CENTRO NACIONAL DE METROLOGIA

MERCOSUR y Chile/MA2-2008
620-Q003-0127-PA

2.1 Recomendaciones generales para mejorar

la calidad de las mediciones.

Presenta: Q.F.B. Alicia Guevara Hernndez.

aguevara@cenam.mx

Divisin Metrologa de Materiales

Metlicos
Noviembre 2008

620-Q003-0127-PA

Temas

Recomendaciones generales

Recomendaciones para espectrometra de absorcin

atmica con atomizacin por flama (EAAF).

Recomendaciones para espectrometra de absorcin

atmica con atomizacin por generador de hidruros
(EAA-GH).

Recomendaciones para espectrometra de absorcin

atmica con atomizacin por generador de vapor fro
(EAA-VF).

Discusin general.

22

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Proceso de Calificacin de equipo (CE)

El proceso total de aseguramiento de

que un instrumento es adecuado para
el uso propuesto y que su
funcionamiento est de acuerdo a las
especificaciones establecidas por el
usuario y por el proveedor.

620-Q003-0127-PA

Proceso de Calificacin de equipo (CE)

Calificacin del Diseo
(CD)

Define
las
especificaciones
funcionales
y
operacionales del instrumento, y detalla las
decisiones conscientes en la seleccin del
proveedor.

Calificacin de Instalacin
(CI)

Establece que el instrumento es recibido de acuerdo

a como se dise y especific, que est
adecuadamente instalado en el ambiente que se
seleccion, y que es apropiado para la operacin del
instrumento.

Calificacin Operacional
(CO)

El proceso en donde se demuestra que un

instrumento
funcionar
de
acuerdo
a
la
especificacin
operacional
en
el
ambiente
seleccionado.

Calificacin del
Funcionamiento (CF)

El proceso en donde se demuestra que un

instrumento funciona de acuerdo a la especificacin
adecuada para su uso rutinario.

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Espectrometra de absorcin atmica con

atomizacin por flama
Principio
Una muestra es aspirada y llevada a una flama y atomizada. Un haz
de luz es dirigido a travs de una celda donde la muestra es
atomizada y posteriormente es dirigida a travs de un
monocromador y un detector (tubo fotomultiplicador) que mide
la cantidad de luz absorbida por el elemento atomizado en la
flama.
La cantidad de energa absorbida en esta longitud de onda
caracterstica es proporcional a la concentracin del elemento en
la muestra sobre un intervalo limitado de la concentracin de
acuerdo a la ley de Lambert -Beer.
Debido a que cada elemento tiene su propia y caracterstica
longitud de onda, es utilizada una lmpara compuesta por este
elemento, lo cual hace este mtodo libre de interferencia
espectrales.

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Concentracin caracterstica

Puede ser calculada con la ecuacin:

CC= Concentracin del MRC (4mg/L) x 0,0044

Absorbancia del MRC (4mg/L)

6 6

Los valores de concentracin caracterstica para cada

elemento en la longitud de onda principal que es
proporcionada dada por el proveedor del equipo.

Conociendo los valores de sensibilidad, esto permite al

operador predecir el intervalo de absorbancia, el cual ser
observado para un intervalo de concentracin del elemento
de inters.

2007620-Q003-0127-PA

Concentracin caracterstica
Pasos
Se emplear la lmpara de cobre.
Se indicar la longitud de onda de 324,8 nm, slit y mA .correspondientes y
permitiendo un tiempo de calentamiento
El tiempo de integracin ser el que se emple normalmente en el anlisis.
Encienda la flama y permita un calentamiento de 10 minutos, aspirando agua.
Introduzca el capilar en la disolucin de 4 mg/L de Cu, tome 10 lecturas.
Substituya el valor en la frmula siguiente:
CC= Concentracin del MR (4 mg/L) x 0,0044
Absorbancia del MR (4 mg/L)
Criterio de aceptacin
Tomado de tablas =0,077 mg/L con 20 %
valor mximo 0,0924
valor mnimo 0,0616

77

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Concentracin caracterstica

Recomendaciones:

Determinar la concentracin caracterstica antes

de iniciar las mediciones de las muestras.

Con los datos obtenidos prepare una carta de

control.

8 8

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Carta de Control del Espectrofotmetro de

Absorcin Atmica (Llama)
0.1

Concentracin (mg/kg)

0.095
0.09
0.085
0.08
0.075
0.07
0.065
0.06
0.055
1

10

11

12

13

14

15

16

17

18

19

20

21

22

23

24

25

Das

99

Mediciones

+ 20% Tolerancia recomendada.

