ARTCULOS DE REVISIN

REV MED UNIV NAVARRA/VOL 48, N 1, 2004, 8-12

Lpez Moratalla N, Gonzlez de la Tajada I

Clulas madre pluripotentes humanas II

N. Lpez Moratalla1, I. Gonzlez de la Tajada2
Dpto. de Bioqumica. 2Dpto. de Histologa y Anatoma Patolgica. Universidad de Navarra

Correspondencia:
Natalia Lpez Moratalla
Dpto. de Bioqumica
Universidad de Navarra
(natalialm@unav.es)

Resumen

Summary

Hay abundantes pruebas de la existencia de clulas madre en los

tejidos animales y humanos provenientes de las tres hojas
blastodrmicas.
Hasta hace pocos aos, estas clulas troncales se consideraban
especficas de tejido, es decir, capaces de generar slo los tipos de
clulas propias del tejido en el que residan, pero estudios recientes,
demuestran una plasticidad inesperada de las clulas adultas, con
capacidad de generar tipos celulares adicionales. En efecto, sustituido su entorno natural por otro, ejecutan el programa de diferenciacin intrnseco de la clula de acuerdo con las nuevas seales de
diferenciacin que recibe.
En algunos casos, parece que algunas clulas troncales de adultos
tienen mayor potencial de diferenciacin que las clulas madre
embrionarias.
El mantenimiento de las propiedades de clulas madre, la posibilidad de reprogramarlas y comprometerlas, y el camino que siguen en
la regeneracin del tejido, es esencial para su uso en medicina
regenerativa.

There are numerous pieces of evidence showing the existence of stem

cells in animal and human tissues. These derive from the three germinal layers.
Until a few years ago, these stem cells were considered to be tissue
specific, that is, only capable of generating cells specific to a particular tissue. However, recent studies have demonstrated unexpected
plasticity of adult cells, thus showing their capability to generate other
cell types.
Placed in a particular microenvironment, cells execute an intrinsic
cellular differentiation program influenced by signals received from
their microenvironment.
In some cases, it seems that some adult stem cells have a greater
differentiation potential than embryonic stem cells. The maintenance
of stem cell properties, the way these cells can be reprogrammed and
compromised, and their role in tissue regeneration, are all essential
for their use in regenerative medicine.
Key words:

Adult stem cells. OCT-4. Plasticity. Differentiation.

Palabras clave: Clulas madre adultas. OCT-4. Plasticidad. Diferenciacin.

Reprogramacin celular hacia el tipo ES

Clulas madre pluripotentes por clonacin de clulas con
dotacin gentica del paciente
Se ha descrito que la mayor parte de los embriones clnicos
de ratn el gen Oct4 (tiene relacin con el mantenimiento de la
totipotencia de las clulas de los primeros estadios del desarrollo embrionario regulando la determinacin temprana del embrin preimplantatorio) se expresa errneamente, bien respecto
al tiempo, o bien respecto al sitio que ocupa la clula, no permitiendo un desarrollo embrionario1. Estos datos tienen gran
importancia: la expresin de Oct-4 determina si las clulas obtenidas por multiplicacin de un nuclvulo producen un embrin
clnico o un simple amasijo de clulas. La protena codificada
por el gen Oct4 es un factor de diferenciacin que dirige la
expresin de los genes programando as el establecimiento de
la estructura celular del embrin preimplantatorio. As pues una
controlada reprogramacin perfectamente errnea, que no
8

REV MED UNIV NAVARRA/VOL 48, N 1, 2004, 8-12

reprograme correctamente Oct4, no transforma el ovoncleo

en cigoto y las clulas derivadas de su multiplicacin no constituyen un embrin. Cabe pensar por tanto en tomar las clulas
del tipo ES de esa organizacin celular que no es un embrin,
clonarlas (multiplicarlas) y derivar de ellas clulas para transplante. Se podran obtener por tanto clulas madre del tipo
embrionario (mediante la transferencia de un ncleo de clula
somtica de un paciente a un vulo) sin que ello signifique
clonar al paciente, ya que la reprogramacin no se realiza hacia la obtencin de un embrin blastocisto clnico.
Clulas madre ES por reprogramacin partenogentica
de un vulo
La activacin qumica adecuada de un vulo maduro da
lugar a una multiplicacin de esta clula sin que expulse el
segundo corpsculo polar. Las clulas as obtenidas tienen la
informacin gentica duplicada de slo el proncleo materno.
Aunque al conjunto celular que se obtiene en forma de bola
hueca se le ha denominado embrin partenogentico, en reali2

