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LABORATORIO N2

Morfologa Bacteriana:

TINCIONES

Nombre Alumno (s): Ximena Andrea Pichulman


Pilcante.
Alberto Leopoldo Lagos
Gmez
Mara Anglica Nez Mancilla
Jos Enrique Espinoza Zapata
Nombre Profesor:

Introduccin

Ruth Ortega Rojas

El siguiente trabajo ha sido realizado con el fin de presentar un informe


sobre las diferentes tcnicas o mtodos de coloracin realizadas en el
laboratorio de microbiologa.
En su mayor parte los microorganismos son demasiado pequeos para
observarse a simple vista: protozoos, algas, hongos, bacterias y virus.
Estos microorganismos difieren en caractersticas tales como forma de
nutricin, estructura, tamao, composicin entre otros aspectos; es por ello
que se emplea el estudio microscpico el cual facilita notablemente la
observacin; Principalmente en las bacterias se facilita las observaciones
gracias a las tinciones ya que podemos observar sus estructuras celulares.
Las tinciones y colorantes se usan con frecuencia en biologa y en la
medicina de hoy en da, esto es para destacar estructuras en tejidos
biolgicos, para poder ver las diferencias de cada organismos depende de la
calidad del microscopio que se utilice.
En el laboratorio analizamos diferentes tipos de muestras y estos nos
sirve para comprender su forma, tamao y a que tipo corresponde segn la
tincin que realizamos.

Objetivos

1.-Objetivos

Generales

Realizar los pasos necesarios para poder realizar diferentes tipos de


tincin a diferentes tipos de muestras que nos facilitan en el laboratorio.
Tambin nos ayuda adquirir las habilidades y conocimientos para poder
realizar una tincin.

2.-Objetivos Especficos
Realizar las 3 tinciones que estamos enfocados las cual son las
siguientes:
Tincin Negativa
Tincin de Gram
Tincin de Esporas.
Una vez ya conocidos los 3 tipos de tincin que implementremos en el
laboratorio. Conoceremos las diferencias y caractersticas de cada
microorganismo segn la tincin que se utilice a travs de los pasos
estipulados.
En la prctica es donde uno toma conocimientos y clasificacin al cual
corresponde el M.O. a analizar (Por ejemplo en el caso de las Gram (+) y (-)).

Tinciones
Tincin Negativa

1.- Materiales

Microscopio
Portaobjeto
Cubreobjetos
Tinta China
Asa
Mechero
Escherichia Coli Fresco
Escherichia Coli Carne
Aceite de Dimensin

2.-Metodo

Tomar con el asa la muestra Escherichia Coli la Normal y Carne este


paso tiene que ser como mnimo 2 a 3 veces para poder asegurar
encontrar microorganismos en las muestras. Para asegurar que no
haya ninguna contaminacin en las muestras estos tienen que estar
cerca del mechero.
Luego que ya agregamos los M.O. al portaobjetos agregamos una gota
de tinta china.
Para poder eliminar el exceso de tinta china en nuestra muestra
pasamos levente por contacto toalla de papel, pero hay que tener
cuidado en no sacar los M.O.
Colocamos cuidadosamente el cubreobjetos, evitando que se formen
burbujas de aires.
Una vez con el cubreobjetos se coloca una gota de aceite de dimensin
para poder visualizar en el microscopio.
Colocamos las muestras en el microscopio (10X100) y analizamos.

3.-Resultados
Aqu utilizamos los lentes del microscopio en de 10x100 por lo tanto
estamos viendo la muestra a 1000 veces su tamao. En la siguiente imagen

podemos visualizar que el Escherichia Coli son prcticamente iguales las


muestras.

Escherichia Coli Fresco

Segn los pasos que realizamos en la tincin que fueron bien realizados
encontramos grandes de cantidades de Escherichia Coli en nuestro frotis Los
M.O. que analizamos en el microscopio estaban en fresco y podemos analizar
que tienen formas de bacilos.
Escherichia Coli con Producto

Igual que en la muestra anterior


podemos
mencionar
que
se
encuentran grandes cantidades de
Escherichia Coli y tienen forman de
bacilos. Una vez seco la tinta no
era posible visualizar los M.O.

