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UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

FACULTAD DE QUMICA, INGENIERA QUMICA E INGENIERA FACULTAD DE QUMICA, INGENIERA QUMICA E INGENIERA
AGROINDUSTRIAL AGROINDUSTRIAL
ESCUELA ACADMICO PROFESIONAL DE QUMICA ESCUELA ACADMICO PROFESIONAL DE QUMICA
INFORME DE LABORATORIO
Experienci N
!
"# Acci$n %e & A'i&(
Experienci N
!
)# De*er'inci$n %e &( Oxi%+re%,c*(( en M*eri&
Bi+&$-ic+
ALUMNOS#
Leveratto Villalobos Andrs 05070021
Martnez Polo Ramiz
PROFESOR#
Carmen Ori!ela
. LIMA, CIUDAD UNIVERSITARIA, OCTUBRE DEL /!!0 . . LIMA, CIUDAD UNIVERSITARIA, OCTUBRE DEL /!!0 .
UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS 1 FQIQIA 1 EAP QUIMICA
INTRODUCCIN
En bioqumica, se llaman enzimas a las sustancias de naturaleza proteica que catalizan
reacciones qumicas, siempre que sea termodinmicamente posible (si bien no pueden
hacer que el proceso sea ms termodinmicamente favorable). En estas reacciones, las
enzimas actan sobre unas molculas denominadas sustratos, las cuales se convierten en
diferentes molculas, los productos. Casi todos los procesos en las clulas necesitan
enzimas para que ocurran en tasas sinificativas. ! las reacciones mediadas por enzimas
se las denomina reacciones enzimticas.
"ebido a que las enzimas son e#tremadamente selectivas con sus sustratos $ su
velocidad crece s%lo con alunas reacciones de entre otras posibilidades, el con&unto
(set) de enzimas sintetizadas en una clula determina el metabolismo que ocurre en cada
clula. ! su vez, esta sntesis depende de la reulaci%n de la e#presi%n nica.
Como todos los catalizadores, las enzimas funcionan disminu$endo la enera de
activaci%n ('(
)
) de una reacci%n, de forma que se acelera sustancialmente la tasa de
reacci%n. *as enzimas no alteran el balance enertico de las reacciones en que
intervienen, ni modifican, por lo tanto, el equilibrio de la reacci%n, pero consiuen
acelerar el proceso incluso millones de veces. +na reacci%n que se produce ba&o el
control de una enzima, o de un catalizador en eneral, alcanza el equilibrio mucho ms
deprisa que la correspondiente reacci%n no catalizada.
!l iual que ocurre con otros catalizadores, las enzimas no son consumidas por las
reacciones que ellas catalizan, ni alteran su equilibrio qumico. ,in embaro, las
enzimas difieren de otros catalizadores por ser ms especficas. *as enzimas catalizan
alrededor de -.... reacciones bioqumicas distintas. /o todos los catalizadores
bioqumicos son protenas, pues alunas molculas de !0/ son capaces de catalizar
reacciones (como el framento 12, de los ribosomas en el que reside la actividad
peptidil transferasa).
*a actividad de las enzimas puede ser afectada por otras molculas. *os inhibidores
enzimticos son molculas que disminu$en o impiden la actividad de las enzimas,
mientras que los activadores son molculas que incrementan la actividad. !simismo,
ran cantidad de enzimas requieren de cofactores para su actividad. 3uchas droas o
frmacos son molculas inhibidoras. 4ualmente, la actividad es afectada por la
temperatura, el p5, la concentraci%n del sustrato $ otros factores fsico6qumicos.
!lunas enzimas son usadas comercialmente, por e&emplo, en la sntesis de antibi%ticos
$ productos domsticos de limpieza. !dems, ampliamente utilizadas en variados
procesos industriales, como son la fabricaci%n de alimentos, tinci%n de &eans o
producci%n de biocombustibles.
PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL:
DPTO2 ACADEMICO DE QUIMICA ORGANICA . LABORATOTIO DE BIOQUIMICA
UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS 1 FQIQIA 1 EAP QUIMICA
Reactivos:
7 8 !milasa (,aliva).