Clulas madre pluripotentes humanas II

dad no es un verdadero embrin ya que carece de la contribucin paterna. No obstante se pueden desarrollar hasta estructuras del tipo blastocisto2 en los que se ha visto la presencia de
clulas tipo ES. En estudios realizados en ratones3 y en primates
no humanos4 se han conseguido clulas madre a partir de dichos embriones partenogenticos, lo que plantea la posibilidad
de que esta estrategia puede ser aplicable a los seres humanos.
De hecho se ha logrado activacin partenognica de oocitos
humanos5 con un proncleo haploide o con duplicacin del
proncleo. Estos resultados abren posibilidades interesantes de
obtener clulas troncales sin producir un embrin, aunque deber examinarse si las clulas troncales que se derivan de este
proceso tienen un potencial de desarrollo y funcionalidad similar a las derivadas de embriones generados mediante fecundacin o transferencia de ncleo; es posible que surjan anormalidades en el desarrollo y diferenciacin de las clulas, por los
efectos de la ausencia de la impronta de un genoma paterno.
Reprogramacin celular por factores del medio intracelular
Recientemente se han reprogramado clulas de adulto
por transdiferenciacin, sin acudir a la clonacin teraputica, ni
usar clulas madre embrionarias. Han convertido una clula de
la piel en linfocitos T necesarios para tratar al paciente6. A los
fibroblastos le hicieron una serie de poros microscpicos en las
membranas y los sumergieron durante una a dos horas en un
extracto de linfocitos T y despus cerraron los poros con calcio.
Protenas de las clulas T capaces de activar especficamente
los genes de los linfocitos emigran a las clulas de la piel y
activan en ellas estos genes especficos, mientras que los propios de la piel quedan inactivados. As los fibroblastos expresan
los receptores caractersticos de los linfocitos al cabo de unas
semanas. Este experimento muestra que no es necesario revertirlas al estado embrionario sino que se transforman o transdiferencian. Esto hace pensar que tal vez su vida media no sea tan
larga como si se reprograman al estado embrionario, pero tampoco tendrn el peligro de transformarse en clulas tumorales.
Reprogramacin celular por incorporacin de genes
Parece posible combinar el uso de las clulas madre con
la terapia gnica para corregir defectos genticos7. Se han utilizado ratones con una deficiencia en un gen importante para la
formacin de varios tipos de clulas del sistema inmunitario.
Empleando clulas somticas de los ratones se han producido
clones y obtenido clulas troncales. Utilizaron a continuacin
terapia gnica para introducir una copia funcional del gen defectuoso en las clulas troncales, adems de un gen que induca a las clulas troncales a transformarse en precursoras de
clulas inmunes. Estas ltimas fueron capaces de restaurar
parcialmente el sistema inmune daado de los ratones.

