Sebenta de Biologia Molecular Da Celula Joao Milhano PDF

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IACULDADL DL MLDICINA DL LIS8CA

Mestrado Integrado em Med|c|na
2012]2013

8lologla Molecular da Celula
Mdulo l.l 8lologla Molecular, Celular e do uesenvolvl-
menLo Pumano e CeneLlca

!oo CouLlnho de Almelda Mllhano
14631

SL8LN1A DL 8ICLCGIA MCLLCULAk DA CLLULA
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INDICL
IN1kCDUC......................................................................................................................................... 4
8LCCC 1: IN1kCDUC CLLULA ......................................................................................................... S
8LCCC 2: GLNLS, GLNCMA L LNGLNnAkIA GLNL1ICA .......................................................................... S
unA L C8CMCSSCMAS............................................................................................................................ 6
18AnSC8lC ........................................................................................................................................ 8
CCn18CLC uA 18AnSC8lC ................................................................................................................... 11
18AuuC .......................................................................................................................................... 11
CCn18CLC uA 18AuuC ...................................................................................................................... 13
LnCLnPA8lA CLnL1lCA .......................................................................................................................... 13
8LCCC 3: MLM8kANAS L CCMAk1IMLN1CS IN1kACLLULAkLS ........................................................ 14
8C1LlnAS MLM88AnA8LS ..................................................................................................................... 14
C8CAnLLCS MLM88AnA8LS .................................................................................................................... 13
18AnSC81L vLSlCuLA8 ......................................................................................................................... 20
vlAS uL SLC8LC ................................................................................................................................ 23
8LCCC 4: A CkIGLM DA VAkIAC GLNL1ICA..................................................................................... 28
8LCCC S: kLLAC GLNC1IC-ILNC1IC ........................................................................................... 28
8LLlCAC uC unA ............................................................................................................................ 28
8LA8AC uC unA ............................................................................................................................ 31
8LCCM8lnAC PCMCLCCA ................................................................................................................... 34
LLLMLn1CS CLnL1lCCS MCvLlS L vl8uS..................................................................................................... 33
8LCCC 6: IMUNCLCGIA ....................................................................................................................... 37
ulvL8SluAuL uL v8M ........................................................................................................................... 37
uLSLnvCLvlMLn1C uL CLLuLAS 8 ............................................................................................................ 38
uLSLnvCLvlMLn1C uL CLLuLAS 1............................................................................................................. 39
uCLnAS ............................................................................................................................................ 40
8LCCC 7: DIILkLNAS GLNL1ICAS LN1kL C nCMLM L A MULnLk ...................................................... 42
MLlCSL .............................................................................................................................................. 42
ullL8LnAS CLnL1lCAS .......................................................................................................................... 44
unA Ml1CCCnu8lAL ............................................................................................................................. 43
8LCCC 8: DCS GLNLS AC CkGANISMC ................................................................................................ 48
CCn18CLC uA 18AnSC8lC ................................................................................................................... 49
8CCLSSAMLn1C uL M8nA 18AnSC8l1C ................................................................................................... 32
CCn18CLC uA uLC8AuAC uL M8nA ..................................................................................................... 32
CCn18CLC uA 18AuuC ...................................................................................................................... 33
AC1lvAC uL 8C1LlnAS....................................................................................................................... 34
8LCCC 9: kCLIILkAC L MCk1L CLLULAk....................................................................................... SS
SlS1LMAS uL CCn18CLC uC ClCLC CLLuLA8................................................................................................ 36
lASL S ............................................................................................................................................... 38
lASL M .............................................................................................................................................. 60
CCn18CLC uC nML8C L 1AMAnPC uAS CLLuLAS........................................................................................ 61
CAnC8C ............................................................................................................................................. 66
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8LCCC 10: CI1CLSULLL1C ................................................................................................................. 68
MlC8C18uLCS ................................................................................................................................... 68
llLAMLn1CS ln1L8MLulCS ...................................................................................................................... 71
llLAMLn1CS uL AC1lnA Cu MlC8CllLAMLn1CS ........................................................................................... 73
ANLkC A: AULAS 1LCkICC-k1ICAS .................................................................................................. 77
AuLA 1LC8lCC-81lCA 1: MCLLCuLA uL unA L CLCnACLM MCLLCuLA8........................................................ 77
AuLA 1LC8lCC-81lCA 2: 1LCnCLCClA uL unA 8LCCM8lnAn1L ................................................................... 77
AuLA 1LC8lCC-81lCA 3: 1LCnlCA uL C8 ............................................................................................... 78
AuLA 1LC8lCC-81lCA 4: SLCuLnClAC uL unA ..................................................................................... 79
AuLA 1LC8lCC-81lCA 3: 1LCnlCAS uL uL1LCC uL 8C1LlnAS L CluCS nuCLLlCCS....................................... 79
AuLA 1LC8lCC-81lCA 6: AnLMlA uL lAnCCnl ......................................................................................... 79
AuLA 1LC8lCC-81lCA 7: 1LS1LS CLnL1lCCS ............................................................................................ 80
AuLA 1LC8lCC-81lCA 8: ulACnCS1lCC L MCnl1C8lZAC uC uCLn1L CCM Plv ............................................. 81
ANLkC 8: 1LCNICAS DL 8ICLCGIA MCLLCULAk L CLLULAk ................................................................. 82
MlC8CSCClA ...................................................................................................................................... 82
ull8ACC C8 8AlCS-x ........................................................................................................................ 83
LLLC18ClC8LSL ................................................................................................................................... 83
!"#$%&'()& +,(-. '&(+/-". (C8) ....................................................................................................... 84
uL1LCC uL 8C1LlnAS L CluCS nuCLLlCCS ........................................................................................... 86
1LCnlCA uC unA 8LCCM8lnAn1L (8unA) ................................................................................................ 88
SLCuLnClAC uL unA ........................................................................................................................ 89

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IN1kCDUC
AnLes de mals: mulLos parabens. Se esLs a ler esLa sebenLa, e porque consegulsLe enLrar na
melhor faculdade: a lMuL. C curso de Medlclna, no prlmelro ano (pelo menos, e o unlco do qual
Lenho experlncla para falar), consegue ser basLanLe rduo. repara-Le para o que al vem! no
enLanLo, posso garanLlr que as cadelras dlflcels, aquelas que Le desaflam, aquelas cu[as noLas flnals
aLe querlas que fossem melhores porque Le esforasLe, so as mals lnLeressanLes. L, Lalvez por lsso,
eleves LanLo as Luas expecLaLlvas. rlmelro conselho: dedlca-Le a aprender. Slm, as noLas so
lmporLanLes e deves LenLar luLar pela melhor posslvel mas se no flm no Le lembrares das bases, de
que Le servlu?
8em, mas falemos de 8lologla Molecular da Celula (vulgo 8MC). Se gosLasLe de 8lologla no 12.
ano e ao longo do secundrlo, fanLsLlco. Se no, bem, prepara-Le para o malor banho celular que
vais apanhar Agora a srio, BMC das cadeiras que parecem mais fceis ao incio porque j falas-
Le de unA e cromossomas. Mas no e. L mulLo lnLeressanLe mas puxa por Ll. LspeclalmenLe a Car-
mo. Sim, a pessoa que vos aparecer frente A Carmo e no O Carmo (depois percebers a
razo desLe esclareclmenLo). As aulas dela so mulLo mulLo boas. So, por experlncla (e arrepen-
dlmenLo), das poucas Lerlcas as quals vale a pena asslsLlr. ALe porque (segundo conselho!) as per-
gunLas do exame flnal andam mulLo a volLa dos pormenores que ela val deblLando nas aulas. vo.
Cs slldes so normalmenLe dlsponlblllzados anLes da aula por lsso aLe os podem levar e aponLar ao
lado os pormenores dela. Cra, era aqul mesmo que querla chegar.
Esta sebenta no bem uma sebenta. Ela a transcrio de uns resumos que fiz ao estudar
para o exame de 8MC de 2. fase e que achel que poderlam dar um bom apanhado geral da maLe-
rla. or lsso, ela fol felLa para vocs, calolros, a levarem para as Lerlcas (e Lambem Lerlco-
prLlcas, [ que um dos anexos e um resumo do que Lm de saber das Lerlco-prLlcas) e aponLa-
rem ao lado os pormenores dela. Slgam esLe conselho. P colsas que mudam Lodos os anos,
nomeadamenLe os exemplos que a Carmo usa para expllcar alguma parLe da maLerla e que ela
depols aprovelLa para o exame. A sebenLa esL organlzada por 8locos, [ que e asslm que a Carmo
organlza as aulas dela.
Se deLecLarem algum erro, clenLlflco ou orLogrflco, ou se Llverem alguma sugesLo a fazer,
conLacLem-me por emall ([oaomllhano[campus.ul.pL). ALeno, o Acordo CrLogrflco no conLa
(sou da velha guarda).
Lm Lermos de agradeclmenLos, Lenho alguns a fazer. Ao 8lcardo, a CaL e a 1eresa: obrlgado por
me Lerem aLurado nesLe ano de 012300 (meu e vosso). vos adoro como pessoas. Ao padrlnho mals
nervoso, lnseguro e hllarlanLe: obrlgado, !oo. A blbllografla que mals consulLel enquanLo eu pr-
prlo esLudava: obrlgado, 8afael e 8amlnhos (no sel se lsLo vos lr alguma vez chegar mas flcam
aqul felLos). A prlnclpal auLora do anexo sobre /4567580 93 :7;<;=78 %;<35><82 3 +3<><82: obrlgado,
CaLarlna (mlnha ouLra meLade da unldade funclonal de 8). A fornecedora de aponLamenLos das
Lerlcas: obrlgado, Mafalda. A mlnha revlsora clenLlflca: obrlgado pela Lua paclncla e dlsponlblll-
dade, CaLarlna. Aos Mega! LsLe[am onde esLlverem, foram a melhor Lurma que podla Ler no prlmel-
ro ano. Ao melhor LuLor desLa faculdade (slm, esL ocupado e no, ele no acelLa mals nlnguem):
obrlgado por Ludo, uavld. A melhor pessoa com quem frlLar: obrlgado, 8ambo.
Finalmente, gostaria s de, tal como Cames, oferecer a minha obra. Esta para ti, O.

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8LCCC 1: IN1kCDUC CLLULA
8LCCC 2: GLNLS, GLNCMA L LNGLNnAkIA GLNL1ICA

M|croscop|a: surge no seculo xvll, com 8oberL Pooke.

1eor|a ce|u|ar: posLulada por Schlelden e Schwann, em 1839.
A celula e a unldade bslca, esLruLural e funclonal dos seres vlvos,
1odas as celulas provm de celulas pre-exlsLenLes,
A celula e a unldade de heredlLarledade, reproduo e desenvolvlmenLo dos
seres vlvos.

Seres procar|ontes: seres mulLo slmples, unlcelulares, desprovldos de organelos e
de membrana nuclear (no Lm nucleo! L o que os ldenLlflca como procarlonLes!).
odero Ler uma cpsula, semelhanLe a parede celular, que envolve a membrana
celular.

Seres eucar|ontes: seres cu[as celulas apresenLam nucleo lndlvlduallzado, dellmlLa-
do por uma membrana nuclear. odem ser unlcelulares (como as leveduras) ou plu-
rlcelulares. LxlsLem organelos que desempenham uma aco especlallzada.
Nc|eo: fechado pela membrana nuclear, ou envelope nuclear, ou lnvlucro
nuclear (blcamada llpldlca que lnvaglna sobre sl prprla, permlLlndo a forma-
o de uma membrana nuclear lnLerna e de uma membrana nuclear exLerna) e
conLem moleculas de unA (lnformao geneLlca do lndlvlduo). So vlslvels
cromossomas duranLe a mlLose ao MCC (mlcroscplo pLlco composLo).
M|tocndr|a: revesLlda por duas membranas, uma lnLerna e uma exLerna, que
dellmlLam um espao lnLermembranar. A lnLerna lnvaglna para o lnLerlor do
organelo, formando crlsLas mlLocondrlals. ConLem unA prprlo (mLunA) e con-
segue repllcar-se lndependenLemenLe. 1er sldo uma bacLerla aerbla que no
sofreu heLerofagla, vlvendo asslm em endosslmblose. L responsvel pela
obLeno de energla celular (produo de A1 aLraves do caLabollsmo gllcldlco
e Lambem llpldlco). Consome oxlgenlo e llberLa dlxldo de carbono.
ket|cu|o endop|asmt|co: con[unLo de clsLernas achaLadas, Lubulos e veslculas
que forma um slsLema conLlnuo enLre o lnvlucro nuclear e a membrana plas-
mLlca. LxlsLem duas formas: o rugoso (malor reglo de slnLese de proLelnas,
possulndo rlbossomas llgados a sua face exLerna/clLoplasmLlca) e o llso (slnLe-
se de fosfollpldos e, sobreLudo, elaborao de novas membranas).
Apare|ho de Go|g|: con[unLo de Lodos os dlcLlossomas (sculos ou clsLernas
achaLadas na perlferla das quals parLem veslculas). 1em uma face convexa
Colgl cls (fase de formao), vlrada para o reLlculo, e uma face cncava Colgl
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Lrans (fase de maLurao), vlrada para a membrana plasmLlca. LsL envolvldo
na slnLese e secreo de dlversas subsLnclas, como gllcoproLelnas e pollssaca-
rldeos. lmporLanLe local de modlflcaes ps-Lraduclonals, Lornando funclonals
cerLas proLelnas, como enzlmas.
L|sossoma: veslcula que conLem vrlos Llpos de enzlmas, como as hldrolases e a
-glucocerebrosldase. lormam-se no Colgl Lrans e podem unlr-se a veslculas
endoclLlcas (formando um vacuolo dlgesLlvo), onde ocorre dlgesLo (heLerofa-
gla). So Lambem responsvels pela dlgesLo dos prprlos organelos (auLofa-
gla).
erox|ssoma: veslcula com um amblenLe lnLerno proplclo a reaces de slnLe-
se/degradao de perxldo de hldrogenlo (P
2
C
2
).
C|toso|: espao enLre os organelos, preenchldo por gua, les, amlnocldos,
precursores de cldos nuclelcos, enzlmas e proLelnas.
Membrana p|asmt|ca: ver 8LCCC 3.
C|toesque|eto: ver 8LCCC 10.

DNA e Cromossomas
8econheclmenLo do unA como porLador da lnformao geneLlca, sendo a sua
esLruLura deLermlnada por !ames WaLson e lrancls Crlck (1933), pelo meLodo da
dlfraco por ralos-x (ver ANLkC 8).

DNA: macromolecula com duas longas cadelas pollnucleoLldlcas dlsposLas em hellce
e llgadas por ponLes de hldrogenlo.

Cs nuc|et|dos so composLos azoLados de oses: aucar com clnco carbonos pen-
Lose, sendo que no unA e a desoxlrrlbose e no 8nA e a rlbose, um grupo fosfaLo
(C
4
3-
), uma base azoLada, que permlLe dlsLlngulr quaLro Llpos de dn1s:
Aden|na (A)
Guan|na (G)
1|m|na (1)
C|tos|na (C)

A adenlna e a guanlna so bases pr|cas]pur|n|cas]de ane| dup|o e a Llmlna e a
clLoslna so bases p|r|m|d|cas]de ane| s|mp|es. LxlsLe complemenLarldade de bases:
emparelhamenLo de nucleLldos de Adenlna com os de 1lmlna (A=1) e dos nucle-
Lldos de Cuanlna com os de ClLoslna (CC). ual se reLlra a kegra de Chargaff:
A +G
T + C
1

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Cs nucleLldos de uma mesma cadela llgam-se enLre sl aLraves de llgaes fosfo-
dlesLer, sendo estas estabelecidas entre o grupo fosfato (carbono 5) e a pentose
(grupo hidroxilo do carbono 3), formando o 0>=82?@A;0@A813 B85CB;63. LsLas llga-
es conferem polarldade ao unA, permlLlndo a dlsLlno de duas exLremldades:
extremidade 5 (fosfaLo) e extremidade 3 (grupo hldroxllo). As cadelas so anLl-
paralelas (orlenLam-se com polarldades lnversas), permlLlndo a formao da dupla
hellce. LsLa conformao e favorvel vlsLo que as bases azoLadas, hldrfobas, so
proLegldas do conLacLo com a gua, enconLrando-se no nucleo da dupla hellce.

Gene: unldade fundamenLal da heredlLarledade. L um segmenLo de unA que codlfl-
ca lnformao que leva a produo de uma proLelna (ou pollpepLldo ou pepLldo) ou
8nA no codlflcanLe. lnclul regles que anLecedem e que sucedem a reglo codlfl-
canLe, bem como sequncla que no so Lraduzldas (lnLres) que esLo lnLercaladas
com segmenLos codlflcanLes (exes), que se manLm na sequncla de 8nA maduro
e podero ser Lraduzldos. LxlsLem, no ser humano, cerca de 23.000 genes.

Genoma: sequncla nucleoLldlca compleLa presenLe nos 24 cromossomas humanos
(22 auLossomas e 2 heLerossomas/cromossomas sexuals). L consLlLuldo por cerca
de 3,2x10
9
nucleLldos (cromaLlna), sendo que apenas 2 e composLa por exes e
sequnclas reguladoras.

Car|t|po: dlsposlo de Lodos os 46 cromossomas humanos.

Cromossoma: esLruLura condensada do unA enconLrando-se esLe assoclado a pro-
Lelnas: hlsLonas e proLelnas no-hlsLonas. C complexo de hlsLonas (P2A, P28, P3 e
P4) e responsvel pela formao dos nucleossomas, devldo a sua carga poslLlva. As
regles que conLm genes expressos esLo menos compacLadas.
neterocromat|na: forma mals condensada da cromaLlna, geralmenLe assoclada
aos Lelmeros e cenLrossomas. 8esulLa de uma modlflcao sobreLudo na cau-
da da hlsLona P3 que compacLa genes que no so ou so menos expressos. A
condensao e promovlda, por exemplo, por hlsLona-deaceLllases (PuAC ou
Pu).
Lucromat|na: forma descondensada da cromaLlna. ermlLe uma malor acesslbl-
lldade a proLelnas e a facLores de Lranscrlo. A descondensao e promovlda,
por exemplo, por hlsLona-aceLllLransferases (PA1), que adlclonam grupos aceLll
a reslduos de llslna.

no genoma humano, dlsLlnguem-se dols Llpos de elemenLos geneLlcos:
Sequnc|as n|cas
Cenes (lnLres e exes),
Sequnclas reguladoras.
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Sequnc|as repet|das
Cenes dupllcados,
8epeLles slmples,
LlemenLos geneLlcos mvels (LlnLs #;6=?761320@32039 6>5<382 3<3D3610,
SlnLs )A;21?761320@32039 6>5<382 3<3D3610, Lransposes e reLro-
Lransposes),
LlemenLos reLrovlrals.

o||morf|smo: alLerao geneLlca presenLe em mals de 1 da populao. ulsLlngue-
se da muLao por esLa se verlflcar em menos de 1 da populao.

SN (!"#$%&'#()%&*+",& .*%/0*1.2"!0): pollmorflsmos mals frequenLes no unA que
envolvem a modlflcao de apenas um nucleLldo. 1raLam-se de subsLlLules, sen-
do que Lambem podem LraLar-se de lnseres ou deleces em casos mals raros.
ossuem dols alelos, sendo que podem causar alLeraes nas sequnclas de resLrl-
o enzlmLlca (sequnclas que podem ser reconhecldas por deLermlnadas enzlmas
de resLrlo), orlglnando fragmenLos de resLrlo de comprlmenLo varlvel (8lL).
Alguns Sns relaclonam-se com sequnclas assocladas a meLabollsmos, podendo
causar resposLas dlferenLes de pessoa para pessoa a mesma dose do mesmo frma-
co.

1ranscr|o
Dogma centra| da 8|o|og|a Mo|ecu|ar: quando e necessrla uma proLelna, a
sequncla de nucleLldos do unA e coplada para sequnclas de 8nA que lro pro-
duzlr, aLraves dos rlbossomas, cadelas pollpepLldlcas que lro orlglnar proLelnas.
lsLo aconLece em Lodas as celulas.

1ranscr|o: coplar a sequncla de unA em 8nA.
AberLura e desenrolar de uma pequena poro de unA.
uma das cadelas acLua como molde para slnLese de 8nA.
Adlo de rlbonucleLldos a cadela de 8nA (8nA no se llga por ponLes de
hldrogenlo ao unA, a medlda que os rlbonucleLldos so adlclonados, o 8nA
desllga-se e o unA volLa a enrolar).

kNA po||merase: caLallsa a formao de llgaes fosfodlesLer que unem os rlbonu-
cleLldos. Move-se ao longo da cadela de unA, desenrolando a hellce. A unlo dos
nucleLldos faz-se no sentido 53, uLlllzando energla de rlbonucleLldos Lrlfosfa-
Lados. Lm eucarloLas, exlsLem Lrs Llpos, responsvels pela Lranscrlo de dlferenLes
classes de 8nA:
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kNA po||merase I e III: L8nA, r8nA e 8nA de lmporLncla esLruLural e caLallLlca.
kNA po||merase II: malorla dos genes da celula.

A forma como as 8nA pollmerase procarloLa e eucarloLa acLuam e dlferenLe:
rocar|otas
Adeso pouco lnLensa ao unA,
uesllza aLe enconLrar o promoLor (sequncla de reconheclmenLo para o qual
Lem aflnldade e que lndlca o ponLo de parLlda),
Llgao do factor , abrlndo a dupla hellce,
Lscolha da cadela-molde (llga-se as duas cadelas, sendo que flca bloqueada
aquela com quem esLabelece uma llgao mals forLe),
SolLa-se o facLor e d-se elongao da cadela de 8nA, por complemenLarl-
dade,
LnconLra o slnal Lermlnador: solLa-se o complexo (llga-se um facLor e pro-
cura novo promoLor).

