Universidad de Sonora.

Dpto. Ciencias Qumico-Biolgicas.

Lic. Qumico en Alimentos
Qumica Analtica II.
Prctica #3: Ley de Beer: curva de calibracin.

Hermosillo, Sonora.
Martes 14 de octubre de 2014.

PRCTICA #3. LEY DE BEER: CURVA DE CALIBRACIN.

OBJETIVOS.
1. Elaborar una curva de calibracin a partir de la medicin de la absorbancia de
soluciones estndar de sulfato de cobre(II).
2. Determinar la concentracin de una solucin de concentracin desconocida de
sulfato de cobre(II) a partir de la curva de calibracin.

INTRODUCCIN.

Ley de Beer

Consideremos un bloque de materia absorbente (slido, lquido o gas). Un haz de

radiacin monocromtica paralelo con intensidad I0 llega al bloque perpendicular a la
superficie; luego pasa a travs de la longitud b del material, que contiene n partculas
absorbentes (tomos, iones o molculas), la intensidad del haz disminuye a I como
resultado de la absorcin. Consideremos ahora una seccin transversal del bloque que
tiene un rea S (X x Y) y un espesor infinitesimal dx. Dentro de esta seccin hay dn
partculas absorbentes; asociada a cada partcula podemos imaginar una superficie en
que ocurrir la captura del fotn. Esto es, si un fotn alcanza una de esas reas por
casualidad, ocurrir inmediatamente la absorcin. El rea total de esas superficies de
captura dentro de la seccin se designa ds; la relacin del rea de captura al rea total es
ds/S. En un promedio estadstico, esta relacin representa la probabilidad para la captura
de fotones dentro de la seccin. La intensidad del haz que entra en la seccin, Ix es
proporcional al nmero de fotones por cm2 y por segundo, y dIx representa la cantidad
removida por segundo dentro de la seccin, la fraccin absorbida es entonces -dIx/Ix y
esta relacin tambin es la probabilidad promedio por captura. El trmino tiene signo
negativo para indicar que la intensidad del haz disminuye.

Recordemos que ds es la suma de las reas de captura para cada partcula dentro de la
seccin; puede ser por eso proporcional al nmero de partculas ds = dn; siendo dn el
nmero de partculas dentro de la seccin y una constante de proporcionalidad, que se
puede llamar seccin transversal de captura.
Considerando las ecuaciones e integrando de 0 a n
Queda

Luego de convertir los logaritmos a base 10 e invirtiendo la fraccin para cambiar de

signo, se obtiene:

Siendo n el nmero total de partculas dentro del bloque.

La seccin transversal S se puede expresar en trminos del volumen del bloque en cm3 y
su longitud b en cm, entonces S = V/b
Sustituyendo en la ecuacin anterior, da:

Se nota que n/V tienes las unidades de concentracin (esto es nmero de partculas por
cm3), sepuede convertir a moles por litro.
El nmero de moles es

y c expresado en mol/l:

Combinando:

Finalmente, las constantes de esta ecuacin se pueden reunir en una nica constante:

Absortividad y Absortividad Molar

La absorbancia es directamente proporcional a la longitud del camino b a travs de la

solucin y la concentracin c de la especie absorbente. Estas relaciones se dan como:
A = abc
Siendo a una constante de proporcionalidad llamada absortividad. La magnitud de a
depender de las unidades empleadas para b y c. A menudo b es dada en trminos de
cm y c en gramos por litro, entonces la absortividad tiene unidades de lg1cm1.
Cuando la concentracin se expresa en moles por litro y la longitud de la celda en
centmetros, la absortividad se llama absortividad molar, se designa como y tiene
unidades de lmol1cm1, entonces la absorbancia es:
A = bc

Curva de Calibracin

Denominamos espectro de una sustancia a la representacin de absorbancia (A) en

funcin de longitud de onda (),este grfico presenta ondulaciones con mximos y
mnimos. Para hacer las determinaciones cuantitativas se elige, en general, la longitud de
onda correspondiente a un mximo, pues el error de medicin es mnimo y la sensibilidad
mxima. Para verificar el cumplimiento de la ley de Beer, se debe realizar la curva de
calibracin; absorbancia (A) en funcin de concentracin (c), para lo cual se preparan
soluciones de la sustancia de concentraciones conocidas y se mide la absorbancia a la
longitud de onda elegida.

