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La parte mecnica del Microscopio

La parte mecnica del microscopio comprende: el pie, el tubo, el revlver, el asa, la platina, el
carro, el tornillo macromtrico y el tornillo micromtrico. Estos elementos sostienen la parte
ptica y de iluminacin, adems permite los desplazamientos necesarios para el enfoque del
objeto.
El pie. Constituye la base sobre la que se apoya el microscopio y tiene por lo general forma de Y o
bien es rectangular
El tubo. Tiene forma cilndrica y est ennegrecido internamente para evitar las molestias que
ocasionan los reflejos de la luz. En su extremidad superior se colocan los oculares.
El revlver. Es una pieza giratoria provista de orificios en los cuales se enroscan los objetivos. Al
girar el revlver, los objetivos pasan por el eje del tubo y se colocan en posicin de trabajo, la cual
se nota por el ruido de un pin que lo fija.
La columna, llamada tambin asa o brazo, es una pieza colocada en la parte posterior del aparato.
Sostiene el tubo en su porcin superior y por el extremo inferior se adapta al pie.
La platina. Es una pieza metlica plana en la que se coloca la preparacin u objeto que se va a
observar. Presenta un orificio en el eje ptico del tubo que permite el paso de los rayos luminosos
a la preparacin. La platina puede ser fija, en cuyo caso permanece inmvil; en otros casos puede
ser giratoria, es decir, mediante tornillos laterales puede centrarse o producir movimientos
circulares.
Carro. Es un dispositivo colocado sobre la platina que permite deslizar la preparacin con
movimiento ortogonal de adelante hacia atrs y de derecha a izquierda.
El tornillo macromtrico. Girando este tornillo, asciende o desciende el tubo del microscopio,
deslizndose en sentido vertical gracias a una cremallera. Estos movimientos largos permiten el
enfoque rpido de la preparacin.
El tornillo micromtrico. Mediante el movimiento casi imperceptible que produce al deslizar el
tubo o la platina, se logra el enfoque exacto y nitido de la preparacin. Lleva acoplado un tambor
graduado en divisiones de 0,001 mm que se utiliza para precisar sus movimientos y puede medir el
espesor de los objetos.
4. Sistema ptico
El sistema ptico es el encargado de reproducir y aumentar las imgenes mediante el conjunto de
lentes que lo componen. Est formado por los oculares y los objetivos.
Los oculares. Los oculares estn constituidos generalmente por dos lentes, dispuestas sobre un
tubo corto. Los oculares generalmente ms utilizados son los de: 8X, 1OX, 12.5X, 15X. La X se
utiliza para expresar en forma abreviada los aumentos.
Los objetivos. Los objetivos producen aumento de las imgenes de los objetos y organismos y, por
tanto, se hallan cerca de la preparacin que se examina. Los objetivos utilizados corrientemente
son de dos tipos: objetivos secos y objetivos de inmersin.
Los objetivos secos se utilizan sin necesidad de colocar sustancia alguna entre ellos y la
preparacin. En la cara externa llevan una serie de ndices que indican el aumento que producen,
la abertura numrica y otros datos. Asi por ejemplo, si un objetivo tiene estos datos: plan 40/0,65
y 160/0,17, significa que el objetivo es planacromtico, su aumento 40 y su abertura numrica
0,65, calculada para una longitud de tubo de 160 mm. El nmero de objetivos vara con el tipo de
microscopio y el uso a que se destina. Los aumentos de los objetivos secos ms frecuentemente
utilizados son: 6X, 1OX, 20X, 45X y 60X.
El objetivo de inmersin est compuesto por un complicado sistema de lentes. Para observar a
travs de este objetivo es necesario colocar una gota de aceite de cedro entre el objetivo y la
preparacin, de manera que la lente frontal entre en contacto con el aceite de cedro.
Generalmente, estos objetivos son de 1 OOX y se distingue por uno o dos crculos o anillos de
color negro que rodea su extremo inferior.
Los objetivos se disponen en una pieza giratoria denominada revlver.
5. Sistema de Iluminacin
Este sistema tiene como finalidad dirigir la luz natural o artificial de tal manera que ilumine la
preparacin u objeto que se va a observar en el microscopio. Comprende los siguientes
elementos:
El espejo. Tiene dos caras: una cncava y otra plana. Goza de movimientos en todas las
direcciones. La cara cncava se emplea de preferencia con iluminacin artificial, y la plana, para
iluminacin natural (luz solar). Modernamente se prescinde del espejo en la fabricacin de
microscopios, ya que stos traen incorporada una lmpara colocada en el eje del microscopio.
