NTE INEN 1633 (1989) (Spanish): Miel de

abejas. Determinacin de azucares.

Reductores totales sacarosa y la relacin
fructosa-glucosa



CDU: 638.16:543.01 AL 02.04.307
1988-045 -1-



Norma Tcnica
Ecuatoriana
Obligatoria

MIEL DE ABEJAS. DETERMINACIN DE AZUCARES
REDUCTORES TOTALES SACAROSA Y LA RELACIN
FRUCTOSA-GLUCOSA.

INEN 1 633

1989-02



1. OBJETO


1.1 Esta norma establece los mtodos de ensayo para determinar os azcares reductores totales,
sacarosa y la relacin fructosa-glucosa en miel de abejas.



2. METODO PARA DETERMINAR AZUCARES REDUCTORES TOTALES


2.1 Resumen


2.1.1 Se basa en el mtodo de Lane-Eynon, que consiste en reducir el complejo de cobre de un
volumen dado del reactivo de Fehling en ebullicin, mediante la adicin de la muestra diluida de miel
de abejas, empleando azul de metileno como indicador.


2.2 Instrumental

2.2.1 Equipo usual de laboratorio y en particular:

2.2.1.1 Balanza analtica, sensible al 0,1 mg.

2.2.1.2 Matraces aforados, de 100 y 500 cm
3
.

2.2.1.3 Probetas graduadas, de 5 y 25 cm
3
.

2.2.1.4 Erlenmeyer, de 250 cm
3
.

2.2.1.5 Pipetas, de 5 y 10 cm
3
.

2.2.1.6 Bureta, de 50 cm3


2.3 Reactivos

2.3.1 Solucin de azul de metileno, al 0,2%

Disolver 2g de azul de metileno en agua destilada y diluir hasta obtener 1 l.

2.3.2 Solucin patrn de azcar invertido (acuosa 10 g/litro).

2.3.2.1 Pesar exactamente 9,5 g de sacarosa pura, aadir 5 cm
3
de cido clorhdrico (HCI puro al 36,5%
aproximadamente) y disolver en agua hasta obtener unos 100 cm
3
.

2.3.2.2 Conservar esta solucin acidificada durante varios das a temperatura ambiente (7 das
aproximadamente, entre 12 - 16 C 3 das entre 20 y 25 C).








(Contina)
I
n
s
t
i
t
u
t
o

E
c
u
a
t
o
r
i
a
n
o

d
e

N
o
r
m
a
l
i
z
a
c
i

n
,

I
N
E
N

C
a
s
i
l
l
a

1
7
-
0
1
-
3
9
9
9

B
a
q
u
e
r
i
z
o

M
o
r
e
n
o

E
8
-
2
9

y

A
l
m
a
g
r
o

Q
u
i
t
o
-
E
c
u
a
d
o
r

P
r
o
h
i
b
i
d
a

l
a

r
e
p
r
o
d
u
c
c
i

n





NTE INEN 1 633 1989-02
1988-045 -2-





2.3.2.3 Diluir despus hasta obtener un litro. Neutralizar un volumen apropiado de esta solucin con
hidrxido de sodio 1 N (40g/I), inmediatamente antes de utilizarla diluir hasta obtener la concentracin
necesaria (2g/I ) para la normalizacin.

2.3.3 Crema de almina.

2.3.3.1 Preparar una solucin fra saturada de alumbre (K
2
S0
4
AI
2
(S0
4
)
3
. 24 H
2
0) en agua.

2.3.3.2 Aadir hidrxido amnico (NH
4
0H), agitando constantemente hasta obtener una
solucin alcalina que reaccione con tornasol, dejar que el precipitado sedimente y lavar por
decantacin con agua, hasta que el agua procedente de los lavados, tratada con solucin de cloruro
de Bario (BaCI
2
), muestre ligeros indicios de sulfato.