ciones fisiolgicas y adems de repararlos en caso de alteracin

o dao. Existe una amplia evidencia de la presencia de clulas
madre en los tejidos de animales y humanos; hasta la fecha se
conoce su presencia en mdula sea, sangre perifrica, sangre
del cordn umbilical, cerebro, mdula espinal, pulpa dentaria,
vasos sanguneos, msculo esqueltico, epitelio de la piel y
tejido conjuntivo, crnea, retina, hgado y los conductos del
pncreas; por tanto en tejidos que derivan de las tres capas
germinales. La definicin de estas clulas AS incluye, como en
el caso de las ES o EG, la capacidad de autorenovacin, es
decir, deben ser clulas no senescentes, deben ser capaces de
diferenciarse morfolgica y funcionalmente a tipos celulares de
las tres capas germinales, y deben tener la capacidad de contribuir a todos los tejidos somticos e incluso germinales cuando
son introducidas en blastocistos10.
Hasta hace pocos aos, estas clulas troncales se consideraban especficas de tejido, es decir, capaces de generar solo
los tipos de clulas presentes en el tejido en el que residan,
pero estudios recientes demuestran una plasticidad inesperada
de las clulas adultas, con la capacidad de generar tipos celulares adicionales. Sustituido su entorno natural por otro, ejecutan el programa de diferenciacin intrnseco de la clula de
acuerdo con las nuevas seales de diferenciacin que recibe.
En algunos casos, parece que algunas clulas troncales de adultos tienen mayor potencial de diferenciacin que algunas clulas troncales embrionarias. Esto podra deberse a que a medida
que el organismo crece y madura existe una disminucin en la
necesidad de restringir el potencial de diferenciacin. Como
hemos sealado, durante el desarrollo temprano, las clulas
que residen en estrecha proximidad (antes de alcanzar el estadio de blastocisto) se ven expuestas a grupos superpuestos de
seales extracelulares. Esto requiere el uso de mecanismos
autnomos de la clula (niveles de expresin del gen Oct 4, en
este caso) para restringir el potencial de seguir determinados
destinos (Figura 1). Pero a medida que el organismo crece, y
especialmente en adultos, las clulas troncales en diferentes
tejidos pueden estar espacialmente aisladas en nichos donde
no estn expuestas a seales inductivas presentes en otros tejiFigura 1. Las clulas MAPC fueron capaces de ser diferenciadas in
vitromediante la adicin de factores de crecimiento, hacia los tres
linajes celulares de los que derivan todas las clulas del organismo.
La diferenciacin inducida, adems de morfolgica, fue funcional

Clulas madre multipotenciales y pluripotentes

del organismo adulto
En 19998 se demostr que las clulas madre no tienen
que proceder necesariamente de embriones para que sean capaces de diferenciarse y dar clulas especializadas. En efecto,
en los tejidos de organismos adultos tambin existen clulas
madre, llamadas clulas madre de adulto (clulas AS)9. Las
clulas AS son responsables de mantener los tejidos en condi3

