BACTERIOFLORA GRAM NEGATIVA AEROBIA DE TILAPIAS SILVESTRES Y

CULTIVADAS EN LA REGIN CENTRAL DE VENEZUELA

DURANTE EL PERODO 1999-2000
Julia D. lvarez R.* y Claudia P. Agurto O.*
*Investigadoras. INIA
Centro Nacional de Investigaciones Agropecuarias
Instituto de Investigaciones Veterinarias
Apdo. 70. Maracay 2101. Venezuela
Recibido: agosto 28, 2000

RESUMEN
Se identificaron miembros de la bacterioflora Gram negativa aerobia del intestino de
tilapias sanas, Oreochromis mossambicus, provenientes del Lago de Valencia y de
una granja comercial (tetrahbrido de O. mossambicus x O. urolepis
hornorum x O.niloticus x O. aureus), mediante el aislamiento primario en agar
tripticasa soya, y se descart la presencia de Salmonella spp. con el uso de medios
selectivos. La bacterioflora estuvo constituida por bacilos Gram negativos (98%), de
los cuales 59-66% fermentadores, 25-26% no sacarolticos y 16-8% oxidadores, en
animales en ambiente natural y cultivados, respectivamente. Predominaron los
gnerosAeromonas, Plesiomonas y miembros de la familia de las
Enterobacteriaceae, con menores proporciones
de Pseudomonas y Vibrio, identificndose las especies:Aeromonas spp., A.
caviae, A. hydrophila anaerogenes, A. hydrophila hydrophila, A. schubertii,
A. sobria, A. veronii, Plesiomonas spp. y Plesiomonas shigelloides.
Pseudomonas fluorescens slo fue aislada de animales cultivados yVibrio
cholerae nicamente del Lago de Valencia. Con el uso de medios selectivos no se
hallaron miembros del gnero Salmonella, pero s se identific una cepa deKlebsiella
pneumoniae pneumoniae. Ambientes dulceacucolas como los estudiados en este
trabajo, constituyen un reservorio de bacterias potencialmente patgenas tanto para
poiquilotermos como para homeotermos, destacndose dentro de este ltimo grupo el
hombre.
Palabras Clave: Oreochromis spp.; bacterioflora; Aeromonas
hydrophila;Pseudomonas fluorescens; Plesiomonas shigelloides;
Vibrio cholerae; Klebsiella pneumoniae; salud pblica.
INTRODUCCIN
Las tilapias se encuentran entre las especies cticas de mayor importancia en la
acuicultura, debido a que tiene una serie de caractersticas deseables que la hacen
popular entre los acuicultores, ya que su cultivo es percibido como una gran empresa
por aquellos que dictan las polticas agroalimentarias del pas y por los inversionistas
del sector (Alceste y Jory, 2000). Desde el punto de vista gubernamental, esta
actividad econmica es significativa para la produccin de protenas, la generacin de

empleos y la produccin de divisas.

