MANUAL DE LABORATORIO DE PATOLOGIA EN CAMARON

EL CAMARN DORADO, S.A. DE C.V. EL DESIERTO 1

INTRODUCCIN



Las enfermedades representan un problema tangible dentro de la camaronicultura que generan
graves prdidas econmicas a los productores, propiciando la disminucin de inversiones en
este sector y prdidas de empleos para las comunidades. El diagnstico rpido y oportuno es la
mejor opcin para hacer frente a esta amenaza.

Entre las herramientas disponibles para la deteccin de enfermedades, se encuentra el
diagnstico en fresco, el cual aunado al trabajo de laboratorio puede ayudar al control y
prevencin de las enfermedades. El anlisis en fresco involucra muestreos continuos en las
granjas, con lo cual los productores tienen una mejor oportunidad para detectar a tiempo el
inicio de cualquier enfermedad.

El anlisis en fresco de los camarones es una practica cada da es ms empleada entre los
acuicultores. El adecuado conocimiento de estas tcnicas, aunado al desarrollo de nuevos
protocolos y al acumulo de experiencias entre los acuicultores, sugiere que el anlisis en fresco
puede ser en corto tiempo una herramienta de gran ayuda y un elemento clave en la
prevencin de enfermedades de camarn.









MANUAL DE LABORATORIO DE PATOLOGIA EN CAMARON
EL CAMARN DORADO, S.A. DE C.V. EL DESIERTO 2

DESCRIPCIN DE LAS TCNICAS DE DIAGNOSTICO UTILIZADAS EN EL LABORATORIO

ANLISIS DE FITOPLANCTON

El conteo de fitoplancton se realiza en los primeros 30 das de cultivo, el cual se induce
mediante la utilizacin de fertilizantes para dar el blum de grupos como Diatomeas, Clorofilas,
entre otras.

El conteo se lleva a cabo utilizando un hematocitometro de 0,1 mm de profundidad para el
conteo se sugieren los objetivos de 10 y 20 X, para realizar rectificaciones se realiza con el
objetivo de 40 X.

El conteo de clulas se realiza de la siguiente manera:
1. Se toma una muestra en un tubo de ensaye a las salidas del estanque y muelles, se fija la
muestra con lugol o rosa de vengala al 5%.
2. Antes de contar la muestra debe ser agitada y se toma 1 ml con la pipeta Pasteur,
llenando la camara.
3. Se observa al microscopio y se cuentan todos los cuadrantes de la camara.
4. Se realizan los calculos, se obtiene el promedio de las clulas y se multiplica po 10,000
para obtener celulas * mililitro (en caso de una dilucin se multiplica por ese factor).





MANUAL DE LABORATORIO DE PATOLOGIA EN CAMARON
EL CAMARN DORADO, S.A. DE C.V. EL DESIERTO 3

ANLISIS DE ZOOPLANCTON

Para la obtencin de las muestras de zooplancton, se filtra un volumen constante de la columna
de agua del estanque (salidas y muelles), la cual es filtrada con un tamiz de 60 micras, una vez
filtradas las muestras se colocan en frascos de plstico y se fijan con lugol o rosa de vengala al
5%, una vez fijadas se pueden guardar para su conteo.

El conteo o identificacin de zooplancton se realiza de la siguiente manera:
1. Se toma la muestra en probetas de 25 ml.
2. Homogenizar y tomar 1 ml para ser colocada en la camara de conteo de Sediwk Rafter.
3. Colocar la camara en el microscopio utilizando el objetivo de 10 X, se realizara un barrido
de camara para el conteo (contador manual) e identificiacin de las especies de
zooplancton, entre ellos copepodos, nauplios, poliquetos, entre otros.
4. La interpretacin de resultados para determinar la cantidad de organismos por litro de
zooplancton, se cuenta el total de organismos multiplicandose por 20 litros (Total de
litros filtrados de agua)














MANUAL DE LABORATORIO DE PATOLOGIA EN CAMARON
EL CAMARN DORADO, S.A. DE C.V. EL DESIERTO 4

TCNICA PARA MACERADO DE LARVAS

Se seleccionan los organismos que presenten signos de enfermedad, se transportan lo mas
inmediato posible al lugar de trabajo evitando que estos mueran.
El anlisis bacteriolgico se realiza macerado (Organismos menor a 1 gramo).
1. Seleccin de 15 a 20 organismos.
2. Desinfectar con alcohol al 70%, permitiendo que el exceso se evapore hasta no quedar
olor de este.
3. Se realiza una desinfeccin de un mortero de porcelana (alcohol y mechero), se adiciona
solucin salina estril en relacin 1:1 con respecto al peso del organismo.
4. Se colocan las larvas en el mortero previamente desinfectado.
5. Se procede a macerarar los organismos hasta que se encuentren completamente
triturados.
6. Se mezcla el inoculo, se toma una asa calibrada previamente esterilizada (mechero) y
enfriada, se toma la muestra y se siembra en placas con Agar TCBS.
7. Las placas sembradas se incuban en forma invertida durante 24 horas a una temperatura
de 28 a 36 C.
8. Despus de este periodo de incubacin se realiza un conteo de colonias verdes y
amarillas, se multiplica por un factor de 200, se toma de referencia la tabla 2 que
muestra los rangos.










MANUAL DE LABORATORIO DE PATOLOGIA EN CAMARON
EL CAMARN DORADO, S.A. DE C.V. EL DESIERTO 5

TCNICA DE LA EXTRACCIN DE HEMOLNFA PARA DETECCIN DE VIBRIO

1. Antes de iniciar con la bacteriologa se hace una limpieza y una desinfeccin con alcohol
etlico al 96 tanto del material a utilizar (pinzas, loncheras de plstico, papel aluminio),
como del rea (mesa, mecheros) donde se llevara acabo esta labor.
2. Se encienden los mecheros y se mantiene cerrado el laboratorio para obtener un rea
estril.
3. Cada cubeta con la muestra de camarn es filtrada a travs de un embudo con malla
mosquitera y posteriormente son colocados en un recipiente de plastico para su
transporte a la mesa de trabajo.
4. Se limpia toda la cutcula del camarn con una torunda de algodn impregnada con
alcohol al 70% para desinfectar las reas cercanas al corazn y periopodos.
5. Para la extraccin de hemolinfa se puede realizar en dos zonas diferentes una de ellas es
en el corazn por medio de lanceta estril al corazn, esto es para camarones menores
a 2,5 gramos. La segunda se puede extraer del seno ventral de la base del quinto
periopodo esto es para camarones mayores de 2,5 gramos.
6. Se recolecta la hemolinfa de 5 camarones de la muestra, se homogeniza el inoculo en un
vidrio de reloj estril adicionando 5 ml de Citrato de sodio al 10% (anticoagulante) en
relacin 1:1.
7. La hemolinfa extrada es sembrada en agar TCBS, usando una asa calibrada previamente
esterilizada, se toma la muestra y se siembra en forma de estra por toda la superficie
del gel. Se deja 1 gota de hemolinfa en portaobjeto para tomar su tiempo de
coagulacin el cual ser menor a 30 segundos.
8. La placa es incubada en forma invertida por un periodo de 18 a 24 horas, a una
temperatura de 28 a 36 C.
9. Luego del periodo de incubacin se realiza la lectura de colonias verdes y amarillas y se
multiplica por el factor 200, se toma como referencia la tabla 2.

NOTA: La hemolinfa debe ser transparente de lo contrario debe ser descartada, ya que al
presentar color indica que se contamino con algn fluido del hepatopancreas.
MANUAL DE LABORATORIO DE PATOLOGIA EN CAMARON
EL CAMARN DORADO, S.A. DE C.V. EL DESIERTO 6





















(a) (b) (c)







Fig. Crecimiento de colonias amarrillas y verdes en hemolnfa (a), hepatopncreas (b), y en
agua (c) en placas de agar TCBS.
MANUAL DE LABORATORIO DE PATOLOGIA EN CAMARON
EL CAMARN DORADO, S.A. DE C.V. EL DESIERTO 7

TCNICA PARA LA EXTRACCIN DE HEPATOPNCREAS.

1. Se seleccionan 5 camarones para el anlisis.
2. Desinfectar el cuerpo con una torunda impregnada de alcohol al 70%.
3. Extraer el hepatopancreas de los 5 camarones sin tocar el intestino, introduciendo unas
pinzas por la base del hepatopancreas y se realiza la extraccin.
4. Se colocan los hepatopancreas en un mortero limpio y desinfectado adicionando 5 ml de
solucin salina al 2% dependiendo si el peso es mayor o menor a 1 gramo.
5. Se macera hasta obtener una muestra homognea.
6. Realizar la siembra en agar TCBS, usando una asa calibrada previamente esterilizada,
sembrando en forma de estras.
7. Incubar en forma invertida por un periodo de 18 a 24 horas a una temperatura de 28 a
36 C.
8. Despus del periodo de incubacin se realiza la lectura de colonias verdes y colonias
amarillas multiplicndose por el factor 200, se toma como referencia la tabla 2.
NOTA: Tratando de encontrar rangos menores a 10,000 UFC/ML

RANGOS
MACERADO
(UFC/ML) HEMOLINFA (UFC/ML)
HEPATOPANCREAS
(UFC/ML)
NIVEL MNIMO 0 6,000 0 2,000 0 6,000
NIVEL MEDIO 6,000 10,000 2,000 6,000 6,000 10,000
NIVEL MXIMO > 10,000 > 6,000 > 10,000

Tabla 2. Parmetros de UFC para macerado, hemolnfa y hepatopancreas del CIAD, Mazatln:
Laboratorio de Bacteriologa



MANUAL DE LABORATORIO DE PATOLOGIA EN CAMARON
EL CAMARN DORADO, S.A. DE C.V. EL DESIERTO 8

ANLISIS BACTERIOLGICOS DEL AGUA.

1. Se toma una muestra de la columna agua del estanque en un tubo de ensaye estril, a
las salidas del estanque y medio fondo, reservorio.
2. Antes de tomar la muestra agitar para su homogenizacin.
3. Tomar 1 ml de muestra con una pipeta estril , diluirlo en 9 ml de solucin salina al 2%
(10
-1
), (Figura 3)
4. Tomar 0,1 ml de la dilucin e inocularlo en cajas petri con agar TCBS, sembrar con un
asa y multiplicar por el factor 200, como referencia se toma la tabla 3.











Figura 3. Siembra con dilucin para anlisis bacteriolgico de agua.