- 20% Tolerancia recomendada.

Concentracin Caracterstica.

Lim. Control sup.

Lim. Control inf.

Lim. Confianza sup.

Lim. Conf ianza inf.

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Recomendaciones Generales

10

Aplicar las buenas prcticas de laboratorio y de medicin.

Conservar los MRC de acuerdo a las condiciones de temperatura

recomendadas en el certificado.

En la preparacin de las disoluciones empleada en los puntos de la curva

calibracin, igualar la matriz con la de la muestra.

Emplear materiales de referencia certificados.

Validar los mtodos.

Si es necesario hacer alguna dilucin de la muestra considerar lo

siguiente:

Transferir en un recipiente el volumen necesario para tomar la

alcuota y desechar el sobrante, nunca regresarlo a la botella.

No tomar alcuotas menores a 5 mL, utilizar material de vidrio

calibrado.

620-Q003-0127-PA

Recomendaciones generales EAAF

1. Identificar y mantener bajo control todas las interferencias.
2. Optimizacin del sistema de introduccin de muestra, quemador,
nebulizador, flama.
4. Medir dentro del intervalo de absorbancia del intervalo de trabajo.
5. Determine el tiempo de integracin adecuado.
6. Seleccione las concentraciones adecuadas para mejor exactitud.
7. Prepare adecuadamente las muestras, blancos, materiales de referencia
para la calibracin analtica y control.
8. Incluir en la secuencia de medicin materiales de referencia de control.
9. Mantener el equipo dentro de un programa de mantenimiento.

11 11

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Recomendaciones para la medicin por

EAA-GH

12 12

Permitir el calentamiento de la lmpara hasta obtener la mxima

energa.

Verificar la limpieza de las ventanas de la celda de cuarzo, en caso de

estar sucias limpiarlas con agua destilada y secar al aire o con
nitrgeno.

Contar con un juego de accesorios (chemifold, tubera y celda de

cuarzo etc.) para las mediciones realizadas con NaBH4 como agente
reductor.

Alinear la mantilla de calentamiento de forma que se obtenga la

mnima absorbancia al momento de colocar la celda de cuarzo, el valor
mximo para esta absorbancia est dado en el manual del equipo. Si
no se obtiene este valor, es posible que sea necesario acondicionar la
celda de cuarzo (revisar las recomendaciones en el manual del
instrumento).

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Recomendaciones para la medicin por

EAA-GH

13 13

En el sistema de inyeccin de flujo, es importante verificar el buen

estado de las mangueras.

Optimizar el flujo de las disoluciones acarreadora (HCl 10 %) y

reductora (NaBH4 2 % en NaOH 0,05 %) de acuerdo al manual del
equipo. Optimizar el flujo de argn necesario para obtener la mejor
seal del analito.

En el bloque de separacin gas lquido del sistema de inyeccin de

flujo es importante cambiar el filtro cada vez que se requiera.

La manguera usada para introducir la muestra a la celda de cuarzo

debe estar perfectamente seca sin gotas adheridas en su interior.

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Recomendaciones para la medicin por

EAA-GH

14 14

En el sistema de inyeccin de flujo, es importante verificar el buen estado

de las mangueras.

Optimizar el flujo de las disoluciones acarreadora (HCl 10 %) y reductora

(NaBH4 2 % en NaOH 0,05 %) de acuerdo al manual del equipo.
Optimizar el flujo de argn necesario para obtener la mejor seal del
analito.

En el bloque de separacin gas lquido del sistema de inyeccin de flujo

es importante cambiar el filtro cada vez que se requiera.

La manguera usada para introducir la muestra a la celda de cuarzo debe

estar perfectamente seca sin gotas adheridas en su interior.

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Recomendaciones para la medicin

de As por EAA-GH

Es necesario realizar una pre-reduccin del As(V) a As(III), como parte crtica
se considera el tiempo de pre-reduccin.

El reactivo ms utilizado para este fin es el yoduro de potasio (KI) y se

recomienda utilizarlo con cido ascrbico para prevenir la oxidacin por el
aire del yoduro a triyoduro. El KI solo puede reducir al arsnico en un medio
acido fuerte, lo cual se asegura adicionando cido clorhdrico concentrado.
As5+ + I As3+ + I+

Para la pre-reduccin se recomienda tomar una alcuota de la muestra y

ponerla en contacto con 10 mL de una disolucin que contenga KI al 5 % y
cido ascrbico al 5 % y adicionar 10 mL de HCl concentrado. Se recomienda
dejar en reposo esta mezcla durante 24 h y aforar con agua.

