Guía para Validación de Métodos Analíticos-CNQFB 2002

otEGlb'NAG"tiiAroV
QUIMICOS FARMACEUTICOS DIOLOGOS

MEXlCO, A.C.
Con Registro ante la DGP

F-032
IjL
75't'W2S.....
as
1m
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- ....--._----~",..-_'_---
FE DE ERRATAS
Gua de validacin de mtodos analticos
1a. Edicin Mayo de 2002
1.- Para informar que en la pgina 37 despus del primer prrafo falto
incluir la siguiente ecuacin a la que se hace referencia
Le __
10xSy/x
bl
2.- El orden de las pginas 98 y 100 estn invertidas, la pgina 98 debe
ser la 100 Y la pgina 100 debe ser la pgina 98.
e o L EG ION A e ION A L
D E Q UIM Ieo
Mtodos
G U lA
DE
FA R M A
e E u TIC o s
B I o L o G o S. A.
e.
Analticos
V ALIDACION
COMISION DE VALIDACION
DE MElODOS ANALITICOS
Ma. Araceli Garca

Evelyn Sobern
Myriam Corts
Ramn Rodrguez
, Jos Luis Herrera
Alej an dro Alcntara
lAMBIEN COLABORARON:
Amparo Chrvel
Rosalinda Mota
Alfredo Garzn
GUA
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS
PRDLDEiD
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e.
~;
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LA VALIDACiN DE MTODOS ANALTICOS es parte fundamental

del desarrollo de una nueva formulacin y de la tcnica de anlisis de control de
calidad de una forma farmacutica, ya que es durante esta secuencia de pruebas y
anlisis, en donde el qumico se da cuenta si el estudio, el cual esta siendo evaluado
sistemticamente, cumple con los propsitos para los cuales fue diseado.
De acuerdo a las Buenas Prcticas tanto de Fabricacin como de
Laboratorio, es necesario que todos los mtodos analticos que empleamos estn
validados.
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Bajo este marco y considerando a la validacin de mtodos analticos

como el proceso por el cual queda establecido, por estudios de laboratorio, que la
capacidad del mtodo satisface los requisitos para las aplicaciones analticas
deseadas, el Colegio Nacional de Qumicos Farmacuticos Bilogos Mxico,. A.C.
ve con agrado, como uno de sus primeros frutos editoriales, sigue siendo hoy una
herramienta til para el entorno laboral analtico en la industria farmacutica.
Sin embargo, considerando tanto el avance cientfico y tecnolgico de
los ltimos aos, como los valores que nos rigen y nuestra bsqueda constante de la
excelencia, han hecho posible nuevamente que presentemos ante ustedes esta
versin actualizada de la Gua de Validacin de Mtodos Analticos, de manera
tal, que satisfaga sus necesidades laborales presentes al da de hoy.
El propsito principal es unificar criterios entre los profesionistas y hacer
ms fcil y productivo el trabajo de todos los que de alguna manera, estamos
involucrados en este tipo de actividades.
No me resta ms que recomendarles ampliamente este trabajo, realizado
por un grupo de expertos en el rea, quienes de manera honorfica han decidido
colaborar y retribuir a su gremio a travs de esta publicacin. Sin duda alguna, nuestra
institucin les esta enormemente agradecida por sus valiosas aportaciones.
Al da de hoy y ante las perspectivas mundiales, las exigencias de
competitividad son muchas, debemos estar preparados para ello, las cuestiones
regulatorias y de armonizacin nos obligan a empatar nuestros conocimientos, en
este caso, analticos en pro de un resultado de calidad.
Sirva pues, esta gua para tal objetivo.
Atentamente,
"Por la Unidad y la Excelencia"
Q.:J'B. Jos 9vfanuef Crdenas

Presidente
Colegio Nacional de Ouimicos Farmacuticos Bilogos Mxico. A.C.
PRLOGO
GUiA
DE
VALIDACIN
DE
MTODOS
ANALTICOS
PRESEN-.:nCIDN
Colegas:
En el IX Congreso Nacionalde Educacin Farmacutica del ao 2000

organizado por el Colegio Nacional de Qumicos Farmacuticos Bilogos AC
en la Universidad de Colima, asist a la ponencia de la colega Amparo Chrvel
Gaos que verso sobre Validacin de Mtodos Analticos; donde se plante la

necesidad de revisar la Gua, debido entre otras, a la inquietud de muchos de
nuestros colegas en su actualizacin y a las publicaciones de otros lineamientos
y guas en aos recientes. Debido a esta propuesta, Jos Manuel Crdenas
presidente del colegio me invito a participar en la actualizacin de la gua y

para ello, se formo una comisin especial de Validacin de Mtodos Analticos.
Gracias al trabajo de varios colegas y a los comentarios vertidos en diversos
foros organizados por el colegio; se dio lugar a esta publicacin, la cual presentamos
a nuestro gremio para facilitar esta actividad.

Es importante resaltar el trabajo de los colegas que participaron en
la elaboracin de la gua anterior, ya que no habra sido posible este hecho; as

como agradecer a los colegas que colaboraron en la actualizacin de la gua, por
su tiempo, conocimientos, experiencia, esfuerzo y trabajo orientado al beneficio
de nuestra comunidad gremial.
Presidente de la Comisin Especial de Validacin de .Mtodos Analiticos
PRESENTACION
GUA
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS
pg.
-;..
r
1.
Prlogo (Introduccin).
2.
Objetivo y campo de aplicacin.
3.
Justificacin.
4.
Definiciones.
5.
Smbolos y Abreviaturas.
6.
Clasificacin de Mtodos Analticos
17
7.
Parmetros de Desempeo.
19
8.
Determinaciones, metodologa y criterios de aceptacin
20
9.
Sustancias de referencia.
40
10. Revalidacin
44
11. Comparacin de 2 Mtodos Analticos
44
12. Documentacin
51
13. Concordancia con Guas Internacionales.
52
14. Bibliografa
53
15. Anexos
55
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GUiA
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS
1. PRDLDl:iD
I
1
L
1,
EN MUCHAS SITUACIONES, cuando se tiene inters en medir un
componente en una muestra, es necesario contar con una

metodologa de medicin (mtodo analtico). Por ello, las empresas
de transformacin (principalmente farmacuticas) requieren de este
tipo de metodologas, pudiendo utilizar metodologas farmacopeicas
o bien, dedicar tiempo para su desarrollo, partiendo del hecho de que deben cumplir
el atributo de confiabilidad. Como en muchas de las actividades de la industria
farmacutica se hace uso del mtodo cientfico para alcanzar este atributo, es
necesario llevar a cabo en la mayora de las ocasiones estudios experimentales
que permitan demostrar la confiabilidad de lo que se est midiendo. Un proceso
que permite cumplir este fin, es la validacin.
Como es bien sabido, todo producto farmacutico debe reunir atributos
de identidad, pureza, concentracin, potencia, inocuidad y disponibilidad para
cumplir con los aspectos normativos oficiales e internos y no menos importantes,
los ticos, por lo que si un mtodo analtico, que finalmente es el medidor de las
I'
1,;
caractersticas crticas de calidad del producto, no es confiable, se corre el grave

riesgo de afectar al usuario final que es un paciente.
Desde este enfoque, la validacin de mtodos analticos es un sistema
involucrado en los procesos de fabricacin en el rea de calidad de la empresa y
bajo la filosofa de la Validacin, las Autoridades Regulatorias verifican que las
empresas sustenten estos sistemas con actividades documentadas, como se indica en la NOM-059 SSA1 numerales 5.6.3, 5.7.4, 9.11.3, 9.11.5 Y 9.12.3 Y en
otros
Iill~amientos
regulatorios internacionales.
El objetivo final de un dictamen de calidad, es la liberacin o no

liberacin de un producto sobre la base de las especificaciones previamente
establecidas. Esta decisin es tomada generalmente por el profesional
farmacutico, en gran medida est dada por los resultados obtenidos al aplicar
uno o diversos mtodos analticos; si estos no son farmacopeicos y no estn
I
I!
validados, su decisin corre el riesgo de ser errnea y afectar al usuario del
1;
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I
,1
INTRODUCCiN
GUiA
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS
producto y por ende, a la misma empresa. La validacin le proporciona, a quien

aplica la metodologa, una seguridad de la confiabilidad de dichos mtodos y
puede tomar la decisin final con certeza. La validacin de mtodos analticos
tambin impacta en otras reas relacionadas a la' calidad de un producto
(estabilidad, limpieza de equipos, entre otras).
Hasta este momento, las empresas que han implantado esta actividad
inicialmente se orientaron con la Gua de Validacin de Mtodos Analticos
publicada por el Colegio Nacional de Qumicos Farmacuticos Bilogos - Mxico,
A.C. y avalada por la Secretara de Salud hace ms de una dcada. En su
momento, esta Gua cubri las necesidades que por la corriente de Validacin
haban empezado a surgir en la mayora de las empresas; con el tiempo, por
necesidades propias de la validacin de procesos, la validacin de mtodos se
especializ al grado de convertirse en una actividad independientemente regulada.
Con los avances tecnolgicos, aplicaciones de nuevas tcnicas,
tratamiento diferente de las muestras, etc., el Colegio Nacional de Qumicos
Farmacuticos Bilogos - Mxico, A.C., ha visualizado la necesidad de publicar
una nueva edicin de esta gua.
No se puede pasar por alto el hecho de que el factor ms importante
durante la validacin de todo mtodo analtico es siempre el criterio del profesional,
responsable de esta decisin, criterio que es necesario aplicar despus de tomar
en cuenta todos los factores relacionados con el, o los principios activos,
concentraciones, forma farmacutica, tipo de muestra, mtodo,1e anlisis, propsito
de la tcnica analtica, instrumentacin, sustancias retaclonadas, etc., estos
requisitos constituyen nicamente una gua para dar al qumico un soporte tcnico
adecuado para resolver cada caso particular.
As mismo, no hay que perder de vista que sta es nicamente una Gua
donde se establecen los requisitos mnimos, que es necesario satisfacer con la
Validacin y que no limita de ninguna manera el inters que pudiera tener el
profesionista para profundizar, de manera particular, en alguno o algunos de los
temas involucrados.
El C.N.Q.F.B. agradece de manera muy especial a todas las personas
que colaboraron en la preparacin, modificacin y actualizacin de esta Gua y a
la Secretara de Salud por su apoyo y aceptacin de estos Requisitos Mnimos
para la Validacin de Mtodos Analticos, ya que estamos seguros de que ser en
beneficio de la comunidad cientfica del pas.
INTRODUCCiN
Ir
I!
GUiA
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS
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2. OBJETIVO Y CAMPO DE APLICACiN
Establecer lineamientos generales mnimos necesarios para llevar a cabo el

proceso de validacin de mtodos analticos en aquellos establecimientos
dedicados a:
a) Fbrica o laboratorio de materias primas para la elaboracin de
medicamentos o productos biolgicos para uso humano, incluyendo
frmacos;
b) Fbrica o laboratorio de medicamentos o productos biolgicos para
uso humano;
e) Laboratorio de control qumico biolgico, farmacutico o de
toxicologa, para el estudio y experimentacin de medicamentos y
materias primas, con el objeto de establecer la validez de los mtodos
analticos utilizados para el control analtico del producto.
d) Laboratorio de control auxiliar de la regulacin,
Un mtodo analtico se define como la descripcin de la secuencia de actividades,

recursos materiales y parmetros que se deben cumplir, para llevar a cabo el
anlisis de un componente especfico de la muestra. Un analito se define como un
componente especfico en una muestra a medir en un anlisis; por lo que un
mtodo analtico mide un componente especfico (analito) en una muestra y como
todo proceso de medicin, ste debe ser confiable para ser utilizado con un
propsito definido. La validacin de mtodos analticos es el proceso por el cual
se demuestra, por estudios de laboratorio, que la capacidad det mtodo satisface
los requisitos para la aplicacion analtica deseada; es decir cumple con su'propsito.
Esta actividad puede ser justificada por los siguientes aspectos:
OBJETIVO
CAMPO
DE
APLICACiN
GUA
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS
3.1. Moral y tica.

El profesional farmacutico es el responsable de los procesos farmacuticos y por
lo tanto de la calidad de estos. Todo producto farmacutico (materias primas,
producto intermedio, producto a granel y producto terminado) debe satisfacer
requisitos y para ello se utilizan mtodos para medir componentes especficos en
el producto; lo cual es llevado a cabo con mtodos analticos.
3.2. Aseguramiento de Calidad.