2.3.3.3 Verter el agua sobrante y conservar la crema restante en una botella cerrada.

2.3.4 Solucin de Fehling. Se obtiene mezclando en volmenes iguales las soluciones A y B.

2.3.4.1 Solucin A. Solucin de sulfato de cobre. Disolver en agua destilada 69,28 g de sulfato
cprico pentahidratado (Cu S0
4
. 5H
2
0, pm= 249,71) hasta obtener un litro.

2.3.4.2 Solucin B. Solucin alcalina de tartrato. Diluir en agua destilada 346 g de tartrato sdico-
potsico (C
4
H
4
KNa0
6
. 4H
2
0) y 100 g de hidrxido de sodio (Na 0H) hasta obtener un litro.
Filtrar con un filtro preparado de asbesto.

2.4 Preparacin de la muestra.

2.4.1 Si la miel est lquida, homogeneizar por agitacin, si est parcialmente o totalmente
cristalizada, colocar el envase cerrado a bao de Mara 60.65 C hasta fundicin total, cuidando no
sumergirlo; luego mezclar muy bien y enfriar rpidamente.

Si hay impurezas o substancias extraas, calentar la muestra en bao de Mara hasta 40 C y
filtrarla a travs de un lienzo.


2.4.2 Para la miel de panal:

Cortar la superficie del panal si est operculado y separar completamente la miel del panal,
filtrndola por un tamiz cuya malla tenga un reticulado cuadrado de 0,500 mm por 0,500 mm (malla
No. 40, tamao del retculo, 420 mm).

Si algunas porciones del panal o de la cera pasan a travs del tamiz, calentar la muestra como se indica
en el punto 2.4.1. Si la miel en el panal es granulada, calentar hasta que la cera se licue,
remover, enfriar y separar la cera.

2.5 Procedimiento


2.5.1 Primer procedimiento



(Continua)



NTE INEN 1 633 1989-02
1988-045 -3-





Pesar 25g (P1) de muestra bien homogenizada y transferir con agua destilada a un matraz de 100
cm
3
; aadir 5 cm
3
de crema de almina y diluir hasta la marca con agua a 20

C y filtrar.


2.5.2 Segundo procedimiento


Pesar 2 g (P
2
) de la muestra homogenizada, disolver en agua destilada y diluir en un matraz
graduado hasta obtener 200 cm
3
de solucin (solucin de miel). De esta solucin tomar 50 cm
3
y
disolver en agua destilada hasta obtener 100 cm
3
(solucin de miel diluida).


2.5.3 A continuacin normalizar la solucin de Fehling modificado de la siguiente manera.


2.5.3.1 Mezclar 5 cm
3
de solucin A y 5 cm
3
de la solucin B de manera que estas soluciones
reaccionen completamente con 0,050g de azcar invertido, aadido desde una bureta de 25
cm
3
la solucin diluida de azcar invertido (2g/I).


2.5.4 Titulacin preliminar.


2.5.4.1 Al final de la titulacin de reduccin, el volumen total de reactivos aadidos ser de 35
cm
3
. Esto se consigue aadiendo el volumen adecuado de agua antes de comenzar la titulacin.
Puesto que los requisitos para miel especifican que sta debe contener ms de un 60% de azcares
reductores, es necesaria una titulacin preliminar para determinar el volumen de agua que ser preciso
aadir a una muestra dada, para asegurar que la reduccin se realice a volumen constante. Para
calcular el volumen de agua, que es preciso aadir, se resta de 25 cm
3
el volumen de solucin
diluida de miel, consumida en la titulacin preliminar.


2.5.4.2 Verter con una pipeta 5 cm
3
de solucin A en un matraz de 250 cm
3
, y aadir 5 cm
3

de solucin B. Aadir 7 cm
3
de agua destilada, un poco de pmez en polvo, u otro regulador de
ebullicin, y agregar con la bureta 15 cm
3
de solucin diluida de miel.