9cido Clorhdrico 1.:.
!lmid%n.
!zul de 3etileno ...1:.
;ormaldehdo ..-:.
<uo de papa.
*eche de vaca.
E#tracto de rbano.
Materiales:
=ubos de ensa$o.
(radillas.
>ipetas.
?auetas.
=erm%metro.
ESTUDIO DE ACCIN DE LAS ENIMAS: Accin de la Amilasa Salival
!UNDAMENTO:
*a hidr%lisis del luc%eno (% almid%n) puede ser catalizada por cidos % por enzimas.
En la hidr%lisis catalizada por cidos ha$ un rompimiento desordenado de enlaces, con
la formaci%n intermedia de todos los posibles oliosacridos $ con la conversi%n final
de estos oliosacridos a lucosa. *as enzimas son ms especficas con respecto a los
enlaces rotos, por e&emplo la alfa6amilasa cataliza la hidr%lisis rpida $ ordenada de
enlaces internos alfa(16-) $ no hidroliza los enlaces alfa(162), ni maltosa@ *a alfa6
amilasa acta rompiendo el luc%eno inicialmente en de#trinas ramificadas de peso
molecular mediano, formando solamente pequeAas cantidades de maltosa@
posteriormente disminu$e el peso molecular de las de#trinas, a travs de rompimientos
relativamente lentos dando lucosa $ un oliosacrido con un residuo de lucosa
menos.
*os productos finales de la deradaci%n sonB lucosa, maltosa e isomaltosa. "ebido a
que durante la hidr%lisis, $a sea catalizada por cidos % por alfa6amilasa, ha$ un
incremento de rupo reductores, el proreso de la reacci%n puede ser observado
midiendo la cantidad de azcares reductores por reducci%n del C,D6dinitro salicilato. El
rado % porcenta&e de hidr%lisis se determina comparando la cantidad del azcar
reductor formado en un tiempo dado con la cantidad del azcar presente despus de la
hidr%lisis acdica total.
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CURSO DE LA DETERMINACIN:
En tres tubos de ensa$o se coloc%B
=ubo /E 1 B !ua.
=ubo /E F B 1 m* de 9cido Clorhdrico.
=ubo /E C B 1 m* de ,aliva "iluida.
! todos los tubos se le aAade Dm* de soluci%n de almid%n (la cual se prepar% con
anterioridad dilu$endo el almid%n 8 GstarchH en aua destilada $ calentando para a$udar
a la disoluci%n) una vez areada la soluci%n de almid%n se aita cada uno de los tubos
con una baueta, posterior a esto se coloca los tubos en baAo de aua durante 1D
minutos de la siuiente maneraB
=ubo /E 1 B ?aAo de aua a CI EC.
=ubo /E F B ?aAo de aua hirviendo.
=ubo /E C B ?aAo de aua a CI EC.
+na vez pasado este tiempo se de&an enfriar los tubos, una vez frios los tubos se aAadi%
F otas de soluci%n de $odo, observandose un cambio de coloracion en la muestra. =al
como siueB
MUESTRA COLORACION
=ubo /E 1 !zul
=ubo /E F !marilla
=ubo /E C !marilla
>ara la determinaci%n de maltosa se tom% 1m* de cada soluci%n, se le are% 1m* de
reactivo de ;ehlin, el cual determinar la presencia de maltosa al formase un
precipitado ro&o de o#ido cuproso.
