UNIVERSIDAD NACIONAL

MAYOR DE SAN MARCOS

(Universidad del Per, Decana De Amrica)
Facultad de Ingeniera Industrial
Laboratorio N4
Tema:
Cromatografa en compuestos orgnicos
Docente: Emilio Ramirez Roca
E.A.P: Ingeniera Textil y Confecciones
Integrantes:
Alonzo Villavicencio Roni
Cangana Martinez Cesmir
Valerio Huaman Manuel
Zavaleta Naupa Sindy
Horario: Sbado 11-1pm
Ao:
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I. INTRODUCCION

La cromatografa es un mtodo fsico de separacin para la caracterizacin de
mezclas complejas, la cual tiene aplicacin en todas las ramas de la ciencia. Es un
conjunto de tcnicas basadas en el principio de retencin selectiva, cuyo
objetivo es separar los distintos componentes de una mezcla, permitiendo
identificar y determinar las cantidades de dichos componentes. Diferencias
sutiles en el coeficiente de particin de los compuestos da como resultado una
retencin diferencial sobre la fase estacionaria y por tanto una separacin
efectiva en funcin de los tiempos de retencin de cada componente de la
mezcla.

La cromatografa puede cumplir dos funciones bsicas que no se excluyen
mutuamente:
Separar los componentes de la mezcla, para obtenerlos ms puros y que
puedan ser usados posteriormente (etapa final de muchas sntesis).
Medir la proporcin de los componentes de la mezcla (finalidad
analtica). En este caso, las cantidades de material empleadas son
pequeas.

Hoy en da casi no hay campo de la qumica, biologa, medicina, etc. En el que no
se utilice la cromatografa en alguna de sus formas, tanto en su vertiente
preparativa como en la analtica: por otra parte el desarrollo sobre el uso
conjunto de la cromatografa con otras tcnicas analticas, as como el desarrollo
de otros tipos de cromatografa , como es por ejemplo la de fluidos supercrticos
hace previsible una extensin aun mayor de su uso.
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II. MARCO TEORICO

CROMATOGRAFIA

Es un procedimiento fsico-qumico que consiste en separar los componentes o
sustancias integrantes de una mezcla en movimiento, nos permite identificar,
separar, purificar un soluto o mezcla, por medio del reparto o adsorcin sobre
una superficie estacionaria o inmvil. La razn por la que es posible conseguir
separaciones difciles de lograr por otros mtodos estriba en que, pequeas
diferencias en el coeficiente de reparto o en la adsorcin desorcin de cada
uno de los componentes se va multiplicando a lo largo del sistema.

Se fundamenta en la separacin diferencial de las sustancias sobre una
superficie fija (su parte o fase estacionaria) al ser desplazados por una fase
mvil (sistemas de solventes).

Se puede establecer dos mecanismos

1. Reparto o particin: Est basada en la separacin de una mezcla de
sustancias mediante el reparto existente entre la fase mvil (lquido o
gas) y la fase estacionaria (liquida) soportada o ligada sobre un slido
adecuado. La mayor o menor migracin de un compuesto en este tipo de
cromatografa, ser funcin del coeficiente de reparto de este entre la
fase estacionaria y la fase mvil.

La cromatografa de reparto es utilizable para la separacin de mezclas
de compuestos de polaridad media y alta. Ejemplos de este tipo de
cromatografa liquida de alta eficacia en fase reservada.
Soporte: papel Wathman responsable de la diferencia de velocidad de
desplazamiento de los solutos.

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2. Adsorcin: La separacin depende de los equilibrios de adsorcin-
desorcin de los compuestos de la mezcla, entre la fase estacionaria
slida y la fase mvil liquida i gaseosa. La fuerza con que es adsorbido un
componente depende de la polaridad de la fase mvil. En general cuanto
ms polar sea un compuesto ms fcilmente ser absorbido. La
separacin de compuestos muy polares mediante cromatografas de
adsorcin requiere la utilizacin de adsorbentes muy poco activos, o
bien, tratamientos qumicos previos para la preparacin de la muestra a
fin de reducir su polaridad.

