Mtodos cromatograficos

Tipos Fase mvil Fase estacionaria

Cromatografa en
papel
Lquido Papel de celulosa.
Cromatografa en
capa fina
Lquido Gel de slice o almina.
Cromatografa de
gases
Gas
Columnas capilares de slice fundida, columnas empacadas con tierras diatomeas
hechas de tubos de vidrio o metal.
Cromatografa lquida
en fase reversa
Lquido
(polar)
Empaques de siloxano de octilo o siloxano de octadecilo.
Cromatografa lquida
en fase normal
Lquido
(menos
polar)
Empaques de slice, almina o un soporte al que se unen qumicamente grupos
polares (ciano, amino, etc).
Cromatografa lquida
de intercambio inico
Lquido
(polar)
Resinas de intercambio inico.
Cromatografa lquida
de exclusin
Lquido Empaques de pequeas partculas de slice o polmeros con red de poros uniforme.
Cromatografa lquida
de adsorcin
Lquido Partculas finamente divididas de slice o de almina.
Cromatografa de
fluidos supercrticos
Lquido
Columnas abiertas de slice fundida con recubrimientos internos de varios tipos de
siloxanos enlazados y de enlaces cruzados.

Cmo preparar una placa para cromatografa en capa fina?
La cromatografa en capa fina (CCF) es una tcnica cromatografa. La fase estacionaria es una capa uniforme de un
absorbente mantenido sobre una placa, la cual puede ser de vidrio, aluminio u otro soporte. En cromatografa en capa
fina se utiliza una placa cromatogrfica inmersa verticalmente; La placa cromatogrfica consiste en una fase
estacionaria polar (comnmente se utiliza slica gel) adherida a una superficie slida. Para realizar la CCF, se debe apoyar
la placa cromatogrfica sobre algn recipiente o cmara que contenga la fase lquida de aproximadamente 1 cm (la
distancia entre el principio de la placa y la muestra que se desea analizar)
Los productos a examinar se disolvern, cuando sea posible, en un disolvente orgnico que tenga un punto de ebullicin
lo suficientemente bajo para que se evapore despus de la aplicacin, lo ms comn es usar acetona. Frecuentemente se
emplean disoluciones al 1 %, de manera que al aplicar 2 ml resulta en la carga 20 mg de producto slido. Muchos
reactivos de revelado llegan a detectar 0.1 mg de material; por esto con esta carga puede llegarse a observar un 5 % de
impurezas.
Existen una gran variedad de micro pipetas y micro jeringuillas para realizar el proceso de siembra de la muestra a
analizar. Tambin pueden usarse tubos capilares. El proceso de siembra se realiza tocando con la punta del capilar (micro
pipeta, etc) sobre la placa preparada. Dejando una distancia al borde inferior de un centmetro aproximadamente. El
punto de aplicacin de la muestra se denomina toque.
Una vez colocado el toque se deja secar para evaporar el disolvente, de forma que en la placa solo quedar la muestra a
analizar. se anota en el cuaderno la identidad del eluyente y la relacin de los dos, o ms que se hayan utilizado.
Cromatografa en columna:
La cromatografa en columna utiliza una columna de vidrio vertical que se llena con un soporte slido adsorbente (fase
estacionaria: los ms utilizados son gel de slice (SiO2) y almina (Al2O3)) La muestra que se quiere separar se deposita
en la parte superior de este soporte. El resto de la columna se llena con el eluyente (disolvente que constituye la fase
mvil) que, por efecto de la gravedad, hace mover la muestra a travs de la columna. Se establece un equilibrio entre el
soluto adsorbido en la fase estacionaria y el disolvente eluyente que fluye por la columna. Debido a que cada uno de los
componentes de una mezcla establecer interacciones diferentes con la fase estacionaria y la mvil, sern transportados
a diferentes velocidades y se conseguir su separacin. As, de manera similar a otros tipos de cromatografa, las
diferencias en las velocidades de desplazamiento a travs del medio slido se corresponden con diferencias en los
tiempos de elucin por la parte inferior de la columna para cada uno de los componentes de la muestra original, que se
recogern en fracciones diferentes.
La polaridad del eluyente afecta las velocidades relativas con las que los diferentes componentes de la mezcla se mueven
en la columna. Los disolventes polares compiten ms eficientemente con las molculas polares de una mezcla por los
lugares polares del adsorbente. Por lo tanto, un disolvente polar desplazar las molculas, incluyendo las ms polares,
rpidamente a travs de la columna. Si el disolvente es muy polar la elucin ser muy rpida y generalmente habr poca
separacin de los componentes de la mezcla. Si por el contrario el disolvente es muy apolar, no eluirn los compuestos de
la columna. Por lo tanto, la eleccin del eluyente es crucial para el xito de la cromatografa en columna. A menudo se
utiliza un gradiente creciente de polaridad para la elucin. La CCF se utiliza para determinar y elegir el sistema solvente
adecuado para cada separacin.
Tipos de revelados:
Los reveladores cromatogrficos se usan en cromatografa de capa fina o TLC. En esta tcnica se coloca la muestra a
analizar (una gota) sobre una placa de slica-gel. Esta placa se introduce verticalmente en un vaso donde hay un
disolvente (o una mezcla de disolventes), de forma que el disolvente no toque la muestra. La slica de la placa ira
absorbiendo el disolvente (capilaridad) y la muestra tambin subir por la placa. La altura que alcance la muestra
depender del disolvente empleado (su polaridad) y de que se componga la muestra. Normalmente las muestras estn
compuestas de varias cosas, de forma que se obtienen una serie de manchas a distintas alturas. Para identificar las
muestras se usa el Rf que consiste en medir y dividir la altura que ha alcanzado la mancha entre la altura que ha
alcanzado el disolvente y hay que decir siempre que disolvente ha utilizado.
Los reveladores ms usados son:
cido fosfomolibdico (para compuestos fcilmente oxidables)
yodo (para compuestos aromticos e insaturados)
ninhidrina (para aminocidos, aminas y aminoazucares)
permanganato potsico (compuestos insaturados o fcilmente oxidables)
Propiedades de qumicos usados:
Acetona
C3H6O, CH3COCH3.