MUESTRA
!ORMACION DE
PRECIPITADO
=ubo /E 1 /eativo
=ubo /E F >ositivo
=ubo /E C >ositivo
DISCUSIN DE RESULTADOS:
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El mtodo usado esta basado en la velocidad de hidr%lisis del almid%n a su vez de sus
diferentes tipo de productos porsu hidr%lisis obteniendose los siuientes resultadosB
Cataliza"or
S#strato "e la
Reaccion
Pro"#cto "e
la Reaccion
Revelaci$n
S#strato Pro"#cto
!ua almidon almidon 66666666666 6666666666666
,aliva almidon maltosa 0. ;ehlin J#ido de Cu
!c. Clorhidrico almidon maltosa 0. ;ehlin J#ido de Cu
*os resultados e#puestos en este cuadro se ven en la siuiente imaenB
En esta imaen podemos apreciar como el tubo /E 1 el cual contena aua dio positivo
al indicador de $odo, esto se debe, a que a diferencia de los otros dos casos, tubo /E F $
tubo /E C, con el aua no se produce la hidr%lisis del amid%n, por tanto, el almidon
queda intacto dando la coloraci%n azul del comple&o caracteristico con $odo. En el caso
de la amilasa salival $ el acido clorhidrico estos si cambian la coloraci%n al arear el
$odo, estos toman una coloraci%n amarilla la que puede indicar la presencia de
acrode#trinas.
!l realizar la prueba con el reactivo de ;ehlin observamos que esta sera inncesaria
para el tubo /E1 (aua) debido a q no e#isten productos de hidr%lisis $ por tanto
ausencia de azucares reductores@ en los dos casos siuientes vemos que se produce la
formacion de un precipitado ro&o de o#ido cuproso debido a la presencia de la maltosa
(azucar reductor). Jbservemos la siuiente imaenB
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En esta imaen podemos observar la formaci%n del precipitado de K#ido cuproso el cual
se presenta con ma$or abundancia en el tubo /E F (amilasa salival) que en el tubo /E C
(cido clorhdrico) este resultado se debe a que la hidr%lisis con la amilasa salival fue
ma$or que con el cido clohdrico debido a que el tubo /E F estuvo e#puesto a una
temperatura ma$or que el tubo /E C.
DETERMINACIN DE LAS DI!ERENTES CLASES DE ENIMAS:
Determinacion de Oxido Reductasas en material biolgico
Revelacin de Aldehidoxidasa en la Leche
!UNDAMENTO:
El mtodo de revelado de la enzima aldehido#idasa se basa en la observaci%n visual
sobre la decoloraci%n de azul de metileno, el cual lia el hidroeno que se desprende
con la participaci%n de la aldehido#idasa del sustrato (en este caso la leche).
*a enzima aldehido#idasa cataliza la reacci%n de deshidroenaci%n de diferentes
aldehdos, como por e&emplo, la del formaldehido.
En este caso el 5 se transporta hacia ;!", que es el coenzima de la enzima dada
(aldehido#idasa) $ lueo sobre el aceptor final (el o#ieno).
!l arear el azul de metileno (!3) 6 (el cual es el aceptor artificial de hidr%eno) en
condiciones de ausencia de o#ieno se oriina la forma reducida de este (forma leicoB
!35
F
). !hora, si la soluci%n incolora de azul de metileno (!3) se aita entonces
nuevamente adquiere el color azul como producto de su o#idaci%n.

CURSO DE LA DETERMINACIN:
En dos tubos de ensa$o se coloc% D m* de leche fresca $ posteriormente se aAadi%B
=ubo /E 1 B 1m* de aua destilada.
=ubo /E F B 1m* de formaldehido.
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Tubo N%
&
Tubo N%
'
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*ueo, a ambos tubos de ensa$o se les aAadi% 1m* de soluci%n de azul de metileno
(!3) $ por ltimo se aAade C a - otas de aceite de vaselina (para proteer la muestra
lquida del contacto con el o#ieno del aire). *os dos tubos se colocaron en baAo de
aua calentado a una temperatura constante de CL EC por un tiempo entre D 8 1.
minutos. >asado este tiempo se compar% la coloraci%n de ambas muestras.
Jbservndose que la muestra del tubo /E 1 tiene una coloraci%n azul $ la del tubo /E F
no.
NOTA: /os referimos a la coloraci%n de todo el lquido no solo de la superficie.
>or ultimo, despues de hacer la comparaci%n del color, procedimos a aitar fuertemente
los dos tuvos observando que la coloraci%n azul aparaece en los dos.