Las tilapias son producidas en muchos pases en vas de desarrollo con climas
tropicales y subtropicales, y responde favorablemente a la aplicacin de nuevas
tecnologas, tales como el mejoramiento gentico y la hibridacin (Alceste y Jory,
2000). Igual que en otros cultivos acucolas, el de tilapias se ve afectado por las
enfermedades (Conroy y Armas, 1997), destacndose entre stas las de etiologa
bacteriana, que son responsables de elevadas mortalidades en peces silvestres y
cultivados (Paperna, 1996).
El papel de estos microorganismos puede variar desde el de un patgeno primario
hasta el de un invasor oportunista en un hospedero moribundo, por causa de otra
enfermedad (Richards y Roberts, 1978). Muchos de estos organismos patgenos son
componentes usuales de la flora bacteriana de ambientes acuticos, por lo cual es
necesario contar con informacin relativa al tipo y a la diversidad especifica de la
bacterioflora de peces sanos y de su entorno, pues muchas de estas bacterias
constituyen patgenos potenciales ante una baja de las defensas orgnicas de los
peces.
Para el control de enfermedades es necesario conocer no slo la virulencia del agente
etiolgico, sino tambin su modo de transmisin y la epidemiologa de la enfermedad
(Colwell, 1996). La descarga de desechos al ambiente acutico puede tener efectos
nocivos para la salud pblica, citndose como buen ejemplo de ello las infecciones que
afectan a personas que deben trabajar en aguas contaminadas por microorganismos
potencialmente patgenos para el ser humano, que con frecuencia son adquiridas en el
curso de traumatismos ocurridos en ambientes acuticos contaminados, por el
consumo de agua proveniente de fuentes de abastecimiento contaminadas (Seidler et
al., 1980), y por el contacto o el consumo de pescado de agua dulce contaminada (Van
Damme y Vandepitte, 1980).
Los objetivos de este trabajo fueron: identificar los bacilos Gram negativas presentes
en el intestino de tilapias silvestres, Orechromis mossambicus y cultivadas
(tetrahbrido de O. mossambicus x O. urolepis hormonum x O. niloticus x O.
aureus),as como en el agua y el sedimento de su entorno, y detectar la presencia de
miembros de Salmonella spp. utilizando medios selectivos y diferenciales.
MATERIALES Y MTODOS
Origen de las tilapias. Durante el perodo 1999-2000 se procesaron 47 tilapias cultivadas en una
granja comercial de la regin central del pas y 37 tilapias silvestres (Figura 1), provenientes de dos zonas del
Lago de Valencia (Figura 2).
Los peces fueron capturados mediante el uso de una atarraya tanto en la granja como
en el lago, en este 1timo la pesca se realizo a una profundidad que permitiera el uso
de una atarraya. Los animales vivos fueron colocados en bolsas plsticas dobles con
adicin de oxgeno, selladas con bandas elsticas dobles. Las bolsas fueron
transportadas en cavas de anime o de plstico. La temperatura del agua y del aire se
mantuvo baja (20 C) usando cubos de hielo dentro de las bolsas y de las cavas.
Despus de su llegada al laboratorio los ejemplares fueron puestos en acuarios con
abundante aireacin y alimentados durante dos das con un concentrado comercial,

despus de lo cual fueron sacrificados para la toma de muestras. Simultneamente con

cada captura de juveniles, se tomaron muestras de agua y de sedimentos del entorno,
que despus de colocadas en envases estriles se refrigeraron hasta su procesamiento
en el laboratorio, pocas horas despus de ser colectadas.
Medicin de algunos factores fsico-qumicos. En el momento de la captura de los
ejemplares y de la toma del agua y sedimentos del entorno de stos, se midi la
temperatura con un termmetro de mercurio, el pH con una cinta indicadora y el
oxgeno disuelto con un medidor Cole-Palmer 5946-75.
Estudio anamnsico y exmenes externo e interno. A cada ejemplar se le llen
su formulario anamnsico, siendo pesados y medidos. La condicin general de los
animales, incluyendo su comportamiento al alimentarse y al desplazarse, y la
observacin de la existencia de cualquier anormalidad aparente, se efectu durante
dos das. Previa desinfeccin del rea con alcohol, fueron realizadas las necropsias
siguiendo la tcnica indicada por Amlacher (1970). Una vez expuesto el intestino se
procedi a tomar muestras de este rgano para el estudio bacteriolgico.

FIGURA 1. Tilapias: a. silvestre (Oreochromis

mossambicus) del Lago de Valencia y b. cultivada
(tetrahibrido de O. mossambicus x O. urolepis
hornorum x O. niloticus x O.

aureus).

