INTRODUCCIN

El presente trabajo de investigacin habla sobre fijadores, detallo como

se define, sus caractersticas, modo de accin, pero principalmente cuales son
los tipos de fijadores.

Partiremos por el concepto de fijacin, para continuar con los tipos de
fijadores como mencione anteriormente.

Para poder comprender se necesita saber a que llamamos fijacin, pues
es un proceso mediante el cual los elementos constitutivos de las clulas, y por
tanto de los tejidos, son fijados en su estado fsico y parcialmente en su estado
qumico, lo cual permite resistir el tratamiento sucesivo con diversos reactivos
sin que ocurra prdida, distorsin o descomposicin significativas. Pues su
objetivo es detener el proceso autoltico de las clulas y conservarlas, en la
medida de lo posible, en el estado en que se encontraban durante la vida. Por
lo tanto, es un mtodo histolgico destinado a facilitar la obtencin de
preparaciones duraderas que conserven su estructura morfolgica y qumica y
que permita realizar posteriormente, los procedimientos de coloracin,
identificacin e interpretacin, que contribuyen al conocimiento profundo de
su morfologa, funcin y alteraciones en los diversos procesos patolgicos.

A continuacin se pasa al marco teorico sobre los fijadores.






CAPITULO I: FIJACIN

1.1 FIJACIN

La fijacin tiene por objeto matar las clulas y
conservarlas, hasta donde sea posible, en el
estado en que se encontraban durante la vida.
Por lo tanto es un mtodo histolgico destinado
a obtener preparados duraderos que conservan
la estructura morfolgica y qumica de las
clulas y tejidos al estado vivo y que permite
realizar, posteriormente, los procedimientos de
coloracin o de identificacin que facilitan el
completo conocimiento de su constitucin
ntima.

Una buena fijacin debe:
- Inmovilizar la clula
- Conservar exactamente todas las partes constitutivas.
- No hacer aparecer artificialmente otros detalles en la estructura.

Los mejores fijadores son los que adems de actuar rpidamente producen el menor
numero posible de reacciones (modificaciones) secundarias o artificios, capaces de
darnos una idea muy falseada de la morfologa interna de la clula.
Un tejido bien fijado mostrar clulas plenas, no vacuolizadas, ni hinchadas, ni
arrugadas, sino presentando muchos detalles de estructura fina.

1.1.1. En qu consiste esencialmente la fijacin?
Es verdad que la masa celular, formada de albuminoides, no puede ser
conservada exactamente, sino es por un proceso que la solidifique. Esta
solidificacin se obtiene por coagulacin o precipitacin.
La coagulacin es producida por agentes fsicos, la precipitacin, siempre
acompaada de modificaciones qumicas, es producida por agentes qumicos.
El verdadero papel de la fijacin es el de producir una coagulacin o una
precipitacin lo ms
completa posible de todos los albuminoides celulares, conservando la
configuracin correspondiente a su naturaleza amorfa (citoplasma), granulosa
(grnulos de secrecin), filamentosa (condrioma), etc.

1.1.2. Conservacin morfolgica de los Tejidos
Debe endurecerlos suficientemente para permitirles resistir sin deformarse, todas
las manipulaciones subsiguientes (deshidratacin, inclusin, cortes, etc.).
La fijacin debe producir al mismo tiempo la insolubilizacin de los elementos
constitutivos de la clula y de los tejidos. Es pues necesario que los detalles de
estructura, conservados por el fijador no sean destruidos enseguida por la accin
de los lquidos de lavado o de las soluciones colorantes.
Esta insolubilizacin puede ser producida por la deshidratacin, coagulacin y
principalmente por la combinacin qumica del reactivo fijador con los
albuminoides celulares.

1.1.3. Preparacin para la coloracin
Ciertas combinaciones formadas entre fijadores y
tejidos tienen la propiedad de combinarse con ciertas
materias colorantes, estas as pueden mordentar los
tejidos y permitir coloraciones especficas.


1.1.4. Funcin del equilibrio fsico:
Cuando hablamos de fijacin debemos tener en
cuenta las reglas del equilibrio fsico que se relacionan con las membranas
permeables. Desde el punto de vista fsico, la fijacin es la penetracin de un
producto extrao a travs de una membrana permeable, es ante todo un fenmeno
de smosis.
La rapidez de la difusin est en razn directa con la concentracin de la
sustancia que se difunde, conviene regular esta concentracin de manera que la
clula pueda conservar lo ms intacta posible su forma, volumen y contenido,
asegurando una penetracin rpida y completa.
La rapidez de la penetracin est en funcin directa a la concentracin y en
funcin inversa del peso molecular de las sales; esta es mayor para los cuerpos
minerales que para los cuerpos orgnicos.

Cuando una pieza es sumergida en un fijador, pueden suceder tres cosas:
La pieza cae al fondo, en este caso el fijador es hipotnico, y la fijacin tiene
bastantes probabilidades de ser incompleta e irregular.
La pieza permanece flotando en la superficie, el fijador es hipertnico, muy
denso y las clulas se contraern.
La pieza se sumerge, pero queda por encima del fondo del recipiente, hay
equilibrio fsico y la fijacin ser buena si los ingredientes del fijador fueron bien
elegidos.

1.1.5. Distintas fijaciones qumicas
Fijacin por inmersin: este mtodo consiste en tomar o extraer una
muestra del tejido u rgano que se vaya procesar y sumergirlo en una
solucin fijadora. Normalmente se introduce la pieza de tejido en un frasco
que contiene la cantidad adecuada de fijador.
Fijacin por perfusin: este mtodo consiste en realizar una perfusin de la
solucin fijadora utilizando el torrente vascular. Es el mtodo empleado
normalmente con animales de experimentacin.

1.1.6. Formas en la que se produce la fijacin
Los fijadores se pueden clasificar segn su mecanismo de accin en dos tipos:
Fijadores por mtodos fijos y
Fijadores por mtodos qumicos.
En el primer caso se emplea el enfriamiento por congelacin.
En el segundo, los fijadores son generalmente lquidos y actan desnaturalizando
las protenas tisulares.
Algunos fijadores aumentan la afinidad del protoplasma por ciertos colorantes
como el alumbre, fenol y sales del cromo. Los fijadores aumentan por lo general
la diferenciacin ptica de las estructuras celulares y tisulares, al mismo tiempo
hacen que las clulas resistan la solucin hipo e hipertnicas que son empleadas
despus de los fijadores; reducen tambin el riesgo de infeccin en las personas
que manejan los tejidos. Es preciso tener en cuenta que no hay un fijador ideal, y
la eleccin depende del tipo de clulas o tejido por estudiar.

1.1.7. Formas en la que se produce la fijacin
De acuerdo a los efectos que se desencadenan en el tejido, la fijacin se produce
por deshidrat acin, reticulizacin, formacin de sales o por cambio de estado
coloidal


a) Fijacin por Deshidratacin

Los reactivos fijadores que se describen a continuacin, presentan gran
compatibilidad qumica con las molculas de agua, va puentes hidrgeno. Los
lpidos se disuelven rpidamente, a excepcin de los fosfolpidos; mientras que los
carbohidratos permanecen conservados dependiendo de la precipitacin proteica.
Los cidos nucleicos se fijan correctamente.

Etanol
Metanol
Acetona


b) Fijacin por Reticulizacin
La accin de estos fijadores aditivos
produce la liberacin de molculas de
agua a partir las protenas que
constituyen los tejidos, originando
grupos qumicos de carga catinica y
aninica en los aminocidos laterales
para establecer, de manera anrquica, estructuras fibrilares que promueven la
formacin de compuestos reticulados en estado de gel.