REV MED UNIV NAVARRA/VOL 48, N 1, 2004, 8-12

Lpez Moratalla N, Gonzlez de la Tajada I

dos. Por ejemplo, se ha descrito un extrao cambio de la direccin de diferenciacin: el compromiso hematopoytico de clulas madre neurales dependiente de las condiciones11. Dado que
el mantenimiento de la restriccin del potencial de desarrollo
es un proceso activo12, es posible que esa restriccin se elimine
a medida que el organismo crece ya que, por razones espaciales, las clulas troncales no encontrarn seales que inducen
diferenciacin hacia otros linajes13.
Algunos trabajos recientes han mostrado que en algunos
casos en el cultivo de diferenciacin de clulas madre de adulto
ocurre una fusin espontnea entre estas clulas y el lecho de
clulas sobre el que crecen14; estos datos plantean la duda de
que alguna de las trandiferenciaciones se deba a este fenmeno
ms que a una verdadera plasticidad intrnseca de las clulas
madre; las clulas hbridas expresan marcadores especficos de
clulas embrionarias y el factor de transcripcin Oct4 especfico de clulas pluripotentes. En todo caso estos experimentos
avalan los ya descritos acerca de que la hibridacin por
electrofusin de una clula ES con un timocito da lugar a una
reprogramacin a una clula rejuvenecida y con caractersticas
de clula madre embrionaria15. Una alternativa a los problemas
que presentan la aplicacin de las clulas ES a la terapia humana sera precisamente la posibilidad de inducir la expresin
del gen Oct4 en clulas de adulto rejuvenecindolas a clulas
madre pluripotentes.
Un trabajo publicado el ao 2002 por la Dra. CM. Verfaille,
en la prestigiosa revista Nature, ha ratificado lo que algunos
autores apenas sugeran. En el trabajo se validan, todas y cada
una de las premisas necesarias para considerar a una clula
madre adulta como pluripotente16.
El grupo investigador de este trabajo, consigui aislar un
tipo celular raro, denominado MAPCs, dentro de cultivos de
clulas madre del mesnquima de la mdula sea. Fueron capaces de mantener cultivos celulares de MAPCs, durante ms
de 80 pases, que en presencia de LIF (factor inhibidor de
leucemia), EGF (factor de crecimiento epitelial), y PDGF (factor de crecimiento derivado de plaquetas), se mantenan en
estado indiferenciado y eran positivas para los marcadores clsicos de clulas pluripotentes (Oct-4 +, Rex-1+, SSEA-I+).
Obtuvieron a partir de estas clulas, mediante la adiccin
de citoquinas tejido-especficas, clulas diferenciadas in vitro,
no slo de linaje mesenquimtico sino tambin endo y
ectodrmico. Obtuvieron clulas endoteliales (CD31+, Flk-1+,
vWF+), neuroprogenitores y clulas nerviosas ms especializadas (Serotonina +, GABA +), y clulas endodrmicas, con caractersticas funcionales de clulas hepticas (Albmina+,
citokeratina 8+, y glucognesis aumentada). La diferenciacin
inducida adems de morfolgica, era funcional.
As mismo, demostraron que las clulas eran capaces de
contribuir a la mayor parte de los tejidos somticos cuando
eran inyectadas en un blastocisto murino temprano. Obtuvieron
clulas derivadas de las inyectadas en encfalo, retina, pulmn,
miocardio, msculo esqueltico, hgado, intestino, rin, bazo,
mdula sea, sangre y piel. Adems, estas clulas estaban presentes no solo en embriones tempranos, sino tambin en individuos adultos, por lo que las clulas derivadas eran capaces de
ser funcionales durante todo el tiempo de vida del rgano.
En contraste con las clulas madre embrionarias, no se
detectaron tumores derivados de las clulas inyectadas en ninguno de los animales nacidos a partir de las quimeras, ya que,
10 REV MED UNIV NAVARRA/VOL 48, N 1, 2004, 8-12

aunque las clulas madre embrionarias contribuyen a la mayor

parte de tejidos somticos cuando son inyectadas en
blastocistos, este transplante suele dar lugar a la aparicin de
teratomas.
Los autores analizaron tambin la capacidad de diferenciacin de las clulas in vivo, mediante la inyeccin
intravenosa de las mismas, en animales post-natales. Las clulas ES no suelen dar lugar a injertos y a diferenciacin in
vivo cuando son inyectadas intravenosamente. Sin embargo
tras la inyeccin de clulas AS, los autores detectaron clulas
derivadas de las mismas en tejido hematopoytico (sangre y
mdula sea, y bazo), epitelio del pulmn, hgado e intestino,
tras 4-24 semanas despus del transplante. Las clulas, fueron
por tanto, capaces de migrar y diferenciarse especficamente
en respuesta a factores secretados por los diferentes rganos
As, el paradigma de que las clulas madre de adulto tienen restringida su potencialidad ha cedido ya ante la evidencia
creciente de que clulas AS contribuyen a otros tipos celulares
cuando estn expuestas a las influencias del entorno apropiadas.
Uso de clulas madre de adulto en terapia celular
Los hallazgos relacionados con la plasticidad en el desarrollo de las clulas troncales adultas plantea con claridad que
su existencia puede reemplazar el uso de clulas ES, y no slo
porque sean de suyo autlogas y no produzcan rechazo:
a. A una clula AS se le puede, de hecho, reprogramar
para que su diferenciacin se dirija hacia otros tipos
celulares y salte, o se transdiferencie, a clulas de capas embrionarias diversas. As por ejemplo clulas AS
de mdula sea pueden dar origen a msculo o a clulas hepticas17, y clulas musculares que pueden regenerar el sistema hematopoytico18. Y muy recientemente se ha conseguido transformar clulas madre
hepticas de ratn en clulas pancreticas productoras
de insulina19. Se han publicado numerosas revisiones9,14,20-24 de la presencia y diferenciacin hacia otros
tipos celulares de las AS.
b. Ms an, se ha identificado una clula madre en la
mdula sea que es pluripotente y por tanto equivalente a una clula ES en cuanto a potencialidad. Tras un
extenso crecimiento in vitro, algunas clulas de la mdula sea humana pueden dar lugar a lneas de diferentes
tejidos25,26. Las clulas mesenquimales CD34 negativas,
similares a fibroblastos, han podido aislarse de la medula
sea y de la sangre perifrica, y datos preliminares muestran que pueden obtenerse de forma muy eficiente de la
sangre del cordn umbilical27,28. Son tambin capaces
de generar las especficas de otros tejidos tales como
endotelio y cardiomiocitos29; pueden usarse en terapia
gnica30 y en la reconstruccin de miembros31. Un primer ensayo clnico se ha efectuado usando las clulas
madre del mesnquima de la mdula sea para el tratamiento de nios con una osteognesis imperfecta32.
c. Adems, las clulas madre procedentes de la mdula
sea que estn en circulacin, tienen la misma plasticidad que las de la mdula sea33. In situ se ha podido demostrar en ratn que la inyeccin de clulas madre hematopoyeticas (definidas funcionalmente por su
capacidad de repoblar la medula sea despus de un
2
4