Lucar|otas
uependenLe de facLores de Lranscrlo: proLelnas acessrlas que se reunem
ao nlvel do promoLor (1A1A B;E, e uma sequncla consLlLulda sobreLudo por
1 e A, esLando a monLanLe do local de lnlclo da Lranscrlo), poslclonam a
pollmerase, abrem a dupla hellce, expem a cadela molde e acLlvam a 8nA
pollmerase. Llgam-se a uma proLelna medladora.
Llgao do facLor 1lllu: causa uma dlsLoro no unA que serve como local
de referncla para ouLras proLelnas. losforlla o complexo enzlmLlco, acLl-
vando-o (Lem acLlvldade de clnase).
I|gura 1 C|c|o de transcr|o da kNA po||merase bacter|ana.
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Sequnclas reguladoras dlspersas ao longo do unA, separadas por mals de
100.000 nucleLldos: gene e conLrolado por vrlas sequnclas reguladoras.
1ranscrlo no nucleo: maLurao do pre-m8nA.
34.."#$ adlo de uma guanlna meLllada extremidade 5 (quando a
cadela formada [ Lem 23 nucleLldos),
5*%"4,&#"%467* clivagem da extremidade 3, adicionando-lhe uma cau-
da poll-A,
8.%")"#$ remoo dos lnLres e agluLlnao dos exes. ldenLlflcao de
sequnclas de consenso de 0@<7576= perLo dos lnLres, sobreLudo nas
exLremldades, e que so lguals em Lodos os lnLres. Cllvagem da
sequncla no-codlflcanLe aLraves da reaco enLre uma adenlna e a
exLremldade 5 do intro, formando-se um anel que e removldo e llgan-
do-se as exLremldades dos exes. caLallsado pelo spllceossoma, consLl-
Luldo por proLelnas e sn8nA (0D8<< 6>5<382 '.(). C !.%")"#$ a|ternat|vo
permlLe produo de proLelnas dlferenLes a parLlr do mesmo gene, a
parLlr da [uno de exes de vrlas manelras (vrlos m8nA a parLlr do
mesmo pre-m8nA). laz-se por llgao de um repressor a sequnclas de
consenso de spllclng, que bloquela a llgao de facLores do spllceosso-
ma.
Mlgrao para o clLoplasma:
Llgao de um recepLor de LransporLe nuclear (facLor de exporLao),
Troca do 5 58@ por um facLor de lnlclao da slnLese proLelca.
uepols de usado, o m8nA e degradado: encurLamenLo da cauda poll-A,
remoo do 5 58@ e degradao aLraves de nucleases.

I|gura 2 1ranscr|o em Lucar|otas.
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Contro|o da 1ranscr|o
1raduo
1raduo: descodlflcao da llnguagem nuclelca em llnguagem proLelca. 8asela-se
no cdlgo geneLlco, que e:
Un|versa|: Lodos os organlsmos o respelLam,
kedundante: mesmo amlnocldo e codlflcado por codes dlferenLes,
No amb|guo: um codo codlflca um e um s amlnocldo.

Codo: LrlpleLo de m8nA.
Ant|codo: LrlpleLo de L8nA, complemenLar ao codo.
Codogene: LrlpleLo de unA, complemenLar ao codo.

tkNA: 8nA de Lransferncla. 1em uma forma de Lrevo Lrldlmenslonal, adqulrlndo
duas pores especlflcas:
Ant|codo: Lrs nucleLldos complemenLares aos do m8nA.
Extremidade 3-Cn: local de llgao do amlnocldo ao L8nA. A reaco e caLall-
sada pela amlnoacll-L8nA slnLeLase, exlsLlndo uma lsoforma para cada amlno-
cldo. LsLabelece-se uma llgao forLe, aLraves da hldrllse de A1.

k|bossoma: complexo proLelco assoclado a r8nA (8nA rlbossomal). L consLlLuldo
por duas subunldades proLelcas: menor (correspondncla enLre L8nA e codes de
m8nA) e malor (llgaes pepLldlcas enLre os amlnocldos na cadela pollpepLldlca).
Cada rlbossoma, responsvel pela capLura e poslclonamenLo de L8nA e llgao
enLre amlnocldos, conLem um local de llgao a molecula de m8nA e Lrs para
monlLorlzao de L8nA:
Loca| A: llgao ao L8nA,
Loca| : llgao ao amlnocldo,
Loca| L: e[eco do L8nA, aps llgao do amlnocldo a cadela em formao.

ver 8LCCC 8
glna 12 de 89

Ltapas da traduo
Llgao do L8nA de lnlclao (LransporLa meLlonlna)
a pequena subunldade do rlbossoma, com facLores
de lnlclao da Lraduo, no local .
Llgao da pequena subunldade ao 5 58@ do m8nA.
MovlmenLao ao longo do m8nA, a procura do
prlmelro codo AuC.
ulssoclao dos facLores de lnlclao, llgando-se as
duas subunldades do rlbossoma.
L|ongao: llgao de um novo L8nA ao local A,
formao da llgao pepLldlca, avano de Lrs
nucleLldos, a conLa da hldrllse de C1.
Alcana-se um codo 01;@ (uAA, uAC, uCA) que e
reconhecldo por um L8nA no llgado a amlnocldo.
Llgao de facLores de llberLao ao codo 01;@ que
alLeram a pepLldll-Lransferase (adlo de gua e
necessrla gua!).
ulssoclao de Lodo o complexo, llberLando-se a
cadela pollpepLldlca no clLosol.

Lm eucarloLas, do-se alLeraes ps-Lraduclonals:
Lstrutura|s: F;<976= das proLelnas na sua esLruLura
naLlva, aLraves de 5A8@32;630.
Mod|f|caes cova|entes: fosforllaes.
L|gao a co-factores
Assoc|ao a outras prote|nas

or cada molecula de m8nA Lraduzlda, exlsLem duas regles no-Lraduzldas, as
u18:
5 UTR: nucleLldo 1 codo de lnlclao,
3 UTR: codo 01;@ cadela poll-A.

D|ferenas para os kCCAkIC1AS
mRNA sem 5 58@: os rlbossomas llgam-se a sequnclas de Shlne-ualgarno
(sequnclas de sels nucleLldos que anLecedem o codo AuC, podendo llgar-se
dlrecLamenLe ao codo de lnlclao).
no necesslLam de facLores de lnlclao.
mkNA po||c|strn|co: mesma molecula de m8nA codlflca vrlos Llpos dlferen-
Les de proLelnas.

I|gura 3 Ltapas da 1raduo.
glna 13 de 89

o||rr|bossoma: ampllflcao e economlzao da Lraduo aLraves da lelLura do
mesmo m8nA por vrlos rlbossomas.

Contro|o da 1raduo
Lngenhar|a Gent|ca

ver 8LCCC 8
ver ANLkC 8
glna 14 de 89

8LCCC 3: MLM8kANAS L CCMAk1IMLN1CS IN1kACLLULAkLS

Membrana p|asmt|ca: blcamada fosfollpldlca assoclada a proLelnas, assumlndo a
sua lmporLncla como barrelra fomenLadora de conslsLncla celular. lmpede o
exLravasamenLo da celula e fornece-lhe forma. Lm eucarlonLes, exlsLem vrlas
membranas lnLernas que dellmlLam e consLlLuem organelos celulares.

Cs llpldos nas membranas (fosfollpldos) so mo|cu|as anf|pt|cas vlsLo que na
mesma molecula comblnam uma poro hldroflllca (conLem grupos polares, esLabe-
lecem aLraces elecLrosLLlcas ou ponLes de hldrogenlo com a gua, dlssolvendo-
se nela) e uma poro hldrofblca (grupos apolares, no esLabelecendo lnLeraces
favorvels com gua). C confllLo enLre foras hldroflllcas e hldrofblcas e resolvldo
pelo efe|to entrp|co, aLraves da formao de uma dupla camada, na qual as por-
es hldroflllcas esLo em conLacLo com a gua e as hldrofblcas esLo em conLacLo
umas com as ouLras (face lnLerna da dupla camada). na membrana, os fosfollpldos
alnda se enconLram llgados enLre eles por foras de van der Waals.

A membrana no e esLvel: as moleculas Lrocam de lugar na prprla camada (dlfu-
so laLeral) e enLre as duas camadas (F<7@?F<;@), podendo alnda ocorrer movlmenLos
de roLao no prprlo fosfollpldo.

A fluldez da membrana depende de facLores como LemperaLura, pP e composlo
da membrana (Leor em colesLerol - colesLerol = rlgldez e permeabllldade).

As duas faces da blcamada apresenLam con[unLos dlferenLes de fosfollpldos. Cs
novos fosfollpldos que so lnLroduzldos na face clLosllca da membrana Lm de ser
Lransferldos para a face exLracelular. Lsse processo e caLallsado por fllpases.

rote|nas membranares

As proLelnas membranares desempenham lmporLanLes funes, Lals como
LransporLe de moleculas, ancoragem de moleculas a membrana, reconheclmenLo
de slnals qulmlcos do melo e acLlvldade enzlmLlca. uependendo do Llpo de
membrana e funo celular, o con[unLo de proLelnas membranares e dlferenLe e
reflecLe a especlallzao funclonal da membrana.
rote|nas transmembranares: aLravessam a membrana de um lado ao ouLro
(poro hldrofblca em conLacLo com as pores hldrofblcas da membrana).
odem ser -hellces ou barrls-.
glna 1S de 89

rote|nas assoc|adas a monocamada: ancoradas a superflcle clLosllca por uma
-hellce anflpLlca.
rote|nas ||gadas a ||p|dos: llgadas a um dos lados da membrana aLraves de
llgaes covalenLes a moleculas llpldlcas.
rote|nas assoc|adas a prote|nas: llgadas por llgaes relaLlvamenLe fracas
(no covalenLes) a ouLras proLelnas de membrana.

or|nas: proLelnas responsvels pela formao de poros na membrana
(especlalmenLe na mlLocndrla), permlLlndo a passagem de pequenos les e
nuLrlenLes e prevenlndo a enLrada de moleculas malores, como anLlblLlcos e
Loxlnas. A sua esLruLura naLlva e barrll- .

Crtex ce|u|ar: rede de proLelnas assocladas a proLelnas Lransmembranares,
enconLrando-se na superflcle clLosllca da membrana. 1em como prlnclpals
funes: manuLeno da forma da celula, reslsLncla mecnlca da celula, locomoo
celular e lmpedlmenLo da salda de deLermlnadas proLelnas aLraves da membrana.
no caso especlflco dos erlLrclLos, o seu crLex e consLlLuldo malorlLarlamenLe por
especLrlnas, esLando llgadas a membrana aLraves de proLelnas de ancoragem
lnLracelulares. uma deflclncla nas especLrlnas faz com que os erlLrclLos
apresenLem forma esferlca (esferoc|tose), se[am frgels e sur[am em pequenas
quanLldades (anemla, pela dlmlnulo consequenLe da concenLrao de
hemogloblna no sangue, por haver menor numero de erlLrclLos).

A superflcle celular esL revesLlda por gllcldos, nomeadamenLe por gllcoproLelnas
(proLelnas assocladas a ollgossacarldeos), proLeogllcanos (pollssacarldeos
assoclados a ollgopepLldos) e gllcollpldos, locallzando-se na monocamada no
clLosllca, formando a camada gllcldlca. LsLa camada proLege a membrana de danos
(mecnlcos e qulmlcos), lubrlflca a celula e permlLe o reconheclmenLo e adeso por
ouLras celulas. As lecLlnas so proLelnas especlallzadas no reconheclmenLo de
cadelas especlflcas de ollgossacarldeos. So exLremamenLe lmporLanLes em caso de
resposLa a lnfeces: os gllcldos da membrana dos neuLrfllos so reconhecldos por
lecLlnas das celulas endoLellals prxlmas da lnfeco. C reconheclmenLo conduz a
adeso dos neuLrfllos aos vasos e a mlgrao para o local de lnfeco (dlapedese).

Crgane|os membranares

Crgane|os: esLruLuras membranares que conLm moleculas unlcas e especlflcas
para deLermlnada funo celular. A exlsLncla de uma membrana que os dellmlLa
permlLe a ocorrncla de reaces que envolvem deLermlnadas enzlmas sem que
ha[a lnLerferncla de ouLras reaces que ocorrem nouLros comparLlmenLos celula-
glna 16 de 89

res. So eles a membrana nuclear, o reLlculo endoplasmLlco, o aparelho de Colgl, a
mlLocndrla, os llsossomas, os peroxlssomas e os endossomas.

Aquando da dlvlso celular, os organelos Lm de ser dupllcados, sendo para lsso
necessrlas novas moleculas, como proLelnas. Lssas proLelnas Lm de ser Lranspor-
Ladas para o organelo correspondenLe. C slsLema endomembranar recebe as pro-
Lelnas vla reLlculo endoplasmLlco, nomeadamenLe do rugoso. C lnvlucro nuclear
e a mlLocndrla recebem as proLelnas produzldas no clLosol, por lmporLao.

A excepo de proLelnas produzldas na mlLocndrla (vla mLunA), a slnLese proLelca
lnlcla-se no clLosol, sendo depols lmporLadas para o organelo correspondenLe. C
local para onde a proLelna se val dlrlglr depende de um 0;2176= 07=68< na sequncla
de amlnocldos.

9: ;14#!.*1+& .*1 5*1*! <()%&41&!

oro nuc|ear: esLruLura proLelca larga e complexa, alLamenLe selecLlva, que Lrans-
porLa acLlvamenLe macromoleculas especlflcas e conLem locals hldroflllcos que
permlLem a dlfuso llvre de gua e de pequenas moleculas.

I|gura 4 1ransporte por oros Nuc|eares.
glna 17 de 89

S|na| de |oca||zao nuc|ear: sequncla de amlnocldos que slnallza a dlreco da
proLelna do clLosol para o nucleo. ConslsLe numa sequncla curLa de amlnocldos
carregados poslLlvamenLe (llslnas e arglnlnas). A esLes slnals llga-se uma proLelna
clLosllca especlflca, o recepLor de LransporLe nuclear, que a[uda a proLelna a aLra-
vessar o poro nuclear. C LransporLador llga-se a sequnclas de amlnocldos do
poro, puxando aLe aLlnglr o nucleo. Al, dlssocla-se da proLelna e volLa a aLravessar o
poro em dlreco ao clLoplasma. LsLe LransporLe e energeLlcamenLe allmenLado
pela hldrllse de C1. uma caracLerlsLlca lmporLanLe desLe Llpo de LransporLe e o
facLo de a proLelna ser LransporLada dobrada (F;<939) na sua conformao flnal.

=: ;14#!.*1+& .414 4 >"+*)?#,1"4

As proLelnas lmporLadas para a mlLocndrla Lm a sequncla slnallzadora no seu n-
Lermlnal, sendo LransporLadas aLraves das duas membranas slmulLaneamenLe, em
locals especlflcos nos quals as duas membranas esLo em conLacLo.

Cada proLelna Lem de ser desdobrada (>6F;<939) a medlda que e LransporLada e o
seu slnal e removldo depols do LransporLe.

Mecan|smo de transporte: a sequncla slnallzadora e reconheclda por um recepLor
na membrana exLerna da mlLocndrla. C complexo recepLor-proLelna dlfunde-se
laLeralmenLe na membrana aLe um local de conLacLo, onde a proLelna e LransporLa-
da slmulLaneamenLe aLraves das membranas exLerna e lnLerna, por melo de um
Lranslocador. uma pepLldase cllva o slnal. As 5A8@32;630 a[udam no LransporLe e no
rearran[o da conformao Lrldlmenslonal da proLelna aps o LransporLe.

I|gura S 1ransporte para a M|tocndr|a.
glna 18 de 89

Cs fosfo||p|dos necessrlos ao cresclmenLo e homeosLasla mlLocondrlals so Lrans-
porLados lndlvldualmenLe por proLelnas LransporLadoras de llpldos, que exLraem
fosfollpldos da membrana do reLlculo endoplasmLlco para a membrana mlLocon-
drlal.

@: ;14#!.*1+& .414 * A&+B)(%* C#,*.%4!0D+")*

ket|cu|o endop|asmt|co (kL): local de enLrada para proLelnas desLlnadas a ouLros
comparLlmenLos celulares, excepLuando as do nucleo e as da mlLocndrla, ou para a
membrana plasmLlca e para o exLerlor da celula. uma vez no lumen do 8L ou
lncorporadas na sua membrana, as proLelnas [ no saem para o clLosol duranLe o
seu percurso: so LransporLadas por veslculas de organelo em organelo.

LxlsLem dols Llpos de proLelnas que passam do clLosol para o 8L:
rote|nas h|drosso|ve|s: aLravessam facllmenLe a membrana do 8L, alcanan-
do o seu lumen. odem ser posLerlormenLe excreLadas ou lnLegradas no lnLe-
rlor de ouLro organelo.
Iuturas prote|nas transmembranares: aLravessam parclalmenLe a membrana
do 8L, flcando lncorporadas na sua membrana. laro parLe da membrana do
8L, da membrana plasmLlca ou da membrana de ouLro organelo.

A sequnc|a s|na||zadora do kL e um pequeno segmenLo de amlnocldos hldrofbl-
cos que Lambem esL envolvldo na Lranslocao aLraves da membrana.

A malorla das proLelnas que aLravessam a membrana do 8L no esLo compleLa-
menLe slnLeLlzadas, o que lmpllca que o rlbossoma se assocle a membrana do 8L
(reLlculo endoplasmLlco rugoso). LxlsLem, asslm, dols Llpos de rlbossomas: asso-
clados ao lado clLoplasmLlco do 8L e llvres no clLoplasma.

I|gura 6 k|bossomas assoc|ados membrana do kL
e ||vres no c|top|asma.
glna 19 de 89

Sk (!"$#4%'1&)*$#"+"*# .41+")%&): llga-se ao slnal da proLelna quando esLa e exposLa
no rlbossoma e lmpede a conLlnuldade da Lraduo. na membrana do 8L exlsLe um
recepLor de S8 que lr reconhecer o S8, o qual se desllga da sequncla slnallzado-
ra e abre um canal de Lranslocao.

rote|nas so|ve|s no |men do kL:
Llgao do S8 ao slnal, lnLerrompendo a slnLese proLelca,
Llgao do S8 ao seu recepLor,
LlberLao do S8, recomeando a slnLese proLelca (proLelna aLravessa o canal
de Lranslocao rumo ao lumen do 8L),
Cllvagem do slnal (pepLldase de slnal), sendo esLe pronLamenLe degradado e
fechando-se o canal de Lranslocao,
Asslm que o C-Lermlnal do pollpepLldo aLravessa a membrana do 8L, a proLelna
e llberLada e dlssemlna-se no lumen.

rote|nas transmembranares
Lm proLelnas Lransmembranares, exlsLe uma poro que se flxa na membrana.
C lnlclo da Lranslocao desLas proLelnas e lgual ao lnlclo das proLelnas hldros-
soluvels. 1odavla, esLas proLelnas possuem uma sequncla de amlnocldos
hldrofblcos, deslgnada por !+*.'+14#!E&1 !&F(&#)&. Cuando esLa sequncla
alcana o canal de Lranslocao, no plano da blcamada llpldlca, forma uma -
hellce que ancora a proLelna na membrana. Asslm, o C-Lermlnal locallza-se no
lado clLosllco da membrana do 8L, enquanLo o n-Lermlnal flca no lado do
lumen.
Lm proLelnas cu[os domlnlos aLravessam mals do que uma vez a blcamada
llpldlca, exlsLe um slnal lnLerno, a !+41+'+14#!E&1 !&F(&#)&, que e usado como
I|gura 7 1ransporte de prote|nas h|drosso|ve|s para o |men do kL.
glna 20 de 89

lnlclo da Lranslocao proLelca, nunca sendo removldo do pollpepLldo. Asslm, a
01821?12860F32 03G>3653 lnlcla a Lranslocao que conLlnua aLe se aLlnglr a
prxlma 01;@?12860F32 03G>3653, flcando esLas lnLegradas na blcamada, onde
esLabelecem llgaes com os llpldos (-hellce).

1ransporte ves|cu|ar

ara as proLelnas aLlnglrem os organelos, uLlllzam a Lranslocao para o 8L e, dal,
parLem para o aparelho de Colgl. Como? or ves|cu|as de transporte.

V|a secretr|a pr|nc|pa| para E*14 ,4 )G%(%4: membrana do 8L lumen do 8L
aparelho de Colgl superflcle celular.

V|a secretr|a pr|nc|pa| para ,&#+1* ,4 )G%(%4: membrana plasmLlca endosso-
mas llsossomas.

Cada veslcula Lem de conLer apenas as proLelnas aproprladas ao seu desLlno e Lem
de fundlr apenas com a membrana-alvo. LsLes processos dependem de proLelnas
assocladas a membrana da veslcula.

I|gura 8 1rans|ocao de prote|nas transmembranares para a membrana do kL.
glna 21 de 89

3*4+&, H&!")%&!: veslculas que nascem de membranas com uma camada proLelca na
sua superflcle clLosllca. LsLa camada e formada por 5;8176= @2;13760, como a cla-
Lrlna. Aps emerglrem da membrana, perdem a sua camada proLelca, permlLlndo a
lnLeraco dlrecLa com a membrana com a qual se vo fundlr.

C|atr|nas: proLelnas que se llgam a recepLores de membrana, conLrlbulndo para a
formao de veslculas. As moleculas de claLrlna assoclam-se em redor da superflcle
do organelo ou da superflcle lnLerna da celula, llgando-se aos recepLores, e formam
uma rede. lnduzem a formao de uma curvaLura que se val afasLando da membra-
na. A d|nam|na e uma proLelna que hldrollsa C1 e que, [unLamenLe com ouLras
proLelnas, corLa a llgao enLre a veslcula e a membrana de orlgem. A veslcula per-
de a sua capa de claLrlnas e forma-se a veslcula de LransporLe. As claLrlnas esLo
envolvldas no LransporLe do aparelho de Colgl para o melo exLracelular e da mem-
brana plasmLlca, numa vla endoclLlca. no enLanLo, as claLrlnas no Lm capacldade
de capLurar moleculas a LransporLar. As adapt|nas so ouLra classe de 5;8176= @2;?
13760, que manLm as claLrlnas unldas a membrana da veslcula e que a[udam na
seleco de moleculas 582=; para LransporLe, aLraves da flxao do recepLor. As
adapLlnas so especlflcas para cada organelo, reconhecendo apenas os recepLores
do organelo em que acLuam.

