PREPARAR MEDIOS DE CULTIVO IN VITRO PARA MICROPROPAGACIN

INTRODUCCIN

Los medios de cultivo son una mezcla de nutrientes que, en concentraciones
adecuadas y en condiciones fsicas ptimas, permiten el crecimiento de los
microorganismos, estos medios son esenciales en el laboratorio por lo que un control
en su fabricacin, preparacin, conservacin y uso, asegurar la exactitud, confiabilidad
y reproducibilidad de los resultados obtenidos. En los laboratorios se utilizan
diferentes tipos de medios de cultivo que pueden ser preparados en forma lquida o en
forma slida. Usualmente para preparar un medio slido, se parte de un medio lquido
al que se le aade un agente solidificante como el agar, la gelatina o la slicagel. Una
vez que ha sido preparado, un medio de cultivo puede ser inoculado (es decir, se le
aaden organismos) y a continuacin incubado en condiciones que favorezcan el
crecimiento. El crecimiento de los microorganismos es el cultivo. Un cultivo axnico o
puro contiene un nico tipo de microorganismos. Los medios de cultivo deben
contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y deben estar exentos de
cualquier microorganismo contaminante. Los medios de cultivo contienen como
mnimo: carbono, nitrgeno, azufre, fsforo y sales inorgnicas. En muchos casos sern
necesarias ciertas vitaminas y otras sustancias inductoras del crecimiento. Tambin se
aaden colorantes que actan como indicadores. El agar es el principal agente
solidificante utilizado en medios. Se disuelve completamente a 100C y se solidifica al
enfriarse a 40C. (Clavell, 1992).

Los medios de cultivo deshidratados se deben almacenar en envases sellados bajo las
condiciones que seale el fabricante, generalmente se almacenan en un lugar fresco
(entre 15 y 25), con poca humedad y protegidos de la luz solar directa. Nunca se
deben almacenar cerca de autoclaves, hornos, ni otra fuente de calor o vapor. Una vez
que el medio de cultivo ha sido preparado y esterilizado se debe almacenar entre 2 y
8 C, a menos que el medio requiera alguna condicin diferente. Se deben mantener
en recipientes bien cerrados para evitar su deshidratacin. Cuando se usa tapn de
algodn se debe colocar por encima una envoltura de papel de aluminio (Dugas, 1999).


El objetivo de esta prctica es aprender a preparar medios de cultivo in vitro para
micropropagacin.












Material y mtodo

Material

1L agua destilada
Papel de aluminio
5 frasquitos de penicilina
Jeringas
Azcar blanca

Material de laboratorio

Agar sabouroud
Murashige y skoog
Balanza
Pipeta
Probetas
Matraz


Mtodo

Preparacin de medio de cultivo

Para iniciar esta preparacin primero se agreg en un matraz Erlenmeyer 50ml de
agua destilada, se procedi agregar 15ml de Murashige y skoog (MS) y 3 ml de cido
Indolacetico luego se afor hasta 150ml y finalmente se agreg el agar, se fue
agregando lentamente y con la ayuda de la cocina elctrica se disolvi rpidamente.

Obtencin del medio de cultivo

El medio de cultivo obtenido se llev a distribuir 2ml en los cinco frascos de penicilina
que tena cada alumno, luego se tap con papel de aluminio, se procedi a envolver
con papel y rotular para ser llevado a esterilizar.


Esterilizacin del medio de cultivo

El medio de cultivo envuelto y rotulado se llev a esterilizar al autoclave por 15
minutos para evitar la contaminacin.








Resultados

Tabla N01: clculos de los diferentes ingredientes para la preparacin de medio de
cultivo













Discusin

La preparacin de un medio de cultivo para tejidos vegetales es de gran importancia,
ya que es este, quien provee las condiciones y nutrientes necesarios al explante para
su crecimiento y desarrollo. El uso adecuado de un medio de cultivo para vegetales
correctamente preparado con todos y cada uno de sus ingredientes bien medidos y
adheridos, favorecer la produccin de plantas in vitro que se requieran propagar ya
que es un medio que contiene los nutrientes y factores de crecimiento necesarios
para su ptimo desarrollo (Gonzales et., 2000).


Conclusin

La presente prctica se concluye que es de gran importancia preparar adecuadamente
los medios de cultivo in vitro para micropropagacin, aadir la cantidad de solucin
exacta y disolverla correctamente para obtener los resultados esperados.

La asepsia que se tuvo para la preparacin del medio del cultivo fue exitosa ya que no
hubo ninguna alteracin en el medio.






Material Cantidad
Sacarosa 4.5 gr.
cido Indolacetico 3ml.
Agar trabaja al 0.8% 1.2gr.
Murashige y skoog 15ml.
Agua destilada 150ml.


