Control de los Microorganismos

Los microorganismos ofrecen diversos beneficios a la sociedad en diferentes formas. En otro aspecto son
tambin los microorganismos un vehculo para la produccin de enfermedades, por la produccin de toxinas
propiamente dichas o metabolitos txicos. Adems de daos en cultivos, descomposicin de alimentos y
enfermedades en animales. Es por esto que el ser humano ha buscado los procedimientos necesarios para
destruir o controlar el crecimiento de los microorganismos perjudiciales.

DEFINICIONES IMPORTANTES:

- Muerte microbiana: Prdida irreversible de la capacidad de reproducirse.

- Esterilizacin: Proveniente del latn sterilis incapaz de reproducirse. Proceso por el cual las clulas vivas,
esporas viables, virus y viroides destruidos o eliminados de un objeto o hbitat.

- Desinfeccin: Destruccin, eliminacin o inhibicin de los microorganismos que pueden producir enfermedad
de una superficie u objeto. Se mantienen viables las esporas.

- Germicida: Terminacin _cida del latn que significa destruir. Es un agente que puede destruir
microorganismos patgenos y muchos no patgenos pero no necesariamente esporas. (Bactericida, fungicida,
viricida)

- Terminacin _statico: proveniente del griego statikos que causa detencin, agente con capacidad de inhibir
el crecimiento microbiano, pero sin matarlos. (Bacteriosttico, fungisttico)


Condiciones que influyen en la eficacia de un antimicrobiano:

La destruccin de los microorganismos y la inhibicin del crecimiento no es un proceso simple, debido a que
la eficacia de un agente antimicrobiano es afectada por 6 factores:

1. Tamao de la poblacin: Debido a que la muerte es exponencial, una poblacin muy grande requiere de
mayor tiempo.

2. Composicin de la poblacin: la eficiencia del antimicrobiano vara considerablemente con respecto a la
naturaleza de los organismos que son tratados porque su susceptibilidad es distinta. Por ejemplo: las
endosporas bacterianas son ms resistentes que las clulas vegetativas, las clulas jvenes mueren con
mayor facilidad y algunas especies soportan mejor condiciones adversas.

3. Concentracin o intensidad del agente antimicrobiano: A menudo, pero no siempre, entre mayor sea la
concentracin del agente qumico o ms intenso agente fsico, ms rpidamente se destruyen los
microorganismos. Pero generalmente la eficiencia no est relacionada con la concentracin o intensidad.
(alcohol)

4. Tiempo de exposicin: cuanto ms tiempo se exponga una poblacin a un determinado agente, ms
organismos se destruirn.


5. Temperatura: A menudo, un aumento en la temperatura aumenta la actividad de un agente qumico.

6. Entorno: la poblacin que se quiere destruir no se encuentra aislada, est rodeada de diversos factores
ambientales que pueden protegerla o facilitar su destruccin. Por ejemplo: el calor es ms efectivo en un
medio cido, la materia orgnica les da proteccin contra el calor y los desinfectantes qumicos.


Modo de accin de los antimicrobianos:

- Alteracin de la permeabilidad de la membrana citoplasmtica
- Dao a la pared celular o inhibicin de la sntesis de sus componentes
- Alteracin del estado fsico qumico de las protenas y cidos nucleicos, o inhiben su sntesis
- Inhibicin enzimtica
Procedimientos para el control microbiano:

- Mtodos fsicos
- Mtodos qumicos
- Agentes Antimicrobianos


MTODOS FSICOS: Los mtodos fsicos se utilizan a menudo para lograr la descontaminacin, la
desinfeccin y la esterilizacin microbiana.


CALOR: La exposicin al agua en ebullicin durante 10 minutos es suficiente para destruir clulas
vegetativas, pero no es suficiente para destruir endosporas. No esteriliza.

