Manual MGII

MANUAL DE PRACTICAS
DE
MICROBIOLOGA
GENERAL II
UNIVERSIDAD NACIONAL AUTONOMA DE MEXICO
FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES ZARAGOZA
PABLO SALGADO AGUIRRE

JOS LUIS A. MORA GUEVARA
MARA JOS MARQUES DOS SANTOS
YOLANDA FLORES CABRERA
Realizado con el apoyo del Proyecto

PAPIME PE200210
2012
PRESENTACIN
El
presente
trabajo
titulado
MANUAL
DE
PRCTICAS
DE
MICROBIOLOGIA II es parte del Proyecto PAPIME PE200210 de
elaboracin de Material Multimedia, Libros electrnicos y cursos en lnea
para el apoyo a la enseanza y aprendizaje del Mdulo de Microbiologa
General II, del sptimo semestre de la carrera de Qumica Farmacutico
Biolgica (Q.F.B.) de la Facultad de Estudios Superiores Zaragoza, UNAM.
Este material pretende facilitar el aprendizaje de los estudiantes
universitarios en este mdulo permitindoles la identificacin de los
microorganismos de manera ms sencilla ya que se incluyen diversas
imgenes tanto propias como obtenidas de varias fuentes.
Se incluyen 14 prcticas cada una de las cuales contiene estructura del
microorganismo, objetivos de la prctica, material necesario para llevarla a
cabo, mtodo, diagrama de flujo, cuestionario y referencias.
Entre los mltiples desafos que la asignatura enfrenta, es la habilidad para
identificar cada tipo de microorganismo: parsitos, hongos y virus y
comprender los posibles daos al ser humano.
Esperamos sea del agrado de estudiantes y maestros y con ello fomentar
el estudio para formar profesionales comprometidos con su carrera y su
actividad profesional.
Fue realizado como una Actividad de Servicio Social por:
PABLO SALGADO AGUIRRE
Con la asesora de:

Dr. Jos Luis A. Mora Guevara
M. en C. Mara Jos Marques Dos Santos
Mtra. Yolanda Flores Cabrera
INSTRUCCIONES PARA EL USO DE ESTE LIBRO

ELECTRNICO
i. Desde las hojas miniatura se puede ir a cualquiera de las pginas
con slo dar clic en la parte superior deseada.
2
Para AVANZAR RETROCEDER una pgina, coloqese en la orilla

derecha (izquierda) hasta que el cursor cambie a:
Para ir a una pgina determinada posterior, coloqese en la orilla

hasta que el cursor cambie a:
4. Para ir a una pgina determinada anterior, coloqese en la orilla

hasta que el cursor cambie a
5.
Si se coloca el cursor en la esquina superior derecha avanza las

pginas rpidamente y en la esquina inferior derecha avanza rnuy
lento, mientras que si se coloca en la orilla y al centro, el avance no
es ni m uy lento ni muy rpido.
6 Si se coloca el cursor en las esquinas inferiores (derecha o izquierda)

se puede hojear el libro corno un libro real cuando el cursor cambie
a
7.
Tambin se puede rnover las pginas con el cursor derecho e

izquierdo.
Si desea otras opciones vea el rnen en la parte superior.
Contenido
Unidad I. Parasitologa
Prctica 1. Protozoarios y helmintos de vida libre y
parasitaria......................................................................
Prctica 2. Transmisores, vectores y ectoparsitos...................
Prctica 3. Tcnicas de colecta y tincin de parsitos.............
Prctica 4. Hemoparsitos.............................................................
Prctica 5. Coproparasitoscpico.................................................
Unidad II. Micologa

Prctica
Prctica
Prctica
Prctica
Prctica
1.
2.
3.
4.
5.
Observacin de estructuras de hongos...................

Aislamiento de hongos de diferentes fuentes.........
Caractersticas tintoriales de los hongos.................
M icrocultivo...................................................................
Determinacin de las caractersticas fisiolgicas
de los hongos................................................................
Prctica 6. Fisiologa de levaduras...............................................
Unidad III. Virologa

Prctica 1. Aislamiento de bacterifagos.....................................
Prctica 2. Hemaglutinacin viral e inhibicin de la
hem aglutinacin............................................................
Prctica 3. Estructuras del embrin de pollo y sus vas de
inoculacin.....................................................................
10
11
21
28
41
50
60
61
69
77
86
93
99
108
109
118
126
UNIDAD
I
PARASITOLOGA
Si no conozco una cosa, la investigar.

Sorprendernos por algo es el primer paso
de la mente hacia el descubrimiento.
m ssk w
rr - ^
Louis Pasteur (1822-1895) Qumico y microbilogo francs
W mm
PRACTICA
NMERO
1
PROTOZOARIOS Y HELMINTOS DE VIDA

UBRE Y PARASITARIA. (MORFOLOGA).
PRACTICA NUMERO 1
PROTOZOARIOS Y HELMINTOS DE VIDA LIBRE Y PARASITARIA (Morfologa)
INTRODUCCIN
PROTOZOARIOS
Los Protozoarios son microorganismos
que pertenecen al reino Protista, son
unicelulares y poseen gran variedad de
formas y tamaos, en la naturaleza
existen
aproximadamente
45,000
especies conocidas entre protozoarios
de vida libre y parasitaria.
son multinucleadas como las de

gnero Chaos sp. y Pelomyxa sp.
e. Vacuolas
contrctiles;
son
estructuras grandes, circulares
que regulan la presin interna del
agua.
f. Vacuolas alimentarias; contiene
nutrientes tiles a la clula.
Los protozoarios tanto de vida libre

como parsitos se dividen en cuatro
clases:
Sarcodina
Mastigosphora
Ciliosphora
Sporozoa
La clase Sarcodina presenta dos
principales formas de resistencia,
trofozoito (forma mvil) y quiste (forma
inmvil), la reproduccin se da por
fisin binaria o por esquizogonia (fisin
binaria acelerada).
El trofozoito presenta:
a. Pseudpodos falsos pies;
proyecciones protoplsmicas que
funcionan como rgano
locomotor.
b. Ectoplasma; capa exterior de
citoplasma de apariencia clara.
c. Endoplasma; regin
intracitoplsmica.
d. Ncleo; generalmente presenta
uno, algunas amibas gigantes
UNIDAD I - PARASITOLOGIA
PRCTICA NUMERO 1 [
La clase Mastigosphora, presenta dos

formas de resistencia, trofozoito y
quiste, el tipo de reproduccin de estos
protozoarios es de tipo asexual por
fisin binaria:
'< ' C
i
*"
Trypanosoma cruzii
PRCTICA NMERO 1
Estructuras principales del trofozoito:

a. Flagelo; puede tener uno o ms
estructuras largas en forma de
ltigo que le sirve para la
locomocin. Algunos protozoarios
de esta clase presentan una
membrana ondulante como en el
caso de Trypanosoma sp.
b. Pelcula; cubierta elstica ms
fuerte que la membrana celular a
la cual le proporciona proteccin
contra sustancias qumicas, dao
mecnico y perdida de agua.
c. Boca; se puede presentar en
forma difusa.
d. Cloroplasto; es un organelo
conteniendo clorofila slo lo
presenta
las
formas
fotosintticas.
e. Mancha Ocular; mancha que se
pigmenta en presencia de luz.
f. Ncleo; presenta de uno a dos.
Estructuras
principales
mastigosphora
en
clase
Tripanosoma cruzii.
ocular
Eritrocito
La clase Ciliosphora se reproduce por

conjugacin y presenta las siguientes
caractersticas morfolgicas:
a. Cilios; estructuras cortas de
aspecto velloso que le sirven para
la locomocin y alimentacin.
b. Pelcula;
capa
flexible
ms
externa.
c. Vacuola contrctil con canales
radiantes;
regula la presin
osmtica.
d. Vacola alimentaria; sitio de
digestin
de
los
alimentos
ingeridos.
e. Macroncleo; un gran ncleo que
funciona
para
controlar
las
actividades celulares.
f. Microncleo; pequeo ncleo que
funciona en combinacin con el
macroncleo
a
modo
de
reproduccin sexual.
Ejemplo ms representativo:
o ra l p p a ra tu *
PRCTICA NMERO 1 [
o(
ncys<<* tco p h
PRCTICA NMERO 1
B a la n tid iu m coH
La clase Sporozoa al igual que la clase

Sarcodina presenta reproduccin por
fisin binaria, sin embargo tambin lo
pueden realizar por esquizogonia esta
puede ser sexual o asexual:
a. Protozoario que presenta gran
complejidad en su ciclo biolgico.
b. Presenta tanto fase sexual como
asexual de reproduccin.
c. Puede requerir de un vector
biolgico para su transmisin.
d. Se
considera
un
parsito
intracelular obligado.
HELMINTOS
Los Helmintos son pluricelulares por lo
que tambin son conocidos como
metazoarios pueden ser aerobios o
anaerobios; sus ciclos de vida son
complejos, as como tambin su
estructura,
sus
hospederos
intermediarios son numerosos.
El
conocimiento de sus estadios durante
su ciclo biolgico, son esenciales para
establecer sus diversas etapas de vida;
tanto vegetativa o de vida libre como la
infectiva o parasitaria.
PRCTICA NMERO 1 [
Triada ecolgica.
Estos se consideran de gran inters
dentro de la parasitologa clnica y se
dividen en dos grupos platelmintos y
nematelmintos.
Los
Platelmintos
se
divididos en dos clases:
Cstoda
Tremtoda
encuentran
Los
Cstodos
se
caracterizan
morfolgicamente por ser gusanos
polizoicos ya que presentan un cuerpo
alargado con forma plana o de cinta,
estn compuestos de gran cantidad de
unidades funcionales y estructurales
llamados progltides al conjunto de
estos se le llama estrbilo, presentan
un rgano de fijacin llamado escolex,
el cual puede tener en ocasiones una
corona de espculas llamada rostelo.
Taenia solium.
Esclex
R stelo
PRCTICA NMERO 1
Su cuerpo est cubierto por una fina

capa llamada tegumento, con funciones
absorbentes y excretoras, para lo cual
presenta microvellosidades.
Ejemplo de un parsito de esta clase:
Esta clase de helmintos posee ambos

sexos por lo cual se consideran
hermafroditas; adems de tener un
sistema sexual y un sistema excretor
que realiza por transporte activo a
travs de su membrana.
Algunos ejemplos de parsitos de este
tipo son:
La clase de los Tremtoda se

caracteriza
por
ser
gusanos
monozoicos con cuerpo ancho y con un
slo juego de unidades estructurales y
funcionales; tienen forma acelomada o
de hoja, poseen un dorso ventral,
asimetra
bilateral
con
un
tipo
pronefrtico
de
sistema
excretor
(clulas en vaina) osmorregulador,
carecen de ano, aparato circulatorio y
respiratorio.
Estn
llenos
de
parnquima
y
la
mayora
son
hermafroditas.
PRCTICA NMERO 1 [
NEMTODOS
Los Nemtodos pueden ser de vida
libre o parsitos, de cuerpo alargado,
cilindrico de tamao microscpico o
macroscpico.
Son
generalmente
dioicos, es decir, presentan sexos
separados.
Nemtodos con sexos separados.

Dentro de su forma cilindrica existen
variedades morfolgicas como son:
Fusiforme: con extremos romos,

puntiagudos o combinacin de los
dos, como en el caso de Ascaris
lumbricoides.
Filiforme: muy delgados y largos

como Onchocerca volvulus.
PRCTICA NMERO 1
Intermedia: es una combinacin de

las dos anteriores, es decir, porcin
anterior filiforme y porcin posterior
fusiforme como es el caso de
Trichuris trichiuria.
Presentan las siguientes estructuras;

Cutcula, laminilla basal, hipodermis,
musculatura y diversas estructuras
especializadas en la superficie, tracto
digestivo, sistema nervioso primitivo,
aparato excretor y reproductor con
sexos separados siendo las hembras
de mayor tamao, tienen un rgano de
fijacin el cual est compuesto de
placas o dientes.
Estructuras generales de protozoarios y

helmintos.
Protozoarios
E s tic o s ito
E s fa g o
Un ejemplo de un parsito de este tipo

es la Ascaris lumbricoides.
a nterior
Pr im o rd io g e n it a l
0 , 1m m
scaris lumbricoides.
PRCTICA NMERO 1 [
PRCTICA NMERO 1
OBJETIVOS:
1. Adquirir la capacidad de identificar protozoarios presentes en
diferentes muestras como el agua encharcada.
2. Conocer algunos grupos de protozoarios y helmintos a partir de
las observaciones realizadas con el microscopio.
3. Identificar los diferentes protozoarios y helmintos que pueden
parasitar al humano y a los que se pueden encontrar en vida
libre.
MATERIAL POR EQUIPO:
s Microscopio.
s Estereoscopio.
s Muestra de agua residual o estancada (esperar asignacin por
parte de los asesores).
s Portaobjetos y cubreobjetos por equipo.
j Aceite de inmersin
s Preparaciones fijas y/o diapositivas de:
a)
b)
c)
d)
e)
f)
Fasciola hepatica.
Taenia solium.
Ascaris lumbricoides.
Entamoeba histolitica.
Giardia lamblia.
Plasmodium sp.
UNIDAD I - PARASITOLOGA
PRCTICA NUMERO 1 f
PRCTICA NMERO 1
METODO
1. Recolecte una muestra de agua
residual (encharcada)
2. Realice varias preparaciones de!
agua estancada colocando una
gota de la misma en un
portaobjetos y posteriormente
colocar un cubreobjetos primero
una arista y lenta mente el resto
para evitar la formacin burbujas
del cubreobjetos.
3. Observe al microscopio dichas
preparaciones con los objetivos;
seco dbil (10X) y seco fuerte
(40X),
esquematizar
lo
observado,
resaltando
las
caractersticas morfolgicas de
los parsitos.
4. Observe las preparaciones fijas
que
le
proporcionen
o
diapositivas que proyecten los
asesores.
5. Observe las preparaciones o
frotis con el microscopio a 40X y
100X (aceite de inmersin).
6. Las preparaciones fijas ms
grandes como Taenia solium y
Ascaris lumbricoides obsrvelas
con el estereoscopio.
7. Esquematice lo observado cmo
se ejemplifica.
PRCTICA NMERO 1 i
Clase
Genero
_
C la se __
Genero
PRIMERA PARTE:
1. Recolectar
una muestra de
agua
4. Realizar
descripciones y
esquemas
2. Colocar gota
de agua entre
porta y cubre
objetos
3. Observar con
objetivos seco
dbil y seco
fuerte
PRCTICA NMERO 1
SEGUNDA PARTE:
CUESTIONARIO
1. Mencione como mnimo cuatro
protozoarios de inters mdico que
parasitan el intestino humano.
fijas
proporcionadas
2. Qu platelminto causa
cisticercosis?
3. Qu parsito puede causar
elefantiasis?
Preparaciones:
Cstodo de
gato, filaras de
sapo y Fasciola
heptica hgado
de res
Trypanozoma
bruceii
4. Qu parsito es agente causal del

prolapso rectal en el humano?
5. Cuntos tipos de Plasmodium
causan paludismo en el hombre?
REFERENCIAS
Observar al
microscopio a
100X, con aceite
de inmersin.
Observar
Con
estereoscopio
E squem atizar lo
observado
1. Tay Z.J, Velasco C.O, Guterrez

Q.M. Parasitologa Mdica. 7a ed.
Mxico: Mndez editores; 2002.
2. Quiroz
H.
Parasitologa:
enfermedades
parasitarias
de
animales
domsticos.
Mxico:
Editorial Limusa; 2005: p. 117118.
3. Romero
R.
Microbiologa
y
parasitologa
humana:
bases
etiolgicas de las enfermedades
infecciosas y parasitarias. 3a ed.
Mxico: Editorial Panamericana;
2007.
4. Capuccino
J,
Sherman
N.
Microbiology: Laboratory manual.
5a ed. USA: Benjamn/Cuminngs
Pub Co edition; 1998.
PRCTICA NMERO 1 i
PRCTICA NMERO 1
5. Greenberg A. Standard methods

of the examination of water and
wastewater. 18a ed. USA: ALPHA
edition; 1992.
6. Rodrguez E. Manual ilustrado de
parasitologa
mdica.
Mxico:
Editorial Cuellar; 1998.
7. Zaman V. Atlas de parasitologa
mdica. 2a ed. Argentina: editorial
Mdica Panamericana; 2004.
8. Anlisis de aguas: imagen tomada
de URL:
http://cirabin.diaitalbrain.com/cirabi
n/accounts/staff/casandra/web/PR
QGRAMA%20CLARA/?cmd=reor
d e r&m ove=/ci ra b in/acco u nts/staff/
casandra/web/PRQGRAMA%20C
LARA/
PRCTICA NMERO 1
PRACTICA
NMERO
2
TRANSMISORES, VECTORES Y
ECTO PARSITOS
UNIDAD I PARASITOLOGA |
PRCTICA NMERO 2
TRANSMISORES, VECTORES Y ECTOPARSITOS
a.
Endoparsito: parsito que
vive dentro del husped. Pudiendo
ser intracelular o extracelular.
INTRODUCCIN
Las asociaciones que se presentan

entre los seres vivos que hay en la
naturaleza son muy amplias dentro de
estas estudiaremos particularmente al
parasitismo que es principalmente
resultado de la relacin entre dos seres
vivos uno de los cuales es llamado
parsito y el otro hospedero o
mesonero. En esta relacin biolgica el
parsito, es el nico beneficiado de la
asociacin, pues obtiene casa y
sustento del otro ser vivo llamado
hospedero, con la particularidad de que
el parsito causa dao al hospedero.
Una definicin de un parsito es: Un
organismo que vive a expensas de otro
ser vivo al cual causa dao.
* Endoparsito
b. Ectoparsito: parsito que vive en

la superficie externa del husped.
Pudiendo
ser
obligados
o
temporales;
los
ectoparsitos
pueden succionar sangre, ingerir
epitelio, etc. Son considerados un
serio factor de diseminacin de
diversas enfermedades ya que en
ocasiones pueden desempearse
como vectores.
Triada ecolgica.
E c to p a r s ito
Existen diversos tipos

como son:
de
parsitos
PRCTICA NUMERO 2 [
PRCTICA NMERO 2
c. Errtico: el parsito se encuentra

en localizacin no habitual un
ejemplo de estos es Ascaris
lumbricoides cuando se encuentra
parasitando el rin u otros
lugares del cuerpo humano.
cambios en su ciclo biolgico y

adems
se
reproduce
activamente. Un ejemplo es el
mosquito Anopheles que transmite
el paludismo.
'-Krt.QUrtO AiOphJ
E iporouta w las
rijl M N te 5
Transmisin
ciclo
del
(paludismo)
ciclopropagativa,
plasmodium
sp.
scaris lumbricoides en nariz y boca.