Referencias bibliogrficas


Clavell, L.; Pedrique de Aulacio, M. 1992. Microbiologa. Manual de Mtodos Generales
ed. 2
da
Facultad de Farmacia. Universidad Central de Venezuela.

Dugas Beverly. 1999. Tratado de Enfermera Prctica Nueva. Editorial Interamericana.
Mxico. http://es.scribd.com/doc/14173118/4-Esterilizacion-y-Preparacion-de-
Medios-de-Cultivo.

Gonzales, cruz, caramillo, silos. 2000. Biotecnologa Vegetal. (Cultivo de tejidos,
manual) SEP, Mxico, 133p.





Anexos





































INTRODUCCION

Diversas plantas de inters agroalimentario, ornamental o manipuladas genticamente, se
propagan o regeneran vegetativamente. Asimismo, en algunos casos es preciso emplear
tcnicas de propagacin vegetativa para erradicar infecciones por virus, lograr la
propagacin de especies en las cuales es difcil hacerlo naturalmente, y para introducir
variaciones genotpicas que aumenten la calidad de los productos.
Con la aplicacin de la tcnica de micro propagacin de plantas, se amplan las
perspectivas de obtencin de material vegetal con mejor calidad agronmica y en cualquier
poca del ao (Alberti et al. 1992). Para el desarrollo de esta tcnica, deben considerarse
aspectos fundamentales, como la procedencia, seleccin y desinfeccin del explante, as
como la composicin de los medios de cultivo a utilizar en cada una de las etapas y las
condiciones de crecimiento (Navarro y Perea 1996).
Uno de los mayores usos del cultivo de tejidos es la propagacin vegetativa de plantas con
el fin de disponer de gran cantidad de material vegetal fitosanitariamente sano (Pasqual y
Ferreira 2007).

OBJETIVO

Establecer la metodologa a seguir para preparacin de un medio de
cultivo.

MATERIALES Y METODOS

Se llevo a cabo la elaboracin de medio de cultivo MS el cual fue elaborado por Murashige
y Skoog (1962), se hicieron las soluciones stock de macro nutrientes, micronutrientes,
vitaminas, calcio, fierro, etc. Se pesaron los ingredientes necesarios para cada solucin y
se fueron agregando uno a uno, en un vaso de precipitado, esto se realizo con la finalidad
de elaborar un concentrado para la preparacin del medio de cultivo.

Una vez obtenido el concentrado se guardo en un refrigerador para impedir su
degradacin. Se tomo el concentrado y se puso en un horno microondas para su
descongelacin, se tomaron 100 ml del concentrado y se verti en un vaso de precipitado
de 1 litro, posterior mente se le agrego 2 ml de Kin (cine tina) esta mezcla se aforo a 1 litro
con agua destilada, despus se midi el pH que tena que estar cerca de 5.8.

Se agrego 500 ml de agua destilada en un matraz de 1 litro, posteriormente se le agrego
4gr de agar, la mezcla se meti al horno microondas para solubilizar el agar

Despus se agrego de 20 ml de agar en frascos de gerber, posterior mente se procedi a
la esterilizacin en el autoclave a un presin de 18 a 22 lb/pulg, a 121c por 15 minutos.

RESULTADOS

Se obtuvo un medio de cultivo de forma satisfactoria ya que su consistencia fue buena, as
como el contenido de nutrientes y aditivos.

DISCUSIN

La elaboracin de un medio de cultivo es sencilla siempre y cuando se lleven a cabo las
actividades en orden y de forma precisa como lo sealan los pasos a seguir.

CONCLUSIONES

En mi opinin el medio MS es el mejor, ya que es fcil de elaborar y es muy verstil, ya
que con pequeas modificaciones se puede adaptar a diversos tipos de plantas.

BIBLIOGRAFIA

Alberti, GI; Barbosa, SL; Guiorgio, PJ. 1992. La micro propagacin: estrategias y
posibilidades. Barcelona, Espaa. 315 p.

Murashige, T; y Skoog, F. 1962. A revised medium for rapid growth and bioassays with
tocacco tissue cultures. Physiology Plant 15:473-497.

Navarro, W; Perea, M. 1996. Tcnica in vitro para la produccin y mejoramiento de
plantas. 2 ed. Heredia, CR. Editorial de la Universidad Nacional. 105 p.

Pasqual, M; Ferreira, ED. 2007. Protocols for micro propagation of wood trees and fruits,
Chapter 37. Micro propagation of fig tree (Ficus carica). S.M. Jain; H. Hggman. eds.
Brazil. 409-416.