Formaldehdo
Glioxal y Glutaraldehdo
Tetrxido de osmio

c) Fijacin por formacin de Sales
Las sustancias que fijan por formacin de sales son aditivas y de penetracin lenta.
El fenmeno de fijacin se produce por el establecimiento del anin o catin salino
en lugares especficos de las molculas del tejido, a travs de uniones inicas. Estas
uniones entre sitios proteicos o lipdicos y los iones metlicos producen liberacin
de molculas de agua a partir del tejido, el cual tiende a endurecerse y, por ello, se
deben utilizar mezclados con otras sustancias fijadoras.

Bicloruro de mercurio
Dicromato de potasio
Acido crmico
Acido pcrico
Sulfato de zinc.

d) Fijacin por Cambio de Estado Coloidal

Todos los reactivos citados anteriormente provocan prdida de agua a partir del
tejido. Por tanto, mientras se produce la fijacin de las estructuras tisulares, el agua
tiende a salir del tejido haciendo que los componentes moleculares pasen del estado
de sol al estado de gel. El cambio de estado coloidal hace referencia, ms bien, al
reestablecimiento del contenido de agua en el tejido, asegurando imgenes
microscpicas ms reales.

Acido actico


CAPITULO II: FIJADORES


1. FIJADOR

1.1.1 CONCEPTO

Es el proceso Fsico (Histoqumico)
que logra una situacin estable de los
constituyentes tisulares,
interrumpiendo las reacciones
enzimticas de autolisis.

Es el producto qumico ya diluido en
agua que se usa para eliminar las sales de plata, no reveladas, que son todava
sensibles a la luz.

1.1.2 CUALIDADES

Dentro de las cualidades de un buen fijador, tenemos:

1. Actuar con rapidez, fijando a las
clulas antes de que se inicien los
fenmenos pre-mortem y post-
mortem (autlisis, fragmentacin,
desintegracin, etc.).
2. Poseer alto poder de penetracin para
asegurar la fijacin correcta hasta las
porciones profundas del espcimen,
en funcin de sus dimensiones.
3. Conservar, en la medida de lo posible,
los detalles estructurales en un patrn
morfolgico similar al que
presentaban in vivo.
4. Permitir o favorecer la aplicacin de
los procedimientos requeridos para su observacin: procesamiento, inclusin
en parafina, corte, tincin y observacin, as como la realizacin de tcnicas
histolgicas, histoqumicas o inmuno-histoqumicas especficas.
5. Evitar la desaparicin de los elementos solubles durante la fijacin o
despus de ella.
6. Impedir la generacin de estructuras artificiales (artificios y artefactos).
7. No generar retraccin excesiva de los tejidos ni volverlos friables o
quebradizos.
8. Ser econmico, estable, con baja toxicidad y de fcil manejo..

1.1.3 MANERA DE ACTUAR DE LOS FIJADORES
De acuerdo a su composicin o naturaleza: estabilizan las protenas sin
combinarse con ellas (alcohol, cido pcrico, yodo, calor), formando enlaces
qumicos con las molculas orgnicas (cido crmico y sus sales), o
reducindose en contacto con las mismas, lo que origina un precipitado
sumamente fino (cido smico, bicloruro de mercurio, cloruro de oro).
La mayora de los fijadores producen cierto endurecimiento tisular, lo cual
facilita el corte, sin embargo, este efecto es complementado por el uso de
alcoholes en concentraciones progresivamente crecientes, que son empleados en
el proceso de la deshidratacin.
La mayor parte de los fijadores actan como oxidantes, favoreciendo as la
coloracin y tincin de los tejidos, adems de incrementar la diferenciacin
ptica de las estructuras celulares y tisulares. Asimismo, favorecen la resistencia
celular a las soluciones hipo e hipertnicas que son empleadas despus de la
fijacin, lo cual reduce el riesgo de infeccin en las personas que manejan los
especmenes.

1.1.4 MECANISMO DE ACCIN DE LOS FIJADORES
Por coagulacin de las protenas, sin combinarse con ellas: alcohol, formol,
cido Pcrico, etc.
Formando combinaciones qumicas con las sustancias orgnicas: cido
crmico, bicromato de potasio, de amoniaco, etc.
Por reduccin, al contacto con las sustancias orgnicas formando un
precipitado fino: cido smico, bicloruro de mercurio.
Por oxidacin: bicromato de potasio.

1.1.5 CLASIFICACIN DE FIJADORES

Son los ms utilizados; pueden ser fijadores simples, constituidos por una sola
sustancia qumica, y fijadores compuestos o mezclas fijadoras cuando varias
sustancias intervienen en su constitucin .






















1.1.5.1 FIJADORES QUMICOS:
Los mtodos qumicos de fijacin ofrecen los mejores resultados. Estos mtodos
utilizan lquidos que difunden hacia la profundidad de la muestra para alcanzar y
desnaturalizar las enzimas que provocan la autlisis tisular.
Los reactivos utilizados tienen capacidad de interactuar con los componentes del
tejido, tales como protenas, glicoprotenas, proteoglicanos, lpidos, glicolpidos,
lipoprotenas, pigmentos, cidos pcticos y nucleicos; como as tambin, la
capacidad de preservar la composicin y localizacin de carbohidratos: celulosa
y almidn en vegetales, quitina en insectos o glucgeno en tejidos animales y
depsitos metlicos (Fe+2, Cu+2, Al+3, Cd+2, Pb+2, As-3, Cr+2). La fijacin
qumica involucra el uso de soluciones orgnicas e inorgnicas que permiten la
adecuada preservacin de la morfologa tisular y propiedades tintoriales de las
macromoleculas del tejido.

1. CARACTERSTICAS FUNDAMENTALES DE UN LQUIDO
FIJADOR:

Los fijadores por mtodos qumicos son normalmente qumicos y deben
poseer unas caractersticas que son las siguientes:
Deben tener la capacidad de bloquear de inmediato la autolisis,
paralizando la actividad enzimtica del tejido.
Poseer un efecto microbicida, que impide la accin bacteriana
responsable de la putrefaccin.
Son capaz de no provocar sobre el tejido retracciones o distorsiones que
generen anomalas en su estructura.
Sea capaz de inducir cambios en la textura y composicin tisular que
favorezcan la inclusin, el corte y la coloracin del material histolgico
(favorecer la coloracin posterior es decir tienen carcter mordiente)
De todas estas caractersticas la ms importante es la capacidad de bloquear
la autolisis de inmediato y se va a relacionar con dos cualidades del agente
fijador:
Velocidad de penetracin: y se refiere a la rapidez con lo que un fijador
se difunde en el interior de un tejido de manera que el tamao de una
pieza que se pretende fijar ha de ser proporcional a la velocidad de
penetracin del agente fijador que se va a utilizar.
La velocidad de fijacin: se refiere al tiempo que cada fijador tarda en
estabilizar los componentes qumicos de los tejidos. La velocidad de
fijacin de un agente qumico no siempre es proporcional a su velocidad
de penetracin.