RANGOS AGUA (UFC/ML)
NIVEL MNIMO 0-1,000
NIVEL MEDIO 1,000 - 2,000
NIVEL MXIMO MAYOR 2,000

Tabla 3. Parmetros de UFC para agua del CIAD, Mazatln: Laboratorio de Bacteriologa

Muestra: Agua del
estanque
1 ml
muestra
Dilucin en 9 ml de
soln. Salina al 2%
0,1 ml de la dilucin p/
sembrar en placa TCBS
MANUAL DE LABORATORIO DE PATOLOGIA EN CAMARON
EL CAMARN DORADO, S.A. DE C.V. EL DESIERTO 9


Siembra Directa

1. Se toma una muestra de la columna agua del estanque en un tubo de ensaye estril, a
las salidas del estanque y medio fondo, reservorio.
2. Antes de sembrar la muestra se agita para su homogenizacin.
3. Se toman 10 ml del agua del estanque reservorio (Figura 4)
4. De estos se toman 0,1 ml (100 ul), posteriormente se siembra en estras con un asa
previamente esterilizada.
5. Se incuban por un periodo de 18 a 24 horas a una temperatura de 28 a 36 C.
6. Despus del periodo de incubacin se realiza la lectura de colonias verdes y amarillas, se
toma como referencia la tabla 3.











Figura 4. Siembra directa de un anlisis bacteriolgico de agua.






10 ml de Agua
del Estanque
0,1 ml agua estanque
sembrar en placa TCBS
MANUAL DE LABORATORIO DE PATOLOGIA EN CAMARON
EL CAMARN DORADO, S.A. DE C.V. EL DESIERTO 10


ANLISIS BACTERIOLGICOS DEL SUELO.

1. Se toma una muestra de lodo del estanque con un tramo de Tubo de PVC 1 de
dimetro, y se coloca en una bolsa de plstico.
2. Se pesa 1 gramo de lodo (Figura 5), se coloca en un tubo de ensaye en una solucin
salina estril al 2% (9 ml sln salina).
3. Con una pipeta estril se toman 1 ml y se diluye en 9 ml de solucin salina 2%.
4. Tomar 0,1 ml (100 ul) con un asa previamente esterilizada de solucin e inocularlo en
agar TCBS en forma de estra.
5. Incubar durante 18 a 24 horas a una temperatura de 28 a 36 C.
6. Despus del periodo de incubacin realizar conteo de colonias amarillas y verdes, en la
tabla 4 se muestran los rangos de este anlisis.











Figura 5. Siembra con dilucin para anlisis bacteriolgico de suelo.





Muestra:
9 ml Soln. Salina
+
1 gramo lodo
Dilucin
9 ml Soln. Salina
+
1 ml muestra
Sembrar en agar TCBS
0,1 ml de la dilucin en
forma estra
MANUAL DE LABORATORIO DE PATOLOGIA EN CAMARON
EL CAMARN DORADO, S.A. DE C.V. EL DESIERTO 11


Siembra Directa:

1. Se toma una muestra de lodo del estanque con un tramo de Tubo de PVC 1 de
dimetro, y se coloca en una bolsa de plstico.
2. Se pesa 1 gramo de lodo, se coloca en un tubo de ensaye en una solucin salina esteril
al 2% (9 ml sln salina).
3. Se toma 0,1 ml de solucin se siembra en agar TCBS en forma de estra con una asa
esterilizada.
4. Incubar durante 18 a 24 horas a una temperatura de 28 a 36 C.
5. Despus del periodo de incubacin realizar conteo de colonias amarillas y verdes en la
tabla 4 se muestran los rangos.









Figura 6. Siembra Directa de anlisis bacteriolgico de suelo.








Sembrar en agar TCBS
0,1 ml de la muestra en
forma estra
Muestra:
9 ml Soln. Salina
+
1 gramo lodo
MANUAL DE LABORATORIO DE PATOLOGIA EN CAMARON
EL CAMARN DORADO, S.A. DE C.V. EL DESIERTO 12


GRADO NIVELES DE AFECCIN PARA SUELO
1 Hay presencia de vibrio. Niveles manejables. (DE 1 A 10 UFC/ML)
2 Hay problema, debe monitorearse cada 7 das. (DE 11 A 20 UFC/ML)
3
Problemas graves, debe monitorearse y tratarse en 7 das.
(DE 21 A 50 UFC)
4
Problemas muy graves, debe tratarse, aplicar alimento medicado.
(ARRIBA DE 50 UFC)

Tabla 4. Parmetros de UFC para Suelo del CIAD, Mazatln: Laboratorio de Bacteriologa













MANUAL DE LABORATORIO DE PATOLOGIA EN CAMARON
EL CAMARN DORADO, S.A. DE C.V. EL DESIERTO 13


TCNICA DE CONTEO DE COLONIAS.

1. Antes de realizar el conteo de colonias se observa si hay presencia de bacterias
bioluminiscentes. Se recomienda hacerlo en un cuarto oscuro de 18 a 24 horas de
incubacin.
2. El conteo de las colonias amarillas y verdes se hace por separado dando el resultado en
UFC/ML.
3. No. Colonias / ml de hepatopncreas = UFC/ml de Hepatopncreas.
4. No. Colonias / ml de hemolnfa= UFC/ml de Hemolnfa.
5. No. Colonias / Factor de dilucin = UFC en el agua.
6. No. Colonias / Factor de dilucin = UFC en el suelo.

Ejemplo: UFC/ML --- No. Colonias * 100 ul / 0,1 ml
UFC/ML --- 5 * 100 / 0,1 = 5,000 UFC/ML















MANUAL DE LABORATORIO DE PATOLOGIA EN CAMARON
EL CAMARN DORADO, S.A. DE C.V. EL DESIERTO 14


TCNICA PARA PRUEBAS DE SENSIBILIDAD (ANTIBIOGRAMAS).

1. Primeramente se toma con un asa normal una muestra de las colonias ya formadas, el
asa debe estar previamente flameada al rojo vivo y enfriada en presencia de dos
mecheros de Bunsen, llevndolas a un tubo de ensaye con solucin salina estril al 2
tratndola de igualar a la turbidez de un tubo de McFarland de 0.5.
2. Una vez igualada la turbidez se humedece un hisopo con esta solucin para inocular una
caja de petri con agar Mueller Hinton, pasando el hisopo por toda la caja (Figura 7a).
3. Posteriormente pasa dos minutos de haber inoculado la caja con el agar se colocan los
sensidiscos (Figura 7b)
4. Las cajas se incuban a una temperatura 35 a 38 C en un tiempo de 18 a 24 hrs.
5. Una vez transcurrido el tiempo de incubacin se mide el dimetro del halo de inhibicin
expresado en milmetros para saber a cual antibitico es mas sensible la bacteria (Tabla
5)








(a) (b)

Figura 7. Aplicacin de la bacteria con un hisopo (a) y colocacin de sensidiscos en la caja
petri con agar Miuller Hinton (b).



MANUAL DE LABORATORIO DE PATOLOGIA EN CAMARON
EL CAMARN DORADO, S.A. DE C.V. EL DESIERTO 15


ANTIBITICO RESISTENTE (R) INTERMEDIO (I) SENSIBLE (S) MUY SENSIBLE
(MS)
Sarafloxacina <13mm 13-18mm >19mm
Florfenicol <7mm 8-11mm 12-16mm >17mm
Enrrofloxacina <7mm 8-11mm 12-16mm >17mm

Tabla 5. Rango de sensibilidad (antibiogramas).

Nota: los rangos de sensibilidad descritos anteriormente son propuestos por la empresa
fabricante.



















MANUAL DE LABORATORIO DE PATOLOGIA EN CAMARON
EL CAMARN DORADO, S.A. DE C.V. EL DESIERTO 16


ANATOMIA DEL CAMARN

Antes de entrar en detalle a lo que es patologa de camarn, es necesario comprender su
anatoma, por lo que se describir brevemente:
Cutcula: Comprende cuatro capas cubriendo la epidermis, estn compuestas de calcio,
quitina y melanina (pigmento), forma el carapacho.
Cefalotrax: Esta constituido por el trax y el protocfalo, o seccin libre del carapacho,
protegido por el rostro, que incluye: ojos, antnulas, antenas y labios.
Trax: Posee el aparato masticador, que incluye: mandbula, maxilares, maxilpedos
(forman los primeros 3 pares de apndices), pereipodos (forman 5 pares que sirven
para caminar).
Abdomen: Junto con los apndices son el sistema de propulsin del camarn y
comprende:
Plepodos: Formados por cinco pares o apndices nadadores, en los machos el
primer par esta modificando para la transferencia de esperma.
Telsn: Proteccin triangular.
Urpodos: Dos paletas nadadoras.
Sistema digestivo: A continuacin se da una breve descripcin de los constituyentes:
Boca: Localizando anteriormente en los primeros maxilpedos.
Intestino anterior: Incluye esfago y estmago, este ltimo contiene una
proyeccin similar a dientes.
Intestino medio: Es el rea de absorcin del tracto digestivo, este pasa entre los
lbulos dorsal y ventral del hepatopncreas. Contiene la mucosa y
microvellosidades, tambin contiene el ciego anterior y posterior que incrementa
la superficie de absorcin.
Intestino posterior: Comprende la glndula rectal, recto y canal anal. Su funcin
es la formacin de heces fecales. Este rgano termina en el ano, el cual se abre el
telsn y los urpodos.
MANUAL DE LABORATORIO DE PATOLOGIA EN CAMARON
EL CAMARN DORADO, S.A. DE C.V. EL DESIERTO 17

Hepatopncreas: Este rgano comprende la glndula digestiva, ocupa la mayor
parte del cefalotrax, formando por un gran nmero de tbulos, donde cada
tbulo esta formado por:
o Las clulas F o fibrosas son ms basoflicas.
o Las clulas B o secretoras contienen un citoplasma vacuolado.
o Las clulas R contienen tambin un citoplasma vacuolado con gotas de
lpidos.
Sistema respiratorio: Los camarones poseen branquias compuestas por un eje central
del cual se proyectan estructuras tubulares. Los maxilpedos son apndices que ayudan a
la ventilacin de las branquias. El intercambio de gases se efecta al ingresar la
hemolinfa a los vasos sanguneos (transporte de oxigeno) hasta llegar a los filamentos
branquiales donde se facilita la difusin de gases a la extremadamente fina cutcula de
epidermis que cubre las branquias.
Sistema circulatorio: El corazn esta dividido en dos partes: el epicardio que rodea y
protege el corazn y el miocardio. La hemolinfa circula a travs de la aorta y fluye de
esta por medio de un sistema de arterias en el que se da un intercambio de nutrientes y
gases.
Tejido hematopoytico: Se encuentra en varias partes del cuerpo, generalmente en la
base del segundo maxilpedo, dorsalmente al estomago cardiaco (o cmara anterior) y,
alrededor de la arteria oftlmica. El tejido tiene un alto ndice meiotico (numerosas
clulas meioticas), conteniendo clulas hemocticas inmaduras.
o Hemocitos: Se conocen cuatro tipos que son:
Hialinocitos: Son alargados y presentan cromatina nuclear dispersa.
Granulocitos intermedios: Son los ms numerosos y presentan una
cromatina ms densa.
Granulocitos eosinfilos: Clulas ovoides, presentan numerosos grnulos
con varias formas.
Cianocitos: Solo se les encuentra dentro del tejido conectivo.
Los cuatro tipos de hemocitos se originan de una simple clula o hemoblasto.
MANUAL DE LABORATORIO DE PATOLOGIA EN CAMARON
EL CAMARN DORADO, S.A. DE C.V. EL DESIERTO 18

Sistema de excrecin: En camarones la mayor excrecin ocurre a travs de la glndula
antenal. Esta glndula esta compuesta de un saco terminal y una vescula, las cuales se
encuentran alrededor del esfago y el segmento basal de la antena. Este rgano excreta
sales, desechos nitrogenados y otras toxinas. Los de mayor excrecin son amonio, urea y
acido rico. La glndula antenal regula la composicin de las sustancias excretadas o
retenidas como la glucosa y cloruros.
Sistema nervioso: El sistema nervioso central esta constituido por los siguientes
rganos:
o Cerebro: El cerebro del camarn es el ganglio supra esfagico, se encuentra justo
en la base de los apndices de la cabeza. Se encuentra dividido en tres regiones
(anterior, medio, posterior). Varios rganos nerviosos alimentan diferentes reas
del cuerpo del camarn.
o Cordn nervioso: Su funcin es alimentar la raz de los rganos motores.
o Corazn: Recibe enervacin de un sistema local (ganglio cardiaco).
Ojo compuesto: Contiene tres ganglios entre los cuales se almacenan productos
hormonales producidos por el rgano neurosecretor, adems el ojo esta compuesto por
dos rganos especializados:
o El rgano censor x situado cerca de la parte dorsal del ojo el cual consiste
principalmente en clulas neurosecretoras.
o El rgano x ganglionar que va ventralmente.
Statocisto: es el rgano del balance o equilibrio, dentro de los cuales existe vellosidades
sensoriales y grnulos.







