OBSERVACIONES EN FRESCO Y COLORACIN

Introduccin:
El examen en fresco es uno de los procedimientos ms simples para observar cualquier
microorganismo. Las coloraciones se utilizan para visualizar la morfologa. Las coloraciones
simples son las que utilizan un solo colorante (Azul de Metileno, Azul de Lactofeno, Violeta de
Genciana).
Uno de los aspectos ms notables de los microorganismos es su tamao pequeo. En las bacterias
las dimensiones se calculan en unidades de micrmetro (1um = 0.001mm). En cuanto a su forma
hay tres tipos distintos; la forma esfrica o cocos, alargada o bacilos y las espiraladas o
espiroquetas. Cuando los cocos se agrupan en pares se denominan diplococos, si es en cadena,
estreptococos y si es en racimos, estafilococos. Estas caractersticas morfolgicas proporcionan la
base principal para su sistematizacin morfolgica.
En cuanto a los hongos pueden presentar la forma redondeada como las levaduras o la forma
filamentosa como los mohos. Los virus en cambio solo se visualizan a travs del microscopio
electrnico por su tamao menor de 300 nanmetros (1nm = 0.000001mm).
La morfologa de las bacterias se puede examinar de dos maneras:
1. Observando los microorganismos vivos sin teir.
2. Observando los microorganismos muertos, teidas con colorantes.
Las bacterias vivas son casi incoloras y no tienen suficiente contraste con el agua en el cual estn
suspendidas. Tindolas se les da contraste en color con respecto al medio que los rodea, con lo
cual son ms visibles. La morfologa bacteriana nos ayuda al diagnstico, un examen apropiado y
cuidadoso de las bacterias nos proporciona una informacin adecuada (caracterizacin de la
especie). Conociendo que el protoplasma bacteriano tiene el mismo ndice de refraccin que el
agua, es indispensable emplear procedimientos de tincin que permita visualizarlas.
En esta prctica, empezamos recin a tener contacto con las bacterias, se hace pues necesario
utilizar colorantes a fin de hacerlas ms visibles y que permitan estudiar su morfologa.
OBJETIVOS:
El manejo de cultivos bacterianos para observar las bacterias.
El fundamento y la tcnica de las tinciones ms significativas en
bacteriologa.
La dificultad de la observacin de las preparaciones en fresco y la deteccin
de la movilidad de las bacterias.
Observar la morfologa de las bacterias.

Agua estancada
Materiales y mtodos:
Materiales:

Microscopio
Lamina
Laminilla
Gotero
Agua estancada

Mtodo:
En el laboratorio se realiz la extraccin de agua destilada para la demostracin de cmo hacer un
preparado en fresco, para ello se realizaron los siguientes pasos:

Sujete una lmina por los bordes, mantenindola en posicin horizontal

Con el gotero, coloque sobre la lmina una gota de agua estancada, a continuacin colocar la
laminilla.
Lleve el preparado al microscopio y coloque la lmina en el centro de la platina sujetndola
con la pinza.
Abrir completamente el diafragma
Colocar el objetivo de 40 x en posicin de observacin.
Accione el tornillo micromtrico hasta lograr imagen en el campo microscpico; luego
accione el micromtrico hasta lograr imagen ntida.

Resultado:
Muestra: agua estancada
Observacin: pulga de agua.
Aumento: 10 X

Muestra: agua estancada

Observacin: pulga de agua.
Aumento: 10 X

Coloracin Gram
Materiales y mtodos:
Materiales:

Mucosa labial
Lamina, laminilla
Microscopio
Gotero
Agua
Lugol
alcohol
Violeta de genciana
Safranina
Aceite de inmersin

Mtodos:

Tomar la muestra extender y fijar.

Agregar violeta de genciana por tres minutos.
Eliminar el exceso de colorante y lavar.
Agregar lugol.
Eliminar el exceso de lugol y lavar.
Decolorar con alcohol.

Lavar el exceso de alcohol.

Agregar safranina por 30 segundos.
Lavar, secar, agregar una gota de aceite de inmersin y observar con lente de
100.

Resultado:

Klebsiella

Materiales y mtodos:
Materiales:

Klebsiella
Rojo de condo
Haza
Mechero
Lamina
Fucsina
Microscopio
Aceite de inmersin

Mtodos:

En una lmina tomar muestra

Agregar una gota de rojo de condo.

Encender el mechero y calentar el haza al rojo vivo.
Extender la muestra y secar.
Agregar dos gotas de fucsina.
Secar a temperatura ambiente.
Agregar aceite de inmersin y observar en el microscopio.

Resultado:

Comentario:
Los colorantes usados en el laboratorio son cierta especie de lquidos que tienen diferentes capacidades para
dar color, permiten una mejor observacin de los organismos vistos en el microscopio y mejor an no alteran la
composicin o funcionamiento del objeto en cuestin. Gracias a estas propiedades es que se utiliza, en este
caso, para muestras en las cuales nos permiti observar bacterias.
En lo que respecta a la muestra de mucosa labial se pudo observar mejor gracias a que se agregaron tres
colorantes: violeta de genciana, lugol y saframina.
En el agua estancada la observacin fue ms simple, pues con solo ajustar el objetivo se pudo observar las algas.

Referencias bibliogrficas:
http://www.buenastareas.com/ensayos/Practica-2-Tecnicas-De-ObservacionMicroscopica/172568.html

https://sites.google.com/a/goumh.umh.es/practicas-demicrobiologia/indice/identificacion-bacteriana

UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

SEDE- HUAMACHUCO

Facultad:

ciencias agropecuarias

Escuela

: Ing. agroindustrial

Ciclo

: Iv

rea

: Microbiologa

Tema

Observaciones en fresco y coloracin

Docente : ALVARADO SALINAS, Pedro

Alumna

: VALDIVIA CUEVAS, Carol

Huamachuco-Per
2013