2. REGLAS GENERALES EN EL EMPLEO DEL LIQUIDO FIJADOR:
Para evitar la autolisis, las piezas deben tallarse lo antes posible y no
deben ser muy gruesas ya que en este caso el fijador tardara mucho en
penetrar en el centro de la pieza por lo que es preferible que al tallarlo se
hagan cortes con un grosor mximo de 5 mm. 0.5cm.
Si se va a fijar un rgano en bloque para preservar la arquitectura del
rgano se deben realizar incisiones, cortes, sobre su superficie y apertura
de sus cavidades internas con el fin de que el lquido fijador alcance lo
ms rpidamente posible el interior del tejido. Para conseguir una buena
fijacin de rganos huecos stos deben ser rellenados con lquido fijador
y atados en sus extremos.
El volumen del fijador respecto al de la pieza, es un punto muy
importante para la fijacin, lo ideal es 1-20 como mnimo.
En la fijacin con lquido que pierden eficacia al utilizarlos hay que ser
mucho ms cuidadoso. Este es le caso del Formol que debe ser renovado
cada cierto tiempo en una misma fijacin, ya que pierde eficacia tambin
hay que ser precavidos en el resto de los fijadores porque generalmente
todos los fijadores con voltiles, por lo que nunca ser empleado el
mismo fijador mas de una vez.
Para lograr una fijacin correcta el liquido tendr que estar en contacto
con todas las paredes del tejido, es por eso que no es conveniente meter
en un mismo frasco varias piezas porque podran pagarse unas a otras y
evitar la penetracin del fijador.
Los tejidos que flotan como por ejemplo grasa o tejido pulmonar no
deben quedarse en la superficie por lo que deben envolverse en papel de
filtro o gasa pesen vallan hacia el fondo y as estn rodeados del fijador.
Cada fijador tiene un tiempo de fijacin que va a depender de su
capacidad de penetracin y del tipo de tejido. Si este tiempo de fijacin
se prolonga se produce en endurecimientos en distintas estructuras del
tejido. Solo se permitir la permanencia de un tejido: en un fijador, si
adems al tener esta propiedad es un liquido conservante porque sino se
corre el peligro de que bacterias aerobias descompongan el tejido.
Durante la fijacin se producen accidentes que modifican el estado de la
pieza, los ms importantes son la Hinchazn y la retraccin de los tejidos
as como la alteracin en el color. Si por ejemplo: el acido actico
produce hinchazn debido a que deshace los enlaces formando
molculas de agua que son absorbidas por la pieza. Otros como el acido
crmico, alcohol y acetona, realizan el efecto contrario porque el fijador
absorbe el agua del tejido por eso es importante que la presin osmtica
del liquido fijador sea equivalente a la del tejido y que la de su pH se
aproxime al pH fisiolgico salvo que nos interese que su composicin
sea acida. Este ltimo caso nos interesa para descalcificar.

3. CLASIFICACIN

Son los ms empleados y pueden ser:

a) SIMPLES: CONSTITUIDO POR UNA SOLA SUSTANCIA:

Aldehdo glutrico o glutaraldehido
Son dialdehdos que actan sobre las protenas,
asegurando su mxima preservacin qumica y
espacial. Sus potenciales de oxidacin estn
prximos al formol. Son compuestos miscibles
en agua y el poder de penetracin es mayor, a
pesar que los pesos moleculares de estos son
mayores que el correspondiente al formol.
Generalmente, se preparan en soluciones
diluidas a pH fisiolgicos. Fija correctamente
protenas y estructuras celula res y de matriz asociadas a ellas, tales
como ADN y membranas. En el caso del glutaraldehdo se empl ea, ms
bien, en microscopa electrnica diluido en buffer de cacodilato de sodio.
El glioxal al 5% en buffer de fosfatos a pH 7,4 tiene aplicacin reciente
en microtcnica de rutina.

Glutaraldehdo.

Alcohol etlico absoluto al 96%, se us a generalmente
en microqumica
Tambin llamado alcohol etlico (C2H5OH) es un
fijador coagulante, no aditivo y de bajo potencial de
ionizacin (0.45 volt.), suele emplearse solo. Penetra
lentamente el tejido produciendo contraccin de la
muestra y endurecindola. Es miscible en agua en
todas sus proporciones y compatible con todos
aquellos fijadoresque no tienen actividad oxidante
fuerte. No produce efectos de sobrecoloracin.
Provoca la precipitacin de las protenas por
extraccin de la capa de agua que las solvata pero sin desnaturalizarlas.
La accin ms potente corresponde a las soluciones ms concentradas
(96 100). Para fijar fragmentos de 5 mm de espesor es suficiente con
6 horas de accin. Si el tamao de la muestra es mayor se corre el riesgo
de que las capas superficiales se endurezcan demasiado y ste no pueda
penetrar an ms como para alcanzar las capas ms profundas. Las
soluciones etanlicas menos concentradas tienen un efecto macerador de
la muestra (70), por tanto, no se utilizan como fijador. Precipita por
coagulacin la totalidad del citoplasma, las mitocondrias se distorsionan,
los glbulos lipdicos difunden o disuelven y provoca ligera contraccin
nucleolar.
























Alcohol metlico, se lo emplea con frecuencia para
fijar frotis desecados (sangre, mdula sea,
ganglio, bazo, lquidos de puncin, etc.).
Conocido como alcohol metlico (CH3OH) o
metanol, es un fijad or no aditivo que,
generalmente, se utiliza solo y cuyo potencial de
oxidacin es inferior al del etanol. Esto hace que
tenga mayor poder reductor y, por tanto, se lo
recomiende para la fijacin de cido s nucleicos y
en la impregnacin argntica de regiones
organizadoras del nucleolo. Es un excelente fijador
para citologa exfoliativa general. Al igual que el
etanol es miscible en agua y forma puentes
hidrgeno con las molculas de agua del tejido, las que extrae con
rapidez coagulando protenas. Es muy adecuado para la realizacin de
mtodos enzimo e inmunohistoqumicos e hibridacin in situ.

cido smico al 1 2%, es poco penetrante pero enrgico, conserva
muy bien estructuras celulares.

Acetona: es un agente no aditivo y muy oxidante
(0.65 volt.), debido a que el tomo de oxgeno
puede compartir coordinadamente un par de
electrones. Su frmula es CH3COCH3 y
deshidrata violentamente. Es miscible en agua e
incompatible con fijadores metlicos bivalentes.
Generalmente se la emplea sola. Es recomendada
para cidos nu cleicos y en protocolos de
inmunofluorescencia directa para la deteccin de
complejos autoinmunes (biopsia renal, heptica,
piel o mucosa). Tambin se la puede emplear en
determinados estudios con microscopio electrnico
de transmisin.
Al igual que los anteriores, disuelve los lpidos y
los carbohidratos quedan conservados debido a la
correcta precipitacin de las protenas. Sin embargo, la rpida extraccin
del agua desde el tejido provoca una contraccin nuclear, que deja un
halo perinuclear, especialmente, en los epitelios.




Otros fijadores qumicos destacamos:

- cido actico:
Incoloro, cristalizable por debajo de 17 C.
Aumenta el contraste entre ncleo y citoplasma.
Retrae los tejidos, Forma parte de la mayora de
las mezclas fijadoras como fijador de la
cromatina.

cido actico: CH
3
COOH

Rara vez se lo utiliza solo, ya que se obtienen resultados inadecuados. Por el
contrario, este reactivo tiene excelentes ventajas cuando es adicionado a
otros lquidos fijadores, situacin que se realiza frecuentemente. Su frmula
es CH3-COOH y la concentracin ptima es al 5%. Tiene un potencial de
oxidacin moderado (0,77 volt.); por lo tanto es un oxidante que se reduce a
acetaldehdo durante la fijacin. El pH es 2,32 y su constante de disociacin
(1,80 x 10-5), lo cual indica que tanto el cido disociado como el no
disociado se unen a nivel de los grupos aminos y carboxilos vecinos de los
aminocidos laterales de las protenas. El grupo hidroflico resultante atrae
molculas de agua provocando un balance hdrico positivo que contrarresta
la actividad deshidratante de los dems fijadores. Durante la solvatacin del
anin actico se originan iones hidronio (H3O+) que tiene un efecto
preservador de las estructuras hsticas por inhibicin de la actividad
enzimtica proteoltica local. Produce separacin de agregados celulares. El
citoplasma se fija homogneamente, el ncleo se retrae ligeramente,
mientras que el ADN se preserva correctamente. Los grnulos neutrfilos de
los polimorfonucleares tienden a disolverse. Ciertos lpidos son miscibles
(colesterol, esfingomielinas y ricinolenas). Sin embargo, si se lo utiliza a la
concentracin indicada, no los afecta demasiado. Los fosfolpidos forman
soluciones coloidales. Los hidratos de carbono no se fijan pero tampoco son
disueltos. Las mitocondrias se vuelven ligeramente granulares