Estudio bacteriolgico. Identificacin de miembros de la bacterioflora aerobia

intestinal. Los ejemplares se procesaron siguiendo la metodologa indicada por Austin y

Austin (1989), tomando muestras aspticas del intestino de las tilapias y del agua y
sedimentos del entorno. Estas muestras fueron diluidas en solucin salina estril (SSE)
hasta la concentracin de 107, y luego, a partir de cada dilucin, se sembr por
duplicado 0,l ml en agar tripticasa soya (ATS, DIFCO), utilizando para ello una esptula
de vidrio doblada esterilizada. Adicionalmente se sembr material de los 3 tipos de
muestras en agar Pseudomonas F (APF). Las placas fueron incubadas a 30 C durante
2 a 3 das antes del conteo de las colonias. De cada placa de ATS se tom material de
las diferentes colonias, distinguidas stas por su morfologa, color, consistencia o por
cualquier otra caracterstica que la diferenciara de las dems, y de cada placa de APF
se extrajo una muestra de las colonias fluorescentes, si las haba.
Un representante de cada colonia fue repicado en ATS o en APF, dependiendo de que
agar fueron inicialmente aislados. Estos aislados frescos fueron usados para la
identificacin taxonmica, mediante el estudio de sus caractersticas fenotpicas,
basado fundamentalmente en las pruebas indicadas en Austin y Lee (1992), Austin y
Austin (1993), Holt et al. (1984; 1994), Hugh (1974) y Koneman et al. (1988).
Asimismo se escogieron representantes de cada especie aislada e identificada por sus
caractersticas fenotpicas especficas, para someterlas a identificacin por el Sistema
de Identificacin API 20E y 20NE (bioMrieux, Francia).
Pruebas para el deteccin de Salmonella spp. Con base en la Norma Venezolana
COVENIN 1291-88 y en las pruebas morfolgicas, bioqumicas y culturales indicadas
por Holt et al. (1984) y Koneman et al. (1988), se procedi al aislamiento primario
e identificacin con la utilizacin de medios diferenciales y altamente selectivos, para
la deteccin de probables colonias. Las tilapias se procesaron en grupos de 3 ("pool")
para la deteccin de Salmonella spp., analizando las siguientes muestras: a) mezclas
de hgado, bazo y rin, y b) intestinos. Separadamente tambin se estudiaron las
muestras de agua y de sedimentos obtenidas en cada muestreo.
En lneas generales, el procedimiento de aislamiento primario consisti en: a) fase de
pre-enriquecimiento, slo en muestras provenientes de la mezcla de hgado, bazo y
rin, y del agua y sedimentos. En muestras de intestino se pas directamente a la
segunda fase; b) fase de enriquecimiento, se sembr directamente del macerado o del
caldo de enriquecimiento (dependiendo del caso) en caldo tetrationato-verde brillante,
caldo selenita y caldo Rappaport-Vassilladis, y se incub por 24 h a 42 C y a 37 C,
respectivamente; c) fase de aislamiento, se transfiri al agar Salmonella-Shigella y al
agar XLT (con tergitol), una asada de cada uno de los 3 caldos de cultivo anteriores,
incubndose estos medios a 35-37 C por 24 horas, y d) fase de identificacin, las
colonias seleccionadas fueron sembradas en agar Kliger y agar urea, escogiendo
aquellas que resultaron de reaccin alcalina a la lactosa, acidificaron la glucosa y no
produjeron ureasa. Si la prueba a la ureasa result negativa, se procedi a realizar las
pruebas bioqumicas de las enterobacterias indicadas por Holt et al. (1984).
RESULTADOS Y DISCUS1N
Las tilapias se observaron aparentemente sanas a su llegada al laboratorio. Dos de los
animales silvestres presentaron hepatomegalia (Figura 3), aunque ellas no mostraron
dentro de su grupo otra diferencia patolgica, ni tampoco en el nmero de unidades
formadoras de colonias por ml (UFC/ml) ni en la diversidad bacteriana especfica.

Figura 3. Hepatomegalia en una tilapia silvestre procedente del

Lago de Valencia.

