UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUMICA

E.A.P. FARMACIA Y BIOQUMICA
Quinto Ao
Semestre 2013-I
Prctica N9:
Determinacin de
Txicos Orgnicos Fijos-
Identificacin de
Residuos 1 y 4
Departamento Acadmico de Farmacologa,
Bromatologa y Toxicologa
Asignatura de Toxicologa y Qumica Legal
Departamento Acadmico de Farmacologa, Bromatologa y Toxicologa

Profesor Responsable: Q.F. Jos Llahuilla Quea
Integrantes:
Cano Mori, Csar Eduardo 08040003
Chvez Carbajal, Lucero 08040103
Gamarra Domnguez, Eliane 08040007
Prez Guerrero, Fiorella 08040106
Quispe Ibarra Anthony 08040024
Horario de Laboratorio:
Martes10:00 am 2:00
pm

Prctica N9: Determinacin de Txicos Orgnicos Fijos-Identificacin de Residuos 1 y 4

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Introduccin
La toxicologa forense ayuda al establecimiento de la relacin causa-efecto entre la
exposicin de un medicamento o sustancia qumica y los efectos txicos o mortales que
puedan causar esa exposicin, las primeras investigaciones en toxicologa forense datan
del ao 1850 en donde el Conde Hiplito de Bocarm, asesina a su cuado
administrndole nicotina; para demostrar la causa de esta muerte Stass crea un mtodo
de aislamiento y extraccin de txicos orgnicos fijos.
1
A raz de estos avances qumicos
y muchos otros, la Toxicologa Forense adquiere un gran desarrollo que se va
consolidando a medida que sus resultados analticos pueden ser confirmados mediante
la variada tecnologa instrumental, cada vez ms especfica y sensible.
Hoy en da las drogas de abuso han pasado a ser de un problema global que afecta a
muchos pases, obligando a las naciones a intensificar sus esfuerzos por el control y
regulacin de algunas drogas
3
, es por ello que como futuros investigadores en el
presente informe vamos a identificar los principales metaboltos producto de la
biotransformacin de sustancias txicas presentes en los fluidos y tejidos corporal.
Para la identificacin de estas sustancias previamente es necesario realizar una
extraccin en un disolvente orgnico ya sea en medio cido o alcalino de modo que nos
permita extraer la mayor cantidad y pureza
2
de estos txicos. Dentro de estos
compuestos vamos a poder encontrar sustancias como las benzodiacepinas,
carbamacepina, fenotiazinas, anfetaminas, antidepresivos tricclicos, alcaloides,
plaguicidas organofosforados, barbitricos, salicilatos y otros analgsicos antipirticos
que hayan sido empleados como sustancias de abuso por el paciente.













Prctica N9: Determinacin de Txicos Orgnicos Fijos-Identificacin de Residuos 1 y 4

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Objetivos
Identificar los compuestos orgnicos fijos presentes en una muestra biolgica de
orina mediante reacciones especficas.

Determinar la presencia de salicilatos, fenotiazidicos y benzodiacepinas
presentes en una muestra biolgica de orina.


Conocer las propiedades, mecanismos de accin y las consecuencias de sus
efectos lesivos.





















Prctica N9: Determinacin de Txicos Orgnicos Fijos-Identificacin de Residuos 1 y 4

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Determinacin de Txicos orgnicos fijos
Identificacin de Residuo 1 y 4
1. Marco terico
1.1. Salicilatos

Son sustancias hoy en da ampliamente empleadas por sus propiedades
antiinflamatoria y analgsica, por ello se expenden de forma libre en muchos
establecimientos farmacuticos en sus presentaciones de salicilatos, acido acetil
saliclico, salicilato de sodio o salicilato de dietilamina.
5

Los salicilatos poseen como ncleo fundamental el cido saliclico (cido
ortohidroxibenzoico) un potente irritante que solo puede usarse por va tpica;
sin embargo para su utilizacin y mejor absorcin se han sustituido grupos
carboxilos e hidroxilos dando como resultado la conocida aspirina, paracetamol,
salicilato de metilo, entre otros.
4






















Mecanismo de accin y
toxicidad
Absorcin: GI, Drmica.
Metabolismo: Heptico
(depuracin 3.9L/h)
Unin a Protena : 50-80%
Volumen de distribucin:
0.15L/kg
Excreta: Orina depende ph
alcalino
Efectos txicos
SNC: hiperventilacin,
alcalosis respiratoria,
deshidratacin.
S.RESPIRAT: edema pulmonar.
S.HEMATO: alteracin factor
de coagulacin, hemorragia.
GI:nauseas, emesis, dolor
abdominal,
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1.2. Fenotiazinas
Las fenotiazinas son un
grupo de frmacos que se
emplean principalmente en
el tratamiento de la
psicosis, se caracterizan por
presentar un anillo
tricclico en el cual estn
ligados dos anillos de
benceno por un tomo de
nitrgeno y azufre.
6
A partir
de esta base se han podido sintetizar ms de 30 fenotiazinas con diferentes
acciones farmacolgicas; uno de los primeros frmacos sintetizados fue la
Clorpromazina indicado para estados de ansiedad, psicosis y agitaciones.