- cido smico:
Se presenta bajo la forma de cristales
amarillentos. Se obtiene comercialmente en
pequeos tubitos de vidrio sellados, contienen
cantidades que varan de 0.1 a 1 g.
El manejo de este cuerpo presenta dificultades,
es muy voltil y emite sin cesar vapores extrema
damente irritantes.
Es un enrgico oxidante por lo cual es reducido
rpidamente por trazas de materia orgnica, por
lo que se debe tener especial precaucin para
preparar las soluciones. El ttulo habitual es de 1
a 2 %, puede prepararse en agua destilada o en cido crmico.
Desde el punto de vista morfolgico, fija sin precipitar, impidiendo adems
la precipitacin por el alcohol durante la deshidratacin. Mata rpidamente
las clulas y fija bien el citoplasma y el condrioma pero no muy bien el
ncleo. El osmio es un buen fijador de sustancias grasas y de la mielina. Es
poco difusible y por consiguiente poco penetrante de manera que las capas
superficiales de las piezas estn superfijadas mucho antes que el reactivo
haya llegado al interior.

- cido pcrico:
Pequeos cristales amarillentos que se emplean en
soluciones acuosas saturadas o en soluciones
alcohlicas. Solubles en fro en agua, mayor
solubilidad con temperatura.
Es un reactivo muy penetrante que no se lo emplea
solo, sino formando parte de mezclas, como en el
lquido de Bouin. El cido pcrico es un excelente
fijador, sobre todo desde el punto de vista tintorial.
Se fija con intensidad sobre los citoplasmas, facilita todas las coloraciones.
Contrae pero endurece poco.

cido pcrico: C
6
H
2
OH(NO
2
)
3




- Bicloruro de Mercurio:
Muy toxico, conformado por pequeos cristales
blancos muy venenosos, solubles en agua, en
fro (7%) en ebullicin (54%), muy soluble en
alcohol (32%). En solucin acuosa precipita
enrgicamente los albuminoides, principalmente
los del ncleo. Estas propiedades se exaltan por
la adicin de cido actico, que vuelve ms
penetrante el fijador. Una vez terminada la fijacin es necesario eliminarlo
de los tejidos para evitar la formacin de cristales.
Frmula qumica es Cl2Hg y se lo emplea, generalmente, en solucin acuosa
al 5%. Esta solucin tiene un pH aproximado a 3.0 y su potencial de
oxidacin es 0,75 volt. El Hg es un metal bivalente que se adiciona a sitios
insaturados de lpidos y a puentes disulfuros en protenas con gran
especificidad, provocando la preservacin de estos componentes tisulares.
Sin embargo, el precipitado excesivo de este metal se observa en la
preparacin histolgica final como partculas negras y amorfas que se deben
redisolver en el corte de tejido antes de la coloracin, utilizando una
solucin dbil de Lugol y luego otra de tiosulfato de sodio (S2O3Na2) para
eliminar el iodo (se puede reemplazar por hiposulfito de sodio: S2O4Na2).
En el siguiente esquema se representan 2 grupos laterales de Cistena unidos
a un tomo de Mercurio (Hg). Coagula fuertemente las protenas que
contienen principalmente metionina o cistena. Sin embargo, sobre el lado
cido del punto isoelctrico de la mayor parte de las protenas biol gicas se
une a los grupos aminos (-NH2) y, por el lado bsico, se liga a los grupos
carboxilos (-COOH). Precipita los cidos nucleicos. Los triglicridos se fijan
correctamente pero se colorean menos con colorantes Sudn; los cidos
grasos (palmtico y esterico) se hidrolizan con facilidad a compuestos
plasmales que se colorean inespecficamente con el reactivo de Schiff
(reaccin plasmal). Provocan buena fijacin de citoplasmas y los
componentes nucleares adoptan una malla poco uniforme. Las inclusiones
citoplasmticas no presentan distorsin, aunque sufren difusin hacia la
membrana plasmtica.



- Bicromatos:
Los bicromatos alcalinos, (Potasio, sodio, Magnesio, Estroncio, Zinc) fijan
bien los citoplasmas pero destruyen los ncleos. Los bicromatos de Bario,
Calcio, Cobre, fijan bien las mitosis pero no los citoplasmas. El ms
empleado de los bicromatos es el de Potasio, gruesos cristales de color rojo
anaranjado, fcilmente solubles en agua (12.4%).

- Formaldehdo:
Este cuerpo es un gas cuya solucin acuosa llev a el
nombre de formalina o de formol. Toda vez que
hablemos de formol puro tendremos en vista la solucin
comercial al 40%. El formol es el fijador ms utilizado, a
causa de su bajo precio y la facilidad de su empleo. Es un
fijador importante a causa de su poder coagulante y su
notable capacidad de penetracin.
El formol comercial es un lquido incoloro, que emite
vapores irritantes. A veces los vapores del formol pueden
producir accidentes febriles, bronquitis, queratitis.
Resulta muy desagradable manejar piezas embebidas en
formol a causa de las violentas punzadas que no se tarda
en sentir en los ojos, la accin sobre la mucosa olfatoria,
es tal vez menos sensible, pero ms durable y la olfacin
puede terminar por quedar notablemente disminuda.
Conviene no poner los dedos en contacto con las soluciones que contienen
formol porque la epidermis se fija rpidamente y endurece de manera poco
agradable, adems de poder ocasionar dermatitis alrgicas por contacto.
Para manejar piezas que han permanecido en formol sin sufrir los
inconvenientes mencionados, se las lava con agua y luego se las introduce en
agua ligeramente amoniacal, as se suprime todo olor.
El formol de comercio casi siempre contiene una cantidad ms o menos
considerable de cido frmico. Esta impureza daa muchas veces la fijacin,
produce precipitacin en los tejidos, destruye las clulas mucosas y daa
seriamente los citoplasmas por lo que es necesario emplear siempre formol
neutro.
Es conveniente adoptar una convencin para formular el ttulo de las
diluciones:
El porcentaje mirar siempre la soluci n comercial de 40%, para preparar
una solucin al 5% se mezcla 5 cc. de formol con 95 cc. de agua. La
solucin comercial presenta a veces una alteracin particular que se
manifiesta por un aspecto lechoso y por la formacin deprecipitado blando
ms o menos abundante, el fro interviene mucho en este fenmeno.

Formol Al 10 % En Solucion Salina
Formaldehdo al 40 % ........................................................... 100 ml.
Cloruro de sodio...................................................................... 9 gr.
Agua destilada.....................................................................900 ml.
El llamado formol puro comercial, es gas formaldehdo al 40 % en agua.
Algunas de las alteraciones que produce, pueden amortiguarse diluyndolo
en suero fisiolgico en vez de agua, y entonces lo llamamos formol salino.
Para esto tambin puede utilizarse buffer fosfato.

Ventajas: Es el fijador mas barato que existe por lo tanto es de eleccin para
los trabajos de rutina en Anatoma patolgica.
Es un buen fijador nico que determina una moderado conversacin de
la estructura tisular.
Por ser buen desinfectante y no endurecer excesivamente los tejidos, es
un medio ptimo para conversar y almacenar biopsias y piezas
quirrgicas.
Provoca escasa retraccin tisular
Posee una velocidad de penetracin intermedia entre la de los alcoholes
y la del sublimado
Tiene aproximadamente una velocidad de un milmetro por hora apenas
altera la coloracin tisular, por eso es el agente de eleccin para fijar
grandes piezas quirrgicas.
Es excelente fijador para el tejido adiposo y para lpidos en general y se
emplea como agente de eleccin para fijar el tejido nervioso y en general
antes de cualquier impregnacin argntica.