Es importante destacar que no se profundiz en el estudio de la hepatomegalia

observada. Los peces y tallas promedio de los ejemplares procesados se presentan en
el Cuadro 1.
CUADRO 1. Los caracteres fsico-qumicos de las muestras de agua, del Lago de Valencia y de la
granja comercial, fueron respectivamente: temperatura entre 25-28 C en ambas localidades;
pH 7,5-8,5 y 8,0-8,5, y oxgeno disuelto 5,0 mg/l y 4,0-4,5 mg/I.
Promedio total de
los muestreos

Muestras

longitud
Estandar Total
(cm)
(cm)

Valor
Mximo

longitud

longitud

Estndar
Peso Estndar Total
Peso (g)
Total (cm) Peso
(g)
(cm)
(cm)
(cm)

Tilapias Cultivadas 15,0

17,8

113,0

Tilapias
Silvestres

30,7

210,5 20,9

25,5

Valor
mnimo

12,0

14,8
25,6

46,3
274,5

18,1
26,6

21,7
39,0

(g)

210,5
679

Aislamiento bacteriano en agar TSA y APF. Los aislamientos bacterianos realizados

tanto en las tilapias silvestres como en las cultivadas se muestran en el Cuadro 2. En
esta investigacin la bacterioflora aerobia, de los ejemplares sanos y de su medio
ambiente, estuvo constituida por 98% de bacilos Gram negativas y 2% por Gram
positivas. El 66 y 59% de los bacilos Gram negativas estuvo integrado por
fermentadores, el 26 y 25% por no sacarolticos y el 8 y 16% por oxidadores, para los
ambientes de cultivo y silvestre, respectivamente (Cuadro 3). Predominaron los bacilos
Gram negativas fermentadores pertenecientes a los gneros Aeromonas y
Plesiomonas, adems de miembros de la Familia Enterobacteriaceae, con menores
proporciones de Pseudomonas, Vibrio y de un grupo que no fue identificado a nivel de
gnero. Como lo indica Sakata (1989), para el aislamiento de poblaciones totales de
aerobios y anaerobios es apropiado usar un medio no selectivo como el ATS, adems
seala que la microflora de los animales acuticos est constituida por relativamente
pocas especies bacterianas, y esta influida fuertemente por el agua circundante,
agregando que los gneros predominantes en el tracto gastrointestinal de los animales
dulceacucolas son representantes de las Enterobacteriaceae, Aeromonas spp., A.
hydrophila y Plesiomonas shigelloides.

CUADRO 2. Identificacin a nivel de especie de los bacilos

Gram negativas fermentadores aislados en el medio ATS a
partir de tilapias silvestres y de cultivo durante el perodo
1999-2000.

Tambin se determin que 41 y 34% de la bacterioflora aislada estuvo constituida por

bacilos Gram negativas no sacarolticos (trmino definido por Koneman et al., 1988,
como aquellos que no degradan la glucosa), o que oxidaron este azcar en las
muestras de animales silvestres y cultivados, respectivamente. Dentro de estos 2
grupos (no sacarolticos y oxidadores) estn incluidos los gneros Alcaligenes,
Acinetobacter, Achromobacter, Moraxella y Pseudomonas (Cuadro 3).

Cuadro 4. Resultados de la clasificacin realizada a travs del sistema de

identificacin API-20E y API-20NE.

Adems de los tres gneros mencionados como predominantes en ambientes

dulceacucolas (Enterobacteriaceae, Aeromonas y Plesiomonas), han sido aislados
otros que se considera provienen del agua y de las dietas, que incluyen Bacillus,
Flavobacterium, Micrococcus,Moraxella, Acinetobacter y Pseudomonas (Sakata, 1989).
Estos dos ltimos gneros han sido identificados en algunas ocasiones como
componentes predominantes de la microflora de animales acuticos, aunque en estos
casos se argumenta que esto puede ser debido a que los peces han sido mantenidos
en condiciones desfavorables, tales como situaciones de hambruna, bajas
temperaturas o algn estrs fisiolgico, previas a la toma de muestras (Sakata, 1989).
En ambos ambientes se identificaron las especies: Aeromonas spp., A. caviae, A.
hydrophila anaerogenes, A. hydrophila hydrophila, A.,schubertii, A. sobria, A. veronii,
Plesiomionas spp., Plesiomionas shigelloides, Plesiomionas fluorescens (aislada slo
del ambiente de cultivo) y Vibrio cholerae (slo del Lago de Valencia). Asimismo se
aisl un grupo que no fue identificado, que incluy bacilos Gram negativos
fermentadores y citocromo-oxidasa negativos, que fueron incluidos en la Familia
Enterobacteriaceae. La identificacin especfica, basada en las caractersticas
fenotpicas estudiadas, fue corroborada en todas las especies excepto en las cepas

deAeromonas sobria, utilizando los Sistemas de Identificacin API 20E y 20NE.