Si es vlida la ley de Beer, para esa sustancia a esas concentraciones, la relacin debe
ser una recta, que pase por el origen de los ejes cartesianos; a menudo se observan
desviaciones debidas a diversos factores.

MATERIALES, REACTIVOS Y MTODOS.

Espectrofotmetro.
1 computadora porttil por equipo.
2 celdas de cuarzo 6 tubos de ensayo de 20 X 150 mm.
1 gradilla 2 pipetas volumtricas de 1 Ml.
2 pipetas volumtricas de 2 mL.
2 pipetas volumtricas de 5 mL.
2 vasos de precipitados de 100 mL.
1 piceta.
1 Pipetor.
7 pipetas Pasteur.
1Agitador.
Sanitas para celdas.
Solucin de CuSO4 0.24 M.
Solucin problema de CuSO4.
Agua destilada.

PROCEDIMIENTO.

15 mL de sol. estndar
de CuSO.

15 mL de agua destilada

ENCENDER 20 MIN
ANTES DE REALIZAR LA
PRCTICA.

Numerar:

Preparar las siguientes 5 disoluciones, de acuerdo a la siguiente tabla:

TUBO #
1
2
3
4
5

mL de agua
4
3
2
1
0

mL de CuSO
1
2
3
4
5

En el tubo #6 se coloca la solucin problema.

Determinar la concentracin
de la solucin desconocida de
CuSO4, explicando cmo
pudo realizar esta
determinacin.

Leer la absorbancia a 850 mm de

las 5 soluciones estndar y de la
muestra problema e introducir
los valores obtenidos a la tabla
de resultados.

Calcular la ecuacin de regresin

lineal de absorbancia (y) vs
concentracin (x) para las
soluciones estndar de CuSO4 e
imprimir la grfica que muestre
los datos y la ecuacin de la
regresin lineal.

CLCULOS Y RESULTADOS.
Tabla de resultados.
Tubo
1
2
3
4
5
6

[CuSO4] 0.24 M
0.048
0.096
0-144
0.192
0.24
MUESTRA PROBLEMA
(SE CALCULAR MS
ADELANTE)

1. C2= C1V1/V2

C1= 0.24M
V1= 1ml
V2= 5ml
C2= (0.24M)(1ml) / (5ml) = 0.048 M
2. C2= C1V1/V2
C1= 0.24M
V1= 2ml
V2= 5ml
C2= (0.24M)(2ml) / (5ml) = 0.096 M

Absorbancia
0.208
0.440
0.450
0.465
0.690
0.346

3. C2= C1V1/V2
C1= 0.24M
V1= 3ml
V2= 5ml
C2= (0.24M)(3ml) / (5ml) = 0.144 M
4. C2= C1V1/V2
C1= 0.24M
V1= 4ml
V2= 5ml
C2= (0.24M)(4ml) / (5ml) = 0.192 M
5. C2= C1V1/V2
C1= 0.24M
V1= 5ml
V2= 5ml
C2= (0.24M)(5ml) / (5ml) = 0.24 M

Absorbancia

Concentracin. Absorbancia.
0.048
0.208
0.096
0.440
0.144
0.450
0.192
0.465
0.24
0.690

Absorbancia vs Concentracin de CuSO en muestras

estndar.
0.800
0.700
0.600
0.500
0.400
0.300
0.200
0.100
0.000

0.690
0.440

0.450

0.208
0

0.05

0.1

0.465
y = 2.0604x + 0.1539
R = 0.8397

0.15
Concentracin
(mL)

Concentracin de la solucin problema:

Absorbancia de la solucin problema = 0.346 = y
y=2.0604x + 0.1539
0.346 = 2.0604x + 0.1539

0.2

0.25

0.3

0.346-0.1539/2.0604 = x
X = 0.0932 M

CONCLUSIN.
Al realizar la curva de calibracin de las soluciones estndar de CuSO y su
ecuacin correspondiente a la recta, se cumpli con el primer objetivo de la
prctica. En la curva se puede notar que las lecturas de las absorbancias de la
muestra del tubo #1 y la muestra del tubo #6 s son muy diferentes a las otras tres
muestras, esto podra deberse a que se tard mucho en tomar la lectura y pudo
haber precipitado que interfiriera en esta.
Con la ecuacin obtenida en la curva, se pudo calcular la concentracin de la
solucin problema de CuSO, que fue de 0.0932 M a una absorbancia de 0.346.

CUESTIONARIO.
1. Cules son las principales limitaciones de la ley de Beer?
R.- La concentracin. Slo es aplicable a disoluciones diluidas (menor 10-2 M); en
disoluciones concentradas la distancia entre partculas absorbentes es tan pequea que
se produce una modificacin en la distribucin de cargas de las mismas, lo que se traduce
en una alteracin en la capacidad de absorcin a una longitud de onda determinada. Este
efecto se puede eliminar mediante dilucin.
La interaccin entre el soluto y la radiacin debida a mecanismos diferentes a la
absorcin pero que producen alteraciones en la intensidad de la luz, tales como la
dispersin, reflexin, la fluorescencia, etc.
Utilizacin de radiacin no monocromtica, puesto que la ley est definida para
radiaciones con una sola longitud de onda. Sin embargo, si la calidad del equipo no es
buena, se obtienen bandas de radiaciones con un estrecho intervalo de longitudes de
onda.
Falta de uniformidad de la muestra o especie absorbente, o presencia de impurezas.
Desviaciones qumicas, debidas a reacciones del absorbente con el disolvente

2. El mtodo ms ampliamente utilizado para realizar un ajuste lineal es el

mtodo de mnimos cuadrados. Explicar brevemente en que consiste dicho
mtodo.
R.- Mnimos cuadrados es una tcnica de anlisis numrico enmarcada dentro de
la optimizacin matemtica, en la que, dados un conjunto de pares ordenados: variable

independiente, variable dependiente, y una familia de funciones, se intenta encontrar

la funcin continua, dentro de dicha familia, que mejor se aproxime a los datos (un "mejor
ajuste"), de acuerdo con el criterio de mnimo error cuadrtico.

3. Cmo se ve afectada la abosrbancia de una solucin si en lugar de

utilizar una celda de 1 cm de paso ptico si se utiliza una celda de 2 cm?
R.- La celda que contiene el blanco o la solucin de referencia utilizada para el ajuste de
100% T, recibe el nombre de celda de referencia y la que contiene la muestra, celda
demuestra. En lo posible estas celdas deben ser idnticas, con el mismo paso ptico y la
misma transparencia a la regin espectral utilizada.

4. Una solucin de una muestra problema de concentracin 1 mM presenta

una A de 1.2. Si de esta solucin se toman 2 mL y se diluyen a 5 mL,Cul
ser el valor la A de la nueva solucin?
R.- A= bc, por lo tanto, = A/c.
= 1.2/1X10^-3 = 1,200.
Concentracin diluida: 4X10^-4
A= bc
A= 1,200 (1) (4X10^-4) = 0.48

Bibliografia :
-

http://absorcion-atomica.blogspot.mx/2009/08/limitaciones-de-la-leyde-lambert-beer.html
http://materias.fi.uba.ar/6305/download/Espectrofotometria.pdf
http://www.optek.com/es/Lambert_Beer_Law.asp
http://www.consultaasesor.bligoo.com/content/view/3101885/UNIDAD2.html#.VDytBPl5P1Y