Clulas madre pluripotentes humanas II

transplante) produjeron clulas de la sangre, de los conductos biliares, pulmn, del tracto intestinal y piel32,34,35.
Se ha demostrado que las clulas troncales de la medula
sea de adulto pueden inyectarse en sangre y de all emigran al
cerebro, se incorporan al tejido cerebral y se diferencian a
neuronas con expresin de protenas propias de estas clulas;
esta enorme plasticidad supone un potencial de aplicaciones
clnicas como fuente alternativa de neuronas para pacientes
con enfermedad neurodegenerativa del sistema nervioso36. Las
clulas madre de tejidos adultos pueden inyectarse en distintos
rganos, como corazn, msculo, hgado, pulmn o intestino,
transformndose in situ en clulas de esos tejidos. As se ha
comprobado35,37 que clulas madre de mdula sea no slo se
pueden transformar en clulas hepticas, sino que en experimentos realizadas en ratones17 pueden transformarse en clulas
hepticas, que en principio podran ser tiles para tratamiento
de enfermedades hepticas degenerativas. Tambin se ha conseguido regenerar clulas cardiacas en el miocardio lesionado
de ratones trasplantndoles clulas madre de mdula sea38;
inyectadas directamente al corazn o sencillamente a la circulacin, que no slo se convierten en msculo cardiaco sino que
se integran lentamente y llegan a ser indistinguibles y funcionales. Posteriormente se ha mostrado que las clulas estaminales
adultas de la mdula sea son eficaces en transplantes de corazn (incluso entre especies diferentes ya que no provocan rechazo), y una vez inyectadas parecen ir directamente a las
reas daadas y se convierten en tejido muscular del corazn,
vasos sanguneos y tejidos fibrosos39.
d. puede existir una regulacin negativa activa de la diferenciacin de tejidos hacia linajes no deseados.
Esta inesperada plasticidad de las clulas humanas despus del transplante abre nuevas perspectivas a la terapia con
clulas madre de adulto. Si bien se pens que el aislamiento y
el cultivo de clulas madre de tejidos adultos tendran serias
limitaciones tcnicas en el ser humano (con excepcin de las
clulas troncales cutneas, de la grasa y mesenquimales), y
que el uso teraputico estara ligado estrechamente a la posibilidad prctica de multiplicarlas in vitro en un modo eficiente,
los trabajos citados muestran que tales dificultades son superables; y sobre todo que, al menos de momento, ninguno de los
experimentos de transplante han producido tumores en el organismo receptor, a diferencia de las clulas ES.
Rejuvenecimiento de las clulas de adulto in vivo
Quiz el futuro se dirija ms directamente hacia la restauracin directa de las clulas en el organismo. Varios trabajos se
han encaminado a restaurar zonas del cerebro, haciendo proliferar y diferenciarse in situ las clulas madre neurales. La simple adicin de un factor de crecimiento las estimula40,41; de
esta forma los investigadores esperan aportar los componentes
colinrgicos de las neuronas perdidas en los enfermos de Alzheimer.
La infusin del factor denominado factor de crecimiento transformante (alfa-TGF) a ratas con la enfermedad similar a Parkinson
induce una proliferacin rpida de clulas madre neurales, seguida de su migracin y diferenciacin a neuronas, y las ratas tratadas mostraron un descenso de los sntomas42.
Otro hallazgo de gran inters es el hecho de que un transplante anima a que crezcan y se diferencien nuevas clulas a
partir de las clulas madre del organismo receptor. En contra
3
5

