UNIVERSIDAD CENTRAL DEL EUADOR

FACULTAD DE INGENIERA QUMICA

LABORATORIO DE BIOQUMICA

PRCTICA # 6

CRECIMIENTO MICROBIANO

GRUPO N # 2

CORREA JHONNY
CHVEZ JESSICA
EGAS KATHERINE
MOREIRA MARCOS
SALAZAR JEAN PIERRE
TINTIN JHONNY




AYUDANTE DE CATEDRA:
GILDA GORDILLO

FECHA DE PRCTICA: 2014-01-09
FECHA DE ENTREGA: 2014-01-18


























RESUMEN
Se elabor la curva de crecimiento microbiano para la levadura Saccharomyces
Cerevisiae. Tambin se identific las variables que involucran en una fermentacin
discontinua. Para esto se prepar el sustrato y el inculo, necesarios donde se estudi el
crecimiento y muerte de la levadura, luego se realiz la inoculacin de manera que se
tenga el caldo de fermentacin en forma homognea, por ltimo se realiz la medicin
del peso seco que permiti elaborar nuestra curva de crecimiento en funcin del tiempo.
Se concluy que cualquier tipo de microorganismo posee su respectiva curva de
crecimiento con sus propias fases.
DESCRIPTORES
CURVA DE CRECIMIENTO MICROBIANO / LEVADURA / VARIABLES /
FERMENTACION

























CRECIMIENTO MICROBIANO
1. OBJETIVOS

1.1. Elaborar la curva de crecimiento microbiano para la levadura Saccharomyces
Cerevisiae.
1.2. Identificar las variables que involucran en una fermentacin discontinua.

2. PARTE EXPERIMENTAL
2.1. Materiales y Equipos
2.1.1. Fermentador 5 L
2.1.2. Balanza 200 g
2.1.3. Lmpara de alcohol
2.1.4. Caja petri
2.2. Sustancias y Reactivos
2.2.1. Melaza
2.2.2. Agua destilada
2.2.3. Ampicilina
2.2.4. Urea

2.3. PARTE A: PREPARACIN DEL SUSTRATO E INOCULO
2.3.1. Pesar cantidad de melaza para obtener una concentracin de 20% p/v para la
preparacin del inculo de 500mL.
2.3.2. Disolver en agua destilada estril con calentamiento y agitacin.
2.3.3. Esterilizar 20 minutos en el autoclave.
2.3.4. Adicionar ampicilina (antibitico) de 300 mg/L y urea 0,4 g/900mL.
2.3.5. Preparar la suspensin celular (levadura) 175 g en 500 mL (indicacin envase)

2.4. PARTE B: INOCULACIN
2.4.1. Alimentar todo el sustrato al fermentador.
2.4.2. Encender una lmpara de alcohol cerca de la boquilla de alimentacin y adicionar
el inoculo antes preparado.
2.4.3. Esperar que se homogenice el caldo de fermentacin.

2.5. PARTE C: MEDICIONES DE PESO SECO
2.5.1. Pesar una caja petri en la balanza analtica.
2.5.2. Sealar 20 cajas petri en funcin de la hora de toma de muestra.
2.5.3. Despus que se ha homogenizado el caldo (primera medicin), en un vaso de
precipitacin se toma un volumen por la zona de descargar del fermentador.
2.5.4. A este volumen se lo regresa al fermentador.
2.5.5. Nuevamente se vuelve a obtener un volumen de caldo en el vaso de precipitacin.
2.5.6. De este volumen se toma 5 mL y se coloca en la caja petri.
2.5.7. A la caja petri se la coloca en la estufa a una temperatura de 100C.
2.5.8. Se repite el procedimiento durante cada hora.
2.5.9. Ya que cada caja petri este seca, se registra el nuevo peso.
2.5.10. Con el mismo volumen extrado, medir BRIX y pH y consecuentemente en su
analizador de fermentacin el equipo correspondiente.

3. DATOS

3.1. Datos experimentales

Tabla 3.1-1
Datos Experimentales

N Tiempo[h] Peso[g]
1 0 4,4699
2 1 4,4702
3 2 4,477
4 3 4,4448
5 4 4,488
6 5 4,4854
7 6 4,4795
8 7 4,4877
9 8 4,5108
10 9 4,6108
11 10 4,7108
12 11 4,8725
13 12 4,9876
14 13 4,9741
15 14 4,9653
16 15 4,9843
17 16 4,982
18 17 4,971
19 18 4,9772
20 19 4,6166
21 20 4,2116
22 21 4,0153
23 22 4,0055
24 23 4,0107
25 24 4,002