El tipo de transmisin se puede dar de
dos formas:
A.Transmisin mecnica; los vectores
son
acarreadores
pasivos
de
enfermedades,
por:
picadura,
excrecin, posar sus patas en
alimentos, lesiones, etc.
c. Ciclodesarrollo; el parsito dentro

del artrpodos sufre cambios en
su ciclo pero no se reproduce. Un
ejemplo
pueden
ser
los
ectoparsitos que contienen y
transmiten las filaras.
B.Transmisin biolgica; en este caso

parte del ciclo del parsito se
desarrolla dentro del ectoparsito.
Esta a su vez se divide en:
a. Propagativa; el parsito, en el
interior del artrpodos no se
presentan cambios en su ciclo
biolgico pero si se reproduce
activamente. Un ejemplo es el
virus que causa la fiebre amarilla.
b. Ciclopropagativa;
el
parsito
dentro del ectoparsito presenta
PRCTICA NMERO 2
Ciclodesarrollo. Ciclo de Wuchereria

bancrofti (filariasis).
PRCTICA NMERO 2
E! ciclo de vida de los parsitos vara

en la mayora de las especies
conocidas, esto dependiendo de la
cantidad de hospederos intermediarios
que
tienen.
Las
principales
clasificaciones son:
b. Polixenos: parsitos que en su ciclo

biolgico presentan un husped
definitivo
y
uno
o
varios
intermediarios. El ejemplo ms
comn dentro de estos parsitos es
Leishmania sp.
a. Monoxeno: son aquellos parsitos

que en su ciclo biolgico tienen un
slo husped; ejemplo: Enterobius
vermicularis cuyo nico husped es
el hombre.
Ciclo
de
vida
de
Enterobius
vermicularis
Human Stages
P ro m w jg o te s are
phagccytizttJ by
Dr. Je ia m*dgjt and
A rra s ^ s te s /ansofm r i o
prom astgote stege in m dg ut
logesbon o*
y
S an dfty k e s a a o d m ea l
- infearve Slage
A=D ro ste Stege
na -nubTniifl- rts*w*
hp V m m .dpd cdc govi'dpdx
Ciclo de vida
(Leismaniasis).
de
Leishamnia
sp.
c. Metaxeno: es aquel parsito en cuya

transmisin interviene uno de sus
huspedes, ya sea el definitivo o el
intermediario.
PRCTICA NUMERO 2 [
PRCTICA NMERO 2
OBJETIVOS:
1. Adquirir la capacidad para identificar parsitos as como las diversas
formas en las que se presentan.
2. Conocer algunos mecanismos de transmisin y propagacin de un
parsito.
3. Conocer los ciclos biolgicos de algunos parsitos.
* Un Microscopio.
s Estuche de diseccin.
s Solucin salina isotnica 250 mL.
s Colorante de Giemsa 50 mL.
S Lugol 25 mL.
s El instructor le indicara al alumno que artrpodos debe de traer para
el desarrollo de la prctica (pulgas, chinches, piojos, moscas,
cucarachas, garrapatas, hormigas, termitas, etc.).
MTODO
1. Obtenga
cuidadosamente
el
contenido
intestinal
de
los
artrpodos asignados por el
instructor.
2. Tome los insectos grandes por la
cabeza con ayuda de unas pinzas
y colquelos en una base para
as poder abrirlos de la parte
ventral con ayuda de un bistur.
3. Coloque parte del contenido
intestinal en un portaobjetos ai
PRCTICA NMERO 2 [
cual se le aplic previamente una

o dos gotas de solucin salina
isotnica, ponga el cubreobjetos y
observe con el microscopio a 10X
y 40X.
4. En el caso de insectos pequeos;
coloque al insecto entre dos
portaobjetos,
presione
los
portaobjetos para extirpar el
contenido intestinal.
5. Tome una muestra del contenido
intestinal o si es posible ah
mismo agregue una o dos gotas
de solucin salina isotnica,
ponga un cubreobjetos y observe
al microscopio a 10X y 40X.
6. Coloque parte del contenido
intestinal en un portaobjetos al
PRCTICA NMERO 2
cual se le aplic previamente una

o dos gotas de solucin salina
isotnica y adicione una gota de
lugol, ponga el cubreobjetos y
observe con el microscopio a
10X, 40X y 100X.
7. Con el resto del contenido
intestinal de o los artrpodos,
haga un frotis, fjelos en metanol
y talos con
colorante de
Giemsa y observe al microscopio
en 10X, 40X y 100X.
DIAGRAMA DE FLUJO
O bservar preparaciones en el
m icroscopio con los objetivos
10X y 40X.
1. Obtener
contenido
intestinal del
artrpodo
O btener contenido
intestinal de los
artrpodos.
CUESTIONARIO
Colocar parte del

contenido
intestinal en
portaobjetos con
gota de de
solucin salina
isotnica y
adicionar lugol.
Realizar frotis
con el resto del
contenido
intestinal y teirlo
con Giemsa.
PRCTICA NMERO 2
1. Ample los conceptos de parasitismo

y ejemplifique ampliamente con
casos de inters general y mdico.
2. De qu forma se transmiten y
cules
son
los
posibles
endoparsitos que pueden contener
los diversos artrpodos que le toc
estudiar en la prctica (especifique
al menos tres)?
3. Explique el ciclo biolgico del
Paludismo y la Enfermedad de
Chagas, indique que enfermedad
transmiten (sntomas), que parsitos
PRCTICA NMERO 2
son los que portan y la forma de

transmisin de los artrpodos.
4. Identifique
las
estructuras
fisiolgicas de los artrpodos o
insectos asignados.
REFERENCIAS
1. Quiroz
H.
Parasitologa:
enfermedades
parasitarias
de
animales
domsticos.
Mxico:
Editorial Limusa; 2005. P. 117118.
2. Tay Z.J, Velasco C, Gutirrez M.
Parasitologa mdica. 7a ed.
Mxico: Mndez editores; 2002.
4. Romero
R.
Microbiologa
y
parasitologa
humana:
bases
2007.
5. Capuccino
J,
Sherman
N.
Microbiology: Laboratoty manual.
Pub Co edition; 1998.
6. Greenberg A.E. Standard methods
of the examination of water and
wastewater. 18a ed. USA: ALPHA
edition; 1992.
parasitologa
mdica.
Mxico:
PRCTICA NMERO 2
PRACTICA
NMERO
3
TECNICAS DE COLECTA Y TINCION DE

PARSITOS
T z ffi a
w
\ * '
l
UNIDAD I PARASITOLOGA |
PRCTICA NMERO 3
TCNICAS DE COLECTA Y TINCIN DE PARSITOS
INTRODUCCIN
La parasitologa es la ciencia que

estudia los fenmenos de dependencia
de los seres vivos. Ya sea, que el
parsito viva dentro o fuera del
husped.
Los mtodos de coloracin o tinciones
en microbiologa se utilizan para
diferenciar fcilmente la morfologa y
estructura de los organismos en
observacin. Los colorantes modifican
el ndice de refraccin
de las
sustancias que colorean.
Tincin de Giemsa
Se emplea en Hematologa para
observar los elementos sanguneos
normales y en Microbiologa para
identificar parsitos (protozoarios de la
sangre y los tejidos), espiroquetas,
levaduras y hongos (Chlamydia).
Se emplea principalmente en frotis

sanguneos para observar a los
agentes patgenos junto a las clulas
sanguneas y mostrar las diferencias
entre ambos. Se ponen en evidencia la
morfologa
y
estructura
de
los
microbios. Estas diferencias pueden
ayudar al diagnstico certero de varias
enfermedades infecciosas de la sangre.
v _______________________________
Tripanosoma cruzi en sangre perifrica

(tincin de giemsa).
El
colorante
de
Giemsa
est
compuesto por una mezcla de varios
colorantes. Por esto se dice que es una
coloracin compuesta o diferencial, ya
que emplea ms de un colorante.
Tincin de giemsa en frotis sanguneo.
PRCTICA NMERO 3 I
Tincin de Giemsa en sangre humana.
PRCTICA NMERO 3
La tincin de Giemsa se basa en la

distinta afinidad que demuestran las
diferentes partes de las clulas a los
distintos colorantes incluidos en el
colorante, emplea como colorante
fundamental, una mezcla de tiacnicos
catdicos, como el azur A, B y azul de
metileno, que colorean el ncleo,
mientras que la eosina para coloracin
citoplasmtica, estas sustancias estn
disueltas en alcohol metlico.
^Tr
10 um
L i
'
^ W
e e l.
f^
guardias
con
tincin
de
-1
Frotis de
giemsa.
'
Su fundamento est en la disociacin

controlada de las sales de eosinato,
que ocurre por la mezcla de Giemsa
con agua destilada. La cromatina
nuclear adopta la tincin azul violcea
algo distinta a la habitual para los
colorantes tiacnicos y que recibe la
denominacin de efecto Giemsa.
PRCTICA NMERO 3 I
a) Leucocito, b) blasto, c) linfocito,

d)neutrofilo,
e)
eosinofilo,
f)
Tripanozoma humboldti.
La tincin de Giemsa al igual que la
tincin de Wright, sirven para la
identificacin de parsitos tales como el
Paludismo
en
los
cuales
es
conveniente un tiempo de 30 minutos
hasta una hora para Giemsa y de tres a
cinco minutos para Wright aunque se
podran obtener mejores resultados si
se le deja a ste ultimo hasta por 15
minutos.
PRCTICA NMERO 3
Tincin de Wright
E! mtodo de Wright slo se puede
aplicar a frotis delgados mientras que
en Giemsa se pueden usar tanto en
frotis delgados como los de gota
gruesa omitiendo el paso de fijacin
con alcohol metlico.
Es una tincin de tipo Romanowsky, es

importante
en
el
laboratorio
de
hematologa, ya que puede obtenerse
cantidad de informacin a partir del
examen de un frotis de sangre
perifrica bien teido.
Amastigotes teidos con Wright.

a. Frotis de gota gruesa,
delgado
b. Frotis
Las preparaciones en fresco son

utilizadas
principalmente
para
la
identificacin
de
tripanosomas
y
Microfilarias;
los
frotis
teidos
(delgados)
sirven
para
identificar
diferencias
morfolgicas
de
protozoarios en clulas sanguneas,
mientras que la gota gruesa es utilizada
cuando escasean los parsitos o
cuando
en
frotis
delgados
los
resultados son negativos, pero es muy
difcil la identificacin estructural; estos
tambin se utilizan para la identificacin
de
tripanosomas,
microfilarias,
plasmodios y leishmanias.
PRCTICA NMERO 3 I
Una tincin de Romanowsky contiene

azul de metileno y sus productos de
oxidacin, as como eosina Y o eosina
M n ft
Eosinfilo
Neutrfilo
_S*K_
Neotrofilo y eosinfilo (afinidad por la
eosina)
La accin combinada
de
estos
colorantes
produce
el
efecto
Romanowsky y da una coloracin
prpura a los ncleos de los leucocitos
y a los grnulos neutroflicos y de color
rosado
a los
eritrocitos.
Los
PRCTICA NMERO 3
componentes de este efecto son el azul

B y la eosina Y.
Neutrofilo (tincin de Wright)

Las propiedades de la tincin de
Romanowsky dependen de! enlace de
los colorantes a las estructuras
qumicas y de las interacciones del azul
B y la eosina Y.
Los
agrupamientos
de
cidos
nuclicos, las protenas de los ncleos
celulares y el citoplasma inmaduro
reactivo, fijan el azul B, colorante
bsico, la eosina Y, colorante cido, se
fija a los agrupamientos bsicos de las
molculas de hemoglobina y a las
protenas bsicas.
La naturaleza cida o bsica de las
estructuras celulares determina su
avidez por los componentes del
colorante policromtico de Wright.
Eosinfilo y plaquetas,
PRCTICA NMERO 3 I
Para el estudio de algunos parsitos o

sus ciclos de vida se requiere del
estudio de los mismos, presentes en
algunos animales de experimentacin,
para esto es indispensable el sacrificio
de algunos animales o de los desechos
o heces de ellos. En ocasiones es
necesario aplicar el sacrificio a
animales,
este
sacrificio
debe
realizarse con mtodos humanitarios
por lo que se requiere una uniformidad
en los mtodos de insensibilizacin
humanitaria que garanticen una muerte
rpida, sin sufrimiento y dolor para los
animales.
Sacrificio de animales para el uso en

laboratorio.
PRCTICA NMERO 3
OBJETIVOS:
1. Aprender a colectar material parasitario de animales de experimentacin y
domsticos.
2. Conocer y utilizar las diferentes tcnicas de tincin, utilizadas en
Parasitologa.
s Un microscopio.
s Un estereoscopio.
s Un pliego de Papel absorbente.
s Un estuche de diseccin.
s Animales como; sapos, ratones, ratas, pollo, palomas, tortuga, etc.
s Visceras de animales de rastro.
REACTIVOS NECESARIOS:
s Solucin salina isotnica 250 mL
s Formaldehdo 100 mL
S Alcohol etlico al 95% 100mL
s Ac. actico glacial 100 mL
s Agua destilada 100 mL
s Azul de cresilo en solucin salina 50 mL
s Azul de metileno en solucin salina 50 mL
s Colorante de Giemsa 50 mL
S Colorante de Wright 50 mL
s Amortiguador de fosfatos pH 6.8 (Fosfato de sodio monocido, Fosfato de
sodio dicido) 100 mL
' f Glicerina 10 mL
J Solucin de AFA 100 mL
s Gelatina 10 g
s Etanol al 50% 100 mL
S Etanol al 70% 100 mL
/ Xilol 100 mL
s Blsamo de Canad 50 mL
# Hilo de camo 1 m
s Lactofenol 50 mL
^ Una caja de portaobjetos y una de cubreobjetos.
s Azul de cresilo al 75% en solucin salina 50 mL
s Ringer de mamferos 200 mL
s Ringer de anfibios 200 mL
PRCTICA NMERO 3 I
PRCTICA NMERO 3
MTODO
1)
Bsqueda
ectoparsitos:
Sangre:
y
estudio
de
a) Localice
y
obtenga
los
ectoparsitos que se encuentran
sobre los animales asignados.
b) Sacrifique los ectoparsitos.
c) Haga
observaciones
de
diferentes
porciones
de!
artrpodo.
d) Realice diversas preparaciones,
en solucin salina, y utilizando
colorantes de contrastes (lugol).
e) Observe
con
ayuda
de!
microscopio y
estereoscopio
dichas preparaciones.
Ectoparasito.
2) A los animales solicitados se les
sacrifica en una forma rpida y lo
menos dolorosa
(Consultar con el
asesor sobre la forma correcta de
sacrificar a los animales). Se les toma
sangre y se realiza lo siguiente:
PRCTICA NMERO 3 I
a) Tcnica de gota gruesa:

Coloque sobre un portaobjetos
limpio una gota de sangre del
animal estudiado y se extiende,
con una de las aristas de un
portaobjetos formando un cuadro
de aproximadamente 1.5 cm y se
deja secar.
El siguiente paso es el lacado o
lisado de los eritrocitos en agua
destilada, durante 8-10 minutos, se
seca y se procede a teir con el
mtodo de Giemsa, observar al
microscopio en 10X, 40X y 100X
aumentos, que corresponden a la
utilizacin
de
los
objetivos
llamados; seco dbil, seco fuerte y
de inmersin.
b) Frotis o extensin fina de sangre:
Deposite una gota de sangre del
animal estudiado en uno de los
extremos del portaobjetos, y con el
borde de otro portaobjetos se
realiza la extensin de la sangre.
Mueva
rpido
este
segundo
portaobjetos el cual debe de
formar
un
ngulo
de
aproximadamente 30 grados se
debe tener el cuidado de no lisar
los eritrocitos por lo cual se
colocara el segundo porta objetos
despus de la gota de sangre para
que sea arrastrada por capilaridad.
Se deja secar, se tie con el
mtodo de Wright y se observar al
PRCTICA NMERO 3
microscopio en 10X, 40X y 100X

aumentos.
3)
O btencin de Protozoarios y
H elm intos:
A los animales y a las visceras se les
aplicar el siguiente tratamiento:
a) Sacrificar mediante una incisin a
todo lo largo de la lnea media
ventral.
b) Una vez abierto el animal buscar
en a superficie de los rganos
internos
y las membranas
serosas la presencia de quistes.
c) A continuacin extraer rgano por
rgano, los que se colocan en
placas que contiene solucin
salina.
d) Abrir los rganos huecos con una
tijera
y
los esponjosos
se
desmenuzarn
en
busca
de
helmintos,
el contenido
del
intestino
se observar
a!
microscopio en
busca
de
protozoarios y helmintos.
e) Realizar una impronta con una
porcin pequea y delgada de
algunos de los rganos de!
animal.
f) A los helmintos encontrados se
les limpiar de moco y resto de
tejido.
g) Conservar a los helmintos limpios
en AFA y fijar posteriormente, con
alguna de las tcnicas que se
sugieren en el anexo de esta
prctica.
PRCTICA NMERO 3 I
DIAGRAMA DE FLUJO
1) BUSQUEDA Y ESTUDIO DE
ECTOPARSITOS
Localizar y
obtener
ectoparsitos
presente en
animal asignado
V
Sacrificar al
ecto parsito
Realizar
preparaciones
con diversas
porciones del
artrpodo y
observar
PRCTICA NMERO 3
TECNICA DE GOTA GRUESA

Colocar gota de
sangre en
portaobjetos y
extender.
*Realizar tincin y
observar al
microscopio
(seco dbil, seco
fuerte e
inmersin).
1) OBTENCIN DE PROTOZOARIOS Y
HELMINTOS
Hacer incisin a lo
largo de la lnea
ventral y buscar
presencia de
protozoarios o
helmintos
Lacado (colocar
portaobjetos en
agua destilada o
de la llave, 8-10
minutos y dejar
secar).
______________ -
Extraer rganos y
colocar en
solucin salina
TECNICA DE FROTIS O EXTENSION FINA
Depositar gota de
sangre en un extremo
del portaobjetos
Realizar improntas
con rganos
extrados y
teirlas*
Realizar extensin con

un movimiento rpido y
dejar secar.
Conservar en AFA
los helmintos
encontrados para
su posterior
fijacin**
Realizar tincin y
observar al microscopio
(seco dbil, seco fuerte
e inmersin)
*La tincin se debe realizar como se indica en el anexo
de sta pr{actica.
** La fijacin se lleva a cabo como se indica en el
anexo de esta prctica.
PRCTICA NMERO 3
PRCTICA NMERO 3
CUESTIONARIO
1. Desarrolle el ciclo biolgico de los
parsitos que encontr en la
prctica. De no haber encontrado
ningn
parsito,
el asesor le
asignar el o los
parsitos que
desarrolle.
2. Nombre y explique el fundamento
de dos tcnicas de fijacin y tincin,
para protozoarios y helmintos,
aparte de las incluidas en el anexo.
3. Nombre
y desarrolle
el ciclo
biolgico
de
dos
nemtodos
hematfagos
y
parsitos
del
humano.
4. En qu consiste la estandarizacin
de los colorantes y que factores
intervienen en esta?
5. Mencione
e
identifique los
ectoparsitos y endoparsitos que
parasitan
comnmente
a
los
animales requeridos en la prctica.
6. Identifique
las
estructuras
fisiolgicas
de
los
animales
utilizados en la prctica y mencione
o
esquematice
su
correcta
manipulacin.
7. Explique en qu consisten las
normas oficiales mexicanas en
manejo
de
animales
de
experimentacin.
PRCTICA NMERO 3 I
REFERENCIAS
1. Romero
R.
Microbiologa
y
parasitologa
humana:
bases
2007.
2. Biagi
F.
Enfermedades
parasitarias.
3a ed.
Mxico:
Ediciones El Manual Moderno;
2004.
3. Capuccino
J,
Sherman
N.
Microbiology:
A
laboratory
manual.
5a
ed.
USA:
Benjamn/Cuminngs
Pub
Co
edition; 1998.
4. Rodrguez E. Manual ilustrado
de parasitologa mdica. Mxico:
mdica panamericana; 2004.
6. Beaver P. Parasitologa clnica.
2a ed. Mxico: Salvat Editores;
1986.
PRCTICA NMERO 3
ANEXO:
Fijacin
adultos:
Tincin
de
Helmintos
a)
Tcnica de Glicerol-Gelatina para
Nemtodos Pequeos;
A la maana siguiente se sella el

cubreobjeto con esmalte, pintura o
barniz de uas.
b)
Fijacin
Formaiina;
Disolver 10 g de gelatina en 60 mL
de agua, adicione 70 mL. de glicerol
puro y 0.5 mL de cristales fundidos
de fenol. Esto se mantiene en un
bao de agua (a 45C) hasta que se
emplee.
Fije los nemtodos en alcohol
glicerol (70 mL de alcohol al 95%,
25 mL de agua destilada, 5mL de
glicerol) a la mezcla caliente de 60 a
63 C. Los especmenes pueden ser
almacenados indefinidamente en
esta solucin, pero deben de
transferirse a un vidrio de reloj con
una tapa que no cubra por completo
la placa.
Despus de varios das, el alcohol
se evaporar dejando al gusano en
una concentracin alta de glicerol. Si
la evaporacin es rpida el gusano
se
colapsar
o
se
destruir
rpidamente.
Transfiera el gusano a una placa
que contenga glicerol puro, despus
de varias horas se depositar en el
fondo los nemtodos. Ponga una
gota de glicerol-gelatina sobre un
cubreobjetos, depostelo sobre la
placa, deje toda la noche.
PRCTICA NMERO 3 I
de
cestodos
en
Caliente formalina-buffer de 60 a
63C. Los gusanos se colocan en la
solucin y se agitan suavemente,
para permitir la fijacin sin contraer
los progltidos.
Cestodos fijados.
c) Fijacin de Tremtodos;
AFA (alcohol,
actico):
formaiina
cido
10 mL de formaldehido.
50 mL de alcohol al 95%.
5 mL de cido actico glacial.
45 mL de agua destilada.
Caliente la solucin de 60 a 63C y fije
los tremtodos por 24 horas. Pueden
colocarse los gusanos entre dos
placas, si ellos se enrollan.
PRCTICA NMERO 3
d) Tincin indica, para Segmentos de