Formaldehdo: CH
2
=O.

Paraformaldehido
Paraformaldehdo................................................................... 4 gr.
PBS.................................................................................. 100 ml.
Para que se disuelva hay que ponerlo a bao mara a 60C en agitador
magntico con calor. En lugar de PBS puede usarse Buffer fosfato.

Soluciones fijadoras simples que contienen formol: hay 4 tipos:
Formol salino: Se utiliza para prevenir el efecto osmtico que provoca el
empleo de disoluciones de formaldehdo en agua destilada y se prepara
disolviendo 9 gramos de cloruro sdico en 1000 mililitros de formalina al
10%.
Formalina neutra: Se prepara aadiendo a la solucin de formalina al 10%
una pequea cantidad de carbonato clcico insoluble que queda depositado
en el fondo del recipiente neutraliza esta sal el exceso de acido frmico que
se produce y aunque puede utilizarse todava para la formacin de tejidos en
la prctica ha sido desplazada por las soluciones tamponadas.
Formol tamponado: Es la solucin mas empleada hoy en da para prevenir
el choque osmtico que provoca la disolucin de formalina en agua destilada
y el depsito de pigmento formlico que ocurre a un pH inferior a 6. Se
preparada la siguiente manera, como amortiguador se emplea el tampn
fosfato calibrado con pH de 7.0 a 7.2 de la siguiente frmula:
FORMALINA PURA..100.0 ml.
FOSFATO SDICO MONOBSICO.4.0 gr.
FOSFATO SDICO DIBSICO (ANHIDRO**)...6.5 gr.
AGUA DESTILADA....900.0 gr.

Se emplea fundamentalmente para fijar tejidos nerviosos en la preparacin
de algunas tcnicas de impregnacin argntica. Y se prepara aadiendo una
parte de cido actico glacial a 9 partes de formalina al 10% con ello se
consigue un pH en torno a 2.
* 4gr: no tiene agua, cogemos 3.5gramos si no pone nada en el bote
cogemos 4 gramos.
** Anhidro: hay que hidratarlo despus.

Tetrxido de osmio:
sustancia txica, cuya
frmula qumica es:
O4Os, se ioniza con
dificultad y la solucin al
2% tiene un potencial de
oxidacin de 0,64 volt. Es
un fijador aditivo que
preserva, preferentemente
protenas y lpidos. En el
primer caso, este xido se
une a los grupos aminos
cercanos de la s protenas
a modo de puente, produciendo un reticulado estable de difcil disolucin.
En el caso de los lpidos se une en las dobles ligaduras, ta l como lo hacen
los metales bivalentes. Colorea de negro el cido oleico y las olenas;
mientras que el cido palmtico, esterico, sus steres y los glicridos se
tien de color marrn intenso (en realidad, estas sustancias se encuentran
mezcladas en el tejido, por tanto, se dice que los lpidos se colorean de
oscuro).

No presenta reaccin alguna con hexosas, pentosas o sus polmeros, por
tanto, no se emplea para fijar carbohidratos. Preserva muy bien la estructura
celular, a pesar de la prdida de homogeneidad alrededor del ncleo, a
menos que se realice una fijacin previa con algn aldehdo, tal como se
emplea en microscopa electrnica. Penetra lentamente (K: 0,85 en 25
horas), o sea que a medida que el osmio penetra su constante K se hace
todava menor. La contraccin que se produce es poco significativa, ms
bien, ablanda el tejido a tal punto que durante la obtencin de los cortes, el
tejido se disgrega. El tetrxido de osmio tiene 9 estados de oxidacin y, por
los menos, 5 son reactivos con componentes celulares. El osmio es soluble
en medios polares y no polares, por tanto, puede fijar sitios polares y
apolares en lpidos y protenas, de acuerdo a lo mencionado con anterioridad.
El osmio al reaccionar con estos componentes es reducido, originando un
precipitado insoluble, difcil de extraer y electrodenso, que lo hace muy
adecuado para aumentar el contraste de la ultraestructura del tejido.

Tetrxido de osmio. OsO
4
.


Dicromato de potasio: se lo
utiliza en solucin acuosa al
1,5% y su frmula molecular
es Cr2O7K2. A esa
concentracin tiene un pH de
3,9 y su potencial de
oxidacin en moderado (0,79
volt.). Durante su disolucin
origina los aniones dicromato
y cromato hidrogenado, los
cuales permiten la correcta
preservacin de lpidos y
protenas respectivamente.
Penetra lentamente otorgando al tejido una rigidez que favorece el
seccionamiento con micrtomo. Las protenas se fijan por coagulacin, los
cidos nucleicos tienden a disolverse; mientras que las histonas nucleares son
fuertemente gelatinizadas. En el caso de los lpidos son atacados por sus dobles
ligaduras y los vuelve ms resistentes a los solventes orgnicos. Los cidos
grasos de cadena corta que presentan una doble ligadura prxima al grupo
carboxilo terminal polimerizan tras oxidacin, lo que permite su preservacin en
el tejido. En el caso de los cidos grasos muy insaturados, se producen dicetonas
que luego se croman motivando su estabilidad. Las triolenas se fijan si la
accin del fijador es prolongada. Las muestras fijadas con este reactivo
presentan un precipitado verdoso y, por ello, se deben lavar con agua comn a
fin de evitar coloraciones inadecuadas.



Acido crmico: se lo emplea en bajas
concentracion es (0,5%). Su frmula qumica
es CrO3 y su potencial de oxidacin es 1,08
volt. Se lo recomienda para preservar lpidos, ya
que acta de la misma forma que el dicromato
de potasio. Sin embargo, no es buen fijador para
el resto de las estructuras histolgicas debido a
su elevado poder oxidante. Tras la fijacin, las
muestras se deben lavar con agua comn para
eliminar el color amarillo verdoso que
presentan.

cido pcrico: es soluble en agua, alcohol y benceno.
Fija con contraccin de la muestra, si bien el
endurecimiento es escaso. La solucin acuosa saturada
tiene un pH de 1,6 y su potencial de oxidacin es de 0,82
volt. Coagula las protenas originando picratos salinos
del aminocido al que se une. Fija bien los cidos
nucleicos y forma una malla homognea e n el ncleo, lo
que permite gran estabilidad espacial de sus componen
tes. Los hemates se vuelven esfricos. Si se desea
realizar tinciones in toto o en bloque no se recomienda el
uso de soluciones acuosas (pironina), sino alcohlicas
(safranina). El tiempo de fijacin oscila segn el tamao
de la muestra entre 6 y 40 horas a temperatura ambiente. Por otra parte, el cido
pcrico tiene accin descalcificadora y, por ello, se debe evitar el uso de este
cido como fijador cuando se investiga la presencia de calcio en la muestra
(tcnica de von Kossa, Alizarina S, etc.). Tras utilizar este reactivo, las muestras
biolgicas se deben lavar en varios baos de alcohol etlico de 70.


Sulfato de zinc: durante mucho tiempo se pens que esta
sustancia actuaba como un reactivo indiferente, tal como
sucede con el cloruro de sodio, sulfato de sodio o potasio.
Sin embargo, en la actualidad se lo emplea para la
preservacin de lpidos de membranas celulares y
componentes de lmina basal y aqu es donde se observan
los beneficios que esta sustancia presenta. Asimismo, se lo
utiliza para fijacin de protenas tisulares en diferentes
protocolos inmunohistoqumicos. Se lo usa en bajas
concentraciones (0,5%) y su frmula es SO4Zn. El
potencial de oxidacin es bajo (0,45 volt.) y, por tanto, acta suavemente sobre
membranas, aunque con ligera contraccin de la muestra.

b) COMPUESTOS O MEZCLAS FIJADORAS: constituidas por varias
sustancias.