Condensador. El condensador est formado por un sistema de lentes, cuya finalidad es concentrar
los rayos luminosos sobre el plano de la preparacin. El condensador se halla debajo de la platina.
El condensador puede deslizarse sobre un sistema de cremallera mediante un tornillo que
determina su movimiento ascendente o descendente.
Diafragma. Generalmente, el condensador est provisto de un diafragma-iris, que regula su
abertura y controla la calidad de luz que debe pasar a travs del condensador.
Trayectoria del Rayo de Luz a travs del Microscopio
El haz luminoso procedente de la lmpara pasa directamente a travs del diafragma al
condensador. Gracias al sistema de lentes que posee el condensador, la luz es concentrada sobre
la preparacin a observar. El haz de luz penetra en el objetivo y sigue por el tubo hasta llegar el
ocular, donde es captado por el ojo del observador.
Propiedades del Microscopio
Poder separador. Tambin llamado a veces poder de resolucin, es una cualidad del microscopio, y
se define como la distancia mnima entre dos puntos prximos que pueden verse separados. El ojo
normal no puede ver separados dos puntos cuando su distancia es menor a una dcima de
milmetro.
En el microscopio ptico, el poder separador mximo conseguido es de 0,2 dcimas de micra, y en
el microscopio electrnico, el poder separador llega hasta 10 ngstrom.
Poder de definicin. Se refiere a la nitidez de las imgenes obtenidas, sobre todo respecto a sus
contornos. Esta propiedad depende de la calidad y de la correccin de las aberraciones de las
lentes utilizadas.
Aumento del microscopio. En trminos generales se define como la relacin entre el dimetro
aparente de la imagen y el dimetro o longitud del objeto, o sea:
Aumento (A) =
objeto
Esto quiere decir que si el microscopio aumenta 100 dimetros un objeto, la imagen que estamos
viendo es 100 veces mayor que el tamao real del objeto. Para calcular el aumento de un
microscopio, basta multiplicar el aumento del ocular por el aumento del objetivo. Por ejemplo, si
estamos utilizando un ocular de 10X y un objetivo de 45X, el aumento a que estamos viendo la
preparacin ser: 1OX x 45X = 450X, lo cual quiere decir que la imagen del objeto est ampliada
450 veces.
6. Campo del Microscopio
Se denomina "campo del microscopio" al crculo visible que se observa a travs del microscopio.
Tambin podemos definirlo como la porcin del plano visible observado a travs del microscopio.
Si el aumento es mayor, el campo disminuye, lo cual quiere decir que el campo es inversamente
proporcional al aumento del microscopio. Para medir el dimetro del campo del microscopio con
cualquiera de los objetivos se utiliza el micrmetro, al que se har referencia en el siguiente punto.
Tipos de Microscopios
Existen diversas clases de microscopios, segn la naturaleza de los sistemas de luz, y otros
accesorios utilizados para obtener las imgenes.
El microscopio compuesto u ptico utiliza lentes para ampliar las imgenes de los objetos
observados. El aumento obtenido con estos microscopios es reducido, debido a la longitud de
onda de la luz visible que impone limitaciones. El microscopio ptico puede ser monocular, y
consta de un solo tubo. La observacin en estos casos se hace con un solo ojo. Es binocular cuando
posee dos tubos. La observacin se hace con los dos ojos. Esto presenta ventajas tales como mejor
percepcin de la imagen, ms cmoda la observacin y se perciben con mayor nitidez los detalles.
Microscopio estereoscpico. El microscopio estereoscpico hace posible la visin tridimensional
de los objetos. Consta de dos tubos oculares y dos objetivos pares para cada aumento. Este
microscopio ofrece ventajas para observaciones que requieren pequeos aumentos. El ptimo de
visin estereoscpica se encuentra entre 2 y 40X o aumento total del microscopio.
Microscopio de campo oscuro. Este microscopio est provisto de un condensador paraboloide,
que hace que los rayos luminosos no penetren directamente en el objetivo, sino que iluminan
oblicuamente la preparacin. Los objetos aparecen como puntos luminosos sobre un fondo
oscuro.
Microscopio de fluorescencia. La fluorescencia es la propiedad que tienen algunas sustancias de
emitir luz propia cuando inciden sobre ellas radiaciones energticas. El tratamiento del material
biolgico con flurocromos facilita la observacin al microscopio.
Microscopio de contraste de fases. Se basa en las modificaciones de la trayectoria de los rayos de
luz, los cuales producen contrastes notables en la preparacin.