Dosis txica
D.TERAPUTICA:40-
60mg/Kg/da
D. AGUDA: 150-
200mg/Kg/da
D.SEVERA:300-500mg/Kg
Manifestaciones Clnicas
Nauseas
Deshidratacin
Hipertemia
Letarco
Convulsiones
Mecanismo de accin y toxicidad
Absorcin: GI, Parenteral.
Metabolismo: Heptico . Efecto
anticolinrgico produce taquicardia, y
el bloqueo alfa-adrenrgico causa
hipotensin ortosttica.
Concentracin plasmtica mxima: 2-
4h
Unin a Protena : 80%
Volumen de distribucin: 20 L/kg
Excreta: Orina y bilis
Vida media: 20-40h
Efectos txicos

SNC: depresin.
S.CARDIO: alteracin en la
repolarizacin, conduccin auriculo-
ventricular,
S.DRMICO: hipersensisbilidad,
reacciones cutneas.
S.METABLICO: hipercolesterolemia.
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1.3. Benzodiacepinas
Estn compuestas por un anillo de benceno unido a un anillo de diazepina de
siete miembros, sin embargo presentan una sustitucin a nivel del carbono 5.
Son tranquilizantes menores empleados con fines teraputicos en el tratamiento
psiquitrico; sin embargo hoy en da tambin se emplean con fines delictivos
junto con otros depresores del sistema nerviosos como el alcohol llevando al
paciente a un estado de coma. Sus efectos ms relevantes son la sedacin,
hipnosis, disminucin de la ansiedad, relajacin muscular, amnesia y actividad
anticonvulsiva.
7


















Dosis txica



D.LETAL: 150mg/Kg
Manifestaciones Clnicas
Miosis
Hipotensin
Arritmia
Depresin respiratoria
Agitaciones
Hiper- Hiportemia
Letarco
Convulsiones
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Mecanismo de accin y toxicidad
Absorcin: GI
Metabolismo: Heptico .
Mecanismo de accin: potencian la accin
inhibitoria del neurotransmisor (GABA),
favoreciendo el ingreso de iones de cloro a
la clula, lo cual genera hiperpolarizacin
celular y disminuye la excitabilidad
neuronal.
Concentracin plasmtica mxima: 2- 3h
Unin a Protena : 80-90%
Volumen de distribucin: 1-3.5 L/kg
Excreta:Renal
Vida media: 10h
Efectos txicos


SNC: depresin.
S.RESPIRATORIO: complicaciones
Dosis txica



D.LETAL: 2000mg/Kg
Manifestaciones Clnicas
Ataxia
Letargia
Somnolencia
Midriasis
Bradicardia
Taquicardia
Hipotensin
Hipotermia





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2. Parte experimental

2.1. Reactivos, materiales y equipos

2.2. Tcnica operatoria
2.2.1. Identificacin de Salicilatos (R
1
)
A. Reacciones Generales


Se basa en la formacin de un complejo coloreado de tetrafenol-
hierro, por la presencia de hierro (III) y el anillo fenlico de los
salicilatos. La formacin de una coloracin roja, azul o prpura
indica una reaccin positiva frente a la presencia de fenoles.


R
E
A
C
T
I
V
O
S

Tetracloruro
de fierro Cl
3
Fe
5%
cido
clorhdrico HCl
10%
Rvo de Trinder
Rvo F.P.N.
Rvo
Dragendorf
Nitrito de
sodio NO
2
Na
0.1%
Sulfamato de
amonio 1%
N-
naftiletilendia
mino
clorhidrato
0.1%

M
A
T
E
R
I
A
L
E
S

Capsula de
porcelana
Tubo de
ensayo de
vidrio
Bao maria
Placa
cromatogrfic
a de silicagel
Cmara
cromatogrfic
a
Capilar
Pipeta de
vidrio de 1, 5 y
10 ml
Propiteta de
plstico o
bombilla

E
Q
U
I
P
O
S






Cmara
extractora de
gases de
laboratorio
Espectrofot
metro
Fundamento
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Reactivo Positivo/Negativo Coloracin
Cl
3
Fe ++ Prpura
HCl ++ Amarillo

Reaccin Qumica
Mecanismo de accin
Resultado
FeCl
3
+ 3 C
7
H
6
O
3
= Fe (C
7
H
6
O
3
)
3
+ Cl
3

