UNIDAD 2

ESTEQUIOMETRA, ENERGA Y CINTICA MICROBIANA

INTRODUCCIN
El balance de materia es, probablemente el concepto ms importante en la ingeniera de diseo
de sistemas para tratamiento biolgico. Para una cantidad dada de residuo, el balance de materia
se usa para determinar la cantidad productos qumicos que hay que suministrar para satisfacer
las necesidades de energa, nutrientes y entorno de los microorganismos. Adems de ello es
posible estimar las cantidades de productos finales generados.
Ejemplos de productos qumicos son el oxgeno, como aceptor de electrones, nitrgeno y fsforo,
como nutrientes para el crecimiento de biomasa y cal o cido sulfrico para mantener el pH en el
intervalo deseado.
Ejemplos de productos finales importantes son el exceso de microorganismos (lodo), que
constituye un costoso problema de eliminacin, y el metano proveniente de sistemas anaerobios,
que puede ser una fuente til de energa.
UN EJEMPLO DE ECUACIN ESTEQUIOMTRICA
Una de las primeras ecuaciones equilibradas para la oxidacin biolgica de un agua residual fue la
presentada por Porges, Jasewicz y Hoover (1956) para un agua residual que contena:
Agua residual:

C8H12O3N2 + 3O2 C5H7O2N + NH3 + 3CO2 + H2O

casena
Peso frmula:

clulas bacterianas

184
96
=280

113

17

132
=280

18

(1)

La ecuacin anterior (1) indica que por cada 184g de casena consumidos por los
microorganismos, hay que suministrar 96g de oxgeno para que la reaccin progrese
adecuadamente. La reaccin produce 113g de clulas microbianas nuevas. 17g de amoniaco (o
14g de N amoniacal). 132g de dixido de carbono y 18g de agua.
Tal conocimiento es esencial en el diseo de un sistema de tratamiento biolgico para casena,
habr que suministrar 520kg/d de oxgeno mediante aireacin, habr que quitar el agua a
610kg/d de biomasa slida y eliminarla.
En la ecuacin (1) parte del carbono de la casena se oxida completamente a CO2. Por eso la
casena es el sustrato donante de electrones. El resto del carbono de la casena se incorpora a la
biomasa recin sintetizada, ya que la casena es tambin la fuente de carbono.
La frmula emprica C8H12O3N2 representa la mezcla de protena contenida en la casena. Esta
frmula se estableci a partir del conocimiento de las proporciones relativas de materia
correspondiente a carbono, oxgeno, hidrgeno y nitrgeno contenidos en el agua residual,
valores que pueden obtenerse por medio de anlisis qumicos orgnicos normales de cada
elemento presente.
La misma aproximacin se adopta para la frmula emprica de las clulas bacterianas de C5H7O2N

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Las clulas bacterianas son estructuras altamente complejas que contienen diversos hidratos de
carbono, protenas, grasas y cidos nuclicos, algunos de los cuales tienen pesos moleculares
elevados. Realmente los microorganismos poseen mucho ms que los cuatro elementos indicados
por la ecuacin anterior, como es el caso del azufre, hierro, fsforo y muchos elementos presente
en cantidades residuales.
Una frmula emprica puede contener tantos elementos como se desee en cuanto sean conocidas
las proporciones relativas en la base de materia, sin embargo Porges escogi los cuatro elementos
principales, lo que resulta generalmente satisfactorio en la mayora de los casos.
Los requerimientos de masa para los elementos no indicados en la frmula pueden determinarse
una vez conocida la masa de las clulas bacterianas que se forman en una reaccin dada. Por
ejemplo, el fsforo representa normalmente alrededor del 2% del peso seco orgnico de las
bacterias. As, si 1000kg/d de casena se consumen en un proceso de tratamiento, entonces
debern estar presentes, o ser aadidos al agua residual 12kg/d de fsforo en forma de fosfato
para satisfacer las necesidades bacterianas de este elemento.
Para conseguir la Estequiometra de una reaccin son necesarias tres cosas:
1. La frmula emprica de las clulas.
2. El marco para describir cmo el sustrato donante de electrones se reparte entre
generacin de energa y sntesis.
3. Medios para relacionar la proporcin de sustrato donante de electrones que se utiliza
para sintetizar biomasa con la energa obtenida del catabolismo y la que necesita el
anabolismo.
1) FRMULA EMPRICA DE CLULAS MICROBIANAS
La frmula emprica expuesta anteriormente para clulas (C5H7O2N), es una de las primeras que se
utilizaron en el equilibrio de reacciones biolgicas. Sin embargo la proporcin relativa de
elementos presentes realmente en la clula depende de las caractersticas de los
microorganismos, de los sustratos empleados para obtener energa y de la disponibilidad de otros
nutrientes precisos para el crecimiento microbiano. Si los microorganismos tienen que crecer en
un entorno deficiente en nitrgeno, tienden a producir ms materia orgnica o hidratos de
carbono por lo que la frmula emprica correspondiente debera reflejar una proporcin de
nitrgeno ms pequea.
La siguiente tabla resume las formulas empricas desarrolladas por otros, algunas de las cuales
son para crecimiento aerobio, otras para crecimiento anaerobio, unas para mezcla de cultivos de
microorganismos, otras para cultivos puros y otras para crecimiento de cultivos sobre sustratos
orgnicos diferentes. El contenido de nitrgeno vara del 6 al 15%, aunque el promedio tpico es
del 12%.

