INTRODUCCIN

La microbiologa ambiental estudia todos los microorganismos que estn presentes en

ambientes naturales o artificiales. Sus inicios estn en las observaciones de Anthony van
Leeuwenhoek en 1677. Estos microorganismos se encuentran como clulas aisladas, las
cuales son capaces de llevar a cabo sus funciones vitales de crecimiento, generacin de
energa y reproduccin independiente. Estos pueden tener una alta densidad poblacional en
cultivos, lo que los hace ms fciles de manipular para estudios cientficos genticos.
En el siguiente informe se realiza una descripcin de las colonias vistas, observando bacterias
y hongos, con ayuda de lacto fenol y tcnicas como la tincin de Gram.
OBJETIVOS
Identificar el hongo o bacteria en el cultivo correspondiente.
Determinar caractersticas microscpicas y macroscpicas del hongo o bacteria.
Practicar las normas y medidas de Bioseguridad en el Laboratorio.
Aprender los conceptos bsicos de microbiologa y sus tcnicas de laboratorio.

PRACTICA 01. METODOS DE SIEMBRA Parte A

La inoculacin de medios de cultivo para la recuperacin, mantenimiento y/o aislamiento de

microorganismos, es un procedimiento fundamental e importante. Debe tenerse cuidado con
las tcnicas de siembra microbiana para evitar en lo posible la contaminacin por otros
microorganismos diferentes al deseado.
RESULTADOS PARTE A
Desinfecta el rea
Tapar y Agitar De 20-30 veces
Dejar enfriar asa
Realizar siembra

PR ACTICA 01. METODOS DE SIEMBRA Parte B

Tcnica de aislamiento de colonias por el mtodo de rejilla.

RESULTADOS PARTE B
En rejilla: esta tcnica se utiliza para conocer la habilidad de crecimiento de un microorganismo.
Procedimiento: - Se prenden mecheros alrededor del cultivo para evitar que otros
microorganismos lo contaminen. - Esterilizamos el asa redonda ponindola al rojo vivo y
sumergindolo en agua, Inmediatamente tomamos la muestra que en este caso salmonella
shigella, y la sembramos en el Agar realizando una lnea horizontal y otra vertical, las cuales
llevan ranuras por los lados.
RESULTADOS
Las colonias sospechosas de Shigella crecidas en Agar Salmonella-Shigella son transparentes,
translcidas u opacas y suelen ser lisas. En este medio las colonias de otros microorganismos
que fermentan la lactosa (Coliformes) son colonias rojizas y en muchos casos mucoides.

PRACTICA 02. TCNICAS DE TINCIN

a. En una lmina portaobjetos limpia, colocar una gota del agua destilada estril (trabajo con
muestra solida) o una gota del cultivo bacteriano (trabajo con muestra liquida) sobre la misma y
con ayuda del asa redonda estril extender la gota de suspensin a un rea no superior a 2cm
2

. b.
Dejar que la preparacin se seque al aire. Fijar con calor, pasando 3 veces seguidas a travs
de la llama del mechero. c. Dejar enfriar la lmina. Lo anterior se conoce como la realizacin de
un frotis y se hace para coloraciones donde la muestra debe ser fijada y luego si iniciar las
coloraciones respectivas. d. Colocar la preparacin sobre una rejilla encima del vertedero. e.
Cubrir la suspensin con algn colorante dado por el profesor, as: i. Cristal violeta: 1 minuto. ii.
Azul de metileno: 5 minutos. iii. Fucsina: 1 minuto f. Terminando el tiempo de coloracin segn
el colorante empleado, eliminar el colorante lavando con agua suavemente g. Dejar secar y
colocar la preparacin en la platina del microscopio y observar con el objetivo de mayor
aumento inicialmente hasta llegar al objetivo de 100X (ver figura1).
2. COLORACION COMPUESTA
a. Realizar un frotis de la muestra seleccionada. b. Colocar en la rejilla para coloracin y cubrir
el frotis con cristal violeta esperando que transcurra un minuto. Lavar con agua el colorante. c.
El segundo colorante es el Lugol, el cual se deja por 1 minuto sobre el frotis. d. Realizar la
decoloracin con la mezcla alcohol acetona por 25 segundos. Lavar inmediatamente con
agua. e. Finalmente adicionar el colorante de contraste, fucsina o safranina, por 30 segundos.
Lavar con agua. Escurrir en exceso de agua, dejar secar y montar el microscopio para hacer las
observaciones respectivas.
RESULTADOS