MANUAL DE LABORATORIO DE PATOLOGIA EN CAMARON
EL CAMARN DORADO, S.A. DE C.V. EL DESIERTO 19































MANUAL DE LABORATORIO DE PATOLOGIA EN CAMARON
EL CAMARN DORADO, S.A. DE C.V. EL DESIERTO 20



MANUAL DE LABORATORIO DE PATOLOGIA EN CAMARON
EL CAMARN DORADO, S.A. DE C.V. EL DESIERTO 21

SELECCIN Y TRANSPORTE DE MUESTRAS

Muestras de camarn.

Para seleccionar una muestra representativa se debe tomar 5 camarones al azar de un muelle
en la parte media de cada estanque, colocndolo en cubetas de 16 litros con agua del mismo
estanque, los cuales se transportan al rea de trabajo donde a cada cubeta se les coloca una
piedra aireadora que es alimentada con un BLOWER de HP para mantenerlos vivos para el
anlisis bacteriolgico. (figura 2)

















Figura 2. Camarones seleccionados para el anlisis: toma de muestra de organismos del
estanque.

MANUAL DE LABORATORIO DE PATOLOGIA EN CAMARON
EL CAMARN DORADO, S.A. DE C.V. EL DESIERTO 22

Seleccin y transporte de muestra.

Para seleccionar una muestra se deben tomar camarones al azar de algunos puntos del
estanque o escogiendo los que presenten sntomas clnicos de la enfermedad en un nmero de
15 a 20 por muestra. Se les transporta lo ms rpido posible procurando que lleguen vivos al
lugar de trabajo. El anlisis bacteriolgico se realiza en macerado (organismos menores de 1 gr),
hemolinfa, intestino, hepatopancreas, agua y sedimentos.


ANLISIS EN FRESCO.

Para seleccionar una muestra representativa se debe tomar 10 camarones al azar del ultimo
muelle de cada estanque, colocndolos en cubetas de 20 litros con agua del mismo estanque,
los cuales se transportan al rea de trabajo donde a cada cubeta se les coloca una piedra
aireadora que es alimentada con un BLOWER de HP para mantenerlos vivos.

Los anlisis en fresco se inician a partir de que el camarn tiene un peso promedio de 1,0 grs.
Esta tcnica se utiliza para monitorear el estado de salud de los organismos y la relacin de
diagnstico presuntivo en laboratorio y campo, el cual consiste en la diseccin del camarn en
todos sus estadios de desarrollo, para observar las alteraciones que presenten rganos y tejidos
del mismo.

Observacin externa

Se observa cuidadosamente la fisiologa externa del camarn revisando las caractersticas como
son la pigmentacin, antenas rugosas o quebradizas, flacidez, manchas en pleuras, tiempo de
coagulacin de la hemolnfa. El cual no debe ser de 30 segundos .se observa en el camarn
caractersticas externas como la coloracin y necrosis, sntomas causados por agentes
patgenos y estrs. (Figura 8)

MANUAL DE LABORATORIO DE PATOLOGIA EN CAMARON
EL CAMARN DORADO, S.A. DE C.V. EL DESIERTO 23

Coloracin externa del camarn:
El grado de expansin de los cromatforos, asi como la coloracin que presentan los pleopodos,
periopodos y uropodos son sntomas que se relacionan con la calidad de suelos del estanque.
La coloracin puede ir desde rojiza hasta verde luminiscente relacionndose con pruebas de
estrs, lo cual a su vez va ligado con problemas bacterianos como presencia de vibrios entre
otros.









Figura 8. Observacin externa del camarn.


Observacin interna

Con la ayuda del microscopio compuesto se observan las branquias para buscar protozoarios
ciliados que son: (Epistylis, Zootamnium, Vorticela y Acineta), Lagrenophis, Diatomeas, Algas
filamentosas y Necrosis; se revisa en el intestino la cantidad de gregarinas y sus diferentes
estados, como tambin restos de camarn dentro del intestino; en el hepatopncreas se
observan la cantidad de vacuolas lipdicas dentro de los tbulos, as como tambin el tipo de
estrangulacin de los mismos producidos por Necrosis Hepatopancretica (NHP) y Vibriosis
(Vibrio spp) y la fase terminal melanizacin de los tbulos (necrosis).



MANUAL DE LABORATORIO DE PATOLOGIA EN CAMARON
EL CAMARN DORADO, S.A. DE C.V. EL DESIERTO 24

PROCEDIMIENTO PARA SELECCIONAR LOS RGANOS A OBSERVAR.

Branquias
Con unas pinzas curvas se toma una pequea porcin y se coloca en un portaobjetos para
buscar diferentes ectoparsitos como: Epistylis, Zootamniun, Lagrenophis, Algas filamentosas y
Necrosis.

Los protozoarios presentes son organismos que se forman en colonias ramificadas o de forma
simple. Los camarones fuertemente infectados presentan adherencia en los apndices,
branquias y algunas veces en ojos. Las branquias y apndices estn decolorados, pueden
presentar signos de letargo y opacidad del musculo abdominal. Los protozoarios comnmente
encontrados son Zootanium penai, Epistylis sp, Vorticella sp, entre otros. Las bacterias
filamentosas su crecimiento se observa en las setas de los uropodos, pleopodos, periopodos,
antenas y boca, en las lamelas branquiales, los organismos fuertemente infectados presentan
decoloracin de las branquias que varia de amarillo a caf dependiendo de las algas que se
encuentren atrapadas por los filamentos.














MANUAL DE LABORATORIO DE PATOLOGIA EN CAMARON
EL CAMARN DORADO, S.A. DE C.V. EL DESIERTO 25


GRADO % INFESTADO
0.25 Presencia
1 Presencia a nivel de lamela (25%)
2 Cubriendo la superficie a nivel lamela (26-50%)
3 Cubriendo la superficie a nivel lamela (51-75%)
4 Cubriendo toda la superficie de la lamela (>75%)

Tabla 6. Grado de Ectoparsitos y Necrosis en Branquias.





















MANUAL DE LABORATORIO DE PATOLOGIA EN CAMARON
EL CAMARN DORADO, S.A. DE C.V. EL DESIERTO 26

Intestino
En el abdomen se realiza un pequeo corte para sacar en intestino medio con la ayuda de unas
pinzas curvas para colocarlo en el porta objetos para buscar gregarinas con sus diferentes
grados de infestacin y sus fases de estadio que son: esporozoitos, trofozoitos, gametocistos y
restos de camarn.

Deteccin de gregarinas. En organismos infectados por estos parasitos muestran una reduccin
en su crecimiento se puede observar una decoloracin amarillenta en el intestino atravez de la
cutcula. Las gregarinas son parasitos de muchos invertebrados principalmente moluscos. La
infestacin ocurre cuando el camarn ingiere algun hospedero intermedio que puede contener
esporas de gregarinas las cuales germinan a esporozoitos y se adhieren a las paredes o
intestino. Una vez adheridos se desarrollan hasta alcanzar el estadio de trofozoito. Este estadio
crece y desarrolla gametocitos que al romperse liberan cigotos que salen al medio donde son
consumidos por hospederos intermedios como los bivaluos, etc.

Tcnica para anlisis de intestino.
1. Seleccionar 5 camarones para el anlisis.
2. Desinfectar todo el cuerpo del camarn.
3. Extraer el intestino completo de los cinco animales.
4. Colocar los intestinos en un mortero limpio y desinfectado con 0.5 ml de solucin salina
al 2% y macerarlos.
5. Mezclar esta muestra con 4.5 ml de solucin salina.
6. Usando un asa calibrada, previamente esterilizada al mechero y enfriada tomar la
muestra y sembrarla en la caja Petri.
7. Incubar en forma invertida la caja Petri inoculada por un periodo de 24 horas a
temperatura de 28 30 C.
8. Luego del periodo de incubacin, se realiza la lectura de las colonias tanto verdes como
amarillas y se multiplica por el factor de 2000.

MANUAL DE LABORATORIO DE PATOLOGIA EN CAMARON
EL CAMARN DORADO, S.A. DE C.V. EL DESIERTO 27









OBSEVACION DE LAS ETAPAS DE MUDA:

Las etapas de muda en los peneidos es en pocos das o semanas, este ciclo se divide en 6
etapas:

1. Post muda temprana (Etapa 1)
2. Post muda tarde (Etapa 2)
3. Intermuda (Etapa 3)
4. Pre muda temprana (Etapa 4)
5. Pre muda tarde (Etapa 5)
6. Ectisis (Etapa 6)
Estas etapas se presentan diariamente en larvas, en los juveniles interdiarias y en los adultos
son semanales o cada 15 das. En el cultivo de camarn hay varios factores que afectan o
alteran el ciclo de muda como la nutricin, aspectos ambientales y fisiolgicos.

Para la seleccin de muestras para determinar la etapa de muda es la observacin directa ya sea
en contacto con los organismos o en la observacin al microscopio, cortando los uropodos
(apndices finales de la cola).



MANUAL DE LABORATORIO DE PATOLOGIA EN CAMARON
EL CAMARN DORADO, S.A. DE C.V. EL DESIERTO 28

FASES DE MUDA




























MANUAL DE LABORATORIO DE PATOLOGIA EN CAMARON
EL CAMARN DORADO, S.A. DE C.V. EL DESIERTO 29

Hepatopncreas
Con unas pinzas se extrae una pequea cantidad y se coloca en un portaobjetos y se checa la
cantidad de lpidos, forma de los tbulos, esto con la finalidad de observar algunas atrofias
provocadas por bacterias intracelulares (NHP) O Vibrio sp. (vibriosis) y as determinar la
presencia y el grado de avance de la enfermedad en caso de que exista.

