Los mtodos analticos estn definidos como un sistema crtico en el Aseguramiento
de Calidad en una empresa farmacutica, ya que impactan de manera directa en
la calidad de un producto.
3.3. Econmica.
La carrera de muchas empresas por alcanzar una productividad elevada a costos
menores, est determinada, entre otros factores, al dictamen del producto en menor
tiempo, utilizando mtodos de prueba de menor costo, mantenimiento o tiempo de
anlisis entre otros.
3.4. Regulatoria.
La presente gua est justificada con base en las siguientes referencias:
Reglamento de Insumos para la Salud. Publicado en el Diario Oficial el4 de Febrero
de 1998 referente a los establecimientos que se destinen a la fabricacin de insumos
(medicamentos, frmacos, materias primas y aditivos), establece lo siguiente.
ART
e o
e u L o
15
N T E N IDO
Los establecimientos que se destinen a la fabricacin

de insumas, llevarn el control analtico de estos. Dicho
control deber incluir:
111. La validacin de las tcnicas empleadas.
Norma Oficial Mexicana NOM-OS.9-SSA1-1993. Buenas prcticas de fabricacin

para establecimientos de la industria qumico farmacutica dedicados a la
fabricacin de medicamentos, establece los siguientes puntos referentes a la
Validacin de Mtodos Analticos.
JUSTIFICACiN
lJi
i
1.[
1:1
GUiA
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS
1:
11
11
I,
NUMERAL
i1:l
DE LA NORMA
.!
CONTENIDO
l!'
"
El encargado del rea de produccin se encargar de realizar las
S.6
siguientes funciones, sin perjuicio de las obligaciones y

responsabilidades que correspondan al responsable sanitario,
conforme a la Ley General de Salud y al Reglamento de lnsumos
para la Salud:
S.6.3
Que se lleven a cabo estudios de validacin de los procesos de

fabricacin y de los sistemas involucrados.
S.7
El encargado del rea de calidad se encargar de realizar las

siguientes funciones, sin perjuicio de las obligaciones y
responsabilidades que correspondan al responsable sanitario,
conforme a la Ley General de Salud y al Reglamento de Insumos
para la Salud:
S.7.4
Que se lleven a cabo estudios de validacin de los procesos de

fabricacin y de los sistemas involucrados.
9.11.3
Los mtodos analticos deben ser validados, de acuerdo con lo

establecido en el apartado 9.12 "control del laboratorio analtico".
9.12.3
Se debe contar con mtodos de anlisis validados para producto a

granel, producto terminado y materia prima en caso de no aparecer
en cualquier farmacopea internacional ni en la FEUM.
NORMA Oficial Mexicana NOM-164-SSA1-1998, Buenas prcticas de fabricacin para frmacos.
NUMERAL DE LA
C O N T E N I D O
NORMA
16.1
Los controles de laboratorio e inspecciones deben apoyarse en

normas, PNO's o manuales que contengan las especificaciones para
garantizar la confiabilidad de sus resultados. Tales controles deben
incluir:
16.1.S
Validacin de mtodos analticos utilizados por la

farmacopeicos.o farmacopeicos que tengan
la farmacopea de referencia.
empr~~a,
no
desviaciones;~~~tEta
.; o::
~~;~~~H.",
'-''';~fr-~';
JUSTIFICACiN
',; vv-
GUiA
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS
NORMA Oficial Mexicana NOM-073-SSA1-1993, Estabilidad de medicamentos.
NUMERAL DE LA
NORMA
5.5
O N T E N IDO
Cuando se cambie el mtodo analtico durante el estudio de

estabilidad, se debe demostrar que los dos mtodos son equivalentes
mediante el proceso de validacin.
5.10.2
5.10.2.3
Informacin general, especificaciones y mtodos analticos:

Informacin de la linealidad, precisin, exactitud, reproducibilidad,
repetibilidad y especificidad del mtodo analtico indicativo de
estabilidad.
6.
Frmacos
Para fines de registro de un medicamento con frmacos nuevos en
Mxico, el fabricante del medicamento debe presentar ante la
Secretara de Salud estudios de estabilidad acelerada y/o a largo
plazo de tres lotes del (los) frmaco(s) efectuados por el fabricante
de los mismos, utilizando mtodos analticos validados.
Las regulaciones anteriores, determinan la obligacin de validar mtodos analticos.

Estas regulaciones podran ser modificadas, por lo que es importante estar
actualizados.
JUSTIFICACiN
GUA
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS
4. D E F IN I e 1'0 N E S
4.1. Adecuabilidad del sistema.- Verificacin de que el sistema (instrumento,
,:
'1
-l",
analista, equipo, sustancia de referencia, entre otros) opera con base a criterios
preestablecidos, que permitan asegurar la confiabilidad de los resultados de un
mtodo analtico.
4.2. Analito.- Componente especfico de una muestra, a medir en un anlisis.

4.3. Calibracin.- Conjunto de operaciones que determinan, bajo condiciones
especificadas, la relacin entre los valores indicados por un instrumento o sistema
de medicin, o los valores representados por una medicin material y los valores
conocidos correspondientes a un patrn de referencia.
4.4. Documentacin.- Conjunto de informacin que sustenta una actividad

realizada.
4.5. Especificaciones.- Descripcin del material, sustancia o producto, que incluye

la definicin de sus propiedades y caractersticas, con las tolerancias de variacin
de los parmetros de calidad.
4.6. Especificidad.- Capacidad de un mtodo analtico para obtener una respuesta

debida nicamente al analito de inters y no a otros componentes de la muestra.
4.7. Estudio colaborativo.- Reproducibilidad realizada en distintos laboratorios,

por diferentes qumicos.
4.8. Exactitud.- Concordancia entre un valor obtenido empleando el mtodo y el

valor de referencia.
4.9. Estabilidad analtica de la muestre Propiedad de una muestra, preparada

para su cuantificacin, de conservar su integridad fisicoqumica y la concentracin
del analito, despus de almacenarse durante un tiempo determinado bajo
condiciones especficas.
4.10.lntervalo.- Concentraciones incluidas entre la concentracin superior einf~:;?,;'~fJ'S

rior delanalito (incluyendo stas), para las cuales se ha demostrado que el mt9ct~~~f~1~b~\{
analtico es preciso, exacto y lineal.
. .
DEFINICIONES
GUA
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS
4.11. Lmite de cuantificacin.- Concentracin mnima del analito, que puede

ser determinada con precisin y exactitud aceptables, bajo las condiciones de
operacin establecidas.
4.12. Lmite de deteccin.- Concentracin mnima del analito en una muestra,

que puede ser detectada, pero no necesariamente cuantificada, bajo las condiciones
de operacin establecidas.
4.13. Lnealidad.- Habilidad para asegurar que los resultados obtenidos

directamente o por medio de una transformacin matemtica definida. son
proporcionales a la concentracin del analito, dentro de un intervalo determinado.
4.14. Metodologa de prueba.- Procedimiento o grupo de procedimientos, para

determinar si un producto materia prima cumple con las especificaciones
establecidas.
4.15. Mtodo analtico.- Descripcin de la secuencia de actividades, recursos

materiales y parmetros que se deben cumplir, para llevar a cabo el anlisis de un
componente especfico de la muestra.
4.16. Mtodo analtico desarrollado internamente.- Mtodo desarrollado por el

propio laboratorio.
4.17. Mtodo analtico indicativo de estabilidad.- Mtodo cuantitativo capaz de

detectar variaciones en las propiedades del material evaluado, debidas a las
condiciones de almacenaje.
4.18. Mtodo analtico oficial.- Mtodo que aparece en la literatura oficial

reconocida.
4.19. Mtodo analtico no oficial.- Mtodo que no aparece en la literatura oficial
reconocida.
4.20. Muestra.- Porcin del material a evaluar.

4.21. Muestra analtica.- Porcin del material a evaluar de acuerdo al mtodo
analtico.
4.22. Muestra adicionada.- Porcin representativa del material a evaluar, a la

que se le adicionan cantidades conocidas del analito.
4.23. Parmetros de desempeo.- Parmetro especfico a estudiar en un protocolo