La eficacia del calor como agente antimicrobiano, se puede expresar como el Tiempo de muerte trmico
(TMT), que se define como el tiempo ms corto necesario para destruir los microorganismos en una
suspensin, a una temperatura especfica y en condiciones definidas. Sin embargo como la destruccin es
logartmica no es posible eliminar completamente los microorganismos de una muestra.

Existen diversos mtodos de control de microorganismos por medio del calor:


a. Esterilizacin por vapor (calor hmedo o autoclave): El agua es llevada a punto de ebullicin de manera
que el vapor llena la cmara, desplazando el aire fro. Cuando todo el aire es expulsado, se cierran las
vlvulas de seguridad y el vapor satura toda la cmara, por lo que incrementa la presin, hasta que se
alcanzan los valores deseados (121C y 15 lb presin).

En estas condiciones se destruyen todas las clulas vegetativas y endosporas en un tiempo que por lo
general es de 15 minutos. Se piensa que el calor hmedo degrada los cidos nucleicos, desnaturaliza
protenas y adems alterar las membranas celulares.

Si no se cumplen las condiciones adecuadas, no hay esterilizacin. Para controlar el buen funcionamiento del
equipo, se pueden incluir con la esterilizacin un control biolgico o un indicador qumico.

El indicador biolgico consiste en una ampolla estril con un medio y un papel cubierto con esporas
de Bacillus stearothermophilus o Clostridium. Luego de la esterilizacin se rompe la ampolla y se incuba por
unos das. El indicador qumico consiste en una cinta especial con letras o lneas que cambian de color
despus del tratamiento suficiente con calor.

b. Pasteurizacin: Se utiliza para sustancias o medios que no pueden ser calentadas a ms de su
temperatura de ebullicin.

Un calentamiento breve a 55 o 60C destruir los microorganismos patgenos y disminuye los causantes de la
descomposicin de la sustancia. NO esteriliza.

Existen variaciones que son utilizadas en la industria de la leche: la pasteurizacin rpida (HTST high
temperature short-term) que consiste en calentar a 72C por 15 segundos. Y la pasteurizacin a temperatura
ultra elevada (UTH ultrahigh temperature) que calienta a 140-150C por 1 a 3 segundos.

c. Tindalizacin o esterilizacin fraccionada al vapor: se utiliza para qumicos o material biolgico que no
puede llevarse a ms de 100C. Se calienta a una temperatura de 90C a 100C durante 30 minutos por tres
das consecutivos y se incuba a 37C entra cada calentamiento.

El primer calentamiento destruye clulas vegetativas pero no esporas, por lo que germinan a 37C y luego son
eliminadas con el siguiente calentamiento.

d. Calor seco: Se utilizan hornos o estufas a una temperatura de 160-170C por 2 o 3 horas. Es menos
efectivo que el calor hmedo, pero no corroe utensilios metlicos. Es lenta y no se puede utilizar para material
termo sensible.


e. Incineracin: Destruye por completo los microorganismos. (calentar las asas en los mecheros).

f. Temperaturas bajas: Refrigeracin y congelacin, son nicamente bacteriostticos. En general, el
metabolismo de las bacterias est inhibido a temperaturas por debajo de 0 C. Sin embargo estas
temperaturas no matan a los microorganismos sino que pueden conservarlos durante largos perodos de
tiempo.

Esta circunstancia es aprovechada tambin por los microbilogos para conservar los microorganismos
indefinidamente. Los cultivos de microorganismos se conservan congelados a -70 C o incluso mejor en
tanques de nitrgeno lquido a -196C.

g. Desecacin: Es de efecto bacteriosttico y las esporas permanecen viables.


FILTRACIN: es utilizada para materiales termosensibles.

a. Filtros de profundidad: Se utilizan materiales fibrosos o granulados que forman una capa gruesa con
canales de dimetro muy pequeo. La solucin es aspirada al vaco y los microorganismos quedan retenidos
o son adsorbidos por el material. Se utilizan diatomeas, porcelana no vidriada, asbestos.

b. Filtros de membrana: Son circulares con un grosor de 0.1 mm y con poros muy pequeos, de unos 2 m
por lo que los microorganismos no pueden atravesarlo. Se fabrican de acetato de celulosa, policarbonato,
fluoruro de polivinilo u otros materiales sintticos.