2.5.4.3 Calentar la mezcla y, mantenerla durante 2 minutos en ebullicin.


2.5.4.4 Aadir un cm
3
de solucin acuosa de azul de metileno al 0,2%, sin interrumpir la
ebullicin, y completar la titulacin, sin que el tiempo total de ebullicin pase de 3 minutos, con
pequeas adiciones repetidas de solucin diluida de miel, hasta que el indicador pierda el color. Lo
que hay que observar es el color del lquido que permanece en la parte superior.


2.5.4.5 Tomar nota del volumen total de la solucin diluida de miel utilizada.


2.5.5 Calcular la cantidad de agua que es necesario aadir para que, al final de la titulacin, el
volumen total de los reactivos sea de 35 cm
3
; para ello, restar de 25 cm
3
la titulacin preliminar.


2.5.5.1 Verter con una pipeta 5 cm
3
de la solucin A en un matraz de 250 cm
3
, y aadir 5 cm
3
de
solucin B.


2.5.5.2 Aadir (25-x) cm
3
de agua destilada, un poco de pmez en polvo u otro regulador de
ebullicin y, de una bureta, todo el volumen, menos 1,5 cm
3
de solucin diluida de miel
determinada en la titulacin preliminar.

(Continua)



NTE INEN 1 633 1989-02
1988-045 -4-





2.5.5.3 Calentar la mezcla fra sobre una tela metlica, hasta ebullicin moderada durante 2
minutos. Aadir 1,0 cm
3
de solucin de azul de metileno al 0,2 por ciento sin interrumpir la
ebullicin y completar la titulacin, sin que el tiempo total de ebullicin pase de 3 minutos, con
pequeas adiciones repetidas de solucin diluida de miel, hasta que el indicador pierda el color.


2.5.5.4 Tomar nota del volumen total de solucin diluida de miel. La diferencia entre titulaciones
duplicadas no deber ser superior a 0,1 cm
3



2.6 Clculos


2.6.1 Cuando usa el procedimiento del numeral 2.5.1, los clculos se hacen de la siguiente manera:


C =
1
25
P
x
1
1000
Y




2.6.2 Cuando utiliza el procedimiento del prrafo 2.5.2:


C =
2
2
P
X
2
1000
Y



Siendo:

C - g de azcar invertido por 100 g de miel
P1 - peso (g) de la muestra de miel utilizada segn el numeral 2.5.1.
P2 - peso (g) de la muestra utilizada segn el numeral 2.5.2.
Y1 - volumen (cm
3
) de solucin diluida de miel consumida durante la determinacin efectuada
segn el procedimiento del, numeral 2.5.1.
Y2 - volumen (cm
3
) de solucin diluida de miel consumida durante la determinacin efectuada
segn el numeral 2.5.2.

3. METODO PARA LA DETERMINACION DE SACAROSA


3.1 Resumen

3.1.1 La determinacin de sacarosa se basa en el mtodo de inversin de Walker.

3.2. Equipo usual de laboratorio y en particular:

3.2.1 Balanza analtica, sensible al 0,1 mg.

3.2.2 Matraz aforado a 100 y 250 cm
3
.

3.3 Reactivos




(Continua)



NTE INEN 1 633 1989-02
1988-045 -5-





3.3.1 Solucin de azul de metileno, igual a la del numeral 2.3.1. .


3.3.2 Solucin patrn de azcar invertido, como se indica en el numeral 2.3.2.


3.3.3 Solucin de Fehling, preparada como indica el numeral 2.3.4.


3.3.4 Acido clorhdrico (6,34 N acuosa)


3.3.5 Solucin de hidrxido de sodio


3.4 Preparacin de la muestra


3.4.1 La preparacin de muestra se realizar como se indica en el numeral 2.4.


3.5 Procedimiento


3.5.1 Para esta determinacin preparar la muestra como se indica en el punto 2.5.1.


3.5.2 Diluir 10cm
3
de esta solucin enagua destilada hasta obtener 250 cm
3
de solucin de miel.


3.5.3 Hidrlisis de la maestra de ensayo.


3.5.3.1 Poner la solucin de miel (50 cm
3
) en un matraz graduado de 100 cm
3
, junto con 25
cm
3
destila, calentar la muestra de ensayos hasta una temperatura de 65 C en bao Mara.