de validacin.
DEFINICIONES
~~~":r.~~"",-';Q
GUiA
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS
4.24. Placebo analtico.- Muestra que contiene todos los componentes de un

producto a excepcin del analito.
4.25. Placebo adicionadQ.- Muestra de un placebo analtico al cual se le adiciona
una cantidad conocida del analito.
4.26. Precsin.-Grado de concordancia entre resultados analticos individuales,
cuando el procedimiento se aplica repetidamente a diferentes porciones de una
muestra homognea del producto o de una referencia.
4.27. Precisin intermedia.- Precisin de un mtodo analtico, expresada como
la concordancia relativa obtenida entre determinaciones independientes realizadas
en un mismo laboratorio, por diferentes analistas, en distintos das.
4.28. Proporcionalidad.- Relacin establecida por una ecuacin matemtica entre los resultados obtenidos por dos mtodos analticos.
4.29. Protocolo de validacin.- Descripcin de pruebas especficas para
demostrar que un proceso da resultados que cumplen con los criterios
preestablecidos de manera consistente.
4.30. Recobro.- Cantidad del analito determinada en el placebo adicionado o
muestra adicionada, empleando el mtodo analtico.
4.31. Repetibilidad.- Precisin de un mtodo analtico, expresada como la
concordancia obtenida entre determinaciones independientes realizadas por un
solo analista, usando los mismos instrumentos y mtodo.
4.32. Reproducibilidad.- Precisin de un mtodo analtico, expresada como la
concordancia entre determinaciones independientes realizadas por diferentes
laboratorios.
4.33. Revalidacin.- Comprobacin de que el mtodo analtico mantiene su
desempeo cuando existen cambios en la composicin del producto, en el mtodo
analtico, o cambios crticos en los procesos de fabricacin.
4.34. Robustez.- Capacidad del mtodo analtico de mantener su desempeo al
presentarse variaciones pequeas pero deliberadas, en los parmetros normales
de operacin del mtodo.
4.35. Sustancia de referencia.- Sustancia de uniformidad reconocida destinada

a utilizarse en comprobaciones analticas fsicas, qumicas o microbiolgicas eR~1
F, I
N I
ION E
10
GUA
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS
transcurso de las cuales sus propiedades se comparan con la sustancia en

evaluacin.
4.36. Sustancia de referencia primaria.- Sustancia quees designada o reconocida

por tener la ms alta calidad metrolgica, cuyas propiedades se aceptan sin
referencia a otras sustancias.
4.37. Sustancia de referencia secundaria.- Sustancia cuyas propiedades se

asignan por comparacin con una sustancia de referencia primaria, o bien, cuando
es certificada mediante un procedimiento cientficamente reconocido.
4.38. To/erancia.- Reproducibilidad de los resultados analticos obtenidos, por el

anlisis de la misma muestra bajo diferentes condiciones normales de operacin
como pueden ser: equipos, columnas. La robustez y la tolerancia son conceptos
diferentes, ya que el primero se refiere a la influencia de factores internos del
mtodo, mientras que la tolerancia, se refiere a factores externos al mtodo.
4.39. Validacin del mtodo analtico.- Proceso por el cual se demuestra, por
estudios de laboratorio, que la capacidad del mtodo satisface los requisitos para
las aplicacion analtica deseada ..
FIN
ION
E S
11
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GUA
DE
5. S M Ba Las y
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS
A BREVI RTU R A S
I
I1
Ij
'1'
',:
Cuando en esta gua se haga referencia a los siguientes smbolos o abreviaturas.

se entender:
AS
Authentic Substance
Pendiente.
Pendiente del mtodo 1.
Pendiente del mtodo 2.
Ordenada al origen.
Ordenada al origen del mtodo 1.
Ordenada al origen del mtodo 2.
BP
British Pharmacopoeia
BPF
Buenas prcticas de fabricacin.
CLAR
Cromatografa de lquidos
de alta resolucin.
COSUFAR
Comit de Sustancias
Farmacuticas de Referencia.
CV
Coeficiente de variacin o
desviacin estndar relativa.
Coeficiente de variacin
de regresin.
1MB
R E V
A S
12
GUA
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS
Diferencia absoluta de la media

aritmtica de cada condicin de
almacenaje respecto de la me
dia aritmtica del anlisis inicial.
Valor de la distribucin F de
F0.975,91
Fisher asociado a una confianza

del 97.5% ya grados de libertad
(gl) establecidos.
F0.05,g/
Valorde la distribucin F de Fisher

asociado a una confianza del 5%
y a grados de libertad (gl)
establecidos.
Valor de la distribucin F de Fisher
F0.025,91
asociado a una confianza del

2.5% y agrados de libertad (gl)
establecidos.
FCC
Food Chemical Codex
FDA
Food and Drug Administration
FEUM
Farmacopea de los Estados

Unidos Mexicanos.
Gramos.
gl
Grados de libertad.
Intervalo de confianza para la
pendiente poblacional.
diferencia de 2 pendientes
poblacionales.
IC(fJ}
ordenada al origen poblacional

diferencia de 2 ordenadas al
origen poblacionales.
1MB
R E V
I A T
R A
13
GUiA
DE
VALIDACiN
DE
IC(~)
MTODOS
ANALTICOS

media poblacional.
diferencia de 2 medias poblacionales.
K'
Factor capacidad.
Le
Lmite de cuantificacin.
LD
Lmite de deteccin.
LGS
Ley General de Salud.
LNSP
Laboratorio Nacional
de Salud Pblica.
mg
miligramos.
Nmero de mediciones o recobros o

blancos o muestras o
determinaciones.
Nmero de muestras del anlisis
inicial
n,
Nmero de mediciones del mtodo 1.

Nmero de mediciones del mtodo 2.
Nmero de platos tericos.
NF
National Formulary
NIST
National Institute of Standard and

Technology
NOM
Norma Oficial Mexicana.
OMS
Organizacin Mundial de la Salud
PNO
Procedimiento Normalizado
de Operacin.
1MB
R E V
I A T U R A
14
GUA
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS
ppm
Partes por milln.
Resolucin.
Coeficiente de determinacin.
Rr
Retencin relativa.
Desviacin estndar.
Desviacin estndar de los blancos.
Desviacin estndar de la ordenada
al origen.
Desviacin estndar para la
diferencia de 2 ordenadas al origen.
Desviacin estndar de la pendiente.
Desviacin estndar para la
diferencia de 2 pendientes.
Varianza.
Varianza del mtodo 1
Varianza del mtodo 2
Varianza poblacional.
Razn de 2 varianzas poblacionales.
Sref
Sustancia de Referencia
SSA
Secretara de Salud.
Desviacin estndar de regresin.
Factor coleo.
t0.975,91
Valor de la distribucin t de Student

asociado a una confianza del 95% y
SMBOLOS
ABREVIATURAS
15
Ir
l'
)i
/!
I!
GUA
DE
VALIDACIN
DE
MTODOS
ANALfTICOS
a grados de libertad (gl) establecidos.

USP
United States Pharmacopeia
USPC
United States Pharmacopoeia

Committe
VMA
Validacin de mtodos analticos.
Media aritmtica de x.
Media aritmtica de y.
Media aritmtica del mtodo 1
Media aritmtica del mtodo 2
Media aritmtica del anlisis inicial.
Media aritmtica de cada condicin
de almacenaje.
%
S 1
Porcentaje o por ciento.
B Ol
I A
T U
R A
16
GUA
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS
R N R L T I e D s
& eL R S I F I e R e I ti N D E M T D D D S
Para fines de esta gua los mtodos se clasifican bajo los siguientes criterios:
1). En funcin de su estado regulatorio en:

a) Mtodos farmacopeicos. Todos aquellos mtodos que
aparecen en cualquier farmacopea (FEUM, USP, SP,
Europea, etc.).
b) Mtodos no farmacopeicos. Aquellos mtodos
no compendiados en una farmacopea.
2). En funcin de su apllcacln (NOM 059 SSA1 y NOM-073-SSA1) en:

a) Mtodos para producto a granel.
b) Mtodos para producto terminado.
e) Mtodos para materia prima.
d) Mtodos indicadores de estabilidad.
3). En funcin de la naturaleza de la respuesta analtica en:

a) Mtodos fsico-qumicos. Cuando la respuesta es de carcter
fsico (absorcin de luz, emisin de luz, voltaje, etc.) o qumico
(consumo de iones -OH, consumo de un acomplejante, etc.).
b) Mtodos biolgicos. Cuando la respuesta es de carcter
biolgico (crecimiento de un microorganismo, proteccin,
muerte, etc.).
4). En funcin de su propsito analtico en:

a) Mtodos para cuantificar el analito(contenido o potencia).
b) Mtodos para establecer la presencia del analito a un lmite.
e) Mtodos para identificar el analito.
C
L A S I F I C A Ci N
D E
o s
N A L TIC
o s
17
GUiA
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALiTICOS
Esta ltima clasificacin es la que se utiliza para establecer los parmetros de

desempeo a estudiar en la validacin del mtodo analtico. En el Anexo 1 se
presenta una matriz de equivalencia entre esta clasificacin y otros mtodos con
aplicaciones analticas definidas de otra manera.
Cualquier mtodo analtico puede estar constituido por tcnicas de separacin,
extraccin, etc., y por tcnicas de medicin (espectrofotometra, volumetra,
colorimetra, potenciometra, etc.) que permiten medir la respuesta del analito en
la muestra. A esta ltima tcnica dentro de la gua, se le denomina Sistema de
Medicin.
5). En funpin de la naturaleza del sistema de medicin se clasifican en:
a) Mtodos en los cuales el instrumento de medicin de la

respuesta analtica, permite medir una seal de ruido
(cromatgrafo de lquidos, cromatgrafo de gases,
espectrofotmetros, etc.).
b) Mtodos en los cuales el instrumento de medicin no permite

medir una seal de ruido (buretas, medidor de halos,
potencimetros. etc.).
L A S I F I
A Ci N
To
o s
N A LIT I
18
GUA
DE
VALIDACiN
DE"'MTODOS
ANALTICOS
7.PRRMETROS DE DESEMPEO
En funcin de la aplicacin analtica de un mtodo, la siguiente tabla indica los

parmetros de desempeo a estudiar.
PARAMETRO DE DESEMPEO
CONTENIDO I
POTENCIAl
VALORACION
PRUEBAS DE IMPUREZAS
IDENTIFICACION
CONTENIDO I
VALORACION
LIMITE
SI
SI
SI'
SI
SI
NO
ESPECIFICIDAD'
SP
SI
SI
SI
EXACTITUD Y REPETIBILlDAD
SI
SI
NO
NO
LINEALIDAD DEL MTODO
SI
SI
NO
NO
SI
SI
NO
NO
.~
PRECISiN / ADECUABILlDAD
DEL SISTEMA
LINEALIDAD DEL SISTEMA
PRECISiN DEL MTODO O

PRECISiN INTERMEDIN
NO
--
ESTABILIDAD ANALlTICN
DE LA MUESTRA
NO
LMITE DE DETECCiN
NO
NO
SI
NO
SI
NO
NO
ROBUSTEZ
NO
TOLERANCIA
NO
LMITE DE CUANTIFICACiN
NO
NO
* PUEDE SER REQUERIDO DEPENDIENDO DE LA NATURALEZA DEL MTODO

1. La falta de especificidad de un mtodo analtico, puede ser compensada por
otra alternativa analtica de soporte, como por ejemplo cromatografa de capa
fina.
2. Tambin es definido como un estudio de tolerancia.
3. Un mtodo que es exacto y lineal, por definicin es especfico al placebo
analtico o a los otros componentes de la muestra.
PAR A
M E T
D E
S E M P
19
GUA
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS
B.DETERMINRCIONES, METODOLOEiR y
CRITERIOS DE RCEPTRCIN
8.1. Precisin del Sistema.
8.1.1. Metodologa.- Un analista debe preparar por lo menos un

sextuplicado de soluciones a la concentracin del analito que
represente la concentracin de la solucin de referencia utilizada, o
en ciertos casos, la concentracin que represente el 100% de la
muestra procesada para su medicin; preparadas por dilucin o por
pesadas independientes. Medir la respuesta analtica bajo las mismas
condiciones.
Calcular, S Y CV de la respuesta analtica.
Para los sistemas biolgicos, se deben cumplir los criterios de validez
inherentes al diseo del bioensayo.
8.1.2. Criterio de Aceptacin:

CV~ 1.5% para mtodos fsico - qumicos.
CV ~ 3% para mtodos biolgicos.

Valores superiores deben ser justificados.
Cualquier otro criterio de aceptacin, debe ser justificado.
Las frmulas, el procedimiento de clculo y un ejemplo, Se
describen en el Anexo 2.
8.2. Adecuabilidad del Sistema (Mtodos Cromatogrficos)
8.2.1. Metodologa.- Inyectar por quintuplicado la solucin de

adecuabilidad. Reportar la respuesta del analito, calcular el CV y para
cada inyeccin informar cuando proceda:
DETERMINACIONES, METODOLOGIA y CRITERIOS DE ACEPTACiN
20
GUA
[)E
VALI[)ACIN
[)E
MTO[)OS
ANALTICOS
factor capacidad (K').

resolucin (si procede, R).
retencin relativa (si procede, Rr).
factor de coleo (T).
nmero de platos tericos (N).
8.2.2. Criterios de Aceptacin.CV ~ 2% para la respuesta analtica.
Para cada inyeccin se recomienda:
K'
>2.~
R> 2.
T<2.
Las frmulas, el procedimiento de clculo y un ejemplo, se describen en
el Anexo 3.
La evaluacin de la adecuabilidad del sistema se recomienda para todos
los mtodos analticos, ya que permite verificar que el sistema de
medicin funciona apropiadamente, independientemente de las
condiciones ambientales. Es conveniente que antes de llevar a cabo la
validacin del mtodo analtico, se establezcan los criterios apropiados
para la operacin del sistema de medicin, para ser evaluados en la
validacin y verificados de manera rutinaria al emplear el mtodo
analtico. Por ejemplo. en el caso de mtodos volumtricos, el volumen
.de la titulacin de blancos y/o de un volumen especfico de la solucin
