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Universidad De Oriente

Ncleo De Sucre
Escuela De Ciencias
Departamento De Qumica
Laboratorio De Bioqumica.






PRCTICA 1
AMINOCIDOS Y PROTENAS.




Profesora: Bachilleres:
Mostue, Maj Britt. Rosal, Ingris.
Martnez, Mauricio.






Cuman, Octubre de 2014









INTRODUCCIN

Existen numerosos compuestos relativamente simples, de masa molecular pequea, que
son las unidades fundamentales constituyentes de una macromolcula. Estas unidades
son los aminocidos, los cuales son molculas orgnicas con un grupo amino (-NH
2
) y
un grupo carboxilo (-COOH), los ms frecuentes y de mayor inters son aquellos que
forman parte de las protenas. En la naturaleza solo hay especies diferentes de
aminocidos que se unen para dar lugar a cadenas llamadas pptidos o polipptidos, que
se denominan protenas cuando la cadena polipeptdica supera una cierta longitud (entre
50 y 100 aminocidos) o la masa molecular total supera las 5000 uma y, especialmente,
cuando tienen una estructura tridimensional estable definida.

La nica diferencia entre los aminocidos radica en las propiedades qumicas de los
grupos R. En solucin acuosa neutra, los aminocidos estn en forma inica es decir,
con una carga positiva y una negativa dentro de la misma molcula. Este tipo de especie
qumica se llama zwitterion. Todos los aminocidos neutro, tanto polares como no
polares, tienen su punto isoelctrico a un pH ligeramente cido, En este punto la carga
neta del aminocido es nula ya que los dos grupos disociables tienen su carga de signo
contrario y compensada. Las protenas desempean un papel fundamental para la vida y
son las biomolculas ms verstiles y diversas, son imprescindibles para el crecimiento
del organismo y realizan una enorme cantidad de funciones diferentes.

Esta prctica se realiz con el objetivo de verificar las propiedades generales de los
aminocidos y las protenas mediante tcnicas y pruebas especficas como es el caso de
la prueba de Biuret, de igual manera pudimos identificar aminocidos y protenas en
distintas partes del cuerpo y en alimentos que a diario se consumen. Las protenas
ocupan un lugar de mxima importancia entre las molculas constituyentes de los seres
vivos (biomolculas). Prcticamente todos los procesos biolgicos dependen de la
presencia o la actividad de este tipo de molculas.












RESULTADOS Y DISCUSIN

Propiedades generales de las protenas y los aminocidos.

Reaccin de Biuret.
Se utiliza para verificar la presencia de protenas y aminocidos, una coloracin prpura
indica presencia de protenas, una azul aminocidos.
Tabla 1. Observaciones obtenidas al realizar la prueba de Biuret.
Soluciones al 2% Observaciones
Asparagina Coloracin azul cielo y formacin de
precipitado
Alanina Coloracin azul cielo
Glicina Coloracin azul cielo
Albumina Coloracin prpura
Gelatina Coloracin prpura

Se observ que las soluciones de asparagina, alanina y glicina reaccionaron generando
un color azul claro, lo que indica la presencia de aminocidos. Los aminocidos no
reaccionan con el reactivo de Biuret, ya que estos no poseen enlaces peptdicos en sus
molculas. Mientras que la albumina y la gelatina, tomaron un color prpura, esto
verifica la presencia de protenas. El color prpura se debe a la formacin de un
complejo de coordinacin en medio alcalino entre los pares de electrones libres del
nitrgeno del enlace peptdico (- CO- NH -) y los iones Cu que estn en el reactivo de
Biuret.

Dilisis de una protena.
Consiste en preparar una solucin de albumina mediante la filtracin de la clara de
huevo, la cual se coloca a dializar para permitir la separacin de micromolculas de las
macromolculas.









Tabla 2. Observaciones al realizar las pruebas dentro y fuera de la bolsa.
Soluciones/Pruebas Observaciones
Fuera de la bolsa/Biuret Coloracin azul
Dentro de la bolsa/Biuret Coloracin prpura
Fuera de la bolsa/Nessler Coloracin amarillo plido

Se demostr que durante la dilisis la protena queda en la bolsa, esto se debe a que estas
son formadas por un gran nmero de unidades estructurales simples repetitivas
(macromolculas) y no pasan a travs de los poros de la bolsa de celofn. Por otro lado
al realizar la prueba de Nessler a la solucin del beaker indic la presencia de amonio,
por lo que se puede afirmar que las micromolculas pasan a travs de la bolsa.
Prueba de cistena.
Esta prueba se basa en la formacin de un precipitado negro que indica la presencia
de enlaces disulfuro en protenas.
Tabla 3. Observaciones obtenidas al realizar la prueba de la cistena.
Protena Observaciones
Albumina Se form un precipitado negro
Gelatina No hubo reaccin

Se observ que en la solucin de albumina existen enlaces disulfuros que reaccionan con
la adicin de Pb(NO
3
), esto se pudo detectar mediante la formacin de un precipitado
negro de sulfuro de plomo.