Las mezclas fijadoras se utilizan para
tcnicas de rutina o para tcnicas
especiales. Las mezclas fijadoras son
combinaciones de agentes fijadores,
cada uno de los cuales es por si solo
insuficiente para dar una fijacin que
responda a todas las exigencias.


Liquido de Flemming: (mezcla cromo-osmio-actica) para estudios
citolgicos.
La solucin de Flemming es un buen fijador
citolgico que contiene el cromo como agente
coagulante y el fijador aditivo tetrxido de osmio.
La fijacin con tetrxido de osmio se retrin ge a las
paredes celulares exteriores debito a su baja tasa de
penetracin en tejidos, mientras que el cido actico
entra concienzudamente en los tejidos. Por tanto,
este es el mejor uso de la solucin de Flemming
sobre muestras de tejido de tamao pequeo.
La solucin "fuerte" fue uno de los fijadores ms
tenidos en cuenta en estos das. La solucin ms
dbil est reservada generalmente para tejidos delicados. Prueba para
determinar qu frmula (o modificacin) es la mejor para tu material
particular.
Prepara el fijador en dos soluciones stock: la solucin A contendr los cidos
crmicos y actico y la B contendr slo cido smico (tetrxido de osmio).
Aade la solucin de osmio slo antes de su uso. Fija piezas de tamao muy
pequeo durante 24-48 horas, lavar concienzudamente, y preparar para
seccionar como es habitual. Los tejidos fijados con osmio necesitan ser
blanqueados con leja antes de su ticin.
Precaucin: el cido smico es un compuesto voltil extremadamente txico.
Puede fijar crneas y otros tejidos a travs de una fijacin con vapores.
Emplear preacuciones especiales y usar siempre en campana extractora de
gases.
Dbil Fuerte
Acido crmico
(1%)
Acido actico
(1%)
Acido actico
glacial
Agua destilada
25
10
-
55
75
-
5
-
Acido smico (2%
acuoso)
10 20

Liquido de Bouin: (mezcla picro-formol-
actica). El mejor fijador para los trabajos
corrientes. Muy penetr ante.
Para hacer esta mezcla es conveniente tener una
solucin saturada de cido pcrico.
Componentes: solucin saturada de cido
pcrico 15 cc, formol 40% 5 cc, cido actico 1
cc.
Es uno de los mejores fijadores para el estudio
del glucgeno; penetra rpidamente a los
tejidos, es un buen fijador general, salvo para el
rin. Es muy adecuado para las coloraciones de
Masson y Mallory. Produce poco encogimiento. Segn el tamao de la pieza
la fijacin requiere de 1 a 24 h. El lquido completo es una solucin estable.
Este fijador produce lisis de los glbulos rojos y disminuye la cantidad de
hierro frrico demostrable. Los tejidos no deben permanecer por ms de 12 a
24 h. pues sino se vuelven duros y quebradizos. Una vez terminada la
fijacin se debe pasar directamente a la deshidratacin con alcohol 80.
Solucin acuosa saturada de cido pcrico..................................... 75 ml.
Formol............................................................................... 25 ml.
Antes de usar, agregar 0.5 ml de cido actico por cada 10 ml de solucin.

Se prepara de la siguiente manera:
- SOLUCIN ACUOSA DE C. PCRICO
(C. PCRICO AL 1-2% EN AGUA DESTILADA)..750.0 ml.
FORMALINA CONCENTRADA250.0 ml.
C. ACTICO GLACIAL.50.0 ml.
PH. FINAL2.2
TIEMPO DE FIJACIN..2 a 24 horas
























Fijador de Bouin-Hollander: es
una variante del liquido de Bouin
especialmente indicado para la
fijacin de los cilindros de biopsia
de mdula sea cuando no es
posible controlar el tiempo de
fijaci n de la muestra en ste
lquido, la conservacin, puede
incluso conservar las 48 horas sin
que se produzca excesivo endurecimiento.
Se prepara de la siguiente manera:
ACETATO NEUTRO DE COBRE.2.5 gr.
C. PCRICO..4.0 gr.
FORMALINA CONCENTRADA....10.0 ml.
C. ACTICO GLACIAL..1.5 ml.
AGUA DESTILADA..100.0 ml.
Para preparar la solucin se disuelve primero la sal de cobre en el agua
destilada luego se aade el cido pcrico y tras filtrarlos el formol y el
cido actico glacial.
Esta solucin se conserva indefinidamente a temperatura ambiente el
tiempo de fijacin oscila entre 48-72 horas y sigue las mismas
precauciones que el lquido de Bouin

Bouin alcohlico (fijador de Dubosq-Brasil): Es una alternativa de lquido
de Bouin cuando la pieza que se debe fijar es relativamente voluminosa
porque posee una velocidad de penetracin mucho mas elevada. Se utiliza
tambin cuando se precisa una fijacin especfica de sustancias hidrosolubles
como el glucgeno ya que evita su disolucin.
Se prepara de la siguiente manera:
ALCOHOL ETILICO 80%...............................................75.0 ml.
C. PCRICO0.5 gr.
FORMALINA CONCENTRADA.....30.0 ml.
C. ACTICO GLACIAL...7.5 ml.
Mezclar antes de usar el tiempo medio de fijacin para fragmentos con un
espesor en torno a 5 milmetros es de 2 a 3 horas.

Liquido de Gendre: Es una variacin que est especialmente diseada para
la fijacin del glucgeno y pigmentos derivados de la hemoglobina. Se
prepara por:
SOLUCIN SATRUADA DE C. PCRICO
EN ALCOHOL ETLICO AL 70%.....................................80.0 ml.
FORMALINA CONCENTRADA...15.0 ml.
C. ACTICO GLACIAL.7.5 ml.
El tiempo de fijacin oscila entre 1 y 4 horas. Tras acabar el proceso debe
realizarse sucesivamente 2 lavados cortos en etanol al 80, 95 y 100

Liquido de von Tellyesniczki:
A base de bicromato de potasio cido actico y agua destilada (3 g, 5 cc,
100cc). el bicromato conserva bien el citoplasma. El cido actico conserva
bien los ncleos. Las muestras no deben ser mayores de 0.5 cm de dimetro.
El tiempo de fijacin no debe superar los dos das, al trmino del mismo
debe hacerse un lavado en agua corriente de 24 h.

De Carnoy:
Los componentes de esta mezcla son los siguientes: alcohol etlico,
cloroformo, cido actico glacial (60 ml, 30 ml, 10 ml ).
Este fijador es muy adecuado para pequeos fragmentos tisulares, por ej.
obtenidos por raspado, que se fijan bien en 30 min. a 2 h. Tambin inicia la
deshidratacin, es un bu en fijador para el glucgeno, los ncleos se tien
bien. Como inconvenientes podemos citar que produce lisis y encogimiento
importante. Disuelve los lpidos y la mielina. Fija bien el glucgeno.
Est compuesta por:
ETANOL ABOSLUTO..60.0 ml.
CLOROFORMO.30.0
ml.
C. ACTICO GLACIAL..10.0
ml.
El tiempo de fijacin puede ser acortado hasta 3 horas. Las muestras
deben cambiarse directamente a alcohol etlico absoluto. El mayor
endurecimiento se produce al prolongar demasiado la deshidratacin en
alcohol, para prevenirlo se puede sustituir el etanol por metanol en la
composicin de lquido fijador, que adems provoca menor retraccin
tisular, y para conservar la pieza se deposita en alcohol etlico absoluto.