En el desarrollo de nuestra metodologa observamos que 5 horas es

suficiente tiempo para pre-reducir la muestra en una concentracin de 10
g/kg; sin embargo para efecto prctico de la medicin empleamos un tiempo
de 24 horas.

La etapa de pre-reduccin debe realizarse en la muestra, en el material de

referencia de control y en las disoluciones de calibracin.

15 15

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Recomendaciones para la medicin de

As por EAA-GH

16 16

Es necesario realizar una pre-reduccin del As(V) a As(III) para que se

lleve a cabo la formacin del hidruro. Como parte crtica se considera el
tiempo de pre-reduccin.

Para la pre-reduccin se recomienda tomar una alcuota de la muestra y

ponerla en contacto con 10 mL de una disolucin que contenga KI al 5 %
y cido ascrbico al 5 % y adicionar 10 mL de HCl concentrado. Se
recomienda dejar en reposo esta mezcla durante 24 h y aforar con agua.

En el desarrollo de nuestra metodologa observamos que 5 horas es

suficiente tiempo para pre-reducir la muestra en una concentracin de 10
g/kg; sin embargo para efecto prctico de la medicin empleamos un
tiempo de 24 horas.

La etapa de pre-reduccin debe realizarse en la muestra, en el material

de referencia de control y en las disoluciones de calibracin.

Se recomienda cuantificar utilizando el mtodo de interpolacin entre dos

puntos para la calibracin analtica.

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Recomendaciones para la medicin de

As por EAA-GH

1717

Para generar el hidruro de arsnico (AsH3) que es una especie ms voltil

que el As3+, se utiliz el borohidruro de sodio al 0,2 % con hidrxido de
sodio al 0,05 %, esta reaccin se realiza inmediatamente antes de la
medicin, utilizando para este fin el sistema de anlisis por inyeccin de flujo
(FIAS) donde se utiliza como carrier cido clorhdrico al 10 % , la reaccin
que se tienes es:
As3+ + 3BH4 + 3H+ AsH3 + 4BH3
BH3 +3H2O H3BO3 +3H2

Permitir el calentamiento de la lmpara hasta obtener la mxima energa.

Verificar la limpieza de las ventanas de la celda de cuarzo, en caso de estar

sucias limpiarlas con agua destilada y secar al aire o con nitrgeno.

Contar con un juego de accesorios (chemifold, tubera y celda de cuarzo etc.)

para las mediciones realizadas con NaBH4 como agente reductor.

Alinear la mantilla de calentamiento de forma que se obtenga la mnima

absorbancia al momento de colocar la celda de cuarzo, el valor mximo para
esta absorbancia est dado en el manual del equipo. Si no se obtiene este
valor, es posible que sea necesario acondicionar la celda de cuarzo (revisar
las recomendaciones en el manual del instrumento).

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0
0

5
h

r
e

r
e

AS- EAAF-GH-experimentos.xls

18 18

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Recomendaciones para la medicin de

As por EAA-GH

Recomendaciones para la medicin por

EAA-GVF

1919

Permitir el calentamiento de la lmpara hasta obtener la mxima

energa.

Verificar la limpieza de las ventanas de la celda de cuarzo, en caso de

estar sucias limpiarlas con agua destilada y secar al aire o con
nitrgeno.

Contar con un juego de accesorios (chemifold, tubera y celda de

cuarzo etc.) para las mediciones realizadas con cada agente reductor.

Alinear la mantilla de calentamiento de forma que se obtenga la

mnima absorbancia al momento de colocar la celda de cuarzo, el valor
mximo para esta absorbancia est dado en el manual del equipo. Si
no se obtiene este valor, es posible que sea necesario acondicionar la
celda de cuarzo (revisar las recomendaciones en el manual del
instrumento).

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Recomendaciones para la medicin por

EAA-GVF

2020

En el sistema de inyeccin de flujo, es importante verificar el buen

estado de las mangueras.

Optimizar el flujo de las disoluciones acarreadora y reductora de

acuerdo al manual del equipo. Optimizar el flujo de argn necesario
para obtener la mejor seal del analito.