3.5.3.2 Retirar del bao Mara y aadir 10 cm
3
de cido clorhdrico 6,34 N.


3.5.3.3 Dejar que la solucin se enfre de modo natural durante 15 minutos y, a
continuacin, calentar hasta 20C, y neutralizar co n hidrxido de sodio 5N, empleando
tornasol como indicador.


3.5.3.4 Enfriar nuevamente y completar el volumen hasta 100 cm
3
(solucin diluida de miel).


3.5.3.5 Realizar la titulacin como en el numeral 2.5.3, continuar el procedimiento como indica el
numeral 2.5.5.4.


3.6 Clculos


3.6.1 Calcular el porcentaje de azcar invertido (g de azcar invertido por 100 g de miel), despus
de la inversin, utilizando la frmula apropiada que para obtener el porcentaje de azcar invertido
antes de la inversin, como se indica en 2.6.


(Continua)



NTE INEN 1 633 1989-02
1988-045 -6-





4. METODO PARA LA DETERMINACION DE LA RELACION FRUCTOSA-GLUCOSA


4.1 Instrumental


4.1.1 Equipo usual de laboratorio y en particular


4.1.1.1 Balanza analtica, sensible al 0,1 mg.


4.1.1.2 Baln volumtrico


4.1.1.3 Matraz af or ado de 250 cm
3
.


4.2 Reactivos


4.2.1 Solucin 0,05 N de yodo.


4.2.2 Solucin de hidrxido de sodio 0,1 N.


4.2.3 Acido sulfrico concentrado.


4.2.4 Solucin de tiosulfato de sodio 0,5N.


4.3 Procedimiento


4.3.1 Pesar 1 g de miel de abeja, pasara un baln volumtrico de 250 cm
3
. Se diluye con 150 cm
3
de
agua destilada y se agita completando con agua destilada hasta la marca.


4.3.2 Se transfieren con una pipeta 50 cm
3
de esta solucin de miel, a un matraz de 250 cm
3
y se
aaden 40 cm
3
de la solucin de yodo y 25 cm
3
de la solucin de hidrxido de sodio. Se tapa el
frasco, se agita y se guarda en la oscuridad durante 20 minutos.


4.3.3 Se acidifica agregando 5 cm
3
de cido sulfrico y se titula rpidamente el exceso de yodo con la
solucin de tiosulfato de sodio.


4.3.4 Se repite el proceso usando un blanco preparado, empleando, en vez de la solucin de miel, 50
cm
3
de agua destilada.


4.4 Clculos


4.4.1 La concentracin de glucosa se calcula mediante la siguiente ecuacin

G = (b-s) X 0,004502


(Continua)



NTE INEN 1 633 1989-02
1988-045 -7-





Siendo:

G = glucosa, expresada en porcentaje en masa.
b = volumen de la solucin de tiosulfato de sodio, usado en la titulacin en blanco, en cm
3
.
s = volumen de la solucin de tiosulfato de sodio, empleado en la titulacin de la
muestra, en cm
3
.

4.4.2 La concentracin de fructosa se calcula mediante la siguiente ecuacin:


F = A - G


Siendo:

F = fructosa, expresada en porcentaje en masa.
A = azcares reductores totales, expresados en porcentaje en masa.
G = glucosa expresada en porcentaje en masa.

4.4.3 La relacin fructosa-glucosa se calcula as:

R =
G
F

Siendo:

R = relacin fructosa-glucosa.
F = fructosa, expresada en porcentaje en masa.
G = glucosa, expresada en porcentaje en masa.