Fijador de Mller: Es la disolucin acuosa de un fijador simple de
dicromato potsico con la adicin de sulfato sdico su importancia actual
radica en que se emplea para fabricar los fijadores de Orth y de Zenker. Lo
que llamamos solucin madre. Est compuesta de:
DICROMATO POTASICO2.5gr.
SULFATO SDICO..1.0 gr.
AGUA DESTILADA 100.0 ml.
Tiempo de fijacin 4 y 8 horas. Tras la fijacin es necesario lavar
abundantemente en agua corriente durante unas horas.

Fijador de Orth: Hoy da se emplea exclusivamente en ciertas tcnicas de
fijacin de tejido nervios. Se prepara de la siguiente manera:
Solucin stock de Orth: idntica a la composicin del fijador de Mller.
Solucin de trabajo: en el momento de su uso se mezclan:
SOLUCIN STOCK..90.0 ml.
FORMULINA CONCENTRADA.10.0 ml.
El tiempo de fijacin de tejido nervioso es de 48 horas y tras el proceso
de fijacin los tejidos han de ser lavados abundantemente en agua y
almacenados en alcohol etlico al 70%

Solucin de B-5 y Zenker-Formol (Liquido de Nelly): Ambas mezclas son
en esencia casi idnticas. La denominacin B5 corresponde en realidad a una
modificacin de la de Zenker.
La solucin de Zenker-formol contiene dicromato potsico y sulfato sdico.
La mayor utilidad de estos fijadores es que mejoran considerablemente la
tincin nuclear, de hecho la fijacin en una mezcla que contenga sublimado
es hoy da prcticamente imprescindible para el diagnstico morfolgico en
las patologas del sistema linfoide y hematopoytico. Es debido a la gran
importancia que se da a la observacin de finos detalles nucleares como es la
presencia o no de hendiduras o repliegues nucleares y del nucleolo para
catalogar un tumor maligno de ganglios linfticos, o de mdula sea
(leucemias) como de alto o bajo grado de malignidad y por tanto recomendar
la teraputica ms oportuna. Adems estas soluciones B5 zenker formol son
los fijadores de eleccin para el rin, hgado, fibras de tejido conectivo y
para fibrina.
Se prefiere la solucin de B5 porque al no contener dicromato, esto permite
una mejor conservacin de la cromatina nuclear y de la estructura antignica
tisular.
Solucin de 35:
*Solucin stock de B5: Esta mezcla es estable durante bastante tiempo
pero concentrado en frasco opaco y oscuridad.
CLORURO MERCRICO... 12.0 gr.
ACETATO SDICO....2.5 gr.
AGUA DESTILADA C.S.P.200 ml.

Mezclas con formaldehdo:
El formaldehdo es quiz el fijador ms usado hoy en da, tanto para tcnicas
histolgicas rutinarias como para otras como la inmunocitoqumica o la
hibridacin de cidos nucleicos. Lo ms frecuente es utilizarlo en solucin al
4 % junto con otros fijadores. Por ejemplo, el Bouin. Se suelen disolver en
soluciones tamponadas que tienen una osmolaridad similar a la del tejido que
se pretende fijar. Para fijaciones de tejidos destinados a microscopa
electrnica se suelen utilizar soluciones fijadoras que contienen
formaldehdo y glutaraldehdo. La funcin del formaldehdo es iniciar una
fijacin rpida, por su mayo capacidad de penetracin, mientras que el
glutaraldehdo realizar una fijacin ms poderosa, pero ms lenta que
afectar a la estructura tisular puesto que el formaldehdo ya ha realizado
una fijacin previa.

c) AGENTES CLARIFICANTES
Se les conoce as porque los tejidos se tornan transparentes cuando se
exponen a los mismos
Tiene que ser afines tanto con el agente deshidratante (alcohol) como
con el agente infiltrante (parafina)
Se les conoce como el agente dealcoholizante
Remueve el alcohol y prepara el tejido para la infiltracin con parafina
Si no hay una buena clarificacin no habr una buena infiltracin
Demasiada clarificacin tiene un efecto parecido al de la deshidratacin

Xylene
Mas utilizado
Se pone opaco (lechoso) cuando esta contaminado con agua
Reemplazar inmediatamente
Endurece el tejido

Tolueno
Endurece menos el tejido
Tolera ms la presencia de agua
Las procesadoras automticas condensan agua en la tapa que con los
cambios de presin causan que le caiga agua al tejido durante los
ltimos pasos del procesamiento

Benceno
Rpida evaporacin
Difcil de mantener
Txico, carcingeno

Cloroformo
Lenta penetracin al tejido
Rpida evaporacin
Difcil de mantener
Txico

Limonene (Sustituto de Xileno)
Endurecen el tejido
Contaminan la parafina
Alergias
Dificultad respiratoria
Dolor de cabeza

Hidrocarbonos Alifticos
Alkanes
Nueva clase de agentes clarificantes
Cadenas cortas
Unas MARCAR mejores que otras

1.1.5.2 FIJADORES FSICOS:

Criodesecacin o filiacin: Consiste en someter al tejido a dos procesos el
primero es la fijacin instantnea por congelacin en Nitrgeno liquido y el
segundo desecacin por sublimacin directa del agua confiada a vapor en
una bomba de vaco es un proceso complicado y costoso pero tiene una
ventaja muy importante y es que al eliminar totalmente el agua tisular,
paraliza la autolisis y produce una conservacin indefinida, adems evita que
se produzcan enlaces qumicos entre el tejido y el fijador, conservando asila
estructura antignica tisular.
Calor: Ejerce una accin muy diferente segn se aplique a objetos secos o
hmedos. La fijacin por agua hirviendo o por diversos fijadores en
ebullicin presta servicios para invertebrados y bsquedas histoqumicas

Fro: No puede ejercer ninguna accin fijadora a temperaturas que no pasen
de 0 C. Endurece los tejidos y suspende las alteraciones celulares debidas a
la necrosis y a la autodigestin. Este agente no sera ms que una ayuda.
La congelacin de los tejidos frescos parece ser a priori, un detestable
procedimiento histolgico. El aumento de volumen de los lquidos que los
llenan y la formacin de agujas de cristales no puede evitar la produccin de
verdaderos deterioros. Su nica ventaja es la de no precipitar los
albuminoides y de no alterarlos.

Congelacin y desecacin: (Mtodo de Altmann-Gersh). detienen por
medio de la congelacin de la clula todos los procesos que la pueden daar.
Sin embargo, si quitamos la pieza del fro continuan los procesos de
autlisis.
Se utiliza como mtodo para la fijacin el enfriamiento por congelacin del
tejido es el mtodo de eleccin para realizar estudios morfolgicos o
funcionales en los que se requiere conservar intacta la estructura antgena del
tejido o su contenido enzimtico. La clave para una correcta fijacin por
congelacin del tejido es que su realizacin sea instantnea porque un
enfriamiento lento provoca la formacin de microcristales titulares de hielo
que pueden agregarse con el paso del tiempo produciendo roturas titulares
que dificulten el diagnostico-
El procedimiento idneo para fijar tejidos por congelacin consiste en
utilizar ISOPENTANO a menos de 50C como agente de congelacin y
realizar una fragmentacin suficiente de la muestra que se vaya a congelar.
Normalmente se preparan bloques de no ms de 3 cm. cuadrados de
superficie y 3 mm de espesor de modo que el proceso de congelacin
instantnea no requiera ms de 10 segundos. El mantenimiento continuo de
isopentano debe realizarse en un congelador programado a -70C para que
quede compensado la subida inmediata de la temperatura que se produce al
extraer el liquido del congelador.
Al enfriar tanto no actan bacterias ni enzimas y el tejido se endurece para
cortar estos tejidos utilizamos el microtomo de congelacin o un aparato mas
evolucionado o criostato el cual tiene como ventajas que la temperatura se
mantiene mas baja y se pueden realizar cortes mas finos entre 2 y 15 micras.
1.1.6 FIJADORES COAGULANTES Y NO COAGULANTES
La fijacin qumica involucra el uso de soluciones orgnicas e inorgnicas que
permiten la adecuada preservacin de la morfologa tisular y propiedades
tintoriales de las macromoleculas del tejido. Estas soluciones se dividen en dos
grandes grupos:



1. Fijadores Coagulantes: son soluciones que pueden coagular protenas,
transformndolas en estructuras insolubles. Debido a que la arquitectura del
tejido se mantiene fundamentalmente por lipoprotenas (uno de los principales
componentes de membranas plasmticas), por protenas fibrosas (colgeno) y
globulares (nucleoprotenas), la coagulacin de estas protenas mantiene la
morfologa del tejido a nivel de microscopa de luz, si bien la fijacin por
coagulacin produce floculacin citoplasmtica, como as tambin, preservacin
pobre de mitocondrias y grnulos de secrecin.