Reaccin xantoproteica.









Esta prueba sirve para detectar grupos aromticos en los grupos R de los
aminocidos.
Tabla 4. Observaciones obtenidas al realizar la prueba xantoproteica.







Se comprob que solo el grupo R de la fenilalanina posee carcter aromtico, ya que fue
la nica solucin que reaccion generando el color esperado. Esto se verific con el
material bibliogrfico consultado.


Obtencin de la casena de la leche.
Al agregar alrededor de 20 ml de cido actico la casena precipit sin embargo al
momento de filtrar no se eligi el mtodo adecuado, la filtracin se hizo a travs de la
bomba que estaba en el laboratorio perdindose gran cantidad del aminocido. Se coloco
Aminocidos Observaciones
Asparagina Incolora
Alanina Incolora
Fenilalanina Amarilla
Glicina Incolora
Cistena Incolora









en el desecador lo poco que se obtuvo pero se pudri por lo tanto no se pudo reportar el
rendimiento de casena en esta experiencia. Ver anexos.
Hidrolisis de la protena.
Al colocar cierta protena en hidrolisis parcial durante cierto tiempo los aminocidos que
forman parte de las protenas se separan y quedan en el filtrado, destruyendo
completamente al triptfano, parte de la serina y la treonina.

Separacin de los aminocidos de una mezcla por cromatografa
bidimensional.
La cromatografa bidimensional sirve para detectar la presencia de distintos aminocidos
a travs de soluciones patrones.
Tabla 5. Distancias recorridas por los solventes patrones en el papel cromatgrafico y
en el hidrolizado.
Papel Solvente 1 E (cm) Solvente 2 E (cm)
Patrn 16,3 0,1 15,3 0,1
Uas 15,7 0,1 13,5 0,1

Tabla 6. Distancias recorridas por los aminocidos patrones en cada solvente.
Aminocido Solvente 1 E (cm) R
f
E (cm) Solvente 2 E (cm) R
f
E (cm)
Asparagina 11, 1 0,1 0,64 0,1 0,6 0,1 0,04 0,1
Cistena 11,8 0,1 0,73 0,1 0,3 0,1 0,02 0,1
Fenilalanina 12,7 0,1 0,78 0,1 5,7 0,1 0,37 0,1
Alanina 12,7 0,1 0,77 0,1 2,3 0,1 0,16 0,1
Glicina 10,6 0,1 0,65 0,1 1,5 0,1 0,10 0,1









Tabla 7. Distancias recorridas por los aminocidos presentes en los hidrolizados.
Hidrolizado Mancha Solvente 1 E (cm) R
f
E (cm) Solvente 2 E(cm) R
f
E (cm)

Uas
1 9,4 0,1 0,59 0,1 2,8 0,1 0,21 0,1
2 11,2 0,1 0,71 0,1 8,7 0,1 0,64 0,1
3 14,2 0,1 0,90 0,1 - -

En el caso de las uas se formaron tres manchas en la cromatografa bidimensional, la
primera mancha producto del solvente 1 obtuvo un R
f
de 0,59 que es tpico del
aminocido glicina, la segunda mancha tuvo un R
f
de 0,71 lo que permite inferir que es
la cistena, la tercera mancha tuvo un R
f
de 0,90 el cual no est en los R
f
patrones, sin
embargo esta mancha puede ser producto de otro aminocido presente como es el caso
de la prolina o la metionina, las cuales se encuentran presente en gran cantidad. En
cuanto al solvente 2 solo se pudo apreciar dos manchas, la primera con un R
f
de 0,2 a
partir de los datos obtenidos se corroboro que era la cistena. La otra mancha no
coincida con ningn R
f
de los patrones, lo que nos sugiere que es cualquier otro
aminocido como la prolina o metionina. La protena estudiada posee varios
aminocidos pero solo en el papel se reflejan aquellos que estn presentes en gran
cantidad y aquellos que no son destruidos por la hidrlisis cida.