de referencia; en el caso de mtodos fotomtricos la lectura de
soluciones blanco; entre otros.
8.3. Linealidad del Sistema.
8.3.1. Metodologa.- Un analista debe preparar por lo menos por
triplicado 5 niveles de concentracin (intervalo) de la solucin de
21
GUA
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS
referencia ya sea por dilucin (a partir de una misma solucin

concentrada) o por pesadas independientes (cuando no sea posible
prepararlas por dilucin). La concentracin central debe ser igual a la
que se prepara la solucin de referencia en el mtodo o en ciertos
casos, la concentracin que represente el 100% en la muestra
procesada para su medicin. El intervalo debe incluir la especificacin
para el caso de aquellos mtodos utilizados para contenido I potencia
I valoracin. Medir la respuesta analtica bajo las mismas condiciones

de medicin, reportarla relacin concentracin vs respuesta analtica.
Calcular el valor de la pendiente (b.), la ordenada en el origen (bo) ' el
coeficiente de determinacin (r2 ) y el intervalo de confianza para la
pendiente (1c(J31
El intervalo est en funcin del propsito del mtodo, y por lo general

se expresa como % de la concentracin de la solucin de referencia o
en funcin del contenido de! analito en la muestra procesada para su
medicin.
Para contenido I potencia I valoracin se sugiere un mnimo de20%.
Para contenido I valoracin de impurezas desde un nivel apropiado
hasta un 20% por arriba de la especificacin.
Para mtodos indicadores de estabilidad desde un nivel apropiado
hasta un 120%
Es crtico que el intervalo no excluya valores de concentracin que
potencialmente puedan dar lugar al contenido del analito en la muestra.
8.3.2. Criterios de Aceptacin:
IC(J31 ) , no debe incluir el cero.

Cualquier otro criterio de aceptacin debe ser justificado.
Las frmulas, el procedimiento de clculo y un ejemplo, se describen
en el Anexo 4:
Es conveniente trazarla grfica la concentracin (x) vs la respuesta
analtica (y), e incluir en ella la ecuacin, la lnea de ajuste y el
coeficiente de determinacin.
n<=T<=I:HAfNArlnNI=~
MI=TODOLOGIA y CRITERIOS DE ACEPTACIN
22
GUA
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS
8.4. Especificidad.
8.4.1. Metodologa: Partiendo de la experiencia en el anlisis de la

muestra, se deben establecer las posibles sustancias interferentes, y
adicionar cantidades conocidas de stas, solas o combinadas a la
muestra y evaluar su respuesta al mtodo, bajo las mismas condiciones
de anlisis.
Para mtodos de identificacin: Se deben seleccionar sustancias que
potencialmente interfieran en la determinacin con base en la estructura
molecular del analito, precursores, sustancias relacionadas, vas
degradativas, entre otros.
Para mtodos de contenido / potencia / valoracin: Se deben analizar
placebos del producto, como lo indica el mtodo, muestras de producto,
y cuando proceda:
-sustancias relacionadas;
-precursores;.
-homlogos;
y una mezcla del producto con ellos o cualquiera de ellos.
Para mtodos de contenido / valoracin de impurezas: Si se dispone

de las impurezas se deben adicionar stas al analito y/o a la muestra
analtica en niveles que incluya la especificacin. Analizar como lo Indica el mtodo. Cuando no se dispone de stas, la muestra que contiene
el analito debe someterse a condiciones que generen su inestabilidad
qumica (luz, calor, humedad, hidrlisis cido-bsica y oxidacin) y
aplicar el mtodo a la muestra resultante.
Para mtodos de limite de impurezas: Proceder a analizar muestras
individuales de la impureza (orgnicas, inorgnicas o solventes
residuales), el producto (de pureza aceptable) y la mezcla de estos,
como lo indica el mtodo.
Para mtodos indicadores de estabilidad: En caso de contar con los
productos de degradacin, preparar muestras con placebo adicionado
de stos, el placebo adicionado de analito, el placebo adicionado de
analito y de productos de degradacin y analizar con el mtodo.
DETERMINACIONES, METODOLO~IA y CRITERIOS DE ACEPTACiN
23
GUA
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS
Si no se cuenta con los posibles productos de degradacin se pueden

emplear, dependiendo de la naturaleza qumica del analito y si es
posible, las siguientes condiciones para favorecer la inestabilidad del
analito en la muestra:
1. Someter el analito, el placebo y la muestra en un horno a 70 - 120

C o a 20 C por debajo del punto de fusin del analito de 2 a 4 semanas.
2. Exponer el analito, placebo y muestra a luz UV, fluorescente y/o
humedad relativa, por un tiempo apropiado.
3. Hacer soluciones del analito, ajustando el pH de 1 a 2 y/o de 10 a 12
y someterlas a 60 C - 80 C por un tiempo apropiado.
4: Para formas farmacuticas lquidas o semislidas, adicionar perxido
de hidrgeno para favorecer oxidacin del analito.
Estos estudios no se deben de llevar a cabo para analitos que segn la

bibliografa, tengan propiedades reactivas que puedan dar lugar a
condiciones inseguras al someter las muestras a las condiciones antes
mencionadas.
El tiempo y las condiciones se seleccionan con el fin de degradar al
analito a niveles de un 15 a 30%.
En el caso de mtodos no selectivos, como por ejemplo los mtodos
que utilizan sistemas de medicin volumtricos, la especificidad para
los componentes de una muestra, es sustentada con los resultados de
exactitud y linealidad del mtodo, si el mtodo cumple con los criterios
de aceptacin.
Cuando haya duda en la demostracin de la especificidad de un mtodo
analtico, se sugiere que sea investigada por otra metodologa de
soporte.

La respuesta del mtodo nicamente debe ser debida al analito.
DETERMINACIONES, METODOLOGA y CRITERIOS DE ACEPTACiN
24
GUA
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANAL[TICOS
8.5. Exactitud y Repetibilidad del Mtodo.
8.5.1. Metodologa.
A) Se conocen los componentes de la muestra y es posible preparar

un placebo analtico.
Un analista debe preparar el placebo analtico con el tipo de
componentes que generalmente estn presentes en la muestra. A la
cantidad de placebo analtico equivalente a una muestra analtica por
sextuplicado,adicionarle la cantidad de analito (puede ser una sustancia
de referencia secundaria) correspondiente al 100% de ste en la
muestra. Los placebos adicionados deben ser analizados por un mismo
analista bajo las mismas condiciones, utilizando como referencia, la
sustancia empleada en la adicin al placebo analtico. Determinar la
cantidad recuperada del analito.
~.'
B) No se conocen los componentes de la muestra.

Un analista debe analizar la muestra con el mtodo, para determinar el
contenido del analito. El mismo analista debe preparar por lo menos 6
muestras adicionadas del analito, por ejemplo utilizando la mitad de la
muestra analtica que originalmente requiere el mtodo y adicionar el
analito (puede. ser una sustancia de referencia secundaria) hasta
completar lo que represente el 100% de ste en la muestra. Las
muestras adicionadas deben ser analizadas por un mismo analista bajo
las mismas condiciones utilizando como referencia la sustancia
empleada en la adicin de la muestra. Determinar la cantidad
recuperada del analito.
Cuando no sea posible adicionar de manera directa el analito a la
muestra, la adicin puede ser llevada a cabo en alguna etapa del
mtodo.Be recomienda que la adicin se lleve a cabo en las primeras

etapas, para poder asegurar que las etapas posteriores no den lugar a
resultados incorrectos. Por ejemplo, si una muestra se debe extraer,
filtrar y diluir, es conveniente que la adicin se lleve a cabo antes de
extraer, ya que si existiera algn problema con la extraccin o con la
filtracin, y el analito se adiciona al placebo analtico o la muestra hasta
antes de diluir, puede dar lugar a resultados incorrectos.
Calcular el porcentaje de recobro de cada placebo analtico o muestra
DETERMINACIONES, METODOLOG[A y CRITERIOS DE ACEPTACiN
25
GUA
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS
adicionada, al obtener el cociente de la 'cantidad recuperada respecto

de la cantidad adicionada expresada en porcentaje.
Calcular el promedio aritmtico (y), la desviacin estndar {S), el
coeficiente de variacin (CV) y el intervalo de confianza para la media
poblacional 1C(1l) del porcentaje de recobro.
El 1C(1l ) debe incluir el 100% o que el promedio aritmtico del % de
recobro se incluya en el intervalo:
98 - 102% si el mtodo es cromatogrfico,
98 - 102% si el mtodo es volumtrico.

97 - 103% si el mtodo es qumico o espectrofotomtrico,
95 - 105% si el mtodo es microbiolgico,
El CV del porcentaje de recobro:
no debe ser mayor de 2% si el mtodo es cromatogrfico.
no mayor de 2% si el mtodo es volumtrico,
no mayor de 3% si es qumico o espectrofotomtrico,
no mayor del 5% si es microbiolgico,
no mayor a una magnitud preestablecida, acorde a la
especificacin del analito en la muestra.
en el Anexo 5.
8.6. Linealidad del Mtodo:

8.6.1. Metodolopa.
A) Se conocen los componentes de la muestra y es posible preparar
un placebo analtico.
26
G u
O E
A L lOA Ci N
0,0
N A L
TIC o s
Un analista debe preparar el placebo analtico con el tipo de componentes que

generalmente estn presentes en la muestra. A la cantidad de placebo analtico
equivalente a una muestra analtica por triplicado, adicionarle la cantidad de analito
(puede ser una sustancia de referencia secundaria) correspondiente al 100% de
ste en la muestra. Seleccionar al menos dos niveles, superior e inferior de la
cantidad del analito (intervalo) y preparar el placebo adicionado al menos por
triplicado a cada nivel, manteniendo constante la cantidad de placebo analitico en
los tres niveles. Los placebos adicionados deben ser analizados por un mismo
analista bajo las mismas condiciones, utilizando como referencia, la sustancia
empleada en la adicin al placebo analtico. Determinar la cantidad recuperada
del analito.
B) No se conocen los componentes de la muestra.
Un analista debe analizar la muestra con el mtodo, para determinar el contenido
del analito. El mismo analista debe preparar por lo menos 3 muestras adicionadas,
por ejemplo utilizando la mitad de la muestra analtica que originalmente requiere
el mtodo y adicionar el analito (puede ser una sustancia de referencia secundaria)
hasta completar lo que represente el 100% de ste en la muestra. Seleccionar al
menos dos niveles, superior e inferior de la cantidad del analito (intervalo) y preparar
la muestra adicionada al menos por triplicado a cada nivel, manteniendo constante
la cantidad de muestra en los tres niveles. Las muestras adicionadas deben ser
analizadas por un mismo analista bajo las mismas condiciones utilizando como
referencia la sustancia empleada en la adicin de la muestra. Determinar la cantidad
recuperada del analito.
Cuando no sea posible adicionar de manera directa el analito a la muestra, la
adicin puede ser llevada a cabo en alguna etapa del mtodo. Se recomienda que
la adicin se lleve a cabo en las primeras etapas del mtodo, para poder asegurar
que las etapas posteriores, no den lugar a resultados incorrectos. Por ejemplo, si
una muestra se debe extraer, filtrar y diluir, es conveniente que la adicin se lleve a
cabo antes de extraer; ya que si existiera algn problema con la extraccin o con la
filtracin, y el analito se adiciona a la muestra o placebo analtico hasta antes de
diluir, puede dar lugar a resultados incorrectos.
El intervalo de la concentracin del analito adicionado, depende del propsito del
mtodo y debe incluir la especificacin. La siguiente tabla supiere intervalos para
el estudio de linealidad, en la cual la especificacin se maneja como porcentaje;
como por ejemplo el 100% puede representar 100 mgl g de muestra, 10 ppm, 5
mg/mL, etc.
27
GUA
DE
VALIDACiN
PROPOSITO
DE
MTODOS
ANALTICOS
ESPECIFICACION
CONTENIDO I POTENCIA I
LMITE INFERIOR (L),
VALORACiN
LMITE SUPERIOR (L s )
INTERVALO MINIMO
L-10%
a Ls +10%
I
EJEMPLO
VALORACiN
90% - 110%
80% a 120%
Por lo tanto los niveles
podran ser 80%, 100%
Y 120%
UNIFORMIDAD DE DOSIS
75% -125%
60% a 140%
podran ser 60%,
100% Y 140%
Q'= 75%
40% a 130%
En el caso conservador, de
llegar a tercera etapa, ninguna
unidad es menor a Q - 25%

podran ser 40%, 100% Y
130%
. LMITE SUPERIOR (Ls)
Ls -20% a Ls +20%
DISOLUCiN
CONTENIDO I VALORACiN
PARA PRUEBAS DE
IMPUREZAS
EJEMPLO
Sustancias relacionadas.
80% a 120%
No debe contener ms de 100%.
podran ser 80%, 100% Y
120%
Reportar la relacin cantidad adicionada vs cantidad recuperada. Utilizando el mtodo