En el bloque de separacin gas lquido del sistema de inyeccin de

flujo es importante cambiar el filtro cada vez que se requiera.

La manguera usada para introducir la muestra a la celda de cuarzo

debe estar perfectamente seca sin gotas adheridas en su interior.

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Recomendaciones para la medicin por

EAA-GVF

2121

En el sistema de inyeccin de flujo, es importante verificar el buen estado

de las mangueras.

Optimizar el flujo de las disoluciones acarreadora (HCl 10 %) y reductora

(NaBH4 2 % en NaOH 0,05 %) de acuerdo al manual del equipo.
Optimizar el flujo de argn necesario para obtener la mejor seal del
analito.

En el bloque de separacin gas lquido del sistema de inyeccin de flujo

es importante cambiar el filtro cada vez que se requiera.

La manguera usada para introducir la muestra a la celda de cuarzo debe

estar perfectamente seca sin gotas adheridas en su interior.

Evitar la acumulacin de vapor de agua en la celda de cuarzo

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Recomendaciones para la medicin por

EAA-GVF

22 22

Se recomienda el uso de material de vidrio para la

preparacin de las disoluciones intermedias para los
calibrantes las muestras.

Se sugiere el uso de algn agente oxidante con el fin de

estabilizar el mercurio, alguno puede ser el dicromato de
potasio.

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Recomendaciones para la medicin por

ICPAES
En ICPAES, pueden existir diferentes factores que influyen en la
variabilidad de los resultados, los cuales pueden minimizarse de la
siguiente manera:
1.
2.

Fugas en el gas acarreador del nebulizador.

Posible bloqueo en el nebulizador o en el tubo inyector de la antorcha.
Insuficiente presin en el drenaje de la cmara de spray.

3.

Verificar que la calidad del argn sea la adecuada y no est

contaminado con algn hidrocarburo.
Hacer pruebas de fugas para el argn:

4.

23 23

Revisar y mantener en buenas condiciones el sistema de

introduccin de muestra.
Revisar el plasma: solid plasma, se llama as cuando no tiene
el canal central, lo que implica que hay una fuga debido a:

Presurizar la lnea y cerrar las llaves y esperar (la presin deber

mantenerse)
Evaluar el nebulizador con disolucin jabonosa libre de fosfatos.

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Recomendaciones para la medicin por

ICPAES
Evaluacin del desempeo instrumental:
1.

Preparar una disolucin multielemental y medirla.

2.

Suponiendo que la seal esperada para cada uno de ellos

es 14000, 37000 y 25000 cps respectivamente.
Si obtiene menor intensidad en todos los elementos
medidos, posiblemente se tiene un problema en la
introduccin de muestra, revisar:
Tubera.

3.
4.

5.
6.

24 24

Por ejemplo Mn, Fe y Cd.

Velocidad de la bomba peristltica es incorrecta.

El nebulizador est parcialmente obstruido.
Argn no es el adecuado.
Problema en la radiofrecuencia.

Si slo dos de ellos se mantienen, puede deberse a la

preparacin.
Si todos incrementan la seal, pudo haberse contaminado
con hidrocarburos.

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Recomendaciones para la medicin por

ICPAES
Optimizacin del mtodo de medicin:
Si va a realizar una medicin simultnea de los analitos debe tener
en cuenta lo siguiente:

25 25

Los parmetros optimizados (flujo de nebulizador, flujo de gas

auxiliar, radiofrecuencia, velocidad de la bomba peristltica, etc.)
sern los mismos para todos los analitos a medir.
Optimice de acuerdo a las caractersticas de los elementos
manteniendo la radiofrecuencia con las condiciones
recomendadas.
Ajuste el flujo de nebulizacin y del gas auxiliar. Deje al final la
velocidad de la bomba peristltica.
Por cada parmetro que ajuste, revise que no afecte demasiado
la seal del ruido de fondo (background) y a la seal de los
elementos a medir, recuerde que se pueden ajustar los
parmetros y benefician a unos elementos pero a otros no.

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Recomendaciones para la medicin por

ICPAES
Optimizacin del mtodo de medicin:

26 26

La finalidad es trabajar con bajo ruido de fondo para todos

los analitos a medir optimizando los parmetros descritos
anteriormente.

Revise continuamente con un blanco reactivo las seales

obtenidas.

Evale el intervalo lineal y el lmite de deteccin.

Permita un tiempo razonable de estabilizacin del equipo

a partir de que se enciende, aproximadamente 2 horas.
Esto deber ser evaluado por el usuario.