del paradigma imperante de que el corazn no puede ser reparado, se han encontrado nuevas clulas desarrolladas tras el
transplante43. Una respuesta regeneradora que no se esperaba.
En resumen, podemos afirmar44 que las clulas madre de
adulto son autoregenerativas, pluripotentes y capaces de repoblar los tejidos en que residen y tienen capacidad despus del
transplante de injertarse en tejidos de diferente origen. Las clulas de la mdula sea se diferencian a mltiples lneas; las
condiciones de cultivo y molculas inductoras pueden alterar el
comportamiento de las clulas estromales de la mdula sea y
el microambiente es crtico para alcanzar propiedades in vivo.
Las clulas reparadoras localizadas en la mdula sea, extradas de un donante (o del propio paciente) pueden trasladarse al
flujo sanguneo y ayudar a regenerar cualquier tejido.
Es interesante en este sentido, el conocimiento que actualmente tenemos de la regeneracin del hgado45. El hgado
mantiene una masa en estado estable que es bsicamente controlado por el delicado equilibrio entre aumento y disminucin
de clulas; la reconstruccin del rgano despus de perdida del
tejido no implica slo reemplazamiento de las clulas diana,
sino tambin un complejo proceso de remodelacin que tiene
como resultado la reconstruccin de la arquitectura tisular tpica. Por una parte los hepatocitos no son clulas diferenciadas a
termino, sino clulas detenidas en la fase G0 del ciclo celular
que son capaces de proliferar tras estmulos apropiados, sin que
en la mayor parte de las situaciones las clulas madre estn
implicadas en la respuesta de manera significativa. La regeneracin del hepatocito se acompaa por una secuencia de fases
diferentes: una fase de iniciacin que da lugar a clulas en un
estado capaz de replicarse una fase proliferativa en la que tiene
lugar la expansin de la poblacin celular y un a fase de terminacin en que se reprime el crecimiento para terminar la regeneracin en ese punto. Las tres fases se regulan por un amplio
grupo de factores, especialmente citoquinas, cuya identidad se
ha conocido con detalle usando modelos animales. La regeneracin exige una remodelacin compleja de todos los tejidos del
hgado que supone un reemplazamiento regenerativo de los
conductos y de los vasos sanguneos y las clulas estrelladas.
As las clulas madre hepticas se diferencian en el epitelio
biliar; por ejemplo, en el tejido cirrtico tanto las clulas que
expresan c-kit como las que expresan CD34 se sitan alrededor
de los conductos biliares; las c-kit-positivas co-expresan
citokeratina-9 cuando se integran al conducto, sugiriendo la
presencia de clulas progenitoras del epitelio46. A su vez, la
estructura y funcin de las clulas hepticas estrelladas es
crticamente dependiente de su microambiente, particularmente
de la presencia de un espacio perisinusoidal (de Disse), una matriz extracelular especfica de contacto con hepatocitos, clulas
endoteliales y macrfagos/clulas de Kupffer. De igual manera, la
neoangiognesis heptica implica dos tipos de clulas madre
endoteliales: las del tipo A son clulas precursoras del endotelio
vascular, presentes en gran numero, emigran a los vasos en proliferacin y tienen una escasa capacidad de proliferar. Por el contrario, las del tipo B derivan de los hemangioblastos circulantes,
derivados de la mdula sea, emigran a los sitios de neoangiognesis, y que estn en bajo nmero pero con gran capacidad
proliferativa. As el hgado tiene un nico endotelio venoso caracterizado por un turnover variado ya que implica adems de sus
propias clulas madre las derivadas de la mdula sea47.
REV MED UNIV NAVARRA/VOL 48, N 1, 2004, 8-12

11

Lpez Moratalla N, Gonzlez de la Tajada I

El mantenimiento de las propiedades de clulas madre, la

posibilidad de reprogramacin y de comprometerlas, y el camino que siguen en la regeneracin del tejido es esencial para su
uso en medicina regenerativa.