I|gura 9 V|as secretr|as pr|nc|pa|s.
glna 22 de 89

uepols da llberLao da veslcula, esLa e LransporLada acLlvamenLe por proLelnas
moLoras que se movlmenLam ao longo do clLoesqueleLo. Cuando chega ao alvo, a
veslcula Lem de ser reconheclda pelo organelo. C processo de ldenLlflcao depen-
de das prote|nas kab, que se enconLram na superflcle da veslcula e que so reco-
nhecldas por +&+2&1"#$ .1*+&"#! na superflcle clLosllca da membrana-alvo. As 8ab e
as 131A3276= @2;13760 so Lambem unlcas e especlflcas de cada organelo e veslcula.

SNAkLs: famllla de proLelnas Lransmembranares que conferem reconheclmenLo
adlclonal. Asslm que as 131A3276= @2;13760 capLuram uma veslcula (aLraves da llga-
o a 8ab), as SnA8Ls da veslcula (v-SNAkL) lnLeragem com as SnA8Ls da membra-
na-alvo (t-SNAkL), ancorando a veslcula na membrana. Aps o 9;5C76=, a veslcula
Lem de se fundlr a membrana para exporLar a sua carga. As SnA8Ls desempenham
um papel lmporLanLe nesse processo: depols de emparelharem, as v-SnA8Ls e as L-
SnA8LS enrolam-se uma na ouLra, exercendo uma fora que obrlga as moleculas de
gua a salrem do espao de fuso (se a gua flcasse no espao, a reaco serla
energeLlcamenLe desfavorvel, vlsLo haver pores hldrofblcas envolvldas), o que
favorece a fuso llpldlca.

I|gura 10 Iormao de ves|cu|as endoc|t|cas com redes de c|ater|na.
glna 23 de 89

V|as de secreo

9: >*,"E")467* )*H4%&#+& ,& .1*+&B#4! #* AC

L|gaes d|ssu|f|to: oxldao dos pares de clsLelnas das cadelas laLerals. So lmpor-
LanLes para a esLablllzao das esLruLuras proLelcas que vo enLrar em conLacLo
com pP balxo ou enzlmas hldrollLlcas quer ao abandonarem a celula quer flcando
na membrana da mesma. 1m poder reduLor, pelo que no podem ser formadas no
clLoplasma.

G||cos||ao: llgao de proLelnas a cadelas de ollgassacarldeos, por llgao cova-
lenLe, sendo converLldas a gllcoproLelnas. LsLe processo confere a gllcoproLelna
vrlas funes, como proLeco conLra degradao, ancoragem ao 8L para recupe-
rar a sus esLruLura ou LransporLe aLe ao organelo aproprlado (veslcula de Lranspor-
Le). Cuando esLo na superflcle celular, os ollgossacarldeos fazem parLe da camada
gllcldlca, permlLlndo a dlsLlno enLre celulas. L um processo de maturao prote|-
ca.
Ltapas da g||cos||ao
roLelna esL a ser Lranslocada para o lumen do 8L,
Cllgossacarldeo llgado a um do||co| (llpldo na membrana do 8L),
Llga-se ao grupo amlna de uma asparag|na da proLelna do lumen (;<7=;085?
5A82793 @2;1376 12860F32803),
I|gura 11 keconhec|mento e fuso de membranas, envo|vendo kab, +&+2&1"#$ .1*+&"#! e SNAkLs.
glna 24 de 89

C processo Lermlna no aparelho de Colgl, para onde a proLelna mlgra (vesl-
cula de LransporLe).

A acumulao de proLelnas no 8L lnduz a acLlvao de um programa de Lranscrlo,
o Uk (>6F;<939 @2;1376 230@;603) que acLua sobreLudo quando os nlvels de proLel-
nas danlflcadas aumenLam, lmpellndo a celula a produzlr mals 8L, recruLando Loda
a maqulnarla molecular necessrla para recuperar o foldlng aproprlado e o proces-
samenLo das proLelnas.

no aparelho de Colgl, os slnals gllcldlcos
so alLerados consoanLe o seu desLlno.
or exemplo, se uma proLelna Lem de lr
para o llsossoma, o seu slnal gllcldlco e
alLerado de forma a que, no flnal, se[a
um slnal de manose 6-fosfaLo.

I|gura 12 G||cos||ao de prote|nas no |men do kL.
I|gura 13 A|teraes dos s|na|s g||c|d|cos
no apare|ho de Go|g|.
glna 2S de 89

=: CI*)"+*!&

Lxoc|tose: as proLelnas abandonam o Colgl Lrans em veslculas de LransporLe para a
membrana plasmLlca, onde se fundem, permlLlndo o cresclmenLo desLa (essen-
clalmenLe quando esL presLes a dlvldlr-se) e levando llpldos e proLelnas essenclals
a membrana.
Secreo const|tut|va: secreo conLlnua em Lodas as celulas de mulLas proLel-
nas soluvels. LsLa vla fornece conLlnuamenLe a membrana llpldos e proLelnas
recem-slnLeLlzados.
Secreo regu|ada: ocorre apenas em celulas especlallzadas. roLelnas especlfl-
cas (hormonas, enzlmas, muco, enLre ouLras) produzldas no Colgl Lrans so
acumuladas e armazenadas em veslculas. So llberLadas aps um esLlmulo pro-
vocado por um slnal exLracelular, que esLlmula a fuso a membrana.

L lmporLanLe referlr que o Lamanho da celula no aumenLa apesar do consLanLe
forneclmenLo de llpldos a membrana, provenlenLes das veslculas exoclLlcas. A
manuLeno do Lamanho da membrana deve-se a remoo de pores equlvalen-
Les de membrana pela endoclLose.

@: C#,*)"+*!&

Lndoc|tose: lnLernallzao de maLerla por parLe da celula, havendo formao de
veslculas endoclLlcas.
|noc|tose: lngesLo de fluldos e parLlculas pequenas, formando uma veslcula.
A formao das veslculas e felLa aLraves das claLrlnas, por lnvaglnaes da
I|gura 14 rocessos de Lxoc|tose.
glna 26 de 89

membrana celular. uepols da llberLao das claLrlnas, as veslculas fundem-se
com endossomas. A plnoclLose e reallzada por Lodas as celulas.
Iagoc|tose: lnLernallzao de parLlculas de malores dlmenses (como mlcror-
ganlsmos), formando-se fagossomas. no exlsLe lnLerveno de claLrlnas, sendo
um processo reallzado por apenas algumas celulas (fagclLos ou celulas fagocl-
Lrlas). C fagclLo reconhece, com a a[uda de recepLores, a parLlcula esLranha,
esLando esLa coberLa por anLlcorpos ou proLelnas do slsLema de complemenLo
1

(opsonlzao). ALraves da emlsso de prolongamenLos clLoplasmLlcos (pseu-
dpodes), o fagclLo engloba a parLlcula a parLlcula, formando-se uma fagos-
soma que se funde com llsossomas, ocorrendo dlgesLo lnLracelular.
Lndoc|tose med|ada por receptores: conslsLe numa plnoclLose vla veslculas
revesLldas por claLrlnas, no enLanLo, e um processo com uma elevada especlfl-
cldade. As macromoleculas a capLar llgam-se a recepLores de membrana e
enLram na celula como complexos recepLor-macromolecula. um exemplo desLe
Llpo de endoclLose e a captura de LDL. C LuL llga-se a recepLores de membrana
e e lnLernallzado em veslculas de claLrlna. As veslculas perdem o seu revesLl-
menLo e fundem-se com endossomas. no amblenLe cldo do endossoma, o LuL
dlssocla-se do recepLor. LnquanLo que o LuL permanece no endossoma e avan-
a para o llsossoma (onde e degradado, llberLando colesLerol llvre), os recepLo-
res so devolvldos a membrana, vla veslculas de LransporLe, onde so reclcla-
dos.

n|perco|estero|m|a fam|||ar: doena auLossmlca domlnanLe, caracLerlzada por
nlvels de colesLerol serlcos elevados (hlpercolesLerolemla), devldo a deflclnclas nos
recepLores de LuL. Se o recepLor de LuL no e normal, o colesLerol acumula-se no

1
S|stema de comp|emento: o slsLema complemenLo a[uda ou complemenLa a capacldade de anLlcor-
pos e celulas fagoclLlcas ellmlnarem agenLes paLogenlcos. laz parLe do slsLema lmunlLrlo lnaLo. Consls-
Le num con[unLo proLelnas enconLradas no sangue, sobreLudos slnLeLlzadas no flgado, que normalmenLe
clrculam sob a forma de precursores lnacLlvos.
I|gura 1S Lndoc|tose med|ada por receptores (exemp|o do LDL).
glna 27 de 89

sangue (por no ser lnLernallzado), o que aumenLa a colesLerolemla. Asslm, por no
enLrar colesLerol, a enzlma PMC-CoA reduLase, envolvlda na slnLese de colesLerol,
no e lnlblda, conLlnuando a slnLese. AumenLa alnda mals a colesLerolemla, aumen-
Lando o rlsco para aLerosclerose e, consequenLemenLe, para enfarLe do mlocrdlo e
AvC. As estat|nas so frmacos anLl-dlsllpldemlcos que se llgam aos cenLros-acLlvos
da PMC-CoA reduLase, lnlblndo a slnLese endgena de colesLerol.

Lndossoma: prlnclpal local da vla endoclLlca. 8evela-se como um complexo con[un-
Lo de Lubos membranares e veslculas lnLerllgadas. C seu lnLerlor e um melo cldo,
sendo esLe manLldo por uma bomba de proLes A1ase que lmporLa P
para o
lumen do endossoma. A acldez faz uma Lrlagem, decldlndo qual o Lra[ecLo dos
recepLores aps a sua enLrada no endossoma: volLam ao mesmo domlnlo da mem-
brana (rec|c|agem), fundem nouLros locals da membrana (transc|tose) ou dlrlgem-
se para o llsossoma (degradao).

L|sossomas: veslculas orlglnadas no aparelho de Colgl, conLendo vrlas hldrolases.
As enzlmas hldrollLlcas do llsossoma s acLuam a balxo pP, o que proLege a celula
caso ha[a uma rupLura da membrana llsossomal. ApresenLam LransporLadores na
membrana para permlLlr a passagem do resulLado da dlgesLo. C melo cldo e man-
Lldo, de lgual forma, por uma A1ase que bombela P. As enzlmas e proLelnas
lmporLadas pelo llsossoma so marcadas com manose 6-fosfato no 8L e no Colgl
cls. Cs slnals de manose 6-fosfaLo so reconhecldos a salda do Colgl Lrans por
recepLores que vo lnduzlr a formao de veslculas que orlglnam/se fundem com
llsossomas.

I|gura 16 Lsquema de um ||sossoma.
glna 28 de 89

8LCCC 4: A CkIGLM DA VAkIAC GLNL1ICA
8LCCC S: kLLAC GLNC1IC-ILNC1IC

LxlsLem, no organlsmo humano, 10
12
celulas humanas sendo que, em cada uma
delas, exlsLe uma cpla do genoma, consLlLuldo por 10
9
p8. uevldo a esLe Lamanho,
e basLanLe provvel que ocorram erros e alLeraes que conferem var|ab|||dade
gent|ca as populaes.

kep||cao do DNA

kep||cao sem|-conservat|va: produo de duas duplas hellces compleLas a parLlr
da molecula de unA orlglnal, sendo cada nova hellce ldnLlca a dupla hellce orlglnal
na sequncla nucleoLldlca (excepLo em casos de erro). Cada cadela da hellce orlglnal
serve de molde a uma nova cadela, fazendo com que cada nova dupla hellce flque
com uma cadela orlglnal e uma cadela recem-slnLeLlzada.

A molecula de unA e mulLo esLvel, vlsLo as bases azoLadas das duas cadelas esLa-
rem unldas por ponLes de hldrogenlo. ara essas llgaes se quebrarem, serla
necessrlo aLlnglrem-se a elevadas LemperaLuras, o que serla lnconceblvel para a
celula. C processo de repllcao lnlcla-se enLo aLraves de DNA he||cases, proLelnas
de lnlclao que quebram llgaes de hldrogenlo, separando as duas cadelas.

Cr|gem de rep||cao: zona de separao lnlclal das cadelas, sendo marcada por
sequnclas especlflcas de nucleLldos de adenlna e Llmlna, vlsLo a rupLura de pon-
Les de hldrogenlo enLre esLes nucleLldos ser menos dlspendlosa energeLlcamenLe
(mals fcll quebrar A=1 do que
CC). Ao nlvel das orlgens de
repllcao, exlsLem duas [unes
em forma de onde se d a repll-
cao proprlamenLe dlLa: as for-
qu||has de rep||cao. As forqul-
lhas movem-se nos dols senLldos
da orlgem (processo bldlrecclonal).

I|gura 17 Cr|gem de rep||cao e abertura |n|c|a|
das cade|as da dup|a h||ce.
glna 29 de 89

DNA po||merase: enzlma preponderanLe e cenLral do processo de repllcao do
unA, slnLeLlzando novas cadelas uLlllzando uma pre-exlsLenLe como molde. CaLallsa
a adio de nucletidos na extremidade 3 da nova cadela, aLraves da formao de
ligaes fosfodister entre o grupo OH do carbono 3 do antigo nucletido e o gru-
po fosfato do carbono 5 do novo (sintetiza no sentido 5 3). lmpe-se uma
quesLo: no ex|st|ndo enz|ma que ad|c|one nuc|et|dos no sent|do 3 S, o que
acontece outra cade|a?

Iragmentos de Ckasak|: pequenos @27D320 de 8nA so adlclonados a ouLra cadela,
por uma prlmase. A unA pollmerase llga-se a esLes @27D320 de 8nA e caLallsa frag-
menLos de unA (Ckasakl) aLe aLlnglr o @27D32 anLerlor, no senLldo 5 3. uma
nuclease reLlra depols os @27D320 de 8nA, a sequncla e llda para a deLeco de
erros e, caso no os ha[a, os fragmenLos de Ckasakl so unldos por uma llgase.

A cadela slnLeLlzada conLlnuamenLe e deslgnada %&4,"#$ !+14#, e necesslLa de ape-
nas um @27D32. A cadela slnLeLlzada desconLlnuamenLe, por melo de fragmenLos de
Ckasakl, e deslgnada %4$$"#$ !+14#,, preclsando de um @27D32 por cada fragmenLo
de Ckasakl.

I|gura 18 kep||cao do DNA. A cadela slnLeLlzada conLlnuamenLe e a <38976=
012869 e a slnLeLlzada desconLlnuamenLe (por fragmenLos de Ckasakl) deslgna-se de
<8==76= 012869.
glna 30 de 89

A unA pollmerase e exLremamenLe preclsa, comeLendo apenas um erro a cada 10
7

nucleLldos que copla. no enLanLo, podem ocorrer erros de llgao (como C-1 e C-
A) que, no sendo Lo frequenLes, Lm de ser reparados. A unA pollmerase possul
duas caracLerlsLlcas que aumenLam a exacLldo na repllcao do unA:
Mon|tor|zao do empare|hamento de bases: apenas quando a complemenLa-
rldade e bem esLabeleclda e que e caLallsada a adlo de um novo nucleLldo.
51**E1&4,"#$: mecanlsmo de correco que ocorre ao mesmo Lempo que a sln-
Lese de unA. AnLes de ser adlclonado um novo nucleLldo, a enzlma conflrma
se o nucleLldo anLerlor esL correcLa e aproprladamenLe colocado. Caso no
esLe[a, a pollmerase sofre uma alLerao conformaclonal e, aLraves de um
domlnlo com funo de nuclease, reLlra o nucleLldo e LenLa subsLlLul-lo por
ouLro.

A DNA polimerase comeLe mulLos erros. no enLanLo, as DNA polimerases (<8=?
=76= 012869) e (<38976= 012869) reallzam @2;;F238976= por comparao com
nucleLldos exlsLenLes.

na slnLese da <8==76= 012869, o unA necesslLa de vrlos @27D320 de 8nA que no se
llgam a cadela-molde de forma conLlnua (exlsLem lnLervalos enLre eles). A exLreml-
dade 3 do @27D32 a unA pollmerase adlclona um desoxlrrlbonucleLldo (dn1),
conLlnuando a elongao aLe ao @27D32 segulnLe. osLerlormenLe, a nuclease que-
bra as llgaes enLre o @27D32 e a cadela de unA recem-slnLeLlzada. C 8nA e subsLl-
Luldo por unA (po||merase de reparao) e, flnalmenLe, a unA llgase une o fosfaLo
5 do novo fragmento de DNA ao grupo hidroxilo 3 do fragmento seguinte.

8"#$%&'!+14#, J"#,"#$ .1*+&"#!: aps a aco da unA hellcase, manLm a cadela
pollnucleoLldlca slmples alongada.

8%","#$ )%40.: manLem a cadela molde llgada a unA pollmerase e permlLe o desll-
zamenLo da pollmerase, como o prprlo nome lndlca. na <38976= 012869 e necess-
rla apenas uma, na <8==76= 012869 e necessrla uma por fragmenLo de Ckasakl. A
)%40. %*4,&1 hldrollsa A1 cada vez que a slldlng clamp se assocla ao unA..

na <8==76= 012869, quando a forqullha de repllcao se aproxlma do flm do cromos-
soma, no h espao para que se forme o @27D32 de 8nA, de modo a que se forme o
ulLlmo fragmenLo de Ckasakl. uesLa forma, serla de esperar a perda de uma poro
do cromossoma cada vez que ocorresse repllcao. LsLe problema e resolvldo, nos
eucarloLas, pela exlsLncla de uma sequncla especlflca de nucleLldos lncorporada
na exLremldade dos cromossomas, as sequnc|as te|omr|cas
2
. LsLas sequnclas

2
Sequnclas Lelomerlcas e no Lelmeros, vlsLo que os Lelmeros no so apenas as sequnclas mas
lncluem Lambem vrlas proLelnas que lhes esLo assocladas.
glna 31 de 89

aLraem a te|omerase. usando um molde de 8nA que faz parLe da prprla enzlma, a
Lelomerase repe os nucleLldos que so perdldos cada vez que o cromossoma se
repllca, adlclonando mulLlplas cplas da mesma curLa sequncla de unA as exLre-
mldades do cromossoma. LsLa mulLl-sequncla acLua como molde que permlLe que
a repllcao da <8==76= 012869 flque compleLa. ara alem dlsso, os Lelmeros so
reconhecldos como as exLremldades reals dos cromossomas, permlLlndo a dlsLlno
enLre esLas e as quebras da dupla cadela acldenLals a melo dos cromossomas e que
devem ser reparadas. A sequncla dos Lelmeros humanos so 2.000 repeLles da
sequncla 11ACCC.

keparao do DNA

Mutao: alLerao permanenLe no unA, podendo Ler consequnclas severas. uma
muLao que afecLe apenas um par de nucleLldos pode compromeLer gravemenLe
a homeosLasla de um organlsmo se essa alLerao ocorrer numa poslo vlLal da
sequncla de unA.

Drepanoc|tose]Anem|a fa|c|forme: doena que resulLa de uma modlflcao geneLl-
ca no gene da beLa-globlna, num unlco nucleLldo, alLerando a sequncla de aml-
nocldos da proLelna. Cs erlLrclLos adqulrem forma de folce, sendo a hemogloblna
menos soluvel e formando preclplLados flbrosos, o que confere aos erlLrclLos a sua
forma caracLerlsLlca. Cs erlLrclLos falclformes Lm dlflculdades na dlfuso de oxl-
genlo e so mals frgels, llsando na correnLe sangulnea. LsLes paclenLes Lero erl-
I|gura 19 Act|v|dade da te|omerase.
glna 32 de 89

Lropenla, o que causa fraqueza, LonLuras, cefalelas, dor e falncla orgnlca. A muLa-
o enconLra-se nas celulas da llnha germlnaLlva, sendo por lsso heredlLrla, sendo
uma doena auLossmlca recesslva.

P asslm uma necessldade de proLeger as celulas da llnha germlnaLlva. 1ambem as
celulas somLlcas Lm de ser proLegldas duranLe Loda a vlda do organlsmo (exlsLe o
rlsco de desenvolvlmenLo de cancro).

Apesar de a malorla dos erros ser prevenlda pela maqulnarla de repllcao duranLe
a repllcao do unA, a celula no esL LoLalmenLe lsenLa de erros. Lsses erros Lm
de ser reparados anLes que se Lornem permanenLes. L esse o papel do comp|exo de
reparao (H.( D70D815A 23@872), que consegue reparar 99 dos erros. ueLecLa os
erros e remove a poro afecLada, slnLeLlzando-a de novo. L lmporLanLe referlr que
a reparao recal sobre a cadela recem-slnLeLlzada, caso conLrrlo, a alLerao pro-
pagar-se-la nas repllcaes segulnLes.

Cuando se forma um erro, a geomeLrla da dupla
hellce e dlsLorclda, sendo esLa dlsLoro reco-
nheclda pelas prote|nas do comp|exo de repa-
rao, que removem parLe da cadela recem-
slnLeLlzada. C espao (=8@) formado e subsLlLul-
do pela unA pollmerase que faz @2;;F238976= a
medlda que slnLeLlza uma nova cadela e e
fechado pela unA llgase. Cs #")K!, mals fre-
quenLes na <8==76= 012869, so usados como
slnals que permlLem a dlsLlno enLre a cadela
recem-slnLeLlzada e a anLlga, por parLe das pro-
I|gura 20 keparao do DNA. na prlmelra slLuao, no h reparao e, por lsso, a muLao e LransmlLlda
descendncla, na segunda slLuao, a reparao faz-se na cadela-molde, o que Lambem propaga a muLao, na
Lercelra slLuao, a reparao faz-se na cadela recem-slnLeLlzada, o que repara o erro e evlLa a Lransmlsso da
muLao a descendncla.
I|gura 21 Comp|exo de reparao do DNA.
glna 33 de 89

Lelnas do complexo. Cs 675C0 permanecem num curLo espao de Lempo aps a pas-
sagem da forqullha, pelo que o complexo Lem de acLuar rapldamenLe.