Tincin de Gram
1.- Materiales
Microscopio

Portaobjeto
Cubreobjetos
Asa
Mechero
Aceite de Dimensin
Cristal Violeta
Lugol
Alcohol de Acetona
Agua Destilada
Safranina
Escherichia Coli
Bacillus Cereus

2.-Metodo

Tomar con el asa la muestra Escherichia Coli y Bacillus Cereus este


paso tiene que ser como mnimo 2 a 3 veces para poder asegurar
encontrar microorganismos en las muestras. Para asegurar que no
haya ninguna contaminacin en las muestras en donde obtenemos los
M.O. estos tienen que estar cerca del mechero.
Luego que ya agregamos los M.O. al portaobjetos la fijamos gracias al
mechero.
Luego que ya esta fija nuestro frotis agregamos el cristal violeta por un
minuto.
Cuando ya paso el minuto del cristal violeta se elimina el exceso pero
sin lavar la muestra aqu se agrega directamente el Lugol por un
minuto ms.
Luego que paso el minuto en que se agrego el Lugol se lava con alcohol
cetona, esto nos ayuda que los canales de que se encuentran en la
clula se deshidraten y queden los colorantes utilizados. El tiempo
utilizado para el alcohol cetona es de un minuto.
Luego que se limpio con el alcohol cetona se agrega la safranina por un
minuto.
Ya han pasado el minuto de la safranina hay que limpiarlo con agua
destilada.
Para poder eliminar el exceso de agua destilada que queda en nuestro
muestra se pasa por contacto toalla de papel, pero hay que tener
cuidado en no eliminar los M.O. que se encuentran en portaobjeto.

Una vez que tenemos nuestra fijacin lista colocamos el cubreobjetos y


en este agregamos una gota de aceite de dimensin para poder
visualizar en el microscopios
Colocamos las muestras en el microscopio (10X100) y analizamos.

3.-Resultados
Aqu utilizamos los lentes del microscopio en de 10x100 por lo tanto
estamos viendo la muestra a 1000 veces su tamao. Segn los colores
obtenidos en la muestra correspondiente a la Escherichia Coli pertenece a
Gram negativa ya que presenta un el color rosado.
En la muestra no se encuentran tantos microorganismos pero se
pueden diferenciar claramente a qu tipo de Gram corresponde.

Escherichia Coli

Bacillus Cereus

Para poder analizar este M.O. ocupamos los lentes del microscopio en
10 x100 o sea obtuvimos una imagen de 1000 veces su tamao.
En la muestra correspondiente al Bacillus Cereus pertenece a una Gram
Positiva ya que presente un color Morado.

Tincin de Esporas
1.- Materiales

Microscopio
Portaobjeto
Cubreobjetos
Asa
Mechero
Aceite de Dimensin
Bacillus Cereus
Staphylococcus Aureus
Verde Malaquita
Safranina
Pinzas de Madera
Papel

2.-Metodo

Tomar con el asa la muestra Bacillus Cereus y Staphylococcus Aureus


este paso tiene que ser como mnimo 2 a 3 veces para poder asegurar
encontrar microorganismos en las muestras. Para asegurar que no
haya ninguna contaminacin en las muestras en donde obtenemos los
M.O. estos tienen que estar cerca del mechero.
Luego que ya agregamos los M.O. al portaobjetos la fijamos gracias al
mechero.
Ya una vez que tenemos nuestro frotis tenemos que colocar el papel
sobre la muestra y encima de esta una gota de verde malaquita.
Una vez agregado el verde malaquita en el papel tenemos que
colocarlo en mechero hasta que la tincin se haya secado, pero hay
que tener cuidado en no quemar la muestra, y para mayor seguridad
hay que utilizar las pinzas de madera.
Ya cuando se seco el verde malaquita hay que repetir este proceso tres
veces ms, en total sern cuatro del mismo proceso.
Si ya realizamos los cuatro procesos a travs de la verde malaquita
tenemos que eliminar el papel con agua destilada, pero sin que este
tenga contacto con las manos ya que ese proceso se puede eliminar
una buena parte de esporas. Por lo cual hay que tener paciencia hasta
que salga completamente.
Ya una vez eliminado el papel que se encontraba en la muestra se
agrega la safranina por 2 minutos.
Cuando ya se el tiempo de elimina la safranina se enjugaba con agua
destilada y se secaba superficialmente con toalla de papel teniendo
cuidado con la muestra.
Luego colocamos el cubreobjetos y una gota de aceite de dimensin.
Colocamos las muestras en el microscopio (10X100) y analizamos.