Cestodos;
Esta tincin de segmentos grvidos

permite mostrar las ramas del tero y
permite diferenciar entre T. solium y T.
saginata.
Coloque los segmentos en agua por

varias horas hasta que se relaje los
tejidos de los progltidos.
Extraiga del agua los progltidos y
squelos con un pauelo facial,
colquelo sobre un portaobjetos,
presione cuidadosamente con un
aplicador.
Usando
una
aguja
inyectara pequea aplique la tinta
india, dentro de los proglotides.
Lave el progltido rpidamente con
agua, seque y coloque entre dos
portaobjetos, mantngalos unidos
con una banda elstica a cada
borde.
Deshidrate el segmento del Cestodo
con varios cambios de alcohol del
50% al 70% si se requiere.
Aclare el segmento con dos cambios
de Xilol y monte en blsamo de
Canad.
e) Mtodo de
Progltidos;
Transparentacin
de
Los progltidos de la Taenias se

lavan en formol hasta que pierda la
porcin mucosa que recubre.
Se escoge uno de los progltidos
terminales del gusano y se coloca
en el centro de un portaobjetos y
despus se pone encima otro
PRCTICA NMERO 3 I
portaobjetos quedando el segmento

en emparedado.
Con un hilo en cada extremo se
presiona el emparedado, se deja
uno de los hilos ms largo.
Sujetando este hilo se sumerge en
una
solucin
aclaradora
de
lactofenol hasta que se aclare.
Cuando el progltido se haya
transparentado,
se
extrae
el
emparedado.
Se abre el emparedado y con unas
pinzas se toma el progltido y se
coloca en un portaobjetos limpio y
se fija con resina.
f) Tincin para
Microfilarias;
la
Observacin
de
Microfilaria.
Tincin supra vital;
Reactivo
Azul de cresilo al 75% en solucin
salina.
Azul de metileno al 1% en solucin
salina.
PRCTICA NMERO 3
Se usa para teir microfilarias vivas

porque permite la tincin bajo su
cubierta, se tie el ncleo y tambin
provee
un
contraste
entre
el
portaobjetos y el microorganismo. La
preparacin mientras se tie debe
guardarse en una cmara hmeda
g) Tincin de Protozoarios:
Tincin permanente en Giemsa
Reactivo:
Giemsa al 4% en un buffer de
fosfatos a pH 6.8
Fije el frotis fecal en metanol por

un minuto. Tia con solucin de
Giemsa por 30 minutos. Se lava
en buffer y seque.
Los flagelos, cilios y ncleo se tie de

color rojo.
El citoplasma y los
esporocistos se tien de color azul.
Protozoarios teidos con la tcnica de

giemsa.
PRCTICA NMERO 3 I
UNIDAD 1 PARASITOLOGA j
PRCTICA NMERO 4
HEMOPARSITOS
INTRODUCCIN
Los
protozoarios
son
los
microorganismos
que
mayormente
pueden parasitar la sangre del humano.
Por lo que se hace necesario el
conocer el tipo de clulas presentes en
sangre que pueden ser parasitadas y
los posibles
parsitos que
ms
comnmente se presentan en sangre.
Las
Hemoparasitosis
constituyen
enfermedades
ampliamente
distribuidas en toda Amrica, al igual
que sus vectores, causando efectos
negativos en la salud de los rebaos
animales y sobre la produccin y
rentabilidad de los sistemas de
produccin animal establecidos en las
diferentes regiones del continente.
Igualmente, la Trypanosomiasis en
humanos (Mal de hagas) ocasiona
importantes problemas de salud en la
poblacin humana americana.
Hemoparasito (Tripanosoma sp.)

Existen
diversas
tcnicas
para
determinar los parsitos en sangre.
Algunas
sumamente
sencillas
y
eficaces
como
son
los
frotis
sanguneos, otros ms sofisticados
pero muy precisos como son las
tcnicas inmunolgicas, las cuales son
indispensables de conocer por el
Q.F.B.
Los mtodos Inmunoenzimticos son
las tcnicas que se estn utilizando
actualmente y consisten en; Ser
tcnicas que emplean
antgenos,
haptenos o anticuerpos marcados con
una enzima.
Se basan en la especificidad de la
reaccin antgeno-anticuerpo y en la
sensibilidad del sistema indicador.
Existen dos tipos de inmunoensayos:
homogneos y los heterogneos.
Tripanosoma cruzi
PRCTICA NMERO 4 I
PRCTICA NMERO 4
HEMOPARSITOS
Inm unoensayo hom ogneo:

Se basa en los cambios de la actividad
enzimtica, un hapteno es unido a la
enzima de tal forma que altera su
actividad cuando e hapteno se une al
anticuerpo.
Su uso se da sobre todo en; la
deteccin de drogas de abuso, en la
medicin de niveles teraputicos de
drogas, etc.
Ventajas; ensayo especfico, sensible,
de amplia aplicacin, equipo requerido
barato y disponible, reactivos baratos y
de vida media-larga, potencialmente se
puede automatizar y no tiene peligro de
radiacin.
Inm unoensayo heterogneo:
Es
el
llamado
Anlisis
de
inmunosorbente
unido a enzimas
(ELISA). Esta tcnica combina
las
ventajas de la Inmunofluorescencia y el
radioinmunoensayo,
superando
las
ventajas de otros mtodos.
Se usa esta prueba para determinar y
medir la presencia de sustancias con
un PM mayor a los 10,000 Daltons.
Ventajas; ensayo especfico, sensible,
preciso y eficiente.
Las tcnicas de ELISA pueden ser
competitivas,
no
competitivas
e
indirectas.
La variante no com petitiva es la ms
utilizada
y
se
ver
en
forma
demostrativa en la presente prctica y
consiste en:
PRCTICA NMERO 4 I
El llamado ensayo inmunoenzimtico,

ELISA indirecta, en esta tcnica el
antgeno reacciona con un exceso
estequiomtrico de anticuerpos y la
reaccin
antgeno-anticuerpo
es
medido en un segundo paso.
C. Se forman una o ms capas de complejos inmunes

sobre la fase slida
<r
<T
Em pleando lo s p o a ilo s
recubiertos de anticuerpo
E LISA Competitivo de Antgeno
Em pleando lo s pocilios
recubiertos de antgeno
ELISA Indirecto
ELISA directo
Tipos de ELISA.
Se
usan
antgenos
bivalente
o
polivalente y se siguen los siguientes
pasos:
1. El anticuerpo especfico se inmoviliza
en la fase slida, el anticuerpo no
pegado se elimina por lavado.
2. La solucin conteniendo el antgeno
se incuba con la fase slida
sensibilizada, se elimina por lavado
el antgeno que no reacciona.
3. El
complejo
anticuerpo-antgeno
inmovilizado se incuba con un
exceso de un segundo anticuerpo
unido a a enzima, se elimina por
lavado lo que no reacciona.
PRCTICA NMERO 4
HEMOPARSITOS
4. Se adiciona el sustrato y el cambio

de color es proporcional a la cantidad
de antgeno presente en la muestra.
Se usa la tcnica para cuantificar los

marcadores tumorales como antgeno
carcinoembriognico, alfafetoprotena y
otros antgenos como protenas, virus,
bacterias, parsitos y hongos.
Los elementos, que se usan en la
tcnica de ELISA son:
1. Fase slida.
2. Etapas de lavado.
3. Muestra a ensayar.
4. Antgeno.
5. Conjugado (mtodos de Nakane o el
de Avrameas).
6. Sustrato y cromgeno.
Sustrato cromojjcuico
Auti-IgG liutnaiio ligado a enzima
Placas para tcnica de ELISA (fase

solida).
Adicin del anticuerpo IgG humano
Fijacin del antgeno a la asc slida
Pasos generales de tcnica de ELISA
PRCTICA NMERO 4 I
Kit para pruebas de ELISA
PRCTICA NMERO 4
HEMOPARSITOS
OBJETIVOS:
1. El alumno aprender a realizar tcnicas; hematolgicas para determinar
los parsitos presentes en sangre.
2. Que el alumno tenga el conocimiento de las tcnicas que se utilizan en
la actualidad para determinar parsitos presentes en sangre.
3. Familiarizar al alumno con el manejo de muestras sanguneas para su
posterior anlisis.
1. Microscopio.
2. Aceite de inmersin.
3. Fortis o preparaciones realizadas en la prctica anterior.
4. Canastillas para tincin o en su defecto cajas petri
5. Portaobjetos una caja.
6. Cubreobjetos una caja.
7. Laminilla de lectura de la tcnica de ELISA, una.
8. Lector de ELISA (preferentemente).
REACTIVOS POR EQUIPO:
1. Metanol 100 mi.
2. Colorante de Giemsa 50 mi.
3. Colorante de Wright 50 mi.
4. Amortiguador de fosfatos para la tincin de Giemsa y para la tincin de
Wrigth 100 mi. para cada uno.
PRCTICA NMERO 4 I
PRCTICA NMERO 4
HEMOPARSITOS
MTODO
Utilice las laminillas obtenidas en la
prctica nmero tres y talas con las
tcnicas de Giemsa y/o Wright.
*Los tiempo sealados para realizar las
tinciones sern modificados de a
cuerdo a la madurez de los colorantes.
Tincin de Wright:
1. No es necesario fijar el frotis.
2. Coloque el portaobjetos en la
canastilla para tincin y sumrjalas
en el recipiente que contiene el
colorante de Wright sumergiendo
por completo la canastilla.
3. Despus de cinco minutos escurra la
canastilla para eliminar los restos de
colorante y sumerja la canastilla en
solucin amortiguador (amortiguador
de fosfatos o agua destilada)
4. Despus de cinco minutos enjuague
con agua de la llave.
5. Deje secar y lea al microscopio, en
seco dbil 10X, seco fuerte 40X y a
inmersin 100X.
Tincin de Giemsa:
4. Coloque la canastilla en el recipiente

que contiene colorante de giemsa
durante diez minutos.
5. Saque y deje secar la preparacin y
lavar con solucin amortiguador
(unas gotas del colorante en agua
destilada) por 5 minutos.
6. Si se llega a sobre teir repita el
lavado.
7. Seque y lea al microscopio a seco
dbil 10X, seco fuerte 40X e
inmersin 100X.
*Es importante marcar los portaobjetos
antes de realizar las tinciones, para
identificar las diferentes preparaciones.
Se recomienda el uso de lpiz con
punta de diamante.
*Para las improntas realizadas repita el
proceso de esta tincin.
Tcnica de ELISA:
Esta tcnica la mayor de las ocasiones
en
este
laboratorio
se
realiza
nicamente de manera demostrativa
por lo cual slo se muestra de manera
general el procedimiento de la tcnica
en tres de sus principales mtodos
como se muestra en la siguiente figura.
1. En un frotis delgado es necesaria la

fijacin con metanol.
2. Coloque
los
portaobjetos
en
canastillas para tincin y sumrjala
en un recipiente con metanol
durante veinte minutos.
3. Deje secar el frotis al aire.
Resultados de la tcnica de ELISA.
PRCTICA NMERO 4 I
PRCTICA NMERO 4
HEMOPARSITOS
pasos
ELISA
directo
Recubrimie
nto de los
pozos
con:
Lavado con
regulador
fisiolgic
Antgeno
ELISA
Indirec
to
Antgeno
3 veces
3 veces
3 veces
AcEnzim
a (3)
4 veces
Suero
proble
ma
3 veces
Antgeno
problem
a
3 veces
AcEnzim
a (4)
4x
Ac-Enzima
ELISA en
sndwich
Anticuerpo
(Ac)(5)
o(1)
Bloqueo(2)
Incubacin
con:
Lavado con
regulador
fisiolgic
o:
Incubacin
con:
Lavado con
regulador
fisiolgic
o:
Adicin de
substrato
(5)
4x
4-
(+
cromgen
o) (6):
Detencin
de la
reaccin
(7):
Lectura a la
A
apropiada
(8 ):
Cuadro 1.4.1 Pasos que se realizan en

la tcnica de ELISA.
PRCTICA NMERO 4 I
1) Solucin salina (pH 6.0), solucin

salina-fosfatos (pH 7.4), solucin
salina-boratos (pH 8.4), etc. Algunos
adicionan tween 20 del 0.01 al
0.05% a la solucin de lavado, otros
no lo hacen.
2) Solucin de albmina, casena,
gelatina o leche descremada al 23% en el regulador fisiolgico.
3) Anticuerpo especfico, acoplado a
una enzima (peroxidasa, fosfatasa
alcalina, B-galactosidasa, etc.).
4) Anticuerpos contra el antgeno
problema, el primer anticuerpo (de
captura) usualmente es monoclonal,
el
segundo
anticuerpo
(de
deteccin), acoplado a una enzima,
casi siempre es policlonal.
5) El substrato y el cromgeno (cuando
este es necesario) dependen de la
enzima.
6) La
reaccin
se
detiene
con
diferentes reactivos, dependiendo
del cromgeno.
7) La longitud de onda de lectura
depende del color del producto de la
reaccin
enzima-substratocromgeno.
PRACTICA NUMERO 4
HEMOPARSITOS
Diagrama de flujo
TINCION DE WRIGHT
TINCION DE GIEMSA
Fijacin dei frotis

con metano!
Secar el
frotis
Tincin con
colorante de
W right
Lavado con
solucin
am ortiguadora
de fosfatos
Coloracin
con Giemsa
Lavado con
solucin
am ortiguadora
UNIDAD I - PARASITOLOG A
PRCTICA NMERO 4 I
Lavado con agua

de la llave
PRCTICA NMERO 4
HEMOPARSITOS
CUESTIONARIO
Cules
son
os
protozoarios
hemticos ms comunes en Mxico?
En qu casos se debe usar la
tcnica de gota gruesa?
En qu caso se debe usar la
tcnica de extensin de sangre?
En qu hemoparsitos se puede
utilizar la tcnica de ELISA?
Qu otras tcnicas inmunolgicas
se pueden utilizar en el diagnstico
de hemoflagelados parsitos del
hombre?
REFERENCIAS
1. Biagi F. Enfermedades parasitarias.
3a ed. Mxico: Ediciones el Manual
Moderno; 2004.
2. Tay Z.J, Velasco C, Gutirrez M.
Parasitologa mdica. 7a ed. Mxico:
Mndez Editores; 2002.
3. Romero
R.
Microbiologa
y
parasitologa
humana:
bases
Mxico:
Editorial
Panamericana;
2007.
4. Capuccino
J,
Sherman
N.
Microbiology: a laboratory manual.
Pub Co Edition; 1998.
UNIDAD I - PARASITOLOG A
PRCTICA NMERO 4 I

parasitologa
mdica.
Mxico:
6. Sitites D. Inmunologa bsica y
clnica. 7a ed. Mxico: Editorial
Manual Moderno; 1993.
7. Rojas O. Espinosa. Inmunologa (de
memoria). 3a ed. Mxico: editorial
UNIDAD I PARASITOLOGA!
PRCTICA NMERO 5
COPROPARASITOSCPICO
INTRODUCCIN
El examen coproparasitoscpico (CPS)
es uno de los anlisis clnico ms
antiguo. Es un estudio prescrito bajo
sospecha de presencia parasitaria,
larvas, o huevos de diferentes familias
de helmintos y protozoos.
Estos parsitos se pueden encontrar en
el tracto entrico del humano, los
cuales ocasionana un parasitismo
intestinal de ligero a intenso, de ah la
enorme
importancia
de
poder
determinar su presencia. Por lo que
esta prctica es fundamental en la
formacin profesional del futuro Q.F.B.
El examen coproparasitoscpico se
realiza de dos formas, una
macroscpica y una microscpica.
Diferentes etapas de un parasito

(huevecillo, quiste y larva).
El examen macroscpico
determinaren las heces:
incluye
a) Consistencia.
b) Composicin.
c) Color.
PRCTICA NMERO 5 I
d) Presencia de parsitos adultos

(helmintos) visibles a simple vista.
scaris en intestino (helmintos en

heces)
Los
exmenes
incluyen determinar:
microscpicos
La tcnica de coproparasitoscpico
(CPS) simple o seriado de al menos
tres muestras frescas revisadas en
forma consecutivas:
a) Mtodo directo; es rpido, til en
la determinacin de quistes y
trofozoitos
de
protozoarios,
huevecillos, progltidos o larvas
de
helmintos,
clulas
de
descamacin,
eritrocitos,
bacteria, hongos y cristales. El
principal inconveniente es que se
llegan a distorsionar o morir las
clulas, quistes, trofozoitos, etc.
b) Mtodos de concentracin; el
propsito de los mtodos de
concentracin; es incrementar las
posibilidades de observar quistes,
huevecillos, quistes y larvas.
Sobre todo en infecciones ligeras.
Existen dos variantes que son;
PRCTICA NMERO 5
COPROPARASITOSCPICO
las tcnicas de sedimentacin y

la de flotacin.
c) Mtodo
de
sedimentacin
modificada de formol-eter es
comn en los laboratorios de
diagnstico bioqumico clnico.
Las ventajas son; rpido
desarrollo,
amplio
espectro
(quistes, huevecillos y larvas),
fcil observacin morfolgica de
los parsitos y con bajo riesgo de
contaminacin.
Las
desventajas
son-,
requiere
de
un
desarrollo
cuidadoso por la gran cantidad de
pasos que tiene la tcnica, los
platelmintos son difciles de
observar y el ter es flamable.
d) Mtodo de flotacin de Faust con
sulfato de zinc. Es la tcnica ms
usada en los laboratorios de
anlisis bioqumico clnico.
Las ventajas son; se puede

observar bien quistes, huevecillos
(incluso de poco peso) y larvas,
aclara las estructuras de los
quistes, huevecillos y larvas
facilitando su observacin.
Las desventajas son; que se

pueden llegar a distorsionar los
parsitos en especial a los
quistes, algunas larvas no llegan
a flotar, existen riesgos de
contaminacin y las soluciones
de sulfato de zinc deben de ser
de produccin reciente.
PRCTICA NMERO 5 I
Huevecillo de Trichuris trichiura.

Tcnicas
de
obtencin
observacin de larvas.
El mtodo de Baerman, es una tcnica

eficiente para determinar nemtodos de
heces y suelo.
Es una tcnica
laboratorios de
clnico.
poco usual en los

anlisis bioqumico
Pasos principales para la Tcnica de

Baerman.
PRCTICA NMERO 5
COPROPARASITOSCPICO
Recoleccin de la muestra
Es de suma importancia el realizar una
buena recoleccin de la muestra ya
que
esta
requiere
ciertas
caractersticas para poder llevar a cabo
un
examen
coproparasitoscopco
confiable.
Recoleccin de muestra (materia fecal).