MANUAL DE LABORATORIO DE PATOLOGIA EN CAMARON
EL CAMARN DORADO, S.A. DE C.V. EL DESIERTO 30

Tcnica para el anlisis de sedimentos.
1. Tomar tres muestras de lodos en una cubeta limpia a lo largo del estanque.
2. Una vez recopiladas las muestras se homogenizan y se coloca una pequea porcin en
un frasco con tapa estril.
3. Agregar solucin salina estril al 4% hasta lograr una relacin 1:1.
4. Con una jeringa de 5 ml estril tomar una muestra de 1 ml y diluirla en 9 ml de solucin
salina (10
-1
).
5. Tomar 0.1 ml de solucin salina e inocularlo en una caja Petri. Sembrar con barra de
vidrio.
6. Incubar en forma invertida la caja Petri inoculada por un periodo de 24 horas a
temperatura de 28 30 C.
7. Luego del periodo de incubacin, se realiza la lectura de las colonias tanto verdes como
amarillas.

















MANUAL DE LABORATORIO DE PATOLOGIA EN CAMARON
EL CAMARN DORADO, S.A. DE C.V. EL DESIERTO 31

Deteccin de gregarinas.
Las poblaciones de camarones, afectados con estos protozoarios muestran una reduccin en las
tasas de crecimiento y una elevada conversin alimenticia. En organismos muy infectados se
puede observar una decoloracin amarillenta en ele intestino a travs de la cutcula. De ah la
importancia de su monitoreo en la estanqueria.

El mtodo de diagnstico es a travs de la examinacin microscpica (objetivo de 10X) de
monturas hmedas del contenido intestinal, donde se observan esporozoitos, tofozoitos o
gametocistos de gregarinas.

Las gregarinas son parsitos de muchos invertebrados, principalmente artrpodos, anlidos y
moluscos. Se presentan como parsitos inter o intracelulares y las clulas hospederas pueden
ser destruidas. La infestacin ocurre cuando el camarn ingiere algn hospedero intermedio
que puede contener esporas de las gregarinas, las cuales germinan a esporozoitos y se adhieren
a las paredes quitinosas del filtro gstrico o al intestino anterior o posterior a travs del epitelio.
Una vez adheridos se desarrollan hasta alcanzar el estadios de trofozoito. Este estadio crece y
desarrolla gametocitos, que al romperse, liberan los cigotos que salen al medio donde son
consumidos por hospederos intermedios como los anlidos, bivalvos, etc.












MANUAL DE LABORATORIO DE PATOLOGIA EN CAMARON
EL CAMARN DORADO, S.A. DE C.V. EL DESIERTO 32










(a) (b)







(c)
Figura 11. Diferentes estadios de gregarinas en intestino Esporozoito (a), Gametocisto (b),
Trofozoito (c).


Grado Gregarinas
0 Ausencia
1 Menor a 25% 12 gregarinas
2 Mayor a 25 % 13 20 gregarinas
3 Mayor a 50% Mayor a 20 gregarinas

Tabla 7. Grado de infestacin y cantidad de gregarina en intestino.

MANUAL DE LABORATORIO DE PATOLOGIA EN CAMARON
EL CAMARN DORADO, S.A. DE C.V. EL DESIERTO 33



Deteccin de protozoarios externos y bacterias filamentosas.
La deteccin de protozoarios externos se basa en monturas hmedas de porciones de las
branquias, apndices o caparazn, las cuales deben examinarse a travs de un microscopio
estereoscpio o compuesto a 4X. Los protozoarios presentes son organismos pedunculados que
pueden ocurrir en forma simple o formando colonias ramificadas, conteniendo de pocos a
muchos individuos. Los camarones fuertemente infectados presentan adherencias en la
superficie de los apndices, branquias y algunas veces en los ojos. Con frecuencia las branquias
y apndices estn decolorados, pueden presentar signos generalizados de hopoxia que incluyen
letargo y opacidad de los msculos abdominales. Los protozoarios comnmente encontrados
son: Zootamnium penaei, Epistylis sp, Vorticella sp, entre otros.

Para el caso de las bacterias filamentosas, los crecimientos se observan en las setas de los
urpodos, plepodos, pereipodos, escamas antenales y otros apndices de la cabeza y la boca,
en las lamelas de las branquias y en las puntas de las mastigobranquias. Los animales
fuertemente infectados, con frecuencia muestran decoloracin de las branquias que vara de
amarillo a gris o caf, dependiendo de los detritos o algas atrapadas por los filamentos.

El mtodo de diagnstico es mediante un examen directo en el microscopio (40X), de monturas
hmedas.









MANUAL DE LABORATORIO DE PATOLOGIA EN CAMARON
EL CAMARN DORADO, S.A. DE C.V. EL DESIERTO 34







(a) (b) (c)


(d) (e) (f)







(g) (h)

Figura 10. Diferentes tipos de ectoparsitos en branquias Acineta (a), Algas o Bacterias
Filamentosas (b), Zootamnium (c), Lagrenophis (d), Vorticela (e), Diatomeas (f), Necrosis (g),
Epistylis (h).



MANUAL DE LABORATORIO DE PATOLOGIA EN CAMARON
EL CAMARN DORADO, S.A. DE C.V. EL DESIERTO 35


Procedimiento para montar los tejidos y rganos en el portaobjetos

Se toma cada porcin y se coloca en un portaobjetos limpio, se adicionan tres gotas de solucin
salina estril al 2.5 %. (Figura 9 a y 9 b)











(a) (b)
Figura 9. (a) Montaje de rganos del camarn a observar, (b) rganos montados en
portaobjetos











MANUAL DE LABORATORIO DE PATOLOGIA EN CAMARON
EL CAMARN DORADO, S.A. DE C.V. EL DESIERTO 36










(d)
(e)








(f) (g)
Figura 12. Diferentes tipo de estrangulacin de los tbulos en el hepatopncreas, grado I pared
lisa (a), grado II pared arrugada (b), grado IIIa una estrangulacin (c), grado IIIb NHP mas de una
estrangulacin (d), grado IIIb Vibriosis mas de una estrangulacin (e), grado IIIc tbulo reducido
(f) y necrosado (g).

MANUAL DE LABORATORIO DE PATOLOGIA EN CAMARON
EL CAMARN DORADO, S.A. DE C.V. EL DESIERTO 37

Tab. 5 Porcentaje de lpidos en tbulos de Hepatopncreas.

LPIDOS
Cantidad Grado
> 75% 4
50 74% 3
25 49% 2
0 25% 1


Tabla 8. Grado de avance de la enfermedad (NHP y Bacterias Intracelulares).

GRADO GRADO DE SEVERIDAD
0
Pared lisa, tubulos normales, intactos llenos de lpidos en ciertos
casos vacos pero asociados con muda.
1
Tubulos con ligera separacin de clulas de la pared de tubulos y
con disminucin de lpidos
2
Tubulos con ligera estrangulacin de 2 a 3 tubulos/laminilla con
lpidos o sin ellos
3
Tubulos con mayor parte de estrangulacin pierden su forma
carecen de lpidos y presencia de necrosis



MANUAL DE LABORATORIO DE PATOLOGIA EN CAMARON
EL CAMARN DORADO, S.A. DE C.V. EL DESIERTO 38


En lo que respecta al grado de infeccin de NHP (enfermedad del Hepatopncreas provocada
por bacterias intracelulares) se considera un score de 1.2 para iniciar medicacin. Para obtener
el promedio de score de un estanque muestreado, se multiplica el numero de organismos con el
mismo grado de infeccin por el score que le corresponda y se saca un promedio del total de la
muestra. A partir de esto, se da seguimiento de las tendencias de cada estanque y de cada
granja semanalmente, si el promedio de score en los estanques sobrepasa el 1.2 de NHP o su
tendencia es ascendente, se considera necesario iniciar con la medicacin, tomando en cuenta
que el camarn este consumiendo un promedio de 35 kgs. / ha/da, lo cual sucede
generalmente a los 3.0 grs. y con una densidad de 18 a 20 organismos / m
2
. Esto es con el fin de
asegurar que el camarn asimile la mayor parte del alimento medicado.



















MANUAL DE LABORATORIO DE PATOLOGIA EN CAMARON
EL CAMARN DORADO, S.A. DE C.V. EL DESIERTO 39

Tiempo de coagulacin

El tiempo de coagulacin es un indicador de salud en el camarn; ya que cuando existe la
presencia de un patogeno (bacteria), el tiempo de coagulacin que tarda la hemolinfa en formar
un coagulo lo puede aumentar en mas de 1 minuto a una temperatura de
20 30 C, mientras que en un camarn normal melifica en menos de 1 minuto y puede aparecer
turbia.

TECNICA DE FIJACIN PARA PCR (Reaccin Qumica de la Polimerasa)

1. Se toma el tamao de muestra que se va a fijar, en larvas la muestra es de 150
organismos y en juveniles es de 10 12 camarones.
2. Se utilizara alcohol grado reactivo de caa potable al 96% (No desnaturalizado).
3. Frascos o tubos limpios y lavados con alcohol al 96%.
4. La toma de muestra deber ser tomada bajo condiciones estrictas de higiene, utilizando
como desinfectante alcohol al 96%.
5. Una vez tomada la muestra, secarla antes de fijarla, la muestra deber ir acompaada
con el historial de los organismos (origen, talla, estanque, numero de lote, especie).
6. Una vez fijadas las muestras se colocan en una hielera, se sella , se desinfecta con cloro y
se enjuaga con agua.
7. En caso de organismos adultos se corta uno de los pleopodos, usando tijeras limpias y
desinfectadas.
8. Una vez cortado el pleopodo se coloca en el recipiente etiquetado y fijado en alcohol al
96%.

NOTA: El cefalotrax se puede enviar para histopatologico el cual se fija con solucin Davidson *
24 horas, posteriormente la muestra se transfiere a alcohol al 70%.