Tipos de cromatografa:
Cromatografa en papel:
La cromatografa en papel es un proceso muy utilizado en los laboratorios para
realizar unos anlisis cualitativos ya que pese a no ser una tcnica muy potente no
requiere de ningn tipo de equipamiento.
La fase estacionaria est constituida simplemente por una tira de papel filtro. La
muestra se deposita en un extremo colocando pequeas gotas de la solucin y
evaporando el disolvente. Luego el disolvente empleado como fase mvil se hace
ascender por capilaridad. Esto es, se coloca la tira de papel verticalmente y con la
muestra del lado de abajo dentro de un recipiente que contiene fase mvil en el
fondo.
Despus de unos minutos cuando el disolvente deja de ascender o ha llegado al
extremo se retira el papel y se seca. Si el disolvente elegido fue adecuado y las
sustancias tienen color propio se vern las manchas de distinto color separadas.
Cuando los componentes no tienen color propio el papel se somete a procesos de
revelado.
Hay varios factores de los cuales depende una cromatografa eficaz: la eleccin del
disolvente y la del papel de filtro.

Cromatografa en capa fina
La fase estacionaria es una capa uniforme de un absorbente mantenido
sobre una placa, la cual puede ser de vidrio, aluminio u otro soporte.
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En cromatografa en capa fina se utiliza una placa cromatogrfica inmersa
verticalmente en un diluyente apolar; La placa cromatogrfica consiste en
una fase estacionaria polar (comnmente se utiliza slice gel) adherida a una
superficie solida con algn agente cementante. El diluyente debe ser un
compuesto lquido apolar, generalmente orgnico. Para realizar la CCF, se
debe apoyar la placa cromatografica sobre algn recipiente o cmara que
contenga la fase lquida a aproximadamente 1 cm (la distancia entre el
principio de la placa y la muestra que se desea analizar). La cromatografa en
capa fina es la combinacin de todos los colores en un papel.

Cromatografa en columna
La cromatografa en columna utiliza una columna de vidrio vertical que se llena con un
soporte slido adsorbente (fase estacionaria: los ms utilizados son gel de slice (SiO2) y
almina (Al2O3). La muestra que se quiere separar se deposita en la parte superior de este
soporte. El resto de la columna se llena con el eluyente (disolvente que constituye la fase
mvil) que, por efecto de la gravedad, hace mover la muestra a travs de la columna. Se
establece un equilibrio entre el soluto adsorbido en la fase estacionaria y el disolvente
eluyente que fluye por la columna. Debido a que cada uno de los componentes de una
mezcla establecer interacciones diferentes con la fase estacionaria y la mvil, sern
transportados a diferentes velocidades y se conseguir su separacin. As, de manera similar
a otros tipos de cromatografa, las diferencias en las velocidades de desplazamiento a travs
del medio slido se corresponden con diferencias en los tiempos de elucin por la parte
inferior de la columna para cada uno de los componentes de la muestra original, que se
recogern en fracciones diferentes.
La polaridad del eluyente afecta las velocidades relativas con las que los diferentes
componentes de la mezcla se mueven en la columna. Los disolventes polares compiten ms
eficientemente con las molculas polares de una mezcla por los lugares polares del
adsorbente. Por lo tanto, un disolvente polar desplazar las molculas, incluyendo las ms
polares, rpidamente a travs de la columna. Si el disolvente es muy polar la elucin ser
muy rpida y generalmente habr poca separacin de los componentes de la mezcla. Si por
el contrario el disolvente es muy apolar, no eluirn los compuestos de la columna. Por lo
tanto, la eleccin del eluyente es crucial para el xito de la cromatografa en columna. A
menudo se utiliza un gradiente creciente de polaridad para la elucin. La CCF se utiliza para
determinar y elegir el sistema solvente adecuado para cada separacin.
PARTES DE UN SISTEMA CROMATOGRAFICO
Fase mvil: lo constituyen los solventes, que son sustancias fluidas de
diferente polaridad, ejemplo: metanol, cloroformo, etanol, etc. La polaridad de
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la fase mvil est relacionada con su capacidad de elucin o desorcin. Los
solventes deben tener elevado grado de pureza.
Fase estacionaria: lo constituyen las sustancias adsorbentes que
generalmente se depositan sobre la placa de vidrio o columna de vidrio, en el
caso de la C. en papel, el papel whatman. Debe ser insoluble en el disolvente
que se va a utilizar para la separacin y no debe de reaccionar con las sustancias
que se van a separar.
Cmara de saturacin: que es un recipiente con una tapa que cierra
hermticamente donde se realiza el cromatograma.
Reveladores o agentes cromgenos: nos permite visualizar el recorrido el
desplazamiento. si todos los compuestos son coloreados , bastara la inspeccin
ocular para distinguir las manchas, pero en la mayora de los casos , los
compuestos son incoloros y por ello invisible en el cronograma, siendo
necesario utilizar mtodos fsicos (luz UV ) o qumicos , como vapores de iodo u
otros reactivos especiales que permitan hacer visible.
Aplicadores: son micro pipetas utilizadas en la aplicacin o sembrado de las
sustancias o cromatografiar.
Muestras: son las sustancias a cromatografiar y pueden ser: la sustancia
patrn o estndar y la sustancia problema o muestra problema.
RELACION DE FLUJOS:
Es una constante, es caractersticas para cada compuesto, siempre que se
efecte la determinacin en las mismas condiciones.
Se define como la relacin existente entre la distancia alcanzada por la
muestra problema (frente de soluto) y la distancia recorrida por el solvente
(frente de solvente).






