ANEXA II

REACTIVI SI COLORANTI

Apa fiziologica - cu urmatoarea compozitie (g/l):

NaCl…………………..8.5 gr
A.D…………….……1000 ml
se dizolva, se filtreaza, se repartizeaza in flacoane si se sterilizeaza la 1.0 atm (1210C),
20min.

Albastru cotton lactofenol – pentru evidentierea microscopica a mucegaiurilor, cu

urmatoarea compozitie (g/l) :
Acid lactic……………………………………20.0gr
Fenol………………………………………...20.0gr
Glicerina………………………………..……..40gr
A.D………………………………………….20.0ml
Albastru ctton…………………………………0.05gr

Albastru de metilen 1/10.000 – se prepara astfel (g/l):

(1) Solutie apoasa albastru de metilen 1 :5000……..100ml
(2) Solutie KH2PO4 0.5M…………………….…99.75 ml
Solutie Na2HPO40.5M…….……..…………0.025 ml
pH = 4.6
solutia de lucru se prepara extemporaneum prin amestacarea de volume egale din
cele doua solutii

Albastru de metilen - pentru coloratia simpla, cu urmatoarea compozitie (g/l) :

Albastru de metilen………………………………...0.3 g
Etanol absolut………………………….………..30.0 ml
Solutie apoasa KOH 1%.........................................1.0 ml
A.D……………………………………….……100.0 ml

Colorant d’Albert – pentru evidentierea incluziilor de volutina, cu urmatoarea compozitie

g/l) :
Albastru de toluidina………………………….…..15 g
Verde malachit………………………..………….2.0 g
Etanol……………………………………..…..20.0 ml
Acid acetic……………………………………10.0 ml
A.D………………………………………….1000. ml

Fuxina bazica fenicata – pentru coloratia simpla si coloratia Gram, cu urmatoarea

compozitie (g/l) :
Fuxina bazica………………………………..10.0gr
Etanol…………………………………….…..100ml
Fenol…………………………………………50.0 gr
A.D…………………………………….……1000ml
Solutia stoc se prepara din fuxina si etanol, similar ca la violetul de Gentiana. Solutia
hidroalcoolica fenicata se prepara in aceeasi maniera cu deosebirea ca se folosesc
5.0gr fenol pentru 100ml solutie. Solutia astfel obtinuta este fuxina concentrata Ziehl,
din care se prepara solutia de fuxina 1/10 pentru coloratia simpla si coloratia Gram :
Fuxina concetrata Ziehl…………………………10ml
A.D…………………………….…………………90ml
299
Mordant - pentru evidentierea capsulei, cu urmatoarea compozitie:
Fenol…………………………………..…..30.0 ml
Acid acetic 20%...........................................10.0 ml
Solutie FeCl3 30%.........................................4.0 ml
Solutie apoasa de fuxina acida 1%………….2.0 ml

Safranina – solutie hidroalcoolica 1% pentru coloratia Gram, cu urmatoarea compozitie:

Safranina…………. 1.0 g
Etanol……………50.0 ml
A.D…………………50.0 ml
Colorantul se dizolva in etanol si apoi se completeaza cu A.D.

Solutie Lugol – pentu coloratia Gram, cu urmatoarea compozitie (g/l):

I2……………….……………..1.0gr
KI……………………..………2.0gr
A.D…………………….……300ml
Se prepara o solutie foarte concentrata de KI prin dizolvarea in A.D. adaugata cu
picatura. Se aadauga ulterior I2 si se omogenizeaza cu bagheta de sticla pana la
completa dizolvare a I2. Se adauga restul de A.D. Solutiile Lugol mai concentrate,
folosite in alte scopuri, se prepara in mod similar, folosind mai putina A.D.: 60ml
(1:2:60, pentru evidentierea incluziilor de glicogen).

Solutie alcool : acetona (1 :4) – pentru coloratia Gram, cu urmatoarea compozitie:

Acetona………….………………1 parte (in volume)
Etanol…………………..………3 parti (in volume).

Verde malachit – solutie apoasa 0.5 % pentru evidentierea endosporilor, cu urmatoarea

compozitie :
Verde malachit…………………………...……..0.5 g
A.D……………………………………….100.0 ml
Amestecul se mojareaza pana la completa dizolvare a colorantului.

Violet de Gentiana fenicat – pentru coloratia Gram, cu urmatoarea compozitie (g/l):

Solutie stoc: Violet de Gentiana………………….……….10.0gr
Etanol……………………………………….100 ml
Fenol…………………………………….……..20gr
A.D. neutra*………………………………1000 ml
Dupa mojarare, se adauga treptat etanol peste violetul de Gentiana. Dupa fiecare
adaugare, supernatantul se decanteaza intr-un flacon de 250ml. Flaconul cu
supernatant se incubeaza la 370C timp de 5-7 zile, cu agitare ocazionala.
Apa fenolata: fenol……………………………….…….2.0 ml (2.0gr)
A.D. neutra………………………………90.0ml
Fenolul se lichefiaza pe baie de apa la 600C si se adauga in volumul de a.d. Apa fenolata se
filtreaza
Solutia hidroalcoolica fenicata de lucru:
solutie baza……………………..…….10.0ml
apa fenolata……………………………90.0ml
*A.D. neutra - A.D. obtinuta prin fierbere tipm de 0.5h, pentru eliminarea CO2.

300