C mecanlsmo do complexo de reparao envolve Lrs eLapas:
8econheclmenLo e remoo do unA danlflcado (nucleases),
reenchlmenLo do =8@ aLraves da complemenLarldade de bases (pollmerase),
unlo dos nucleLldos (llgase).

um Llpo perlgoso de dano no unA ocorre quando ambas as cadelas da dupla hellce
so afecLadas, no delxando qualquer 13D@<813 lnLacLo para gular uma reparao
aproprlada. LsLas modlflcaes podem ser causadas por radlao lonlzanLe, erros
nas forqullhas de repllcao, agenLes oxldaLlvos e meLabollLos produzldos pelas
celulas. Se esLes danos no forem pronLamenLe reparados, podem levar a fragmen-
Lao do cromossoma e a perda de genes quando a celula se dlvldlr.

<*#2*0*%*$*(! &#, L*"#"#$: uma nuclease provoca uma deleco de uma curLa
sequncla de nucleLldos nas exLremldades orlglnadas pela quebra das cadelas,
sendo essas posLerlormenLe unldas por uma llgase. A deleco poder ser acelLvel
porque o genoma do ser humano conLem apenas uma pequena parLe de genes
codlflcanLes de proLelnas. no enLanLo, Lambem poder Ler consequnclas negaLl-
vas, dependendo do que se[a afecLado.

M&1*,&104 ."$0&#+*!(0: doena causada por muLaes em qualquer um dos
nove genes que codlflcam proLelnas de reparao. Asslm, os organlsmos afecLados
so menos eflcazes na reparao de danos provocados pela radlao uv, como os
dlmeros de Llmlna. ConsequenLemenLe, desenvolvem-se leses graves, sobreLudo
na pele, nomeadamenLe cancro devldo a acumulao de muLaes. Cs lndlvlduos
com I32;932D8 @7=D361;0>D Lm um rlsco mll vezes malor de desenvolver cancro.
I|gura 22 <*#2*0*%*$*(! &#, L*"#"#$.
glna 34 de 89

kecomb|nao hom|oga
kecomb|nao hom|oga: pode ser usado como processo de reparao do unA
quando esLe se enconLra quebrado, no havendo perda de maLerlal geneLlco, usan-
do o cromossoma homlogo como molde.. LsLe mecanlsmo recorre a Lroca de
lnformao geneLlca enLre um par de moleculas de unA homlogas (conLm
sequnclas de unA slmllares enLre sl), consLlLulndo Lambem uma fonLe de varlablll-
dade geneLlca. C processo e lnlclado quando ambas as cadelas so quebradas logo
aps a repllcao do unA (nessa alLura, as duas hellces alnda esLo prxlmas). ara
comear, a nuclease dlgere as extremidades 5 a parLlr da reglo quebrada. Com a
ajuda de enzimas especializadas, uma das cadeias invade a cadeia complementar,
formando llgaes enLre as bases azoLadas. Se houver emparelhamenLo exLenso,
forma-se um B2865A @;761 onde as cadelas homlogas se cruzam. nesLe ponLo, a
unA pollmerase promove a elongao, usando a cadela complemenLar como mol-
de. C B2865A @;761 mlgra ao longo da cadela-molde. A reparao compleLa-se aLra-
ves da slnLese de unA, segulda pela llgao das cadelas reparadas. C resulLado flnal
so duas hellces de unA lnLacLas, onde a lnformao geneLlca de uma cadela e usa-
da como molde para reparar a ouLra. uuranLe a melose, pode ocorrer um processo
de recomblnao homloga semelhanLe, aumenLando a varlabllldade geneLlca dos
gmeLas orlglnados.

I|gura 23 kecomb|nao hom|oga.
glna 3S de 89

L|ementos gent|cos mve|s e V|rus

1ransposes: elemenLos geneLlcos mvels (pequenos segmenLos de unA que se
conseguem mover de uma reglo do genoma para ouLra). no genoma humano,
exlsLem dols Llpos de Lransposes:
Cs Lransposes proprlamenLe dlLos, que se movlmenLam aLraves de mecanls-
mos de corte-e-costura,
ketro-tranposes: movlmenLam-se aLraves de um lnLermedlrlo de 8nA, aLra-
ves da LranscrlpLase reversa.

LINL-1: famllla de reLro-Lransposo mals comum no genoma humano. L converLldo
a 8nA pela 8nA pollmerase, sendo o 8nA Lransformado em cunA pela LranscrlpLase
reversa (esLa enzlma e codlflcada pelo prprlo LlnL-1). LsLes elemenLos consLlLuem
cerca de 13 de Lodo o genoma humano, embora mulLas desLas cplas se[am lm-
vels devldo a muLaes (uma pequena parLe manLem a sua capacldade de se deslo-
car). C seu movlmenLo pode resulLar em doena: mudana de elemenLos L1 para o
gene que codlflca o facLor vlll (facLor de coagulao) causou hemofllla num lndlvl-
duo sem hlsLrla famlllar nem anLecedenLes desLa doena heredlLrla.

Sequnc|a N%(: Llpo de reLro-Lransposo com cerca de um mllho de cplas no nos-
so genoma. no produzem a sua prprla LranscrlpLase reversa, esLando dependen-
Les da exlsLenLe na celula para as a[udar a deslocarem-se.

ketrov|rus: vlrus de 8nA que, aLraves da LranscrlpLase reversa conLlda no prprlo
vlrus, consegue slnLeLlzar unA, que se pode lnLegrar no genoma do hospedelro. C
nIV e um reLrovlrus.
SlnLese de cunA a parLlr de 8nA vlral, aLraves da LranscrlpLase reversa,
8emoo do 8nA e slnLese da cadela complemenLar a slnLeLlzada anLerlormen-
Le,
lnLegrao do cunA no genoma do hospedelro (lnLegrase),
C vlrus pode flcar laLenLe duranLe mulLo Lempo, passando uma cpla do geno-
ma vlral a celulas-fllhas da orlglnal,
A Lranscrlo acLlva do genoma vlral, dependenLe do recruLamenLo da maqul-
narla da celula hospedelra, permlLe a produo das proLelnas vlrals (cpsula,
LranscrlpLase reversa e ouLras proLelnas) e do 8nA vlral. Asslm, e posslvel a
repllcao do reLrovlrus.

Cuando dols elemenLos geneLlcos mvels se lnserem numa molecula de unA em
locals separados, llmlLando, por exemplo, um exo, caso esLes elemenLos se[am
mulLo semelhanLes enLre sl, o mecanlsmo de Lransposlo usa as suas Lermlnaes
glna 36 de 89

que dellmlLam o exo para remover o Lransposo (em vez de usar as Lermlnaes
de cada um dos elemenLos). Asslm, e removlda uma sequncla de unA que conLem
um exo. LsLa sequncla e depols lnserlda nouLro local do genoma, alLerando, pelo
menos, um gene.

I|gura 24 C|c|o de v|da de um retrov|rus.
glna 37 de 89

8LCCC 6: IMUNCLCGIA

Cr|gem das c|u|as do s|stema |mun|tr|o num |nd|v|duo adu|to: celulas hemaLo-
poleLlcas da medula ssea.
L|nfc|tos 8: permlLem o reconheclmenLo do melo exLracelular e so respons-
vels pela lmunldade humoral, medlada por anLlcorpos, sendo esLes secreLados
para a clrculao quando os llnfclLos 8 se dlferenclam em plasmclLos.
L|nfc|tos 1: responsvels pela lmunldade celular (reconhecem o melo lnLrace-
lular ao reconhecer moleculas expressas por celulas Lumorals, lnfecLadas por
vlrus, eLc.).

LsLas celulas Lm o seu genoma modlflcado quando comparado com o do resLo das
celulas somLlcas, o que afecLa a sua produo de proLelnas. Lxpressam receptores
nas suas membranas plasmLlcas:
8Ck (O')&%% 1&)&.+*1): heLerodlmeros consLlLuldos por quaLro cadelas (duas
leves e duas pesadas). ApresenLam dols locals de llgao a proLelnas.
1Ck (;')&%% 1&)&.+*1): heterodmeros ( ou ) constitudos por duas cadeias.
apresenLam apenas um local de llgao a proLelnas. Cs llnfclLos 1- podem
ser Cu4
(celulas /?A3<@32) ou Cu8
(celulas /?5J1;1;E75). Assoclam-se a proLel-

nas Cu3.

Cs recepLores so VkMs (K8278B<3 '3=7;6 %;<35><30), vlsLo possulrem um domlnlo
varlvel para alem de um domlnlo consLanLe. L o domlnlo varlvel que confere
especlflcldade a cada anLlgenlo.

aradoxo de Landste|ner: como que um organismo finito (ser humano tem 10
3

genes no genoma) consegue reconhecer uma lnflnldade de moleculas (exlsLem 10
12

isoformas de VRM)?. A resposta: exlsLe um con[unLo de celulas que so seleclona-
das por serem as mals apLas (Leorla evoluclonlsLa de uarwln).

D|vers|dade de VkM

kecomb|nao somt|ca]kearran[o VDI
A gerao de proLelnas v8M do slsLema lmunlLrlo no corresponde a slmples
Lranscrlo e Lraduo de genes.
no herdamos dos progenlLores a sequncla nucleoLldlca que codlflca os recep-
Lores: herdamos enLo o mecanlsmo enzlmLlco que permlLe a produo de
proLelnas e enzlmas funclonals.

glna 38 de 89

1rs fragmenLos genlcos:
V: varlvel. 1em acoplado o promoLor.
D: dlversldade.
I: [uno. 1em acoplado o 36A86532.
Cs fragmenLos locallzam-se num <;5>0 especlflco, sendo que exlsLem 7 <;57.
Mecan|smo: [usLaposlo dos fragmenLos, formando uma sequncla (gene fun-
clonal). Lxclso de uma molecula clrcular de unA com o maLerlal que no lnLe-
ressa, sendo os fragmenLos unldos por uma llgase. u-se apenas em celulas 8 e
1, aconLecendo apenas uma vez por celula. A acLlvao da recomblnao e felLa
por duas enzlmas kAG ('35;DB76817;6 (517L817;6 M363):
kAG-1: [uno dos fragmenLos u e !.
kAG-2: [uno dos fragmenLos v e u!.
VDI recomb|nase: endonuclease que reconhece sequnclas de resLrlo especl-
flcas, as 8SS ('35;DB76817;6 )7=68< )3G>36530).
CbLeno de 10
6
lsoformas dlferenLes de v8M.
Ausnc|a de kAG func|ona|]ausnc|a tota| de kAG: uoena de Cmenn.

Insero a|eatr|a de nuc|et|dos
lnsero aleaLrla de nucleLldos nos locals de [uno dos fragmenLos genlcos.
1d1 (+&10"#4% ,&*I"#()%&*+",/% +14#!E&14!&): lnLroduz sequnclas ao acaso
enLre os blocos v e !, conLrlbulndo para a dlversldade [unclonal.
CbLeno de 10
12
lsoformas dlferenLes de v8M.

Desenvo|v|mento de c|u|as 8

uerlvam de celulas hemaLopoleLlcas esLamlnals, sendo dlferencladas na medula
ssea.
I|gura 2S kearran[o VDI ou kecomb|nao Somt|ca.
glna 39 de 89

n|permutao somt|ca: alLerao de nucleLldos lndlvlduals no <;5>0 da reglo
varlvel. ermlLe a maLurao e aflnldade de cada lmunoglobullna. CaLallsada pela
AID (8517L817;6?769>539 938D76803).

Mudana de c|asse: lgM e o prlmelro anLlcorpo a ser produzldo. ara se obLerem as
ouLras classes, e necessrla a alLerao da reglo consLanLe (o efecLor). CaLallsada
Lambem pela AID.

Desenvo|v|mento de c|u|as 1

Celulas hemaLopoleLlcas esLamlnals que sofrem dlferenclao no Llmo (flgado, no
feLo).

Celulas-me apresenLam o recepLor c-lL e lL-7 para facLores de cresclmenLo.

I|gura 26 Desenvo|v|mento de c|u|as 8.
I|gura 27 Desenvo|v|mento de c|u|as 1.
glna 40 de 89

Ioxn1: regulador de Lranscrlo lmporLanLe para dlferenclao de eplLellos,
nomeadamenLe o eplLello Llmlco.

Doenas

S|ndrome de Cmenn
lmunodeflclncla prlmrla, caracLerlzada pela ausncla de 8AC funclonal ou
ausncla LoLal de 8AC.
uoena auLossmlca recesslva assoclada a muLaes nos genes acLlvadores da
recomblnao (8ACs).
Ausncla de celulas 8 e 1, devldo a lmposslbllldade/dlsfuno ao nlvel dos rear-
ran[os vu!. Logo aps o nasclmenLo, os nlvels serlcos de lgC so normals vlsLo
que esLes so LransmlLldos pela me (cordo umblllcal e colosLro).
1ratamento: LransplanLe de medula ssea.

Agammag|obu||nm|a
1oLal ausncla de anLlcorpos com presena de celulas 1.
uoena heLerossmlca recesslva (llgada ao x homens Lm malor prevalncla)
assoclada a muLaes no gene que codlflca a 81 (Llroslna clnase de 8ruLon). A
81 e responsvel por slnallzaes para o lnLerlor da celula a parLlr do pre-8C8,
asslm, no se formam celulas 8 maduras (desenvolvlmenLo esLagnado em pre-
8).
1ratamento: Lransfuso de anLlcorpos, LransplanLe de medula com lmunossu-
presso de celulas 1 [ exlsLenLes (vlsLo que reagem ao LransplanLe, re[elLando-
o).

S|ndrome de h|per-IgM
nlvels serlcos de lgM aclma dos normals, comblnados com nlvels anormalmen-
Le balxos ou ausenLes de ouLras classes de lmunoglobullnas (lgA, lgu, lgL e lgC).
MuLao no cromossoma 12, afecLando a enzlma Alu, Lornando-a dlsfunclonal.
A Alu no consegue alLerar a reglo consLanLe da lgM, no havendo mudana
de classes de lmunoglobullnas.

S|ndrome de D|George]<(,&'83PQ
Ausncla de celulas 1 dlferencladas e eplLellos desdlferenclados (ausncla de
pelos na pele 6>93).
MuLao 6;603603 no nucleLldo 792 no cromossoma 22, afecLando o gene
foxn1, que codlflca um facLor de Lranscrlo essenclal a dlferenclao de celulas
eplLellals, nomeadamenLe de celulas do eplLello Llmlco.
glna 41 de 89

As celulas do eplLello Llmlco ([unLamenLe com celulas dendrlLlcas e macrfagos
exlsLenLes no Llmo) provldenclam a dlferenclao das celulas 1. Ao no esLar
dlferenclado o eplLello Llmlco, as celulas pre-1 no sofrem maLurao (no h
apresenLao de moleculas esLranhas e do prprlo organlsmo anLlgenlos
por parLe da MPC as celulas pre-1).
1ratamento: LransplanLe de Llmo (sendo esLe prevlamenLe colocado num melo
de culLura que ellmlna llnfclLos 1 exlsLenLes).

M'%"#K&, 83PQ
Ausncla de celulas 1 e conLagem normal de celulas 8.
MuLaes no cromossoma x que afecLam a cadela gama do recepLor da lnLer-
leuclna-7 (lL-7).
1ratamento: LransplanLe de medula ssea.

glna 42 de 89

8LCCC 7: DIILkLNAS GLNL1ICAS LN1kL C nCMLM L A MULnLk

keproduo sexuada: mlsLura de genomas de dols lndlvlduos geneLlcamenLe dlfe-
renLes (regra geral).

Crgan|smo d|p||de: cada celula conLem dols con[unLos de cromossomas, um de
cada progenlLor.

A|e|os: vrlas verses do mesmo gene. Cada gene apresenLa, no genoma, dols ale-
los, podendo esLes ser lguals (homoz|got|a) ou no (heteroz|got|a). C %*)(! repre-
senLa a locallzao dos alelos no cromossoma.

um organlsmo que se reproduza sexuadamenLe produz celulas alLamenLe especlall-
zadas, haplldes (meLade do numero de cromossomas) os gmetas. C gmeLa
femlnlno e o vulo e o gmeLa mascullno e o espermaLozlde, sendo esLes orlglna-
dos de celulas dlplldes por melose.

Iecundao: fuso dos gmeLas haplldes, formando uma celula dlpllde (z|goto)
com uma nova comblnao de cromossomas.

A prlnclpal vanLagem da reproduo sexuada e a var|ab|||dade gent|ca que advem
do enconLro aleaLrlo de gmeLas e das recomblnaes e fenmenos de 52;0076=?
;L32 que ocorrem duranLe a melose. Lxclulndo esLes dols ulLlmos aconLeclmenLos,
na melose podem gerar-se 2
23
(duas posslbllldades em cada par de cromossomas,
por parLe de cada progenlLor) con[unLos dlferenLes de cromossomas, logo 2
23
gme-
Las dlferenLes. A varlabllldade geneLlca e favorvel a sobrevlvncla e adapLao das
especles.

Me|ose

Me|ose: processo de dlvlso nuclear aLraves do qual, a parLlr de uma celula com
nucleo dlpllde, se formam celulas com nucleo hapllde. Ccorrem duas dlvlses:
Me|ose I D|v|so keduc|ona|: reduo do numero de cromossomas a meLade
(separao dos homlogos 4n 2n).
rofase I: emparelhamenLo dos homlogos, formando-se blvalenLes cro-
mossmlcas/LeLrades cromaLldlcas, surglndo ponLos de cruzamenLo enLre os
homlogos (ponLos de qulasma). L a nlvel desLes ponLos que pode haver
Lrocas reclprocas de segmenLos de cromaLldeos enLre os homlogos (52;0?
glna 43 de 89

076=?;L32). ueslnLegra-se o
lnvlucro nuclear e dlferencla-
se o fuso acromLlco.
Metafase I: os fllamenLos do
fuso llgam-se aos cenLrmeros
das blvalenLes, dlspondo-se no
plano equaLorlal os ponLos de
qulasma. Cs blvalenLes orlen-
Lam-se ao acaso relaLlvamenLe
aos polos da celula.
Anafase I: separao dos
homlogos e mlgrao polar
dos cromossomas (cada um
com dols cromaLldeos).
1e|ofase I: os homlogos aLln-
gem os polos. C fuso acromLlco desaparece e forma-se o lnvlucro nuclear
(ou no, podendo os nucleos passar dlrecLamenLe para meLafase ll).
Me|ose II D|v|so Lquac|ona|: reduo da quanLldade de unA por celula a
meLade (2n 2n). lgual a
mlLose.

no lnlclo da melose l, em humanos, exlsLem 92 cromossomas (23 pares dupllcados).
Sendo a melose um processo fallvel, no e surpreendenLe que ocorram erros.

Aneup|o|d|a: alLerao numerlca de cromossomas numa celula. no zlgoLo, pode ser
decorrenLe da fuso de gmeLas que no LransporLavam o numero correcLo de
cromossomas. ueve-se a no dls[uno dos homlogos (em anafase l) ou a no dls-
[uno dos cromaLldeos (em anafase ll).
S|ndrome de Down (47,kk]k+21): Lrlssomla do cromossoma 21. L caracLerl-
zada por aLraso menLal e caracLerlsLlcas flslcas anormals, sendo mals frequen-
LemenLe decorrenLe da no dls[uno de cromossomas 21.
S|ndrome de 1urner (4S,k0): apenas um cromossoma sexual, sendo lndlvlduos
do sexo femlnlno.
S|ndrome de k||nefe|ter (47,kk): Lrs cromossomas sexuals, sendo lndlvlduos
do sexo mascullno.
S|ndrome de Iacobson (47,k): recebe dols cromossomas paLernos.

As aneuploldlas anLerlores permlLlram dlscernlr a |mportnc|a do cromossoma na
determ|nao do sexo do |nd|v|duo. 8eLlraram-se as segulnLes concluses:
resena de (com Sk): homem.
Ausnc|a de : mulher.
I|gura 28 Comparao entre Me|ose e M|tose.
glna 44 de 89

Um k: no e obrlgaLorlamenLe homem.
Do|s k: no e obrlgaLorlamenLe mulher.

D|ferenas gent|cas

C homem e a mulher dlferem, a nlvel cromossmlco, no par dos cromossomas
sexua|s, sendo que a mulher Lem dols cromossomas x e o homem Lem um cromos-
soma x e um cromossoma .

C cromossoma x conLem cerca de 2.300 genes enquanLo o cromossoma conLem
cerca de 70 genes. Cs genes do cromossoma , nomeadamenLe o Sk (03E?
93132D7676= 23=7;6 ;F $), so responsvels pela dlferenclao sexual mascullna,
expressando proLelnas responsvels pela dlferenclao de embrles, desenvolvl-
menLo LesLlcular, produo de LesLosLerona, enLre ouLros.

uma mulher, possulndo dols cromossomas x, lrla produzlr o dobro das proLelnas
codlflcadas pelo x, pelo menos, serla o esperado. no enLanLo, lsLo no se verlflca,
sendo assegurado pelo s||enc|amento de um dos cromossomas k na mulher. A
escolha de qual dos homlogos ser sllenclado e aleaLrla (celulas com cromossoma
x maLerno acLlvo e ouLras com o paLerno acLlvo mulher e um mosa|co gent|co),
sendo esLa escolha felLa no 10. dla do desenvolvlmenLo embrlonrlo. LxlsLe uma
sequncla no cromossoma x, a kIS1 (I?768517L3 0@357F75 12860527@1), cu[o 8nA (no
codlflcanLe) promove a desaceLllao e meLllao de hlsLonas e meLllao do unA,
o resulLado e uma esLruLura forLemenLe heLerocromLlca, especlalmenLe vlslvel em
neuLrfllos (corpscu|o de 8arr).