El tipo de muestra recogida depender
de la especie y forma del parsito
sospechado. El conocimiento del ciclo
vita! del parsito ayuda a determinar el
tipo, cantidad y frecuencia de los
especmenes
necesarios
para
el
diagnstico.
Para el estudio se requiere que se
recolecte una muestra de materia fecal
en un frasco limpio de vidrio con tapa
de rosca. No se deben mezclar las
heces con orina o con ningn otro
lquido como agua de la taza del bao.
El estudio se puede hacer con una sola
muestra de materia fecal (examen
coproparasitoscpico
simple),
este
estudio simple es suficiente cuando la
evidencia es tal que con una sola
muestra se logran identificar gran
cantidad de parsitos. Sin embargo la
PRCTICA NMERO 5 I
mayor parte de las veces es mejor

solicitar
un
examen
coproparasitoscpico seriado.
La muestra de materia fecal debe
recolectarse de preferencia en la
maana unas horas o minutos antes de
llevarla al laboratorio, y de no ser
posible, en la noche anterior y
refrigerarla en el recipiente en el que se
recolecto.
La cantidad de heces no debe de ser
mucha, generalmente con una pequea
muestra es suficiente (del tamao de
una nuez). El frasco debe cerrarse
hermticamente y no exponerse a calor
extremo.
Muestra para examen

coproparasitoscpico.
Las muestras no deben recogerse
durante 1 semana si el paciente ha
estado tomando materiales que dejan
residuos cristalinos, como compuestos
antidiarricos, anticidos, bismuto y
bario, Adems los laxantes a base de
aceites, como la parafina, pueden
interferir en
los exmenes.
Los
antibiticos y los medios de contraste
pueden disminuir la cantidad de
organismos,
particularmente
los
protozoos, en las heces durante 2 a 3
semanas.
PRCTICA NMERO 5
COPROPARASITOSCPICO
OBJETIVOS:
1. Realizar un examen macroscpico y microscpico de la materia fecal.
2. Determinar la presencia de parsitos en la materia fecal.
1. Microscopio.
2. Portaobjetos.
3. Cubreobjetos.
4. Tubos de ensayo de 13X100 propios para la centrfuga.
5. Gasa.
6. Centrfuga clnica
REACTIVOS POR EQUIPO:
1. Muestra de materia fecal 100 g aproximadamente del tamao de una
nuez (fruto de nogal) contenida en un frasco de boca grande.
2. Sulfato de zinc al 33%, 500 ml_ con densidad de 1.180 +/- 0.02, 50 mL
3. Lugol propio para las tcnicas de CPS, 50 mL
PRCTICA NMERO 5 I
PRCTICA NMERO 5
COPROPARASITOSCPICO
METODO
TECNICAS
COPROPARASITOSCPICAS.
I.
Examen Macroscpico:
Reporte las caractersticas que
presenta la materia fecal por
estudiar.
Color.
Consistencia.
Presencia de sangre y/o moco.
Deteccin
de
parsitos
macroscpicos.
Composicin.
Muestra para ser

analizada de forma macroscpica.
II.
Examen Microscpico:
a) CPS Directo:
Con un aplicador de madera
(abate lenguas) tome una pequea
cantidad de materia fecal (donde
se encuentre moco y/o sangre
preferentemente,
si
es
que
PRCTICA NMERO 5 I
presenta estas caractersticas) y

colquelo sobre un portaobjeto que
previamente tiene dos gotas de
lugol.
Coloque un cubreobjetos y lea al
microscopio en 10 X y 40 X.
b) CPS mediante la Tcnica
Flotacin de Faust.
de
Agregue agua (aprox. hasta

que cubra la muestra) al frasco
que contiene la muestra de
materia fecal
y proceda a
disolver
moviendo
con
el
aplicador de madera sobre una
gasa doblada en cuatro partes
(servir como un tamizador),
que est dentro de un embudo
de plstico o cristal y agregue
poco a poco agua destilada,
para proceder a macerarlo y el
lquido se recolecta en un tubo
de ensayo de 13x100.
Centrifugar a 2500
r.p.m.
durante 3 minutos, tire el
sobrenadante y al sedimento
agregue agua para proceder a
resuspender.
Repita la centrifugacin de dos
a tres veces o las veces que se
requiera hasta obtener un
sobrenadante ms claro.
Eliminar el sobrenadante de la
ltima centrifugacin y agregar
al sedimento lentamente por
las paredes del tubo la solucin
de sulfato de zinc al 33%
(densidad aproximada de 1.18),
PRCTICA NMERO 5
COPROPARASITOSCPICO
hasta las tres cuartas parte del

tubo y centrifugar a 2500 rpm
durante 3 minutos.
Sin eliminar el sobrenadante y
sin
agitar
agregue
cuidadosamente ms solucin
de sulfato de zinc hasta formar
un menisco cncavo en la boca
del tubo (llenar el tubo).
Coloque un cubre objetos
sobre el menisco formado en
la boca del tubo de uno a
dos minutos.
Se transfiere el cubreobjetos a un
portaobjetos que previamente tiene
dos gotas de lugol y se observa al
microscopio en seco dbil 10X y
seco fuerte 40X.
DIAGRAMA DE FLUJO
CPS directo:
Tom ar muestra
con ayuda de
un aplicador de
madera.
Colocar
muestra en
portaobjetos
con lugol.
O bservar al
microscopio
con objetivos
10X y 40X.
PRCTICA NMERO 5 I
PRCTICA NMERO 5
COPROPARASITOSCPICO
c) CPS Tcnica de flotacin de

Faust:
A gregar agua
hasta cubrir
m uestra y
hom ogeneizar
Colocar
cubreobjetos
sobre tubo,
retirar despus
dei tiem po
indicado y
colocar en
portaobjetos con
lugol.
Filtrar m uestra con

ayuda de la gasa y
el embudo,
recolectar filtrado
en tubo de ensaye.
O bservar con
ayuda del
m icroscopio con
los objetivos 10x
y 40X
Adicionar sulfato
de zinc hasta %
partes centrifugar y
llenar tubo con
sulfato de zinc
hasta form ar
menisco.
C entrifugar y tirar
sobrenadante.
Repetir lavados
de 2-3 veces.
PRCTICA NMERO 5 I
PRCTICA NMERO 5
COPROPARASITOSCPICO
CUESTIONARIO
1. Qu parsitos son
los ms
fcilmente detectados por el CPS
directo y el de flotacin?
2. Qu parsitos son difciles de
detectar por el CPS directo y el de
flotacin?
3. Por qu se pide que sean cuando
menos tres muestras subsecuentes
para realizar un CPS?
4. Qu tcnica es la idnea para
buscar Enterobius vermicularis?
5. Para qu sirve la tcnica de ameba
en fresco y en qu casos se debe
utilizar?
6. D la proporcin en que se pone la
muestra con el conservador.
REFERENCIAS
1. Fleck L. Diagnostic techniques in
medical parasitology. UK: Editorial
Wright; 1989.
2. Biagi F. Enfermedades parasitarias.
3a ed. Mxico: Ediciones el Manual
Moderno; 2004.
3. Tay J, Velasco C, Gutirrez M.
Parasitologa mdica. 7a ed. Mxico:
Mndez editores; 2002.
4. Romero
R.
Microbiologa
y
parasitologa
humana:
bases
etiolgicas de as enfermedades
PRCTICA NUMERO 5 [
Mxico:
Editorial
Panamericana;
2007.
5. Capuccino
J,
Sherman
N.
Microbiology: a laboratory manual.
5a ed. USA: Benjamn/Cuminngs Pub
Co Edition; 1998.
parasitologa
mdica.
Mxico:
7.Stites D. Inmunologa bsica y
clnica. 7a ed. Mxico: Editorial
Manual Moderno; 1993.
PRCTICA NMERO 5
COPROPARASITOSCPICO
ANEXO DE LA PRCTICA:
Si para el anlisis de las muestras se
excede de los lmites establecidos, se
deben utilizar conservadores, como los
que a continuacin se desglosan:
1.Uno de los conservadores ms
empleados es el
PVA (alcohol
polivinlico),
el
cual
es
una
combinacin de fijador y resina
soluble. Es usada particularmente
para especmenes lquidos y debe
ser usado en relacin de tres partes
de PVA y una parte del espcimen
fecal homogeneizado y almacenado
a temperatura ambiente en frascos
cerrados. Es un reactivo estable, se
debe
almacenar
en
frascos
hermticos, en frascos pequeos se
llega a endurecer o a gelificarse.
2.
La Formalina al 10%, es otro
conservador que se emplea para
conservar por perodos largos de
tiempo, quistes de protozoarios,
huevos y larvas de helmintos. Para
los huevos de helmintos es preferible
calentar a formalina a 60 C para
prevenir el desarrollo al estado
infectivo. Se usa en proporcin de
tres partes de formalina y una parte
de heces mezclado vigorosamente
para que quede bien homogneo.
Fig. 1.5.4
3. El Merthiolate-Yodo-Formalina es un
conservador que se usa con todo tipo
de heces y aspirados. Preserva
trofozoitos y quistes de protozoarios,
huevos y larvas de helmintos,
PRCTICA NMERO 5 I
adems de fijarlos y teirlos. La

muestra se toma de la parte ms
consistente o slida.
4. El PAF (Fenol-Alcohol-Formol), este
conservador se puede utilizar en
lugar
de
formalina.
Conserva
adecuadamente trofozoitos y quistes
de protozoarios, huevos y iarvas de
helmintos. Se usa en una proporcin
de 1:5 y se homogeneza.
Formalina utilizada como conservador

para periodos largos.
UNIDAD
II
MICOLOGA
El experimentador que no sabe lo que est

buscando no comprender lo que encuentra.
Claude Bernard (1813-1878) Fisilogo francs.
PRACTICA
NMERO 1
OBSERVACION DE ESTRUCTURAS DE
HONGOS
UNIDAD 2 M icologa |
PRCTICA NMERO 1
OBSERVACIN DE ESTRUCTURAS DE HONGOS
INTRODUCCIN
La micologa es la ciencia, que tiene
como objeto de estudio a los hongos,
ya
sean
macroscpicos
o
microscpicos,
as
como
las
asociaciones, daos y beneficios que
puedan causar.
Desde el punto de vista mdico, los
hongos
macroscpicos,
tambin
llamados setas, se conocen en casos
de intoxicacin alimentaria (micetismo),
a
diferencia
de
los
hongos
microscpicos que generan variados
cuadros patolgicos (micosis). Estos
son organismos muy abundantes en la
naturaleza, constituyendo uno de los
reinos de los seres vivos, el reino
Fungi. Se calculan ms de 70 000
especies, pero se cree que hay ms de
un milln y medio; viven en los medios
ms variados y slo alrededor de 100
son necesariamente patgenos para
mamferos,
pero
tambin
hay
patgenos de vegetales, insectos o de
otros hongos, y algunos son hongos
oportunistas.
Aerobios y anaerobios en algunos

casos.
Metabolismo heterotrfico.
No poseen clorofila.
Nutricin osmtrofa (por absorcin).
Temperatura: para la mayora de

hongos la temperatura ptima es de
22-30 C, y para patgenos de 30 a
37 C.
Requerimientos
elevada.
pH ptimo de 5 a 6.
Luz no necesaria, salvo en algunos

casos.
Tolerancia a la concentracin
solutos variable.
Pueden
ser
pluricelulares.
Reproduccin sexual y asexual.
La unidad fundamental anatmica y

de crecimiento es la hifa.
de
humedad
unicelulares
de
o
Los hongos pertenecen al reino Fungi,

que constituyen un numeroso grupo de
seres
vivos
de
gran
diversidad
morfolgica.
Las principales caractersticas de los
hongos son:
Organismos eucariotas
U N ID AD 2 - M IC O LO G A |
P R C T IC A NM ERO 1
Diferentes especies pertenecientes al

reino Fungi.
PRCTICA NMERO 1
E reino Fung comprende

divisiones o phylum:
cuatro
Zygomycota
Ascomycota
Basidiomycota
Deuteromycota
P h y lu m Z y g o m y c o t a
Es un hongo inferior que se caracteriza

por presentar
hifas gruesas y
cenocticas
(no
presentan
segmentaciones
o
tabicaciones),
reproduccin asexuada por esporas
endgenas
(esporangioesporas)
y
reproduccin sexuada por cigosporas.
Entre los Zygomycetes quiz los ms
conocidos sean algunos representantes
del orden Mucorales como Mucor sp. o
Rhizopus sp. pero en realidad el grupo
tiene integrantes que representan
lneas evolutivas muy dispares.
P h y lu m A s c o m y c o t a
Son hongos superiores y como tal

presentan
hifas
tabicadas
y
reproduccin
asexuada
mediante
esporas externas o conidios, aislados,
en
cadenas
o
dispuestas
en
conidiforos.
Tambin
presentan
reproduccin sexuada esta se da por
medio de aseas.
Los representantes de este grupo
prcticamente se encuentran poblando
todo tipo de hbitat uno de los ms
representativos es el hongo del gnero
Alternara sp.
a)
Conidiforos,
(.Marielliota bseptata)
a)
j esporangio
columela
espora ngiforo
Alternara sp.
a) Imagen microscpica de Mucor sp.
b) Esquema general de gnero Mucor.
b)
Conidios.
PRCTICA NMERO 1
P h y lu m B a s id io m y c o ta
Est constituido por los macrohongos

perfectos que incluyen setas, tienen
hifas
septadas
o
tabicadas.
Su
reproduccin es de tipo sexual por
medio de basidiosporas formadas
sobre
basidios
y
reproduccin
asexual
ya
que
presentan crecimiento vegetativo, rara
vez forman esporas.
Amanita sp.
Phylum Deuteromycota
Tambin son conocidos como hongos
imperfectos ya que son hongos sin
ciclos sexuales conocidos,
podra
decirse que son hongos parecidos a las
de
los
phylum
Ascomycota
y
Basidiomycota
con
reproduccin
asexuada. Su reproduccin se da por
medio de conidias formadas en clulas
especializadas o conidiforos. Son
hongos
filamentosos
con
micelio
tabicado, figura 2.1.6.
Estructura
general
basidiomycota.
del
phylum
Los ejemplos ms representativos de

este phylum son las comnmente
conocidas setas.
Entre sus miembros se encuentran

parsitos que enferman a las plantas y
animales. Las enfermedades humanas
ms comunes causadas por este grupo
son infecciones de la piel y de las
membranas mucosas. Algunos revisten
importancia econmica porque se
emplean para producir ciertos quesos y
antibiticos (penicilina).
Los ms conocidos quiza sean los
principales degradadores de celulosa:
Trichoderma y Chaetomium. Aunque
ampliamente conocidos son tambin:
Aspergillus y Penicillium.
PRACTICA NUMERO 1
a)
Penicillium sp.
Reproduccin
b)
La forma de reproduccin de los

hongos puede ser en forma asexual o
sexual:
Cokimnar
Radial
Clulas tki U jOo
a) Micelios tabicados, b) Estructuras

generales
hongos
deuteromicetes
ejemplo Aspergillus sp.
Para la reproduccin asexual requiere

producir taloesporas y conidioesporas.
Las taloesporas son esporas que
derivan directamente del micelio y
puede ser de varios tipos como son;
Artroesporas,
blastosporas,
clamidioesporas y dictroesporas.
Las conidias son esporas de forma
variable; de forma esfrica, oval,
piriforme,
fusiforme,
filiforme,
etc.
Dependiendo del tamao se le puede
designar
como
macroconidias
o
microconidias, figura 2.1.9.
En algunos hongos las conidioesporas
se pueden forman aisladas o en
cadena,
otras
en
estructuras
especializadas
denominadas
conidiforos, estos pueden ser simples
o complicadas.
Aspergillus sp.
PRCTICA NMERO 1
La clase Zygomycota se reproduce en

forma sexual por zygosporas.
La clase Ascomycota se reproduce en
forma sexual por ascoesporas. La clase
Basidiomycete se reproduce en forma
sexual por basidioesporas.
Estructuras de hongos
Reproduccin en hongos.
Existen adems otro tipo de esporas
llamadas esporangioesporas que se
producen
en
un
saco
llamado
esporangio; estas estructuras son
caractersticas de hongos de micelio
cenoctico.
Reproduccin
sexual
asexual (ascosporas).
(conidios)
Esporangio.
La reproduccin sexual de los hongos

se puede llevar a cabo tanto invitro
como invivo.
Reproduccin
basidiomycotas.
sexual
de
PRCTICA NMERO 1
O B J E T IV O S :
1. Reconocer las principales estructuras de hongos filamentosos y

levaduriformes.
2. Adquirir la capacidad de diferenciar los tipos de esporas sexuales y
asexuales.
3. Adquirir experiencia para ser capaz de diferenciar a los hongos de otros
tipos de microorganismos.
M A T E R IA L P O R E Q U IP O :
Microscopio.
Preparaciones semipermanentes de hongos:
1. Clase Deuteromycota:
a) Penicillium sp.
b) Aspergillus sp.
c) Geotrichum sp.
d) Curvalaria sp.
e) Alternara sp.
f) Fusarium sp.
2. Phylum Zygomycota:
a) Mucorsp.
b) Rhizopussp.
3. Levaduras.
a) Blastoesporas.
b) Esporas asexuales.
U N ID A D 2 - M IC O LO G A |
PRCTICA NMERO 1
1. Observe
las
preparaciones
semipermanentes al microscopio en
10X y 40X.
2. Realice los dibujos y registre lo que
observ.
REFERENCIAS
1. Gamazo C, Lpez-Goi I, Daz R.