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Tabla 1. Frmulas empricas para clulas procariotas.

Frmula
Emprica
Cultivos mixtos
C5H7O2N
C7H12O4N
C9H15O5N
C9H16O5N
C4.9H9.4O2.9N
C4.7H7.7O2.1N
C4.9H9O3N
C5H8.8O3.2N
C4.1H6.8O2.2N
C5.1H8.5O2.5N
C5.3H9.1O2.5N
Cultivos puros
C5H8O2N
C5H8.33O0.81N
C4H8O2N
C4.17H7.42O1.38N
C4.54H7.91O1.95N
C4.17H7.21O1.79N
C4.16H8O1.25N
C3.85H6.69O1.78N
Mximo
Mnimo
Media

Peso
Frmu
la

COD
Peso

%N

Referencia

113
174
217
218
129
112
130
134
105
124
127

1.42
1.33
1.40
1.43
1.26
1.38
1.21
1.16
1.20
1.35
1.41

12
8
6
6
11
13
11
10
13
11
11

1
2
2
2
3
3
3
3
3
3
3

casena, aerobio
acetato, N amoniacal, aerobio
acetato, N nitrato, aerobio
acetato, N nitrato, aerobio
acetato, metanognico
octanoato, metanognico
glicina , metanognico
leucina , metanognico
caldo nutriente , metanognico
glucosa , metanognico
almidn , metanognico

114
95
102
94
108
100
92
95
218
92
113

1.47
1.99
1.33
1.57
1.43
1.39
1.67
1.30
1.99
1.16
1.39

12
15
14
15
13
14
14
15
15
6
12

4
4
4
4
4
4
5
5

bacterias, acetato, aerobio

bacterias, no definido
bacterias, no definido
Aerobacter aerogenes, no definido
-1
Klebsiella aerogenes, glicerol =0.1 h
-1
Klebsiella aerogenes, glicerol =0.85 h
Escherichia coli, no definido
Escherichia coli, glucosa
1

Sustrato de crecimiento
y condiciones de entorno

Referencias: Porges. 1956, Symons. 1958, Speece.1964, Bailey.

5
1986, Battley.1987

Una forma muy importante de comparar frmulas empricas de clulas la aporta la relacin del
oxgeno requerido para oxidar totalmente al carbono celular por unidad de peso de la clula. Este
requerimiento de oxgeno es conocido como COD y se define como demanda de oxgeno
calculada. Esta resulta corrientemente igual a la demanda qumica de oxgeno (COD), que es un

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procedimiento qumico estndar para evaluar tal cantidad y se basa en la reduccin de dicromato
en una solucin cida a ebullicin.
La COD puede calcularse a partir de la frmula emprica como sigue:

CnHaObNc +

)O

nCO2 + cNH3 -

)H O
2

Y
COD/Peso=
donde:

n=%C/12T ; a=%H/T ; b=%O/16T y

c=%N/14T

T=%C/12 + %H + %O/16 + %N/14

Si se conoce la distribucin de masa de los cuatro elementos orgnicos en el cultivo biolgico,
entonces la frmula emprica de las clulas puede establecerse rpidamente calculndose la COD
a partir de ella.
Ejemplo:
Frmula Emprica de Biomasa: Una muestra de cultivo biolgico se somete en un laboratorio de anlisis
para averiguar el % en peso de cada uno de los principales elementos presentes en la parte orgnica. En el
laboratorio se evapora la muestra a sequedad y se la introduce en una estufa durante la noche a 150 C
para eliminar completamente el agua. La porcin orgnica del residuo que queda se analiza entonces y la
muestra se quema en una mufla a 550C para determinar el peso de la ceniza restante. La ceniza contiene
P, S, Fe y dems elementos inorgnicos presentes en la muestra. La composicin de clulas en peso da:
48.9% de C, 5.2% de H, 24.85 de O, 9.46% de N y 9.2% de ceniza. Preparar la frmula emprica de las clulas,
dejando c=1 y determinar la relacin COD/Peso orgnico de las clulas.