En este estudio, un nmero elevado de aislados no pudo ser identificado a nivel de
especie dentro del gnero Aeromonas, debido quizs a que estos aislados
corresponden a especies nuevas o a representantes atpicos de especies ya bien
identificadas. Este aspecto es significativa para la salud del hombre, tal como ha sido
demostrado por Seidler et al. (1980) quienes demostraron que la descarga de
desechos en ambientes acuticos puede tener efectos nocivos para la salud humana,
sobre todo en las personas que realizan deportes acuticos y en los buzos
profesionales que deben trabajar en aguas contaminadas por microorganismos
potencialmente patgenos para el hombre. En aos recientes se ha observado un
incremento del nmero de reportes relacionados con infecciones en humanos,
asociadas con diversas Aeromonas sp., que incluyen endocarditis, gastroenteritis,
meningitis, neumona, septicemia, heridas infectadas, etc., en las cuales una fuente
importante de Aeromonas patgenas puede ser el agua de bebida, contenga o no cloro
(Handfield et al., 1996).
Dentro del gnero Aeromonas, la especie A. hydrophila constituy la ms abundante
pero en juveniles silvestres y cultivados. Esta especie, perteneciente al grupo de
lasAeromonas mviles, ha sido bien estudiada como causante de enfermedades en los
peces, usualmente como invasora oportunista o secundaria, ms que como un
patgeno primario (Austin y Austin, 1993). Es interesante mencionar que se aisl una
cepa de Aeromonas hydrophila anaerogenes de un juvenil cultivado, la cual fue
identificada de acuerdo al esquema de Austin y Lee (1992). En el presente estudio se
aislaron dos de estas especies, A. hydrophila y A. veronii.
En un trabajo realizado por Maki et al. (1998), se efectuaron pruebas para determinar
la patogenicidad de aislados de Aeromonas, obtenidos de ejemplares muertos del
bivalvo "zebra mussel" (Dreissena polymorpha), molusco que esta ampliando su rango
de invasin en los Grandes Lagos de EE.UU. de Norte Amrica. Adems de demostrarse
que cepas de A. veronii, A. media y A. hydrophila resultaron patgenas para este
bivalvo, los datos obtenidos indican que este molusco es un importante reservorio para
estas bacterias en ambientes dulceacucolas.
Dos cepas de la especie Vibrio cholerae fueron aisladas de tilapias silvestres. La
identificacin de las cepas de V. cholerae fue confirmada por la seccin de Aislamiento
e Identificacin Bacteriana del Departamento de Bacteriologa, del Instituto Nacional de
Higiene "Domingo Alberto Rangel" del Ministerio de Salud y Desarrollo Social, las
cuales resultaron auto aglutinables. A pesar del bajo nmero de aislados en ambiente
silvestre, stos no dejan de ser significativos, considerando la importancia de
V.cholerae para la salud pblica (Colwell, 1996).
Austin y Austin (op cit.) indican que es probable que la infeccin por V. cholerae tenga
su origen en el agua, ya que esta especie es un habitante comn en medios acuticos
con temperaturas de 26 C o mayores (Lee et al., 1982).
En todos los casos, el APF se us para la deteccin rpida de Pseudomonas
fluorescens, aunque estas cepas fue recuperada slo del ATS, que al ser sembrada en
el medio OF de Hugh y Leifson y determinarse la naturaleza oxidadora de la misma,
fue sembrada luego en APF comprobndose su fluorescencia. Por experiencia previa en
el laboratorio se ha observado que algunas cepas de Pseudomonas fluorescens, luego