RADIACIN:

a. Ultravioleta: Es letal para todas las clases de microorganismos por su longitud de onda corta y su alta
energa. Es letal a 260 nm ya que es la longitud de onda que es ms efectivamente absorbida por el ADN.
El mecanismo primario del dao al ADN es la formacin de dmeros de timina lo que inhibe su funcin y
replicacin. Son escasamente penetrantes y se utilizan para superficies.

b. Ionizante: Niveles bajos pueden producir mutaciones e indirectamente resultar en la muerte, niveles altos
son letales. Especficamente causan una serie de cambios en las clulas: ruptura de puentes de hidrgeno,
oxidacin de dobles enlaces, destruccin de anillos, polimerizacin de algunas molculas, generacin de
radicales libres.

La mayor causa de muerte es la destruccin del ADN. Es excelente esterilizante y con penetracin profunda
en distintos materiales, por lo que se utilizan para esterilizar materiales termolbiles (termosensibles) como
jeringas desechables, sondas, etc.

No se utilizan para medios de cultivo o soluciones proteicas porque producen alteraciones de los
componentes.

MTODOS QUMICOS:

Condiciones ideales para un agente antimicrobiano qumico:
- No txico para el ser humano, animales ni medio ambiente
- Actividad antimicrobiana
- No debe de reaccionar con la materia orgnica o corroer
- Estable y homogneo


Modo de accin:

- Bacteriostticos: Inhibidores de sntesis proteica por unin al ribosoma, que es reversible, pues se disocia
de este cuando disminuye en concentracin.

- Bactericidas: Causa la muerte celular pero no la lisis. No se eliminan por dilucin.

- Bacteriolticos: Inducen la lisis celular al inhibir la sntesis de la pared celular o daan la membrana
citoplasmtica.

Agentes antimicrobianos qumicos:

a. Fenoles: El primer desinfectante y antisptico utilizado, en 1867 Joseph Lister los emple para reducir el
riesgo de infeccin en las cirugas. Hasta ahora los fenoles y sus derivados (cresol, xilenol) son utilizados
como desinfectantes en laboratorios y hospitales. Elimina micobacterias, eficaz an en presencia de materia
orgnica y permanece activo en la superficie despus de mucho tiempo de su aplicacin. Desnaturaliza
protenas y altera la membrana. Tiene olor desagradable y puede producir irritaciones cutneas.

b. Alcoholes: No elimina esporas pero son bactericidas y fungicidas y algunas veces viricida (virus que
contienen lpidos), son comnmente utilizados principalmente el etanol y el isopropanol en concentraciones de
70-80%. Tienen el mismo modo de accin de los fenoles.

c. Metales pesados: mercurio, arsnico, plata, zinc y cobre. Son bacteriostticos ya que el metal se combina
con los grupos sulfihidrilos de las protenas inactivndolas o precipitndolas. Son txicos. Ejemplos: sulfato de
cobre (alguicida) y nitrato de plata (gonorrea oftlmica en nios)

d. Halgenos:

- Yodo: antisptico cutneo. Oxida componentes celulares y forma complejos con las protenas. En altas
concentraciones puede destruir algunas esporas. Puede lesionar la piel, dejar manchas y desarrollar alergias.

- Cloro: oxida componentes celulares, requiere un tiempo de exposicin de unos 30 minutos.El producto
clorado ms utilizado en desinfeccin es el hipoclorito de sodio, que es activo sobre todas las bacterias,
incluyendo esporas, y adems es efectivo en un amplio rango de temperaturas. La actividad bactericida del
hipoclorito de sodio se debe al cido hipocloroso (HClO) y al Cl2 que se forman cuando el hipoclorito es
diluido en agua. La actividad germicida del in hipocloroso es muy reducida debido a que por su carga no
puede penetrar fcilmente en la clula a travs de la membrana citoplasmtica. En cambio, el cido
hipocloroso es neutro y penetra fcilmente en la clula, mientras que el Cl2 ingresa como gas.