Manual prctico de microbiologa. 3a
ed., Barcelona (Espaa): Editorial
Masson; 2005.
2. Arenas
R.
Micologa
mdica
ilustrada. 3a ed. Mxico: editorial Me
Graw Hill; p 11.
3. Herrera T, Ulloa M. El reino de los
hongos. 2a ed. Mxico: Editorial
Fondo de cultura Econmica. 2003:
pp 25,38-38, 381-385.
1. A qu se le llaman hongos
verdaderos y hongos falsos?
2. Nombre tres hongos de importancia
para la industria farmacutica.
3. Nombre tres hongos de importancia
mdica.
4. Qu es una espora?
5. Cules
son
las
principales
diferencias entre un hongo micelial y
uno levaduriforme?
U N ID A D 2 - M IC O LO G A |
4. Microbiology, virology, immunology,

bacteriology, parasitology, mycology
Online 2001. The Board of Trustees
of the University of South Carolina
[internet].
Disponible
en:
http://www.facmed.unam.mx/bmnd/di
rijo_gbc.php?bib_vv=12.
PRCTICA
NMERO 2
AISLAMIENTO DE HONGOS DE
DIFERENTES FUENTES
PRCTICA NMERO 2
AISLAMIENTO DE HONGOS DE DIFERENTES FUENTES
INTRODUCCIN
Los hongos tienen gran importancia
econmica, no tan slo por su utilidad,
sino tambin por el dao que pueden
causar. Los hongos son responsables
de la degradacin de gran parte de la
materia orgnica de la Tierra, una
actividad enormemente beneficiosa ya
que permite el reciclaje de la materia
viva. Por otro lado, los hongos causan
gran cantidad de enfermedades en
plantas y animales y pueden destruir
alimentos y materiales de los que
depende
el
hombre.
Los efectos perjudiciales de los hongos

estn contrarrestados por su utilizacin
industrial. Los hongos son la base de
muchas fermentaciones. Los hongos
son tambin la fuente de muchos
enzimas
comerciales
(amilasas,
proteasas,
pectinasas),
cidos
orgnicos (ctrico, lctico), antibiticos
(penicilina).
Productos comerciales obtenidos a

partir de hongos.
Planta contaminada por un hongo.
A los hongos se les considera los

contaminantes ms importantes del
mundo, en gran medida a la facilidad
con que se pueden distribuir, gracias a
que pequeos fragmentos ya sea de
micelios, hifas o esporas pueden ser
diseminados
por
el
aire,
agua,
alimentos, ropa, etc.
U N ID AD 2 - M ICO LO G A
Los hongos en su mayora se les

consideran saprofitos, ya que se
alimentan de materia orgnica en
descomposicin y carecen de clorofila,
unos pocos son parsitos para los
seres vivos (en el humano se considera
que aproximadamente de 70 a 100
especies de hongos son patgenos).
Hongo saprofito alimentndose de

materia orgnica en descomposicin.
PRCTICA NMERO 2
Los hongos requieren de ciertos

factores para la regulacin de su
crecimiento y desarrollo, tal vez uno de
los ms importantes es la humedad del
medio en general; sin esta nunca habr
hongos. La temperatura necesaria para
los hongos oscila en un rango de entre
los 4 o a los 60 C. El pIH aunque
variado en muchas especies, por lo
general debe mantenerse entre los 4-6.
Necesitan tener oxigeno, y en este
punto tambin debe mencionarse la
relacin existente entre el 0 2 y el C 0 2;
si existe una abundancia de C 0 2; no
habr crecimiento del cuerpo fructfero.
La luz es medianamente necesaria,
para algunos hongos es totalmente
innecesaria,
aunque
algunos
son
fototrpicos (usan la luz para iniciar o
limitar el proceso de esporulacin).
polimorfismo (un mismo hongo en

diferentes condiciones de desarrollo
presenta
diferente
color)
y
pleomorfismo (un mismo hongo en
diferentes condiciones de desarrollo
presenta diferente forma). Por lo
anterior en micologa general, industrial
y mdica, la tipificacin de los hongos
contaminantes y parsitos se dificulta.
Colonias de Geotrichum candidum con

diferentes caractersticas morfolgicas.
Mould phase.
macroconidia
Figura N
Colonias de Nocardia en
uledios de Sabouraud,
Lowestein Jensen y
Figura N 2
Colonias de Nocardia
medio de Lowestein
Jensen
Figura M3
en medio de Tioglicolato
Fase micelial,
macronidia
-a-a
microconidia
Tioglicolato
Nocardia sp. en diferentes medios de

cultivo.
La gran mayora de los hongos
presentan dimorfismo (un mismo hongo
en diferentes condiciones de desarrollo
presenta
diferente
tamao),
P R A C T IC A NUM ERO 2 |
(J var duboisii
var capsulatum
Yeast phases. 37C.
Fase levaduriforme a 37C.
Diferentes formas de Histoplasma

capsulatum (dimorfismo).
PRCTICA NMERO 2
O B J E T IV O S :
1. Demostrar la presencia y distribucin de los hongos que se encuentran en el

medio ambiente.
2. Analizar la morfologa de los hongos que se han obtenido de diversas
fuentes.
3. Realizar la identificacin y clasificacin de los hongos aislados de los
diferentes especmenes trabajados.
s Microscopio.
s Estereoscopio
s Cuatro cajas de Petri que contiene agar Sabouraud glucosado.
s Dos cajas con agar Littman.
Seis tubos, 15X100 con 4.5 mL de solucin salina estril.
s Portaobjetos y cubreobjetos.
s Asa y porta asa.
s Cuatro pipetas de 1 mL
s Cuatro cajas de Petri estriles.
s Muestras de frutas, verduras y tierra contaminadas de hongos.
M A T E R IA L P O R G R U P O , C O N 1 0 E Q U IP O S E N P R O M E D IO :
s 40 mL de agar Littman.
s 40 mL de agar Sabouraud.
R E A C T IV O S :
s KOHI al 10%.
s Azul de algodn de lactofenol.
s Lugol.
S Mezcla de antibiticos; Penicilina-Estreptomicina 1:1
s Hipoclorito de sodio comercial.
P R C T IC A NM ERO 2 |
U N ID AD 2 - M IC O LO G A
PRCTICA NMERO 2
/.
Aislamiento de Hongos del
Aire.
1. Destape la caja de Petri que contiene
agar Sabouraud y expngala a las
corrientes de aire, por un lapso de 15
minutos, de igual manara hgalo con
el agar Littman. Esto puede llevarse
a cabo en algn sitio del hogar de
algn integrante del equipo, el cual
debe tener cuidado de vigilar el
crecimiento de las colonias de
hongos que lleguen a crecer en los
medios mencionados anteriormente.
2. Incube a placa expuesta al aire a
temperatura ambiente en un lugar
hmedo y libre de cualquier tipo de
contaminacin.
3. Registre
las
caractersticas
macroscpicas,
de
lo
que
se
desarrollo en los medios de cultivo.
2. Pese 0.5 g de tierra y agregue a un

tubo que contiene 4.5 mL de
solucin salina estril con una
dilucin 1:10.
3. Proceda a realizar las diluciones
hasta alcanzar 10 y 10 .
4. Proceda a preparar los medios
Sabouraud y Littman, cuando estn
fundidos
y a temperatura
de
aproximadamente 25 - 30 C, aada
dos
gotas
de
la mezcla
de
antibiticos.
5. De las diluciones realizadas en el
paso 3 tom ar un mililitro de la
dilucin 10' y vierta en dos cajas
Petri estriles diferentes, repita el
este proceso con la muestra diluida
hasta 10'6
6. Vierta agar Sabouraud en dos de las
cajas del paso 4, en una con
muestra diluida 10' y otra con
muestra diluida hasta 10'6. Repita
este pas vertiendo agar Littman.
7. Incube todas las placas sembradas
a temperatura ambiente y en un
lugar hmedo.
8. Realice la lectura y reporte las
caractersticas macroscpicas, de
los hongos desarrollados en las
cajas de Petri.
///,
A is la m ie n t o d e H o n g o s d e
V e rd u ra s y F ru ta s .
Colonia de Trichophiyton rubrum

II. A i s l a m i e n t o d e H o n g o s d e l S u e lo .
1. Cerna la muestra de tierra solicitada,

seleccionando la que este seca o
ligeramente hmeda.
U N ID A D 2 - M ICO LO G A
1. Corte una pequea porcin del tejido

de la fruta o verdura donde se
encuentra el hongo ayudndose con
asas
micolgicas,
pselo
unos
minutos por hipoclorito. Si el hongo
PRCTICA NMERO 2
contaminante es de aspecto polvoso

este paso no es necesario.
2. Siembre en una caja de Petri que
contiene agar Sabouraud, repita la
operacin para la caja con el agar
Littman. La siembra se realiza por
puncin superficial del hongo en el
centro de la caja de Petri y
asegurndose
de
fijarlo
correctamente. En caso de tratarse
de varias muestras divida las cajas y
siembre en el centro de cada
divisin.
3. Realice la lectura y reporte las
caractersticas macroscpicas, de lo
que se desarroll en la caja de Petri.
IV .
R e s u lta d o s .
De los especmenes trabajados en la

prctica, el alumno reportar lo
siguiente:
1. Lugar de donde se obtuvo.
2. Fuente de aislamiento.
3. Fecha de aislamiento.
4. Caractersticas macroscpicas de las
colonias como:
a) Pigmentacin de la colonia, del
frente y del envs, del centro y la
periferia, las diferentes zonas
areas y en distintos perodos de
incubacin.
b) Consistencia; algodonosa,
polvosa, filamentosa, compacta,
cremosa, reseca, etc.
c)Tipo de crecimiento; radial, lento,
rpido, etc.
DIAGRAMA DE FLUJO
Exponer caja
con agar
Sabouraud y
Littman al
corrientes de
aire.
Incubar placas
(ya inoculadas)
a temperatura
ambiente y en
un lugar
hmedo.
Realizar
observacin y
reporte de
caractersticas
macroscpicas
de lo
desarrollado en
los medios.
PRCTICA NMERO 2
II.
III.
Agregar 0.5 g de
tierra en tubos
con solucin
salina.
Cortar porcin de
tejido de fruta
contaminado con
ayuda de asas
micolgicas.
Suspensin madre 1:10
1Q I
l mi
t mi
1mi
I mi
1mi
mi
Realizar
diluciones hasta
alcanzar 10'* y
10'5.
u
10'1
lo -2
Verter 1mL de
dilucin de 10~;
en una caja de
Petri estril y
realizar lo mismo
con dilucin 10'
Incubar placas a
temperatura
ambiente y en un
lugar hmedo
realizar
m -
lo *
I0's
lo '
Sembrar porcin
de muestras en el
centro de cajas
con agar
Sabouraud y otra
con agar Littman.
En caso de
tratarse de varias
muestras dividir
las cajas y
sem braren el
centro de cada
divisin.
PRCTICA NMERO 2
CUESTIONARIO
1. Cules son los factores que afectan

el crecimiento de los hongos en libro
encuadernados,
frutas
ctricas,
compotas, gelatinas etc.?
2. Qu clase de productos tiles
proceden los hongos?
3. Cmo afectan la temperatura, pH,
presin osmtica y humedad en el
desarrollo de un hongo?
4. Para qu se realizan las diluciones
en el aislamiento de los hongos del
suelo?
5. Nombre cinco medios de cultivo para
hongos y su composicin qumica.
6. Nombre cinco gneros de hongos
que se presentan en suelo.
7. De existir mtodos para cuantificar
ios hongos contaminantes en suelo,
aire,
alimento
e
industria
farmacutica. Nmbrelos.
8. Nombre
cinco
gneros
de
Deuteromycetes patgenos.
9. Qu es una aflotoxina?
10. Nombre tres hongos superiores
venenosos.
REFERENCIAS

Masson; 2005.
hongos. Mxico: Editorial Fondo de
cultura econmica y UNAM; 1990.
3. Koneman R. Micologa: prcticas de
laboratorio.
Argentina:
editorial
Panamericana; 1993.
4. Rippon J. Tratado de
medica.
Mxico:
Interamericana; 1990.
micologa
Editorial
/l ^#
PRACTICA
NMERO 3
CARTERISTICAS TINTORIALES DE LOS

HONGOS
UNIDAD 2 M icologa
PRCTICA NMERO 3
CARTERSTICAS TINTORIALES DE LOS HONGOS
la aplicacin de diversas tcnicas de

tincin y montaje.
INTRODUCCIN
Las tcnicas de tincin de hongos son:
1. TCNICAS DE TINCIN SIMPLE:

Una de las caractersticas bsicas para
la clasificacin de las estructuras de los
hongos, es la pigmentacin ya sea que
las hifas sean hialinas o dematiceos, o
bien las hifas sean tabicadas o no. Que
los
hongos
sean
miceliales
o
levaduriformes como se aprecia enm la
siguiente figura
Las cuales se caracterizan por el

empleo de un slo colorante como
pueden ser; azul de metileno, lugol,
safranina, etc.
Tincin con azul de metileno:

Se utiliza para exmenes en fresco o
coloraciones compuestas. Los hongos
adquieren un color azul semejante a!
azul de algodn, aunque el hongo se
observa ms intenso que el fondo del
campo como se puede ver en la
siguiente figura.
4
Microsporum canis,
morfologa microscpica. Hifas hialinas,
septadas y ramificadas.
Fragmoconidios (macroconidios con
divisiones transversales) en forma de
huso.
Cuando el hongo es micelial, una forma

de
clasificarlos
es
mediante
la
observacin de las hifas y esporas.
Por lo que el cometido de la presente
prctica
es
poder
identificar,
diferenciar, clasificar y montar, los
hongos aislados en la prctica nmero
dos, la forma de realizarlo es mediante
Aspergillus versicolor, esporas

exgenas (Conidia). Tincin de azul
algodn lactofenol.
PRCTICA NMERO 3
Tincin con safranina:

Los elementos fngicos se tien de
color rojo intenso, y el resto del campo
toma un tono incoloro o rosa plido.
til para el estudio de cultivos y
productos biolgicos lquidos.
Nocardia sp, tincin de Ziehl Neelsen.

3. TCNICAS DE TINCIONES
ESPECIALES:
Absidia corymbfera, tincin con
safranina.
2. TECNICAS DE TINCION
DIFERENCIALES:
Con los hongos demateceos es ms

recomendable el uso de KOH del 10%
al 30%, como mordente.
0r. K Salfelder
Son tcnicas que utilizan dos o ms

colorantes y/o principios activos como
pueden ser; tincin de Ziehl-Neelsen, la
tcnica de Schiff, etc. Como se observa
en la siguiente figura.
Pitiriasis versicolor, tincin con tinta

Parker.
PRCTICA NMERO 3
O B J E T IV O S :
1. Adquirir la capacidad
de
diferenciar
hongos de diferentes
fuentes,
mediante
diferentes
tcnicas
tintoriales.
2. Conocer y realizar
las
principales
tcnicas de tincin
de hongos.
3. Identificar y clasificar
los hongos aislados
en la prctica dos.
s
s
s
s
LJn microscopio.
Portaobjetos
Cubreobjetos.
Asa y porta-asa.
R E A C T IV O S :
S KOH a! 10%, 50 mL
s Lugol, 50 mL
s Azul de algodn de
lactofenol, 50 mL
s Azul de metileno, 50 mL
s Safranina, 50 mL
s Alcohol-acetona para la
tcnica de Gram, 50 mL
s Cristal violeta, 50 mL
s Muestras de hongos
aislados en la prctica
anterior.
S Alcohol metlico,
100mL
^ Xilol, 100 mL
s Eritrocina 50 mL
s Etanol al 70%, 100
mL.
s Etanol al 96%, 100 mL
s Blsamo de Canad,
100 mL
s Esmalte para uas
incoloro o merkoglass.
s Fuccina fenicada, 100
mL
s Alcohol-cido, 100 mL
s Nigrosina, 50 mL
S Colorante de Wright,
250 mL
s Solucin
amortiguadora para
Wrihgt, 250 mL
s Colorante de Giemsa,
250 mL
s Solucin
amortiguadora para
Giemsa, 250 mL
PRCTICA NMERO 3
METODO
1.Tom e un espcimen de los aislados
anteriormente,
que
presente
abundante crecimiento.
2.
Aplique la tcnica para teir
hongo.
3. Observe a 10X y 40X y esquematice
lo visto al microscopio.
4. Aplique otra(s) tcnica(s) y el KOH al
10% (pregunte ai asesor para ms
informacin).
5. Observe a 10X y 40X y esquematice
lo visto al microscopio.
I)
Tcnicas para preparaciones

con azul algodn-lactofenol a
partir de colonias de hongos:
1.
Ponga un portaobjetos limpio
sobre una superficie transparente e
iluminada, si esto no es posible,
ponga el portaobjetos
sobre una
hoja blanca.
2. Ponga una gota pequea de azul de
algodn lactofenol en el centro del
portaobjetos.
3. Tome un fragmento de la colonia
mediante el asa recta o con aguja de
diseccin.
4. Monte la preparacin depositando
suavemente un cubreobjetos sobre el
portaobjetos.
5. Estas preparaciones se sellan con
spray merckoglas o esmalte incoloro
de uas, en el anexo de la prctica
existe un ejemplo.
el
Aspergillus terreus, con tcnicas para

preparaciones con azul algodnlactofenol.
II)
Tcnica de tincin con

eritrocina:
1. Fije con alcohol metlico por diez

minutos.
2. Cubra con eritrocina por 15 minutos.
3. Lave ligeramente con agua de la
llave.
4. Haga pasar rpidamente alcohol al
70% y deje secar.
5. Pase por alcohol absoluto durante 5
minutos y deje secar.
6. Ponga en xilol por 15 minutos y deje
secar.
7. Monte en blsamo de Canad, en el
anexo de la prctica existe un
ejemplo.
Aspergillus candidus, en tincin de

eritrosina.
PRCTICA NMERO 3
DDI)
Tincin con azul algodn

actico:
1. Fije con alcohol metlico, cubriendo el

portaobjetos y deje evaporar.
2. Cubra la preparacin con azul de
algodn actico por 20 minutos,
caliente hasta emisin de vapores.
3. Lave rpidamente con agua.
4. Pase por alcohol al 96% y seque.
5. Aplique xilol hasta que transparente
la preparacin.
6. Monte en blsamo de Canad o
resina sinttica, en el anexo de la
prctica existe un ejemplo.
4. Coloque una gota de nigrosina en el

extremo del portaobjetos y extienda
como si fuera un frotis sanguneo en
capa fina, deje secar y observe a
10X y 40X.
V)
Tcnica de Zielh-Neelsen para

Actinomyces:
1. La preparacin se llena con fucsina
fenicada a emisin de vapores por 3
minutos.
2. Decolore con alcohol-cido y lave
con agua.
metileno durante un minuto y deje
escurrir.
4. Deje secar y observe en 10X y 40X.
VI)
Tincin de Gram:
Siga
la
tcnica
usada
Microbiologa General i.
en
m
Aspergillus flavus, en tincin con azul
algodn actico.
IV)
Tincin de Zielh-Neelsen
modificado:
Candida albicans en tincin de Gram.
1. La preparacin se llena con fucsina

fenicada a emisin de vapores por 5
minutos.
2. Decolore con alcohol-cido y lave
con agua.
metileno durante 2 minutos y deje
escurrir.
PRCTICA NMERO 3
VII)
Tincin de Wright:
1. No es necesario fijar el frotis.