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Frente de soluto. Es la distancia que alcanza o recorre la muestra en una cromatografa.
Frente de solvente. Es la distancia que alcanza o recorre la fase mvil en una
cromatografa.
III. MATERIALES
Cuba cromatografica (tubo de prueba)

Beaker

Capilares

Mechero

Trpode

Porta objeto

Papel filtro
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Silicagel

Rejilla

Cmara de revelado

Lpiz

IV. PROCEDIMIENTO
CROMATOGRAFIA EN PAPEL
Muestra problema: Colorantes.
Soporte: Papel Whatman N1
Sistema de solvente: Acetona: Etanol 96 (2:1)
1. En el papel Whatman apropiadamente se traz una lnea que dividiera en la
mitad el largo del papel. Desde el borde del papel hasta 1 cm se traz una lnea
en cuyo cruce se ubic el punto de origen y a continuacin se traz una lnea a
10 cm donde se ubic el frente de solvente.








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2. Se sembr con dos plumones de diferente color (rojo y negro) cinco veces cada uno en
el punto de origen.











3. Se llev la muestra a la cuba cromatografa en el cual estaba disuelto 1mL de solvente y
se sumergi pero sin hacer chocar el punto de origen con el solvente.












4. Se dej desarrollar hasta que llegue al frente de solvente.

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CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA

Soporte: Silicagel G activado
Sistema de solvente: Cloroformo: Etanol 96 (2:1)
Muestra problema: cido acetil saliclico disuelto en acetona
Revelador: Solucin etanlica de FeCl3
En el Silicagel G activado, del borde a 0.5 cm se traz y se ubic el frente de solvente y
al otro extremo y considerando una
pequea distancia se ubic dos puntos
de origen.




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Se sembr con el capilar, en un punto de origen cinco veces de cido acetil saliclico
puro. Y en el otro punto de origen cinco veces la muestra problema.

Luego se llev a un recipiente que contena 1 mL de cloroformo y luego se
tap hasta que se dej desarrollar.












Despus que se lleg hasta el frente de solvente se retir y se puso en el horno
para que sea secado.











Se retir del horno y se revel con cloruro frrico (FeCl3) .


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V. RESULTADOS

En la cromatografa en capa fina notamos que en nuestra placa
cromatogrfica, luego del revelado, las franjas que se formaron de nuestra
muestra y de la muestra pura, no tienen mucha diferencia; esto se logr
gracias a que en prcticas pasadas los procedimientos se realizaron de manera
ptima.








