Caracterización de Bacterias en El Aire en Una Estación de Metro

UNIVERSIDAD AUTNOMA METROPOLITANA
UNIDAD AZCAPOTZALCO

CARACTERIZACIN DE BACTERIAS EN EL AIRE EN UNA ESTACIN DE METRO SUBTERRNEO

Microbiologa Ambiental
Grupo: CPMAMB01
Alumno: Raymundo Guzmn Gil
Matrcula: 2121800040
Profesora:

Dra. Mara Teresa Castaeda Briones

Mxico, D.F., Marzo 2013.

A partir de 2011, ms de 120 ciudades de
todo el mundo tienen sistemas
subterrneos de transporte ferroviario
(metro), que transportan unos 200
millones de personas diariamente.

Las estaciones de metro ambiente cerrado
agentes biolgicos.

Concentraciones perjudiciales de
microorganismos patgenos o sus toxinas
en el aire podra ocurrir despus de una:

Dispersin deliberada de agentes de amenaza
biolgica.

Liberacin no intencional a partir de fuentes
naturales.

A pesar de que no hay dispersin
deliberada de agentes de amenaza
biolgica en ambientes del metro:

Se ha informado anteriormente el culto
religioso japons Aum Shinrikyo:

Dispersin en aerosol de Bacillus anthracis en
Tokio en 1993.

Sarn: Fue clasificado como arma
de destruccin masiva en la
resolucin 687 de la ONU.
La dispersin de gas nervioso sarn (un agente
de amenaza qumica) mat a 11 e hiri a ms
de 5.000 personas, en 1995.

En el metro de Tokio.

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En ausencia de un sistema de vigilancia fiable,
lo ms probable es no darse cuenta de un
incidente con agentes biolgicos, hasta que
los individuos expuestos buscan asistencia
mdica hasta varios das ms tarde.

Un sistema de alerta temprana: la deteccin
y la respuesta podra contribuir a reducir al
mnimo las consecuencias de los incidentes de
este tipo. Tanto civiles, militares y
autoridades han expresado la necesidad
urgente de los sistemas de deteccin y
vigilancia.

Detectores biolgicos deben cumplir
requisitos estrictos antes de que puedan
ser desplegadas con fines de vigilancia
fiables, por lo que se sigue trabajando en
el desarrollo, y su prueba y evaluacin.

Sensibilidad y especificidad es desafiada
durante el funcionamiento con una mezcla
compleja y dinmica (material areo biolgico
y no biolgico).

La capacidad de simular las condiciones de la
vida real depende de la disponibilidad de
informacin detallada acerca de la
composicin del aire en los ambientes
complejos y dinmicos. Esta informacin es
actualmente muy limitada.

Se realiz una caracterizacin detallada del
entorno bacteriana cultivable en el aire en la
mayor estacin de metro subterrneo en Oslo
(unos 600.000 habitantes), Noruega, de mayo
a septiembre de 2010.

En promedio, un tren sale cada minuto
durante las horas de funcionamiento de la
estacin, y la red de metro transporta
anualmente ms de 70 millones de personas.

Imagen: http://www.flickr.com

Materiales y mtodos
Los mtodos microbiolgicos, bioqumicos y
moleculares se utilizaron para clasificar
taxonmicamente los microorganismos
aislados, para investigar la virulencia y la
supervivencia asociada a propiedades tales
como: resistencia a los antibiticos, la
actividad hemoltica y la pigmentacin.
El muestreo se llev a cabo bajo techo en el
vestbulo en direccin oeste durante el da (11
am a 1 pm) y noche (2 a 4 am), y la toma de
muestras de referencia se llev a cabo al aire
libre durante el da (9 a 11 horas) en una
casilla adyacente a la entrada de la estacion.
Coleccin bioaerosoles. Las muestras de aire
fueron recolectados a travs de un muestreador
de alto volumen de aire, SASS 3100, con filtro
basado en la tecnologa de captura electret.

El instrumento SASS 3100 ofrece un flujo de aire
ajustable de entre 50 y 360 litros por minuto (lpm),
y las eficiencias de recoleccin de partculas son de
92% para las partculas en el rango (0,5-y 5,0) m.
Las concentraciones de partculas y los datos
de distribucin de tamao se midieron con un
contador de partculas ptico Aerotrak 8220;
ETI, Shoreview, MN. El instrumento estaba
equipado con una sonda de temperatura
externa y medidor de humedad.

Cultivo bacteriano. Para determinar el total
de bacterias cultivables suspendidas en el aire,
los extractos de filtro se sembraron por
triplicado utilizando un mtodo de difusin
estndar en placa sobre agar de tripticasa de
soja (TSA) y R2A complementadas con
cicloheximida para evitar el crecimiento de
hongos.
La incubacin se realiz a 30 C durante 48 h
antes de conteo de colonias. Para aerobias y
anaerobias, hasta aislar y purificar.

16S rRNA gen secuenciacin parcial (para una
sola colonia aislada y pura).

16S rRNA gen a base de clasificacin
taxonmica.


MALDI-TOF MS basada en la clasificacin
taxonmica.

Resistencia a antibitico: sobre placas de TSA
suplementado con cido nalidxico, ampicilina,
tetraciclina, estreptomicina y cloranfenicol.
Presencia o ausencia de crecimiento de las
colonias despus de incubacin a 30 C
durante 48 h.
Actividad hemoltica. Todos los aislamientos
fueron seleccionados inicialmente para la
actividad hemoltica por cultivo sobre placas
de agar Colombia suplementado con sangre
de oveja al 5%, incubacion a 30 C durante 24
a 48 h.
Las muestras que fueron clasificadas en el
genero Bacillus que mostraron la actividad
hemoltica se analizaron posteriormente para
investigar los factores asociados con la
virulencia.
Sintetasas de pptidos ribosomales.

Agrupamiento filogentico de Bacillus spp. hemoltica
aislados.

Cereulida y pptidos similares a surfactina [cromatografa
lquida espectrometra de masas (LC/MS].

Pigmentacin.

Anlisis estadstico. test de Pearson chi-cuadrado con nivel
de significancia P<0.05 para todas las pruebas estadsticas.

Resultados
Visin general de las concentraciones de bacterias en el aire y parmetros meteorolgicos
Gnero distribucin de los aislamientos bacterianos obtenidos

Distribucin de la resistencia a los antibiticos en los gneros bacterianos dominante
Actividad hemoltica. Alrededor del 22%
(87/402) de los aislados bacterianos mostr
hemlisis en la seleccin inicial en placas de
agar sangre. Estos se distribuyeron entre los
gneros de bacterias: Bacillus (87%),
Staphylococcus (11%), Erwinia (1%), y
Pseudomonas (1%).

Conclusiones

Los resultados aqu presentados pueden
ayudar a mejorar el desarrollo de los recursos
biolgicos de deteccin / vigilancia.
Los aislamientos bacterianos obtenidos se
distribuyeron en tres filos, Actinobacteria,
Proteobacteria, y Firmicutes. La proporcin de
bacterias Gram
+
>90%.
Alrededor del 48% de los aislados de cultivo
totales fueron pigmentada, mientras que slo
el 8% de los aislados de cultivo de esporas
especficos eran pigmentados.
Referencias
Dybwad, M.; Einar, G.P.; Bruheim, P.; Blarny, J.M. (2012). Characterization
of airborne bacteria at an underground subway station. .Applied and
environmental microbiology, 6:1917-1929.
Internet Consulta: (01/03/13). Pagina: Imagen: http://www.flickr.com

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