UNIVERSIDAD NACIONAL

DEL SANTA
FACULTAD DE INGENIERA

E.A.P:
INGENIERIA AGROINDUSTRIAL
CURSO:
MICROBIOLOGA GENERAL
ESTUDIANTE:
CRISTHIAN CORTEZ CRUZ
DOCENTE:
ETERIO ALVA MUOZ
GRUPO:
B
NVO CHIMBOTE, Octubre de !"#

PRACTICA 03
$PREPARACION DE MEDIOS
DE CULTIVO%
OB&ETIVOS GENERALES
Preparar medios de cultivo como soporte y fuente
de nutrientes para el desarrollo de los
microorganismos in vitro.
Manejar los instrumentos de uso rutinario, a la vez
que imprescindibles, en el laboratorio de
microbiologa
OB&ETIVOS ESPECIFICOS
Preparar medios de uso general en el laboratorio
Conocer los nutrientes en cada medio preparado y
su funcin que ejerce cada uno.
Identicar colonias bacterianas en forma
macroscpica
Conocer los materiales que utilizan en la
preparacin de medios de cultivo
Conocer el modo de accin del autoclave y su
funcionamiento

INTRODUCCI'N
Un medio de cultivo es un material alimenticio que se usa
en el laboratorio para el desarrollo de los microorganismos.
!na vez que "a sido preparado, un medio de cultivo puede
ser inoculado #es decir, se le a$aden organismos% y a
continuacin incubado en condiciones que favorezcan el
crecimiento microbiano. &l crecimiento de los
microorganismos es el cultivo. !n cultivo a'(nico o puro
contiene un )nico tipo de microorganismos.
*os medios de cultivo deben contener los nutrientes y
factores de crecimiento necesarios y deben estar e'entos de
cualquier microorganismo contaminante.
*os medios de cultivo contienen como mnimo+ carbono,
nitrgeno, azufre, fsforo y sales inorg,nicas. &n muc"os
casos ser,n necesarias ciertas vitaminas y otras sustancias
inductoras del crecimiento. -ambi(n se a$aden colorantes
que act)an como indicadores para detectar, por ejemplo, la
formacin de ,cido o como in"ibidores del crecimiento de
unas bacterias y no de otras.
&l agar es el principal agente solidicante utilizado en medios
bacteriolgicos. .e disuelve completamente a /001C y se
solidica al enfriarse a 201C.
A continuacin presentare un informe acerca del
procedimiento que se llev a cabo en el laboratorio
para la preparacin de medios de cultivo.
MARCO TE'RICO
I. 3e acuerdo a su consistencia, los medios de cultivo
pueden clasicarse en+
4 Lquidos: .e utilizan para el crecimiento de cultivos
puros en lote. .e denominan caldos de cultivo y no
tienen agar en su formulacin.
4 Semislidos: Contienen 0.56 de agar en su
formulacin. .e utilizan para estudiar la movilidad de las
bacterias #presencia o ausencia de 7agelo%.
4 Slidos: Contienen de /.5 a 86 de agar en su
formulacin. &stos medios inmovilizan a las c(lulas,
permiti(ndoles crecer y formar masas aisladas visibles
llamadas colonias. *as colonias permiten al microbilogo
reconocer la pureza del cultivo9 las placas que contengan
m,s de un tipo de colonia no provienen de un cultivo
puro.
II. 3e acuerdo a su composicin, los medios de cultivo
pueden clasicarse en+
4 Defnidos: es aqu(l medio de cultivo del cual se
conoce su composicin e'acta. .on muy utilizados en
estudios siolgicos. *os medios mnimos son medios
denidos que )nicamente le proporcionan al
microorganismo los nutrientes necesarios para crecer,
pero no para desarrollarse ptimamente.
4 Complejos: es aqu(l del cual no se conoce la
composicin e'acta del medio. : menudo, los medios
complejos emplean sangre, lec"e, e'tracto de levaduras,
e'tracto de carne u otras sustancias muy nutritivas pero
de las cuales se desconoce la composicin qumica
e'acta. &stos medios son muy utilizados para cultivar
bacterias desconocidas o bacterias de requerimientos
nutricionales muy complejos.
III. 3e acuerdo a su funcin, los medios de cultivo se
clasican como+
4 edios selectivos: .on aqu(llos que poseen uno o
m,s componentes a$adidos, los cuales in"ibir,n o
prevendr,n el crecimiento de ciertos tipos de especies
de bacterias y;o promover,n el crecimiento de las
especies deseadas. !no puede ajustar las condiciones
fsicas de un medio de cultivo tales como el p<, la
temperatura, para "acerlo selectivo para los organismos
de inter(s.
4 edios diferenciales: Permiten al investigador
distinguir entre diferentes tipos de bacterias con base en
alguna caracterstica observable en su patrn de
crecimiento en el medio, ya sea por produccin de alg)n
pigmento o por cambios de color en el medio debido a
indicadores de p<, o por "alos de degradacin de alg)n
componente en el medio de cultivo.
4 edios de enriquecimiento: Contienen alg)n
componente que permite el crecimiento de cierto tipo
especco de bacteria, pero no contienen sustancias
in"ibidoras.
4 edios enriquecidos: .e emplean para cultivar
microorganismos que requieren un gran n)mero de
factores de crecimiento. =eneralmente contienen
e'tractos biolgicos poco usuales como sangre, suero en
polvo, e'tracto de cerebro de res, yema de "uevo, etc.
MATERIAL ( M)TODOS
A!"#$AL"S
>eactivos para+ :gar com)n, Caldo com)n y :gar
.abouraud.
Peptona
Cloruro de sodio #?aCl%
&'tracto de carne
=lucosa
:gar
:gua destilada
Material de vidrio
@aln de fondo plano
@ureta