620-Q003-0127-PA

Recomendaciones para la medicin por

ICP-AES-GH

2727

Permitir un tiempo razonable de estabilizacin del equipo a partir de que se

enciende, aproximadamente 2 horas.

Realizar el paso de pre reduccin donde aplique.

Optimizar los parmetros de medicin considerando: la radiofrecuencia, la

velocidad de la bomba, el flujo de nebulizacin y del gas auxiliar. Hasta
encontrar la intensidad mxima del pico con baja seal por ruido de fondo.

Recomendaciones para la preparacin del blanco reactivo: utilizar una

concentracin de HCl lo ms baja posible.

Preparar el borohidruro de sodio estabilizado con hidrxido de sodio cada da

de medicin. Preferentemente filtrar la disolucin y colocarla en un bao
ultrasnico por 3 minutos para eliminar un poco el burbujeo.

Durante la medicin verificar constantemente el correcto drenado de los

residuos.

Ajustar y optimizar la velocidad de la bomba para la introduccin de la

muestra

620-Q003-0127-PA

Recomendaciones para la medicin

por EAA-HG
Un horno de grafito calienta la muestra a fin de desolvatarla y
atomizarla para medir la cantidad de analito presente en la
muestra; la alcuota de la muestra es consumida totalmente en
segundos en un proceso que involucra las siguientes etapas:
Secado

Se evapora el disolvente de la muestra quedando la sal.

El tiempo depende del volumen de la muestra

Pirlisis

La materia orgnica se oxida, quedando los metales.

Tambin se eliminan otras especies que pudieran
causar interferencias como: NO2-, NO3-, PO4-3, SO4-2 etc.

Atomizacin Volatilizacin completa del elemento del inters

Limpieza

28 28

Evitar adherencias de residuos en el tubo de grafito

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Puntos crticos para la medicin por la

tcnica de EAA-HG

1. Identificar y mantener bajo control todas las interferencias.

2. Seleccionar el modificador de matriz adecuado.
3. Permitir el calentamiento de la lmpara hasta la mxima energa.
4. Optimizar el sistema de introduccin de muestra en dentro del tubo de
grafito.
5. Medir dentro del intervalo lineal de absorbancia recomendado.
6. Optimizar la rampa de temperatura de pirolisis y atomizacin.
7. Evaluar la masa caracterstica del elemento a medir.

29

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Recomendaciones para la medicin

por colorimetra
Principio: La colorimetra es una tcnica instrumental que tiene por
objeto determinar la absorcin de luz visible por una muestra,
que puede ser una sustancia pura o bien una mezcla o
disolucin.
Para ello se utiliza un instrumento constituido por los siguientes
elementos:


Fuente de radiacin (luz blanca)


Sistema dispersivo (rendijas de entrada y salida, y red de
difraccin)


Detector (fototubo que transforma la seal luminosa en una
seal elctrica)


Sistema de medida de la absorcin, una vez amplificada
(convertidor analgico o digital).

30 30

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Recomendaciones para la medicin

por colorimetra

3131

Utilizar blancos similares a la matriz de la muestra.

Utilizar materiales de referencia certificados para preparar la
curva de calibracin analtica ya que a partir de esta, se asigna
el valor a las muestras.
Utilizar materiales de referencia como control en el proceso de
medicin para evaluar el desempeo del mtodo,
comportamiento del equipo y la aptitud tcnica del analista.
Verificar el material volumtrico.
Trabajar dentro del intervalo de absorbancia de la curva de
calibracin analtica para evitar extrapolar para obtener la
concentracin de la muestra.
Verificar que la celda del equipo no est sucia o rayada al hacer
las mediciones, lo cual genera interferencia en el paso del haz
de luz.

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Bibliografa


Guidance on Equipment Qualification of Analytical Instruments: High

Performance Liquid Chromatography (HPLC). LGC/ VAM. 1998/026.2

Gua Sobre la Calificacin de equipo de instrumentos analticos basado

en el documento The Development and application of Guidance on
Equipment Qualification of Analytical Instruments, P. Bedson and M.
Sargent, Laboratory of the Government Chemist. 1996

Analytical Methods for Atomic Absorption Spectroscopy. Perkin Elmer

manual. Sep 1996.

Charles B. Boss. Concepts, instrumentation and techniques in inductively

coupled plasma optical emission espectrometry 1997 Perkin Elmer
corporation.

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