Determinacin del punto isoelctrico de un aminocido por titulacin
potenciomtrica.
Por medio de la titulacin potenciomtrica se puede determinar un punto en donde los
aminocidos la carga neta es nula.
Tabla 8. Valores de pH y volumen de NaOH 2,5 mol/l para la titulacin de la
glicina.

















Grafica 1. Curva de valoracin potenciomtrica para determinar el punto
isoelctrico de la glicina.

V NaOH (ml)
pH
0 2,11
0,5 2,16
1 2,23
1,5 2,32
2 2,4
2,5 2,51
3 2,62
3,5 2,83
4 2,97
4,5 3,27
5 3,96
5,5 7,33
6 8,01
6,5 8,29
7 8,46
7,5 8,61
8 8,7
9 8,9
10 9,05
11 9,19
12 9,33
13 9,46
14 9,56
15 9,67
16 9,81
17 9,95
18 10,05
19 10,27
20 10,53
21 10,84
22 11,64
23 12,18











La glicina por ser un aminocido neutro, se establece dos equilibrios en solucin
acuosa entre tres formas inicas distintas. Este equilibrio est determinado por
las constantes del grupo carboxilo K
C
y del grupo amino K
N
.
La contante de equilibrio del grupo carboxilo (K
C
) relaciona las formas inicas I
y II.

[

] []
[ ]

Si se utiliza la frmula de la ecuacin de Henderson-Hasselbalch, entonces:


[

]
[ ]

[]
[]

La constante de equilibrio del grupo amino (K
N
) relaciona las formas inicas II y
III.
0
2
4
6
8
10
12
14
0 5 10 15 20 25










[ ] []
[ ]


Si se utiliza la frmula de la ecuacin de Henderson-Hasselbalch, entonces:

[ ]
[ ]

[]
[]


Las formulas ionicas y equilibrios de los aminocidos en funcin del pH del
medio.
H
H
3
NCCOOH H
H H
3
NCCOO H
I H H
2
NCCOO
pH < 5 II H
5 < pH > 7 III
pH > 7

La forma II corresponde al el ion dipolar o zwitterion en la que el grupo
carboxilo y el grupo amino estn disociados, por lo que la carga neta del
aminocido es nula, en este punto se le llama punto isoelctrico. A este pH el
aminocido no presenta movilidad electrofortica, el punto isoelctrico (PI) de
los aminocidos neutros como la glicina se localiza entre 6 y 8. Este punto se
calcula como la media aritmtica de los pK
N
y
.



En el caso de la glicina el PI es aproximadamente 6,04; ya que pK
N =
2,22

y

pKc= 9,86.









CONCLUSIONES

En la experiencia 1, se pudo distinguir cmo reaccionan los aminocidos y las
protenas con el reactivo de Biuret.

Se corrobor que durante la dilisis de la albumina solo las micromolculas
como los iones amonio pasan a travs de la bolsa de celofan.

Se pudo observar que solo la albumina reacciona con la adicin de Pb(NO
3
),
esto es gracias a los grupos tioles que contiene.

Se confirm que solo la fenilalanina reacciona en la prueba xantoproteica, ya que
esta es el nico aminocido que posee grupo R aromtico.

Se comprob que la cromatografa bidimensional es una excelente tcnica para
identificar aminocidos presentes en una protena dada, como es el caso de las
uas donde se pudo conseguir cistena y glicina con una mancha muy
pronunciada.















RECOMENDACIONES

Las muestras problemas deben ser preparadas por el tcnico del laboratorio para
que as el estudiante no sepa que aminocido o protena se tiene.

La casena se debe filtrar por gravedad y colocarla en reposo para que se pueda
separar en fases y sea ms fcil de filtrar.



BIBLIOGRAFA

Mostue, M.; 1999. Guia para la Asignatura Terico Prctica Bioqumica de la
licenciatura en qumica. Cuman, Venezuela.

Murray, R.; Granner, D. y Mayes, P. 2002. Bioqumica. 14 Edicin. Editoral
Limusa. Mxico.

Gonzlez, E.; Bucio, P.; Damin, F.; Cortez, L. y Perez, J. 2009. Manual de
bioqumica. 3 Edicin. Mxico.















ANEXOS
Reaccin Xantoproteica(naranja)
Albumina y gelatina.

Hidrolisis de la albumina
Solucin dentro de la bolsa





















Papel cromatrografico del hidrolizado de uas.




Casena podrida