Practica N5 Identificacin de Saponinas

Propsito
Identificar cualitativamente la presencia de saponinas en un extracto vegetal.

Marco Terico
Las saponinas son metabolitos secundarios, ampliamente distribuidos en las plantas superiores, en las que se presentan
en forma de glucsidos. Es una combinacin de azucares y agliconas o sapogeninas.
La solubilidad en agua de estos compuestos esta facilitada por su alto peso molecular y la presencia de los residuos de
monosacridos y de otros grupos polares en la aglicona. Por hidrolisis acida o enzimtica dan origen a una sustancia libre
del o los azucares formando as la sapogenina.
Existen dos clases de saponinas: las de tipo esteroidal,
generalmente triterpenos tetracclicos (base gonano) y las de
tipo terpenoides pentacclicos (saponinas triterpenoides,
derivados del escualeno).
En ambas familias de saponinas el enlace glucosdico se
establece a travs del hidroxilo en posicin 3 del anillo A de la
aglicona. Las esteroidales se localizan en monocotiledneas:
principalmente de la familia de las liliceas, amarilidceas y dioscoreceas; las triterpnicas: en las anteriores y en
algunas dicotiledneas.
Las saponinas son compuestos importantes en la defensa de la planta, algunas son reguladoras del crecimiento, tambin
presentan propiedades alelopticas, as como actividades molusquicidas y fungicidas.
Algunas saponinas triterpnicas presentan actividad biolgica, cardiaca y hemoltica, se usan como veneno para peces,
reducen el colesterol, otras tienen actividades espermaticidas, antiinflamatorias, etc. Las saponinas esteroidales tienen
propiedades biolgicas similares a las triterpnicas, pero son menos abundantes en la naturaleza.
Las dos familias de saponinas presentan un grupo de caractersticas generales que sirven de base para su identificacin
rpida:
Prueba de la espuma.
Hemolisis de los glbulos rojos.
Toxicidad en animales poiquilotrmicos (parlisis de agallas).
Prueba de Lieberman-Buchard (identificacin de saponinas esteroidales dan colores de azul hasta verde,
mientras que las terpnicas presentan coloracin rosada, rojo o violeta).
Solubilidad (la mayora son solubles en etanol al 80%).
Ensayo para carbohidratos (por presencia de carbohidratos ligados).

Agave Agave Americana
P.A. Gran cantidad de inulina (glcidos complejos), glucsidos esteroideos, entre los que se destaca la hecogenina,
as como saponinas.
Zarzaparrilla Smilax Aspera
P.A. Aproximadamente 2% de saponinas esteroides (sarsaponin, smilasaponin, parillin), zarzasapogenina, smilagenin,
diosgenina, tigogenina, asperagenin, fitoesteroles como sitosterol, estigmasterol y pollinastanol, 50% de
almidn, resina, alcohol cetlico, aceite voltil, cido cafeicoshikmico, el cido shikmico, el cido ferlico,
kaempferol y quercetina.
Alfalfa Medicago Sativa
P.A. Saponsidos, taninos, sales minerales (10%), vitaminas (400mg/100g), carotenos (67mg), trazas de alcaloides en
semillas (esaquidrina y homoestaquidrina).

Hiedra Hedera Helix
P.A. Hojas: flavonoides: rutsido, rutinsido. cidos orgnicos: cafico, clorognico. Trazas de alcaloides (emetina).
Poliacetilenos: falcarinona, falcarinol. Fitoesteroles: sitosterol, estigmasterol, campestrol, colesterol,
espinasterol. Sesquiterpenos: germacraneno, -elemeno. Toda la planta: saponsidos triterpnicos (5%):
glucsidos de la hederagenina (hederacsido C, -hederina); glucsidos del cido oleanlico (hederacsido B y
-hederina).

Pia Ananas Comosus Merril
P.A. Enzimas proteolticas (bromelina o bromelana). cidos ctrico y mlico. Vitaminas A, B y C. Azcares: glucosa,
sacarosa. Materias grasas. Sales minerales: yodo, magnesio, manganeso, potasio, calcio, fosforo, hierro, azufre.
Abundante fibra (celulosa), en el corazn.

Diagrama de Flujo

Licuar el material vegetal con la
menos cantidad de agua posible y
dejar reposar por 12hrs en
refrigeracion.
Flitrar los
macerados.
Indice de Espuma.
Colocar 2mL de
cada filtrado en
tubos de ensaye.
Tapar el tubo y
agitar
vigorosamente
durante 30s.
Observar si aparece
o no espuma.
Si la espuma es
mayor a 5mm
despues de 15min
de su aparicion, la
prueba es positiva.
Prueba de
Rosenthaler.
Colocar 2mL de
cada filtrado en
tubos de ensaye.
Agregar 2 gotas de
vainillina y agitar.
Adicionar a cada
tubo 1 o 2 gotas de
H
2
SO
4.

Prueba de
Liebermann-
Buchard.
Mezclar 1mL de
anhidrido acetico y
1mL de cloroformo.
Enfriar a 0C y
adicionar una gota
de H
2
SO
4
.
Agregar 1mL de este
reactivo a 2mL de
cada uno de los
filtrados.
Observacion de
hemolisis al
microscopio.
Neutralizar el pH de
cada extracto.
Colocar una gota de
sangre en el
portaobjetos.
Adicionarle una
gota del filtrado y
mezclar
cuidadosamente.
Observar al
microscopio.
Reportar si hay
hemolisis o no,
puede ser total o
parcial.
Repetir esta
operacion para cada
filtrado.
Prueba de hemolisis
en agar-sangre.
Cortar discos de
papel filtro de 1cm
de diametro aprox.
Calentar a ebullicion
los extractos
neutros.
Impregnar cada uno
de los discos con los
diferentes extractos.
Colocar los discos
sobre el agar sangre,
tapar y dejar
refrigerando para
observar al dia
siguiente.
Disposicin de Residuos.
Esterilizar el agar sangre para poderlo desechar.
Los residuos de la prueba de Rosenthaler se neutralizan y se recolectan en recipiente D.
Los residuos de la prueba de Liebermann-Burchard se neutralizan y se recolectan en recipiente B.
Los portaobjetos se la prueba de hemlisis se introducen en solucin de Hipoclorito de sodio para su
inactivacin.

Resultados

ndice de
Espuma
Rosenthaler
Lieberman-
Buchard
Hemolisis al
Microscopio
Hemolisis en Agar
Sangre
Alfalfa + + + + -
Hiedra + + + Parcial +
Pia + - - - -
Zarzaparrilla - + + Parcial -

Referencias
Obtencin De Crudos De Saponinas Hipocolesteromizantes Del Chenopodium Quinoa Willd.
http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0138-65571997000100008
Consultado 05/10/2014.
Caracterizacin Y Cuantificacin De Flavonoides, Sapogeninas Esteroidales En Extractos De Tres Plantas
Mesoamericanas Lippia Graveolens (Organo), Passiflora Edulis (Maracuy) Y Smilax Domingensis (Zarzaparrilla).
http://biblioteca.usac.edu.gt/tesis/06/06_2682.pdf
Consultado 05/10/2014.
Saponinas Esteroides.
http://farmacia.udea.edu.co/~ff/saponinasp.pdf
Consultado 05/10/2014.
S.A. Qumica De La Flora Mexicana: Investigaciones En El Instituto De Qumica De La UNAM Sociedad Qumica
De Mxico, 1
ed
, 2006: pg. 143.