3.2. Datos Adicionales
Tabla 3.2-1
Propiedades del Sustrato
Sustrato Melaza de Caa
Preparacin 20 % p/v
Aditivos rea 0,4 g/900 mL
Densidad 1,16
BRIX 21,2
pH 4
Fuente: Datos analizados antes de la inoculacin en el Laboratorio de Biotecnologa

Tabla 3.2-2
Caractersticas del fermentador
Tipo de fermentador Fermentador Discontnuo, BATCH
Capacidad, L 5
Sistema de
Calefaccin
Provisto de Focos con regulacin para el control de
temperatura
Flujo de aire, L/s 2,354 L/min


Tabla 3.2-3
Condiciones ptimas de crecimiento de levadura Saccharomyces Cerevisiae
Temperatura T. mnimas de 0.3 y 0.5C
T. mximas entre 34 y 47C
pH entre 3 y 6
Fuente: seresmodelicos.csic.es/llevat.html


4. CLCULOS

4.1. Clculo de la velocidad especfica de crecimiento

lnX = lnXo + t Ec. 4.1-1

y = mx+ b Ec. 4.1-2

y = 0,0223x + 1,3341

= m Ec. 4.1-3

= 0,0223


4.2 Clculo del tiempo de duplicacin.

l

Ec. 4.2-1

= m =

Ec. 4.2-2

td = 31,08

5. RESULTADOS

Tabla 5-1
Datos registrados para linealizacin

Tiempo ,
h
Peso seco
X g /ml Ln X
6 4,4795 1,49951143
7 4,4877 1,50134032
8 4,5108 1,50647452
9 4,6108 1,52840138
10 4,7108 1,54985774
11 4,8725 1,58360715
12 4,9876 1,60695483




Tabla 5-2
Resultados Finales

Fermentacion Microorganismo Velocidad
Especifica de
crecimiento
Tiempo de
duplicacin (h)
aerbica Saccharomyces
Cerevisiae
0,0223 31,08

Tabla 5-3
Identificacin de Fases

Fase Tiempo de Fermentacion (h)
Fase de latencia 5
Fase logartmica o exponencial 7
Fase Estacionatia 6
Fase de Muerte 6

6. DISCUSIN
En la realizacin de la prctica se observ que las cantidades de masa de
microorganismos variaron progresivamente, esto se debi por el proceso de
fermentacin en la cual iban aumentando los microorganismos hasta determinado
tiempo a continuacin se mantiene constante la vida de estos microorganismos y se
observa despus la muerte microbiana, en el registro de datos si se cumple dicha teora,
el clculo de estos no fue tan preciso pudo deberse a la mala calibracin de la balanza,
en el nmero de grados brix hubo an ms error, al tabular los datos se observ una
variacin no tan coherente ya que aumentaban y disminuan los grados brix. Por este
hecho no se tom en cuenta en los clculos.
Se recomienda mayor precisin en el momento de pesar la sustancia
8. CONCLUSIONES
8.1. El peso seco (contenido de slidos) de las clulas bacterianas que se encuentran en
una suspensin se obtiene por el secado de un volumen en un horno a 105C hasta peso
constante. Esta tcnica es til para grandes volmenes de muestra, debido a que
diferencias del orden de los miligramos representan el peso de un gran nmero de
bacterias. La desventaja de este mtodo es que componentes voltiles de la clula
pueden perderse por el secado y puede existir alguna degradacin. Tambin la muestra
seca puede recobrar humedad durante el pesado, principalmente si el ambiente tiene una
humedad relativa alta.

8.2. Todos los microorganismos tienen una temperatura ptima de crecimiento. Esto
significa que a determinada temperatura la velocidad de duplicacin (o la velocidad de
crecimiento poblacional) de los microorganismos es mayor. Hay que tener en cuenta
que no todos los microorganismos crecen en el mismo rango de temperaturas.

8.3. El efecto de la concentracin del nutriente sobre el crecimiento total es fcil de
comprender, ya que gran parte del nutriente se convierte en material celular, y por tanto,
si se limita la cantidad de nutriente se convierte en material celular. La razn del efecto


de las concentraciones muy bajas de nutriente sobre el ritmo de crecimiento es ms
incierta. Una opinin es que a estas bajas concentraciones de nutriente ste no puede
ser transportado a la clula a una velocidad suficiente para satisfacer todas las demandas
metablicas de nutriente. Es presumible que no todos los lugares transportadores estn
ocupados. Esta propiedad de alterar el ritmo de crecimiento mediante la concentracin
del nutriente se utiliza en el aparato de cultivo continuo llamado quimiostato.
8.4. El clculo del nmero de clulas que existen en una suspensin se puede llevar
a cabo mediante el recuento celular (microscopa, nmero de colonias), masa celular
(peso seco, medida del nitrgeno celular, turbidimetra) o actividad celular (grado de
actividad bioqumica con relacin al tamao de la poblacin).