Bibliografa
1. Boiani M, Eckardt S, Scholer H R, McLaughlin K J. Oct4 distribution and level in mouse clones: consequences for pluripotency.
Genes Dev 2002;16:1209-19.
2. Trounson A. The genesis of embryonic stem cells. Nat Biotechnol
2002;20:237-8.
3. Kaufman MH, Robertson E J, Handyside A H, Evans M J.
Establishment of pluripotential cell lines from haploid mouse
embryos. J Embryol Exp Morphol 1983;73:249-61.
4. Cibelli JB, et al. Parthenogenetic stem cells in nonhuman
primates. Science 2002;295:819.
5. Nakagawa K, et al. A combination of calcium ionophore and
puromycin effectively produces human parthenogenones with
one haploid pronucleus. Zygote 2001;9:83-8.
6. Hakelien AM, Landsverk H B, Robl J M, Skalhegg B S, Collas P.
Reprogramming fibroblasts to express T-cell functions using cell
extracts. Nat Biotechnol 2002;20:460-6.
7. Rideout WM 3rd, Hochedlinger K, Kyba M, Daley G Q, Jaenisch
R. Correction of a genetic defect by nuclear transplantation and
combined cell and gene therapy. Cell 2002;109:17-27.
8. Bjornson CR, Rietze R L, Reynolds B A, Magli M C, Vescovi A L.
Turning brain into blood: a hematopoietic fate adopted by adult
neural stem cells in vivo. Science 1999;283:534-7.
9. Clarke D, Frisen J. Differentiation potential of adult stem cells.
Curr Opin Genet Dev 2001;11:575-80.
10. Morrison SJ, Shah N M, Anderson D J. Regulatory mechanisms
in stem cell biology. Cell 1997;88:287-98.
11. Morshead CM, Benveniste P, Iscove N N, van der Kooy D. Hematopoietic competence is a rare property of neural stem cells that
may depend on genetic and epigenetic alterations. Nat Med
2002;8:268-73.
12. Blau HM, Baltimore D. Differentiation requires continuous
regulation. J Cell Biol 1991;112:781-3.
13. Spradling A, Drummond-Barbosa D, Kai T. Stem cells find their
niche. Nature 2001;414:98-104.
14. Ying QL, Nichols J, Evans E P, Smith A G. Changing potency by
spontaneous fusion. Nature 2002;416:545-8.
15. Tada M, Takahama Y, Abe K, Nakatsuji N, Tada T. Nuclear
reprogramming of somatic cells by in vitro hybridization with ES
cells. Curr Biol 2001;11:1553-8.
16. Jiang Y, et al. Pluripotency of mesenchymal stem cells derived
from adult marrow. Nature 2002;418:41-9.
17. Petersen BE, et al. Bone marrow as a potential source of hepatic
oval cells. Science 1999;284:1168-70.
18. Gussoni E, et al. Dystrophin expression in the mdx mouse restored
by stem cell transplantation. Nature 1999;401:390-4.
19. Yang L, et al. In vitro trans-differentiation of adult hepatic stem
cells into pancreatic endocrine hormone-producing cells. Proc
Natl Acad Sci USA 2002;99:8078-83.
20. Reya T, Morrison S J, Clarke M F, Weissman I L. Stem cells,
cancer, and cancer stem cells. Nature 2001;414:105-11.
21. Temple S. The development of neural stem cells. Nature 2001;
414:112-7.
22. Anderson DJ, Gage F H, Weissman I L. Can stem cells cross
lineage boundaries? Nat Med 2001;7:393-5.
23. DeWitt N, Knight J. Biologists question adult stem-cell versatility.
Nature 2002;416:354.
24. Terada N, et al. Bone marrow cells adopt the phenotype of other
cells by spontaneous cell fusion. Nature 2002;416:542-5.