de estimacin por mnimos cuadrados, calcular el valor de la pendiente (b.), la ordenada
en el origen (b.), el coeficiente de determinacin (r2),el intervalo de confianza para la
pendiente (1c(f31, el intervalo de confianza para la ordenda al origen (1C(f3o y el
coeficiente de variacin de regresin (CVyIJ
Calcular el porcentaje de recobro de cada placebo adicionado o muestra adicionada,
al obtener el cociente de la 'cantidad recuperada respecto de la cantidad adicionada
expresada en porcentaje. Calcular el promedio aritmtico (Y'), la desviacin estndar
(S), el coeficiente de variacin (CV) y el intervalo de confianza para la media poblacional
IC(Il) del porcentaje de recobro.
28
GUA
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS

8.6.2.1. Cantidad adicionada vs cantidad recuperada:
EIIC( (31 ) debe incluir la unidad.

El
1C(f3) debe incluir el cero.
El CV yxI del porcentaje de recobro,

no debe ser mayor de 2% si el mtodo es cromatogrfico,
no mayor de 3% si es qumico o espectrofotomtrico,
no mayor del 5% si es microbiolgico
no mayor a una magnitud preestablecida, acorde a la especificacin
del analito en la muestra.
8.6.2.2. Porcentaje de recobro:

El IC(/-!) debe incluir el 100% o que el promedio aritmtico del % de
recobro se incluya en el intervalo:
98 - 102% si el mtodo es cromatogrfico,
98 - 102% si el mtodo es volumtrico,
97 - 103% si el mtodo es qumico o espectrofotomtrico,
95 - 105% si el mtodo es microbiolgico.
El CV del porcentaje de recobro:
no debe ser mayor de 2% si el mtodo es cromafogrfico,
no mayor de 3% si es qumico o espectrofotomtrico
no mayor del 5% si es microbiolgico
29
GUA
DE
VALIDACIN
DE
MTODOS
ANALTICOS

en el Anexo.6.
Es conveniente trazar la grfica de la cantidad adicionada (x) vs la
cantidad recuperada (y), e incluir la ecuacin, su lnea y el coeficiente
de determinacin.
8.7. Precisin del Mtodo (Precisin Intermedia o Tolerancia

interda / analista).
8.7.1. Metodologa:
Analizar por triplicado una muestra homognea del producto que tenga
un nivel cercano o igual al 100 % (en el caso de contenidol potencial
valoracin) o una muestra homognea cuyo contenido est incluido
en el intervalo lineal de concentracin de linealidad de mtodo (para
el caso de impurezas), en dos das diferentes y por dos analistas
diferentes. Utilizar de preferencia la misma sustancia de referencia y
los mismos instrumentos y/o equipos. Reportar el contenido I potencia
/ valoracin del analito de todas las muestras.
Calcular la media aritmtica (y), desviacin estndar (8) y coeficiente
de variacin (CV) del contenido I potencia I valoracin, empleando
todos los resultados obtenidos.

CV-< 2% para mtodos cromatogrficos y volumtricos.
CV-< 3% para mtodos qumicos o espectrofotomtricos.
CV -< 5% para mtodos biolgicos.
DETERMINACIONES, METODOLOGA y CRITERIOS DE ACEPTACiN.
30
GUA
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS

en el Anexo 7.
Los resultados pueden ser analizados, utilizando otros mtodos
estadsticos apropiados, que permitan sustentar que la precisin del
mtodo es aceptable. Puede ser utilizado un modelo estadstico lineal
de diseo experimental considerando como factores al analista y al da
anidado en el analista o considerando al analista como un factor jerrquico
respecto al da. Este modelo permite investigar el efecto del analista y
del da, as como estimar la variabilidad entre analistas (reproducibilidad
interanalistas), la variabilidad entre das (reproducibilidad interdas) y la
variabilidad del mtodo analtico (repetibilidad). Este anlisis es de utilidad
cuando se tiene inters en determinar el grado de tolerancia del mtodo
a estas fuentes de variacin.
8.8. Estabilidad Analtica de la Muestra.

8.8.1. Metodologa:
El analista debe establecer la etapa de anlisis en la cual se desea
evaluar la estabilidad, adems de determinar si en dicha etapa es posible
fraccionar (muestras dependientes) o no (muestras independientes) y.
las condiciones de almacenaje.
Para determinar la estabilidad analtica para muestras dependientes, el
analista debe procesar hasta la etapa preestablecida por lo menos por
t1iplicado una muestra homognea. Fraccionar cada una de las preparaciones
de acuerdo a las condiciones de almacenaje de inters. Terminar el anlisis
de una de las fracciones de cada preparacin (contenido I potencia I
valoracin inicial). Proseguir el anlisis de cada una de las fracciones al
trmino de cada condicin de almacenaje, utilizando una solucin de
referencia recientemente preparada, si el mtodo contempla el uso de una
solucin de referencia. Reportar el contenido I potencia I valoracin de cada
fraccin.
Para determinar la estabilidad analtica para muestras independientes, a
partir de una muestra homognea, el analista debe analizar por t1iplicado
(contenido I potencia I valoracin inicial). Simultneamente y de la misma
muestra, procesar el nmero de muestras necesarias para cada condicin
de almacenaje hasta la etapa preestablecida (preparaciones) al menos por
triplicado. Proseguir el anlisis de cada una de las preparaciones al trmino
de cada condicin de almacenaje, utilizando una solucin de referencia
recientemente preparada; si el mtodo contempla el so de una solucin de
referencia. Reportar el contenido I potencia I valoracin de cada preparacin.
31
GUA
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS
Calcular la media aritmtica del anlisis inicial (Yo) y de cada condicin
de almacenaje (y). Calcular la diferencia absoluta de la media aritmtica
I 1).
de cada condicin de almacenaje respecto del anlisis inicial ( di
Idi I~ 2% para mtodos cromatogrficos y volumtricos.

Idi I~ 3% para mtodos qumicos o espectrofotomtricos.
Idi I~ 5% para mtodos biolgicos.
en el Anexo 8.
Los resultados pueden ser analizados utilizando otros mtodos
estadsticos apropiados. Uno de ellos es la obtencin de intervalos de
confianza que describen la diferencia de los resultados de una condicin
especfica respecto de los resultados iniciales, basados en la distribucin
t de Dunnett.
8.9. Lmite de Deteccin.
Para la estimacin del lmite de deteccin se sugieren los siguientes
procedimientos:
8.9.1. LD con base en seal de Ruido.
8.9.1.1. Metodologa:
Este procedimiento aplica a mtodos que utilizan instrumentos para
medir la respuesta analtica y que presentan una seal de ruido basal.
Un analista debe determinar la respuesta de muestras blanco (reactivos,
placebos analticos, etc., segn proceda) y la respuesta de muestras
analticas (anal]to, placebos adicionados, segn proceda) en un
intervalo de concentraciones del ana lito que incluya la especificacin
de la prueba de impurezas lmite. Determinar aquella cantidad del analito
que genere una respuesta con respecto a la muestra blanco en una
proporcin de por lo menos de 3 a 1, lo que corresponde a la
32
GUiA
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS
concentracin asociada al lmite de deteccin. Este procedimiento se

utiliza para verificar el lmite de deteccin estimado por otros
procedimientos.
8.9.1.2. Criterio de Aceptacin:

El LD debe ser menor a la especificacin de la prueba de
impurezas lmite.
8.9.2. LD con base en curva de calibracin y desviacin estndar
de los blancos.
Este procedimiento aplica tanto a mtodos instrumentales como a no
instrumentales. Un. analista debe preparar por lo menos 3
concentraciones de la sustancia de inters (anal ita, placebos
adicionados, etc.; segn proceda) a valores menores o que incluya la
especificacin de la prueba de impurezas lmite; ya sea' por dilucin o
por pesada independiente del analito. Simultneamente, preparar por
lo menos 5 blancos (reactivos, placebos analticos, etc.; segn proceda).
Medir las respuestas analticas. Para la curva de calibracin, sin incluir
los blancos, calcular el valor de la pendiente (b.), el coeficiente de
determinacin (r2 ) y el intervalo de confianza para la pendiente (IC({31'
Para los blancos, calcular la desviacin estndar (Sb)de los blancos.
Calcular el lmite de deteccin con la siguiente ecuacin:
LO=
3.3 X Sb
b1
El valor estimado LD debe ser verificado utilizando el procedimiento de la

seal de ruido.
1C({31)' no debe incluir el cero.

El LD debe ser menor a la especificacin de la prueba de impurezas lmite.
DETERMINACIONES, METODOLOGiA y CRITERIOS DE ACEPTACiN
33
GUA
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS
8.9.3. LD con base en la curva de calibracin y la desviacin

estndar de regresin.
instrumentales. Un analista debe preparar por lo menos 3
concentraciones de la sustancia de inters (anal ita, placebos
especificacin de la prueba de impurezas lmite; ya sea por dilucin o
por pesada independiente del analito. Medir las respuestas analticas.
Calcular el valor de la pendiente (b.), el coeficiente de determinacin
(r 2 ) , la desviacin estndar de regresin (SY/X> y el intervalo de confianza
para la pendiente (1C(3). Calcular el lmite dedeteccin con la siguiente
ecuacin.
LD =
3.3 X Sy/x
b1
El valor estimado LO debe ser verificado utilizando el procedimiento de

la seal de ruido.

r2 ~ 0.98
1C(31)' no debe incluir el cero.

El LO debe ser menor a la especificacin de la prueba de
impurezas lmite.
8.9.4. LD con base en la curva de calibracin y la desviacin

estndar de la ordenada al origen.
concentraciones de la sustancia de inters (analito, placebos
especificacin de la prueba de impurezas lmite; ya sea por dilucin o
por pesada independiente del analito. Medir las respuestas analticas.
Calcular el valor de la pendiente (b.), el coeficiente de determinacin
(r'). la desviacin estndar ele la ordenada al origen (Sb. ) y el intervalo
de confianza para la pendiente (IC(31. Calcular el lmite de deteccin
con la siguiente ecuacin:
DETERMINACIONES. METODOLOGIA y CRITERIOS DE ACEPTACiN
34
GUiA
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS
El valor estimado LD debe ser verificado utilizando el procedimiento de

la seal de ruido.
r2 ~ 0.98
1C({31)' no debe incluir el cero.
El LD debe ser menor a la especificacin de la prueba de
impurezas lmite.
Las frmulas, el procedimiento de clculo y un ejemplo, considerando
los distintos procedimientos, se describen en el Anexo 9.
8.10. Lmite de Cuantificacin.

Para la estimacin del lmite de cuantificacin se sugieren los siguientes
procedimientos:
8.10.1. Seal de Ruido.

Este procedimiento aplica a mtodos que utilizan un instrumento para
medir la respuesta analtica y que presentan una seal de ruido basal.
Un analista debe determinar la seal de muestras blanco (reactivos,
placebos, etc., segn proceda) y la seal analtica de muestras (analito,
placebos adicionados, segn proceda) a concentraciones conocidas del
analito, inferiores o que incluya la especicacin del contenido I valoracin
de la prueba de impurezas. Determinar aquella cantidad del analito cuya
seal sea similar o mayor a la de la muestra blanco en una proporcin
de 10 a 1, lo que corresponde a la cantidad asociada al lmite de
cuantificacin. Es necesario verificar que dicha cantidad corresponda al
lmite de cuantificacin, evaluando la exactitud y repetibilidad del valor
estimado.
.~
DETERMINACIONES,
~ODOLOGIA y
CRITERIOS DE ACEPTACiN
35
GUA
DE
VALIDACiN
DE
METODOS
ANALTICOS

El LC debe ser menor a la especificacin del contenido / valoracin de
la prueba de impurezas
8.10.2. LC con base en la curva de calibracin y la desviacin
estndar de los blancos.
8.10.2.1. Metodologa: Este procedimiento aplica tanto a mtodos

instrumentales como a no instrumentales. Un analista debe preparar
por lo menos 3 concentraciones de la sustancia de inters (analito,
placebos adicionados, etc., segn proceda) a valores menores o que
incluya la especificacin de contenido / valoracin de la prueba de
impurezas, ya sea por dilucin o por pesada independiente del analito.
Simultneamente, preparar por lo menos 5 blancos (reactivos, placebos, etc., segn proceda). Medir las respuestas analticas. Calcular el
valor de la pendiente (b.), el coeficiente de determinacin (r2) y el
intervalo de confianza para la pendiente 1c(f31) . Para los blancos,
calcular la desviacin estndar de los blancos. Calcular el lmite de
cuantificacin con la siguiente ecuacin:
LC=
1Dx Sb
b1
Evaluar la exactitud y repetibilidad del valor estimado del lmite de

cuantificacin.
IC(f31), no debe incluir el cero.'

El LC debe ser menor a la especificacin del contenido I
valoracin de la prueba de impurezas
8.10.3. LC con base en la curva de calibracin basado en la
desviacin estndar dereqresln,