MANUAL DE LABORATORIO DE PATOLOGIA EN CAMARON
EL CAMARN DORADO, S.A. DE C.V. EL DESIERTO 40


TABLA PARA LA DETERMINACIN DE NUTRIENTES
PRUEBA REACTIVO
VOLUMEN
REQUERIDO
(MUESTRA
PROBLEMA)
BLANCO PROCEDIMIENTO
PO4 FOSVER 3 25 ml + Fosver 3
25 ml de agua de
la muestra
Agregar reactivo Fosver 3 y
disolver, dejar reposar 2 min. El
blanco se coloca en el HACH y se
oprime 0 para calibrar. Desps
se coloca la muestra problema y
se procede a lectura.
NO3 NITRAVER 5 25 ml + Nitraver 5
25 ml de agua
muestra
Agregar reactivo Nitraver 5 a la
muestra y al blanco agitar 1 min
y dejar reposar 5 min. El blanco
se coloca en el HACH se oprime
0 para calibrar. Despus se
coloca la muestra problema y se
procede a lectura.
NO2 NITRIVER 3 25 ml + Nitriver 3
25 ml de agua
destilada +
Nitriver 3
Agregar reactivo nitriver 3 a la
muestra y disolver, dejar reposar
20 min. El blanco se coloca en el
HACH y se oprime 0 para
calibrar. Desps se coloca la
muestra problema y se procede
a lectura.
SO4
Sulfide 1 +
Sulfide 2
25 ml de la muestra + Sulfide
1 + Sulfide 2
25 ml de agua
destilada + Sulfide
1 + Sulfide 2
25 ml de agua de la muestra +
Reactivo Sulfide 1 + Reactivo
Sulfide 2. Dejar reposar 5 min.
Introducir longitud de onda
colocar el blanco y leer.
NH3
Salicilato de
amonia
+
Cianurato de
amonia
25 ml + Salicilato de amonia
+ Cianurato de amonia
25 ml de agua
destilada +
Salicilato de
amonia +
Cianurato de
amonia
Agregar el salicilato de amonia dejar
reposar 3 min, transcurrido el tiempo
adicionar el cianurato de amonia y
reposar 15 min. El blanco se coloca
en el HACH y se oprime 0 para
calibrar. Desps se coloca la muestra
problema y se procede a lectura.
MATERIA
ORGANICA
DICROMATO
DE POTASIO
+
ACIDO
SULFURICO
* 1 gramo de suelo tamizado
+ * 10 ml de Dicromato de
potasio + 20 ml de Acido
Sulfurico + 100 ml de agua
destilada
10 ml de
Dicromato de
Potasio + 20 ml
Acido Sulfurico +
100 ml Agua
Destilada
1 gr de Muestra + 10 ml
Dicromato de Potasio + 20 ml
Acido Sulfurico + 100 ml Agua
Destilada.
*Introducir la longitud de onda
de 610 nm, colocar el blanco y
leer.
* Operaciones previas: Se toman varias muestras de suelo de la parte mas negra del estanque con una pala, se colocan
20 gramos de muestra en papel aluminio y se deja secar en horno, ya secas se trituran en un mortero y se tamizan. Se le
adicionan los reactivos, se deja enfriar y se filtra aprox 50 ml. En la preparacin del Dicromato de Potasio se pesa 49,04
gr + 1 lts de Agua destilada, se guarda en una botella de vidrio y de esta se toman los ml a utilizar.

MANUAL DE LABORATORIO DE PATOLOGIA EN CAMARON
EL CAMARN DORADO, S.A. DE C.V. EL DESIERTO 41


PREPARACION DE SOLUCIONES UTILIZADAS EN EL LABORATORIO

Preparacin de solucin salina
Esta solucin se realiza para la preparacin del agar que generalmente debera tener una
salinidad similar a la del medio en que se desarrolla el cultivo de camarn por lo general se
prepara al 2% y 2.5%.

Citrato de Sodio (Anticoagulante) 10%
10 gramos de citrato de sodio, disolverlos en 100 ml de agua destilada.
Calentar hasta diluir.
Esterilizar durante 25 minutos a 15 psi a 121 C.

Preparacin de Medios Nutritivos
Los medios se preparan en matraces de vidrio con tapa, se pesa la cantidad requerida de
medio y se disueve con agua destilada ajustando la salinidad total a 2 y 2,5% de cloruro
de sodio.
Se esteriliza a 121 C durante 20 minutos (Solo los medios que requieren de
esterilizacin). Se espera a que se enfrie.
Se vacia en cajas petri esteriles aproximadamente 20 ml de agar, es importante no
colocar mas de la cantidad de medio ya que esto puede ocasionar interferencia a la hora
de realizar conteos.
Se deja solidificar (el agar solidifica a 42 C), las placas se colocan en forma invertida y se
dejan en un horno a una temperatura de 30 40 C durante 24 hrs.
Antes de utilizar las cajas petri con el agar estas se deben poner a temperatura
ambiente.




MANUAL DE LABORATORIO DE PATOLOGIA EN CAMARON
EL CAMARN DORADO, S.A. DE C.V. EL DESIERTO 42


Preparacin del medio.
El bacto agar TCBS es un medio selectivo utilizado para el cultivo y aislamiento de especies de
Vibrio presentes en muestras de agua salinas y estuarinas, especies marinas, y otros materiales
o fuentes objeto de su investigacin.

Para preparar un litro del medio, se pesan 89 gr. de agar TCBS y se disuelven en unos 200 ml de
agua destilada previamente esterilizada, agitar continuamente hasta disolucin y agregar 20 gr
de NaCl, adicione el resto de agua poco a poco hasta completar el volumen deseado, llevar a
ebullicin para completa disolucin lo cual se evidencia por la no formacin de grumos en las
paredes del matraz. Dejar enfriar hasta unos 45 50 C aproximadamente y distribuir en cajas
Petri manteniendo condiciones de asepsia con la ayuda de un mechero.

Una vez que se han llenado las cajas de Petri con el medio y este se encuentra solidificado, se
invierten las placas para que el vapor retenido en la placa al condensarse no caiga en el medio y
lo contamine.

Agar TCBS
Este medio es especifico para bacterias del genero vibrio sp.
Se pesa 89 gramos de agar.
Se disuelve en 1 litro de agua destilada.
Se calienta hasta que hierva (Tener cuidado con derrames).
Se vierte en cajas previamente esterilizadas.
Se deja solidificar y tener cuidado que no quede humedad en las cajas.
Guardar en un lugar seco y esteril.
No necesita esterilizarse en autoclave.




MANUAL DE LABORATORIO DE PATOLOGIA EN CAMARON
EL CAMARN DORADO, S.A. DE C.V. EL DESIERTO 43


Agar TSA
Se pesa 40 gramos de agar.
Se disuelven en 1 litro de agua destilada.
Se esteriliza en autoclave a 121 C, 15 psi * 20 min.
Se deja enfriar.
Se vierte en cajas petri previamente esterilizadas.
Se coloca 1 ml de la muestra (Agua Sedimento).
Se deja solidificar, se colocan en posicin invertida, incubar por un periodo de 18 a 24
horas a una temperatura de 20 36 C.
Se realiza un conteo de colonias UFC/ML

Tabla de Rendimientos de Agar
P/Preparar
(ml) Agar
1000 900 800 700 600 500 400 300 200 100
Rinde para
Caja
50 45 40 35 30 25 20 15 10 5

Fijador Davidson
330 mililitros de Alcohol Etilico absoluto.
220 ml Formaldehdo de 37 40%
115 ml Acido Clorhidrico.
335 ml Agua destilada.
Se mezclan todos los reactivos iniciando con el alcohol etilico y finalizando con agua
destilada.

Fijacin para larvas
Se sumergen directamente a la solucin fijadora por 24 horas, posteriormente se
almacenan en alcohol etilico al 70%.
MANUAL DE LABORATORIO DE PATOLOGIA EN CAMARON
EL CAMARN DORADO, S.A. DE C.V. EL DESIERTO 44


Rosa de Vengala al 5%
100 ml agua destilada.
5 ml Formaldehdo.
0,1 gramo de Colorante de Rosa de vengala.

TINCIN RPIDA PARA DETECCION DE CUERPOS DE INCLUSIN.

Debido a la importancia que ha tomado el diagnosticar de forma oportuna la presencia de
mancha blanca (WSSV) en los estanques de cultivo de L. stylirostris y L. vannamei se llevan a
cabo algunas tcnicas como tinciones rpidas para la deteccin de cuerpos de inclusin. Es de
suma importancia seleccionar organismos moribundos, como sera el caso de animales en la
orilla del estanque, de costado, muy letrgicos, con dificultades para nadar, etc.

Protocolo:
1.- Se corta el oprculo y se coloca en un frasco con solucin Davidsons AFA por 1: 30
horas. Se procede a separar la cola de la cabeza entre el primero y segundo segmento
retirando la cola ya que no se va a trabajar en ella. Se fija la cabeza con solucin
Davidsons AFA (Tabla IV). Despus de fijar la cabeza del organismo esta se coloca en un
frasco con solucin Davidsons (10 partes de Davidsons por una parte de camarn).

2.- Despus de 30 min. En solucin de Davidsons AFA se saca la cabeza del organismo y se
le realiza con una navaja de un filo o bistur un corte longitudinal en la parte ventral de la
cabeza entre la lnea de los pereiopodos, dividindola en dos partes iguales.
3.- Con pinzas, de una mitad de la cabeza se extrae el estmago y el esfago. El estmago se
debe dejar en solucin Davidsons una hora ms (para completar 1:30 horas ms) La
mitad de la cabeza no usada se debe mantener en solucin Davidsons por 12 24 horas
antes de cambiarla a alcohol cido ETOH al 70% (TABLA V), esta mitad servir para ser
procesada por histologa si el caso as lo amerita.

MANUAL DE LABORATORIO DE PATOLOGIA EN CAMARON
EL CAMARN DORADO, S.A. DE C.V. EL DESIERTO 45

TABLA Preparacin de Davidsons AFA.

Formalina al 37% 220 ml
cido actico glacial 115 ml
Etanol al 95% 330 ml
Agua destilada 335 ml
TOTAL 1000 ml

TABLA Preparacin del alcohol cido.

Acido clorhidrico concentrado 37% 11 ml
Etanol al 70% 89 ml
TOTAL 100 ml

4.- Se elimina el exceso de Davidsons AFA de los tejidos y se procede a retirar la cutcula del
oprculo usando pinzas finas. Se transfiere la membrana, junto con el estmago, a ETOH
al 11% cido por 30 min. Este paso se realiza con la finalidad de descalcificar los tejidos
que van a ser teidos. El ETOH al 11% cido debe ser preparado el mismo da de su uso.
5.- Los tejidos deben ir envueltos en fundas hechas con papel de lente y puesto dentro de
un cassette para histologa, de tal manera que la membrana del oprculo est plana y no
presente arrugas.
6.- Posteriormente se colocan los cassettes en un bao con agua corriente durante 30 min,
o se enjuagan dentro de frascos con agua limpia por 60 min, haciendo recambios del
agua cada 5 min. La importancia de este paso radica en la buena eliminacin del cido en
los tejidos, la cual es necesaria para obtener una buena tincin y diferenciar entre la
Hematoxilina y la Eosina.
7.. Se elimina el exceso de agua de los cassettes con papel toalla y se da un bao de
Hematoxilina (color azul) por 45 seg. Dependiendo de la marca de la Hematoxilina, el
bao puede variar + 15 seg.
MANUAL DE LABORATORIO DE PATOLOGIA EN CAMARON
EL CAMARN DORADO, S.A. DE C.V. EL DESIERTO 46

8.- Se enjuagan los cassettes en agua limpia, hasta que deje de salir tinta y se secan con
papel toalla.
9.- Se sumergen los cassettes en un bao de Eosina Y (color naranja) por 30 seg, de acuerdo
con la marca de Eosina Y, el bao puede variar entre 30 a 60 seg.
10.- Para terminar, se enjuagan los cassettes con agua eliminando el exceso de Eosina, se
retiran de las fundas los tejidos con pinzas, transfiriendo los estmagos a un
portaobjetos con agua, para posteriormente retirar la capa de clulas del epitelio de
estmago mismos que se ponen sobre un portaobjetos con una gota de agua y se coloca
un cubreobjetos para examinarlo en el microscopio. Las membranas del oprculo
pueden ser transferidas directamente a una placa con agua.
11.- Se revisa la placa con objetivos de 20X y 40X. El ncleo es la parte de la clula que se
ver afectada en una infeccin por WSSV. Los ncleos normales aparecen como crculos
de color blanco con permetro negro-azul obscuro (basoflico) y presentan el nucleolo de
color negro-azul obscuro. Los ncleos infectados con mancha blanca son ms grandes
que un ncleo normal pudiendo compararse con un tomate o uva (crculo rosado a
morado).