12 REV MED UNIV NAVARRA/VOL 48, N 1, 2004, 8-12

25. Reyes M, et al. Purification and ex vivo expansion of postnatal

human marrow mesodermal progenitor cells. Blood 2001;98:
2615-25.
26. Lagasse E, et al. Purified hematopoietic stem cells can differentiate
into hepatocytes in vivo. Nat Med 2000;6:1229-34.
27. Huss R, Lange C, Weissinger E M, Kolb H J, Thalmeier K. Evidence
of peripheral blood-derived, plastic-adherent CD34(-/low)
hematopoietic stem cell clones with mesenchymal stem cell
characteristics. Stem Cells 2000;18:252-60.
28. Lange C, Kaltz C, Thalmeier K, Kolb H J, Huss R. Hematopoietic
reconstitution of syngeneic mice with a peripheral blood-derived,
monoclonal CD34-, Sca-1+, Thy-1(low), c-kit+ stem cell line.
J Hematother Stem Cell Res 1999;8:335-42.
29. Makino S, et al. Cardiomyocytes can be generated from marrow
stromal cells in vitro. J Clin Invest 1999;103:697-705.
30. Bianco P, Riminucci M, Gronthos S, Robey P G. Bone marrow
stromal stem cells: nature, biology, and potential applications.
Stem Cells 2001;19:180-92.
31. Gazit D, et al. Engineered pluripotent mesenchymal cells integrate
and differentiate in regenerating bone: a novel cell-mediated gene
therapy. J Gene Med 1999;1:121-33.
32. Horwitz EM, et al. Transplantability and therapeutic effects of
bone marrow-derived mesenchymal cells in children with
osteogenesis imperfecta. Nat Med 1999;5:309-13.
33. Korbling M, et al. Hepatocytes and epithelial cells of donor
origin in recipients of peripheral-blood stem cells. N Engl J Med
2002;346:738-46.
34. Krause DS, et al. Multi-organ, multi-lineage engraftment by a
single bone marrow-derived stem cell. Cell 2001;105:36977.
35. Alison MR, et al. Hepatocytes from non-hepatic adult stem cells.
Nature 2000;406:257.
36. Mezey E, Chandross K J, Harta G, Maki R A, McKercher S R.
Turning blood into brain: cells bearing neuronal antigens
generated in vivo from bone marrow. Science 2000;290:177982.
37. Alison M, Golding M, Lalani el-N, Sarraf C. Wound healing in
the liver with particular reference to stem cells. Philos Trans R
Soc Lond B Biol Sci 1998;353:877-94.
38. Clarke DL, et al. Generalized potential of adult neural stem cells.
Science 2000;288:1660-3.
39. Wang JS, Shum-Tim D, Chedrawy E, Chiu R C. The coronary
delivery of marrow stromal cells for myocardial regeneration:
pathophysiologic and therapeutic implications. J Thorac
Cardiovasc Surg 2001;122:699-705.
40. Tuszynski MH. Intraparenchymal NGF infusions rescue degenerating cholinergic neurons. Cell Transplant 2000;9:629-36.
41. Kondo T, Raff M. Oligodendrocyte precursor cells reprogrammed
to become multipotential CNS stem cells. Science 2000;289:
1754-7.
42. Fallon J, et al. In vivo induction of massive proliferation, directed
migration, and differentiation of neural cells in the adult mammalian brain. Proc Natl Acad Sci USA 2000;97:14686-91.
43. Quaini F, et al. Chimerism of the transplanted heart. N Engl J
Med 2002;346:5-15.
44. Bianchi G, et al. Microenvironment and stem properties of bone
marrow-derived mesenchymal cells. Wound Repair Regen 2001;
9:460-6.
45. Zimmermann A. Liver regeneration: the emergence of new
pathways. Med Sci Monit 2002;8:RA53-63.
46. Crosby HA, Kelly D A, Strain A J. Human hepatic stem-like cells
isolated using c-kit or CD34 can differentiate into biliary
epithelium. Gastroenterology 2001;120:534-44.
47. Gao Z, McAlister V C, Williams G M. Repopulation of liver
endothelium by bone-marrow-derived cells. Lancet 2001;357:
932-3.

2
6