DETERMINACIONES, METODOLOGiA y CRITERIOS DE ACEPTACiN
36
GUA
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS
adicionados. etc. segn proceda) a valores menores o que incluya la

especificacin de contenido I valoracin de la prueba de impurezas, ya
sea por dilucin o por pesada independiente del analito. Medir las
respuestas analticas. Calcular el valor de la pendiente (b.), el coeficiente
de determinacin (r2) , la desviacin estndar de regresin (Sy,) y el
intervalo de confianza para la pendiente (1C(31))' Calcular el lmite de
cuantificacin con la siguiente ecuacin:
cuantificacin.
8.10.3;2. Criterio de Aceptacin:
r2 ;:::" O.98
1C(31)' no debe incluir el cero.
El LC debe ser menor a la especificacin del contenido I
valoracin de la prueba de impurezas.
8.10.4. Le con base en la curva de calibracin y la desviacin
estndar de la ordenada al origen.
instrumentales. Un analsta debe preparar por lo menos 3
adicionados, etc., segn proceda) a valores menores o que incluya la
especificacin de contenido I valoracin de la prueba de impurezas, ya
sea por dilucin o por pesada independiente del analito. Medir las
respuestas analticas. Calcular el valor de la pendiente (b.), el coeficiente
de determinacin (r2 ) , la desviacin estndar de la ordenada al origen
(Sbo ) y el intervalo de confianza para la pendiente (IC(31))' Calcular el

lmite de cuantificacin con la siguiente ecuacin:
Le =
3.3 x Sbo
b1

cuantificacin.
37
GUA
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS
r2 ~ 0.98
IC(,81)' no debe incluir el cero.
El LC debe ser menor a la especificacin del contenido /
valoracin de la prueba de impurezas.
Las frmulas, el procedimiento de clculo y un ejemplo, considerando
los distintos procedimientos, se describen en el Anexo 10.
8.11. Robustez.
Metodologa:
Se deben establecer aquellos factores instrumentales (temperatura de
la columna, presin en la columna, velocidad de flujo, etc.) y/o factores
no instrumentales (pH de fases, volmenes de solventes orgnicos para
una extraccin, etc.), relacionados al propio mtodo, que se considere
crticos. En cada condicin de operacin distinta; asi como a la condicin
normal, analizar la misma muestra por lo menos por triplicado. Reportar
el contenido / potencia / valoracin del analito para las muestras de
condicin normal de operacin y para la(s) muestra(s) de las otra(s)
condicion(es) de operacin, expresada(s) como %.
Calcular la media aritmtica de la condicin normal de operacin (Yo) y
de cada condicin de operacin diferente a la condicin normal ( Yi ).
Calcular la diferencia absoluta de la media aritmtica de cada condicin
respecto a la condicin normal (\ di [).

\di I ~ 2% para mtodos cromatogrficos y volumtricos.
I di 1 ~
3% para mtodos qumicos yespectrofotomtricos.
Idi I ~ 5% para mtodos biolgicos.

no mayor a una magnitud preestablecida. acorde a la especificacin del
analito en la muestra.
38
GUA
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS

el Anexo 11.
estadsticos apropiados. Uno de ellos es la obtencin de intervalos de
confianza que describen la diferencia de los resultados de una condicin
especfica respecto a la condicin normal de operacin, basados en la
distribucin t de Student (para 2 condiciones) o t de Dunnett (para 3 o
ms condiciones), incluyendo la condicin normal.
8.12. Tolerancia
Metodologa:
Se deben establecer aquellos factores ajenos al mtodo como diferentes
equipos, lotes de reactivos, columnas, etc., que se puedan presentar al
reproducir el mtodo en otras condiciones de uso. Fijar por lo menos 2
condiciones de uso y analizar una misma muestra por lo menos por
triplicado a cada condicin. Reportar el contenido I potencia I valoracin
del analito de todas las muestras.
Calcular la media aritmtica ( ~ ). desviacin estndar (S) y coeficiente
de variacin (CV) del contenido I potencia I valoracin.
8.12.1. Criterio de Aceptacin:

CV ~ 2% para mtodos cromatogrficos y volumtricos.
CV
3% para mtodos qumicos yespectrofotomtricos.
CV ~ 5% para mtodos biolgicos.

no mayor a una magnitud preestablecida, acorde a la especificacin del
analito en la muestra.
el Anexo 12.
estadsticos apropiados. Uno de ellos es aplicar un anlisis de la varianza
39
GUiA
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS
con un criterio de clasificacin para determinar si al menos una de las

condiciones de uso es diferente. En caso de concluir que al menos una
de las condiciones de uso es diferente: puede emplearse una prueba
estadstica de comparaciones mltiples para identificar aquellas
condiciones que dan lugar a resultados diferentes.
S.SUSTANCIAS DE REFERENCIA
Las sustancias de referencia son importantes en la validacin de mtodos

analticos, ya que constituyen un componente propio del mtodo y una
herramienta en la evaluacin de los parmetros de desempeo, lo que
permite establecer la confiabilidad de la metodologa.
c.'i
Para la seleccin y adquisicin de las sustancias de referencia se debe

contar con procedimientos acordes para su manejo y aplicacin correctos
dentro del laboratorio que va a llevar a cabo las actividades de validacin
de mtodos. As mismo, se debe contar con registros del uso y con la
documentacin que avale una buena prctica en el manejo de dichas
sustancias.
9.1. Manejo.
Para cumplir su propsito, cada sustancia de referencia debe
almacenarse, manejarse y utilizarse de acuerdo con las especificaciones
correspondientes. Generalmente deben almacenarse en su contenedor
original, alejadas del calor y protegidas dela luz. Deben evitarse lugares
hmedos. Cualquier indicacin sobre condiciones especiales de
almacenamiento deben incluirse en el marbete y (o) certificado analtico.
Toda sustancia de referencia debe contar con su identificacin y registro.
La informacin mnima para identificar las sustancias de referencia es:
Para sustancias de referencia primarias:
a) Nombre de la sustancia de referencia
b) Cantidad
T A
N C
F E
I A
40
GUA
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS
I
t
c) Lote del producto

d) Clave (para uso interno en el laboratorio)
e) Fecha de adquisicin
f) Pureza (potencia)
g) Fecha de caducidad
h) Riesgo potencial de manejo
i) Indicaciones especiales.
Para sustancias de referencia secundarias:
a) Nombre de la sustancia de referencia
b) Cantidad certificada
c) Lote interno
d) Clave
e) Fecha de certificacin
f) Potencia en relacin con la sustancia de referencia

La informacin mnima de un registro de las sustancias de referencia es:
a) Nombre
b) Lote
e) Clave de identificacin interna
d) Procedencia (USP, BP, COSUFAR, etc.)
e) Fecha de adquisicin
f) Fecha de empleo
g) Para que se emplea (uso)
U S T A
N C
I A S
E F E R E N
C I A
41
GUA
DE
VALIDACiN
DE
METODOS
ANALTICOS
h) Cantidad empleada
i) Cantidad remanente
j) Analista que la utiliza

k) Caducidad
Para las sustancias de referencia secundaria, es conveniente contar
adems con registros adicionales como:
a) Nombre
b) Lote
e) Clculos para obtener la potencia de la sustancia analizada (por

ejemplo si se emplea para obtener una sustancia de referencia
secundaria)
d) Grficas (espectros, cromatogramas, etc.)
e) Certificado de anlisis del material.
En la validacin de los mtodos analticos, estos registros son criticas.
Se debe contar con lineamientos que aseguren la no utilizacin de
sustancias de referencia caducas.
9.2. Tratamiento.
Cualquier tratamiento previo al que deba someterse la sustancia de

referencia lo debe contemplar la propia metodologa, o en su caso, debe
especificarse en su marbete.
Si la sustancia de referencia debe secarse antes de ser utilizada, es
necesario seguir las instrucciones que aparecen en su etiqueta o
certificado de anlisis. La operacin de secado no se debe llevar a cabo
en el envase original; es conveniente transferir una cantidad suficiente
a otro envase, para llevar a cabo dicha operacin. Si queda un excedente,
se debe desechar.
S u
S T
A N
I AS
D"E
F E RE
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42
GUA
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS
9.3. Procedencia.
A continuacin se mencionan algunos centros especializados que
proveen sustancias de referencia:
Btitish Pharmacopoeia (BP) (Farmacopea Britnica). European Pharmacopoeia (EP) (Farmacopea Europea). La SP ofrece sustancias de
referencia, las cuales estn disponibles en la Agencia de Laboratorios
de Control de Medicamentos (Inglaterra).
European Pharmacopoeia Chemical Reference Substances, EPCRS
(sustancias qumicas de referencia de la Farmacopea Europea). Estos
materiales se obtienen por medio de la Comisin Secretarial de la
Farmacopea Europea, Consejo de Europa .
Comit de Sustancias Farmacuticas de Referencia (COSUFAR).
Organizacin Mundial de la Salud (OMS).
La OMS clasifica las sustancias de referencia en:
Sustancias qumicas internacionales de referencia, que son las
establecidas por la OMS.
Sustancias nacionales de referencia o sustancias regionales de
referencia, las cuales se producen en cada pas y se certifican mediante
las sustancias qumicas internacionales de referencia.
La Organizacin Mundial de la Salud, agencia de las Naciones Unidas,
mantiene un programa para proveer los estndares biolgicos
internacionales y las sustancias qumicas de referencia. El programa
tiene relacin con las sustancias de referencia para antibiticos, productos
biolgicos y agentes quimioteraputicos. Como regla general, un estndar
internacional para un material de origen vegetal se discontina una vez
que la sustancia responsable de la actividad se ha aislado, identificado y
preparado, de tal forma que pueda ser completamente caracterizada
por medios fsicos y qumicos.
Secretara de Salud (SSA).
United States Pharmacopeia (USP) (Farmacopea de Estados Unidos).
U S T A N C
E F E R E N C I A
43
GUiA
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS
O. REVRLIDRCIN
Se deben establecer y justificar criterios apropiados para la revalidacin de mtodos

analticos, as como mantener un control de cambios. Cualquier cambio crtico a
un mtodo analtico, da lugar a uno nuevo y por lo tanto requiere de una validacin
como tal.
Como un ejemplo, en la siguiente tabla se establecen cambios en el mtodo, su
impacto y el parmetro de desempeo a revalidar.
CAMBIO
PARAMETROA
REVALIDAR
IMPACTA
DISPOSITIVO DE MEDICION
DEL INSTRUMENTO DE
MEDICION
VARIACION EN SISTEMA
DE MEDICION
CONCENTRACION DE LA
SOLUCION DE
REFERENCIA
EXACTITUD DEL METODO
LINEALIDAD DEL SISTEMA

y EXACTITUD DEL
METODO
FORMULACION DEL
EXACTITUD DEL METODO
EXACTITUD Y
PRECISION DEL SISTEMA

ADECUABILlDAD DEL
SISTEMA
REPETIBILlDAD DEL
PRODUCTO
METODO
LINEALIDAD DEL METODO
ESPECIFICIDAD
r r,
EQUIPOS
VARIACION DEL METODO
TOLERANCIA
PROVEEDOR DE COLUMNAS
VARIACION DEL METODO
TOLERANCIA
COMPRRRCION DE 2
METODOS RNRLITICOS
Cuando se tiene inters en comparar 2 mtodos analticos para aplicaciones de

contenido I potencia I valoracin, se pueden emplear los siguientes procedimientos:
REVALIDACiN
44
GUA
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS
I
I
Estudio de Comparacin de Parmetros de Desempeo. Este procedimiento se

utiliza cuando los 2 mtodos analticos han sido validados y se tiene inters en
comparar sus parmetros de desempeo, como puede ser el comparar un mtodo
volumtrico contra un mtodo por cromatografa de lquidos de alta resolucin .
Estudio de correlacin. Este procedimiento se utiliza cuando se comparan dos
mtodos cuyos resultados se expresan en unidades diferentes, tal como, actividad
biolgica vs concentracin.
11.1. Estudio de Comparacin de Parmetros de Desempeo:

En funcin de la aplicacin analtica de los mtodos analticos, la siguiente
tabla indica cuales son los parmetros de desempeo a estudiar.
PARMETROS DE DESEMPEO A COMPARAR DE
2 MTODOS ANALiTICOS
CONTENIDO I POTENCIA I
CAMBIO
PARAMETRO
A REVALIDAR
VALORACION
ESPECIFICIDAD
PARAMETROS DE
EXACTITUD Y REPETIBILlDAD
DESEMPEO
LINEALIDAD DEL METODO
PRECISION DEL METODO O PRECISiN INTERMEDIA
A continuacin se listan los parmetros analticos mnimos a comparar,

as como los criterios para establecer la igualdad de dichos parmetros.
11.1.1. Especificidad.
Este parmetro debe cumplir para cada mtodo analtico; ya sea
demostrando su especificidad o exactitud.
C o
M PAR A
e ;
O E
T 00
N A LIT I
e o s
45
GUiA
DE
VALIDACiN
DE
METODOS
ANALTICOS
11.1.2. Repetibilidad en Exactitud.
De los datos de exactitud y repetibilidad utilizar la informacin del porcentaje de
recobro. Calcular la varianza (8 2 ) del porcentaje de recobro de cada mtodo.