DISCUSIN DE RESULTADOS:
!l realizar la e#periencia podemos observar un problema al comenzar, al no contar con
el aceite de de vaselina no se puede proteer la soluci%n del o#ieno del aire $ por tanto
la superficie del liquido reaccionar tomando la coloraci%n del azul de metileno como se
observa en la primera fiuraB
!un as podemos notar en el tubo de la izquierda, tubo /E1, que cierta parte de la
soluci%n ha adquirido la coloraci%n del azul de metileno, esto se debe a la presencia de
o#ieno del aua@ en el otro caso, tubo /E F, vemos que esta coloraci%n solo se da en la
superficie debido a la presencia del o#ieno del aire.
"espus de calentar vemos que las muestras del tubo /E 1 $ tubo /E F se mantienen
incoloras como se ve en la fiuraB
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Tubo N%
(
Tubo N%
&
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>osteriormente $ con aitaci%n viorosa las muestras cambian de coloraci%n como se
observa en la siuiente imaenB
Revelacin de la Peroxidasa en la Papa y el Rbano
!UNDAMENTO:
Este proceso enzimtico esta basado en la capacidad de la pero#idasa de catalizar la
reacci%n de o#idaci%n de la benzidina a difenoquinoidiimina con per%#ido de hidroeno.
El compuesto difenoquinoidiimina, se condensa con la molcula de la benzidina no
o#idada en la formaci%n de un comple&o verde azulado que en alunos casos por estado
de los reactivos o de la sustancia en la que se analiza se ve verde parduzco.
CURSO DE LA DETERMINACIN:
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En dos tubos de ensa$o se coloc%B
=ubo /E 1 B E#tracto de papa.
=ubo /E F B E#tracto de rbano.
! cada uno de estos tubos se le aAadi% D otas de una soluci%n alcoh%lica de benzidina $
una ota de per%#ido de hidroeno observando un cambio de coloraci%n en el caso del
e#tracto de rbano que adquiere una coloraci%n verde parduzca.
DISCUSIN DE RESULTADOS:
*os resultados visuales que se obtuvieron al realizar la siuiente e#periencia son los
siuientesB
>odemos apreciar en esta imaen queB En el tubo /E F se produce la reacci%n de la
o#idaci%n de la benzidina en difenoquinoidiimina, esta conclusi%n es apreciable debido
a la aparici%n verdosa de la soluci%n, as como tambin podemos decir que en el &uo o
e#tracto de papa ha$ ausencia o poca cantidad de la enzima que cataliza esta reacci%n
debido a que esta no adquiri% la coloraci%n que determina que la reacci%n se positiva.
CONCLUSIONES
DPTO2 ACADEMICO DE QUIMICA ORGANICA . LABORATOTIO DE BIOQUIMICA
Tubo N%
&
Tubo N%
(
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*as reacciones catalizadas por enzimas son muchos mas rpidas $ mas completas que
las correspondientes reacciones no catalizadas.
El incremento de la velocidad en las reacciones catalizadas depende de la colcaci%n
e#acta del sustrato en la pro#imidad $ con la orientacion adecuada respecto al rupo
cataltico.
la 76amilasa cataliza la hidr%lisis rpida $ ordenada de enlaces internos 7 (16-) $ no
hidroliza los enlaces 7 (162).
*os productos finales de la deradaci%n por hidr%lisis del almid%n sonB lucosa, maltosa
e isomaltosa.
*a enzima aldehido#idasa reacciona con la lactosa de la leche, la cual presente un rupo
aldehdo dando las coloraciones especficas al tratarlo con azul de metileno.
En el e#tracto de rbano ha$ presencia de pero#idasas que catalizan la o#idaci%n de la
benzidina a difenoquinoidiimina.
En el &uo o e#tracto de papa ha$ ausencia o poca cantidad de pero#idasa que cataliza
esta reacci%n debido a que esta no adquiri% la coloraci%n verdosa que indica que el
resultado es positivo.
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