Doenas ||gadas ao cromossoma k: as recesslvas apresenLam malor lncldncla em
lndlvlduos do sexo mascullno, [ que esLes apresenLam celulas com apenas uma
cpla do cromossoma x. Se essa cpla se enconLrar muLada, o lndlvlduo manlfesLa a
doena. As mulheres podem manlfesLar a doena (em homozlgoLla) ou podem ser
porLadoras (uma cpla muLada heLerozlgoLla), no manlfesLando a paLologla ou
manlfesLando um grau dlmlnuldo desLa.
nemof|||a: ausncla de facLor de coagulao (na hemofllla A, facLor vlll, na
hemofllla 8, facLor lx). no homem com hemofllla A, Lodas as celulas se encon-
Lram muLadas, no produzlndo facLor vlll. na mulher porLadora (heLerozlgLl-
ca), se em olLo celulas das dez que orlglnam o flgado ao 10. dla de embrloge-
nese for sllenclado o alelo saudvel, a mulher produzlr quanLldade lnsuflclenLe
de facLor vlll.
glna 4S de 89

Da|ton|smo: ausncla de alelos normals nos cones da reLlna. C homem no e
capaz de dlsLlngulr cores, por exemplo o verde do vermelho. A mulher heLero-
zlgLlca no Lem grande deflnlo (depende do grau de mosalclsmo geneLlco).
D|strof|a muscu|ar de Duchenne: o gene da dlsLroflna e afecLado. uma das
muLaes verlflcadas em doenLes e a deleco do exo 30 no cromossoma 30
devldo a uma alLerao numa sequncla de consenso de 0@<7576=. C LraLamenLo
passa por lnLroduzlr uma proLelna que lnlbe o 0@<7576= enLre os exes 49 e 32,
removendo o exo 31. A proLelna formada no e lgual a orlglnal mas e funclo-
nalmenLe ldnLlca.
Ca|v|c|e.

DNA m|tocondr|a|

M|tocndr|a: organelo com papel cruclal na produo de energla meLabllca em
celulas eucarlLlcas aLraves de processos como -oxldao, clclo de rebs (ou do
cldo clLrlco ou Lrlcarboxlllco) e resplrao aerbla (cadela LransporLadora de elec-
Lres).

C proteoma m|tocondr|a| (con[unLo de proLelnas e varlanLes de proLelnas que
podem ser enconLrados na mlLocndrla quando esLa esL su[elLa a um cerLo esLlmu-
lo) e consLlLuldo por:
roLelnas codlflcadas no mLunA e slnLeLlzadas na mlLocndrla,
roLelnas codlflcadas por genes nucleares, Lraduzldas em rlbossomas no clLosol
e lmporLadas para a mlLocndrla (amlncldos preferenclals, como llslna e argl-
nlna).

A mlLocndrla possul o seu prprlo unA, o mtDNA, que possul cerLas parLlcularlda-
des:
Cenoma exLranuclear e clrcular (caracLerlsLlco de procarloLas), com cerca de
16,6 k8.
I|gura 29 kepresentao do mtDNA.
glna 46 de 89

ossul 37 genes, que codlflcam:
13 proLelnas da cadela LransporLadora de elecLres (C1L).
2 r8nA (12S e 16S).
22 L8nA.
no possul lnLres.
Cdlgo geneLlco llgelramenLe dlferenLe do unlversal (no respelLa a unlversall-
dade do mesmo).
Llevada Laxa de muLao (cerca de cem vezes superlor ao unA nuclear), por fal-
La de mecanlsmos de reparao de unA ( especles reacLlvas de C
2
afecLa
mLunA afecLa C1L A1 012300 oxldaLlvo apopLose). Cs <;57 Pv1 e
Pv2 so alLamenLe pollmrflcos.
LxlsLem mulLlplas cplas por organelo ( mLunA nunA).
Perana excluslvamenLe maLerna (as mlLocndrlas presenLes no zlgoLo so
excluslvamenLe provenlenLes do oclLo ll nerana un|parenta| materna).

na mlLose, as mlLocndrlas so aleaLorlamenLe reparLldas pelas celulas-fllhas. uesLa
dlvlso, poder ocorrer a presena de um malor ou menor numero de mlLocndrlas
muLadas.
nomop|asm|a: presena de um genoma ldnLlco em Lodas as mlLocndrlas pre-
senLes numa celula,
neterop|asm|a: presena de genomas mlLocondrlals dlferenLes denLro da
mesma celula.

A carga mutac|ona| (proporo de mlLocndrlas muLadas/normals) deflnlr o efelLo
de cada muLao parLlcular.

I|gura 30 kepresentao da transm|sso de genes m|tocondr|a|s. Como se pode ver, dependendo da
carga muLaclonal mlLocondrlal denLro da mesma celula, os lndlvlduos com mlLocndrlas muLadas podem
manlfesLar ou no a doena.
glna 47 de 89

LnCN]R&J&1s S&1&,"+41/ T.+") <&(1*.4+2/]Neuropat|a Cpt|ca Degenerat|va:
perda sublLa da vlso cenLral, provocada pela degenerao do nervo pLlco (eleva-
das necessldades energeLlcas). ueve-se a muLaes no mLunA que afecLam a NADn
des|drogenase (complexo l da C1L), provocando decresclmo na produo de A1 e
a acumulao de especles reacLlvas de oxlgenlo. LsLas desregulaes culmlnam em
apopLose celular.

Apesar da herana unlparenLal maLerna, as doenas mlLocondrlals podem ser
LransmlLldas de forma auLossmlca domlnanLe ou recesslva se as muLaes se
enconLrarem ao nlvel dos genes nucleares que codlflcam proLelnas lmporLadas pela
mlLocndrla.

As opes teraput|cas para doenas mlLocondrlals passam por:
1raLamenLo de slnLomas (dlabeLes, correco da pLose, subsLlLulo de lenLes
lnLraoculares, eLc.),
8eduzlr o 012300 celular:
uleLa balxa em gorduras e hldraLos de carbono complexos,
Lxerclclo flslco conLrolado e moderado,
LvlLar 012300 flslco e menLal (dlferenas de LemperaLura, lcool, nlcoLlna,
frmacos, eLc.),
SuplemenLos vlLamlnlcos que esLlmulam a C1L (acelLadores e cofacLores,
como o cldo ascrblco e a rlboflavlna/vlLamlna 82),
1erapla genlca (subsLlLulo do alelo muLado pelo normal),
lnlblr a repllcao do unA muLanLe/promover a repllcao do N7<91J@3.

C mLunA Lem alnda ouLras apllcaes:
ldenLlflcao lndlvldual (mulLo llmlLada),
Anllse de parenLesco (assoclao de muLaes num grupo de lndlvlduos),
PlsLrla demogrflca e mlgraLrla da Pumanldade.

glna 48 de 89

8LCCC 8: DCS GLNLS AC CkGANISMC

Lxpresso gn|ca: uLlllzao selecLlva de genes, acLlvando ou lnlblndo alguns,
expressando um con[unLo de m8nA e proLelnas deflnldoras de uma dlferenclao
celular, essenclal a esLabllldade de organlsmos e comunldades mulLlcelulares.

Lm 1962, reallzou-se uma experlncla que preLendla responder a quesLo Tero as
celulas a capacldade de escolher quals os genes a expressar sem alLerar a sequncla
nucleotdica do DNA?
8emoo de um nucleo de uma celula da pele de um sapo adulLo,
ln[eco do nucleo num oclLo maduro, exposLo a radlo uv (desLrulo do
nucleo do oclLo),
Desenvo|veu-se um g|r|no norma| o unA nas celulas especlallzadas conLem
o mesmo con[unLo de lnsLrues necessrlas ao desenvolvlmenLo de Lodo o
organlsmo.

L a expresso de dlferenLes genes em cada celula que permlLe a produo de um
Llpo especlallzado de proLelnas responsvels por proprledades dlsLlnLlvas enLre
celulas (Lamanho, forma, comporLamenLo e funo). A regulao geneLlca ocorre
em vrlas eLapas ao longo da s|ntese prote|ca.
ConLrolo da transcr|o,
rocessamenLo do kNA transcr|to,
ConLrolo do transporte e |oca||zao do kNA,
ConLrolo da degradao de mkNA,
ConLrolo da traduo,
ConLrolo da act|v|dade prote|ca.

I|gura 31 Ltapas da regu|ao gent|ca ao |ongo da s|ntese prote|ca.

glna 49 de 89

Contro|o da 1ranscr|o

ara que se d Lranscrlo, e necessrlo:
romotor: reglo do gene que aLral a 8nA pollmerase, orlenLando-a na dlrec-
o correcLa a Lranscrever. ConLem uma sequncla de 30 nucleLldos, anLes do
local de lnlclao da Lranscrlo, que promove a llgao da 8nA pollmerase
(1A1A J*I em eucarloLas).
Sequnc|as regu|adoras: uLlllzadas na acLlvao/desacLlvao do gene. So
reconhecldas por proLelnas, os reguladores da Lranscrlo, que se llgam a elas
(encalxam na perfelo na superflcle nuclelca da dupla hellce, malorlLarlamenLe
nas D8O;2 =2;;L3) por llgaes fracas mas que, no seu con[unLo, so forLes e
alLamenLe especlflcas. Cs H.(?B76976= D;17F0 llgam-se e conLrolam a expresso
de uma grande varledade de genes.

A regu|ao gn|ca esL assoclada a resposLa celular a esLlmulos exLernos.

9: 51*)41"*#+&!U T.&1V&!

Cpero: con[unLo de genes LranscrlLos numa unlca molecula de m8nA.
1r|ptofano: produo de LrlpLofano (1rp = opero acLlvo). C operador e uma
sequncla que e reconheclda por reguladores da Lranscrlo, ao llgar-se uma
proLelna, a aco da 8nA pollmerase e bloqueada. C regulador e enLo um
repressor: a llgao do LrlpLofano causa uma mudana conformaclonal (alosLe-
rla) que permlLe a sua llgao ao operador. Ao dlmlnulr a concenLrao de Lrlp-
Lofano llvre, o repressor desllga-se do LrlpLofano e llberLa-se do operador, per-
mlLlndo a acLlvldade da 8nA pollmerase e a produo de LrlpLofano.

I|gura 32 Cpero do tr|ptofano.
glna S0 de 89

Lactose: dlgesLo de lacLose em casos de falLa de gllcose (lac = opero acLl-
vo). Cs reguladores desLe opero so dols um repressor Lac e uma prote|na
act|vadora CA. A proLelna CA Lem de se llgar a cAM anLes de se consegulr
llgar ao unA: os genes regulados por CA so acLlvados face a um aumenLo dos
nlvels de cAM (slnal de que no exlsLe gllcose dlsponlvel). ara efelLos de ren-
Labllldade energeLlca, o opero s esL acLlvo em slLuaes de gllcose e
lacLose:
[g||cose] e [|actose]: a proLelna CA no se llga (gllcose) nem o repres-
sor Lac (lacLose). C opero esL |nact|vo.
[g||cose] e [|actose]: a proLelna CA no se llga (gllcose) mas o repres-
sor Lac esL llgado (lacLose). C opero esL |nact|vo.
[g||cose] e [|actose]: a proLelna CA esL llgada (gllcose) e o repressor
Lac Lambem (lacLose). C opero esL |nact|vo.
[g||cose] e [|actose]: a proLelna CA esL llgada (gllcose) mas o repres-
sor Lac esL desllgado (lacLose). C opero esL act|vo.

=: C()41"*#+&!

Cs reguladores so Lambem acLlvadores ou repressores, Lodavla llgam-se a locals
especlflcos (&#24#)&1!). uescobrlu-se que os reguladores podem regular a Lrancrl-
o d|stnc|a (mllhares de p8 enLre 36A86532 e promoLor) e podem enconLrar-se
anLes ou depols do prprlo gene.

I|gura 33 Cpero da |actose.
glna S1 de 89

Modela de actuao distncia: a proLelna acLlvadora llga-se ao 36A86532 e
promove uma alLerao de conformao no prprlo unA, favorecendo uma Loro
da molecula enLre o 36A86532 e o promoLor. A proLelna acLlvadora consegue lnLera-
glr com as proLelnas na vlzlnhana do promoLor (8nA pollmerase ll e facLores de
Lranscrlo). ara alem dlsso, pode haver uma prote|na med|adora que esLabelece
a llgao enLre Lodas as proLelnas e o unA. A Lranscrlo d-se quando os acLlvado-
res esLo llgados e os repressores esLo lnlbldos.
Act|vador: a[uda na organlzao dos facLores de Lranscrlo e da 8nA pollme-
rase no promoLor (hlsLona-aceLllLransferases).
kepressor: saboLagem na organlzao do complexo proLelco (hlsLona-
deaceLllases).

Contro|o comb|natr|o: vrlas proLelnas reguladoras que acLuam em con[unLo na
regulao da expresso de um deLermlnado gene.

Memr|a ce|u|ar: a especlallzao da celula provoca modlflcaes na expresso
genlca que, em condles normals, no podem ser esquecldas.

A expresso de uma proLelna pode lnfluenclar a expresso de ouLra, o que prova a
lmporLncla da Lranscrlo duranLe o processo de dlferenclao celular.

I|gura 34 Modelo de actuao distncia.
glna S2 de 89

rocessamento de mkNA transcr|to
Contro|o da degradao de mkNA

m|kNA: mlcro8nA. ConLrolam a expresso genlca aLraves da llgao (enLre bases
azoLadas) a m8nA especlflcos, conLrolando a sua esLabllldade e Lraduo. 1al como
ouLros 8nA no codlflcanLes (L8nA e r8nA, por exemplo), sofre processamenLo
especlflco para formar ml8nA funclonal. Assocla-se posLerlormenLe a proLelnas
especlflcas, as do comp|exo kISC ('.(?769>539 07<36576= 5;D@<3E). LsLe complexo
paLrulha o clLosol em busca de m8nA complemenLar ao ml8nA que LransporLa.
Cuando esLabelece llgao, o m8nA e desLruldo por uma nuclease do 8lSC ou a sua
Lraduo e bloqueada, sendo
lanado no clLosol onde e
degradado por ouLras nuclea-
ses. As duas caracLerlsLlcas do
ml8nA que o Lornam um bom
regulador so:
um unlco ml8nA conse-
gue regular um grande
con[unLo de m8nA desde
que conLenham uma
sequncla comum (nor-
malmenLe enconLradas
na u18),
Cs genes que codlflcam
lnformao para ml8nA
I|gura 3S Lxemp|o da |mportnc|a da transcr|o
para a d|ferenc|ao mscu|o]osso. ua mesma
celula precursora (nesLe caso, um flbroblasLo),
obLm-se duas llnhas celulares: aLraves do facLor
de Lranscrlo %J;?H, obLm-se celulas musculares
(mlclLos), a parLlr de celulas que expressam o
facLor );675 A39=3A;=, obLm-se celulas sseas.
ver 8LCCC 2
I|gura 36 Iormao e actuao de m|kNA.
glna S3 de 89

so pequenos e ocupam mulLo menos espao no genoma quando comparados
com genes que codlflcam reguladores de Lranscrlo.

kNA|: 8nA de lnLerferncla.
MeLodo de reconheclmenLo e
de desLrulo de 8nA. ode
ser um mecanlsmo de defesa
conLra poLenclals lnvasores,
em cerLos organlsmos, ao
deLecLar dskNA (8nA de
cadela dupla) exgeno. A pre-
sena de ds8nA aLral um com-
plexo proLelco que conLem
uma nuclease, a D|cer, que cll-
va o ds8nA em fragmenLos
pequenos, com 23 nucleLldos
os s|kNA (0D8<< 76132F3276=
'.(). Cs sl8nA so lncorpora-
dos em 8lSC, sendo uma das
cadelas de sl8nA descarLada e
a ouLra servlr como locallza-
dora de cadelas complemenLa-
res de 8nA, degradando rapldamenLe as que enconLrar (semelhanLe ao ml8nA).

Contro|o da 1raduo

A"J*!W"+)2&!: pequenas sequnclas reguladoras em moleculas de m8nA, que
podem alLerar a sua conformao quando llgadas a moleculas como meLabollLos.
LnconLrando-se em m8nA, permlLem a regulao da sua prprla Lranscrlo e Lra-
duo.

Lm procar|ontes, a sequncla de reconheclmenLo do m8nA por parLe do rlbossoma
enconLra-se alguns nucleLldos anLes do codo de lnlclao. C bloquelo/exposlo
dessa sequncla promove a lnlblo/acLlvao da Lraduo.

Lm eucar|ontes, o mRNA possui o 5 58@ que permlLe a llgao dos rlbossomas.
Existem reguladores que se ligam na 5 UTR, impedindo o desllzamenLo do rlbosso-
ma para os exes.

I|gura 37 Mecan|smo do kNA|.
glna S4 de 89

Act|vao de prote|nas

LxlsLem proLelnas que, aps o processo de Lraduo, alnda no so funclonals. ara
que se d a sua acLlvao, e necessrlo ocorrer um con[unLo de processos como
alLerao da conformao (por 5A8@32;630), fosforllaes, aceLllaes, gllcosllaes
ou aLe mesmo assoclao a ouLras proLelnas.

glna SS de 89

8LCCC 9: kCLIILkAC L MCk1L CLLULAk

C|c|o ce|u|ar: clclo de dupllcao do conLeudo celular (ver 8LCCCS 4 e S) e posLerlor
dlvlso do conLeudo dupllcado pelas duas celulas-fllhas. ara lsso, e necessrla a
coordenao e regulao da maqulnarla envolvlda nesLes processos.

Iuno bs|ca da c|u|a: dupllcar flelmenLe a grande quanLldade de unA dos cro-
mossomas e dlsLrlbul-la equlLaLlvamenLe (cplas) as celulas-fllhas geneLlcamenLe
ldnLlcas.

Iase M: fase mlLLlca do clclo celular. Compreende a m|tose (ou carloclnese, cor-
responde a dlvlso nuclear) e a c|toc|nese (dlvlso do clLoplasma).

Interfase: lnLervalo enLre duas fases M. CaracLerlza-se por um perlodo de elevada
blosslnLese, sendo composLa por Lrs fases:
Iase G1: lnLervalo enLre o flnal da fase M e o lnlclo da fase S,
Iase S: dupllcao do unA (pre-requlslLo para a dlvlso celular),
Iase G2: lnLervalo enLre o flnal da fase S e o lnlclo da fase M.

S|stema de contro|o do c|c|o ce|u|ar: garanLe que os evenLos do clclo celular (repll-
cao do unA, mlLose e ouLros) decorram numa deLermlnada sequncla e que cada
processo esL Lermlnado anLes de o segulnLe se lnlclar. ara lsso, o slsLema de con-
Lrolo e regulado em ponLos crlLlcos do clclo celular ()2&)K.*"#+!) por F339B85C do
processo em curso. Cs 5A35C@;7610 servem como paragens moleculares, onde o
clclo celular consegue ser lnLerrompldo. LxlsLem Lrs 5A35C@;7610 que conLrolam a
progresso do clclo celular:
G1: conflrmao da favorabllldade do amblenLe. A prollferao celular necessl-
La de suflclenLes nuLrlenLes e slnals exLracelulares. Se as condles exLracelula-
I|gura 38 C|c|o ce|u|ar.
glna S6 de 89

res forem adversas, aLrasa-se C1, enLrando num esLado de laLncla (G0). CerLas
celulas, como celulas nervosas e do musculo esqueleLlco, permanecem em C0
duranLe Loda a vlda do organlsmo. LsLe 5A35C@;761 e lmporLanLe vlsLo Lambem
ser regulado por slnals de ouLras celulas.
G2: garanLe que a celula no enLra em mlLose aLe que Lodo o unA se[a repllca-
do e que Lodos os erros que danlflquem o unA se[am reparados.
M|tose: garanLe que os cromossomas repllcados esLo devldamenLe assoclados
ao fuso acromLlco anLes de serem segregados e dlsLrlbuldos pelas duas celu-
las-fllhas.

S|stemas de Contro|o do C|c|o Ce|u|ar

C s|stema de contro|o do c|c|o ce|u|ar acLua sobre a maqulnarla responsvel pela
produo de componenLes para a celula em cresclmenLo e pela movlmenLao des-
ses componenLes para os seus locals correcLos, acLlvando-a ou lnlblndo-a nas alLu-
ras correcLas, permlLlndo a coordenao de vrlos passos do clclo.

C slsLema acLua acLlvando e depols lnacLlvando proLelnas e complexos proLelcos
que lnlclam ou regulam a repllcao do unA, a mlLose e a clLoclnese. Lssa sequncla
de acLlvao/lnacLlvao e felLa aLraves de fosfor||aes]desfosfor||aes, sendo
medladas por proLelnas clnases e fosfaLases.

A acLlvao das clnases que acLuam ao longo do clclo celular depende de ouLras
proLelnas, as c|c||nas. LsLas no Lm acLlvldade enzlmLlca nelas prprlas mas Lm
de se llgar as clnases do clclo celular para que esLas possam ser enzlmaLlcamenLe
acLlvas, asslm sendo, as clnases do slsLema de conLrolo so c|nases dependentes de
c|c||na (Cdk). A varlao das suas concenLraes ao longo do clclo celular, que valeu
as clcllnas o seu nome, promove a assoclao e acLlvao dos comp|exos c|c||na-
Cdk, desencadeando vrlos processos do clclo (como a enLrada na fase S ou M).

glna S7 de 89

C aumenLo/dlmlnulo dos nlvels de clcllna regulam a acLlvldade das Cdk ao longo
do clclo celular. As concenLraes de clcllna aumenLam gradualmenLe, mas a acLlvl-
dade dos complexos clcllna-Cdk Lende a ser acLlvada abrupLamenLe num deLerml-
nado momenLo do clclo. Lssa acLlvao abrupLa deve-se a fosfor||ao do comp|exo
num deLermlnado local, por uma clnase, e a desfosfor||ao nouLro local, por uma
fosfaLase.