2. Fijadores No Coagulantes: estas soluciones interaccionan con diferentes
sitios qumicos de las macromolculas tisulares para establecer, a modo de
puente, uniones que originan una malla que las entrelaza. A diferencia de los
fijadores coagulantes, la eliminacin de las molculas de agua a partir del tejido
es mucho menor, haciendo que la mayora de los componentes tisulares se
conserve adecuadamente.













1.1.7 OTROS FIJADORES QUMICOS


G138



Fijador universal estndar
El fijador de dos componentes de Agfa, G334, destaca por su menor emisin de olores.
Esto se ha logrado reduciendo tanto la emisin de cido actico como de dixido de
azufre. No ha disminuido la potencia y precisin del fijador y Ud. no necesitar
incrementar, por lo tanto, la tasa de regeneracin de la procesadora.
Flexible y universal G334 es adecuado para su utilizacin en procesadoras automticas y
le permitir procesar una amplia variedad de pelculas radiogrficas, como las pelculas
CURIX, SCOPIX y MAMORAY.
El fijador G334 ha sido diseado para ser utilizado conjuntamente con revelador G138i o
G139.
Reducida emisin de sustancias qumicas. La mayora de las sustancias qumicas
utilizadas en reveladores comunes y fijadores no-endurecedores se disuelven fcilmente
en agua y no se evaporan excesivamente en el aire.
El fijador G334, sin embargo, contiene un regulador de pH con cido actico y sulfito de
sodio para evitar que se descomponga la sal fijadora presente en el fijador.
Al utilizar G334, se ha reducido en gran medida la emisin tanto de cido actico como de
dixido de azufre.
Compatible con la tecnologa E.O.S. G334 tambin es adecuado para la recuperacin de
plata "en lnea". En combinacin con el Sistema de Optimizacin Ecolgica (E.O.S.) es
posible utilizar una tasa de regeneracin mnima.










G334 + ADITAN



Fijador universal estndar
El fijador de dos componentes de Agfa, G334, destaca por su menor emisin de olores.
Esto se ha logrado reduciendo tanto la emisin de cido actico como de dixido de
azufre. No ha disminuido la potencia y precisin del fijador y Ud. no necesitar
incrementar, por lo tanto, la tasa de regeneracin de la procesadora.
Flexible y universal G334 es adecuado para su utilizacin en procesadoras automticas y
le permitir procesar una amplia variedad de pelculas radiogrficas, como las pelculas
CURIX, SCOPIX y MAMORAY.
El fijador G334(i) ha sido diseado para ser utilizado conjuntamente con revelador G138i
o G139.
Reducida emisin de sustancias qumicas. La mayora de las sustancias qumicas
utilizadas en reveladores comunes y fijadores no-endurecedores se disuelven fcilmente
en agua y no se evaporan excesivamente en el aire.
El fijador G334, sin embargo, contiene un regulador de pH con cido actico y sulfito de
sodio para evitar que se descomponga la sal fijadora presente en el fijador.
Al utilizar G334, se ha reducido en gran medida la emisin tanto de cido actico como de
dixido de azufre.
Compatible con la tecnologa E.O.S. G334 tambin es adecuado para la recuperacin de
plata "en lnea". En combinacin con el Sistema de Optimizacin Ecolgica (E.O.S.) es
posible utilizar una tasa de regeneracin mnima.


G150



Revelador de una sola parte, sin endurecedor
G150 es un revelador de una sola parte sin endurecedor especficamente diseado para
ofrecer una solucin flexible y ecolgica para el revelado manual. En combinacin con el
fijador
G354, el revelador G150 ofrece unos excelentes resultados de revelado de pelcula
radiogrfica convencional, pelculas lser y pelculas de copia.
Flexible para un control perfecto
G150 se adapta perfectamente a una gran variedad de ciclos de revelado y temperaturas,
desde temperatura ambiente hasta 35 C.
El tiempo de revelado recomendad es de 5 minutos a 18 C y de 2 minutos a 25 C.
Tambin es posible el revelado a otras temperaturas ajustando los tiempos segn
corresponda.



G153



G153 para procesado automtico:
G153 es un revelador envasado en 12 unidades para preparar hasta 30 litros de solucin
final.



G354



G354 es el fijador sin endurecedor y de una sola parte estndar de Agfa para el revelado
manual y el revelado automtico en procesadoras de sobremesa. Fijador de bajo nivel de
olor, manteniendo su alta calidad.
Uso universal
El fijador G354 ofrece unos resultados de alta calidad en el procesado de una amplia
variedad de pelculas de rayos X, incluyendo pelculas radiogrficas convencionales,
pelculas lser y pelculas de copia.
El fijador G354 se puede utilizar en una amplia variedad de ciclos de revelado y
temperaturas. Los mejores resultados se obtienen cuando se combina con el revelador
G150 para el revelado manual o con el revelador G153 para el revelado automtico de
sobremesa.






CONCLUSIONES



Existen multitud de fijadores en los manuales de tcnicas histolgicas. Aqu
slo trataremos aquellos que consideramos de uso ms comn para la
observacin de tejidos al microscopio, es decir, aquellos que mejor preserven
la estructura celular.
Los fijadores qumicos son los ms frecuentemente empleados, bien con un
solo tipo de sustancia fijadora o con mezclas de varias de ellas.
Un fijador conserva la forma, estructura, relacin y constituyentes qumicos de
los tejidos y clulas, postmortem.
No existe un mtodo universal de fijacin. Un fijador es adecuado para un
tejido y puede no serlo para otro..
No todos los fijadores conservan indefinidamente el tejido, ya que la fijacin no
es equivalente a conservacin. Tenemos por ejemplo la formalina, y nos queda
claro que ste fijador es el mas utilizado y al mismo tiempo es buen
conservador.
Un defecto de fijacin jams puede ser corregido.
Es intil realizar un estudio histopatolgico sobre material con defectos de
fijacin graves.







ALGUNAS RECOMENDACIONES


Es importante recalcar que la mayora de las sustancias fijadoras son
txicas por inhalacin o por contacto, algunas de ellas cancergenas. Hay
que seguir las indicaciones de seguridad para su manejo y utilizacin.

Controle cuidadosamente los tiempos establecidos para cada tcnica. Es
muy importante respetarlos para obtener resultados satisfactorios.

Antes de iniciar cualquier tcnica, primero lala atentamente. Prepare el
material de vidrio necesario, rena los reactivos y colorantes, haga las
diluciones, determine los tiempos, y despus comience el proceso.

Tenga mucha paciencia y voluntad. Sea perseverante, si durante las
primeras experiencias sus resultados no son lo que Ud. esperaba, verifique
cada paso y repita tantas veces como sea necesario.








BIBLIOGRAFA


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