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15/03/20
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Espectrofotometra
Daniel Olave
Tecnologa Mdica 2007
INTRODUCCIN
Espectrofotometra
Es la medida de la cantidad
de energa radiante
absorbida por las molclas
a longitdes de onda
espec!cas"
#a espectro$otometra es el
mtodo de an%lisis &ptico
m%s sado en las
investigaciones biol&gicas"
Tipos de Espectrofotometra
#a espectro$otometra de absorci&n de
in$rarro'os
#a espectro$otometra por
resonancia magntica nclear
()M*+
#a espectro$otometra de ,orescencia"
#a espectro$otometra de emisi&n at&mica
#a espectro$otometra absorci&n at&mica
#a espectro$otometra de masas
#a espectro$otometra de ,orescencia de
ra-os .
Espectrofot
metro
El espectro$ot&metro es n
instrmento sado en la $sica &ptica
/e permite comparar la radiaci&n
absorbida o transmitida por na
solci&n /e
contiene na cantidad desconocida de
solto0 - na /e contiene na
cantidad conocida de la misma
sstancia en $nci&n de la longitd de
onda
Los componentes
esenciales de un
espectrofotmetro
son :
1na $ente estable de energa radiante
1n sistema de lentes0 espe'os - abertras
(2lits +0 /e de!nan0 colimen (3agan
paralelo+ - en$o/en el 3a4 de radiaci&n - n
monocromador /e separe la radiaci&n de
bandas estrec3as de longitd de onda"
1n componente transparente a la radiaci&n
/e contenga la mestra
1n detector de radiaci&n o transdctor /e
recibe la se5al de radiaci&n electromagntica -
la convierte en na se5al elctrica
de magnitd proporcional a la intensidad de la radiaci&n
recibida"
1n sistema ampli!cador /e prod4ca o
genere na se5al elctrica mc3o ma-or a
la se5al recibida
1n sistema de lectra tal como6 1na escala de
ag'a0 n registrador0 n sistema de dgitos o
na comptadora0 /e trans$orme la se5al
elctrica en na se5al /e el operador peda
interpretar"
Espectrofot
metro
Esquema de un
espectrofotmetro
de un solo a! " de
do#le a!
CELD$
%
Dia&rama de funcionamiento del
espectrofotmetro de un solo a!'
()todos Espectroscpicos
#os mtodos espectrosc&picos de
an%lisis se basan en la medida de la
radiaci&n electromagntica emitida o
absorbida por la materia"
#os mtodos de emisi&n tili4an la
radiaci&n emitida cando n solto
es e7citado por energa trmica0
elctrica0 o energa radiante"
()todos Espectroscpicos
#os mtodos de absorci&n0 por el
contrario0 est%n basados en la
disminci&n de la potencia (o
atenaci&n+ de la radiaci&n
electromagntica como consecencia
de la absorci&n /e se prodce en s
interacci&n con el solto"
#os mtodos de absorci&n poseen la
considerable venta'a de prodcir poca
o ningna alteraci&n en el sistema
estdiado"
()todos Espectroscpicos
#os mtodos espectrosc&picos se
consideran como na de las me'ores -
m%s tili4adas tcnicas instrmentales
a disposici&n del cient!co0 para la
ad/isici&n de in$ormaci&n tanto
cantitativa como calitativa"
#os mtodos espectrosc&picos se
clasi!can seg8n la regi&n del espectro
electromagntico /e est implicada9
siendo las m%s importantes las regiones
de6
ra-os .0
ltravioleta0
visible0
in$rarro'a0
microondas
)adio$recencia"
El Espectro Electroma&n)tico
Color de la sustancia
El color de las sstancias se debe a
/e stas absorben ciertas longitdes
de onda de la l4 blanca /e incide
sobre ellas - solo de'an pasar a
nestros o'os a/ellas longitdes de
onda no absorbida
COLORE% DE L$ LU* +I%I,LE
Le"es -undamentales de la
$#sorcin
2e denomina absorci&n al proceso
por el cal na especie0 en n
medio transparente0 capta
selectivamente ciertas $recencias
de la radiaci&n
electromagn
tica"
Le"es -undamentales de la
$#sorcin
Le" de Lam#ert: cando n 3a4 de l4
atraviesa
n medio absorbente de concentraci&n
constante0 la cantidad de energa
lminosa absorbida por el
medio vara en $orma directamente
proporcional a la distancia recorrida"
Ener&a
a#sor#ida . #
Le"es -undamentales de la
$#sorcin
Le" de ,eer6 cando n 3a4 de l4
atraviesa n medio absorbente de
espesor constante0 la cantidad de
energa lminosa absorbida por el
medio varia en $orma directamente
proporcional a la concentraci&n del
absorbente en el medio
Ener&a a#sor#ida . /C0
Transmitan
cia
es la $racci&n de radiaci&n insidente
transmitida por la solci&n0 por lo
general la transmitancia se e7presa
en porcenta'e" Esta de!nida por la
ecaci&n6
T1T1 22 33 2424 T1T1 545466
$$ 77TT11 TT 88 544544
$#sor#an
cia
Es la medida de la energa radiante
/e es absorbida por n material o
na sper!cie como $nci&n de la
longitd de onda de dic3a energa" :
di$erencia de la transmitancia0 la
absorbancia de na solci&n /e
amenta la atenaci&n del 3a4 esta
de!nida por la ecaci&n6
$1 Lo& 24 3 2 $1 Lo& 53T
$#sor9ati9idad " $#sor9ati9idad
(olar
la absorbancia es directamente
proporcional a la tra-ectoria de la
radiaci&n a travs de la solci&n - a
la concentraci&n de la especie /e
prodce la absorbancia" Esta
de!nida por la ecaci&n6
$1 a#C : &3lt ; a1 $3#C
Donde:
a: constante de proporcionalidad
llamada absorvatividad" ;ando se
e7presa la concentraci&n en moles /
litro - la tra-ectoria a travs de la
celda en cm"0 la absorvatividad se
denomina absorvatividad molar - se
representa con el smbolo <=>' En
consecencia cando <#> se e7presa
en cm" - <C> en moles/ litro"
$1 =#C :mol3lt;=1 $3 #C C1 $3 =#
Curva Estandar
7
6
5
4
3
2
1
0
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Concnetracin (moles/lt)
A
bs
or
ba
nc
ia