de muchos subcultivos y/o de ser recuperadas de su medio de conservacin, despus

de un perodo prolongado, no manifiestan fluorescencia, observndose slo como
colonias color crema. Sin embargo, al hacerse un segundo subcultivo en agar
Pseudomonas F, este pigmento fluorescente se manifiesta nuevamente.
Pseudomonas fluorescens fue aislada del sedimento del lago ms no de ejemplares
silvestres, a pesar de que de estos ltimos, fueron aislados bacilos gram negativos
oxidadores (a las 24 horas), mviles, citocromo-oxidasa positivas, que de acuerdo con
algunos autores podran ser ubicadas en el gnero Pseudomonas (Holt et
al.,1984;Koneman et al.,1988).Lascepasde Pseudomonas fluorescens se caracterizaron
por ser bacilos Gram-negativos mviles y oxidadores de la glucosa; productores de
citocromo-oxidasa, catalasa, arginina dihidrolasa y de un pigmento amarillo-verdoso
fluorescente (fluorescena); fuertes degradadores de la gelatina, con una reaccin de
Voges Proskauer negativa; no produjeron ureasa, sulfuro de hidrgeno, galactosidasa, ni hidrolizaron al almidn; no utilizaron el citrato y reaccionaron en
forma variable en cuanto a la oxidacin de la maltosa y la xilosa.
Estos resultados demuestran que cepas de Pseudomonas fluorescens forman parte de
la bacterioflora normal de tilapias bajo cultivo en Venezuela, siendo tambin
identificadas en forma pura y abundante en la sangre de ejemplares con amplias zonas
de hiperemia. Tambin se sabe que los peces son propensos a contraer infecciones
sistmicas producidas por bacterias Gram-negativas patgenas facultativas, debido
fundamentalmente a la baja calidad del agua del medio y al hacinamiento al que son
sometidos los animales con el fin de obtener un mayor rendimiento (Austin y Austin,
1993; Roberts, 1989). Estas condiciones de alta densidad poblacional y elevada carga
orgnica del agua, estn presentes en granjas de cultivo de tilapias en el pas.
En Venezuela no existen estudios que reporten la presencia de Pseudomonas
fluorescens en tilapias silvestres o cultivadas, y slo se puede hacer mencin del
trabajo realizado por Conroy et al. (1985: citado por Conroy, 1998) en el Lago de
Valencia, en el cual se informa la presencia de Pseudonomas sp., aisladas de
ejemplares silvestres de Oreochromis mossambicus, los cuales presentaron exoftalma
y lesiones drmicas. En esta investigacin todas las cepas de Pseudomonas
fluorescensaisladas de las tilapias cultivadas, resultaron fuertemente proteolticas y
rpidas degradadoras de carbohidratos, lo que sugiere una posible patogenicidad.
En este trabajo, la especie Plesiomonas shigelloides ocup el segundo lugar en cuanto
al nmero de aislados dentro del gnero Plesiomonas, siendo encontrada en mayor
cantidad en el Lago de Valencia que en la granja comercial, a pesar de que se proces
un mayor nmero de tilapias cultivadas. El gnero Plesiomonas est ubicado en la
familia Vibrionaceae, siendo Plesiomonas shigelloides la nica especie dentro de este
gnero (Holt et al., 1984). Sin embargo, estudios filogenticos realizados indican que
esta especie est relacionada con la familia Enterobacteriaceae (Ruimy et al., 1994), y
que realmente debe pertenecer al gnero Proteus como Proteus shigelloides(MacDonell
y Colwell, 1985).
Plesiomonas shigelloides (Figura 4) es comnmente hallada en aguas dulces
superficiales, en el suelo y en peces y aves (Arai et al., 1980: citado por Hernndez y
Rodrguez, 1997), e infecta con frecuencia a animales de sangre fra como ranas,
ofidios, tortugas, lagartijas y peces (Koneman et al., 1988). Esta especie bacteriana ha
sido implicada en brotes de gastroenteritis en humanos, particularmente en pases

tropicales y subtropicales, as como en infecciones extra intestinales, cuando el agua

utilizada en el riego de cultivos vegetales acta como va de contagio (Claesson et
al.,1984; Koneman et al., 1988; Hernndez y Rodrguez, 1997). Las cepas
de Plesiomonas shigelloides reportadas en este estudio provienen de tilapias sanas, por
lo cual es conveniente determinar su patogenicidad potencial en peces mediante la
realizacin de las pruebas respectivas.