En la cromatografa en papel se observa que la distancia recorrida por cada
colorante es diferente.
El Rf para la cromatografa en papel es el siguiente:
Distancia del frente del solvente: 7.4cm
Distancia recorrida por el colorante 1(color rojo): 1.5cm
Distancia recorrida por el colorante 2(color negro): 5cm
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Rf
1
= 1.5/7.4 =0.20
Rf
2
= 5/7.4 =0.68







VI. CONCLUSIONES

Gracias a la cromatografa podemos determinar la pureza de muchos
compuestos, logrando as extraer de manera ptima las sustancias de ciertos
sustratos.
Asimismo comprobamos que dos sustancias no tienen la misma velocidad de
desplazamiento, como se puede observar en la imagen hay una diferencia de
colores en el papel, lo que indica que cada colorante (en este caso fue la tinta
de plumones) tiene distintas velocidades de desplazamiento.





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VII. CUESTIONARIO

1. Qu es una serie eluotropica?
Una serie eluotrpica, es un rango de sustancias de diferentes polaridades que actan
como fase mvil y que permiten observar un mejor desplazamiento sobre una fase
estacionaria.
Otra definicin que se puede dar es la ordenacin de los disolventes de acuerdo a su
capacidad relativa para desplazar solutos o componentes de una mezcla sobre un
determinado adsorbente.
Las series eluotrpicas son usadas como gua para la eleccin del solvente o
combinacin de solventes que se requerirn
para la separacin de una mezcla concreta,
sobre un determinado soporte.
2. En qu consiste la cromatografa por
HPLC y la cromatografa de gases?
Cromatografa por HPLC
Cromatografa por HPLC (High performance
liquid) o La Cromatografa lquida de alta
eficacia, es un tipo de cromatografa en
columna utilizada frecuentemente en
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bioqumica y qumica analtica. La separacin cromatogrfica en HPLC es el resultado de
las interacciones especficas entre las molculas de la muestra en ambas fases, mvil y
estacionaria
A diferencia de la cromatografa de gases, la cromatografa de lquidos de alto
rendimiento (HPLC) no est limitada por la volatilidad o la estabilidad trmica de la
muestra.
La HPLC es capaz de separar macromolculas y
especies inicas, productos naturales lbiles,
materiales polimricos y una gran variedad de
otros grupos polifuncionales de alto peso
molecular. Con una fase mvil lquida interactiva,
otro parmetro se encuentra disponible para la
selectividad, en adicin a una fase estacionaria
activa.
La HPLC ofrece una mayor variedad de fases
estacionarias, lo que permite una mayor gama de estas interacciones selectivas y ms
posibilidades para la separacin.

Cromatografa de gases
La cromatografa de gases es til para gases o para compuestos relativamente
voltiles, lo que incluye a numerosos compuestos orgnicos. En el caso de compuestos
no voltiles se recurre a procesos denominados de "derivatizacin", a fin de
convertirlos en otros compuestos que se volatilicen en las condiciones de anlisis.
Dentro de la cromatografa lquida destaca la cromatografa lquida de alta resolucin
(HPLC, del ingls High Performance Liquid Chromatography), que es la tcnica
cromatogrfica ms empleada en la actualidad, normalmente en su modalidad de fase
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reversa, en la que la fase estacionaria tiene carcter no polar, y la fase mvil posee
carcter polar (generalmente agua o mezclas con elevada proporcin de la misma, o de
otros disolvente polares, como por ejemplo metanol). El nombre de "reversa" viene
dado porque tradicionalmente la fase estacionaria estaba compuesta de slice o
almina, de carcter polar, y por tanto la fase mvil era un disolvente orgnico poco
polar.


COMPONENTES DE UN CROMATOGRAFO DE GASES
GAS PORTADOR: gas portador cumple bsicamente dos propsitos:
Transportarlos componentes de la muestra, y crear una matriz adecuada para el
detector.
REGULADOR DE LA PRESION: para garantizar que la presin sea estable.
REGULADOR DE FLUJO: para garantizar un flujo Estable.
3. Diga que es la electroforesis y cul es su fundamento.
La electroforesis es utilizada con fines analticos y que fue introducida por el qumico
sueco Arne Tiselius. El inters principal de este investigador fue la qumica de las
protenas sricas. Por su trabajo pionero en este campo, Tiselius recibi el Premio
Nobel en 1948.
La electroforesis es una tcnica para la separacin de molculas segn la movilidad de
estas en un campo elctrico a travs de una matriz porosa, la cual finalmente las separa
por tamaos moleculares y carga elctrica, dependiendo de la tcnica que se use.
La electroforesis capilar constituye una adaptacin particular de la tcnica de
electroforesis y es una tcnica de separacin que se ha desarrollado gracias a los
avances de la cromatografa lquida de alta eficacia junto con los procedimientos ms
tradicionales de electroforesis. Esta tcnica permite separar bastante bien
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biomolculas, donde la cromatografa lquida se muestra menos eficaz, y compuestos
de pequea masa molecular, difciles de estudiar por los procedimientos clsicos de
electromigracin en soporte.
Los mtodos electroforticos son de alta sensibilidad, eficacia, poder de resolucin y
versatilidad.