2. Coloque
el
portaobjetos
completamente horizontal sobre una
superficie adecuada que deje libre la
mayora de sus bordes y cbralo con
el colorante.
3. Despus de tres minutos agregue
solucin buffer (buffer de fosfatos o
agua destilada) en la misma cantidad
que la de colorante, mezcle la
solucin (colorante-buffer), aplicando
una corriente de aire sobre la mezcla
mediante una pipeta.
4. Despus de cinco minutos enjuague
con agua de la llave.
5. Deje secar y lea al microscopio en
seco dbil, seco fuerte y a inmersin.
DIAGRAMA DE FLUJO
Aplicar tincin
a los
especmenes
aislados
anteriormente.
Observar al
microscopio a
10X y 40X y
esquematice.
I)
Tcnicas para preparaciones
con azul algodn-lactofenol a partir
de colonias de hongos:
Agregar una
gota de azul
de algodn
lactofenol en
un
portaobjetos
limpio.
Acremonium strictum, en tincin de

Wright.
Colocar un
fragmento de
colonia en el
portaobjetos
con Azul de
algodn
lactofenol.
Colocar
cubreobjetos
en muestra y
sellar.
PRCTICA NMERO 3
II)
Tcnica de tincin con

eritrocina:
Fijar asada a
portaobjetos por
10 minutos con
alcohol metlico.
III)
Tincin con azul algodn

actico:
Fijar muestra con

alcohol metlico y
dejar evaporar.
Cubrir con eritrosina,

lavar inmediatamente y
pasar por alcohol
rpidamente.
Pasar por alcohol

absoluto, adicional xilol
y dejar secar. Montar en
blsamo de Canad.
Cubrir con azul de

algodn y
calentar a emisin
de vapores.
Pasar por alcohol

y secar, aplicar
xilol y montar en
blsamo de
Canad.
PRACTICA NUMERO 3
CUESTIONARIO
1. Cul es el fundamento y en qu
casos se utiliza la tcnica de Gram,
Ziehl-Neelsen y la tcnica de Schiff?
2. Qu tcnica de tincin se usa en
hongos demateceos?
3. Qu tcnicas de tincin son ms
utilizadas en el rea de Bioqumica
Clnica para el diagnstico de
hongos, patgenos tanto miceliales
como levaduriformes?
4. Qu tcnicas de tincin son ms
utilizadas en el rea Farmacutica
para la determinacin de hongos de
importancia
industria!
o
de
contaminacin
en
plantas
farmacuticas?
REFERENCIAS

Masson; 2005.
Cultura Econmica y UNAM; 1990.
3. Koneman R. Micologa: prcticas de
laboratorio.
Argentina:
editorial
Panamericana; 1993.
4. Rippon J. Tratado de
mdica.
Mxico:
micologa
Editorial
P R A T T IT A
M IC R O C U L T IV O
k
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NMER04
>
UNIDAD 2. M icologa |
PRCTICA NMERO 4
MICROCULTIVO
Comnmente es posible determinar s

una colonia que crece in vitro es un
moho ( hongo filamentoso ), por medio
de un examen directo, pero no es tan
evidente si la colonia tiene apariencia
levaduriforme, o debido a micelios muy
finos y sedosos, donde la colonia
presenta
una apariencia tersa y
sedosa.
Formacin de una colonia de hongo

filamentoso.
Existen diversas tcnicas, para el

examen microscpico de los hongos
filamentosos, que son tiles para la
identificacin del gnero y especie de!
hongo.
Montaje hmedo, tcnica fcil de
realizar, rpida y econmica, pero
debido a la forma tan directa de
tom ar la muestra, esta sufre algn
traumatismo,
en las estructuras
microscpicas, lo que dificulta el
hecho de identificarlo correctamente.
Tcnica de cinta adhesiva, la cual es
barata, rpida y fcil de realizar, sin
embargo, si la toma de la muestra no
se
hace
correctamente
la
observacin ser mala.
La tcnica idnea para identificar y
clasificar un hongo filamentoso es el
Microcultivo . Esta tcnica es ms
difcil de realizar, ms cara, no es
idnea para un diagnstico rpido;
por otro lado esta tcnica es
inmejorable
para
observar
las
estructuras microscpicas de los
hongos filamentosos en forma casi
intacta.
medio
Petri
varilla
Colonia de richophiyton rubrum

(hongo filamentoso)
Tcnica de microcultivo para identificar

hongos filamentosos.
PRCTICA NMERO 4
MICROCULTIVO
Una precaucin que se debe de

tomar para no realizar e! microcultivo
es; cultivos en donde el desarrollo es
lento, ya que nos hace sospechar en
patgenos como H. capsulatum,
C. immitis o S. schenckii. Debido al
riesgo que implica destapar la caja
de Petri y contaminarse por la
inhalacin o contacto de las esporas.
Sporotricosis (micosis causada
infeccin con Sporotrhrix schenkii)
Colonias de Histoplasma capsulatum
Colonias de Sporothrix schenckii
P R C T IC A NM ERO 4 [
por
PRCTICA NMERO 4
MICROCULTIVO
O B J E T IV O S :
1. Ser capaz de realizar la tcnica de microcultivo

2. Entender la eficacia de un microcultivo para identificar y clasificar un hongo
filamentoso.
s Una caja de portaobjetos y una de cubreobjetos.

s Un microscopio.
s Cinco cajas de Petri con el equipo de microcultivo portaobjeto, cubreobjetos y
un tringulo de varilla de vidrio todo dentro de lacaja de Petrien condiciones
de esterilidad.
S Pipeta de 5mL estril.
S Dos pinzas de diseccin.
s Una esptula.
s Dos placas de agar PDA o Sabouraud.
s Un asa y porta asa.
s Glicerol al 10% estril, 150 mL
s Formaldehido al 10%, 150 mL
S Fenol al 10%, 250 mL
S Azul de algodn de lactofenol, 50 mL
s Un esmalte transparente de uas o barniz sellador.
s Un mechero.
PRCTICA NMERO 4
MICROCULTIVO
MTODO
1. El trabajo se realiza en condiciones

aspticas usando mecheros.
2. Corte un pequeo trozo de agar PDA
o Sabouraud de un centmetro de
dimetro, se recomienda se haga en
forma circular, con un grosor de
aproximadamente
0.3
cm
ayudndose de un tubo de ensayo.
3. En la caja de Petri estril, ponga en
la base de la caja el tringulo de
varilla de vidrio y sobre el tringulo
el portaobjeto y a su vez sobre el
portaobjeto se deposita el trozo de
agar, para realizar esta operacin se
usa una esptula esterilizada.
4. Inocule los cuatro costados en forma
simtrica el trozo de agar con el
hongo elegido.
5. Sobre el trozo de agar inoculado
deposite un portaobjetos, mediante
las pinzas de diseccin.
6. Al trmino
de esta
serie
de
operaciones, deposite 5 mL de
glicerina-agua en la base de la caja
de Petri, cuidando que no se rebase
el nivel del tringulo de vidrio, tape la
caja
e
incube
a
temperatura
ambiente o a 30 C, durante 3 a 7
das.
7. Diariamente revise el crecimiento del
hongo, para verificar si ya est
madura la colonia para su cosecha.
8. Si decide que est completa la
maduracin del cultivo, agrege de 1 a
3 mL de formaldehido al 10% o fenol

al 10%, media hora antes de realizar
el manejo del microcultivo.
9. Una vez inactivadas las esporas,
retire
con
sumo
cuidado
el
portaobjetos y adicione una o dos
gotas de azul de algodn y coloque
los cubreobjetos, por otra parte retire
el trozo de agar y depostelo en un
vaso de precipitados que contiene
fenol al 10%, al portaobjetos ya sin el
agar aplique una o dos gotas de azul
de algodn y ponga los cubreobjetos.
10. Ambas preparaciones se observan
a seco dbil 10X y seco fuerte 40X.
La
correcta
observacin
de
las
preparaciones, nos dar el gnero y
especie
del
hongo
filamentoso,
estudiado.
DIAGRAMA DE FLUJO
Cortar trozos
circulares de
agra PDA o
Sabouraud.
PRCTICA NMERO 4
MICROCULTIVO
Colocar trozos
de agar en
caja Petri
acondicionada
con triangulo
de varilla de
vidrio y
portaobjetos
(estriles).
Inocule en los
cilindros de
agar, en
cuatros
costados
simtricamente
y colocar otro
portaobjetos
sobre los trozos
ya inoculados.
Adicione 5 mL
aproximadamente
de glicerina-agua
en la base de la
misma caja, tapar
e incubar.
Inactive las
esporas con
formaldehido
cuando este
completa la
maduracin.
Deseche el agar y
adicione una a
dos gotas de azul
de algodn a
porta objetos
colocando
posteriormente un
cubreobjetos.
Realice las
observaciones en
ambas
preparaciones.
PRCTICA NMERO 4
MICROCULTIVO
CUESTIONARIO
REFERENCIAS
1. Cul es la funcin de agregar

glicerina-agua a la caja de Petri?

2. Cul es e! efecto del fenol o el

formaldehido al 10%, al agregar a
la caja de Petri?
2. Koneman R. Micologa prcticas

de laboratorio. Argentina: Editorial
Panamericana; 1993.
3. Qu otras tcnicas a parte del

microcultivo son tiles para la
identificacin de mohos?
4. En un hongo levaduriforme Es
recomendable
usar
el
microcultivo
para
su
identificacin?
3. Rippon J. Tratado de micologa

mdica.
Mxico:
Editorial
PRCTICA NMERO 5
DETERMINACIN DE LAS CARACTERSTICAS FISIOLGICAS DE LOS HONGOS
e)E! pH ptimo para el desarrollo de los

hongos de de 5 - 7.
INTRODUCCION
Los hongos son un grupo muy amplio
de seres vivos, que en un principio se
les clasific dentro el reino Plantae,
pero
que
precisamente
por sus
caractersticas
morfolgicas
y
fisiolgicas, posteriormente se abre un
reino exprofeso para este grupo de
seres vivos que es el reino Fungi.
M y h o del pan
SeU>
A^COMlCLTOS
FICOMICETOS
-----
BASIDIOMICFIOS
------ ELtM IC EIO i------- i
HONGOSI
Principales tipos de hongos (reino

fungi)
Las caractersticas fisiolgicas ms
relevantes de los hongos son:
a) No tienen clorofila.
b)Son fotosensibles pero no realizan la
fotosntesis.
c)
Pueden presentar dimorfismo.
d)Son saprofitos, sus requerimientos
nutricionales son muy sencillos, en
especial en los hongos filamentosos,
temperatura ptima de crecimiento
de 25 - 28 C. Los hongos
levaduriformes son los que requieren
medios
ms
ricos
para
su
sobrevivencia, la temperatura ptima
de crecimiento es de 35 - 37 C.
Forma levaduriforme de Histoplasma

capsulatum (hongo dimorfico)
Por lo que los hongos deben de
encontrar en los medios de cultivo, lo
necesario para su crecimiento y
desarrollo
a) Material nitrogenado como peptonas.
b) Azcares como; glucosa y maltosa,
que son indispensables.
c) Un soporte slido como la gelosa,
que
permite
a
los
hongos
filamentosos
desarrollar
micelio
areo como rganos de fructificacin.
d)D ebe contener el medio cultivo un pH
de entre 5 - 6. El medio glucosado o
maltosado de Sabouraud rene este
requisito indispensable de desarrollo.
Figura N1
Colonias de Nocardia en
Medios de Sabouraud,
Ltwestein Jensen y
fioglicolato
Figura N2
medio de Lowestein
Jensen
Figura IW
en medio de Tioglicolato
Cepas de Nocardia sp. en diferentes

medios de cultivo.
PRCTICA NMERO 5
Para obtener ia esporuiacin sexuada o

asexuada es preferible utilizar medios
naturales gelosados como el papa zanahoria o extracto de malta.
Muchos hongos necesitan vitaminas,
estas se encuentran en las impurezas
de la peptona y del azcar, en
ocasiones conviene utilizar medios
enriquecidos con vitaminas especficas.
La forma unicelular en los hongos
pueden ser las levaduras, para obtener
un desarrollo adecuado de estos
hongos se requiere cultivarlos en
medios enriquecidos con sangre o
huevo. La temperatura ambiente que
es de 15 a 30 C permite el desarrollo
de la mayora de los hongos saprofitos
y de patgenos superficiales. Para los
patgenos de mucosas y dems
rganos profundos la temperatura
ptima de desarrollo es de 30 a 37 C.
La fermentacin de azcares es una

caracterstica
importante
para
diferenciar
levaduras,
tambin
es
conveniente el mtodo de utilizacin de
azcares y materias nitrogenadas en
anaerobiosis. Estos tambin pueden
utilizarse en hongos filamentosos.
Por todo lo anterior se disea la
presente prctica que aprovecha las
caractersticas
fisiolgicas
ms
relevantes de los hongos para su
clasificacin.
Forma levaduriforme de
Paracoccidioides barsilensis.
A gar
G lu c o s a d o
S a b o u ra u d
Medio de cultivo para crecimiento de

hongos.
Forma micelial de Paracoccidioides
barsilensis.
PRCTICA NMERO 5
O B J E T IV O S :
1. Conocer las necesidades fisiolgicas de los hongos filamentosos en

comparacin con los hongos levaduriformes.
2. Conocer las tcnicas y mtodos adecuados para demostrar y valorar
las necesidades fisiolgicas de los hongos.
s
s
s
s
#
s
s
s
s
s
s
S
s
s
Un asa y porta asa.

Una esptula.
Un bistur.
Papel absorbente estril, 20 cm
Dos cajas de Petri estriles.
Un tubo 13X100, con 3 mL
de acetato de sodio al 5% pH 7.5.
Un tubo 13X100, con 3 mL de cloruro de amonio al 5% pH 2.3.
de cido sulfrico 2N.
Un tubo 13X100, con 3 mL de solucin salina al 2.5%.
de solucin salina al 5%.
Un tubo 13X100, con 3 mL de solucin de sacarosa al 5%.
Un tubo 13X100, con 3 mL de solucin de sacarosa al 15%.
Dos tubos 13X100, con 3 mL de agua destilada estril.
Fruta fresca y/o verdura (se las asignar el asesor de la prctica a
cada equipo de laboratorio).
s Mermelada (se las asignar el asesor de la prctica a cada equipo de
laboratorio).
PRCTICA NMERO 5
METODO
1) Todos los tubos que se les

proporcione inoclelos (excepto un
tubo con agua destilada estril), con
una cepa de hongo previamente
identificada (el asesor les indicar
cual hongo se utilizar).
2) Incube a temperatura ambiente y
cheque su crecimiento a las 24, 48,
72, etc. horas. Hasta obtener un
desarrollo adecuado.
3) En una caja de Petri estril coloque
mermelada, cubriendo el fondo de la
caja y siembre la cepa utilizada en el
paso anterior.
4) Incube a temperatura ambiente y
reporte el crecimiento que observe
en la caja de Petri.
5) En la otra caja de Petri estril
coloque una porcin de papel filtro o
absorbente y agregue agua destilada
estril procurando impregnar con
suficiente
humedad
el
papel,
posteriormente aada una pequea
porcin de fruta o verdura cuidando
de quitar la cscara y suciedad
externa.
6) Incube la misma cepa con la que
trabajo e incube a temperatura
ambiente.
7) Realice
por
equipo
sus
observaciones y conclusiones.
8)A la siguiente semana de haber
realizado sus observaciones, haga
una concentracin de resultados de
todo el grupo y discuta sus
resultados y conclusiones (moderado

por
todos
los
asesores
de
laboratorio).
DIAGRAMA DE FLUJO
Inocular tubos con
cepas indicadas,
excepto uno que
contendr agua
destilada.
Incubar hasta
obtener un
desarrollo
adecuado.
Colocar
mermelada en
caja petri y
sembrar cepa del
paso anterior.
PRCTICA NMERO 5
En otra caja petri

colocar porcin de
papel humedecido
y posteriormente
una porcin de
fruta, en la misma
caja inocular cepa
de paso anterior.
Incubar cajas a
temperatura
ambiente.
CUESTIONARIO
1. Qu importancia tiene el conocer la
fisiologa de los hongos?
2. Qu
es
el
dimorfismo
en
micologa?
3. Describa
ampliamente
como
repercuten en la morfologa
y
fisiologa
de
los
hongos los
siguientes factores:
pH.
Temperatura.
Humedad.
4. Qu factores fisiolgicos influyen
en la prctica donde utiliza la
mermelada como medio de cultivo?
5. Analice
y
describa
el
comportamiento metablico de los
hongos
en
condiciones
de
aerobiosis y de anaerobiosis.
Realizar
observaciones y
concluir.
1. Bayley
and
Scott's.
Diagnostic
microbiology. 7a ed. USA: Editorial
Mosby. (1986).
2. Koneman R. Micologa prctica de
laboratorio.
2a reimpresin.
3a
edicin.
Argentina:
editorial
panamericana. (1990).
mdica. 3a edicin. Mxico: Editorial
interamericana. (1990).
PRACTICA
NMERO 6
FISIOLOGA de l e v a d u r a s
UNIDAD 2. MICOLOGIA
PRCTICA NMERO 6
FISIOLOGA DE LEVADURAS
INTRODUCCIN
Las levaduras son hongos unicelulares,
tienen forma oval o esfrica, midiendo
de 3 a 15 mieras de dimetro.
La gran mayora de estos hongos se
reproducen por gemacin, tanto sexual
como asexual.
criptococosis, enfermedades que se

caracterizan por ser oportunistas y
tener una elevada incidencia en
pacientes
desnutridos,
inmunocomprometidos,
pacientes
sujetos a prolongados tratamientos con
antibiticos o quimioterpicos.
Cabe aclarar que en algunas ocasiones
estos hongos pueden estar como flora
normal.
Se sabe que el 75 al 80% de las
muestras recolectadas en el laboratorio
y que presentan forma levaduriforme
corresponde a C. albicans.
Muchos hongos de importancia mdica

e industrial presentan esta forma. A
nivel industrial tenemos los hongos
levaduriformes
que
producen
vitaminas, vinos, cerveza, la levadura
del pan, etc.
Por todo lo anterior es importante la

correcta identificacin de las levaduras,
las pruebas ms comnmente usadas
son:
a) Desarrollo de tubo germinativo.
Esta prueba determina la formacin
de seudohifas o tubo germinativo en
Cndida albicans.
Koneman
y
Roberts
idearon
un
esquema til para clasificar los hongos
ms comnmente aislados en el
laboratorio de Bioqumica Clnica, que
consiste en determinar si el hongo es
un moho ya sea hialino o demateaceo,
o bien si el hongo es una levadura.
Por
otra
parte
los
hongos
levaduriformes de importancia mdica
que ms comnmente se presentan
son:
La Cndida albicans y el Criptococcus
neoformans causan la candidiasis y la
A) Tubo germinal de Cndida albicas

obtenido en suero humano a las 3
horas de incubacin a 37 C. B)
Blastoconidio con pseudohifa.
PRCTICA NMERO 6
b) Produccin de ureasa.
Esta tcnica se basa en el hecho que
el C neoformans, C. krusei, algunos
hongos del genero Rhodoto rula
ssp. y T richosporum ssp. producen
ureasa, esta tcnica es altamente
sensible (99.5%)
para detectar el C. neoformans.
*>
fe
\
Prueba de la fenoloxidasa (C.
neoformans positivo).
Cryptococcus neoformans ureasa

positivo (tubo de la derecha positivo).
c) Reduccin de nitrato.
Esta tcnica es til para diferenciar el
C. neoformans, se basa en el hecho
que este hongo es incapaz de
reducir nitritos.
d) Prueba de L-dopa-citrato frrico.
Esta prueba es til para detectar la
presencia de C. neoformans, ya que
este hongo es capaz de producir
fenoloxidasa, enzima que puede ser
detectada
por la L-dopa-citratofrrico.
e) La asimilacin y fermentacin de
carbohidratos,
denominadas;
Auxonograma
y
Zimograma
respectivamente.
Estas pruebas son tan selectivas que
pueden determinar el gnero y la
especie del hongo levaduriforme.
El Auxograma se realiza en placa de
Petri que contiene un medio con
escaso contenido de fuentes de
carbono y se evala la asimilacin de
carbohidratos, que son colocados en
el medio de cultivo desde que se
sembr el hongo por identificar.
PRCTICA NMERO 6
f) Tambin
existen
pruebas
comerciales
para
identificar
levaduras como son; el sistema APIYeast-ldent, API 20C y el Uni-YeastTek System. Que se basan en la
asimilacin
de
carbohidratos.
Pruebas eficientes, precisas pero
muy caras.
Auxograma en agar noble.

El Zimograma se realiza en tubo de
ensaye que contiene un carbohidrato
especfico en
solucin, en una campana de
Durham invertida se coloca la
levadura y se evala la fermentacin
del carbohidrato especfico.
Tubos con medio para la prueba de

zimograma.
PRCTICA NMERO 6
O B J E T IV O S :
1. Conocer las necesidades fisiolgicas de las levaduras.

2. Comprender y realizar las tcnicas de Auxonograma y el Zimograma, para la
identificacin de levaduras.
3. Conocer la importancia clnica e industrial de identificar levaduras.
s
s
s
S
s
s
s
s
s
s
s
s
s
s
s
Cepa de C. albicans, en un tubo 18X150 con tapn de rosca.