Su actividad est influida por la presencia de materia orgnica, pues puede haber en el medio sustancias
capaces de reaccionar con los compuestos clorados que disminuyan la concentracin efectiva de stos.


e. Compuestos cuaternarios de amonio (detergentes): Molculas orgnicas emulsificantes porque
contienen extremos polares y no polares, solubilizan residuos insolubles y son agentes limpiadores eficaces.
Solo los catinicos son desinfectantes, alteran membrana y pueden desnaturalizar protenas. No destruyen
micobacterias ni esporas. Se inactivan con el agua dura y el jabn.

f. Aldehdos: Formaldehdo y glutaraldehdo, se combinan con las protenas y las inactivan. Eliminan esporas
(tras 12 horas de exposicin) y pueden usarse como agentes esterilizantes.

g. Gases esterilizantes: Esterilizacin de objetos termosensibles.

- Oxido de etileno: microbicida y esporicida, se combina con las protenas celulares. Alto poder penetrante. En
concentraciones de 10-20% mezclado con CO2 o diclorodifluorometano. Se debe de airear ampliamente los
materiales esterilizados para eliminar el gas residual porque es muy txico.

AGENTES ANTIMICROBIANOS:


La medicina moderna depende de los agentes quimioterapeuticos para el tratamiento de enfermedades. Estos
agentes destruyen a los microorganismos patgenos o inhiben su crecimiento para evitar un dao significativo
al hospedador.

La mayora de estos agentes son antibiticos derivados de productos microbianos o sus derivados. Existen
tambin antibiticos sintticos. Caractersticas de los agentes antimicrobianos:

- Toxicidad selectiva: debe de eliminar o inhibir exclusivamente el microorganismo patgeno que est
daando al hospedador.


- No causar efectos adversos: No deben de causar efectos indeseables para el hospedador. (respuestas
alrgicas, dao renal, dao gastrointestinal, nauseas, deplecin de la mdula sea)


- Espectro de accin: Algunos agentes tienen un espectro de accin estrecho por lo que su efecto es contra
una limitada variedad de microorganismos. Otros tienen un espectro de accin amplio, y pueden atacar
diferentes clases de patgenos.

Para tener una idea de la efectividad de un agente antimicrobiano puede obtenerse:

- Concentracin Mnima Inhibitoria (CMI), que es la mnima concentracin del agente antimicrobiano que
puede inhibir el crecimiento de un patgeno en particular.


- Concentracin Letal Mnima (CLM), es la mnima concentracin de un agente antimicrobiano que mata a
un patgeno.

Mecanismos de accin de los agentes antimicrobianos:
Las drogas antimicrobianas pueden causar un dao al organismo patgeno de varias maneras:

- Los antibiticos ms selectivos son aquellos que interfieren con la sntesis de la pared bacteriana.
(penicilinas, vancomicina, bacitracina, cefalosporinas).

- Pueden inhibir la sntesis proteica al unirse al ribosoma procaritico. (estreptomicina, gentamicina,
cloranfenicol, eritromicina)

- Inhibicin de la sntesis de cidos nucleicos, inhibiendo la ADN girasa, interfiriendo con la replicacin,
transcripcin o traduccin, bloqueando la sntesis de ARN, etc. (ciprofloxacina, quinolonas, rifampicina)

- Dao en la membrana plasmtica unindose a ella para daar su estructura y alterar su permeabilidad.
(polimixina B)

- Algunas drogas antimicrobianas pueden actuar como antimetabolitos: bloquean las vas metablicas por
competicin inhibitoria. Compiten por los metabolitos.