3.-Resultados

Aqu utilizamos los lentes del microscopio en de 10x100 por lo tanto


estamos viendo la muestra a 1000 veces su tamao. En la muestra de
Bacillus Cereus y Staphylococcus Aureus no pudimos encontrar esporas en
las muestras ya que aunque realizamos los pasos adecuados en la tincin.

Staphylococcus Aureus

Bacillus Cereus: Aunque no obtuvimos los resultados esperados podemos


mencionar que la espora de tiene una forma de ovoide, central y no es
deformante. Esta esporas se da comn mente en los alimentos, para poder
tener seguridad que se elimino esta espora tiene que estar a 100C por unos
5 a 10 minutos.

Aunque no pudimos tomar una imagen lo complementamos con


imgenes que estn disponibles a travs de la Internet.

Discusin
Una tincin de gram es una tcnica de tincin diferencial, utilizada
principalmente en laboratorio de microbiologa, aunque puede ser trasladada
a otros campos, nos permite clasificar las bacterias gram positivas y gram
negativas, segn el tipo de coloracin que adquieran.

Tras realizar este proceso nuestros microorganismos o bacterias se


tieron de dos formas: si han adquirido una coloracin violeta se trata de
microorganismos gram +, mientras que si adquieren una coloracin rojoroscea se tratara de microorganismos gram -.
Adems de acuerdo a lo analizado en nuestras muestras y comparado
con material de la intranet y de libros, nuestros resultados se asemejan
muchsimo a los de la literatura y tambin concluimos que todos los pasos
indicados en nuestras guas de laboratorio concuerdan con nuestros
resultados.

Conclusin
Podemos mencionar que a pesar que las bacterias es una estructura
muy pequea que se encuentra en nuestro mundo y que comnmente vive
con nosotros, podemos saber la estructura interna como externa de esta a
travs de las tinciones que fueron aplicadas en el laboratorio.

No podemos olvidar que unas de las tinciones no tiene mayor dificultad


de manejar, la cual corresponde a la tincin negativa, ya que aqu utilizamos
solo un compuesto (tinta china) comparada con los dems tinciones, pero
nuestras expectativas quedaron satisfechas al poder observar al Escherichia
Coli en sus formas externas.
Las tincin de Gram es un trabajo muy completo para poder visualizar
a una clula, por lo cual si se llegase a faltarnos un paso en este proceso o lo
realizamos inadecuadamente, los resultados finales no darn visualmente el
objetivo que deseamos analizar. Por lo que tuvimos que seguir las guas de
laboratorio en cada uno de sus pasos.
La tincin de esporas, es un anlisis en el que tuvimos que seguir paso
a paso la gua de laboratorio adems de tener cuidado en todo momento ya
que si nos pasbamos en el tiempo en el mechero, nuestra muestra se
hubiese quemado y todo el proceso quedar inservible.
A pesar de todas las tinciones aprendimos y averiguamos nuevos
mtodos de tincin.

Bibliografa
Para poder tener apoyo sobre la informacin de tinciones encontramos
las siguientes pginas:
http://www.monografias.com/trabajos15/tinciones/tinciones.shtml#BACI
L
http://es.wikipedia.org/wiki/Tinci%C3%B3n

http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioTinciones.htm
http://www.google.cl/search?
hl=es&biw=1280&bih=695&gbv=2&tbm=isch
&sa=1&q=tincion+de+esporas+de+bacillus+cereus&oq=tincion+de+espor
as+de+bacillus+cereus&aq=f&aqi=&aql=&gs_sm=e&gs_upl=10914l12427l
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