5. ERRORES DE METODO


5.1 La diferencia entre los resultados de una determinacin efectuada por duplicado no debe
exceder del 1,0% del promedio de ambos ensayos; en caso contrario, se debe repetir la
operacin.


6. INFORME DE RESULTADOS


6.1 Como resultado final, debe reportarse la media aritmtica de los resultados de la
determinacin.

6.2 Deben indicarse el mtodo usado y el resultado obtenido. Debe mencionarse, adems,
cualquier condicin no especificada en esta norma o considerada como opcional, as como
cualquier circunstancia que pueda haber influido sobre los resultados.











(Continua)



NTE INEN 1 633 1989-02
1988-045 -8-





APENDICE Z



Z.1 NORMAS A CONSULTAR


Esta norma no requiere de otra para su aplicacin.



Z. 2 BASES DE ESTUDIO


Anlisis Moderno de los Alimentos, Leslie Hart y Harry Johnstone Fisher, Editorial Acribia, Zaragoza
(Espaa) 1971.

Official Methods of Analysis. Associations of Official Analytical Chemists. Fourteenth Edition, Edited
by Sidney Williams, Arlington, Virginia, 1984.

Codex Alimentarius. Normas del Codex para los azcares incluida la miel, Volumen III. Roma, 1981.



INFORMACIN COMPLEMENTARIA

Documento:
NTE INEN 1 633

TITULO: MIEL DE ABEJAS. DETERMINACION DE
AZUCARES REDUCTORES TOTALES SACAROSA Y LA
RELACION FRUCTOSA-GLUCOSA.
Cdigo:
AL 02.04-307
ORIGINAL:
Fecha de iniciacin del estudio: 1988-05-11

REVISIN:
Fecha de aprobacin anterior por Consejo Directivo
Oficializacin con el Carcter de
por Acuerdo No. de
publicado en el Registro Oficial No. de

Fecha de iniciacin del estudio:
Fechas de consulta pblica: de a

Subcomit Tcnico: AL 02.04 Azcares
Fecha de iniciacin: 1988-06-03 Fecha de aprobacin: 1988-06-03
Integrantes del Subcomit Tcnico:

NOMBRES:

Dr. Jos Escudero (Presidente)
Ing. Carolina Palacio de Wray
Lic. Flor de Gallardo
Ing. Renne Palacios
Dra. Luz Guerrero
Dra. Delia de Mora

Agr. Becker Ayala

Arg. Alfredo Zuiga

Dra. Rosa de Len
Sr. Silvio Durn
Dra. Magdalena Bus
Ing. Norma Santamara (Secretaria Tcnica)













INSTITUCIN REPRESENTADA:

ADAP
MAG-INCCA
LA COLMENA
SUPERBA
PASTEURIZADORA QUITO S.A.
INSTITUTO NACIONAL DE HIGIENE-
GUAYAQUIL
ASOCIACION DE APICULTORES DE
TUNGURAHUA
ASOCIACION DE APICULTORES DE
TUNGURAHUA
INSTITUTO NACIONAL DE HIGIENE QUITO
EL PARAISO
MINISTERIO DE SALUD PUBLICA
INEN
Otros trmites: !
4
Esta norma sin ningn cambio en su contenido fue DESREGULARIZADA, pasando de
OBLIGATORIA a VOLUNTARIA, segn Resolucin de Consejo Directivo de 1998-01-08 y oficializada
mediante Acuerdo Ministerial No. 235 de 1998-05-04 publicado en el Registro Oficial No. 321 del 1998-05-20
El Consejo Directivo del INEN aprob este proyecto de norma en sesin de 1989-02-15

Oficializada como: OBLIGATORIA Por Acuerdo Ministerial No. 216 del 1989-05-10
Registro Oficial No. 218 del 1989-06-23



























