9. APLICACIONES
9.1. En todos los sistemas de cultivo continuo las densidades de poblacin son
mantenidas a niveles considerablemente bajos que los que se presentan en la fase
estacionaria del crecimiento. El tipo ms simple de sistema de cultivo continuo que hay
que comprender es el llamado turbidostato. En este sistema la turbidez del cultivo es
medida fotoelctricamente y la seal elctrica se utiliza para controlar una bomba que
aade medio de cultivo a fin de diluir el cultivo a un ritmo justamente suficiente para
equilibrar el aumento de turbidez debido al crecimiento. El dispositivo est ajustado de
tal modo que una turbidez determinada puede ser mantenida indefinidamente. Si se
desea poca turbidez, el medio se aade ms rpidamente, mientras que si se desea un
alto grado de turbidez el medio se aade ms lentamente. El medio utilizado contiene
todos los nutrientes esenciales en exceso, de forma que la poblacin crece en una
manera similar a la fase exponencial. En el turbidostato el ritmo de crecimiento no es
controlado por el investigador, sino por condiciones internas del sistema tales como las
condiciones ambientales utilizadas, la especie de organismo y el medio.
Los turbidostatos son dispositivos tiles para proporcionar aportaciones continuas de
clulas en estados fisiolgicamente controlados, y pueden ser especialmente importantes
en la microbiologa industrial, campo en el que los procesos de produccin continua
suelen ser ms econmicos.

9.2. En otro tipo de dispositivo de cultivo continuo, el quimiostato, tanto la densidad de
poblacin como el ritmo de crecimiento son controlados por el investigador. Para la
regulacin del quimiostato se utilizan dos elementos: el ritmo de flujo y la
concentracin de un nutriente limitante, como una fuente de carbono, de energa o de
nitrgeno, o factor de crecimiento.

9.3. El conocimiento de la cintica de crecimiento de los microorganismos es de sumo
inters en el campo industrial, ya que permite conocer la manera de reproduccin de las
bacterias, con este conocimiento se pueden desarrollar mtodos de catalizacin e
inhibicin de stos y de prevencin en caso de que el crecimiento sea en una forma
desproporcionada y peligrosa

9.4. En el campo alimenticio, el conocimiento de la cintica de crecimiento microbiano
es un parmetro que indica la forma en que se deben colocar los preservantes en un
producto determinado.









10. ANEXOS
10.1. Grfica X=f(t) con fases identificadas (ver anexo 1)
10.2. Grfica lnX = lnX
0
+ t (ver anexo 2)
10.3. Fotografa del fermentador (ver anexo 3)

































Anexo N1


Grfica X=f(t) con fases identificadas



Figura 1







0
1
2
3
4
5
6
0 5 10 15 20 25 30
P
e
s
o

s
e
c
o

X
,

g
/
m
l

Tiempo, h
Fase de latencia
Fase exponencial
Fase estacionaria
Fase de muerte
Nombres Fecha
Universidad Central del Ecuador
Facultad de Ingeniera Qumica
Escuela de Ingeniera Qumica
Dibuja: .GRUPO 2 09-01-2014
Revisa: Gilda Gordillo 18-01-2014
Escala:



TEMA: CRECIMIENTO
MICROBIANO
Lmina

1


Anexo N2



Grfica lnX = lnX
0
+ t



Figura 2











0
1
2
3
4
5
6
0 5 10 15 20 25 30
X
,

g
/
m
l

tiempo, h
Nombres Fecha
Universidad Central del Ecuador
Facultad de Ingeniera Qumica
Escuela de Ingeniera Qumica
Dibuja: .GRUPO 2 09-01-2014
Revisa: Gilda Gordillo 18-01-2014
Escala:



TEMA: CRECIMIENTO
MICROBIANO
Lmina

2



Anexo N3
Fotografa del fermentador



Figura 3










Nombres Fecha
Universidad Central del Ecuador
Facultad de Ingeniera Qumica
Escuela de Ingeniera Qumica
Dibuja: .GRUPO 2 09-01-2014
Revisa: Gilda Gordillo 18-01-2014
Escala:



TEMA: CRECIMIENTO
MICROBIANO
Lmina

3




PASTEURIZACIN Y ESTERILIZACIN

OBSERVACIONES

JUGO PASTEURIZADO:
Conservo el sabor.
Conservo el color.
Se apreci q conservo la misma cantidad de azcar.

JUGO ESTERILIZADO:
Se apreci que perdi una cantidad de azcar el jugo era ms inspido.
Perdi sabor.
El jugo se torn ms claro que antes de la esterilizacin.

Del jugo pasteurizado
pH : 4.5