Mtodo operatorio
Gts R1 (Disuelto en
etanol)
Gts Cl
3
Fe 5%
Coloracin azul,
roja, prpura.
Si la reaccin es
positiva
Agregar HCl 10%
Desaparece el
color.
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B. Cuantificacin


El reactivo de Trinder [HgCl
2
-Fe(NO
3
)
3
] produce un color prpura,
aconsejable para la determinacin cuantitativa de salicilatos por
espectrofotometra U.V. siendo caracterstico a una absorcin
cuya longitud de onda es 540 nm



























Fundamento
Mtodo operatorio
Reaccin Qumica
MP ST
5ml Rvo
Trinder
1ml HCl
1ml MP o St
(5mg cido
saliclico)
Leer a 540nm por
espectrofotometra
FeCl
3
+ 3 C
7
H
6
O
3
= Fe (C
7
H
6
O
3
)
3
+ Cl
3

Prctica N9: Determinacin de Txicos Orgnicos Fijos-Identificacin de Residuos 1 y 4

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Absorbancia
MP 0.549
ST 0.508






















Mecanismo de accin
Resultado
5mg AAS 100ml
X = 0.05mg AAS 1ml

0.508 A
ST
0.05mg AAS
0.549 A
MP
X= 0.0540mg AAS
0.0540mg AAS 2ml ORINA
X 100
X=2.7mg%
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2.2.2. Identificacin de Fenotiaznicos (R
4
)
A. Reaccin de caracterizacin



Se basa en la formacin de un compuesto coloreado verde oscuro
o azul-verde que indica la presencia de compuestos fenlico como
el cido fenilpiruvico (metaboltos) o de cidos relacionados. El
color puede aclararse lentamente pasando al amarillo.
























Fundamento
Mtodo operatorio
Mecanismo de accin
Reaccin Qumica
Gts R
4
(diluido
en etanol)
Evaporar
II gts Cl
3
Fe al
5%
Agrega gt de
HCl al 10%
El color azul-verde no
debe desaparecer.
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B. Reaccin especfica



Forrest F.M y Forrest F.L, en 1960, propusieron un mtodo de
determinacin cualitativa basado en el uso de FeCl3, HClO3 y
HNO3 (el reactivo FPN, de fierro, perclrico y ntrico), el cual
produce un radical libre con coloracin variable (azul, azul
violceo).





















Reactivo Positivo/Negativo Coloracin
Cl
3
Fe ++ Azul
HCl 10% ++ No desaparece
Resultado
Fundamento
Mtodo operatorio
III Gts del Rvo FPN
5 mlCl
3
Fe 5%
45ml NO
3
H
C

50ml Ac. Perclrico
Gts R
4
(diluido en
etanol)
Evaporar

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2.2.3. Identificacin de Benzodiacepinas (R
4
)
A. Reaccin general ( Dragendorff)



Se basa en la identificacin de alcaloides, siendo especfico para
compuestos nitrogenados presentes en la benzodiacepinas que
por accin del Reactivo de Dragendorff (yoduro de potasio y
bismuto) han de formar un compuesto rojo ladrillo caracterstico.












Reactivo Positivo/Negativo Coloracin
FPN + Rojo violceo
Mecanismo de accin
Resultado
Fundamento
Mtodo operatorio
III Gts R
4

Evaporar
III Gts Rvo Dragendorff
Formacin de
precipitado rojo ladrillo
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B. Reaccin especfica


Se fundamenta en el empleo del reactivo de Bratton- Marshall
(Nitrito de sodio, sulfamato de amonio y N- (1- Naftil)
etilendiamina.) para la determinacin de benzodiacepinas por
diazotizacin.
Este reactivo fue propuesto originalmente por sus creadores para
la determinacin de sulfonamidas en orina, en donde previamente
la orina deba ser sometida a una hidrlisis cida con HCl para la
produccin de una benzofenona, con el medio cido
proporcionado previamente, el nitrito de sodio se convierte a
cido nitroso y se lleva a cabo la reaccin de diazotizacin


















Reactivo Positivo/Negativo Coloracin
Dragendorff +++ Rojo ladrillo
Resultado
Fundamento
Mtodo operatorio
Gts R
4

5ml HCl 6N
Bao en
glicerina
A temperatura
de 124C
Por 30min
Enfriar
1ml NO
2
Na
0.1%
1ml Sulfamato
de amonio 1%
1ml N-
naftiletilendiam
ino clorhidrato
0.1%
Azul,
rojo
violceo
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Mecanismo de accin
Reaccin Qumica
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2.2.4. Screenig en Cromatografa de capa fina


La cromatografa en capa fina es la separacin de dos o ms
molculas presentes en una mezcla en base al principio de
reparto entre dos fases. Sirve para hacer una determinacin en
serie de los metaboltos que queremos evaluar, aunque tienen la
ventaja de ser rpidos y de rutina, puede que en algunos casos no
sean tan especficos como los mtodos anteriormente descritos.



