LxlsLem vrlos Llpos de complexos clcllna-Cdk que conLrolam dlferenLes eLapas do
clclo celular:
M-Cdk: composLos por c|c||na M (como a clcllna 8) e Cdk1. AcLua ao nlvel de
C2, caLallsando a enLrada na fase M.
G1-Cdk: composLos por c|c||na G1 (como a clcllna u) e Cdk4 e Cdk6. AcLua
numa fase prevla de C1, a[udando na progresso aLe a fase S.
S-Cdk: composLos por c|c||na S (como a clcllna A) e Cdk2. AcLua numa fase Lar-
dla de C1, despoleLando a enLrada na fase S.
G1]S-Cdk: composLos por c|c||na G1]S (como a clcllna L) e Cdk2. AcLua prevla-
menLe ao complexo S-Cdk.
I|gura 39 Var|ao das concentraes das c|c||nas ao |ongo do c|c|o ce|u|ar e da
act|v|dade das c|nases dependentes de c|c||na (Cdk).
I|gura 40 Actuao dos d|ferentes comp|exos c|c||na-Cdk ao |ongo do c|c|o ce|u|ar e var|ao das
suas concentraes.
glna S8 de 89

A queda abrupLa das concenLraes
de clcllnas em cerLos ponLos do clclo
resulLa da degradao se|ect|va de
c|c||nas. Complexos enzlmLlcos
especlflcos adlclonam ublqulLlna a
clcllna aproprlada, slnallzando-a para
degradao no proLeossoma. LsLa
degradao de clcllnas e basLanLe
rplda e permlLe a lnacLlvao da Cdk
respecLlva. A lnacLlvao de Cdk Lam-
bem pode desencadear Lransles de
uma fase do clclo para ouLra. or
exemplo, a degradao de clcllna-M
lnacLlva o complexo M-Cd, o que
lndlca a celula a flnallzao da mlLose.

Alguns dos 5A35C@;7610 dependem de prote|nas |n|b|doras de Cdk que bloquelam a
organlzao ou acLlvldade de um ou mals complexos clcllna-Cdk. Algumas desLas
proLelnas a[udam a manLer lnacLlvas Cdk em C1, aLrasando a enLrada na fase S
(mals Lempo para aumenLar o seu Lamanho e esperar por condles exLracelulares
mals favorvels).

M|togn|os: slnals exLracelulares produzldos por ouLras celulas que esLlmulam a
dlvlso celular, passando por clma dos mecanlsmos lnLracelulares que Lendem a
bloquear a progresso ao longo do clclo. Se a celula no receber esLes slnals, flca
bloqueada em C1, quando a ausncla de mlLogenlos e prolongada, a celula enLra
em C0, sendo que pode ser um C0 lrreverslvel (por exemplo, as celulas nervosas).
nesse caso, a grande malorla do slsLema de conLrolo e desmanLelado.

Iase S

AnLes da celula se dlvldlr, Lem de repllcar o unA (ver 8LCCCS 4 e S).

I|gura 41 Degradao das c|c||nas e trans|es do c|c|o
assoc|adas.
glna S9 de 89

As orlgens de repllcao recruLam proLelnas especlflcas que conLrolam o lnlclo e
compleLam a repllcao do unA. um complexo mulLlproLelco, o comp|exo de reco-
nhec|mento da or|gem (CkC), manLem-se llgado as orlgens de repllcao duranLe
Lodo o clclo celular, onde serve como slnallzador para ouLras proLelnas que se
venham llgar anLes do lnlclo da fase S.

uma dessas proLelnas e a Cdc6, esLando presenLe em balxos nlvels ao longo da
malor parLe do clclo celular mas que aumenLa LranslLorlamenLe numa fase precoce
de C1. Cuando se llga ao C8C em C1, promove a llgao de ouLras proLelnas, for-
mando um comp|exo pr-rep||cat|vo, que slnallza o lnlclo da repllcao, aLraves da
acLlvao do complexo S-Cdk. LsLe complexo pre-repllcaLlvo prevlne alnda a re-
repllcao do unA: a[uda na fosforllao da Cdc6, promovendo a dlssoclao do
complexo pre-repllcaLlvo e a degradao da Cdc6.

Coes|nas: proLelnas que asseguram a coeso dos croma-
Lldeos-lrmos nos cromossomas repllcados. Asseguram
a segregao cromossmlca aproprlada, sendo apenas
quebrada numa fase Lardla da mlLose permlLlndo a
separao dos cromaLldeos pelo fuso acromLlco em
anafase.

C slsLema uLlllza dlversos mecan|smos de )2&)K.*"#+
para lmpedlr a progresso do clclo celular caso o unA
esLe[a danlflcado.
G1: danos no unA causam um aumenLo da concen-
Lrao da proLelna pS3, reguladora da Lranscrlo
que acLlva a Lranscrlo do gene que codlflca a pro-
I|gura 42 Lntrada na fase S por me|o do comp|exo pr-rep||cat|vo.
I|gura 43 Coes|na.
glna 60 de 89

Lelna p21. LsLa proLelna e lnlbldora de Cdk2, 4 e 6 e llga-se aos complexos C1-
S/Cdk e S-Cdk, lmpedlndo a progresso para a fase S. Se o unA esLlver dema-
slado danlflcado, a p33 pode lnduzlr apopLose.
S: duranLe a repllcao do unA, lmpedlndo a enLrada em fase M com unA
lncompleLo ou danlflcado. ara que a celula enLre em fase M, o complexo M-
Cdk Lem de ser acLlvado por fosfaLases e clnases especlflcas. Cuando o unA
esL danlflcado, as fosfaLases auLo-lnlbem-se, os complexos M-Cdk esLo
lnacLlvos e a fase M no comea enquanLo os erros no forem reparados.

Iase M

8eorganlzao de Lodos os componenLes celulares de forma a dlsLrlbul-los equlLaLl-
vamenLe pelas celulas-fllhas.

M-Cdk: lnduz a condensao dos cromossomas e correcLo allnhamenLo dos mesmos
no plano equaLorlal, para que possam ser correcLamenLe segregados. lnduz Lam-
bem a formao do fuso acromLlco. L acLlvado pela fosfatase Cdc2S, sendo essa
acLlvao medlada por F339B85C poslLlvo.

Condens|nas: complexos proLelcos que a[udam na condensao dos cromossomas.
So acLlvadas, por fosforllao, por aco lndlrecLa do complexo M-Cdk e acLuam
con[unLamenLe com as coeslnas, conLrlbulndo para a formao de anels a volLa dos
cromossomas.

I|gura 44 Act|vao do comp|exo M-Cdk.
I|gura 4S Condens|nas.
glna 61 de 89

A fase M pode ser dlvldlda em sels fases:
rofase: condensao dos cromossomas (2 cromaLldeos-lrmos) e formao do
fuso acromLlco enLre os dols cenLrossomas.
rometafase: fosforllao dos poros nucleares e lmlnas nucleares, quebrando-
se o lnvlucro nuclear. Cs mlcroLubulos do fuso acromLlco llgam-se aos c|ne-
tocoros (complexos proLelcos que medelam a llgao dos fllamenLos aos cen-
Lrmeros).
Metafase: allnhamenLo dos cenLrmeros no plano equaLorlal da celula.
Anafase: segregao dos cromaLldeos-lrmos aLraves de mlgrao polar. Cs
mlcroLubulos vo dlmlnulndo o seu comprlmenLo (anafase A) e os plos do
fuso movem-se em senLldos oposLos (anafase 8).
1e|ofase: reformao do lnvlucro nuclear (desfosforllao dos poros e lmlnas
nucleares) a volLa de cada con[unLo de cromossomas. lormao do anel con-
LrcLll de acLlna.
C|toc|nese: separao do clLoplasma, aLraves da conLracLllldade do anel de
acLlna.

Contro|o do nmero e tamanho das c|u|as

As celulas de um organlsmo mulLlcelular so reguladas ao nlvel da dlvlso mas Lam-
bem a nlvel da morte ce|u|ar. Cuando uma celula [ no e necessrla ou, por algu-
ma razo, se Lorna perlgosa, pode provocar a sua prprla morLe morte ce|u|ar
programada, sendo a apoptose o processo mals comum em anlmals.

A apopLose no pre[udlca as celulas vlzlnhas vlsLo que a celula encolhe e condensa-
se, sendo rapldamenLe fagoclLada por macrfagos, que reconhecem fosfat|d||-
I|gura 46 Iormao e quebra do |nv|ucro nuc|ear.
glna 62 de 89

ser|na expressa, em apopLose, na face exLerna da membrana plasmLlca. C clLoes-
queleLo colapsa e o maLerlal geneLlco e fragmenLado.

Caspases: proLeases provenlenLes de precursores lnacLlvos (pr-caspases). 1m
como prlnclpals aces: desLrulr as proLelnas lnlbldoras da unase, cllvar as lmlnas
nucleares e proLelnas do clLoesqueleLo, levando a fragmenLao do nucleo, desLrul-
o do clLoesqueleLo e fragmenLao celular.

As pr-caspases so acLlvadas por c||vagem proteo||t|ca em resposLa a slnals lndu-
Lores de apopLose. u-se uma cascata proteo||t|ca amp||f|cada: as caspases cllvam
pr-caspases, acLlvando-as e Lornando-as em caspases efecLoras que podem acLuar
no seu subsLraLo ou conLlnuar a cllvar ouLras pr-caspases.
I|gura 47 Lxpos|o de fosfat|d||-ser|na numa c|u|a apoptt|ca.
I|gura 48 V|as de act|vao de caspases. (A) Cllvagem proLeollLlca. (8) CascaLa proLeollLlca ampllflcada.
glna 63 de 89

Caspase 9: caspase lnlcladora nos mamlferos que e acLlvada aquando da formao
do apoptossoma, um complexo com 7 subunldades, sendo, cada uma delas, consLl-
Lulda por uma pr-caspase 9, uma proLelna adapLadora Apaf-1 e uma molecula de
c|tocromo C. C clLocromo e llberLado pela mlLocndrla por esLlmulos pr-
apopLLlcos. uma vez acLlvada pelo apopLossoma, a caspase 9 cllva/acLlva caspases
efecLoras que levam a morLe celular. AcLlva as caspases 3 (fragmenLa unA), 7 e 8
(acLlva proLelnas pr-apopLLlcas da famllla 8cl2).

Iam|||a 8c|2: grupo de proLelnas lnLracelulares que regulam a acLlvao de procas-
pases e, consequenLemenLe, a acLlvao de processos que desencadelam morLe
celular programada. Alguns membros promovem a acLlvao de procaspases e mor-
Le celular enquanLo ouLros lnlbem esses processos.
8ax e 8ak: acLlvam procaspases lndlrecLamenLe ao llgarem-se a membrana
exLerna mlLocondrlal, promovendo a llberLao de clLocromo C e formao do
apopLossoma.
8c|2: a prprla proLelna 8cl2 lnlbe a acLlvao de procaspases e apopLose, ao
bloquear a acLlvldade de 8ax e 8ak.
LxlsLem alnda ouLros membros que lnlbem os lnlbldores (lnlbem a 8cl2), ou
se[a, so pr-apopLLlcos. um exemplo dessas proLelnas e a proLelna 8ad.

lace a danos lrreparvels no unA, a proLelna pS3 Lambem e lnduLora de apopLose.
A exlsLncla desses erros provoca a acLlvao de clnases (A1M, A18 e CP2) que
fosforllam e esLablllzam a p33, permlLlndo o aumenLo dos seus nlvels. A p33 lnduz a
Lranscrlo de genes que codlflcam proLelnas pr-apopLLlcas OS@'*#%/
@
(!>D8 e
.;E8), culmlnando na apopLose.

3
As proLelnas :,P?;6<J da famllla 8cl2 so lnlcladores essenclals da morLe celular programada e so
necessrlas para apopLose lnduzlda por esLlmulos clLoLxlcos.
I|gura 49 Iormao do apoptossoma. As proLelnas 8ax e 8ak so responsvels pela aberLura de
poros na membrana mlLocondrlal, levando a llberLao do clLocromo C.
glna 64 de 89

C processo de morLe celular programada pode alnda ser regulado por s|na|s prove-
n|entes de outras c|u|as, podendo promover ou lnlblr o processo.
Iactores de sobrev|vnc|a: promovem a sobrevlvncla da celula, suprlmlndo a
apopLose. Se as celulas no receberem esses facLores, acLlvam o seu programa
lnLracelular de morLe. Llgam-se a recepLores na superflcle celular que suprl-
mem o programa de morLe, podendo usar para esses efelLos a proLelna 8c|2.

M|togn|os: llgam-se a recepLores na superflcle celular, lnlclando Lransdues
de slnals que lndlcam que a celula se deve dlvldlr. odem acLuar ao llberLarem
do bloquelo e permlLlndo a Lranslo de C1 para S. um dos D;<35><82 B28C30 e
a prote|na ket|nob|astoma (kb) que se llga a reguladores de Lranscrlo especl-
flcos, lmpedlndo-os de esLlmularem a Lranscrlo de genes necessrlos a dlvl-
so e prollferao celular. Cs mlLogenlos acLlvam vlas de slnallzao lnLracelular
que conduzem a acLlvao dos complexos C1-Cd e C1/S-Cd, que fosforllam a
8b, alLerando a sua conformao e llberLando o regulador de Lranscrlo. um
exemplo de mlLogenlo, que acLlva ouLra vla de slnallzao, e o DGI (@<813<31?
9327L39 =2;N1A F851;2), que pode ser llberLado por plaqueLas lncorporadas em
cogulos sangulneos. C uCl llga-se a receptores t|ros|na c|nase (k1k), acLl-
vando a proLelna kas que val lnlclar uma cascaLa de fosforllao que acLua
sobre um mdulo de slnallzao: a 8as acLlva a MA-c|nase-c|nase-c|nase
(MA-kkk), que acLlva a MA-c|nase-c|nase (MA-kk), que acLlva a MA-
c|nase (MA-k), que fosforlla reguladores de Lranscrlo responsvels pela pro-
llferao celular na zona danlflcada. ua mesma forma, o factor de cresc|mento
de hepatc|tos esLlmula a prollferao de hepaLclLos num flgado danlflcado
(clrurgla ou ferlda).

I|gura S0 Modo de actuao de um
factor de sobrev|vnc|a.
glna 6S de 89

Iactores de cresc|mento: llgam-se a recepLores na superflcle celular, acLlvando
vlas de slnallzao lnLracelular. Levam a acumulao de proLelnas e ouLras
macromoleculas aLraves de dols mecanlsmos aumenLo da blosslnLese e dlml-
nulo da sua Laxa de degradao. C DGI e um facLor de cresclmenLo e um
mlLogenlo, esLlmulando LanLo o cresclmenLo celular como a progresso ao lon-
go do clclo celular. A[uda as celulas a manLer um Lamanho aproprlado enquan-
Lo prollferam.

Algumas proLelnas de slnallzao exLracelular lnlbem a dlvlso, cresclmenLo e
sobrevlvncla da celula. um exemplo dessas proLelnas e a m|ostat|na que lnlbe o
cresclmenLo e prollferao celular de mloblasLos , que se fundem para formar as
I|gura S1 Modo de actuo da prote|na kb face a um est|mu|o m|togn|co.
I|gura S2 Modo de actuao do DGI.
glna 66 de 89

flbras musculares duranLe o desenvolvlmenLo embrlonrlo. Cuando o gene se
enconLra danlflcado, as celulas musculares crescem e prollferam, hlperLroflando os
musculos.
Cancro

Cancro: paLologla resulLanLe da prollferao anormal de qualquer Llpo de celula
(Lumor). C tumor ma||gno e aquele que Lem capacldade de se meLasLlzar.
Carc|noma: com orlgem em celulas eplLellals (90),
Sarcoma: a parLlr de celulas do Lecldo con[unLlvo, como osso, carLllagem e Lecl-
do flbroso,
Leucem|a e ||nfoma: a parLlr de celulas hemaLopoleLlcas e do slsLema lmunlL-
rlo (8).

A prollferao desmedlda das celulas deve-se a mutaes em genes reguladores
crlLlcos que conLrolam a prollferao, a dlferenclao e a sobrevlvncla.
roto-oncogene: genes reguladores que promovem a prollferao celular nor-
mal e lnlbem a apopLose. A presena de uma muLao em um dos alelos e sufl-
clenLe para ser lnduzlda prollferao celular e desenvolverem-se Lumores.
Asslm, o proLo-oncogene Lransforma-se num oncogene. As alLeraes que orl-
glnam um oncogene podem ser:
MuLao numa sequncla codlflcanLe: pode conduzlr a produo, em nlvels
normals, de uma proLelna hlperacLlva. ode provocar alLeraes no cenLro
acLlvo ou na conformao, alLerando a llgao ao subsLraLo. L o caso dos
k1k (recepLores Llroslna clnase) ou da kas.
Ampllflcao genlca: ampllflcao do gene, o que faz com que ha[a super-
produo de proLelna. ode aconLecer com factores de cresc|mento (como
o c-Myc).
8earran[o cromossmlco: Lranslocao do proLo-oncogene para uma reglo
com vrlas sequnclas reguladoras e promoLoras >@01238D, aumenLando a
Lranscrlo. ode alnda haver fuso com um gene acLlvamenLe LranscrlLo,
havendo produo de uma proLelna hlbrlda hlperacLlva (e o caso do 8cr-Ab|,
leucemla mlellde crnlca, cromossoma hlladelphla).

glna 67 de 89

Gene supressor de tumor: genes reguladores que lnlbem a prollferao celular
e o desenvolvlmenLo Lumoral e promovem a apopLose celular. A presena da
muLao Lm de se enconLram em ambos os alelos para se verlflcar compleLa
lneflccla do gene. Cs genes que codlflcam as proLelnas kb, pS3 e p21 so
oncossupressores, Lal como os genes 8kCA1 e 8kCA2 (mulLo comuns em casos
heredlLrlos de cancro da mama e do ovrlo).

Cs Lumores enconLraram ouLras formas de prollferao, como a secreo de facLo-
res de cresclmenLo que promovem a anglogenese e a reacLlvao da Lelomerase.

I|gura S3 rocessos de obteno de um oncogene a part|r de um proto-oncogene.
glna 68 de 89

8LCCC 10: CI1CLSULLL1C

C|toesque|eto: complexa rede dlnmlca de fllamenLos proLelcos que se esLende
pelo clLoplasma, reorganlzando-se em resposLa ao melo e funclonando como o sis-
Lema musculo-esqueltico da clula. De uma forma geral, tem funes como:
adapLabllldade de formas celulares, suporLe de volume clLoplasmLlco, organlzao
dos componenLes celulares, lnLeraces mecnlcas com o melo amblenLe, obLeno
de movlmenLos, segregao dos cromossomas duranLe a mlLose e melose, enLre
ouLras.

C clLoesqueleLo e consLlLuldo por Lrs Llpos de fllamenLos proLelcos:
M|crotbu|os, cu[a subunldade so heLerodlmeros de tubu||na,
I||amentos |ntermd|os, cu[a subunldade podem ser dlferenLes proLelnas,
I||amentos de act|na ou m|crof||amentos, cu[a subunldade e o monmero de
act|na.

M|crotbu|os

Cs m|crotbu|os so Lubos ocos consLlLuldos
por 13 proLofllamenLos de heLerodlmeros de
Lubullna. Cs heLerodlmeros so composLos
por uma unldade de -tubu||na e ouLra de -
tubu||na, llgadas forLemenLe por llgaes
no-covalenLes. Ao adqulrlrem essa confor-
mao, o mlcroLubulo adqulre duas exLreml-
dades: uma exLremldade -Lubullna (0"#(!
&#,) e uma exLremldade -Lubullna (.%(!
&#,), havendo asslm po|ar|dade do mlcroLu-
bulo. LsLa polarldade e de exLrema lmpor-
Lncla no s para o seu cresclmenLo como
para a funo que desempenham:
1ransporLe lnLracelular,
ManuLeno de organelos no mesmo
local,
Cerao de fora (fuso mlLLlco segre-
gao dos cromossomas/cromaLldeos),
MovlmenLo celular (clllos e flagelos).

I|gura S4 M|crotbu|os.
glna 69 de 89

Os heterodmeros -Lubullna so adlclonados em qualquer exLremldade. no
enLanLo, a pollmerlzao na @<>0?369 e mals rplda.

M1CC: D752;1>B><3?;2=867Q76= 536132. C centrossoma e o prlnclpal M1CC, locall-
zando-se perLo do nucleo quando a celula no se enconLra em mlLose e conLrola o
numero e dlsposlo dos mlcroLubulos no clLoplasma. C cenLrossoma e consLlLuldo
por subunldades de -tubu||na, as quals se llgam as D76>0 3690 dos mlcroLubulos.
Servem de ponLo de lnlclo (#()%&4+"*# !"+&) a pollmerlzao dos mlcroLubulos. no
cenLrossoma, enconLra-se um par de centr|o|os.