Cepa de C. stellatoidea, en un tubo 18X150 con tapn de rosca.
Suero humano o de carnero o conejo, 3 mL
Una caja de agar harina de maz.
Dos cajas de agar base de levaduras ms prpura de bromocresol.
Un tubo de 13X100 conteniendo una solucin estril de los siguientes
carbohidratos:
Manitol.
Glucosa.
Lactosa.
Sacarosa.
Maltosa.
Trealosa.
Galactosa.
Dos tubos de solucin salina estril al 0.85%.
Dos tubos 13 X100, con caldo maltosado ms PBC con campana de Durham.
s
s
s
s
s
s
s
s
s
s
s
Dos tubos 13X100, con caldo sacarosa ms PBC con campana de Durham.
Dos tubos 13X100, con caldo trealosa ms PBC con campana de Durham.
Dos tubos 13X100, con caldo lactosa ms PBC con campana de Durham.
Dos tubos 13X100, con caldo glucosa ms PBC con campana de Durham.
Dos tubos 13X100, con caldo manitol ms PBC con campana de Durham.
Dos tubos 13X100, con caldo galactosa ms PBC con campana de Durham.
Diez discos de papel filtro estriles, en un tubo 18X150 con tapn de rosca.
Un mechero.
Cinco pares de hisopos estriles.
Un microscopio.
Cubreobjetos y portaobjetos.
I_____________________________________________________________________________________________________
PRCTICA NMERO 6
MTODO
e) Observe al microscopio en busca

del desarrollo del tubo germinal y
reporte el resultado.
I) Produccin de Clamidioesporas.
a) Divida por la mitad la caja de agar
harina de maz y en cada mitad
siembre cada cepa en forma de
'jr 1
.
b) Incube a 37C por 24 a 48 horas.

c)Tom e una pequea muestra de
cada mitad en un portaobjetos y
agregue una gota de solucin
salina.
d)
Observe al microscopio y reporte
el tipo de desarrollo.
02/10/200911:44
Produccin de tubo germinal.
III)
Produccin de Clamidioesporas
II)
Produccin de Tubo Germinal.

a) En dos tubos de ensaye coloque
aproximadamente 1 mL de suero
de conejo, carnero o humano.
b) Inocule una asada de cada cepa
de hongo.
c) Incube a 35C durante 3 horas.
d)AI trmino de la incubacin, tome
una gota de la solucin de cada
tubo, en su respectivo portaobjetos
y se coloca un cubreobjetos.
mM{
Auxonograma.
a) Cada cepa
de
levadura
se
suspende
en
solucin
salina
fisiolgica estril.
b) Introduzca en cada tubo un hisopo
estril y siembre
masivamente
cada levadura en su respectiva
caja con prpura de bromocresol.
c) Humedezca los discos de papel
filtro estril (marcar ios discos con
lpiz), con cada
una de la
soluciones de carbohidratos, deje
secar el exceso y coloque todos
los discos en la caja de Petri ya
sembrada.
d)Se incuba a 37C por 24 a 48
horas.
e)Se reporta el crecimiento de cada
levadura alrededor de cada uno de
los discos.
f)
Se interpreta de la siguiente forma;
un crecimiento indica que hubo
asimilacin de ese carbohidrato
por parte del hongo, un halo de
PRCTICA NMERO 6
inhibicin alrededor dei disco

indica que no hubo asimilacin de
la azcar por parte del hongo.
II)
Inocular asada de
cepa de hongo en
tubo con suero e
incubar.
** Compare los resultados obtenidos

con los reportados en la bibliografa. **
IV) Zimograma.
a) Inocule cada cepa de levadura en
cada tubo que contiene
el
carbohidrato ms prpura de
bromocresol.
b) Incube a 37C por 24 a 48 horas,
lea y reporte los resultados.
c) Interprete cualquier cambio o gas
detectado, indica fermentacin del
carbohidrato.
** Compare los resultados obtenidos
con los reportados en la bibliografa. **
DIAGRAMA DE FLUJO
I)
Produccin de Clamidioesporas.
_______________________
Dividir medio agar

harina de maz y
sembrar en forma
de Z.
Incubar y despus
observar al
microscopio
agregando una
gota de solucin
salina.
Produccin de Tubo Germinal
Colocar una gota

en portaobjetos,
cubrir y observar
al microscopio.
iil)
Auxonograma.
Sembrar
masivamente
cada levadura en
caja
correspondiente.
Colocar discos
humedecidos en
cajas ya
sembradas e
incubar.
Reportar
crecimiento de
cada levadura.
PRCTICA NMERO 6
IV)
Zimograma.
Inocular levadura
en cada tubo con
carbohidrato y
purpura de
bromocresol e
incubar.
Reportar si hay
fermentacin.
CUESTIONARIO
1.Cul
es
la
diferencia
entre
asimilacin y fermentacin de un
carbohidrato, por parte de una
levadura?
2.
Describa someramente la moniliasis,
candidiasis
sistmica
y
la
criptococosis.
3. Describa en qu consisten los
sistemas de identificacin API-20C y
Uni-Yeast-Tek System.
4. Qu otras tcnicas de identificacin
de levaduras hay y que no se
incluyeron en la prctica (dos)?
5. Por qu motivo, se sembr en Z
en la caja de agar harina de maz?

2. Koneman R. Micologa prcticas
de laboratorio. Argentina: Editorial
Panamericana; 1993.
mdica.
Mxico:
Editorial
UNIDAD
III
VIROLOGA
yt '
Un cientfico debe tomarse la libertad de plantear

cualquier cuestin, de dudar de cualquier
afirmacin, de corregir errores.
Julius Robert Oppenheimer (1904-1967) Fsico estadounidense.
PRACTICA
NMERO 1
AISLAMIENTO DE BACTERIOFAGOS
UNIDAD 3 Virologa
PRCTICA NMERO 1
AISLAMIENTO DE BACTERIFAGOS
INTRODUCCIN
Los virus son parsitos intracelulares
obligados, de tamaos muy pequeos
en el orden de los nanmetros
(nm). Los virus estn constituidos de un
genoma, cor o material gentico,
tienen un recubrimiento proteico al cual
se le llama cpside y al conjunto del
genoma y la cpside se le suele llamar
capsmero, algunos virus suelen tener
un recubrimiento lipdico a lo que se le
llama peplos o membrana, estos virus
se les llama virus envuelto, los virus sin
peplos se les llama sin peplos o
desnudos.
Estructuras virales
P R C T IC A NM ERO I |
U N ID A D 3 - V IR O LO G A
Los virus pueden parasitar clulas

procariotas, como las bacterias y que
en este caso el virus se le llama
bacterifago. Cuando el parasitismo lo
realiza en clulas eucariotas se le llama
virus.
Los virus que infectan bacterias se
denominan
bacterifagos
o
simplemente fagos.
Existen dos clases de bacterifagos:
Fagos lticos o virulentos, en los que

tras la infeccin, el cido nucleico
del fago se replica y transcribe
dentro de la bacteria husped
originando nuevas partculas fgicas
que son liberadas al lisarse la clula
(ciclo ltico).
Fagos lisognicos o atenuados. Tras
la infeccin, su cido nucleico puede
integrarse
en
el
genforo
o
cromosoma de la bacteria, lo que se
denomina prfago, y replicarse en
sincrona con l, mantenindose en
estado latente (ciclo lisognico). El
prfago puede liberarse del genforo
bacteriano y entra en un ciclo ltico,
como se muestra en la siguiente
figura.
PRCTICA NMERO 1
CICLO VITAL DE UN FASO
Receptor de
membrana
Fajo
Integracin del ADN

del fo jo en el geneforo 7
___________ /
A
Divisin celular
Virus
/atenuado
LIS05NIC0
\.
O HO HO <
Bacteria
CICLO
Adsorcin
Divisiones
sucesivas
Infeccin
husped
CICLO
LTICO
Pep lie acin del
Formacin de
ADN del virus
nuevos virus
Lisis
Ciclo vital de un fago.

El cometido de la prctica es demostrar
la capacidad de los virus de replicarse
en una clula hospedera. Para este
motivo se proveer de un fago virulento
y susceptible a la clula hospedadora
del cultivo. Esta tcnica es til para
enumerar partculas fgicas sobre la
base de formacin de placas en un
medio de agar slido.
Para preparar una suspensin de fagos
virulentos, se mezcla una pequea
cantidad de estos en un cultivo de la
bacteria susceptible a ser infectada o
bacteria hospedera. Tras la infeccin,
las bacterias se lisaran liberndose
nuevas partculas fgicas al medio, que
se centrifuga para retirar los restos
celulares. Se mezcla una determinada
dilucin de la suspensin fgica con un
cultivo exponencial de la bacteria
hospedera, y se coloca sobre la
superficie de una placa de agar,
despus de la incubacin se observara
un csped o tapiz bacteriano sobre el
P R A C T IC A NUM ERO I |
que
aparecen
pequeas
areas
circulares claras que corresponden a
las denominadas placas lticas o
calvas de lisis. Estas placas lticas
representan reas de produccin de
fagos procedentes de la lisis de
bacterias infectadas en esa rea.
Las placas lticas o calvas; son reas
claras
en
un
medio
de
agar
previamente
sembrado
con
una
muestra diluida del fago y la clula
husped. Cada placa representa la lisis
que produjo un fago que infecto a una
bacteria como se muestra en la
siguiente figura.
Csped
Calvas
Placas lticas causadas por

bacterifagos.
PRCTICA NMERO 1
OBJETIVOS:
1. Conocer e identificar un bacterifago, un virus y el efecto de parasitismo
intracelular que producen en una clula hospedera.
2. Llevar a cabo el manejo y aislamiento de bacterifagos.
3. Conocer las etapas de la replicacin de los bacterifagos.
s Moscas vivas, de 20 a 30, atrpelas usted.
S Aguas residuales como fuente del bacterifago aproximadamente 45 mL
s Cepa de Escherichia coli. sembrado en forma masiva en una caja medio EMB.
Aislada previamente.
s Dos matraces Erlen Meyer de 125 mL
s Cinco tubos para centrifuga 13X100.
s Cinco tubos con tapn de rosca 18X150.
s Ocho pipetas estriles de un mL.
s Un filtros de membrana estriles de 0.45 |jm, marca Millipore.
s Una jeringa estril de 10 mL.
s Cuatro tubos 13X100, que contiene 2 mL de caldo soyatripticasena.
s Cuatro cajas que contiene agar nutritivo.
s Cuatro tubos 13X100, que contienen 3 mL de agar blando (0.7% de agar) de
soya tripticasena.
s Mortero y pistilo para aproximadamente 250 mL
Dos frascos estriles, de 50 a 100 mL
s Cinco mL de caldo nutritivo decaconcentrado, en un matraz de 50 mL
v' Cuatro pipetas estriles de un mL.
U N ID AD 3 - V IR O LO G A
PRCTICA NMERO 1
3. De todas las colonias que han

crecido aisl a la E. coli en agar
EMB.
A. Aislamiento de Escherchia c o li
de diversas fuentes.
Una semana antes de realizar la
prctica es indispensable que haga
lo siguiente.
Moscas vivas como fuente:
4. Una vez aislado la E. coli, tome

una asada y resuspenda en 2 mL
de caldo de soya tripticasena
(este cultivo se usara para el
enriquecimiento del bacterifago).
B. Enriquecimiento del
bacterifago
1. Atrape usted de 20 a 30 moscas

vivas.
Un da antes de la prctica debe

realizar lo siguiente.
2. Macere las moscas con caldo BHI

o caldo soya tripticasena.
Moscas vivas como fuente:
3. Siembre de esta mezcla en agar

EMB, por extensin, e incube a
37 C por 24 horas.
4. De todas las colonias que han
crecido aisl a la E. coli en agar
EMB.
5. Una vez aislado la E. coli, tome
una asada y resuspenda en 2 mL
de caldo de soya tripticasena
(este cultivo se usara para el
enriquecimiento del bacterifago).
Aguas residuales como fuente:
1. Obtenga aproximadamente
mL de agua residual.
45
2. Tome con el asa bacteriolgica

calibrada 0.01 mL del agua
residual y siembre en agar EMB,
por extensin, e incube a 37 C
por 24 horas.
P R C T IC A NM ERO I |
Moscas vivas
1. Adicione de 20 a 30 moscas a una
pequea cantidad de caldo soya
tripticasena y macere con un pistilo
hasta hacer una pulpa fina.
2. Transfiera esta mezcla a un frasco
estril y adicione ms caldo soya
tripticasena hasta completar 20 mL
ms 2 mL de caldo que contiene E.
coli (del cultivo del punto cinco del
PRCTICA NMERO 1
aislamiento de E. coli de moscas

vivas).
3. Mezcle suavemente.
4. Incube 24 hrs. a 35 C.
Agua residual com o fuente:
1. Adicione
15
mL
de
agua
residuales a 5 mL de caldo
nutritivo decaconcentrado en un
frasco estril, adicione 2 mL de
cultivo en caldo de E. coli (del
cultivo del punto cuatro del
aislamiento de E. coli de agua
residual).
2. Mezcle suavemente.
3. Incube 24 hrs. a 35 C.
C. Identificacin del bacterifago
El da de la prctica debe realice lo
siguiente.
Tanto de
residuales
m oscas.
la fuente de aguas
com o
de
las
de
Aguas residuales
1. Decante
10
mL
del
enriquecimiento de bacterifagos
(del punto B tanto de moscas
como de agua residual) dentro de
un
tubo
para
centrfuga
y
centrifugue a 3000 r.p.m. por 30
minutos, para remover bacterias y
material slido.
2. Del sobre nadante del tubo
centrifugado, con la ayuda de una
jeringa, filtre el sobrenadante a
travs de un filtro de membrana
(con el filtro Millipore) y deposite el
lquido claro dentro de un tubo con
tapn de rosca.
3. Marque 4 tubos de caldo soya
tripticasena (con 3 mL cada uno),
del 1 al 4.
4. Aspticamente adicione 0.5 mL de
la suspensin enriquecida (del
paso dos) al tubo uno y mezcle
cuidadosamente
aspirando
y
bajando el volumen dos a tres
veces. De este tubo (1) transfiera
0.5 mL al segundo tubo, y repita la
operacin hasta el tubo (4) y el
restante 0.5 mL virtalo a un
contenedor con desinfectante.
5. Adicione 0.1 mL de cultivo de E,
coli del paso A, a los tubos de
agar blando, previamente fundido
y mantenindolo a 45 C.,
contine mantenindolos a 45 C
sin permitir que solidifique.
6. Pipete del tubo (4) 1 mL y
virtalo al agar blando (marcado
con el nmero 4), mezcle por
agitacin y rpidamente invierta
este tubo sobre la caja marcada
con el nmero (4), mezcle en
PRACTICA NUMERO 1
forma de ochos.
Repita
la
operacin para los tubos (1) al (3)
a igual nmero de cajas de Petri resultados cuantitativos por la
aparicin de las calvas (celular
formadores de colonias)-.
7. Adicione dos asadas de cultivo de
E. coli, a cada remanente de los
tubos (del 1 al 4) del paso anterior
y mezcle suavemente -resultados
cualitativos, existe o no turbidez al
da siguiente- (cuidando que la
asada de E. coli sea de la fuente
correspondiente, moscas o aguas
residuales, recuerde que los virus
son selectivos).
8. Incube las cajas y los tubos del
paso 9 a 35 C por 24 horas,
observe.
9. Ver la figura 3.1.3 de como se
deben observar las capas lticas o
calvas en las cajas.
DIAGRAMA DE FLUJO
Decantar el
sobrenadante
del centrifugado
y filtre con
ayuda de una
jeringa y un filtro
de disco
Millipore.
Realizar
diluciones *
Fundir agar
blando y
mantener a
45 C
Decantar
enriquecimiento
B y centrifugar.
/
Adicionar 0.1 mL
de caldo de
E.coli y 1 mL de
caldo de fago.*
PRCTICA NMERO 1
Verter mezclas
en cajas Petri
con agar
preformado.*
Adicionar asadas
de E. coli a los
remanentes de los
tubos con caldo de
fago.
CUESTIONARIO
1. Describa la forma del DNA virus y
RNA virus.
2. Ample lo que es un bacterifago.
3. Cuntos virus de la hepatitis hay y
cul es su forma de transmisin, de
cada uno de ellos?
4. Describa la forma que presenta el
virus HIV.
5. Qu es el SIDA?
PRCTICA NMERO 1
REFERENCIAS
1. Smith A. Principies of microbiology.

8a ed. USA: editorial Mosby; 1981 .pp
392-399.
2. Ketchum A. Microbiology.
USA:
editorial Willy & sons. 1988. pp 431513
3. Bayley
and
Scott's.
Diagnostic
microbiology. 7a ed. USA: Editorial
Mosby; 1986: pp 234-495.
4. Mims
P.
Microbiologa
mdica.
Espaa: editorial Mosby; 1995: pp
1.6-24.9
5. Brooks G. Microbiologa mdica de
Jawetz, Melnick y Adelberg. 17a ed.
Mxico: Editorial El Manual Moderno;
2002 .
6. Douglas J. Bacterifagos. Espaa
(Barcelona): Ediciones Omega; 1978:
7. Madigan M, Martinko M. Biologa de
los microorganismos. 10a
ed.
Espaa (Madrid): Editorial Pearson
Educacin; 2004.
8. Murray P. Microbiologa Mdica. 4a
ed. Espaa: Editorial Mosby; 2004.
PRACTICA
NMERO 2
HEMAGLUTINACION VIRAL E
INHIBICIN DE LA HEMAGLUTINACIN
VIRAL
UNIDAD 3 Virologa |
PRCTICA NUMERO 2
HEMAGLUTINACIN VIRAL E INHIBICIN DE LA HEMAGLUTINACIN VIRAL
NTRODUCCION
Actualmente esta tcnica se sigue
usando para poder determinar la
potencia de vacunas, de virus que tiene
hemaglutinina
que
de
forma
espontnea se unen a eritrocitos, como
son Sarampin, Parainfluenza viral, e
Influenza A1HN1 entre otros, de ah la
importancia que ios alumnos de QFB
de las orientaciones de Farmacia
Industrial, Farmacia Hospitalaria y
Bioqumica Clnica las conozcan y
maneje
La influenza viral es una tpica

zoonosis, es decir que la transmisin
es de los animales al humano, es una
enfermedad cuyo curso clnico tpico,
comienza
con
fiebre
abrupta,
escalofro, seguido de fatiga, cefalea y
mialgias. La recuperacin de casos no
complicados es de 3 a 4 das de
iniciados los sntomas. Sin embargo la
debilidad y fatiga pueden persistir por
varias semanas. El virus de la influenza
tipo A causa la ms severa enfermedad
en los humanos, seguida por la
P R C TIC A NM ERO 2 |
influenza tipo B y por la influenza tipo C

(la cual puede no ser un virus de la
influenza verdadero si nos ajustamos a
criterios bioqumicos estrictos).
Genesls of New Human Influenza Vlruses
Influenza viral tpica zoonosis.