FIGURA 4. Se observa la morfologa de la colonia de

Plesiomonas shigelloides, colonia crema con borde
irregular en un agar tripticasa soya suplementado
con 4% de agar.

Mendoza y Hernndez (1999) realizaron una investigacin para conocer la incidencia

dePlesiomonas shigelloides en tetrahbridos de Oreochromis sp. cultivados en una
laguna artificial de la zona central de Venezuela. Para el aislamiento de esta especie
bacteriana se utilizaron los medios selectivos, agar Plesiomonas y agar Inositol Verde
Brillante Sales Biliares. Estas autoras encontraron una alta incidencia (73%)
dePlesiomonas shigelloides, siendo mayor en el tracto intestinal (60%), luego en la piel
(36,67%) y por ltimo en las branquias (26,67%).
En este estudio, aunque en porcentajes menores, se obtuvo Plesiomonas
shigelloidestanto del intestino de las tilapias silvestres y cultivadas como del sedimento
del Lago de Valencia. Esta menor cantidad de aislados obtenidos, quizs fue debido a
que en el trabajo de Mendoza y Hernndez se utilizaron medios selectivos y
diferenciales para el aislamiento bacteriano primario, los cuales aumentaron la
posibilidad de aislar esta especie.
Descarte de Salmonella spp. Finalizadas las pruebas bsicas para la deteccin
deSalmonella spp., se observ que ninguno de los aislados seleccionadas (colonias de
color negro o claras con el centro negro) de los medios de aislamiento primario, fue
finalmente confirmada como miembro de este gnero, a pesar de que los medios de
cultivo fueron apropiados para el desarrollo de Salmonella spp. Sin embargo, se debe
indicar que de los 16 bacilos Gram negativos, fermentadores y citocromo-oxidasa
negativos aislados con esta metodologa, slo se identific la especie Klebsiella
pneumoniae pneumoniae. Igual que con las especies bacterianas aisladas de los
medios ATS y APF, la clasificaci6n de K. pneumoniae pneumoniae fue confirmada con
el Sistema de Identificacin API 20E (Cuadro 4) y por el INH.
El gnero Klebsiella esta ampliamente distribuido en la naturaleza y en el tracto

gastrointestinal de humanos y de animales (Koneman et al., 1988). Klebsiella

pneumoniae puede ser frecuentemente aislada de especmenes clnicos, y causa una
forma clsica de neumona primaria, pudiendo ocasionar tambin una variedad de
infecciones extrapulmonares (Koneman et al., 1988).
Daskalov et al. (1998) aislaron miembros de la especie Klebsiella pneumoniae como un
cultivo virtualmente puro, de muestras tomadas de las colas y aletas en
descomposicin de 12 truchas arcoiris que, aparte de esta sintomatologa, estaban
aparentemente sanas, las cuales provinieron de una granja pisccola dulceacucola en
Escocia. Estos autores llevaron a cabo en el el laboratorio experiencias de infectividad
que confirmaron: a) la habilidad de este organismo para ocasionar la podredumbre de
las aletas, previa abrasin de stas, y b) la capacidad de producir mortalidad de las
truchas, luego de la administracin por la va intramuscular e intraperitoneal.
Sivakami et al. (1996) realizaron un estudio para identificar la poblacin bacteriana
(bacterioflora) y los patgenos presentes en el agua de las lagunas y en algunos
tejidos de carpas bajo cultivo. La bacterioflora intestinal de los peces recin capturados
de las lagunas estuvo constituida por: Escherichia coli, Enterobacter cloacae, E.
aerogenes, Proteus rettgeri, P. mirabilis, Salmonella sp., Pseudomonas aeruginosa,
Klebsiella sp. y por un grupo no identificado.
Mendoza y Hernndez (1999) encontraron una alta incidencia de Escherichia coli en
tejidos de tilapias de una laguna de cultivo en la regin central de Venezuela, mientras
que en este estudio la mayora de los bacilos Gram negativos fermentadores y
citocromo-oxidasa negativos aislados, no pudieron ser identificados a nivel de gnero,
por lo que se ubicaron en la Familia Enterobacteriaceae.
CONCLUSIONES

