I.

INTRODUCCION
La cromatografa es la separacin de una mezcla de dos o ms compuestos
por distribucin diferencial entre dos fases (una fija o estacionaria y otra
mvil) l, que se encuentran en ntimo contacto. Y segn sean la naturaleza
de las fases slido-lquido, lquido-lquido y gas- lquido. Tambin puede
definirse como un mtodo de separacin basado en la distribucin o en la
diferencia velocidad con que se desplazan los compuestos entre 2 fases. En
la separacin cromatografa, la fase mvil (disolvente o eluyente), la fase fija
y los componentes de la mezcla que se est separando o analizando,
interaccionan entre s constituyendo un SISTEMA CROMATOGRFICO.
La muestra se introduce en la fase mvil y los componentes de la muestra
se distribuyen entre la fase estacionaria y la mvil. Los componentes de la
mezcla a separar invierten un tiempo diferente en recorrer cada una de las
fases, con lo que se produce la separacin. Si un componente est la mayor
parte del tiempo en la fase mvil el producto se mueve rpidamente,
mientras que si se encuentra la mayor parte en la fase estacionaria, el
producto queda retenido y su salida es mucho ms lenta.
Tipos Fase
mvil
Fase estacionaria
Cromatografa en
papel
Lquido Papel de celulosa.
Cromatografa en
capa fina
Lquido Gel de slice o almina.
Cromatografa de
gases
Gas Columnas capilares de slice fundida, columnas
empacadas con tierras diatomeas hechas de tubos
de vidrio o metal.
Cromatografa
lquida
Lquido
(polar)
Empaques de siloxano de octilo o siloxano de
octadecilo.










TIPOS DE CROMATOGRAFA
Segn el fenmeno fsico predominante y el estado fsico de las fases
involucradas, existen 3 tipos bsicos de cromatografa: de adsorcin, de
particin y de intercambio inico.
Por ello, es ms comn clasificarla en: Cromatografa sobre papel, en capa fina
(c.c.f.), en columna (c.c.), en fase gaseosa (c.g.), Cromatografa de alta
performancia (HPLC) segn la tcnica empleada y la naturaleza de las fases.
1. CROMATOGRAFIA DE ADSORCIN
Es aquel sistema cromatogrfico en que la fase fija es un slido y la separacin o
desplazamiento depende del equilibrio adsorcin-desorcin entre el compuesto y
las fases fija y mvil. La adsorcin es un fenmeno fsico de superficie que
consiste en que las molculas de una sustancia (adsrbalo) se adhieren o
concentran en la superficie de un slido finamente dividido (adsorbente). El
proceso inverso, o sea la separacin de las molculas adsorbidas se denomina
desorcin.
Si las sustancias son coloreadas, no hay ninguna dificultad pues se visualizan
directamente; pero, la mayora de compuestos son incoloros o blancos, por lo que
no son visibles directamente y necesitaremos de un "revelador" para su
localizacin.
Los mtodos qumicos utilizan un reactivo qumico (revelador) que se aplican o
pulverizan sobre el cromatograma y al reaccionar con la sustancia dan productos
coloreados o fluorescentes (visibles a la luz ordinaria o UV).
RELACION DE FRENTE (Rf): Es una constante usada especialmente en el caso
de la cromatografa sobre papel y en capa fina. Cuando son visibles, se puede
determinar para cada una de las manchas el valor de Rf (factor de retencin), o la
distancia que cada compuesto se desplaza en la placa. Cada compuesto tiene un
Rf caracterstico que depende del disolvente empleado y del tipo de placa de CCF
utilizada, pero es independiente del recorrido del disolvente. De esta manera se
puede ayudar a identificar un compuesto en una mezcla al comparar su Rf con el
de un compuesto conocido (preferiblemente cuando se hacen eluir en la misma
placa de CCF).






2. CROMATOGRAFIA EN COLUMNA
Es til en la separacin de una cantidad apreciable de mezclas de
sustancias y puede hacerse por adsorcin, reparto o intercambio inico.
Se rellena cuidadosamente la columna cromatografa (tubo de vidrio con
una llave en el extremo inferior) con la fase fija. Si el mtodo es de
adsorcin el adsorbente debe estar pulverizado y seco. Si es de particin,
las partculas slidas deben estar cubiertas de una capa lquida.
Se deposita o siembra la muestra a separar (en solucin) por la parte
superior de la columna y luego se va adicionando la fase mvil (elucin).
El eluyente tratar de arrastrar las sustancias hacia abajo, mientras que la
fase fija tratar de retenerlas. Segn el equilibrio adsorcin desorcin o
segn el coeficiente de solubilidad de cada compuesto, algunos sern
desalojados (eluidos) ms rpidamente que otros, y los recibiremos
primero.
El mtodo consta de 3 etapas: llenado de la columna, aplicacin de la
muestra y elucin.
El llenado tiene por objeto preparar una columna uniformemente compacta,
sin rajaduras ni burbujas de aire. Puede hacerse de 2 maneras:
a) Suspender el adsorbente agitndolo con un solvente adecuado y verter
poco a poco esta suspensin. El adsorbente va sedimentando y formando
una columna uniforme.
b) Aadir el adsorbente seco, en pequeas porciones y dando golpes a la
columna para que el adsorbente se deposite en forma uniforme.