Instab|||dade d|nm|ca: cresclmenLo dos mlcroLubulos (a parLlr dos slLlos de
nucleao por adlo de subunldades de -Lubullna) e, repenLlnamenLe, decrescl-
menLo dos mesmos (perda de subunldades), podendo volLar a crescer, podem Lam-
bem desaparecer compleLamenLe, sendo subsLlLuldos por um novo mlcroLubulo do
mesmo anel de -Lubullna. LsLa dlnmlca e posslvel a acLlvldade de C1ase da Lubu-
llna. Cada dlmero de Lubullna llvre conLem uma molecula de G1 assoclada forLe-
menLe, que e hldrollsada a GD, depols do dlmero ser adlclonado ao mlcroLubulo.
Cuando a llgao enLre as subunldades do mlcroLubulo (adlo de dlmeros) ocorre
mals rapldamenLe do que a hldrllse de C1, a exLremldade crescenLe e consLlLulda
apenas por subunldades llgadas a C1 G1 )4.. nesLa slLuao, o mlcroLubulo
conLlnuar a crescer. uevldo a aleaLorledade dos processos qulmlcos, conLudo, oca-
slonalmenLe a Lubullna na exLremldade llvre do mlcroLubulo hldrollsa o seu C1
anLes de a prxlma subunldade ser adlclonada. C facLo de a exLremldade ser agora
consLlLulda por subunldades de Cu-Lubullna promove a despollmerlzao, sendo
que, uma vez lnlclada, a despollmerlzao Lem Lendncla a conLlnuar.
I|gura SS Centrossoma e cresc|mento de m|crotbu|os a part|r deste. A @<>0?
369 dos mlcroLubulos flca vlrada na dlreco conLrrla a do cenLrossoma.
glna 70 de 89

LxlsLem frmacos que lnlbem a pollmerlzao ou a despollmerlzao e Lm um efel-
Lo noLrlo na organlzao do clLoesqueleLo, nomeadamenLe no fuso acromLlco.
Co|ch|c|na: lnlbe a pollmerlzao, llgando-se a Lubullna llvre.
1axo|]ac||taxe|: lnlbe a despollmerlzao, llgando-se aos mlcroLubulos (uLlll-
zado em LraLamenLos oncolglcos).

A malorla das celulas e po|ar|zada, lsLo e, uma exLremldade e esLruLural e funclo-
nalmenLe dlferenLe da ouLra. LsLa polarldade provem da organlzao dos organelos
pelos mlcroLubulos. L o caso dos neurnlos, cu[os mlcroLubulos dlspem a D76>0
369 para o nucleo e a @<>0 369 para a perlferla.

Cs mlcroLubulos esLo envolvldos no transporte |ntrace|u|ar, cu[os movlmenLos so
gerados por proLelnas moLoras que usam energla provenlenLe da hldrllse de A1.
LsLas proLelnas llgam-se aos componenLes celulares que querem LransporLar e aos
fllamenLos, LransporLando os componenLes ao longo dos ulLlmos.
C|nes|nas: movlmenLo no senLldo da @<>0 369. A medlda que a celula cresce, as
clneslnas llgam-se a membrana do reLlculo endoplasmLlco e puxam-no para
fora.
D|ne|nas: movlmenLo no senLldo da D76>0 369. Llgam-se ao aparelho de Colgl e
puxam-no para denLro.

I|gura S6 Instab|||dade d|nm|ca dos m|crotbu|os. A pollmerlzao depende da presena de Lubullna assoclada a
C1 e a despollmerlzao de Lubullna assoclada a Cu.
I|gura S7 rote|nas motoras
envo|v|das no transporte |ntra-
ce|u|ar.
glna 71 de 89

C|||os: esLruLuras mlcroLubulares esLvels que se esLendem da superflcle aplcal de
algumas celulas. ConLm um con[unLo nuclear de mlcroLubulos assoclado a proLel-
nas especlflcas (axonema) que surgem dos corpos basa|s do clLoplasma, na base do
clllo. 1m como funo mover o fluldo das superflcles celulares, sendo enconLrados,
por exemplo, nas mucosas das vlas aereas superlores e das Lrompas de lalplo.

I|age|os: assemelham-se esLruLural e bloqulmlcamenLe aos clllos, no enLanLo, so
mulLo mals longos. Servem para mover a celula lnLelra, aLraves de movlmenLos
ondulares. LnconLram-se nos espermaLozldes.

I||amentos |ntermd|os

Caracter|st|cas pr|nc|pa|s: reslsLncla esLruLural e elasLlcldade.
ApresenLam uma enorme fora Lnsll, o que permlLe a celula reslsLlr ao 012300
mecnlco que sofre quando e esLlcada,
So mals reslsLenLes que os ouLros fllamenLos do clLoesqueleLo, sendo capazes
de reslsLlr a solues no-lnlcas e a melos concenLrados.

Ao conLrrlo dos ouLros fllamenLos do clLoesqueleLo, os fllamenLos lnLermedlos no
esLo dlrecLamenLe envolvldos no movlmenLo celular. ApresenLam funo estrutu-
ra| e so composLos por uma grande varledade de proLelnas. Lssas proLelnas apre-
senLam um domlnlo cenLral em hellce-, uma cabea globular n-Lermlnal e uma
cauda globular C-Lermlnal. A reglo -hellcoldal permlLe que duas subunldades se
envolvam, formando um dlmero.

I|gura S8 Const|tu|o dos f||amentos
|ntermd|os. Cs fllamenLos so consLl-
Luldos por subunldades proLelcas que
se assoclam em dlmeros paralelos. Cs
dlmeros formam LeLrmeLros anLlpara-
lelos (sendo esLes a unldade funclonal
dos mlcroLubulos). ClLo LeLrmeros
sofrem Loro, orlglnando um fllamenLo
em forma de corda.
glna 72 de 89

Cs fllamenLos lnLermedlos so apo|ares, dado que no apresenLam exLremldades
poslLlvas/negaLlvas dlsLlnLas. So por lsso mals esLvels, no apresenLando o com-
porLamenLo dlnmlco assoclado aos ouLros elemenLos do clLoesqueleLo.

LnconLram-se ao longo do clLoplasma, rodeando o nucleo e esLendendo-se aLe a
perlferla, onde flcam llgados a membrana plasmLlca nas zonas de comunlcao
enLre celulas (desmossomas) ou em zonas de comunlcao com a membrana basal
(hem|-desmossomas). odem enconLrar-se Lambem denLro do nucleo.

Cs fllamenLos lnLermedlos podem ser dlvldldos em quaLro Llpos:
uerat|nas: enconLram-se em c|u|as ep|te||a|s, sendo que cada Llpo de eplLe-
llo apresenLa o seu prprlo con[unLo de queraLlnas. Locallzam-se no lnLerlor das
celulas eplLellals, aLravessando a celula. !unLam-se aos fllamenLos de celulas
ad[acenLes aLraves de desmossomas. A lmporLncla desLes fllamenLos e per-
cepLlvel aLraves da doena &.",&10*%/!"! J(%%*!4 !"0.%&I: muLaes geneLlcas
nos genes das queraLlnas que lnLerferem com formao desLes fllamenLos na
pele, que a Lornam suscepLlvel a rupLuras mesmo com apllcao de uma fora
fraca.
V|ment|nas: Lecldo con[unLlvo, celulas musculares e celulas da glla.
Neurof||amentos: neurnlos.
Lm|nas nuc|eares: revesLlmenLo e reforo da superflcle lnLerna da membrana
nuclear lnLerna. As proLelnas que consLlLuem as lmlnas so as |m|nas. Cs
fllamenLos da lmlna nuclear separam-se e llgam-se duranLe a dlvlso celular,
sendo esLe mecanlsmo conLroloda por fosforllaes e desfosforllaes. CerLos
defelLos nas lmlnas nucleares esLo assoclados a cerLos Llpos de proger|a:
envelheclmenLo premaLuro que, pensa-se, esLar assoclado a uma dlvlso celu-
lar problemLlca (lnsLabllldade nuclear ou dlmlnuLa capacldade de regenerao
Lecldular).

I|gura S9 1|pos de f||amentos |ntermd|os. ara alem dos descrlLos em clma, pode consl-
derar-se a exlsLncla de dols grupos malores: os fllamenLos lnLermedlos clLoplasmLlcos
(queraLlnas, vlmenLlnas e neurofllamenLos) e os fllamenLos lnLermedlos nucleares.
glna 73 de 89

I||amentos de act|na ou M|crof||amentos

Caracter|st|cas pr|nc|pa|s:
Cadela de moleculas de act|na que se dls-
pem de forma organlzada e na mesma
dlreco em Lorno do elxo da cadela, sendo
que esLa sofre uma Loro sobre sl mesma a
cada 37 nm,
Mals flexlvels e flnos que os mlcroLubulos,
lrequenLemenLe surgem assoclados numa
rede que e mals forLe que os fllamenLos lso-
lados,
ApresenLam po|ar|dade (Lm uma @<>0 369
e uma D76>0 369),
Se no se assoclarem a proLelnas, so bas-
LanLe lnsLvels e podem sofrer despollmerl-
zao em ambas as exLremldades.

Cs fllamenLos de acLlna locallzam-se por Lodo o clLoplasma e no crLex celular.

1al como nos mlcroLubulos, a po||mer|zao d-se por adlo de monmeros (de
acLlna) em ambas as exLremldades, sendo mals rplda na @<>0 369. Cada molecula
de acLlna esL assoclada a A1 que e hldrollsado a AD quando se llga ao fllamenLo.
A hldrllse de A1 dlmlnul a esLabllldade de pollmero, pols a fora de llgao enLre
os monmeros dlmlnul, promovendo a despollmerlzao.

Sendo asslm, o que lmpede que os monmeros de acLlna pollmerlzem Lodos?
equenas proLelnas, como a t|m|os|na e a prof|||na, que se llgam aos monme-
ros de acLlna exlsLenLes no clLosol, crlando reservas de acLlna sob a forma de
monmeros e, asslm, lmpedlndo a adlo de monmeros nas exLremldades dos
fllamenLos,
Apenas quando a pollmerlzao e necessrla, surgem proLelnas como as form|-
nas e as Arp (85176?23<8139 @2;13760) que promovem a adlo de monmeros.

As proLelnas que se assoclam aos fllamenLos de acLlna modlflcam o seu comporLa-
menLo:
I|mbr|nas: esLabllldade em fllamenLos paralelos,
I||am|nas: formao de redes de fllamenLos cruzados,
Cof|||na: quebra dos fllamenLos,
Arp 2]3: ramlflcaes,
I|gura 60 I||amento de act|na. A cada 37
nanmeLros, a cadela sofre uma Loro
sobre sl mesma.
glna 74 de 89

M|os|nas (I e II): proLelnas moLoras que conferem conLracLllldade,
Integr|nas e cader|nas: proLelnas Lransmembranares que se llgam aos fllamen-
Los.

Mov|mento ce|u|ar por arrastamento:
emlsso de uma proLuso (por melo de
fllamenLos de acLlna) que adere ao
subsLraLo. C crLex flca sob Lenso. A
parLe de Lrs da celula conLral (com
auxlllo de m|os|na II), arrasLando a
celula para a frenLe. lormam-se novos
ponLos de ancoragem e os anLlgos vo
sendo llberLados.

I|gura 61 Con[unto de prote|nas assoc|ado a f||amentos de act|na.
I|gura 62 Mov|mento ce|u|ar por arrastamento.
glna 7S de 89

R40&%%".*,"4: prolongamenLos clLoplasmLlcos
flnos e lamelares. A formao de redes de acLlna
com vrlas ramlflcaes depende da proLelna Arp
2]3.

X"%*.*,"4: prolongamenLos clLoplasmLlcos alon-
gados. A formao de fllamenLos recLlllneos
depende de proLelnas como as form|nas.

M|os|na I: assocla-se aos fllamenLos de acLlna e llga-se a veslculas (LransporLe vesl-
cular) ou a membrana plasmLlca (deformao desLa). Move-se sempre no senLldo
da @<>0 369:

M|os|na II: responsvel pela conLraco muscular. Cada molecula e um dlmero
composLo por duas moleculas de mloslna llgadas aLraves das suas caudas. 1em duas
cabeas globulares com act|v|dade A1s|ca numa exLremldade e uma cauda em
forma de mola. As caudas assoclam-se, formando um fllamenLo blpolar no qual as
cabeas se pro[ecLam para fora em dlreces oposLas.
I|gura 63 D|spos|o dos f||amentos de
act|na em (A) lelxes conLrcLels, (8)
#8D3<<7@;978 e (C) R7<;@;978.
I|gura 64 M|os|na I e sua actuao. (A) Molecula de mloslna l. (8) 1ransporLe
veslcular. (C) ueformao da membrana plasmLlca.
glna 76 de 89

I|gura 6S M|os|na II e contraco muscu|ar. (A) Musculo relaxado. (8) Musculo conLraldo.
I|gura 66 kesumo das caracter|st|cas gera|s de cada e|emento do c|toesque|eto.
glna 77 de 89

ANLkC A: AULAS 1LCkICC-k1ICAS

Au|a 1er|co-rt|ca 1: Mo|cu|a de DNA e C|onagem Mo|ecu|ar

Mo|cu|a de DNA: ver 8LCCC 1.

C|onagem Mo|ecu|ar e DNA recomb|nante: ver ANLkC 8.

A21: anlogo do nucleLldo de Llmlna. L uLlllzado como lnlbldor da LranscrlpLase
reversa do Plv. Lm Lermos de esLruLura, o AZ1 e semelhanLe ao nucleLldo de Llml-
na com excepo do carbono 3, onde, em vez de se enconLrar llgado um grupo
hldroxllo, se enconLra um grupo azlda (n
3
). Asslm, como o AZ1 e lncorporado prefe-
renclalmenLe a Llmlna, e dlflculLada (ou mesmo lmposslblllLada) a elongao da
molcula de DNA viral, visto que grupo fosfato 5 no se consegue ligar ao grupo N
3
.
Ccorre paragem de slnLese de unA vlral, fazendo com que o Plv delxe de consegulr
lnfecLar llnfclLos 1 Cu4
.

C unA genmlco bacLerlano no d|ger|do pelas suas prprlas enzlmas de resLrl-
o porque as sequnclas de resLrlo correspondenLes a essas nucleases esLo
proteg|das por met||ao

Au|a 1er|co-rt|ca 2: 1ecno|og|a de DNA kecomb|nante

1ecno|og|a de DNA recomb|nante: ver ANLkC 8.

|ataformas de produo de med|camentos recomb|nantes: bacLerlas, culLuras de
celulas eucarlLlcas (leveduras, por exemplo) e anlmals Lransgenlcos. A uLlllzao de
dlferenLes plaLaformas permlLe ulLrapassar deLermlnadas llmlLaes que condlclo-
nam a capacldade de expresso dessas proLelnas (por exemplo, modlflcaes ps-
Lraduclonals), sendo essas llmlLaes levanLadas pelas caracLerlsLlcas especlflcas da
plaLaforma ou pela lncapacldade de esLas produzlrem quanLldades comerclalmenLe
explorvels do produLo recomblnanLe.
8actr|as: no fazem modlflcaes ps-Lraduclonals (gllcosllao, fosforllao,
ollgomerlzao e cllvagem proLeollLlca).
S|stemas eucar|otas un|ce|u|ares: resolvem o problema das modlflcaes ps-
Lraduclonals, no enLanLo, por vezes, as modlflcaes no so eflclenLes e a
quanLldade produzlda no e economlcamenLe renLvel e explorvel.
Crgan|smos transgn|cos: resolvem ambos os problemas.
glna 78 de 89

As prote|nas recomb|nantes podem ser uLlllzadas em:
vaclnas,
lalLa ou dlsfuno de proLelnas ou LraLamenLo de doenas heredlLrlas (subsLl-
Lulo enzlmLlca ou hormonal),
8lomedlcamenLos (facLores proLelcos humanos, facLores de cresclmenLo, enLre
ouLros).

Doena de Gaucher: e causada por falLa da enzlma g|ucocerebros|dase nos llsos-
somas, sendo esLes lncapazes de dlgerlr os glucocerebrsldos. LsLes acumulam-se,
levando a um aumenLo de volume dos llsossomas (corpos de lncluso), especlal-
menLe nos macrfagos (porque Lm de degradar grandes quanLldades de membra-
na, pela sua funo fagoclLlca). Asslm, nesLa doena e comum a presena de hepa-
Loesplenomeglla e de alLeraes sseas (por causa dos macrfagos exlsLenLes na
medula ssea). L LraLada aLraves de terap|a de repos|o enz|mt|ca, em que a glu-
cocerebrosldase e produzlda por unA recomblnanLe num vecLor de expresso euca-
rloLa (que lhe adlclona o slnal de manose 6-fosfaLo). A Lerapla resu|ta nesLa doena
vlsLo que, uma vez na correnLe sangulnea, a glucocerebrosldase e endoclLada pelos
macrfagos, lnclulda no endossoma que depols se [unLa ao llsossoma. no enLanLo,
com ouLras doenas (como as dos peroxlssomas), esLa abordagem no e posslvel
pols as enzlmas endoclLadas Lm como desLlno o llsossoma, onde serlam degrada-
das. Alnda no e posslvel o reencamlnhamenLo para ouLros organelos. A glucocere-
brosldase recomblnanLe enconLra-se no mercado sob o nome de 3&1&Y/0&.

Au|a 1er|co-rt|ca 3: 1cn|ca de Ck

1cn|ca de Ck: ver ANLkC 8.

I|brose u|st|ca: doena auLossmlca recesslva causada por uma muLao no gene
CI1k (5J0175 F7B2;070 12860D3DB2863 5;69>518653 23=><81;2), que codlflca uma pro-
Lelna dos canals de cloro e que regula ouLros canals lnlcos e, por lsso, os Lecldos
afecLados apresenLam um LransporLe lnlco anormal. A muLao lmpede a salda de
cloro das celulas, havendo um aumenLo da presso osmLlca. A gua das mucosas
enLra para denLro das celulas, fazendo com que o muco flque mals espesso. verlfl-
cam-se compllcaes ao nlvel dos brnqulos (drenagem anormal dos fluldos,
havendo prollferao de mlcrorganlsmos e consequenLe rlsco de lnfeco), do Lubo
dlgesLlvo (obsLlpao) e no suco pancreLlco (llpases no chegam ao lnLesLlno, o
que faz com que a emulso llpldlca no ocorra, provocando o apareclmenLo de
fezes gordurosas). nas glndulas sudorlparas, as celulas dos ducLos so lncapazes de
absorver naCl e, porLanLo, o suor flca salgado (base de LesLe de dlagnsLlco).
glna 79 de 89

Au|a 1er|co-rt|ca 4: Sequenc|ao de DNA

Sequenc|ao de DNA: ver ANLkC 8.

Au|a 1er|co-rt|ca S: 1cn|cas de Deteco de rote|nas e c|dos Nuc|e|cos

1cn|cas de deteco de prote|nas e c|dos nuc|e|cos: ver ANLkC 8.

Au|a 1er|co-rt|ca 6: Anem|a de Iancon|

Anem|a de Iancon| (AI): doena auLossmlca recesslva ou assoclada ao cromosso-
ma x (gene lAnC8). CaracLerlza-se por muLao nos genes lAnC que produzem
proLelnas do slsLema de reparao do unA. ApresenLa-se uma falncla medular que
conduz a panclLopenla progresslva (dlmlnulo do numero de erlLrclLos, leucclLos
e LrombclLos) e malformaes congenlLas graves ou llgelras que podem afecLar o
esqueleLo, o corao, os rlns e as vlas urogenlLals. Cs lndlvlduos com Al apresenLam
predlsposlo ao desenvolvlmenLo de leucemla mlellde e Lumores slldos, dada a
exlsLncla de uma fase G2 do clclo celular aumenLada e por apresenLarem |nstab|||-
dade cromossm|ca espontnea. A conflrmao do seu dlagnsLlco pode ser felLa
aLraves de dols LesLes laboraLorlals:
ueLeco da hlpersenslbllldade a agenLes genoLxlcos,
ueLermlnao do grupo de complemenLao.

Grupo de comp|ementao: subgrupo geneLlco comum. MuLaes que conduzem a
lgual fenLlpo podem afecLar:
ulferenLes genes,
um mesmo gene, mas com a posslbllldade de as muLaes serem dlferenLes
enLre os alelos.
Caso a doena se[a recesslva, pode reallzar-se um LesLe de complemenLao. MuLa-
es que afecLam o mesmo gene no so complemenLares. MuLaes que afecLam
genes dlferenLes so complemenLares. Se um alelo do gene lAnCA esLlver muLado
e um alelo do gene lAnCu
1
esLlver muLado, no h manlfesLao da doena exlsLe
comp|ementao. no enLanLo, se ambos os alelos do gene lAnCA esLlverem muLa-
dos, no h complemenLao, manlfesLando-se a doena.

glna 80 de 89

Abordagens teraput|cas:
1ransplanLe de medula ssea (quer se[a auLlogo ou heLerlogo), embora corrl-
[a apenas as alLeraes hemaLolglcas, no alLerando a suscepLlbllldade para o
desenvolvlmenLo de cancro.
1erap|a gn|ca: lnsero de celulas esLamlnals hemaLopoleLlcas alLeradas gene-
LlcamenLe, de modo a expressarem, num dos alelos, a proLelna funclonal. A
anemla de lanconl, por resulLar de alLeraes num unlco gene, conhecldo e lso-
lado como prlnclpal responsvel da doena (grupos de complemenLao) e por
ser recesslva (um alelo no muLado e suflclenLe para que ha[a compensao da
produo da proLelna muLada exlbe hap|ossuf|c|nc|a), ser um bom alvo de
Lerapla genlca. no enLanLo, poder no ser suflclenLe: a Laxa de Lransfeco de
celulas esLamlnals por vlrus pode no ser suflclenLe para produzlr um numero
slgnlflcaLlvo de proLelnas funclonals. Lm alguns casos, por no se consegulr
alnda conLrolar o local de lnsero do gene no genoma, podem desenvolver-se
leucemlas por lnsero do gene LerapuLlco enLre genes assoclados a cancro.

A Lerapla genlca s acLua sobre doenas recesslvas (pelo menos para [), no curan-
do (apenas Lorna o lndlvlduo doenLe em porLador).