Invencin del Microscopio Electrnico
En 1932, Bruche y Johnsson construyen el primer microscopio electrnico a base de lentes
electrostticas. Ese mismo ao Knoll y Ruska dan a conocer los primeros resultados obtenidos con
un microscopio electrnico Siemens, construido con lentes magnticas. As nace el microscopio
electrnico. Para 1936 ya se ha perfeccionado y se fabrican microscopios electrnicos que superan
en resolucin al microscopio ptico.
Estos logros no slo representan un avance en el campo de la electrnica, sino tambin en el
campo de la Biologa, pues son muchas las estructuras biolgicas que se han descubierto y que
revelan detalles inusitados, al observarlas al microscopio electrnico.
7. El Microscopio Electrnico
El microscopio electrnico utiliza un flujo de electrones en lugar de luz. Consta fundamentalmente
de un tubo de rayos catdicos, en el cual debe mantenerse el vaci. El ctodo est constituido por
un filamento de tungsteno, que al calentarse elctricamente emite los electrones, los cuales son
atrados hacia el nodo por una diferencia de potencial de 50.000 a 100.000 voltios. La lente del
condensador enfoca este haz y lo dirige hacia el objeto que se observa, cuya preparacin exige
tcnicas especiales. Los electrones chocan contra la preparacin, sobre la cual se desvan de
manera desigual.
Con el objetivo se enfoca la imagen, que es ampliada por la lente de proyeccin. Para variar los
aumentos en el microscopio electrnico basta variar la distancia focal de la lente proyectora.
Como los electrones no impresionan la retina del ojo humano, debe recogerse la imagen del
microscopio electrnico en una pantalla fluorescente, la cual posee una superficie impregnada con
fsforo o sulfuro de cinc. La imagen obtenida en esta pantalla puede fotografiarse.
Se acostumbra utilizar el trmino microfotografias para las fotografas tomadas a travs del
microscopio ptico y micrografa o electromicrografia para las que se toman en el microscopio
electrnico.
Los aumentos mximos conseguidos en el microscopio electrnico son del orden de 2.000.000
(dos millones de aumento!) mediante el acoplamiento al microscopio electrnico de un
amplificador de imagen y una cmara de televisin. En resumen, el microscopio electrnico consta
esencialmente de:
Un filamento de tungsteno (ctodo) que emite electrones.
Condensador o lente electromagntica, que concentra el haz de electrones.
Objetivo o lente electromagntica, que ampla el cono de proyeccin del haz de luz.
Ocular o lente electromagntica, que aumenta la imagen.
Proyector o lente proyectora. que ampla la imagen.
cPantalla fluorescente, que recoge la imagen para hacerla visible al ojo humano.
Tipos de Microscopios Electrnicos
Existen varios tipos de microscopios electrnicos, que cada da se perfeccionan ms.
El microscopio electrnico de transmisin que utiliza un haz de electrones acelerados por un alto
voltaje (cien mil voltios). Este haz ilumina una seccin muy fina de la muestra, sean tejidos, clulas
u otro material.
El microscopio electrnico de barrido se utiliza para el estudio de la morfologa y la topografa de
los elementos. Estos instrumentos utilizan voltajes cercanos a los 20.000 voltios. Las lentes
magnticas utilizan un haz muy fino de electrones para penetrar repetidamente la muestra, y se
produce una imagen ampliada de la superficie observada en la pantalla de un monitor.
El microscopio electrnico mixto tiene propiedades comunes con el de transmisin y con el de
barrido y resulta muy til para ciertas investigaciones. Hay otros microscopios analticos que
detectan seales caractersticas de los elementos que constituyen la muestra.
Con estos poderosos instrumentos, que utilizan el flujo de electrones y las radiaciones
electromagnticas as como la aplicacin de tcnicas histoqumicas y bioqumicas, adems del
empleo de marcadores radiactivos, se han logrado grandes avances en la biologa celular.
Medicin a travs del Microscopio
Muchas veces interesa al observador conocer el tamao real de los objetos o microorganismos
que est observando a travs del microscopio. Para estas mediciones pueden utilizarse varios
mtodos.
Mtodo de los micrmetros. Se utiliza para esto un micrmetro de platina o de objetivo, que
consiste en un portaobjetos en cuyo centro se halla una escala graduada (de 2 mm de longitud),
con separaciones, entre cada divisin, de una centsima de milmetro.
Adems se utiliza un micrmetro ocular que lleva una escala graduada en dcimas de milmetros.