&quipo
@alanza
:utoclave
Cocina el(ctrica
Atros
:lgodn
Pabilo
=asa
-ijera
Papel
%#&C"D$$"'!&:
$. %reparacin del caldo com(n
/. Pesamos los reactivos necesarios para preparar 50 ml de
medio de cultivo con las sgtes cantidades+
0.B g de pectona
0.B g de ?aCl
0.8g de e'tracto de carne
8. :gregamos la mezcla a un baln de fondo plano y
disolvemos en agua destilada, llev,ndolo a ebullicin.
B. Colocar los medios preparados dentro del autoclave
para esterilizarlos durante /5 minutos, /5 lb;in8. y 850CD
o su equivalente de #/5E ' /atmsfera ' /8/CC%.
2. Prender la
autoclave y esperar a
que llegue a 850CD y /5 lb;in8. : partir de este
momento, deber,s tomar el tiempo de /5 minutos.
3eber,s tener cuidado de que la presin de la autoclave,
nunca rebase los 80 lb;in8, ni est, por debajo de los /5
lb;in8. &sto se puede controlar conectando y
desconectando la autoclave. .i es que no tiene
termostato, en caso contrario se "ar, autom,ticamente
5. -ranscurridos los /5minutos, desconecta la autoclave.
Comienza a abrir la v,lvula para liberar el vapor y que la
presin comience a bajar. *a autoclave puede abrirse
)nicamente cuando el manmetro marque cero. F:ntes
no ya que podra e'plotarG
H. *a autoclave se abre desde atr,s, procurando que
nadie quede de frente "acia donde se abre la tapa, ya
que saldr, muc"o vapor caliente que causa quemaduras.
!na vez que se abri con cuidado, con ayuda del trapo,
sacar el matraz.
I. Jaciar el medio en las cajas de Petri est(riles siguiendo
la t(cnica as(ptica. *as cajas no pueden ser destapadas
a menos que sea entre los mec"eros o dentro de la
campana de 7ujo laminar. *as tapas no se tocan por
dentro con los dedos, ni se sacan del ,rea de esterilidad.
K. La slidas, se cierran adecuadamente y se etiquetan
con el tipo de medio, equipo, grupo y fec"a de
elaboracin. =uardar en el refrigerador para utilizar la
siguiente pr,ctica.
M. Jaciar el agua de la autoclave con cuidado de no
quemarse
RESULTADOS
&)!"'C$&' D" "D$&S D" CUL!$*&:
*uego de "aber preparado los B medios de cultivo tales
como+ caldo com)n, agar com)n y agar saboraud, y ponerlos
a ebullicin, se obtuvieron B muestras de estos medios de
cultivo antes de ser puestas en la autoclave,
CUESTIONARIO
a) Glosario.
Defne los siguientes trminos
.
/. Elemento traza: un elemento traza en
un compuesto qumico que es necesario en
cantidades nmas para el crecimiento,
desarrollo y siologa de un organismo. &n
este campo, un elemento traza tambi(n
puede ser referido como micronutriente.
8. Macronutrientes: son aquellos nutrientes
que suministran la mayor parte de la
energa metablica del organismo. *os
principales son gl)cidos, protenas,
y lpidos. Atros incluyen alco"ol y ,cidos
org,nicos. .e diferencian de
los micronutrientes las vitaminas y mineral
es en que estos son necesarios en
peque$as cantidades para mantener la
salud pero no para producir energa.
B. Micronutrientes : sustancias que el organismo
de los seres vivos necesitan en peque$as
dosis. &s decir es lo que al cuerpo le falta lo
que no "ay demasiado. .on indispensables
para los diferentes procesos metablicos de
los organismos vivos y sin ellos moriran.
3esempe$an importantes
funciones catalizadoras en
el metabolismo como cofactores
enzim,ticos, al formar parte de la estructura
de numerosas enzimas #grupos prost(ticos%
o al acompa$arlas #coenzimas%.
2. Peptona:
Las peptonas son polip(ptidos formados
durante
la degradacin enzim,tica de protenas. .on
la principal fuente de nitrgeno en el medio
org,nico para el cultivo de bacterias.
Contienen amino,cidos libres y cadenas
cortas de p(ptidos, ciertas vitaminas y a
veces carbo"idratos.
/
&s soluble en agua e
insoluble en etanol y (ter
5. Cloruro de sodio: un compuesto
qumico con la frmula ?a Cl. &l cloruro
de sodio es una de las sales responsable
de la salinidad del oc(ano y del 7uido
e'tracelular de muc"os organismos.