II. PROCEDIMIENTO
1. CROMATOGRAFA SOBRE PAPEL
Sobre una cinta de papel Whatman N 1 de 3 x 10 cm se realizan las
siguientes operaciones:
a) A 1,5 cm de un extremo de la tira de papel de filtro, marque una tenue
lnea recta con lpiz (lnea de partida). No use tinta.
b) Doble la tira longitudinalmente, quedando dividida en 2 mitades. En
cada mitad, y sobre la lnea de partida, seale el punto medio o lugar de
siembra
c) En uno de estos puntos y con la ayuda de un capilar, deposite unas
gotitas (2 3) de la mezcla a analizar (azul de metileno y anaranjado de
metilo). En el otro punto sembrar, uno de los colorantes (cualquiera) en
solucin. Espere que cada gota seque antes de sembrar la siguiente.
d) Deje unos minutos para que se evapore el solvente de siembra (puede
ayudarse con corriente de aire) y luego introduzca la tira en un tubo de
ensayo de 2 x 15 cm en cuyo interior se ha colocado el solvente de
desarrollo (1-propanol - butanona - Agua 4:1:1) (La zona de siembra no
debe quedar sumergida en el solvente).
e) Cuando la fase mvil haya ascendido unos 8-10 cm, retire el papel,
marque el frente del solvente (con lpiz) y djelo secar.
f) Observe y compare las 2 muestras sembradas y calcule el Rf de cada
sustancia.















2. CROMATOGRAFA EN CAPA FINA
a) Las placas se preparan introduciendo 2 lminas portaobjeto (juntas)
en una suspensin preparada al agitar 35g de Silicagel G. ( 60 g de
almina) en 100 mL de una mezcla cloroformo-metanol (2:1). Esta
suspensin puede conservarse en recipientes bien cerrados.
b) Se separan los portaobjetos, se dejan secar y se sealan
2 puntos (equidistantes de los bordes y del centro) que se
encuentren en una imaginaria "lnea de partida" a 1 cm del borde
inferior (Use nicamente lpiz).
c) En uno de los puntos se siembra (en solucin y con un capilar) unas
2 3 gotas de la mezcla anaranjado de metilo-azul de metileno y en
el otro uno de ellos. Dejar secar el solvente.
d) Introducir la placa en una cmara de desarrollo que contiene la fase
mvil (1-Propanol-butanona-Agua 4:1:1).
e) Cuando el solvente est por llegar al borde superior de la plaquita,
retire sta, marque el frente del solvente, dejar secar y calcule el Rf.

















III. MARCTO TEORICO


1. Solubilidad: Es una medida de la capacidad de disolverse de una
determinada sustancia (soluto) en un determinado medio (solvente).
Implcitamente se corresponde con la mxima cantidad de soluto que
se puede disolver en una cantidad determinada de solvente a una
temperatura fija. Puede expresarse en unidades de concentracin:
molaridad, fraccin molar, etc.

2. Eluato: Solucin o sustancia obtenida por un proceso de elucin.

3. Solvente: Es el medio disolvente de una solucin; normalmente es el
componente de una solucin presente en mayor cantidad. Los
disolventes forman parte de mltiples aplicaciones: adhesivos,
componentes en las pinturas, productos farmacuticos, para la
elaboracin de materiales sintticos, etc.

4. Absorcin: Es la operacin unitaria que consiste en la separacin de
uno o ms componentes de una mezcla gaseosa con la ayuda de un
solvente lquido con el cual forma solucin (un soluto A, o varios
solutos, se absorben de la fase gaseosa y pasan a la lquida). Este
proceso implica una difusin molecular turbulenta o una transferencia
de masa del soluto A a travs del gas B, que no se difunde y est en
reposo, hacia un lquido C, tambin en reposo.

5. Pulverizado: Reducir a polvo una cosa slida: esas mquinas
pulverizan la piedra, Esparcir un lquido sobre un lugar en forma de
gotas muy pequeas: ese aparato pulveriza ambientador en la sala.


6. Gel slice: El gel de slice es una forma granular y porosa de dixido
de silicio fabricado sintticamente a partir de silicato sdico. A pesar
del nombre, el gel de slice es slido.










IV. CONCLUSIONES
Se observo en esta prctica que por medio de la cromatografa es
posible identificar de que sustancias est compuesta una mezcla.
Como la polaridad del solventes utilizados para la cromatografa
determinan la el resultado mostrndonos sus diferentes compuestos.
Se observo como las diferentes caractersticas de la mezcla A se
vean en la placa promedio de sus diferentes manchas. Como ciertos
factores pueden modificar el restado en esta prctica.

V. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
[1] Carey, F. (2006). Qumica orgnica. Editorial McGraw-Hill. Mxico.
Pginas (449 466).
[2] Shiner, R. y Fuson, R. (1977).Cromatografia. Editorial Limusa. Mxico.
Pginas (1-14; 168-183).
[3] Chang, R. (2007). Qumica Cromatografia. Edicin. Novena. Editorial:
McGraw-Hill. Mxico D. F. 1203 pp.
VI. CUESTIONARIO
1. Haga un esquema de un cromatograma desarrollado e indique cada
una de las partes.
2. Cules son las diferencias entre la c.c.f. y la de papel?
CROMATOGRIA DE
CAPA FINA
CROMATOGRAFIA EN
PAPEL
Aplica un sistema de Fase Estacionaria Fase Mvil y estacionaria
Se utiliza En Portaobjeto En papel filtro
Reactivo para la
absorcin
Silicagel

______
El absorbente se
introduce en
En una placa delgada
de vidrio
En un tubo de ensayo
Fuerza motriz El disolvente sube
hasta el punto de la
placa
Cae por la gravedad
Aplicaciones Identifica alguna
sustancia en una
mezcla por su
comparacin en un
patrn.
Identifica las reacciones
de los iones y su efecto
sobre el desarrollo
cromatografico.
Cromatografa En liquida-liquida

En liquida-liquida
Transportador por la Absorcin Evaporacin

Rf=
3. Cmo ubicaras las posiciones de las sustancias incoloras
en un cromatograma?
Aunque los compuestos incoloros pueden formar bandas bien definidas en
una columna de adsorcin cromatografa, se necesita la utilizacin de
mtodos especiales para identificar su direccin es decir para la localizacin
de las bandas de los productos adsorbidos se emplea generalmente una
lmpara ultravioleta como reactivo.
4. Cmo encuentras el solvente ideal de separacin cromatogrfica
para una muestra desconocida?
5. Cite algunas aplicaciones de la cromatografa en su especialidad.
6. Interprete los valores de Rf 0,05; 0,5 y 0,98
El valor de Rf es una constante usada para intentar la identificacin de un
compuesto ya que el desplazamiento de una sustancia con respecto al
desplazamiento del disolvente es constante y caracterstico de ella.

Distancia recorrida por la sustancia
Distancia recorrida por el disolvente

Los 3 valores pueden ser interpretados como 3 diferentes sustancias de las
cuales, la 1era (Rf=0,05) tiene un desplazamiento menor, la 2da (Rf=0,5) un
desplazamiento algo ms amplio, y la 3era (0,98) un desplazamiento mayor
a las dems.
7. Si al realizar el desarrollo de un cromatograma y encuentra el Rf de
0,1, lo escogera como un buen solvente de desarrollo. Por qu?.
Si, por que esa distancia es muy pequea y es muy buena para utilizarla
como identificacin de un compuesto en una mezcla.
8. Explique algn mtodo para localizar las bandas de adsorcin
cuando se trabaja con sustancias incoloras en una columna.
9. D algunas aplicaciones prcticas de la cromatografa en
columna?
Separacin de colorantes
Separacin de protenas
Separacin de fragancias


10. Haga un breve resumen de la Cromatografa lquida de alta
performance.
En la cromatografa lquida, la fase mvil es un lquido que fluye a travs de
una columna que contiene a la fase fija. La cromatografa lquida clsica se
lleva a cabo en una columna generalmente de vidrio, la cual est rellena con la
fase fija. Luego de sembrar la muestra en la parte superior, se hace fluir la fase
mvil a travs de la columna por efecto de la gravedad.
Con el objeto de aumentar la eficiencia en las separaciones, el tamao de las
partculas de fase fija se fue disminuyendo hasta el tamao de los micrones, lo
cual gener la necesidad de utilizar altas presiones para lograr que fluya la fase
mvil. De esta manera, naci la tcnica de cromatografa lquida de alta
resolucin (HPLC), que requiere de instrumental especial que permita trabajar
con las altas presiones requeridas.
Cromatografa de adsorcin: La fase fija es un slido y se utiliza casi
exclusivamente slice (slica) y en mucha menor medida almina.
Cromatografa de reparto: En casi todos los casos, como fase estacionaria se
utilizan compuestos unidos qumicamente a un soporte slido de slica. Se la
subdivide en cromatografa en fase normal y fase reversa.
Cromatografa inica: Se utilizan columnas rellenas con resinas de intercambio
inico para separar y determinar iones
Cromatografa de exclusin por tamao: La fase fija est formada por partculas
polimricas o de slice que contienen una red uniforme de poros y llevan a cabo
un fraccionamiento relacionado con el tamao molecular.