Reactivo Positivo/Negat
ivo
Coloracin
N-
naftiletilendiamino
+++ Rojo violceo
Compuesto en
estudio
Sistema de
solvente
Proporcin
Salicilatos
Metanol 5ml
Agua 5ml
Fenotiazinicos
Benzodiacepnico
Metanol 5ml
Agua 5ml
Trietanolamina 0.03ml
Resultado
Fundamento
Mtodo operatorio
Soporte: Silicagel G
Sistema de solvente
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Compuesto en
estudio
Revelador
Salicilatos Reactivo de Trinder
Fenotiazinicos Reactivo de FPN
Benzodiacepnico Reactivo de Dragendorff



























Reveladores
Se realiza la siembra hasta 15 veces de las muestras problemas y los
estndares con ayuda de un capilar pequeo.
El punto de siembra debe estar por encima del nivel de la fase mvil.

Introducir las placas o soportes de silicagel G en la cmara
cromatogrfica para realizada la corrida.
Se procede a secar con cuidado las placas y se revela, tienen que
colocarse en distintos roceadores para evitar mezclas.

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Sustancia Rf Rx
Salicilatos 0.46 0.53
Fenotiazinicos 0.52 0.50
Benzodiacepinas 0.70 0.66
Resultado
Rf: Mide la retencin de un componente.
Rf= Distancia de la muestra desde el origen
Distancia del eluyente desde el origen
Rx: Mide la relacin entre el estndar
Rx= Distancia recorrida por el compuesto de referencia
Distancia recorrida por el eluyente
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3. Discusin de resultados

Para la identificacin de txicos orgnico fijos como los salicilatos, fenotiazinas
y benzodiacepinas se emplearon mtodos qumicos de reacciones cualitativas y
cuantitativas colorimtricas que fueron especficas para cada uno de estos
compuestos, los resultados fueron positivos; sin embargo las cantidades
encontradas en los residuos R
1
Y R
4
fueron mnimos segn los valores
obtenidos al confirmar con los calores limites. Para una mejor identificacin de
estos compuestos se realiz una determinacin por cromatografa en capa fina
empleando slica gel-G que permiti comparar nuestras muestras problema
frente a un compuesto estndar; para ello se emplearon diferentes reactivos
como el Rvo de Trinder, Rvo FPN y Rvo de Dragendorff los cuales fueron
potenciados al agregar nitrato de sodio en el proceso de revelado.

4. Conclusiones

Se determin la presencia de salicilatos, benzodiacepinas y fenotiazinas en los
residuos R1 y2 de una muestra biolgica de orina mediante reacciones
especficas colorimtricas.

Las concentraciones encontradas de salicilatos no sobrepasa el lmite tolerado,
por lo tanto no podran causar grandes consecuencias de efectos lesivos a corto
plazo.

La presencia de benzodiacepinas y fenotiazinas podra causar efectos lesivos si se
encuentran a altas concentraciones en el organismo.















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5. Bibliografa
1. Drogas en pelo: sus alcances y limitaciones I" Perkins de Piacentino, A. M.;
Locani, O. A.; Lorenzo, J. L. LABORATORIO DE TOXICOLOGA Y QUMICA
LEGAL. Cuerpo Mdico Forense, Corte Suprema de Justicia de la Nacin
Argentina.
2. Repetto, Manuel; Repetto, Guillermo. Toxicolgica fundamental. 4a ed.
Sevilla: Editorial Diaz de Santos; 2009. Pg. 526
3. Osvaldo Romo Pizarro. Medicina legal: elementos de ciencias forenses. 1
edicin. Santiago de Chile. 2000. Pg. 5
4. Lorenzo F.P. Moreno G.I Hernndez J.C. Farmacologa: Bsica y Clnica. 18
edicin. Buenos Aires: Editorial Mdica Panamericana. 2008. Pg. 532
5. Secretaria de salud del Gobierno del estado de Veracruz. Gua de
diagnostico y tratamiento intoxicacin por salicilato. 2012. Disponible en
[www.ssaver.gob.mx./cilver]
6. Mencas R.E. Mayero F.L. Manual de toxicologa bsica. 1 edicin. Madrid:
Editorial Daz de santos. 2000. Pg. 123- 124
7. Rozo U.R. Alvarado B.J. Gua de Prctica clnica Toxicologa. 1 edicin.
Volumen II, Tomo IV. Bogot: Editorial Mdica Latinoamericana. 2004. Pg
76-78.