MANUAL DE LABORATORIO DE PATOLOGIA EN CAMARON
EL CAMARN DORADO, S.A. DE C.V. EL DESIERTO 47

ENFERMEDADES Y MEDIDAS CORRECTIVAS EN CAMARN

BRANQUIAS

La presencia de algas, bacterias filamentosas, protozoarios y otros pueden ocasionar lesiones
como melanosis y necrosis en las lamelas branquiales, afectando el intercambio de oxigeno. Los
signos ms evidentes es el cambio de coloracin de las mismas. Signos clnicos del tejido
afectado:
Cuando es causado por ensuciamiento por epicomensales, las branquias se decoloran de
blanco a caf amarillento.
Branquias negras se observa un oscurecimiento de las branquias, adherencia de materia
orgnica.
Vibriosis hay pequeos ndulos en las lamelas branquiales melanizadas.

MEDIAS CORRECTIVAS: Para su control, es necesario tomar medidas correctivas cuando el
mayor porcentaje de los organismos se encuentran en grado 2 y 3 de infestacin aumentando la
capacidad de bombeo y manejar recambios de agua, desinfeccin de los estanques entre cada
cosecha y utilizar cal en los estanques de 20 a 50 kg/ha dependiendo el grado de infestacin.

NOTA: El proceso de muda elimina estos protozoarios de las branquias.









MANUAL DE LABORATORIO DE PATOLOGIA EN CAMARON
EL CAMARN DORADO, S.A. DE C.V. EL DESIERTO 48

INTESTINO (GREGARINAS)

La presencia de gregarinas en los camarones causa la destruccin del epitelio intestinal y afecta
la absorcin del alimento. Los signos clnicos del tejido afectado:
Se observa una coloracin amarilla en la parte superior del intestino y lesiones en la
mucosa del intestino lo cual puede llevar a una susceptibilidad a otros agentes
patgenos.
Cuando las gregarinas se presentan con alto grado de severidad causan dao en el
epitelio intestinal y reduccin en el crecimiento, en casos severos la muerte del
organismo.
MEDIDAS CORRECTIVAS: Cuando el grado de infestacin pasa el 50% (Grado 3) es necesario
tratar con cal u otro producto para la desinfeccin y destruccin de las gregarinas y mejorar
la calidad de agua del estanque. Previo a cualquier tratamiento es necesario mejorar la
calidad del agua y las condiciones de los fondos para asegurar la efectividad del mismo.
Elevan su dosis 2kg/ton de alimento durante 10 das produce un efecto con el que las
gregarinas absorben agua y explotan.

HEPATOPNCREAS

Este se analiza con el fin de encontrar alteraciones en la estructura de los tbulos del
hepatopncreas. Un montaje en hmedo evala la cantidad de lpidos, morfologa del
hepatopncreas, consistencia, color y tamao con respecto al cefalotrax, as como la bsqueda
minuciosa de lesiones de presencia de NHP la cual se describe mas adelante.

Coloracin normal verde oscuro.
Tamao si hay atrofia (reduccin del tamao), hipertrofia (aumento de tamao).
En este tejido es posible detectar problemas como necrosis hepatopancreatica producida por
vibriosis sp generalmente cuando hay vibriosis avanzada (2000 UFC) aqu no hay necrosis
MANUAL DE LABORATORIO DE PATOLOGIA EN CAMARON
EL CAMARN DORADO, S.A. DE C.V. EL DESIERTO 49

alargada es decir el tubulo se necrosa sin sufrir deformacin, otra alteracin es producida por
baculovirus sp se observan estructuras piramidales, invade al tubulo destruyendo las clulas.

Las condiciones ptimas para los organismos con respecto a lpidos son grado 2, 3 y 4 a partir de
regular cantidad de vacuolas 50%.

El grado se evala la normalidad de los tbulos hepticos como la deformidad relacionada con
la invasin de bacterias intracelulares (grupo ricketsia) as como bacterias oportunistas del
genero vibrio sp.

La escala de utilizar medicamento en grado 1 y 2 se recupera se recomienda medicar a partir del
10% de la poblacin.

MEDIDAS CORRECTIVAS: Dosis de oxitetraciclina 7.5 kg/ ton de alimento durante 10 das de
medicacin.

ENFERMEDADES PRODUCIDAS POR VIBRIOSIS

Son bacterias producidas del genero vibrio sp. El gnero vibrio es una bacteria gran en forma de
bastoncillos, curvados, simples y retorcidos son anaerobias son comunes en el ambiente
marino, los podemos encontrar en agua dulce si esta contaminada con materia orgnica y pH de
6 9 estas bacterias son susceptibles al cloro desecacin, la ebullicin estas bacterias se dividen
en dos clases:

1. Quitinosis (lesiones bacterianas en exoesqueleto).
2. Lesiones bacterianas sistmicas en hemolinfa y rganos mayores, conocida como
vibriosis sistmica extracelular, se consideran en oportunistas.
Las especies encontradas aisladas mas frecuentes encontradas son V. alginoly, V.
parahemoliticus, V. Harvey y V. valnificus.
MANUAL DE LABORATORIO DE PATOLOGIA EN CAMARON
EL CAMARN DORADO, S.A. DE C.V. EL DESIERTO 50


Los signos que presentan los organismos son tractos vacios, flacidez en la cuticula uropodos
rojizos, lesiones en las lamelas branquiales, coloracin verde luminiscente en uropodos y
apndices externos.

Reduccin del hepatopncreas y necrosis del mismo.

Tratamiento: Es recomendable tener una buena calidad de agua y suelo a travs de una buena
preparacin algunas veces combinada con tratamientos con antibiticos.

La administracin de antibitico a travs del alimento en raciones de 3/da, la seleccin del
antibitico aplicar es determinado por la sensibilidad de la bacteria.

Diagnostico: resultados mediante bacteriologa de hemolinfa, histologa para detectar la
enfermedad por sus lesiones afecta a diferentes rganos hepatopncreas, corazn, rgano
linfoide, tejido conectivo, cordon nervioso.

ENFERMEDADES CAUSADAS POR BACTERIAS

HEPATOPANCREATITIS NECROTIZANTE (NHP)
La bacteria es pequea gran negativa intracelular que infecta las clulas epiteliales del
hepatopncreas. Esta enfermedad es producida por una bacteria del tipo Ricketsia. Los
organismos afectados presentan bajo crecimiento, flacidez, branquias negras, expansin en los
cromatforos, dando apariencia de suciedad en plepodos y urpodos, anorexia, tracto
digestivo vacio, letargia, hepatopncreas reducido, tiempo de coagulacin alto de 20 a 30
segundos generalmente en grados 3.

Tratamiento y Control: Se recomienda determinar el ndice de afeccin (Grado 2 y 3) aplicar
alimento medicado oxitetraciclina 4 gr/kg de alimento balanceado durante 10 das.

MANUAL DE LABORATORIO DE PATOLOGIA EN CAMARON
EL CAMARN DORADO, S.A. DE C.V. EL DESIERTO 51

ENFERMEDADES CAUSADAS POR VIRUS
BP (Bacolovirus penaeus). Ataca al hepatopncreas, esta enfermedad causa
mortalidades en larvas y postlarvas y juveniles de los peneidos, causando bajo
crecimiento causando lesiones al hepatopncreas, intestino medio y superior.
Tratamiento y control: Se observan cubos tetradricos en la muestra de hepatopncreas,
intestino es necesario desechar los organismos que presenten BP, desinfectar los
tanques lavar y secar todo el estanque o tanque larvario.
WSSV (Virus de la Mancha Blanca). Es una enfermedad que induce altas mortalidades en
cualquier etapa del ciclo productivo la principal fuente de introduccin del virus puede
ser la misma larva, peces o el transporte en aves que ingieren camarn enfermo. Los
organismos infectados presentan manchas blancas cuticulares en caparazn, coloracin
muscular pardo rojiza, expansin de cromatforos enrojecimientos en urpodos y
antenas afecta al camarn en todas sus etapas y tallas. Mortalidades de un 60 a 100%
para su deteccin mediante PCR o histologa.
Tratamiento: Sin tratamiento a la fecha se recomienda cosechar el estanque.
TSV (Virus del Sndrome del Taura). Se presenta entre los 14 y 40 das de cultivo 0.5 y 5
gramos su virulencia puede encontrarse en forma pasiva en espera o manifestarse en un
brote. Los organismos infestados presentan coloracin rojiza, flacidez cuticular, tracto
vacio, organismos que mueren durante el proceso de muda. Los organismos que
sobreviven presentan lesiones melanizadas multifocales en cefalotrax y exoesqueleto
abdominal, el ciclo de muda aparece inactivo.
Tratamiento: Aun no se encuentra tratamiento.
IHHNV (Sndrome de las Deformaciones). Esta enfermedad se desarrolla en forma
crnica, causando una mnima mortalidad. L. vannamei se caracteriza por la deformacin
del rostrum y el sexto segmento, los organismos presentan bajo crecimiento son muy
susceptibles a las amonias altas, a los protozoarios si damos buenas condiciones al
cultivo es probable que sobrevivan hasta el da ultimo de engorda.
Tratamiento: No existe tratamiento.

MANUAL DE LABORATORIO DE PATOLOGIA EN CAMARON
EL CAMARN DORADO, S.A. DE C.V. EL DESIERTO 52

NOTA: El uso de antibiticos se debera realizar cuando sean necesario. No se debe almacenar el
alimento medicado por periodos largos (mximo un mes), si se realiza el uso de alimento
medicado se deben establecer los tiempos de retiro para eliminar el residuo del antibitico.

ENFERMEDADES CAUSADAS POR PROTOZOARIOS
MICROSPORIDIOS. Son protozoarios que infestan una gran variedad de organismos
peces, crustceos e insectos son causantes de la enfermedad del algodn o camarn de
leche, no se considera un problema grave en la camaronicultura. Las especies
thelohania y pleistophora infestan gonodas, corazn, branquias, hepatopncreas e
intestino. Los organismos infestados presentan coloracin lechosa en musculo y cutcula
azul obscura, son muy susceptibles y mueren en la manipulacin. Se detecta en anlisis
en fresco.
Tratamiento: Como medida de control se utiliza el control de peces en el estanque ya
que sin ellos no se completa su ciclo de vida mediante el secado hasta el agrietamiento
del suelo, la remocin de materia orgnica y adicin de cal como desinfectante.
ACALAMBRADO. Este proceso se puede deber a bajas de oxigeno o temperatura altas
(34 35 C) si el acalambramiento es debido altas temperaturas los camarones
reaccionan de forma similar, otra causa podra ser una vibriosis desbalance de pH o altos
niveles de amonia, el arcamiento de la cola se da por un desbalance de calcio o potasio.
OPACIDAD DEL MUSCULO Y COLA BLANCA. Un organismo saludable presenta
tonalidades claras y transparentes, los camarones estresados o enfermos muestran color
blanquecino y opaco en la cola, esto se relaciona con stress o vibriosis esta opacidad no
debe confundirse con el aspecto de microsporidiosis.