**Es una tcnica de separacin que consiste en el transporte de iones a travs de una
disolucin por accin de un campo elctrico.
4. Diga usted que mtodo cromatogrfico se podra aplicar en su carrera
profesional.
La cromatografa es uno de los principales mtodos para la separacin de especies
qumicas estrechamente relacionadas en mezclas complejas. La cromatografa es un
mtodo fsico de separacin basado en la distribucin de los componentes de una
mezcla entre dos fases inmiscibles, una fija o estacionaria y otra mvil.
Las tcnicas cromatogrficas son muy variadas pero las ms utilizadas son la
cromatografa por HPLC y la cromatografa de gases.
Respecto a la cromatografa lquida, la cromatografa de gases tiene la ventaja de
disponer de detectores mucho ms universales (por ejemplo, el de ionizacin de llama).
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Adems, para numerosas aplicaciones, los mtodos son ms simples, ms rpidos y
ms sensibles que los correspondientes a la cromatografa lquida de alta resolucin. La
instrumentacin requerida para cromatografa de gases tambin es mucho ms sencilla
y econmica que la empleada en HPLC. Sin embargo, en cromatografa de gases, la
influencia de la temperatura sobre la distribucin del equilibrio es considerable, a
diferencia de la cromatografa lquida. Por ello, la cromatografa de gases presenta
limitaciones en tres casos:
compuestos poco voltiles, generalmente los de peso molecular superior a 300
u.m.a.
compuestos sensibles a una elevacin de la temperatura incluso moderada
(determinados compuestos de inters biolgico)
compuestos que se encuentran en forma inica (puesto que son e n general
poco voltiles)
Por esta razn, la cromatografa de gases se emplea cuando los componentes de la
mezcla problema son voltiles o semivoltiles y trmicamente estables a temperaturas
de hasta 350-400C. En cambio, cuando los compuestos a analizar son poco voltiles y/o
termolbiles, la tcnica separativa adecuada suele ser la cromatografa lquida de alta
resolucin (HPLC).


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BIBLIOGRAFIA
DABRIO, M.V. et.al. Cromatografa de Gases. Vol. II. Series Qumica. Coleccin
Exedra. Editorial Alhambra. Espaa. 1973
GASCO, Luis. Teora y Prctica de la Cromatografa en Fase Gaseosa. Ediciones
J.E.N. Espaa. 1969.
ROWLAND, Fred W. La Prctica de la Cromatografa de Gases. Segunda Edicin.
Hewlett Packard. USA. 1977.
TRANCHANT,J. Manual Prctico de Cromatografa en Fase Gaseosa. Toray-
Mason. Espaa. 1972.
BURGET,C.A.; GREEN,L.E. and BONELLI, E.J.Chromatographic Methods in Gas
Analysis. Hewlett Packard. USA. 1979
Elementary of Gas Chromatography. Gow-Mac Instruments. 1978.
Skoog, Douglas A. y Leary, James J. (1994). Anlisis Instrumental. Armenia:
McGraw-Hill. 84-481-0191-X.

PAGINAS VISITADAS:
http://www.rettsyndrome.org.es/informacion/diccionario/electroforesis.html
http://en.wikipedia.org/wiki/Electrophoresis
http://laboratoriotecnicasinstrumentales.es/analisis-qumicos/cromatografa-de-lquidos-
hplc
http://es.wikipedia.org/wiki/Serie_eluotr%C3%B3pica
http://www.ecured.cu/index.php/M%C3%A9todo_cromatogr%C3%A1fico