PRESENCIA DE COCOS GRAN POSITIVA VIOLETA.

PRACTICA 03. OBSERVACIN MICROSCPICA DE HONGOS

CONSOLIDACIN DE CONCEPTOS
1. Dibuje:
Cuerpo fructfero de un Aspergillus y nombre sus partes
El gnero Aspergillus comprende alrededor de 180 especies, son hongos filamentosos, hialinos
y ubicuos. Se reproducen asexualmente por conidias que se originan de grupos de filides
localizadas en un ensanchamiento terminal del conidiforo (vescula).
Figura 1. Estructuras de reproduccin asexual de Aspergillus sp. Cabeza aspergilar donde se observa el conidiforo,
vesculas, filides y cadenas de fialoconidias, estructuras todas ellas que intervienen en la reproduccin asexual de
los hongos de este gnero.

En estos hongos se ha descubierto su fase de reproduccin sexual y se ubican dentro de la

divisin Ascomycota. Son organismos heterotlicos y la unin de hifas de sexo diferente origina
la formacin de ascas que contienen ascosporas, tanto las ascas como las ascosporas estn
contenidas en un cuerpo fructfero que puede ser redondo y cerrado que se conoce como
cleistotecio, o bien, puede tener forma de pera llamado peritecio (Figura 2).
Aunque conocer la forma de reproduccin sexual es de gran utilidad para estudios
taxonmicos, fisiolgicos y de reproduccin, las enfermedades causadas por estos hongos se
presentan cuando el hongo se reproduce asexualmente. Los hongos de este gnero, tienen
gran potencial bitico y son degradadores activos del material orgnico y en consecuencia muy
tiles en la ecologa del planeta. Sin embargo, causan enfermedades en el humano y animales
por tres mecanismos diferentes:
a) Hipersensibilidad. Esta puede ser congnita y en estos casos Aspergillus slo acta como lo
haran otros antgenos ambientales por ejemplo, polvo o plenes ocasionando desde una rinitis
alrgica, hasta un asma crnico severo, los pacientes tienen concentracin elevada de IgE. En
otros casos, las personas pueden hacerse hipersensibles a los hongos de este gnero, si
trabajan en sitios con altos niveles de contaminacin por el agente, como puede ocurrir en los
silos donde se almacenan granos en malas condiciones de humedad y temperatura, en estos
casos se incrementa la concentracin de IgG.
b) Intoxicacin por ingesta de metabolitos fngicos (micotoxicosis). En estos casos, substancias
como las aflatoxinas producidas durante el crecimiento de A. flavus cuando se desarrolla
abundantemente sobre alimentos, puede causar daos a diversos rganos, an cuando al
momento de la ingesta, el hongo ya no est presente. Se ha demostrado el potencial
hepatotxico y cancergeno de muchos metabolitos como las aflatoxinas y ocratoxinas de
diversas especies de Aspergillus; y otras como la gliotoxina en estudios de laboratorio ha
mostrado tener un efecto inmunosupresor.
c) Invasin (micosis). El sufijo osis se refiere a enfermedad o invasin, como en todas las
infecciones, se substituye la ltima slaba por el sufijo y entonces cuando decimos aspergilosis
nos referimos a la invasin de tejidos y rganos por hongos de este gnero. Los hongos del
gnero Aspergillus, son capaces de invadir porque producen diversas enzimas inducidas como
lipasas o proteasas, elastasas o DNAsas. A pesar de la diversidad de substancias
potencialmente patgenas, las infecciones humanas generalmente requieren de factores
predisponentes.
Figura 2. Reproduccin sexual y asexual de Eurotium rubrum. En este caso, las ascas y ascosporas se encuentran
dentro de un cleistotecio. (Figura 278. Tomada de Herrera T, Ulloa M. El Reino de los Hongos 2a. Edicin. Fondo de
Cultura Econmica-UNAM. Mxico 2003).