Instituto Ecuatoriano de NormaIizacin, INEN Instituto Ecuatoriano de NormaIizacin, INEN Instituto Ecuatoriano de NormaIizacin, INEN Instituto Ecuatoriano de NormaIizacin, INEN - -- - Baquerizo Moreno E8 Baquerizo Moreno E8 Baquerizo Moreno E8 Baquerizo Moreno E8- -- -29 y Av. 6 de Diciembre 29 y Av. 6 de Diciembre 29 y Av. 6 de Diciembre 29 y Av. 6 de Diciembre
CasiIIa 17 CasiIIa 17 CasiIIa 17 CasiIIa 17- -- -01 01 01 01- -- -3999 3999 3999 3999 - -- - TeIfs: (593 2)2 501885 aI 2 501 TeIfs: (593 2)2 501885 aI 2 501 TeIfs: (593 2)2 501885 aI 2 501 TeIfs: (593 2)2 501885 aI 2 501891 891 891 891 - -- - Fax: (593 2) 2 567815 Fax: (593 2) 2 567815 Fax: (593 2) 2 567815 Fax: (593 2) 2 567815
Direccin GeneraI: E Direccin GeneraI: E Direccin GeneraI: E Direccin GeneraI: E- -- -MaiI: MaiI: MaiI: MaiI: furresta@inen.gov.ec furresta@inen.gov.ec furresta@inen.gov.ec furresta@inen.gov.ec
rea Tcnica de NormaIizacin: E rea Tcnica de NormaIizacin: E rea Tcnica de NormaIizacin: E rea Tcnica de NormaIizacin: E- -- -MaiI: MaiI: MaiI: MaiI: normaIizacion@inen.gov.ec normaIizacion@inen.gov.ec normaIizacion@inen.gov.ec normaIizacion@inen.gov.ec
rea Tcnica de C rea Tcnica de C rea Tcnica de C rea Tcnica de Certificacin: E ertificacin: E ertificacin: E ertificacin: E- -- -MaiI: MaiI: MaiI: MaiI: certificacion@inen.gov.ec certificacion@inen.gov.ec certificacion@inen.gov.ec certificacion@inen.gov.ec
rea Tcnica de rea Tcnica de rea Tcnica de rea Tcnica de Verificacin: E Verificacin: E Verificacin: E Verificacin: E- -- -MaiI: MaiI: MaiI: MaiI: verificacion@inen.gov.ec verificacion@inen.gov.ec verificacion@inen.gov.ec verificacion@inen.gov.ec
rea Tcnica de Servicios TecnoIgicos: E rea Tcnica de Servicios TecnoIgicos: E rea Tcnica de Servicios TecnoIgicos: E rea Tcnica de Servicios TecnoIgicos: E- -- -M MM MaiI: aiI: aiI: aiI: inencati@inen.gov.ec inencati@inen.gov.ec inencati@inen.gov.ec inencati@inen.gov.ec
RegionaI Guayas: E RegionaI Guayas: E RegionaI Guayas: E RegionaI Guayas: E- -- -MaiI: MaiI: MaiI: MaiI: inenguayas@inen.gov.ec inenguayas@inen.gov.ec inenguayas@inen.gov.ec inenguayas@inen.gov.ec
RegionaI Azuay: E RegionaI Azuay: E RegionaI Azuay: E RegionaI Azuay: E- -- -MaiI: MaiI: MaiI: MaiI: inencuenca@inen.gov inencuenca@inen.gov inencuenca@inen.gov inencuenca@inen.gov.ec .ec .ec .ec
RegionaI Chimborazo: E RegionaI Chimborazo: E RegionaI Chimborazo: E RegionaI Chimborazo: E- -- -MaiI: MaiI: MaiI: MaiI: inenriobamba@inen.gov.ec inenriobamba@inen.gov.ec inenriobamba@inen.gov.ec inenriobamba@inen.gov.ec
URL:www.inen.gov.ec URL:www.inen.gov.ec URL:www.inen.gov.ec URL:www.inen.gov.ec