Los resultados de esta investigacin permiten concluir que el Lago de Valencia y

la granja de cultivo comercial de tilapia son reservorio de bacterias
potencialmente patgenas que pueden afectar tanto a animales poiquilotermos
como homeotermos, destacndose dentro de este ltimo grupo el hombre. Este
hecho tiene una doble importancia: a) porque la pesca furtiva de tilapia que se
realiza a diario en el Lago de Valencia expone a contraer diversas
enfermedades, especialmente las gastrointestinales, a los pobladores de sus
regiones costeras, y a los comensales de los restaurantes de la regin central
del pas donde el producto es servido, y b) porque los animales de cultivo, a
pesar de estar en condiciones de mayor control sanitario, tambin son
portadores de bacterias patgenas al pez y al hombre.
Es urgente la realizacin de estudios para determinar la ecologa: estacionalidad
y ubicacin preferencial, y la prevalencia de las bacterias aisladas, as como la
enterotoxigenicidad de las bacterias de importancia en salud pblica aisladas en
esta investigacin.

AGRADECIMIENTOS
Este estudio fue financiado con fondos de los Proyectos 02-278-04005 FONAIAPPRODETEC-Ministerio de Ciencia y Tecnologa (MCT), y del Proyecto FUNDACITE

Aragua 1998-FCT-01-05-03-3-CONICIT-MCT. Los autores agradecen al Instituto

Nacional de Higiene por la corroboracin de la Identificacin de las cepas de Vibrio
cholerae y Klebsiella pneumoniae.
SUMMARY
Members of the Gram negative intestinal bacterioflora of healthy tilapias from the Lake
Valencia (Oreochromis mossanbicus) and from a commercial farm (a tetrahybrid of O.
mossanbicus x O. urolepis hornorum x O. niloticus x O. aureus) were identified using
tripticase soy agar as a primary isolation medium and discarding the presence
ofSalmonella spp. by the use of highly selective media. Ninety-eigth per cent of
bacterioflora was formed by Gram negative rods, of which between 59 and 66% were
fermentative, 25 and 26% were non glucose users and 16 and 8% oxidized this sugar,
respectively for animals in natural and cultivated environments. Predominating
groupswere Aeromonas, Plesiomonas and members of the Enterobacteriaceae Family:
lesser amounts and Vibrio were found. Species identified were: Aeromonas spp., A.
caviae, A. hydrophila anaerogenes, A. hydrophila hydrophila, A. schubertii, A. sobria,
A. veronii, Plesiomonas spp. and Plesiomonas shigelloides. PSeudomonas
fluorescens was only isolated from cultivated conditions and Vibrio cholerae only from
Lake Valencia. The use of selective media avoided the presence of members
of Salmonella genus, but a strain of Klebsiella pneumoniae pneumoniae was identified.
Freshwater ecosystems as the ones studied in this research constitute a reservoir for
potentially pathogenic bacteria for poikilotherms and homeotherms, where human
beings are included.
Key words: Tilapia; bacteriloflora; Aeromonas; Pseudomonas fluorescens;
Plesiomonas shigelloides; Vibrio cholerae; Klebsiella pneumoniae; public health.
BIBLIOGRAFA
ALCESTE, C. and D. E. JORY. 2000. Best tilapia strains. Aquaculture Magazine.
March/April 2000. pp. 80-84.
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