Se coloca el micrmetro objetivo sobre la platina y se enfoca el microscopio hasta que las lneas de
la escala graduada aparezcan ntidas. Luego se hace superponer la escala del ocular y se toma
como referencia las primeras divisiones en que una lnea del micrmetro objetivo y una lnea del
micrmetro ocular coincidan o se superpongan exactamente.
Luego, por simple regla de tres, se calcula el valor en mieras de cada divisin ocular. Veamos un
ejemplo. Si 9 divisiones del micrmetro objetivo (0,09mm) equivalen a 30 divisiones del
micrmetro ocular, cada divisin del ocular equivaldr a:
0,09 = 0,003 mm = 3 micras
30
Quiere decir que para el objetivo cali-brado y el ocular utilizado, cada divisin del micrmetro
ocular equivale a 3 micras. Una vez obtenido este dato para cada objetivo en la forma que hemos
expuesto, teniendo el microscopio ocular podran hacerse todas las mediciones que se deseen.
Para medir, por ejemplo, un Paramecium de una preparacin, procedemos as: haremos coincidir
los extremos del microorganismo con las divisiones del micrmetro ocular. Si la longitud del
organismo es de 75 divisiones del micrmetro ocular, y cada divisin equivale a 3 mieras, la
longitud del Paramecium ser 75x3= 225 mieras. Tambin se pueden efectuar mediciones en el
microscopio con cmara clara y utilizando una regla. En realidad, estas medidas no son tan exactas
como cuando se utilizan micrmetros por errores que se introducen superponiendo imgenes.
8. Mantenimiento del Microscopio
El microscopio debe estar protegido del polvo, humedad y otros agentes que pudieran daarlo.
Mientras no est en uso debe guardarse en un estuche o gabinete, o bien cubrirlo con una bolsa
plstica o campana de vidrio.
Las partes mecnicas deben limpiarse con un pao suave; en algunos casos, ste se puede
humedecer con xilol para disolver ciertas manchas de grasa, aceite de cedro, parafina, etc. Que
hayan cado sobre las citadas partes.
La limpieza de las partes pticas requiere precauciones especiales. Para ello debe emplearse papel
"limpiante" que expiden las casas distribuidoras de material de laboratorio. Nunca deben tocarse
las lentes del ocular, objetivo y condensador con los dedos; las huellas digitales perjudican la
visibilidad, y cuando se secan resulta trabajoso eliminarlas.
Para una buena limpieza de las lentes puede humedecerse el papel "limpiante" con ter y luego
pasarlo por la superficie cuantas veces sea necesario. El aceite de cedro que queda sobre la lente
frontal del objetivo de inmersin debe quitarse inmediatamente despus de finalizada la
observacin. Para ello se puede pasar el papel "limpialentes" impregnado con una gota de xilol.
Para guardarlo se acostumbra colocar el objetivo de menor aumento sobre la platina y bajado
hasta el tope; el condensador debe estar en su posicin ms baja, para evitar que tropiece con
alguno de los objetivos. Gurdese en lugares secos, para evitar que la humedad favorezca la
formacin de hongos. Ciertos cidos y otras sustancias qumicas que producen emanaciones
fuertes, deben mantenerse alejados del microscopio.
9. Conclusiones
El Microscopio es: cualquiera de los distintos tipos de instrumentos que se utilizan para obtener
una imagen aumentada de objetos minsculos o detalles muy pequeos de los mismos.
El microscopio simple o lente de aumento es el ms sencillo de todos y consiste en realidad en una
lupa que agranda la imagen del objeto observado. Las evidentes limitaciones de este sistema,
conocido desde la antigedad, y el desarrollo de la ptica y de la construccin de lentes hizo que
surgieran en el siglo XVII los microscopios compuestos, diestramente utilizados por el holands
Antonie van Leewenhock en el estudio de la microfauna de los estanques y charlas. Estas
observaciones, unidas a las de Robert Hooke, establecieron la microscopia como poderosa
herramienta cientfica.
Dos lentes convexas bastan para construir un microscopio. Cada lente hace converger los rayos
luminosos que la atraviesan. Una de ellas, llamada objetivo, se sita cerca del objeto que se quiere
estudiar. El objetivo forma una imagen real aumentada e invertida. Se dice que la imagen es real
porque los rayos luminosos pasan realmente por el lugar de la imagen. La imagen es observada
por la segunda lente, llamada ocular, que acta sencillamente como una lupa. El ocular est
situado de modo que no forma una segunda imagen real, sino que hace diverger los rayos
luminosos, que al entrar en el ojo del observador parecen proceder de una gran imagen invertida
situada ms all del objetivo. Como los rayos luminosos no pasan realmente por ese lugar, se dice
que la imagen es virtual.