Fuente: Imgenes Google

Cuerpo fructfero de un Penicillium y nombre sus partes.

Los penicilios son mohos comunes que desarrollan sobre los ms diversos substratos: granos,
paja, cueros, frutas, etc. Su identificacin en base a las caractersticas morfolgicas fue catica
hasta que Pitt (1980) normaliz las condiciones de cultivo y Frisvad (1981) consider la
formacin de los metabolitos secundarios en la descripcin de las especies. La importancia de
estos mohos en la alimentacin humana y animal se debe a que, adems causar deterioro,
producen toxinas. Penicillium es un gnero del reino Fungi. Tiene entre 100 y 150 especies. Las
especies de Penicillium son reconocidas por su denso cepillar como las estructuras del esporacojinete. Los conidiforos son simples o ramificados y son terminados por los racimos de
fialides en forma de botella. Las esporas (conidios) se producen en cadenas secas de las
extremidades de los fialides, con la espora ms joven en la base de la cadena, y son casi
siempre verdes. La ramificacin es una caracterstica importante para identificar especie del
Penicillium. Algunos no son ramificados y llevan simplemente un racimo de fialides en la tapa
del estpite. Otros pueden tener un racimo de ramas, cada cojinete un racimo de fialides. Un
tercer tipo tiene ramas el llevar de una segunda pedido de ramas, llevando alternadamente un
racimo de fialides. Estos tres tipos de sistemas del cojinete de la espora (penicilli) se llaman
monoverticillate, biverticillate y terverticillate respectivamente.
Fuente: Imgenes Google

Cuerpo fructfero y macroconidias de un Fusarium y nombre sus partes

La forma y tamao de las esporas es la caracterstica principal para el reconocimiento de los

fusarios. Las esporas estn dispersas en el micelio areo o en esporodoquios o masas limosas
(pionotos). Los macro conidios son curvados, pluriseptados, con una clula apical ms o menos
puntiaguda y en muchas especies con una clula basal en forma de pie. Los microconidios son
comnmente unicelulares, elipsoidales, fusiformes, claviformes, piriformes o subglobosos,
similares en ancho a los macroconidios, con una base redondeada o truncada, por lo general
formando cabezuelas mucosas, pero en algunas especies en cadenas baspetas. No siempre
son producidos ambos tipos de esporas. Los conidiforos del micelio areo en algunos casos
slo constan de una clula conidigena, en otros estn ramificados, a veces en verticilos. Las
monofilides producen conidios desde una sola abertura y en las polifilides surgen las esporas
desde ms de una abertura en la misma clula (Booth 1971).
Cuerpo fructfero y macroconidias de una Alternaria y nombre sus partes
El gnero Alternaria contiene especies cosmopolitas que se encuentran en un amplio rango de
materiales y productos. Como saprobias pueden deteriorar alimentos y forrajes, produciendo
compuestos biolgicamente activos tal como micotoxinas. Como patgenas reducen el
rendimiento de las cosechas o afectan a los vegetales almacenados. Es necesaria una
identificacin precisa de las especies porque cada nombre entraa un conjunto de
caractersticas (preferencias para el crecimiento, patogenicidad, produccin de metabolitos
secundarios) que permiten predecir el comportamiento del hongo (Andersen et al. 2001).
Fuente: Imgenes Google