Au|a 1er|co-rt|ca 7: 1estes Gent|cos

1este gent|co: anllse de unA, 8nA, cromossomas, proLelnas e cerLos meLabollLos
com o ob[ecLlvo de ldenLlflcar uma doena geneLlca.
D|agnst|co: ldenLlflcao da condlo geneLlca em lndlvlduos que apresenLam
slnLomas.
red|t|vo: deLeco de muLaes em lndlvlduos asslmpLomLlcos e clculo do
rlsco de desenvolvlmenLo da doena.
Iarmacogent|ca: permlLe a ldenLlflcao de meLabollzadores rpldos/lenLos
ou de lndlvlduos com malor suscepLlbllldade a frmacos LerapuLlcos.
Aconse|hamento reprodut|vo: basela-se na esLlmaLlva da probabllldade de
Lransmlsso da muLao a descendncla e de esLes serem doenLes.
r-|mp|antatr|o]r-nata|: efecLuados quando LesLe do porLador sugere rls-
co. no pre-lmplanLaLrlo, faz-se seleco dos embrles que seguem para
lmplanLao (sem muLao). C pre-naLal serve para deLermlnar se o feLo Ler
ou no a doena.
kastre|o do recm-nasc|do: pesqulsa da presena/ausncla de muLao causa-
dora de doena geneLlca.
1estes de patern|dade: anllse de regles pollmrflcas do unA dos suposLos
pal e fllho.
glna 81 de 89

Au|a 1er|co-rt|ca 8: D|agnst|co e Mon|tor|zao do doente com nIV

Mon|tor|zao do estad|amento: conLagem de celulas 1 Cu4
e conLagem da carga
vlral em clrculao (por 81-C8). 1ambem o esLado de saude do doenLe e lmporLan-
Le (asslmpLomLlco, slnLomLlco ou com doenas deflnldoras de SluA).

1erap|a nAAk1: ,7=A<J (517L3 (617'312;L728< /A328@J. ConslsLe numa comblnao
de Lrs medlcamenLos: do|s lnlbldores de nucleosldeos anlogos da LranscrlpLase
reversa e um lnlbldor da proLease. A PAA81 no cura nem reduz equlLaLlvamenLe
Lodos os slnLomas mas dlmlnul slgnlflcaLlvamenLe as Laxas de morLalldade e morbl-
lldade por lnfeco por Plv. 8eduz a carga vlral em clrculao. no e posslvel sus-
pender (aco curLa) e exlsLe probabllldade elevada de surglrem reslsLnclas vlrals
ou reaces adversas.

Se surglrem reslsLnclas, aconselha-se a fazer a genot|pagem da est|rpe v|ra|
(sequenclao das regles codlflcanLes das proLelnas vlrals alvo da Lerapla). esqul-
sam-se muLaes e deflne-se uma nova esLraLegla LerapuLlca a segulr.

rote|nas v|ra|s:
G||coprote|na gp120: llgao as moleculas Cu4 do llnfclLo 1, permlLlndo o con-
LacLo da gp41 com a membrana da celula (fuso das membranas e llberLao
do conLeudo vlral).
1ranscr|ptase reversa: produo de unA vlral a parLlr do 8nA vlral.
Integrase: caLallsa a enLrada do genoma vlral no genoma hospedelro (funo
de nuclease e llgase).
rotease: cllva as proLelnas formadas, Lornando-as maLuras e acLlvas.

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ANLkC 8: 1LCNICAS DL 8ICLCGIA MCLLCULAk L CLLULAk

M|croscop|a

Conce|tos
Amp||ao: aumenLar o Lamanho da lmagem.
keso|uo: nlvel de deLalhe que uma lmagem comporLa.
L|m|te de reso|uo: dlsLncla mlnlma enLre dols ponLos que permlLe que esLes
se[am percebldos como dols ponLos dlsLlnLos.

1|pos de m|croscop|a
M|croscp|o pt|co: uLlllza luz branca para llumlnar preparaes. Cs mlcrosc-
plos Lradlclonals uLlllzam um con[unLo de lenLes convergenLes que a[udam na
formao de lmagens amplladas.
M|croscp|o de f|uorescnc|a: possul um fllLro que permlLe a seleco de um
deLermlnado comprlmenLo de onda (uv lv) para llumlnar a preparao. A
radlao exclLa os fluorocromos (moleculas fluorescenLes) presenLes na amos-
Lra que vo, por sua vez, emlLlr radlao vlslvel. 1ecnlca mulLo uLlllzada em blo-
logla molecular, [ que permlLe dlsLlngulr dlversos componenLes/moleculas
denLro da celula.
M|croscp|o e|ectrn|co: Lem malor poder de resoluo que o mlcroscplo
pLlco. uLlllza um felxe de elecLres que lnclde sobre as amosLras e um con[un-
Lo de slsLemas elecLromagneLlcos para focar a radlao emlLlda pelas prepara-
es. LxlsLem dols Llpos:
ue varrlmenLo/0586676= as amosLras so LraLadas com meLals pesados que
reflecLem os elecLres, orlglnando lmagens Lrldlmenslonals dos ob[ecLos.
ue Lransmlsso os elecLres aLravessam flslcamenLe a amosLra (lmposslbl-
lldade de ver a amosLra vlva).

Vantagens da m|croscop|a de f|uorescnc|a H!. e|ectrn|ca
ermlLe observar celulas vlvas, o que com o mlcroscplo elecLrnlco e lmpossl-
vel, [ que as celulas no sobrevlvem ao felxe de elecLres.
ermlLe ver mals que o corLe mulLo flno caracLerlsLlco do mlcroscplo elecLr-
nlco. lsLo faz com que se[a posslvel uma melhor ldela da aparncla real da celu-
la e no apenas do seu corLe.

glna 83 de 89

D|fraco por ka|os-k

uLlllzado quando se quer ver a composlo de moleculas lsoladas, de resoluo
superlor a da mlcroscopla elecLrnlca. ConslsLe em Lrs passos:
1) lormao de crlsLals da molecula em quesLo (por exemplo, proLelnas).
2) ulfraco do felxe de ralo-x pela molecula.
3) ueLermlnao da locallzao exacLa de cada Lomo, a parLlr do padro de
dlfraco.

L|ectroforese

1ecnlca com vrlas apllcaes, que permlLe separar e ldenLlflcar moleculas (proLel-
nas, 8nA e unA).

NC1A: para reallzar elecLroforese, necessrio um substrato para pr a correr no
gel. ara lsso, recorre-se a preparao de homogenaLos de celulas (batidos de clu-
las) em que todos os constituintes se encontram em soluo. Para os separar e
reLlrar os consLlLulnLes celulares a anallsar, procede-se a llses e cenLrlfugaes a
velocldades dlferenLes consoanLe o maLerlal que se quer aprovelLar.

L|ectroforese propr|amente d|ta: colocam-se as amostras a correr num gel, isto ,
colocam-se as amosLras num gel, em poos, e, de segulda, faz-se uma correnLe elec-
Lrlca aLravessar o gel. uesLa forma, os vrlos componenLes das amosLras vo mlgrar
a dlferenLes velocldades, dlspondo-se em vrlas bandas, sendo que cada uma delas
e consLlLulda pelo mesmo Llpo de moleculas, com o mesmo Lamanho e/ou carga.
Cuando se anallsa uma plsLa/<863, esL a anallsar-se Lodas as proLelnas/unA pre-
senLes na amosLra colocada no poo correspondenLe.

Iactores que |nf|uenc|am a ve|oc|dade da m|grao:
1amanho da molecula,
Carga elecLrlca da molecula,
vlscosldade do melo (agarose ou pollacrllamlda),
pP,
1emperaLura,
lnLensldade da correnLe elecLrlca.

A elecLroforese pode ser em ge| de agarose ou ge| de po||acr||am|da ou, alnda e|ec-
troforese cap||ar. A dlferena enLre esLes dols gels e a preclso (pollacrllamlda e
mulLo mals preclso, deLecLando varles de um unlco nucleLldo).
glna 84 de 89

na elecLroforese de unA em gel de agarose e necessrlo cor-lo. ara Lal, recorre-
se a coranLes fluorescenLes, como o bromeLo de eLldlo (Lem grupos qulmlcos que se
lnLercalam enLre as bases de unA, fluorescendo com mals lnLensldade que o coran-
Le llvre quando llumlnado com radlao uv).

na elecLroforese de proLelnas, podemos Ler elecLroforese com base no ponto |soe-
|tr|co da proLelna (pP no qual a proLelna no apresenLa carga). nesLe 70;3<351275
F;5>076=, as amosLras sofrem elecLroforese em gel de pollacrllamlda, no qual esL
esLabelecldo um gradlenLe de pP (conseguldo com recurso a vrlos B>FF320), de Lal
forma que, quando se d a passagem de correnLe elecLrlca, as proLelnas vo mlgrar
aLe alcanarem o seu ponLo lsoelecLrlco. odemos Ler alnda o SDS-AGL, lsLo e, o
)H)?@;<J8527<8D793 =3< 3<312;F;23070, em que as proLelnas so su[elLas a aco de um
deLergenLe com carga negaLlva (o SuS), formando complexos negaLlvamenLe carre-
gados enLre cadelas pollpepLldlcas e as moleculas de SuS. ue segulda, so submeLl-
das a uma elecLroforese em gel de pollacrllamlda normal. uesLa forma, a mlgrao
das proLelnas val Lraduzlr o seu peso molecular.

5*%/0&14!& 324"# A&4)+"*# (Ck)

Cb[ect|vo: obLeno de lnumeras cplas de um segmenLo de unA/gene com carac-
LerlsLlcas de lnLeresse.

8asela-se na uLlllzao de uma unA pollmerase LermoesLvel que lr formar uma
nova cadela, Lendo como molde uma cadela exlsLenLe. C lnlclo da slnLese e deflnldo
pela llgao a um .1"0&1 (segmenLo de unA com cerca de 23 nucleLldos, preferen-
cialmente nico no genoma, que se liga extremidade 3 de cada uma das cadeias;
o E*1W41, Lem a mesma sequncla que a poro lnlclal da cadela dada e o 1&H&1!& e
complemenLar dos nucletidos do final da cadeia, sendo lido no sentido 5 3).
LsLa Lecnlca assume parLlcular lmporLncla vlsLo que Lodas as Lecnlcas que se
baselam na anllse de unA uLlllzam, numa prlmelra fase, a reaco de C8 vlsLo ser
necessrla grande quanLldade de unA para serem obLldos resulLados mals verosl-
mels.

Ltapas de uma Ck
1) lsolamenLo da sequncla a coplar (por elecLroforese, por exemplo),
2) Colocao na preparao da sequncla lsolada, unA pollmerase, dn1 (nucle-
Lldos llvres) e dols @27D320 (F;2N829 e 23L3203),
3) Llevao da LemperaLura a 90C, desnaLurando a dupla cadela de unA em duas
cadelas slmples,
glna 8S de 89

4) 8eduo da LemperaLura, permlLlndo a hlbrldlzao/86638<76= dos @27D320 por
complemenLarldade em exLremldades oposLas da sequncla,
S) Llevao leve da LemperaLura, permlLlndo a llgao da pollmerase e o lnlclo da
slnLese de unA, a parLlr dos @27D320 por exLenso, no senLldo 5 3,
6) romoo de clclos sucesslvos dos passos 3, 4 e 3, resulLando numa ampllflca-
o exponenclal da sequncla lnlclal.

Iases de uma Ck
1. fase (cresc|mento exponenc|a|): cresclmenLo exponenclal do produLo
ampllflcado (cada clclo dupllca a quanLldade de produLo),
2. fase: dlmlnulo da velocldade de reao, delxando de se poder correlaclo-
nar o aumenLo de produLo com a quanLldade lnlclal de amosLra,
3. fase (.%4+&4(): esgoLamenLo dos reagenLes, delxando de haver ampllflca-
o.

Var|antes de Ck
k1-Ck (1&H&1!& +14#!)1".+"*# 53A): anllse e ampllao de fragmenLos de
m8nA. Cs passos so lguals aos descrlLos para a Lecnlca normal, havendo ape-
nas uma eLapa prevla: o molde e uma molecula de m8nA, Lendo por lsso de ser
LranscrlLo em cunA (LranscrlpLase reversa). LsLa Lecnlca e uLlllzada para deLe-
o da expresso genlca de celulas (o m8nA lndlca quals os genes que esLo
acLlvos nessa celula).
A&4%'+"0& 53A: produLo da reaco e marcado com fluorescncla, sendo anall-
sado duranLe a fase de cresclmenLo exponenclal. 1orna a quanLlflcao da
amosLra lnlclal mals fcll uma vez que a quanLldade de produLo obLldo e dlrec-
LamenLe proporclonal a quanLldade de moleculas na amosLra lnlclal.
Ck-kIL (53A 1&!+1")+"*# E14$0&#+ %&#$+2 .*%/0*1.2"!0): LraLamenLo do
produLo com nucleases de resLrlo, obLendo-se fragmenLos (ou no, se a
sequncla no Llver uma sequncla de reconheclmenLo) mals pequenos de unA
que, por exemplo, podem ser submeLldos a elecLroforese em gel de agarose
(deLermlnao de uma cerLa sequncla assoclada a paLologla).

glna 86 de 89

Deteco de rote|nas e c|dos Nuc|e|cos

9: Q&+&)67* ,& .1*+&B#4!

1cn|cas de deteco de prote|nas: baseado na relao anLlgenlo-anLlcorpo.

Lnsa|o |muno|g|co ("0(#*4!!4/): LesLes baseados na llgao especlflca que exlsLe
enLre uma lmunoglobullna/anLlcorpo e a molecula que reconhece especlflcamenLe,
o anLlgenlo. Cs anLlcorpos uLlllzados nesLes LesLes so obLldos de anlmals de labora-
Lrlo, que os produzem em resposLa a uma lmunlzao com o anLlgenlo especlflco.

O%*++"#$: aps uma elecLroforese em gel de pollacrllamlda, pode recorrer-se a um
B<;1176=, em que se faz uma Lransferncla do maLerlal su[elLo a elecLroforese para
uma membrana, uma folha de nlLrocelulose, com a a[uda de correnLe elecLrlca. Lxls-
Lem Lrs Llpos de B<;1176=:
8*(+2&1# J%*++"#$: felLo com unA. lncubao com uma sonda especlflca, per-
mlLlndo deLecLar a presena ou ausncla de uma dada sequncla.
<*1+2&1# J%*++"#$: felLo com 8nA. lncubao com uma sonda especlflca, perml-
Llndo deLecLar a presena ou ausncla de uma dada sequncla.
Z&!+&1# J%*++"#$: felLo com prote|nas. Aps sofrerem um SuS-ACL e o B<;1?
176=, as proLelnas so lncubadas com anLlcorpos especlflcos, que se vo llgar a
proLelnas especlflcas. As proLelnas so asslm ldenLlflcadas pela sua massa
molecular e anLlcorpo anLl-proLelna. C N301326 B<;1176= e mulLo uLlllzado em
lnvesLlgao laboraLorlal mas com mulLas llmlLaes para a prLlca cllnlca.
Lxemplo LesLe a lnfeco por Plv. A elecLroforese e felLa com as proLelnas
vlrals e, aps o B<;1176=, a folha de nlLrocelulose e lncubada com soro do
paclenLe. Se esLe [ Llver esLado exposLo ao vlrus, val possulr anLlcorpos con-
Lra as proLelnas vlrals, que se vo llgar as mesmas. uepols adlclona-se um
anLlcorpo anLl-lmunoglobullna humana assoclado a uma enzlma e Lambem
um subsLraLo desLa enzlma. Caso ha[a llgao anLlgenlo-anLlcorpo, no local
do anLlgenlo lr aparecer um produLo corado (pela degradao do subsLraLo
por aco da enzlma).

LLISA (&#Y/0&'%"#K&, "00(#*!*1J&#+ 4!!4/): Lem como ob[ecLlvo deLecLar a pre-
sena ou quanLlflcar anLlgenlos ou anLlcorpos numa amosLra blolglca.
Deteco de um ant|corpo espec|f|co: apllcao em LesLes para Plv ou a efl-
clncla da vaclna conLra a hepaLlLe 8.
1) AnLlgenlo especlflco e lmoblllzado numa superflcle sllda (adsoro do anLl-
genlo).
2) Soluo conLendo soro do paclenLe e adlclonada.
glna 87 de 89

3) Se anLlcorpo esLlver no soro, val llgar-se ao anLlgenlo lmoblllzado.
4) 8emove-se o soro.
S) Adlclona-se uma soluo com anLlcorpos (anLl-lmunoglobullna humana)
llgados covalenLemenLe a uma enzlma.
6) Se o anLlcorpo se llgar, a enzlma, na presena do seu subsLraLo, promove a
formao de um produLo corado, quanLlflcvel no especLrofoLmeLro.
Deteco de um ant|gn|o: apllcao em quanLlflcao de frmacos, de nlvels
hormonals ou de anLlgenlos Lumorals.
1) AnLlcorpo especlflco e lmoblllzado numa superflcle sllda (adsoro do anLl-
corpo).
2) Soluo conLendo soro do paclenLe e adlclonada.
3) Se anLlgenlo esLlver no soro, val llgar-se ao anLlcorpo lmoblllzado.
4) 8emove-se o soro.
S) Adlclona-se uma soluo com anLlcorpos semelhanLes aos lnlclals llgados
covalenLemenLe a uma enzlma.
6) Se o anLlcorpo se llgar, a enzlma, na presena do seu subsLraLo, promove a
formao de um produLo corado, quanLlflcvel no especLrofoLmeLro.

Imunoc|toqu|m|ca (celula) e Imunoh|stoqu|m|ca (Lecldos): celulas ou Lecldos bem
preservados morfologlcamenLe so lncubados com uma soluo conLendo um anLl-
corpo especlflco para um deLermlnado anLlgenlo. LsLes anLlcorpos especlflcos de
anLlgenlo (ant|corpos pr|mr|os) podem esLar dlrecLamenLe acoplados a um fluoro-
cromo ou a uma enzlma (|munodeteco d|recta). AlLernaLlvamenLe, os anLlcorpos
prlmrlos podem no esLar marcados e ser deLeLados por um anLlcorpo anLl-
lmunoglobullna acoplado a um fluorocromo ou a uma enzlma (|munodeteco
secundr|a). LsLas Lecnlcas so uLlllzadas na deLeco de marcadores Lumorals em
blpslas e na ldenLlflcao de auLo-anLlcorpos nas doenas auLo-lmunes.

=: Q&+&)67* ,& D)",*! #()%&")*!

1cn|cas de deteco de c|dos nuc|e|cos: suporLada pela blologla complemenLa-
rldade de bases.

n|br|dao "# !"+(: Lem como ob[ecLlvo deLecLar e/ou locallzar a presena de
sequnclas especlflcas de unA ou de 8nA em celulas, Lecldos ou cromossomas de
preparaes de clLogeneLlca, usando uma sonda nuc|eot|d|ca, lsLo e, um fragmenLo
de unA ou 8nA (normalmenLe 100 a 1000 bases de comprlmenLo) com sequncla
especlflca, que lnclul nucleLldos modlflcados para permlLlr a sua deLeco. A sonda
de cadela dupla de unA Lem de ser prlmelro desnaLurada em cadelas slmples de
unA e depols lncubada com a amosLra blolglca conLendo o unA alvo, Lambem
glna 88 de 89

desnaLurado. A sonda llga-se a sequncla alvo na amosLra blolglca por comple-
menLarldade de bases. A deLeco de sequnclas com malor ou menor grau de
complemenLarldade depende de quo exlgenLes so as condles de hlbrldao
usadas. As modlflcaes mals comuns na preparao de sondas so a bloLlna ou a
dlgoxlgenlna, que podem ser deLeLados por anLlcorpos especlflcos con[ugados com
fluorocromo ou enzlmas.
IISn (E%(*1&!)&#)& |n s|tu 2/J1","Y4+"*#): caso parLlcular da hlbrldao 76 071> em
que so usados marcadores fluorescenLes, deLecLados dlreLamenLe, recorrendo a
mlcroscopla de fluorescncla. 1em a sua apllcao na deLeco de sequnclas espe-
clflcas em cromossomas mlLLlcos: genes, Lranslocaes, Lrlssomlas, enLre ouLros.

1cn|ca do DNA kecomb|nante (rDNA)

1cn|ca de rDNA: con[unLo de passos pelos quals segmenLos de unA de dlferenLes
provenlnclas so comblnados para fazer novo unA. C unA obLldo (unA recombl-
nanLe), pode ser usado na clonagem de genes e modlflcaes geneLlcas em orga-
nlsmos, permlLlndo, por exemplo, a produo de novas proLelnas.

Iases da tcn|ca de rDNA
1) lsolamenLo da sequncla de m8nA correspondenLe a proLelna de lnLeresse,
2) uLlllzao da LranscrlpLase reversa para obLer cunA, sendo esLa molecula secclo-
nada em duas exLremldades (coeslvas ou cegas) por nucleases de resLrlo,
3) SecclonamenLo de um vecLor com a mesma nuclease (s pode ser secclonado
uma unlca vez),
4) lnLroduo do cunA secclonado no vecLor, por melo de llgases,
S) lnLroduo do vecLor numa celula hospedelra (eucarloLas transfeco, proca-
rloLas transformao),
6) MulLlpllcao do vecLor na celula hospedelra,
7) Seleo das celulas hospedelras com vecLor (anLlblLlco, por exemplo),
8) roduo de proLelnas.

Caracter|st|cas de um bom vector: orlgem de repllcao (permlLe repllcar-se lnde-
pendenLemenLe), zona de reconheclmenLo de vrlas nucleases de resLrlo, promo-
Lor da celula hospedelra (permlLe llgao a 8nA pollmerase), gene que conflra resls-
Lncla a anLlblLlco.

glna 89 de 89

Sequenc|ao de DNA

Cb[ect|vo: deLermlnar a ordem dos nucleLldos numa amosLra de unA.

Mtodo enz|mt|co: produo de sucesslvas cplas da molecula pela unA pollme-
rase, de forma a serem Lermlnadas premaLuramenLe por lncorporao de dldeoxl-
nucleLldos (sem grupo hldroxllo na exLremldade 3). Correlaciona-se Lamanho das
dlversas cadelas e o ulLlmo nucleLldo lncorporado, deduzlndo-se a sequncla de
nucleLldos orlglnal. AcLualmenLe, os dldn1s so marcados com fluorocromos,
permlLlndo uma unlca reaco de sequenclao, no mesmo Lubo, sendo a lelLura
deLermlnada por elecLroforese capllar.

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glna 1 de 89

IACULDADL DL MLDICINA DL LIS8CA

(celulas /?A3<@32) ou Cu8

(celulas /?5J1;1;E75). Assoclam-se a proLel-

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