MANUAL DE LABORATORIO DE PATOLOGIA EN CAMARON
EL CAMARN DORADO, S.A. DE C.V. EL DESIERTO 53

ENFERMEDADES DE ORIGEN NO INFECCIOSO

Enfermedades por deficiencia nutricional: Existen varias enfermedades por esta causa, pero se
conocen mejor las que se presentan a continuacin:

DEFICIENCIA POR ACIDO ASCORBICO: Los camarones criados en tanques o sistemas
cerrados y que solamente reciben alimentacin suplementaria son potencialmente
susceptibles a presentar deficiencias de esta vitamina manifestando lo siguiente:
o Las lesiones se presentan tpicamente como melanizacin de las paredes del
estomago, intestino, branquias y subcutcula.
o Se acompaa de bacterias oportunistas y se diferencian de otras lesiones en el
exoesqueleto, ya que estas carecen de erosion o dao en la cuticula.
o El tratamiento es con la aplicacin de vitamina C, en dosis que van de 100 a 200
mg de vitamina C por kilo de alimento, dependiendo de la estabilidad del
producto en el alimento y el agua.
SINDROME DEL MUSCULO ACALAMBRADO: Se le conoce con varios nombres y se
caracteriza por flexin del musculo de la cola, que se pone rigido y no se puede
recuperar sin desgarrar el tejido. La cola se acalambra por bajas de oxigeno y estrs
causado por temperaturas altas, o tambin por enfermedad. Generalmente, cuando es
sacado el camarn del estanque para su observacin, ocurre el sndrome de la cola
acalambrada, ya que se expone al aire libre y a temperaturas que exceden los 38 o 40 C
(en el verano). Adems de estas razones, la causa mas comn de cola acalambrada es la
vibriosis, seguida de problemas con la calidad de agua (pH desbalanceado, altos niveles
de amonia). Otra causa del acalambramiento del musculo lo es una deficiencia o
inbalance mineral (calcio, potasio) en el agua o en la dieta del camarn.
SINDROME CRONICO DE CAMARN BLANDO: Las causas de este problema son las
inadecuadas prcticas alimenticias tales como el indebido almacenamiento del alimento
y la utilizacin de alimentos rancios o de mala calidad. Los sntomas que presentan a
parte de un estado persistente de muda (exoesqueleto blando) y rugoso tambin se
MANUAL DE LABORATORIO DE PATOLOGIA EN CAMARON
EL CAMARN DORADO, S.A. DE C.V. EL DESIERTO 54

pueden observar un color oscuro del exoesqueleto fuertemente colonizado por
ectoparsitos, letargia, debilidad y pobre crecimiento.
ENFERMEDADES DE ORIGEN TOXICO
TOXICIDAD DE ALGAS AZUL-VERDES: Ciertas algas de este tipo causan enteritis
hemocitica (Schizotrix calcicola, Cpirulina subsalsa), las cuales poseen una fuerte
endotoxina. El proceso de toxicidad se lleva a cabo por la ingestin de estas algas, ya en
el tracto digestivo son liberadas sus toxinas y causan dao en la mucosa de este rgano
generando una inflamacin hemoctica. La muerte se da por inbalance osmtico o pobre
absorcin de nutrientes debido a la destruccin de la mucosa; por ultimo aparece una
septicemia o presencia de bacterias que ingresan por las paredes del intestino
lesionadas. Un tratamiento adecuado es el suministrado antibitico via alimento para
evitar el ataque bacteriano y, por consecuencia disminuir la infeccin. Es necesario evitar
que se eleve la produccin y tipos de algas (especialmente las bnticas) en el estanque.
AFLATOXINAS: La exposicin a las aflatoxinas produce fuertes lesiones inflamatorias en
el hepatopncreas y menos fuertes en el rgano linfoide y tejido hematopoytico. Las
aflatoxinas son generadas por Aspergillum flavis y parasiticus, cuando el alimento ha
sido expuesto a lugares hmedos y calidos. Para prevenir que se desarrollen estos
hongos y generen este metabolito (aflatoxinas), es necesario llevar acabo un buen
almacenaje del alimento, cuidar que se encuentre en un lugar seco lejos de la humedad
y el calor.
ENFERMEDADES DE LAS BRANQUIAS NEGRAS: Existen algunas enfermedades a las que
se les asocia con las branquias negras o lesiones inflamatorias de las branquias; estas
enfermedades pueden ser causadas por hongos, protozoos, bacterias, deficiencia de
vitamina C, metales pesados, aceites y otros qumicos irritantes. Lesiones similares a las
branquias negras son causadas por exposiciones al cadmio y al cobre. La causa mas
comn se debe al amonio y nitrito presentes en el agua de cultivo, exposiciones agudas
o crnicas a 1 ppm de amonio no ionizado o 10 ppm de nitrito puede resultar en daos
de las branquias, as como leve mortandades; el tratamiento para este ultimo seria una
fuerte renovacin de agua.
MANUAL DE LABORATORIO DE PATOLOGIA EN CAMARON
EL CAMARN DORADO, S.A. DE C.V. EL DESIERTO 55


PRESENCIA DE VIBRIO EN AGUA

El monitoreo de cargas bacterianas del sistema nos permite tomar medidas justificadas. La flora
bacteriana en el sistema de agua de produccin presenta un comportamiento dependiente de
los das de cultivo, recambios, tipo de fertilizante.

Medidas correctivas: Algunos tratamientos han demostrado ser ineficientes para disminuir la
carga bacteriana de vibriosis sp, en los estanques se administra productos como omicron 3
lts/ha, bioaqua 350 ml/ha, asi mismo probioticos AC 2135 y bionutre en relacin 1:1 (1 kg de
probiotico/100 lts de agua) una vez preparada la mezcla se aplican 50 lts/ha.


PRESENCIA DE VIBRIO EN SEDIMENTOS

El monitoreo de los suelos es muy importante para mantener las condiciones optimas y que no
alteren las condiciones del cultivo.

Medidas correctivas: Los tratamientos utilizados para disminuir la carga bacteriana en la
estanquera es el uso de probiotico 2135, AC y Bionutre 50 lts/ha.


PRESENCIA DE RANGOS ALTOS DE METABOLITOS (SULFUROS Y AMONIA)

Medidas correctivas: La forma de evitar un desbalance en los metabolitos es mantener una
buena calidad de agua y buen manejo del estanque a travs de recambios oportunos de agua
libre de niveles txicos de amonia, en casos se utilizan productos como cal 100 kg/ha.



MANUAL DE LABORATORIO DE PATOLOGIA EN CAMARON
EL CAMARN DORADO, S.A. DE C.V. EL DESIERTO 56

ANTIBIOTICOS

Los antibiticos son sustancias producidas por microorganismos que inhiben o matan a otros
microorganismos.
Cuando los mecanismos normales de defensa de un husped y las medidas preventivas fallan al
tratar de protegerse contra el establecimiento de organismos patgenos se utilizan agentes
antimicrobianos, que tienen la finalidad de eliminar al microorganismo patgeno o prevenir su
establecimiento.
Un agente antimicrobiano debe inhibir a los microorganismos infectantes y tener gran toxicidad
hacia el organismo de este, pero producir la menor cantidad de efectos colaterales al husped,
es decir la viabilidad en el uso de los antibiticos en vivo como agentes quimioterpico depende
de la especificidad de accin de dichas sustancias, donde el objetivo consiste en matar a los
microorganismos sin provocar efectos perjudiciales en el husped. Los antibiticos eficaces
trabajan porque inhiben reacciones metablicas esenciales en el organismo blanco y son
relativamente inocuos para el husped.
La toxicidad selectiva se debe a las diferencias entre los metabolismos del husped y el
infectante, a la unin selectiva a estructuras metablicas aproximadamente similares (se unen
selectivamente a las membranas y las altera) y a las diferencias de permeabilidad de las clulas
a los agentes quimioterpicos.
Es muy importante saber si el antibitico es bactericida o bacteriosttico o si acta en clulas en
crecimiento o no.
AGENTE BACTERIOSTTICO: Previene la proliferacin de microorganismos infectantes
manteniendo su poblacin a raya hasta que los mecanismos inmunolgicos de defensa normal
elimine al agente invasor.
AGENTE BACTERICIDA: Los que matan a las bacterias.
Para elegir un antibitico se deben tomar en cuenta los siguientes factores:
1. Sensibilidad del microorganismo infectante al agente microbiano.
2. Efectos colaterales del antibitico relativos a la toxicidad directa para las clulas del
husped.
MANUAL DE LABORATORIO DE PATOLOGIA EN CAMARON
EL CAMARN DORADO, S.A. DE C.V. EL DESIERTO 57

3. Las biotransformaciones de los agentes antimicrobianos que suceden in vivo, es decir
como permanecen en su forma activa el tiempo suficiente para que sean selectivamente
txicos.
4. Las propiedades qumicas para determinar su distribucin en el organismo, para saber
las concentraciones adecuadas y que puedan ser capaces de alcanzar el sitio de infeccin
para matar o inhibir a los microorganismos.