El acetona es un lquido
incoloro, de olor caracterstico
agradable, voltil, altamente
Inflamable y sus vapores son
ms pesados que el aire.
P. fusin 178,2 K
p. ebullicin 129,4 K
Masa molecular 58 g/mol
RQ: 5000
Niveles de irritacin a ojos en
humanos: 500 ppm
Mxico:
CPT: 2400 mg/m3 (1000 ppm)












Tonsil actisil ff SiO
2









Proxcedimiento experimental de la CCF












Preparar una columna cromatografa y
colocar un trozo de algodn en el cuello
de la salida
Fase estacionaria
Adicionar fase mvil a la
columna y con una varilla
elimina el aire del algodn
Adicionar ms fase mvil y
empacar la columna
vertiendo una suspensin
espesa de silise con eluyente,
permitiendo en forma
simultnea, la salida del
eluyente
Adicionar sulfato de sodio
anhdrido sobre la fase
estacionar
Llenar de la columna con
tonsil actisil FF
Adicionar Na
2
So
4
anh.
Agregar la muestra problema
Aadir la fase mvil
durante el desarrollo del
cromatograma
Recolectar las
fracciones eluidas
Tonsil actisil FF SiO
2




























Fase estacionaria
Preparas una
suspensin fluida 3:1
de Atisil FF- yeso
dental
Extender la suspensin
fluida sobre un porta
objetos y permitir su
secado
Preparar una suspensin
en metanol-cloroformo
1:3 de slice
Sumergir 2 porta objetos
unidos por sus caras en la
suspensin de slice,
separarlos y permitir su
secado
Aplicar la muestra
sobre la placa con un
microcapilar
Introducir la placa de la
cmara cromatografica
Retirar la placa y marcar
la altura alcanzada del
disolvente
Revelar la placa en el caso
de muestras incoloras
Calcula el Rf




Acetona




Bibliografa

Abbott D. Y Andews R. S., Introduccin a la Cromatoqrafa, 3a ed., Alhambra,Madrid, 1970.
vila Z. G. et a/. Qumica Orgnica. Experimentos con un
enfoque ecolqico.Direccin General de Publicaciones y Fomento
Editorial, UNAM, Mxico, 200'1
Eva Hernndez Godnez y otros (2008), Punto de fusin y sublimacin, Tcnicas bsicas para la experimentacin en qumi ca orgnica,
Ciudad Universitaria, Facultad de Estudios Superiores Cuautitln.
Qumica orgnica. Autor: Vega De Kuyper, Juan Carlos Editorial: MARCOMBO ALFAOMEGA Paginas: 316. Edicin: 2edicin. Fecha
edicin: 01-01-2000

Siempre mantenerlos alejados de fuentes de ignicin.
Para pequeas cantidades, puede absorberse con papel
y dejarlo evaporar en una campana extractora de gases.
No tirar al drenaje, pues pueden alcanzarse niveles
explosivos.
Para cantidades grandes, se puede utilizar arena,
cemento en polvo o tierra para absorberla y mantenerla
en un rea segura antes de incinerarla.