Los tres tipos de virus de la influenza A,
B y C, se diferencian por antgenos
internos especficos de tipo, las
nucleoprotenas (NP) y por protena M
de la membrana. Los antgenos
especficos de cepa o subtipos se
presentan en la superficie externa; la
hemaglutinina
(HA)
y
la
neuroaminidasa (NA) para la influenza
A y B y una simple glicoprotena (HEP)
para la influenza C, como se ve en la
siguiente figura.
PB1. PB2 PA
Estructura del virus de la influenza

(antgenos presentes).
PRCTICA NUMERO 2
Mediante
pruebas serolgicas se
puede establecer el tipo y subtipo de
virus de la influenza que provoca la
infeccin, sin embargo la determinacin
de anticuerpos en una simple muestra
no nos indica necesariamente una
infeccin reciente, a menos que se
trate de un subtipo de virus que
aparece p or prim era vez.
Para
establecer
el
diagnstico
serolgico de enfermedad reciente se
requiere
medir
los
ttulos
de
anticuerpos en sueros pareados con
intervalos dentro de la primera muestra
y la segunda de al menos 2 3
semanas
Las pruebas serolgicas ms usadas
para establecer el diagnstico de
influenza son las pruebas de fijacin de
complemento (FC) y la de inhibicin de
la hemaglutinacin (Hl), sta ltima
prueba se basa en la capacidad que
tiene el virus de aglutinar eritrocitos y la
capacidad de un anticuerpo especfico
anti HA para inhibir esta aglutinacin.
Dentro de las ventajas que tiene la
prueba de Hl en relacin a la FC, estn
el que es ms rpida, fcil de hacer y
que nos determina subtipos de virus,
mientras que su desventaja mayor es
que existen inhibidores no especficos
en las muestras de suero.
conteniendo cido silico que pueden

ser eliminadas del suero mediante la
enzima
de
Vibrio
cholerae
que
destruyen el receptor o bien tratando el
suero con peryodato de potasio (K I0 4)
En sta prctica se sustituir el virus de
la influenza por el virus Newcastle que
tambin tiene la capacidad de aglutinar
glbulos rojos y que es inocuo al
humano.
HN = Procelia lleinootfotiniiw-iV mniininklaid
F
= Ptolena de Fusin
RNA = Gerwnw sennflo de rido ribonucleico
Estructura del virus New castle.
pPdrtfcUrlvwwjru-OOHIMIMhMCfiK A fa rc ite lt g o H x u t*,

dr una rulrtuU bt pMi&x sfa
W b n w lttitf
deb edub
Maduracin: L mperen; *
Por
lo
tanto,
requerimos
de
tratamientos efectivos de los sueros
para no tener reacciones falsas
positivas. Algunos de los inhibidores en
el suero pueden ser mucoprotenas
nm * Mi*!*
Replicador) de un bacterifago
PRCTICA NUMERO 2
OBJETIVOS:
1. Aprender el correcto manejo de la tcnica de micro hemaglutinacin viral
(HA).
2. Hacer la titulacin del virus mediante la tcnica de microaglutinacin viral.
3. Determinar el ttulo de anticuerpos anti
HA mediante la prueba de
inhibicin de la hemaglutinacin (Hl).
s Virus del Newcastle cepa vacunal. Se debe manejar con cuidado pues
puede producir conjuntivitis viral leve.
S Am ortiguador de solucin salina fosfatos (PBS), 250 mL.
s Suspensin de eritrocitos de pollo al 0.5% en solucin de PBS.
s Suero de conejo anti virus del Newcastle, tratado con K I0 4, 0.5 mL.
s Una placa de microhemaglutinacin.
s Una micropipeta tipo Ependorf de 20 a 100 jxL,
PRCTICA NUMERO 2
a temperatura de 4o
temperatura ambiente.
MTODO
Prueba
(HA).
de
6. Leer la aglutinacin como

observa en la siguiente figura.
hemaglutinacin
a
se
viral
................................L
1. Coloque en los 12 pozos 0.05 mL de

PBS
(diluyente),
usando
una
micropipeta Ependorf (el proceso se
realiza por duplicado en las lneas A
y B de la placa de microtitulacin de
policarbonato).
2. Coloque en el pozo nmero 1 de la
lnea A y B, la cantidad de 0.05 mL
de la suspensin de virus a titular,
con una micropipeta tipo Ependorf, y
con la misma pipeta mezcla en el
pozo y 0.05 mL al siguiente pozo
siguiendo este procedimiento hasta
el pozo 11, del cual tome 0.05 mL y
se deschelos.
3. En el pozo 12 se queda slo con
0.05 mL de PBS el testigo de la
prueba en las lneas A y B de la
placa.
4. Los eritrocitos de pollo conservados
en alsever, se lavan con solucin de
PBS por centrifugacin a 2000 rpm
durante cinco minutos, repita el
lavado
hasta
obtener
un
sobrenadante claro, el cual se
desecha.
Del paquete globular
realice la dilucin al 0.5% en PBS.
5. Adicione a todos los pozos de las
lneas A y B de la placa 0.05 mL de
los glbulos rojos de pollo al 0.5%,
mezcle bien e incube por 15 minutos
|-
Hemaaglutinacion viral.
Prueba de la in h ib ici n de la
hem aglutinacin viral (Hl).
1. Coloque en los 12 pozos 0.025 mL
de PBS (diluyente), usando una
micropipeta
tipo
Ependorf
(el
proceso se realiza por duplicado en
las lneas D y E de la placa de
microtitulacin de policarbonato).
2. Coloque en el pozo nmero 1 de las
lneas D y E, la cantidad de 0.025
mL del suero de conejo antivirus de
Newcastle a probar, con una
micropipeta tipo Ependorf, y con la
misma pipeta se mezcla en el pozo y
se pasan 0.025 mL al siguiente pozo
siguiendo este procedimiento hasta
el pozo 11, de este pozo tome 0.025
mL y deseche.
3. En el pozo 12 le queda slo con
0.025 mL de PBS y es el testigo de
la prueba en la lnea D y E de la
placa.
PRCTICA NUMERO 2
HEMAGLUTI NACIN VIRAL E INHIBICIN DE LA HEMAGLUTI NACIN VIRAL
4. Adicione a todos los pozos 4

unidades hemaglutinantes (HAU) de
virus de Newcastle en un volumen
de
0.025
mL,
usando
una
micropipeta tipo Ependorf.
5. Mezcle bien e incube a temperatura
ambiente durante 15 minutos.
6. Adicione 0.05 mL de glbulos rojos
de pollo al 0.5%, agitar e incube a
temperatura ambiente durante 15
minutos.
hemaglutinacin y tenemos una unidad

inhibidora de la hemaglutinacin en ese
volumen de 0.025 mL, para este
ejemplo es la dilucin 1:64 que se
muestra en los pozos 6 de la lneas D y
E; que corresponde a 64X4=256
unidades
de
inhibicin
de
la
hemaglutinacin/mL
de
suero
empleado.
7. Lea el ttulo hasta donde se inhibe la

hemaglutinacin.
Interpretacin de resultados
Para la prueba HA; la dilucin ms alta
del virus que causa una aglutinacin
completa es considerada el ttulo final y
tenemos una unidad hemaglutinante en
ese volumen de suspensin viral, como
se puede observar en la dilucin de la
lnea A corresponde a 1:64 que es el
pozo 6.
Para considerar a qu concentracin se
usar el virus para la prueba de
inhibicin de la hemaglutinacin, para
este ejemplo recorra la lectura en
sentido inverso, ya que en el pozo 6
que corresponde a una dilucin 1:64 se
observa an aglutinacin, en el pozo 5
una dilucin 1:32 y finalmente en el
pozo 4 una dilucin
1:16 que
corresponde a las cuatro unidades
hemaglutinantes que se requieren para
la siguiente prueba.
Para la prueba Hl; el ttulo se define
como el factor de dilucin ms elevada
del suero que inhibe completamente la
En la parte superior se observa la

reaccin de hemaglutinacin viral
(pozos del 1 al 12 de las lneas A y B) y
en la parte inferior se observa la
reaccin de la inhibicin de la
hemaglutinacin viral (de los pozos 1 a
12 de las lneas E y F) con virus de
Newcastle y suero de conejo antivirus
de Newcastle.
PRCTICA NUMERO 2
Prueba de la inhibicin de la
hemaglutinacin viral (Hl).
DIAGRAMA DE FLUJO
Prueba
(HA).
de
hemaglutinacin
Colocar 0.05 mL de
PBS en los pozos
de las lneas A y B.
Colocar 0.05 mL de
suspensin viral en el
pozo 1de las lneas A y
B. mezclar con ayuda
de la pipeta.
Tom ar 0.05 mL de
suspensin viral del pozo
1de las lneas A y B. y
adicionar al pozo 2, con
ayuda de la misma pipeta
repita esto hasta el pozo
numero 11. Desechar 0.05
mL de este pozo.
Lavar eritrocitos de pollo y

adicionarlos a todos los
pozos de las lneas A y B e
incube a temperatura de
4C o a temperatura
ambiente. Leer resultados.
viral
Colocar 0.025 mL
de PBS en los
pozos de las lneas
Colocar 0.025 mL del suero de

conejo antivirus en el pozo 1
de las lneas D y E. mezclar
con ayuda de la pipeta.
Pasar 0.025 mL de la mezcla

del pozo 1 al pozo 2, repetir
hasta el pozo 11, tom ar 0.025
mL de este pozo y desechar.
Adicionar a todos los pozos

0.025 mL de unidades
hemaglutinantes de virus
newcastle.
Incube a temperatura
ambiente. Y adicione 0.05 mL
de eritrocitos de pollo agitar e
incubar durante 15 minutos a
temperatura ambiente. Leer
resultados.
PRCTICA NUMERO 2
CUESTIONARIO
1. Qu tipo de enfermedades vrales

son imposibles de diagnosticar por
medio de la tcnica de inhibicin de la
hemaglutinacin?
2. Qu precauciones se debe tener
con la realizacin de la tcnica de
inhibicin de la hemaglutinacin?
3. Con qu otra tcnica inmunolgica
se puede suplir la tcnica de inhibicin
de la hemaglutinacin?
REFERENCIAS
1. Stuart-Harris C, Shild G, Oxford J.
Influenza: the viruses and the
disease, 2a Ed. Editorial Arnold
London; 1985.
2. Kendal P, Cate TR. Increases
sensitivity and reduced specificity of
hemagglutination inhibition tests with
ether
treated
influenza
b/
Singapore/222/79 J Clin Microbiol.
1983; 18: 930-934.
3. Harmon M, Rota P, Walls H, Kendal
A. Antibody responses in human to
influenza type b host cell derived
variant following vaccination with
standard (eggs-derivaded) vaccine
or natural infection. J Clin Microbiol
1988;26: 333-337.
4. Rota PA, Regnery HC, Kendal AP.

Influenza viruses. In Rose NR,
Friedman H, Fahey Jl et al. (Eds.):
Manual clinical immunology. 4a. Ed.
Washinton D.C.: American Society
For Microbiology; 1992: 576- 581.
PRCTICA
NMERO
ESTRUCTURAS DEL EMBRIN DE POLLO

Y SUS VAS DE INOCULACIN
PRCTICA NMERO 3
ESTRUCTURAS DEL EMBRIN DE POLLO Y SUS VAS DE INOCULACIN
INTRODUCCIN
Los primeros investigadores en

utilizar embriones de pollo son, Rous
y Murphy en 1911 que los utilizaron
por
primera
vez,
usando
la
membrana
corioalantoidea
del
embrin de pollo para el estudio de
los virus. En 1931 Goodpasture
logr introducir el embrin de pollo
para cultivar virus. Los primeros
trabajos
fueron para aislar e
identificar al virus influenza y luego
se extendi para estudios de otros
virus y bacterias intracelulares como
la
Viruela,
Herpes
simplex,
Rickettsias y Chlamidias. Por lo que
el embrin de pollo es uno de los
mtodos ms antiguos y eficientes,
para
cultivar
virus,
y
otros
microorganismos intracelulares.
Esta tcnica es til para
aislamiento
e identificacin
agentes
etiolgicos
enfermedades virales.
el
de
de
El embrin tambin se utiliza para

cultivar virus para obtener vacunas
contra; la Rabia, el Newcastle o la
Influenza.
Por todo lo anterior se hace
indispensable conocer las partes de
un embrin de pollo y sus vas de
inoculacin.
PRCTICA NMERO 3 |
UNIDAD 3 - VIROLOGA
MEMBRANA
VIRUS
SIGNOS DE
CRECIMIENTO
Saco vitelino
Herpes
simple
Muerte
Coriolantoies
Herpes
simple
Poxvirus
Sarcoma
de Rous
Varicela
Influenza
Muerte
Pstulas
Pstulas
Alantoides
Amnitica
Hemaglutinacin
Parotiditis Muerte
Virus de
la gripe
Cuadro 3.i Relacin de infecciones

virales y la va de inoculacin
PRCTICA NMERO 3
OBJETIVOS:
1. Adquirir el conocimiento para el correcto manejo de la tcnica de
inoculacin de embrin de pollo por las vas ms utilizadas.
2. El alumno conocer las diversas partes del embrin de pollo de 9 das
de incubacin.
s Un ovoscopio.
s Cinco embriones de pollo de 9 a 10 das.
s Algodn, 100 g
s Cinco jeringas de un mL
s Cuatro agujas del nmero 27.
s Una aguja del nmero 22 larga.
S Azul de metileno, 10 mL
s Un lpiz de nmero 2.
s Pinzas de diseccin.
s Cinco cajas de Petri.
PRCTICA NMERO 3 |
UNIDAD 3 - VIROLOGA
PRCTICA NMERO 3
seale el punto de inoculacin entre los

vasos sanguneos.
3. Perfore sobre la cmara de aire y el
punto de inoculacin.
4. Succione con una boquilla por el orificio
de la cmara de aire. Se debe formar
una cmara de ms menos un cm de
dimetro.
5. Con una aguja del 27 corta depositar
0.1 mL del colorante.
METODO
A.
Estructura Normal:
1. Ilumine con el ovoscopio el embrin de

pollo, identificando y marcando la
cmara de aire y la mancha ocular.
2. Corte el cascarn a la altura de la
cmara de aire, procurando que no
** Cuide de no perforar la membrana
queden bordes filosos.
corioalantoidea **
3. Deposite el contenido del embrin en
una caja de Petri.
4. Proceda a identificar las estructuras del
C.
Inoculacin en Saco Vitelino.
embrin de pollo de 9 das.
1. Ilumine con el ovoscopio el embrin y

marque la cmara de aire.
2. Coloque el embrin en plano horizontal
y localice el saco vitelino (mancha
obscura y densa).
3. Introduzca una aguja del 22 larga
verticalmente a travs de la cmara de
aire y depositar 0.1 mL de colorante.
Regin donde se
desarrollar
el embrin
Saco
areo
D.
la cscara
vitelo Envoltura
vitelina
Figura.3.1 Partes del embrin de pollo

B.
inoculacin de Membrana
Corioalantoidea.

marcar la cmara de aire.
2. Divida imaginariamente al embrin en
tres partes, al final del primer tercio
PRCTICA NMERO 3 |
UNIDAD 3 - VIROLOGA
Inoculacin de la Cavidad
Alantoidea.

marcar la cmara de aire y marcar un
punto en la cima.
2. Aproximadamente 5 mm por abajo de
la cmara de aire localice una zona
libre de vasos y del lado opuesto al
embrin marque el punto de
inoculacin.
PRCTICA NMERO 3
3. Perfore los puntos marcados e inocule

0.1 mL del colorante con una aguja del
27 corta.
4. La inoculacin se puede realizar
tambin a travs de la cmara de aire
con una aguja del 22 larga.
E.
B.
Inoculacin de Membrana
C orioalantoidea.
Iluminar embrin
de pollo y
marcar cmara
Inoculacin en Cavidad
A m nitica.
1. Ilumine con el ovoscopio el embrin,

marcar la cmara de aire y marcar un
punto en la cima.
2. Marque el punto de inoculacin
exactamente donde se ve el embrin
(localice las manchas oculares).
3. Ilumine el embrin e inocule con la
aguja del 22,0.1 mL del colorante.
perforando por
la cmara de
aire.
NOTAS:
C.
Inoculacin en Saco V itelino.
1. Despus de cada inoculacin ilumine al
embrin y haga sus observaciones.
Iluminar embrin
2. Despus de cada inoculacin vace el
de pollo
embrin en una caja de Petri y haga
colocndolo en
sus observaciones.
plano horizontal
marcar cmara
de aire.
DIAGRAMA DE FLUJO
y
Inoculacin en l membrana corioalantoidea
A.
Estructura Normal:
/f
0v ) \ I
(U ^n n \
V rR m
((
Inoculacin amnitica
/"
^ / llI
-------v
Iluminar embrin
de pollo y cortar
cascaron en la
cmara de aire.
Depositar
embrin en caja
petri e identificar
estructuras.
PRCTICA NMERO 3 |
UNIDAD 3 - VIROLOGA
Inocular
colorante
perforando por
la cmara de
aire.
Saco vitelino T j l l
4
\V
//
'Inoculacin en el
_ m co vitelino
I I
// )
I. f
Inoculacin alentoidea
PRCTICA NMERO 3
D.
Inoculacin de la Cavidad
Alantoidea.
Iluminar embrin
de pollo y
marcar cmara
de aire y zona
libre de vasos.
CUESTIONARIO
Inoculacin en la membrana cofoaiantoldea
Inoculacin amnitca
Inoculacin alantoidea
Inocular
colorante
perforando los
puntos
marcados.
1. Qu otros tipos de cultivos se cuentan

para desarrollar virus?
2. Qu ventajas o desventajas tiene el
uso de un embrin de pollo?
3. Qu tipos de virus se pueden inocular
en cada una de las partes del embrin
de pollo?
4. Qu efectos causa la inoculacin de
un virus en un embrin de pollo?
5. Esquematizar y explicar los ciclos de
replicacin viral.
I
E.
REFERENCIAS
Inoculacin en Cavida A m nitica.

Iluminar embrin
de pollo, marcar
cmara de aire y
un punto donde
se encuentre el
embrin
(manchas
oculares).
Inoculacin en la membrana cwoalantoidea
Inoculacin alantoidea
Inocular
colorante.
PRCTICA NMERO 3 |
UNIDAD 3 - VIROLOGA
1 Stuart-Harris C, Shild G, Oxford J.

Influenza: the viruses and the disease.
2a London: Editorial Arnold London,
1985.
2. Kendal AP, Cate TR. Increases
sensitivity and reduced specificity of
hemagglutination inhibition tests with
ether
treated
influenza
b/
Singapore/222/79 J Clin Microbiol
1983; 18: 930-934.
3. Harmon MW, Rota PA, Walls HH,
Kendal AP. Antibody responses in
human to influenza type b host cell
derived variant following vaccination
with
standard
(eggs-derivaded)
vaccine or natural infection. J Clin
Microbiol 1988;26: 333-337.

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MANUAL DE PRACTICAS

UNIVERSIDAD NACIONAL AUTONOMA DE MEXICO

FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES ZARAGOZA

PABLO SALGADO AGUIRRE

Realizado con el apoyo del Proyecto

PABLO SALGADO AGUIRRE

Con la asesora de:

INSTRUCCIONES PARA EL USO DE ESTE LIBRO

Para AVANZAR RETROCEDER una pgina, coloqese en la orilla

Para ir a una pgina determinada posterior, coloqese en la orilla

4. Para ir a una pgina determinada anterior, coloqese en la orilla

Si se coloca el cursor en la esquina superior derecha avanza las

6 Si se coloca el cursor en las esquinas inferiores (derecha o izquierda)

Tambin se puede rnover las pginas con el cursor derecho e

Si desea otras opciones vea el rnen en la parte superior.

Unidad II. Micologa

Observacin de estructuras de hongos...................

Unidad III. Virologa

Si no conozco una cosa, la investigar.

Louis Pasteur (1822-1895) Qumico y microbilogo francs

PROTOZOARIOS Y HELMINTOS DE VIDA

son multinucleadas como las de

Los protozoarios tanto de vida libre

La clase Mastigosphora, presenta dos

Estructuras principales del trofozoito:

La clase Ciliosphora se reproduce por

La clase Sporozoa al igual que la clase

Su cuerpo est cubierto por una fina

Ejemplo de un parsito de esta clase:

Esta clase de helmintos posee ambos

La clase de los Tremtoda se

Nemtodos con sexos separados.

Fusiforme: con extremos romos,

Filiforme: muy delgados y largos

Intermedia: es una combinacin de

Presentan las siguientes estructuras;

Estructuras generales de protozoarios y

Un ejemplo de un parsito de este tipo

4. Qu parsito es agente causal del

1. Tay Z.J, Velasco C.O, Guterrez

5. Greenberg A. Standard methods

Las asociaciones que se presentan

b. Ectoparsito: parsito que vive en

Existen diversos tipos

c. Errtico: el parsito se encuentra

cambios en su ciclo biolgico y

scaris lumbricoides en nariz y boca.

c. Ciclodesarrollo; el parsito dentro

B.Transmisin biolgica; en este caso

Ciclodesarrollo. Ciclo de Wuchereria

E! ciclo de vida de los parsitos vara

b. Polixenos: parsitos que en su ciclo

a. Monoxeno: son aquellos parsitos

Dr. Je ia m*dgjt and

A=D ro ste Stege

c. Metaxeno: es aquel parsito en cuya

cual se le aplic previamente una

cual se le aplic previamente una

Colocar parte del

1. Ample los conceptos de parasitismo

son los que portan y la forma de

TECNICAS DE COLECTA Y TINCION DE

La parasitologa es la ciencia que

Se emplea principalmente en frotis