2. REPARTO DEL SUSTRATO Y RENDIMIENTO CELULAR

Cuando los microorganismos utilizan un sustrato donante de electrones para sntesis, una porcin
de sus electrones (fe) se transfiere inicialmente al aceptor de electrones para suministrar

energa para la conversin de la otra porcin de electrones (fs) en clulas microbianas

como ilustra la figura siguiente:

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La suma de fe y fs es 1. Las clulas se destruyen por mantenimiento o depredacin: parte

de los electrones en fx se transfieren al aceptor para generar ms energa y otra parte se
convierte en residuo orgnico celular inactivo.
Las porciones convertidas inicialmente en clulas fs , y las utilizadas para generar energa
fe , constituyen el marco del reparto del sustrato entre generacin de energa y sntesis.
Una faceta muy importante del marco de reparto es que se realiza en base a equivalentes
de electrones (e- eq). Debido a que el flujo de electrones genera la energa celular, es
esencial que el reparto sea expresado en equivalentes de electrones.
La fraccin fs puede ser convertida a unidades de masa, tales como gramos (g) de clula
producida/COD consumida. Cuando se expresa en unidades de masa se denomina
rendimiento real y se expresa con el smbolo (Y). La conversin de fs a Y es:
Y= fs (Mc g clulas/mol clulas) / [(ne e- eq/mol clulas)(8 g COD/e- eq donante)]
en la que Mc es el peso de la frmula emprica de las clulas, ne es el nmero de
equivalentes de electrn en un mol emprico de clulas y la masa del donante se expresa
como COD. Cuando las clulas se representan por C5H7O2N y el amonio es la fuente de
nitrgeno, Mc =113g clulas/mol clulas y ne =20 e- eq/mol clulas. Entonces la conversin
es Y=0.706 fs , viniendo dado Y en g clulas/g COD. Los nmeros usados en la conversin
cambian si la clula difiere, o si las clulas utilizan fuentes de nitrgeno oxidadas como
NO3.
Matemticamente, la velocidad de crecimiento de clulas microbianas se expresa por:

=Y(

)-b

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donde
(

M/L3),

representa la relacin de crecimiento neta (M/L3T) de organismo activo

representa la velocidad de desaparicin del sustrato (S, M/L3), b es la

relacin de agotamiento (T-1) del organismo e Y es el rendimiento real de

microorganismos (M/M).
La velocidad de crecimiento neta es igual a la diferencia entre el crecimiento a partir del
consumo de sustrato y el agotamiento debido a respiracin endgena o a la depredacin.
El rendimiento neto (Yn, M/M) puede hallarse dividiendo la ecuacin anterior por la
velocidad de utilizacin del sustrato:

Yn =

= Y-b

El rendimiento neto es inferior a Y, debido a que algunos de los electrones originalmente

presentes en el sustrato tienen que ser consumidos para obtener energa o para
mantenimiento.
Al considerar el rendimiento neto, la porcin de electrones usada para sntesis es fs1 en
lugar de fs y la porcin de generacin de energa es fe1 en lugar de fs . A pesar de todo la
suma de fs1 + fe1 =1 y fs1< fs , mientras que fe1> fe
La ecuacin anterior indica que esta porcin destruida llega a ser mayor cuando la
velocidad de agotamiento o la concentracin de organismos aumenta, o cuando la
velocidad de consumo del sustrato disminuye.
Cuando la proporcin de utilizacin del sustrato por unidad de masa de la clula es
suficientemente baja, el lado derecho de la ecuacin anterior puede llegar a ser cero lo
que quiere decir que el rendimiento neto de clulas Yn es tambin igual a cero. La
cantidad de utilizacin del sustrato es justo suficiente para mantener las clulas, no
habiendo crecimiento neto de clulas activas. En estas condiciones:

Yn =0,

=m

En este caso, la cantidad de sustrato utilizado por unidad de masa de organismos se

conoce como energa de mantenimiento (m, M/MT). De la ecuacin anterior se deduce
que m es proporcional a b e inversamente proporcional a Y. Cuando la cantidad de
sustrato utilizado es menor que m, el sustrato disponible es insuficiente para satisfacer las
necesidades metablicas de los microorganismos. Ello supone una forma de muerte por
inanicin.
Ejemplo:

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Velocidad de crecimiento y rendimiento neto: Un reactor contiene 500mg/l de microorganismos

activos, consume acetato al ritmo de 750mg L-1d-1. Para este cultivo, Y=0,6g clulas/g acetato y b
=0,15d-1. Determinar la velocidad especfica de crecimiento de los microorganismos, la cantidad
especfica de la utilizacin del sustrato y el rendimiento neto de clulas.