FORMAS DE ACCIN DE LOS ANTIBIOTICOS
1. Inhibicin de la sntesis de cido flico: El acido flico es una coenzima esencial
compuesta en parte del cido paraaminobenzoco. Existen las clulas de lo mamferos
incapaces de sintetizar cido flico, necesitan un suministro en su dieta y su asimilacin
es por transporte activo (movimientos de materiales a travs de membranas celulares de
concentracin baja a concentracin alta con gasto de energa metablica). Las clulas
bacterianas en cambio si lo sintetizan y son incapaces de transportarlo a travs de su
membrana. Los anlogos del cido paraaminobenzoco son competidores efectivos con
el sustrato natural para las enzimas involucradas en la sntesis del cido flico y como
tales, son capaces de inhibir la formacin de esta coenzima necesaria produciendo un
efecto bacteriosttico.
El principal antibitico representante de este grupo son las sulfamidas son
bacteriostticas y su eliminacin o incluso la adicin de p-aminobenzoco al medio
permite que se restablezca el crecimiento del organismo sensible. La inhibicin depende
de:
Capacidad de la bacteria para sintetizar el cido flico
Su permeabilidad al cido flico
Presencia en el medio de compuestos no competitivos que puedan revertir la
reaccin
Debido a la resistencia natural y adquirida de las bacterias, sus efectos y disponibilidad,
las sulfamidas son de utilidad en un nmero de infecciones limitadas.
MANUAL DE LABORATORIO DE PATOLOGIA EN CAMARON
EL CAMARN DORADO, S.A. DE C.V. EL DESIERTO 58

2. Inhibicin de la pared celular (Sntesis de peptidoglucanos): Los antibiticos que trabajan
mediante este mecanismo inhiben la formacin de uniones de pptidos en la columna
de la pared celular, por ejemplo inhibiendo las enzimas de reacciones de unin como
transpeptidasas. Las paredes celulares bacterianas carentes de la cadena de pptidos
son sujetas al ataque de autolisinas (enzimas automticamente producidas por el
organismo y que degradan las estructuras de las paredes celulares de la propia clula), y
el resultado es que en presencia del antibitico las clulas bacterianas en crecimiento
estn sujetas a lisis porque sin estructuras de pared celular funcionales, la clula
bacteriana queda desprotegida contra el choque osmtico. Para inhibir eficazmente la
sntesis de pptidoglucanos el antibitico debe de atravesar las capas externas de
lipopolisacaridos para alcanzarlos ya que estn situadas en la porcin interna de la pared
celular. El peptidoglucano es un componente rgido de la pared celular en la mayora de
las bacterias.
El crecimiento continuo de las clulas sin que haya sntesis de la capa estructural rgida
de peptidoglucano conduce a la lisis celular. El peptidoglucano acta normalmente
como una fuerza que se opone a la elevada presin osmtica en el interior de la clula
bacteriana (la mayor parte de las bacterias viven en medios hipotnicos en relacin con
el interior de la clula y necesitan estar rodeadas de peptidoglucano asociado a la
membrana a partir de nucletidos de uridina precursora. A este grupo lo representa la
penicilina. NOTA: La resistencia de especies reside en la hidrlisis enzimtica (penicilasas
bacterianas).
3. INHIBIDORES DE LA SINTESIS DE LA PROTENA: Los antibiticos que pertenecen a este
grupo son aminoglucsidos que contienen azucares aminados unidos por enlaces
glucosdicos. Son efectivos contra bacterias aerobias y anaerobias facultativas.
Estos antibiticos se unen a subunidades ribosmaticas 30S del ribosoma procariote 70S
bloqueando la sntesis de protena y alterando la fidelidad de traduccin del cdigo
gentico. Este grupo de antimicrobianos altera el funcionamiento normal de los
ribosomas interfiriendo con la formacin de los complejos de iniciacin de la sntesis de
las protenas, adems induce a la lectura errnea de las molculas de RNA mensajeras,
ocasionando la formacin de enzimas no funcionales. Esta interferencia en la sntesis de
MANUAL DE LABORATORIO DE PATOLOGIA EN CAMARON
EL CAMARN DORADO, S.A. DE C.V. EL DESIERTO 59

protenas provoca la muerte de la bacteria. Para ser eficaces, los aminoglucsidos deben
ser transportados a travs de la membrana citoplasmtica. Pertenecen a este grupo las
tetraciclinas, cloranfenicol, eritromicina y estreptomicina.
Tetraciclinas: Las de amplio espectro interaccionan con las subunidades
ribosmica 30S bloqueando el sitio receptor para la fijacin de RNA y as previene
la adicin de aminocidos a la cadena polipeptdica en desarrollo. Su lugar de
inhibicin principal de la sntesis de protenas es la unin del AA-RNAt a la
subunidad 30S. Todas las tetraciclinas poseen un amplio espectro antibacteriano
idntica, y el desarrollo de resistencia a uno de ellos provoca la resistencia a
todas las tetraciclinas, pero difieren en estabilidad, en velocidad de absorcin y
excrecin. La resistencia de las tetraciclinas es medida por plsmidos e involucra
alteraciones en el mecanismo de transporte de las molculas de tetraciclina a
travs de la membrana.
Cloranfenicol: Bacteriosttico de amplio espectro que acta unindose a las
subunidades ribosmicas 50S previniendo la unin de las molculas de tRNA en
sitios de unin de los ribosomas y en consecuencia no se forman las uniones
peptdicas, o sea que inhiben la etapa de transpeptidacin en la sntesis de
protenas. La resistencia al cloranfenicol esta generalmente asociada a la
presencia de plsmidos R que codifican enzimas capaces de transformar la
molcula de antibitico, por la enzima acetiltransferasa. Este es un antibitico
que produce efectos txicos.
Eritromicina: Inhibe la etapa de translocacin de la sntesis de protena. Pueden
ser bacteriostticas en concentraciones cercanas al mnimo para inhibir, pero son
bactericidas a concentraciones 10 veces ms altas. Acta en la subunidad S.
Inhibe a las bacterias gran positivas.
4. INHIBIDORES DE LA FUNCIN DE LOS ACIDOS NUCLEICOS: Las rifamicinas son los
antibiticos ms representativos de este grupo. Los modos de accin son:
Interacciones con el DNA y RNA molde, dificultando la transcripcin o la
replicacin.
MANUAL DE LABORATORIO DE PATOLOGIA EN CAMARON
EL CAMARN DORADO, S.A. DE C.V. EL DESIERTO 60

Interacciones con las polimerasas implicadas en la transcripcin a replica (inhibe
a la RNA-polimerasa y bloquean la sntesis de DNA).
Como anlogos a los componentes de cidos nuclecos, dificultando su sntesis o
provocando alteraciones en su estructura y funcin.
5. ANTIBIOTICOS QUE PRODUCEN DAOS A LA MEMBRANA: Son antibiticos polipeptdicos
que destruyen a la bacteria daada principalmente en la membrana celular y destruyen
la barrera de permeabilidad de la clula. La membrana citoplasmtica es el sitio de
accin de algunos agentes antimicrobianos, interactuando con ella causan cambios en la
estructura de la membrana de la clula bacteriana y por ende el derrame de la clula;
estn relacionados al contenido de fosfolpidos de la pared celular y del complejo de
membrana.
6. OTROS MECANISMOS: Existen antibiticos que actan mediante mecanismos aun
desconocidos. Algunos funcionan como antimetabolitos, agregan equivocadamente un
anlogo (antibitico) en lugar de la sustancia normal, da como resultado la formacin de
molculas que son incapaces de llevar a cabo sus funciones metablicas normales.
Otros inhiben la biosntesis de acido micolicos que son componentes nicos de la pared
celular de microbacterias y el bloque de la sntesis de estos componentes pueden inhibir
especficamente a las micobacterias.












MANUAL DE LABORATORIO DE PATOLOGIA EN CAMARON
EL CAMARN DORADO, S.A. DE C.V. EL DESIERTO 61

DESARROLLO DE RESISTENCIA
Las cepas resistentes estn dotadas de genes que codifican para propiedades que producen
resistencias (plsmidos R). Incluso si esta cepa se encuentra en concentraciones baja en relacin
con las cepas sensibles, la exposicin de las cepas sensibles a los agentes quimioterpicos
seleccionar la resistencias por lo que a medida que aumenta el uso de antibitico lo hace
tambin la frecuencia de aparicin de cepas resistentes. Un uso moderado de los antibiticos
hace su eficacia ms duradera. Su uso sin ninguna seguridad de que son beneficiosos,
simplemente incrementa la probabilidad de aumento del nmero de cepas resistentes en el
medio.
Ocasionalmente la base de la resistencia tiene que ver con la capacidad de cepas en particular
para producir enzimas que degradan el antibitico no permitiendo que la forma activa del
mismo alcance la pared celular bacteriana donde pueden ser inhibidas. La resistencia tambin
puede deberse a una menor asimilacin de la droga, metablicamente transformada a su forma
no toxica, a la disminucin de su forma activa y a la disminucin de la sensibilidad microbiana
contra la droga.
Otro factor importante es el transporte de DNA entre las bacterias. Si el DNA transportado
codific para resistencia, una celula sensible se hara resistente cuando reciba o incorpore dicho
DNA en su propio DNA, esto por medio de plsmidos y transposones (sustancia con capacidad
de mover un elemento de DNA a otro) por lo que facilitan que los genes que codifican para la
resistencia puedan incorporarse al material gentico de cepas sensibles. Los genes que codifican
para resistencia se transfieren entre las clulas a travs de la transferencia de los plsmidos o
mediante bacterifagos vectores.
La frecuencia de la utilizacin de agentes quimioterpicos y la facilidad con que los genes se
transfieren entre determinados patgenos resistentes y sensibles influye en la aparicin de cada
vez ms cepas resistentes.
Los genes para resistencia codifican mecanismos de resistencia diferentes, dependiendo del
antibitico, a veces hay diferentes mecanismos para un mismo antibitico.
Existen resistencia por:
1. Modificacin enzimtica:
N-acetilacin
MANUAL DE LABORATORIO DE PATOLOGIA EN CAMARON
EL CAMARN DORADO, S.A. DE C.V. EL DESIERTO 62

O-fosforilacin
O-nucleotidacin
2. Bloqueo de transporte
3. Hidrlisis enzimtica
4. Metilacin enzimtica del RNA 23S ribosmico
5. Sustitucin de la enzima resistente
6. Cambios de permeabilidad
SINERGISMO Y ANTAGONISMO
El efecto de combinacin de dos sustancias sobre una sola especie puede ser aditiva, sinrgico y
antagnico.
Aditivas: Si el efecto de la combinacin es igual a la suma de los efectos de los
antibiticos individuales.
Sinrgicos: Si la suma de los efectos es mayor que los efectos independientes.
Antagonismo: Si la suma de los efectos es menor que los efectos independientes.















MANUAL DE LABORATORIO DE PATOLOGIA EN CAMARON
EL CAMARN DORADO, S.A. DE C.V. EL DESIERTO 63







MANUAL DE LABORATORIO DE PATOLOGIA EN CAMARON
EL CAMARN DORADO, S.A. DE C.V. EL DESIERTO 64





Figura 1.- Ejemplos de rotferos (Brachionus plicatilis y Keratella cochlearis), cladceros (Daphnia
magna) y coppodos (Acanthocyclops vernalis) comunes en sistemas acuticos


ROTIFEROS
MANUAL DE LABORATORIO DE PATOLOGIA EN CAMARON
EL CAMARN DORADO, S.A. DE C.V. EL DESIERTO 65


Larva de un nauplio

COPEPODOS

MANUAL DE LABORATORIO DE PATOLOGIA EN CAMARON
EL CAMARN DORADO, S.A. DE C.V. EL DESIERTO 66



























POLIQUETOS
MANUAL DE LABORATORIO DE PATOLOGIA EN CAMARON
EL CAMARN DORADO, S.A. DE C.V. EL DESIERTO 67


Amphoraovalis

Biddulphia pulchella

Cocconeis krammerii

Cyclotella meneghiniana

Phaeodactylum tricornutum

Skeltomema potamos

Surirela sublinearis

Triceratium dubium

DIATOMEAS




CIANOFITAS
MANUAL DE LABORATORIO DE PATOLOGIA EN CAMARON
EL CAMARN DORADO, S.A. DE C.V. EL DESIERTO 68



CLOROFITAS


Ceratium
(Dinophyceae)

Alexandrium
(=Gonyaulax)
(Dinophyceae)

Pfiesteria shumwayae
(Blastodiniophyceae)

Noctiluca scintillans
(Noctiluciphyceae)

DINOFLAGELADOS