La determinacin de azcares reductores mediante

el mtodo de Somogyi-Nelson se basa en la

capacidad de estos azcares para reducir agentes
oxidantes suaves como el Cu2+.. El Cu2+ se
reduce a Cu+, y en presencia de arsenomolibdato
amnico forma un complejo de color azul, a partir
del cual podemos conocer mediante
espectrofotometra la cantidad de cobre reducido, y
por lo tanto, de azcar reductor.



Reactivo de Somogyi I
Reactivo de Somogyi II
Glucosa de 500 ppm (Sol A)
Reactivo de Nelson
12 Tubos de ensayo (de tapa roscada)
Vaso de precipitados 25 ml
Vaso de precipitados 50 ml
Probeta 25 ml
Pipeta automtica 1 ml
Pipeta automtica 5 ml
Agua destilada
Tres muestras problema (A, B, C)
Espectrofotmetro
Agitador de tubos o vrtex
Cubeta
Incubadora


Para empezar, preparamos las muestras problema
para realizar el experimento. Primero preparamos el
Reactivo 1, compuesto por Reactivo de Somogyi I y
Reactivo de Somogyi II mezclados en proporcin
4:1. Para ello mezclamos con ayuda de las pipetas
automticas 19,2 ml de Somogyi I con 4,8 ml de
Somogyi II, hasta alcanzar un volumen final de 24
ml aproximadamente (dos por cada tubo de
ensayo). Para continuar, mezclamos por duplicado
2 ml de cada muestra problema con 2 ml de
Reactivo de Somogyi (anteriormente creado),
homogeneizamos las disoluciones con ayuda de un
vrtex y las incubamos en un bao de agua
hirviendo durante 15 min. Una vez transcurrido ese
tiempo, dejamos enfriar y aadimos 2 ml de
Reactivo de Nelson y 4 ml de agua destilada.
Homogeneizamos la nueva disolucin y evaluamos
la absorbancia de cada muestra mediante un
espectrofotmetro a una longitud de onda de 540
nm. Una vez sometidas las muestras problema a la
espectrofotometra obtenemos los siguientes



|Muestra |Absorbancia |Absorbancia media |
|A1 |0.664 |0.6535 |
|A2 |0.643 | |
|B1 |0.071 |0.041 |
|B2 |0.011 | |
|C1 |1.049 |1.0145 |
|C2 |0.980 | |

A continuacin, preparamos en seis tubos de
ensayo seis disoluciones distintas formadas por
agua destilada y una solucin de glucosa de 500
ppm. En esta tabla se especifican las cantidades
que hay que aadir de cada, y las respectivas
concentraciones que tendrn las disoluciones
resultantes:

|Glucosa 500 ppm |Agua destilada |Concentracin
de glucosa |
| | |resultante |
|0 ml |2.0 ml |0 ppm |
|0.1 ml |1.9 ml |5 ppm |
|0.2 ml |1.8 ml |10 ppm |
|0.3 ml |1.7 ml |15 ppm |
|0.4 ml |1.6 ml |20 ppm |
|0.5 ml |1.5 ml |25 ppm |

Despus, las sometemos al mismo proceso que
hemos realizado para las muestras problema. Las
soluciones resultantes se introducirn en el
espectrofotmetro para crear una curva de
calibrado a partir de las concentraciones y su
respectiva absorbancia a una longitud de onde de
540 nm. Los resultados sern:

|Agua destilada |Concentracin |Absorbancia |
|2.0 ml |0 ppm
|0 |
|1.9 ml |5 ppm |0.341 |
|1.8 ml |10 ppm |0.562 |
|1.7 ml |15 ppm |0.847 |
|1.6 ml |20 ppm |1.072 |
|1.5 ml |25 ppm |1.332 |

[pic]

Utilizando la curva de calibrado anterior calculamos
la cantidad de azcares reductores presente en las
tres muestras problemas.
Para ello despejamos la x en: y= 0.0514x + 0.0587,
entonces x= (y- 0.0587)/ 0.0514

| |Ecuacin |Concentracin |
|Muestra A |x = (0.6535- 0.0587) / 0.0514 |x =
11.572 ppm |
|Muestra B |x = (0.041- 0.0587) / 0.0514 |x = 0.344
ppm |
|Muestra C |x = (1.0145-0.0587)/0.0514 |x =
18.595ppm |

Estas son las concentraciones de las muestras para
el volumen final de 10 ml que se obtena tras
procesarlas. Ahora mediante una regla de tres,
hallamos la concentracin de las muestras iniciales:
C = x VFinal/VO

| |Concentracin de azcares |
|Muestra A0 |C = (11.572 10)/2= 57.86 ppm |
|Muestra B0 |C = (0.344 10)/2= 1.72 ppm |
|Muestra C0 |C = (18.595 10)/2= 92.975 ppm |

El mtodo utilizado para la determinacin de lo
azcares se basa en la capacidad para absorber la
luz del complejo formado por el cobre reducido por
los azcares y el arsenomolibdato amnico. A partir
de la absorbancia de una muestra de este
complejo, podemos conocer la cantidad de cobre
reducido de la muestra, y por extensin, la cantidad
de azcares reductores que hay en ella.