3) REACCIONES DE ENERGA

Ciclo de Krebs (catabolismo). El catabolismo es la transformacin de molculas complejas a molculas simples, con
liberacin de energa.

Anabolismo: Replicacin de ADN. La doble hlice es desenrollada y cada hebra hace de plantilla para la sntesis de la
nueva cadena. La ADN polimerasa aade los nucletidos complementarios a los de la cadena original.

Los microorganismos obtienen su energa para crecimiento y mantenimiento por medio

de reacciones de oxido reduccin. Incluso los microorganismos fotosintticos, que
obtienen energa de la radiacin electromagntica o de la luz solar, utilizan reacciones de
oxidacin-reduccin para convertir la energa de la luz en ATP y NADH

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Las reacciones de oxido-reduccin siempre suponen un aceptor y un donador de

electrones. Generalmente, se considera al donante de electrones como el sustrato
alimenticio de los organismos. La materia orgnica es el donante de electrones ms
comn a todos los organismos no fotosintticos con excepcin de los procariotas (sin
ncleo definido)
Los procariotas quimiolittrofos utilizan compuestos inorgnicos reducidos tales como el
amonio y los sulfuros como donantes de electrones para la energa del metabolismo, por
eso los procariotas son verstiles.
El aceptor comn en condiciones aerobias es el oxigeno molecular (O2). Sin embargo en
condiciones anaerobias algunos procariotas pueden utilizar otros aceptores de electrones
como nitratos, sulfatos y dixido de carbono.
Los ejemplos a continuacin muestran que la energa ganada a partir de una molcula de
glucosa vara ampliamente en funcin de aceptor de electrones.
Oxidacin aerobia:
C6H12O6 + 6O2 6CO2 + 6H2O
E.l: -2.880 kJ/mol glucosa
Desnitrificacin:
5C6H12O6 + 24NO3- + 24H+ 30CO2 + 24H2O + 12N2 E.l: -2.720 kJ/mol glucosa
Reduccin de sulfato:
2C6H12O6 + 6SO4-2 + 9H+ 12CO2 + 12H2O + 3H2S + 3HS- E.l: -492 kJ/mol glucosa
Metanognesis
C6H12O6 3CO2 + 3CH4
E.l: -428 kJ/mol glucosa
Fermentacin de etanol:
C6H12O6 2CO2 + 2CH3CH2OH
E.l: -244 kJ/mol glucosa
Evidentemente los microorganismos preferiran obtener la mayor cantidad posible de
energa de reaccin utilizando oxgeno como aceptor de electrones excepto los
microorganismos anaerobios que no son capaces de competir con los aerobios cuando el
oxigeno est disponible. Por otra parte en ausencia de oxigeno los anaerobios pueden
dominar.
El orden de preferencia de aceptores de electrones basado solo en consideraciones de
energa sera: oxigeno, nitrato, sulfato, dixido de carbono y finalmente fermentacin.
E. coli es capaz de usar varios aceptores de electrones como: oxigeno, nitratos o materia
orgnica en fermentacin.

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4) REACCIONES GLOBALES DE CRECIMIENTO BIOLGICO

El crecimiento bacteriano supone dos reacciones bsicas, una para producir energa y otra
para sintetizar clulas. El donante de electrones suministra los electrones al aceptor de
electrones para producir energa. Se trata de representar la sntesis mediante la
combinacin de semirreacciones, es preciso disponer de ellas para la sntesis, Rc. La tabla
siguiente expone las semirreeacciones clave de sntesis. Consideremos ahora la primera
semirreaccion de sintyesis (C-1) utilizada cuando el amonio es la fuente de nitrgeno para
la formacin de protenas y cidos nuclicos. El amonio es la fuente de nitrgeno. Si no
est disponible los microorganismos pueden llegar a utilizar otras fuentes de nitrgeno
relacionadas en la tabla, que adems contiene las semirreacciones de aceptores (Ra) de
los cinco ms corrientes: O2, NO3-, Fe3+, SO4-2, CO2.
Como ejemplo, suponemos que se dispone de benzoato como donante de electrones, de
nitrato como aceptor de electrones y de amonio como fuente de nitrgeno. En base a
rendimiento neto, suponemos que el 40% de los equivalentes de electrn en el benzoato
se utilizan para la sntesis (fs=0.40), mientras que el 60% se emplea para obtener energa
(fe =0.60)