-ambi(n es el mayor componente de la
sal comestible, es com)nmente usada
como condimento y conservante de
comida.
H. Extracto de carne: &l e'tracto de carne es
un caldo de carne muy concentrado,
normalmente de vacuno. .e usa para dar
sabor a carne a diversas recetas, y para
elaborar consom(s y sopas.
I. Glucosa: es un monosac,rido con frmula
molecular C
H
<
/8
A
H
. &s una "e'osa, es decir,
contiene H ,tomos de carbono, y es
una aldosa, esto es, el grupo carbonilo est,
en el e'tremo de la mol(cula #es un
grupo alde"do%. &s una forma de az)car que
se encuentra libre en las frutas y en la miel.
K. Agar : es un polisac,rido sin ramicaciones
obtenidos de la pared celular de varias especies
de algas de los
g(neros =elidium, &uc"ema y=racilaria entre
otros resultando seg)n la especie de un color
caracterstico. *a palabra agar viene
del malayo agarNagar, que signica jalea.
M. Autoclave: es un recipiente de
presin met,lico de paredes gruesas con un
cierre "erm(tico que permite trabajar a
alta presin para realizar una reaccin
industrial, una coccin o una
esterilizacin con vapor de agua. .u
construccin debe ser tal que resista la presin
y temperatura desarrollada en su interior. *a
presin elevada permite que el agua alcance
temperaturas superiores a los /00 1C
b) <az un diagrama de 7ujo del procedimiento a seguir
en esta pr,ctica.
PESAR
DISOLVER
COLOCAR
PRENDER
DESCONECTAR
SACAR
VACIAR
Sustancias indicadas
En 50 ml de agua
destilada
Los balones en el
autoclave
el autoclave
El autoclave transcurridos 15
min
Los balones
Los medios en cajas
petri
En el refrigerador
DISCUSIONES
3entro marco de discusin podemos enmarcar diversos
aspectos importantes y fundamentales de la pr,ctica.
3estacamos *a importancia de este laboratorio ya que no solo
se basa en la observacin y aprendizaje de la &sterilizacin,
desinfeccin, manipulacin e identicacin de materiales,
sino de comprender la importancia de los microorganismos y
como in7uyen directamente en nuestras vidas. *os grandes
"ombres de ciencia que se aventuraron a descubrir este
mundo oculto, nos proporcionaron todos sus descubrimientos,
por los cuales dedicaron pr,cticamente toda su vida y que
"oy con instrumentos y t(cnicas modernas podemos
observar, practicar y realizar en los laboratorios.
=racias a estas t(cnicas de esterilizacin e desinfeccin, tanto
bilogos, como qumicos y cientcos en general "an podido
identicar, clasicar, para luego estudiar detalladamente, a la
inmensa Jariedad de microorganismos e'istentes en todos los
lugares, Inimaginables que se puedan encontrar #desiertos,
salares, casquetes polares, profundidades
marinas, medios muy ,cidos, aguas termales, etc.% Con esto
"an podido obtener en todos los campos, tanto econmico,
industrial, sobre todo de salud, resultados enormemente
importantes para la "umanidad. : medida que evolucionamos
como especie, tambi(n los microorganismos lo "acen, y
aunque seamos la especie dominante en este planeta,
siempre estaremos ligados, o por no decir lo que es cierto,
dependeremos de los microorganismos, los cuales forman
parte importantsima de todos los sistemas vivos.
GUARDAR
VACIAR
El agua del
autoclave
CONCLUSIONES
Concluida la pr,ctica se obtuvieron B muestras de medio
de cultivo tales como caldo com)n, agar com)n y agar
saboraud, y ponerlos a ebullicin, se obtuvieron B
muestras de estos medios de cultivo antes de ser
puestas en la autoclave.
-ambi(n se pudo conocer el funcionamiento del
autoclave, que para esterilizar necesita un tiempo de /5
minutos, /5 lb;in8. y 850CD o su equivalente de #/5E '
/atmsfera ' /8/CC% y tambi(n que al prender la
autoclave, tenemos que esperar a que llegue a 850CD y
/5 lb;in8. : partir de este momento, debemos tomar el
tiempo de /5 minutos.
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
ttp!""###.microinmuno.$b.fcen.uba.ar"Seminario%inciones.tm
Lilia Serrano &00'(
)ogelio Dia*( &00+