11.1.2.2. Criterios de Aceptacin:

El intervalo de confianza para la razn de varianzas, debe incluir el valor de 1.
Lasfrmulas, el procedimiento de clculo y un ejemplo, se describenen elAnexo 13.
11.1.3. Repetibilidad en Linealidad del Mtodo.
De los datos de linealidad del mtodo, utilizar la informacin del porcentaje de
recobro. Calcular la varianza (8 2) del porcentaje de recobro de cada mtodo.
11.1.3.2. Criterios de Aceptacin:

El intervalo de confianza para la razn de varianzas debe incluir el valor de 1.
Las frmulas y el procedimiento de clculo con un ejemplo, se describen en el
Anexo 14.
11.1.4. Exactitud.
11.1.4.1. Metodologa: De los datos de exactitud y repetibilidad, utilizar la

informacin del porcentaje de recobro. Calcular la media aritmtica (y) y varianza
(8 2) del porcentaje de recobro de cada mtodo.
11.1.4.2. Criterios de aceptacin:

El intervalo de confianza para la diferencia de las 2 medias poblacionales del
porcentaje de recobro, debe incluir el valor de cero.
El anlisis estadstico de los resultados, presenta 2 situaciones:
a) Los mtodos tienen la misma repetibilidad (varianzas iguales)
.C o
M PAR A
e i N
DE
MTODOS
N A LIT I
e o s
46
GUA
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS
b) Los mtodos tienen diferente repetibilidad (varianzas diferentes)

por lo tanto para llevar a cabo el anlisis es necesario realizar el estudio de
comparacin de repetibilidad de ambos mtodos. (11.1 .2 )
Las frmulas y el procedimiento de clculos con un ejemplo para ambas
situaciones, se describen en el Anexo 15.
11~ 1.5.
Linealidad del Mtodo.
De los datos de linealidad del mtodo, utilizar la informacin de la cantidad
adicionada y cantidad recuperada de cada mtodo, as como el porcentaje de
recobro de cada mtodo. Para cada mtodo, calcular la pendiente (b, y b,.> y
ordenada al origen (b o1 y b o, ) de Ia relacin cantidad adicionada -cantidad
recuperada, as como la media aritmtica (Y1 Y Y2) Y varianza (S21 y S22) del
porcentaje de recobro.

El intervalo de confianza para la diferencia de las pendiente de cantidad adicionadacantidad recuperada debe incluir el valor de cero.
El intervalo de confianza para la diferencia de las ordenadas al origen de cantidad
adicionada-cantidad recuperada debe incluir el valor de cero.
El intervalo de confianza para la diferencia de las medias poblacionales del
porcentaje de recobro, debe incluir el valor de cero.
El anlisis estadstico de los resultados del porcentaje de recobro, presenta 2
situaciones:
a) Los mtodos tienen la misma repetibilidad (varianzas iguales)
b) Los mtodos tienen diferente repetibilidad (varianzas diferentes)
por lo tanto para llevar a cabo el anlisis es necesario realizar el estudio de
comparacin de repetibilidad de ambos mtodos. (11.1.3)
Las frmulas y el procedimiento de clculos con un ejemplo para la situacin de
C o
M PAR A Ci N
D E
o s
N A LIT I C
o s
47
GUA
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS
igual repetibilidad, se describen en el Anexo 16. Para el caso de diferente

repetibilidad, con base en el porcentaje de recobro se describe en el anexo 15.
11.1.6. Precisin del Mtodo.

De los datos de precisin del mtodo, utilizar la informacin del contenido / potencia
/ valoracin del analito de cada mtodo. Calcular las varianzas. (S21 y S22).

El intervalo de confianza para la razn de varianzas, debe incluir el valor de 1.
Las frmulas, el procedimiento de clculo y un ejemplo,se describen en el Anexo 17.
11.2. Estudio de Correlacin.

Estos estudios se aplican a mtodos de contenido / valoracin / potencia y los
parmetros a evaluar en este tipo de estudio son:
* ProPorcionalidad. Es importante establecer que estos estudios no necesariamente
establecen equivalencia de resultados, sino proporcionalidad; ya que en muchas

ocasiones la respuesta analtica es diferente.
* Precisin. Es deseable que el mtodo no oficial tenga una precisin igual o
mejor que el mtodo oficial, o que su precisin sea aceptable para la aplicacin
analtica deseada.
Inicialmente se debe establecer el mtodo de referencia y el mtodo a comparar
11.2.1. Proporcionalidad:
A. Se conocen los componentes de la muestra y es posible preparar un placebo

analtico.
Un analista debe preparar una cantidad suficiente de placebo analtico con el tipo
de componentes que comnmente estn presentes en la muestra, de tal manera
que pueda ser analizado por ambos mtodos en tres diferentes nivele del analito,
que incluya la especicacin.
C o
M PAR A Ci N
D E
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N AL'
i TIC o s
. 48
GUiA
I
l
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS
Del placebo analtico preparado tomar una cantidad suficiente para adicionarle
analito al nivel inferior. Fraccionar en tres muestras y analizar cada muestra con
ambos mtodos bajo las mismas condiciones analticas de cada mtodo, para
determinar el contenido I valoracin I potencia. Es importante que cada muestra
este identificada. Repetir este procedimiento con el nivel del 100% Y superior.
'
Reportar la relacin contenido I valoracin I potencia de cada mtodo en cada
muestra del mtodo a comparar (y) - mtodo de referencia (x). Calcular el valor de
la pendiente (b.), la ordenada en el origen (b.), el coeficiente de determinacin
(r2 ) , el intervalo de confianza para la pendiente (1c(f31) ) , y el coeficiente de variacin
de regresin (CVy,.).
B. No se conocen los componentes de la muestra.
11.2.1.2. Metodologa: El analista debe seleccionar por lo menos 9 muestras del

producto, cuyo nivel de analito cumpla con la especificacin. El analista debe fijar
una etapa de los mtodos analticos, en los cuales transfiera una mayor o menor
cantidad de la muestra con el objeto de poder variar el nivel del analito, como
puede ser al pesar la muestra, al transferir un volumen. al efectuar una dilucin,
entre otras.
Es conveniente que 3 muestras tengan un nivel bajo. 3 el nivel correspondiente al
100% de la especificacin y 3 un nivel alto de analito.
Las 9 muestras deben ser identificadas y analizadas por ambos mtodo. bajo las
mismas condiciones analticas de cada mtodo. Determinar el contenido I valoracin
I potencia de cada muestra.

Reportar la relacin contenido I valoracin I potencia del mtodo a comparar (y) mtodo de referencia (x). Calcular el valor de la pendiente (b.), la ordenada en el
origen (be), el coeficiente de determinacin (r2 ) , el intervalo de confianza para la
pendiente (1c(f31)) , y el coeficiente de variacin de regresin (CV y,.).

El 1C(f31) no debe incluir el cero.
Las frmulas. el procedimiento de clculo y un ejemplo, se describen en el Anexo 18.

11.2.2. Precisin.
11.2.2.1. Metodologa: Por lo menos 2 analistas. en por lo menos2 das, deben

C o
M PAR A Ci N
D E
N A LIT I C
o s
49
GUA
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS
analizar por triplicado muestras independientes (pesadas o alcuotas) de un lote

homogneo de producto, cuyo nivel de analito est incluido dentro de la
especificacin; tanto con el mtodo de referencia como con el mtodo a comparar.
Reportar el contenido I potencia I valoracin del analito de todas las muestras
en %, para ambos mtodos.
El intervalo de confianza unilateral inferior, para la razn de varianzas del mtodo
a comparar respecto del mtodo de referencia, no debe exceder el valor de 1.
Las frmulas, el procedimiento de clculo y un ejemplo, se describen en el
Anexo 19.
COMPARACiN
DE
MIOTOOS
ANALITICOS
50
GUiA
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS
.2.DDCUMENTAClN
. Las actividades de la validacin de un mtodo analtico, deben ser sustentadas

por los siguientes documentos.
A. Protocolo. El contenido sugerido que debe tener un protocolo es:
1. Ttulo.
2. Propsito u Objetivo.
3. Responsabilidades.
4. Plan de prueba. En ste, se deben describir los parmetros de desempeo
que permitan verificar la aplicacin analtica deseada.
5. Criterios de aceptacin para cada parmetro.
6. Formatos de registro de resultados.
B. Reporte, cuyo contenido mnimo debe ser:
1. Ttulo.
2. Resultados.
3. Anlisis de resultados.
4. Confrontacin contra los criterios de aceptacin.
5. Conclusin.
Es crtico documentar los registros analticos.
La documentacin debe estar ordenada y disponible, bajo la responsabilidad del
rea de calidad.
o e
M' EN
T A
C: I N
51
GUA
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS
1 :a.CONCORDANCIA CON GUIAS INTERNACIONALES
Esta gua es equivalente a:

Guideline for Industry: Text on Validation of Analytical Procedures.
ICH-Q2A, March 1995
Guideline on the Validation of Analytical Procedures; Methodology; Availability;
Notice ICHQ2B.
USP24. Validation of Compendial Methods.
Reviewer Guidance: Validation of Chromatographic Methods. CDER. November
1994, CMC 3
C o
e o
R D A N
I A
e o
A S
I N TER
N A
ION A L E
52
GUA
DE
VALIDACIN
DE
MTODOS
ANALTICOS
t 4.BIBLIDORRFiR
14.1. Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos, 7a. Ed. Mxico (2000).
14.2. Mtodos Analticos, Validacin. Guas Generales de Validacin de la DGCIS,

SSA(1989).
14.3. Ley General de Salud (1997).
14.4. NMX-CC-1-1990 Sistemas de Calidad Vocabulario.
14.5. NMX-CC-2-1990 Sistemas de Calidad-Gestin de Calidad. Gua para la

Seleccin, el Uso de Normas de Aseguramiento de Calidad.
14.6. Reglamento de Insumos para la Salud (1998).
14.7. NORMA Oficial Mexicana NOM-059-SSA1-1993, Buenas prcticas de

fabricacin para establecimientos de la industria qumico farmacutica dedicados
a la fabricacin de medicamentos.
14.8. NOM- 177 SSA1 1998 "Que establece las pruebas y procedimientos para
demostrar que un medicamento es intercambiable"
14.9. Guidance for Industry Bioanalytical methods Validation for Human Studies.
December 1998 FDA.
14.10. Guideline for Industry: Text on Validation of Analytical Procedures.
ICH-Q2A, March 1995

B
I B
R A
53.
GUiA
DE
VALIDACiN
DE
METODOS
ANALTICOS
14.11. Reviewer Guidance: Validation of Chromatographic Methods. CDER.

November 1994, CMC 3
14.12. Guideline for Industry. Analytical Procedures and Methods Validation.
August 2000. FDA
14.13. Guideline for submiUing Samples and Analytical Data for Methods Validation. February 1987. FDA
14.14. ICH Harmonised Tripartite Guideline. Validation Analytical Procedures:

Methodology. 6 Nov 1996.
14.15. ICH Guideline on the Validation of Analytical Procedures; Methodology;

ICHQ2B, November 1996.
14.16. USP24. Validation of Compendial Methods.
14.17. NORMA Oficial Mexicana NOM-073-SSA1-1993, Estabilidad de

medicamentos.
14.18. Diseo y Anlisis de Experimentos, Montgomery D. C.. Grupo Editorial

Iberoamrica. 38 Ed. Mxico (1991).
BIBLIOGRAFIA
54
~;
GUA
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS
~i i:,
1:
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:~ '~
'N
El: 5
GUiA
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS
15. ANEXOS
CONTENIDO
NUMERO
1
2
MATRIZ DE EQUIVALENCIA DE MTODOS ANALTICOS

FRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CLCULO CON EJEMPLO PARA PRECISiN DEL SISTEMA
3
4
FRMULASY PROCEDIMIENTO DE CLCULO CON EJEMPLO PARA ADECUABILlDAD DEL SISTEMA
FRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CLCULO CON EJEMPLO PARA EXACTITUD Y
FRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CLCULO CON EJEMPLO PARA LINEALIDAD DEL SISTEMA
REPETIBILlDAD DEL MTODO.
6
7
FRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CLCULO CON EJEMPLO PARA LINEALIDAD DEL MTODO.

FRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE .CLCULO CON EJEMPLO PARA PRECISiN DEL MTODO
(PRECISiN INTERMEDIA).
FRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CLCULO CON EJEMPLO PARA ESTABILIDAD ANALTICA

DE LA MUESTRA.
9
10
11
12
FRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CLCULO CON EJEMPLO PARA LIMITE DE DETECCiN.
13
FRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CLCULO CON EJEMPLO PARA REPETIBILlDAD
FRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CLCULO CON EJEMPLO PARALMITE DE CUANTIFICACiN.

FRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CLCULO CON EJEMPLO PARA ROBUSTEZ.
FRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CLCULO CON EJEMPLO PARA TOLERANCIA.
Y EXACTITUD PARA COMPARACiN DE 2 MTODOS ANALTICOS.
14
FRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CLCULO CON EJEMPLO PARA REPETIBILlDAD EN

LINEALIDAD DEL MTODO PARA COMPARACiN DE 2 MTODOS ANALTICOS.
15
FRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CLCULO CON EJEMPLO EN EXACTITUD PARA.

COMPARACiN DE 2 MTODOS ANALTICOS.
16
FRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CLCULO CON EJEMPLO EN LINEALIDAD DEL MTODO

PARA COMPARACiN DE 2 MTODOS ANALTICOS.
17
FRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CLCULO CON EJEMPLO EN PRECISiN DEL MTODO

PARA COMPARACiN DE 2 MTQDOS ANALlTICOS.
18
FRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CLCULO CON EJEMPLO PARA PROPORCIONALIDAD DE

MTODOS EN ESTUDIOS DE CORRELACiN PARACOMPARACiN DE 2 MTODOS ANALTICOS.
19
FRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CLCULO CON EJEMPLO PARA PRECISiN DEL MTODO

EN ESTUDIOS DE CORRELACiN PARA COMPARACiN DE 2 MTODOS ANALlTICOS.
20
21
22
TABLA ESTADSTICA DE LA DISTRIBUCiN t DE STUDENT.

TABLAS ESTADISTICA DE LA DISTRIBUCiN F DE FISHER.
COMENTARIOS RESPECTO A LOS CLCULOS Y REGLAS DE REDONDEO.
ANEXOS'
55
GUA
ANEXO 1.
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS
MATRIZ DE EQUIVALENCIA DE MTODOS ANAlTICOS.
EQUIVALENTE
PROPSITO
USO
CONTENIDO O
POTENCIA
CUANTIFICA
ALANALlTO
Mtodos para producto a

granel.
Mtodos para producto
terminado.
Mtodos para materia prima.
Mtodos indicadores de
estabilidad.
Mtodos para frmacos.
Mtodos para cuantificar el
analito en la prueba de
disolucin.
Valoracin.
Ensayos de cuantificacin.
Determinacin del principio
activo liberado.
Titulacin.
Uniformidad de dosis.
LMITE
ESTABLECE LA PRESENCIA
DEL ANALlTO A UN LMITE
IDENTIFICACiN
IDENTIFICA AL ANALlTO
Mtodos lmite de impurezas.

Mtodos lmite de residuos.
Mtodos para determinar el
nivel de limpieza.
Prueba lmite.
Ensayo de identidad.
.di'
GUiA
ANEXO 2.
DE
VALIDACiN
DE
METODOS
ANALITICOS
FRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CLCULO CON EJEMPLO PARA

PRECISiN DEL SISTEMA
A) FRMULAS
MEDIA ARITMTICA:
_ LY
y=-
DESVIACiN ESTNDAR:
n(L l)-(L y)2

n(n-l)
s=
COEFICIENTE DE VARIACiN:
cv = y~*lOO
n = nmero de mediciones.
B) PROCEDIMIENTO DE CLCULO.
1) Tabular los resultados:
PROPIEDAD MEDIDA (ABSORBANCIA)
.DE LA SOLUCiN DE REFERENCIA
(y)
1.0520
1.0462
1.0566
1.0568
1.0554
1.0498
2) Calcular ~y, ~y2 Y determinar n.
~y,= 1.0520 + 1.0462
~y2
1.05202
+...+ 1.0498 = 6.3168
+ 1.0462 2 +...+ 1.04982 = 6.650417
n=6
3) Calcular y y S:
y = 6.3168 = 1.0528
6
s ==
6 x 6.650417 - 6.3168 == 0.004252

6x(6-1)
4) Calcular el CV:
cv
== 0.004252 x lOO == 0.4039%

1.0528
.
El CV no excede el 1.5%.
ANEXOS'
57
GUiA
ANEXO 3.
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS

ADECUABILlDAD DEL SISTEMA.
A) FRMULAS
MEDIA ARITMTICA:
y=-
DESVIACiN ESTNDAR:
n(L/)-(2:y)2
n(n-l)
s=
CV = ~*lOO
y
n = nmero de mediciones.
Para la frmulas de factor capacidad (K'), resolucin (R), retencin' relativa (Rr), factor de
coleo (T) y nmero de platos tericos (N), referirse a la FEUM 7a Edicin. Pginas 229 a
231.

RESPUESTAANALlTICA (REA DE PICO)
DE LAS INYECCIONES DE LA SOLUCiN DE REFERENCIA.
Inyeccin rea (mAu*s)
1131.6
1
2
3
4
1134.1
1162.8
1132.9
1136.2
2) Calcular ~y, ~y2 Y determinar n.

~y =1131.6 + 1134.1+...+ 1136.2 =5697.6
~y2 = 1131.62 + 1134.1 2 +...+ 1136.22 = 6493218.06
n=5
3) Calcular
y y S.
y= 5697.6 = 1139.52
5
2
s= 5x6493218.06-5697.6 =
5x(5-1)
13.124
.'''.,
4) Calcular el CV.
cv = 13.124 x100= 1.15%

1139.52
El CV no excede el 1.5%.
ANEXOS'
58
..
.~
..... - ..
GUiA
ANEXO 4.
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS
FRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO CON EJEMPLO PARA LINEALIDAD DEL SISTEMA.
A) FRMULAS
PENDIENTE
=nmero de mediciones (concentracin -
respuesta analtica).
ORDENADA AL ORIGEN
COEFicIENTE DE DETERMINACiN
(n(Ixy)-(x)(Iy))2
r = (n(Ix 2)-(Ix)2)(n(Ii)-(Iy)2)
2
'0
INTERVALO DE CONFIANZA PARA LA PENDIENTE
/C(PI) = b (O.975,n-2 Sbl
Sylx-t o.975,n-2
~'2>2
-b",-b,y
n-2
=Referirse al Anexo 20, para determinar el valor de la t de Student.
8) PROCEDIMIENTO DE CLCULO.
Estos datos se utilizan nicamente para ejemplificar los clculos.
CONCENTRACiN - PROPIEDAD MEDlpA
SOLUCiN
1
2
3
4
5
6
7
8
9
x (ppm)
y (absorbancia)
80
80
80
100
100
100
120
120
120
0.5194
0.5172
0.5147
0.7800
0.7846
0.8063
1.5917
1.5844
1.5837
GUiA
DE
2) Calcular LX,
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS
LY, LX2 , L y2 , Lxy Y determinar n:
LX = 80 + 80 + ... + 120 = 900

LY = 0.5194 + 0.5172 + + 1.5837 = 8.682
L x2 = 802 + 80 2 + + 1202 = 92400.00
'L y2 = 0.51942 + 0.51722 + ... + 1.5837 2 = 10.228243
LXY 80*0.5194 + 800.5172 + ... + 120*1.5837 932.37
oo.
oo.
n=9
3) Calcular b., bo y r2.
b ::: 9 x 932.37 - 900 x 8.682 = 0.026738
9 x 92400- 9002
b = 8.682-0.026738x900 = -1.709083
o
9
r2 =
(9 x 932.37 -900x8.682)2
=0.925925
2)
(9 x 92400 - 900 2) x (9 x 10.228243 - 8.682
El valor es menor de 0.98

4) Calcular Sytx y
Sbl
10.228243-0.026738x932.37 -(-1.709083)x8.682 = 0.140031

9.,...2
S bl = 0.140031
1
= 0.002858
2
92400- 900
9
5) Determinar en el Anexo 20 to.975,n-2 y calcular 1C({3,),

/0.975,7 =
2.365
JCCPl) = 0.026738 2.365 x 0.002858 = 0.019979,0.033496

El intervalo no incluye el cero.
GRFICA X vs Y
2.0000 , - - - 1.5000
---,
y = 0.0267x - 1.7091
2
r
~
=0.9259
1.0000
0.5000
0.0000 +--~--.,.---~--..,__-_..,..--..,__-----l
8060
70
90
100
110
130
120
ANEXOS'
60
GUiA
ANEXOS.
,
1
DE
VALIDACIN
DE
MTODOS
ANALTICOS
FRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CLCULO CON EJEMPLO PARA EXACTITUD Y

REPETIBILlDAD DEL MTODO
A) FRMULAS
MEDIA ARITMTICA:
_ LY
y=-
DESVIACION ESTNDAR:
n(Ly 2)-(Ly)2
n(n-l)
s=
S
CV = _*100
Y
INTERVALO DE CONFIANZA PARA LA MEDIA POBLACIONAL:
Je(p) = y [0.975,1l-1
tO.975.n-1
.;;
Referirse al Anexo 20, para determinar el valor de la t de Student.
=nmero de recobros.
CANTIDAD ADICIONADA- CANTIDAD RECUPERADA - % DE RECOBRO

PARA UN MTODO CROMATOGRFICO.
PLACEBO
ANALlTICO
ADICIONADO
1
2
3
4
5
6
CANTIDAD
ADICIONADA
(mg)
50.00
50.10
50.00
49.90
50.00
50~OO--
......
---
CANTIDAD
RECUPERADA
(mg)
%DE
RECOBRO
(y)
50.04
50.39
50.11
49.89
50.23
100.08
100.58
100.22
99.98
100.46
-- 99.86--
- --49~93--
----------------
y = Es el cociente porcentual de la cantidad recuperada respecto de la cantidad

adicionada.
ANEXOS'
61
GUiA
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
2) Calcular Y. y2 Y determinar n.
y = 100.08 + 100.58 +
y2
=100.082 + 100.58
+ 99.86
= 601.1788
+...+ 99.86 2 = 60236.3819
n=6
3) Calcular y Y S:
y= 601.1788 =100.1965
6
s=
6 x 60236.3 819 - 60 I.l788

6x(6-1)
= 0.2792
4) Calcular el CV:
cv =
0.2792 x l 00
100.1965
=0.28 %
El CV no es mayor de 2%.
5) Determinar en el Anexo 20
..
(o 9755 =
to.975.n-1 y calcular
IC(Il).
2.571
/C(.u) = IOO.19652.57Ix
0.2792
==99.90,100.49
El intervalo incluye el valor de 100%.
ANEXOS'
62
ANALTICOS
G u i
ANEXOG.
O E
A LID A Ci N
D E'
o Do s
N A LiT I
e o s
FRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CLCULO CON EJEMPLO PARA LINEALIDAD

DEL MTODO.
6.1 CANTIDAD ADICIONADA VS CANTIDAD RECUPERADA
A) FRMULAS
PENDIENTE
nxy-Xy
l
"2" 2
b = nLJx -(LJ X )
n = nmero de mediciones (cantidad adicionada - cantidad recuperada).

ORDENADA AL ORIGEN
y-blx
b = ='-----=n
COEFICIENTE DE DETERMINACiN
(n(L xy )-( X )(2: y))2
lC(PI)=b l
IO.975,n-2 Sbl
t O.975,n-2 Referirse al Anexo 20, para determinar el valor de la t de Student.

INTERVALO DE CONFIANZA PARA LA ORDENADAAL ORIGEN
lC(Po) = bo IO.975,n-2 SbO
_LX
x=--
COEFICIENTE DE VARIACiN DE REGRESiN.
CVy/x =~xl00
y
ANEXOS'
63
GUiA
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS
1)
Tabular los resultados:
CANTIDAD ADICIONADA (x) - CANTIDAD RECUPERADA (y) DE UN MTODO

CROMATOGRFICO
PLACEBO
ANALTICO
ADICIONADO
1
2
3
4
5
6
7
8
9
x (mg/mL)
y(mg I mL)
1.860
1.860
1.860
2.479
2.479
2.479
3.099
3.099
3.099
1.857
1.885
1.861
2.482
2.485
2.491
3.126
3.115
3.122
j'
2) Calcular ~x, ~y, ~X2, ~y2. ~xy y determinar n:
=1.860 + 1.860 + oo. + 3.099 =22.314

=1.857 + 1.885 + ... + 3.122 =22.424
~X2 = 1.860 2 + 1.860 2 + oo. + 3.099 2 =57.62653
~ y2 =1.857 + 1.885 2 + oo. + 3.122 2 =58.22761
~xy =1.860*1.857 + 1.860*1.885 + ... + 3.099*3.122 =57.9259
~x
~Y
n=9
Calcular b., be y r2.
3)
b = 9x57.9259-22.314x22.424 = 1.01157
I
9x57.62653-22.3142
b = 22.424-1.01157x22.314 =-0.01647
o
2.
r =
9
(9x 57.9259-22.314 x 22.424)2
=0.99971
2
(9x57.62653- 22.314 2)x(9x 58.22761-22.424 )
El valor excede a 0.98
ANEXOS'
64
.~
GUA
DE
4) Calcular Sy/x y
=
yl x
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS
s;
58.22761-1.01157x57.9259-(-0.01647)x22.424 =0.00989
9-2
1
= 0.00989
2 = 0.00652
57.62653- 22.314
9
5) Determinar en el Anexo 20 tO.975.n-2 y calcular 1C(/3,).
Sbl
(0.975.7
= 2.365
[CC.8I) = 1.01157 2.365 xO.00652 = 0.99615, 1.02699

El intervalo incluye la unidad.
6) Calcular x y
ss,
x= 22.314 = 2.47933
9
= 0.00989 "9 +
SbO
2.47933 2
= 0.0165
223142
5762653
- - ' 9- .
7) Calcular lC(b o)'
[CCPo) = -0.01647 2.365 xO.0165 = -0.05548,0.02254

El intervalo incluye el cero.
8) Calcular el CVy/ x :
y = 22.424 = 2.49156
9
CV
y/x
= 0.00989 x 100= 0.397%

2.49156
El valor no excede el 2%.
YvsX
4.00
3.00
>-
2.00
y= 1.0116x - 0.0165
(2 = 0.9997
1.00
0.00
1.50
2.00
2.50
3.00
ANEXOS'
65
3.50
GUA
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS
6.2 PORCENTAJE DE RECOBRO.

A) FRMULAS
MEDIA ARITMTICA:
- y
y=-
DESVIACiN ESTNDAR:
n(/)-(y)2
s=
n(n -1)
CV = ~*lOO
y
INTERVALO DE CONFIANZA PARA LA MEDIA POBLACIONAL.
/C(.L) = y t O.975,n- 1
f;
tO.975,n-1 Referirse al Anexo 20, para determinar el valor de la t de Student.

n = nmero de recobros.
1)

CANTIDAD ADICIONADA - CANTIDAD RECUPERADA - % DE RECOBRO
DE UN MTODO CROMATOGRFICO
PLACEBO
ANALiTICO
ADICIONADO
1
2
3
4
5
6
7
8
9
RECUPERADA
(mg I mL)
%DE
CANTIDAD
ADICIONADA
(mg I mL)
RECOBRO
1.857
1.885
1.861
2.482
2.485
2.491
3.126
3.115
3.122
99.84
101.34
100.05
100.12
100.24
100.48
100.87
100.52
100.74
1.860
1.860
1.860
2.479
2.479
2.479
3.099
3.099
3.099
(y)
y =Es el cociente porcentual de la cantidad recuperada respecto de la cantidad

adicionada.
2) Calcular 1:y, 1:y2 y determinar n.
1:y =99.84 + 101.34 + + 100.74 =904.21339

1:y2 =99.84 2 + 101.34 2 + + 100.742 =90846.39831
n=9
ANEXOS'
66
GuiA
DE
VALIDACIN
DE
MTODOS
3) Calcular y y S:
y
= 904.21339 = 100.46815
9
s=
9x90846.39831-904.21339
9x(9-1)
= 0.4673
4) Calcular el CV:
_ 0.4673 x100 =0.465%

CV - 100.46815

lo 975 8 =
IC(Jl)
t o.975 ,n- 1 y calcular 1C(J..l).
2.306
= 100.46815 2.306x
0.4673
J9 = 100.11,100.83
El intervalo no incluye el valor de 100 .
.\NE<OS
::7
ANALTICOS
GUiA
ANEXO 7.
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS
FRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CLCULO CON EJEMPLO PARA PRECISiN DEL

MTODO (PRECISiN INTERMEDIA).
A) FRMULAS
MEDIA ARITMTICA:
LY
n
y=DESVIACiN ESTNDAR:
n(L/)-(Ly)2
n(n-l)
s=
CV = ~*100
y
n
=nmero de muestras de contenido I potencia I valoracin.
CONTENIDO DE ANALlTO EN mg I 9 PARA UN MTODO BIOLGICO
ANALISTA
o
2
2) Calcular Ly..,
49.85
48.70
50.04
53.43
53.12
54.12
52.53
51.78
51.80
51.86
52.44
52.30
Ly2 Y determinar n.
LY =49.85 + 48.70 + ... + 52.30 =621.97
Ly2 =49.85 2 + 48.70 2 +...+ 52.30 2

n
=12
=32264.7003
3) Calcular y y S:
y = 621.97 =51.83
12
s=
12x 32264.7003 - 621.97 = 1.5805

12x(l2-1)
4) Calcular el CV:
CV
= 1.5805 x l 00 = 3.05
51.83
El CV no excede el 5%.
ANEXOS'
68
GUA
ANEXOS.
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS
FRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CLCULO CON

EJEMPLO PARA ESTABILIDAD ANALTICA DE LA MUESTRA.
A) FRMULAS
MEDIA ARITMTICA DEL ANLISIS INICIAL
- :2>0
.Yo=-170
no
=nmero de muestras del anlisis inicial.
MEDIA ARITMTICA DEL ANLISIS DE CADA CONDICiN DE ALMACENAJE
- :2>
y I. = -
ni = nmero de muestras del anlisis de la i-sima condicin de almacenaje.

DIFERENCIA ABSOLUTA DE LA MEDIA ARITMTICA DE CADA CONDICiN DE
ALMACENAJE RESPECTO DE LA MEDIA ARITMTICA DEL ANLISIS INICIAL
CONTENIDO DE ANALlTO EN % PARA UN MTODO CROMATOGRFICO

TIEMPO DE ALMACENAMIENTO EN EL INYECTOR
INICIAL
MUESTRA
1
2
3
(Yo)
100.05
99.98
100.10
6 horas
24 horas
36 horas
(Y,)
(Y2 )
(Y3)
99.50
99.31
99.50
100.26
99.50
99.31
98.31
98.50
98.31
2) Calcular Yo' Y 1 , Y2 , Y3 Y determinar no' n1 , n2 Y n3

Yo = 100.05 + 99.98 + 100.10 = 300.13
Y, = 99.50 + 99.31+ 99.50 =298.31
Y2 = 100.26 + 99.50+ 99.31 = 299.07
Y 3 = 98.31 + 98.50+ 98.31 = 295.12
no
=3
=3
=3
n, =3
n2
n3
ANEXOS'
69
GUA
DE
VALIDACiN
DE
Yo = 300.13 = 100.0433
3
298.31
3
YI = ------ =99.4367
- - 299.07 _ 99 69
Y2 - --3-.
Y3 = 295.1~ =
98.3733
Id,; = IY1- ~o =199.4367 -100. 04331=0.61

I
Id2: = IY2- ~o\ =19 9.69 -100.0433\ = 0.35

MTODOS
ANALTICOS
GUiA
ANEXO 9.
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALiTICOS
FRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CLCULO CON EJEMPLO PARA lMITE DE DETECCiN
9.1 SEAL RUIDO

1)
SEAL
ANALTICA
pA*seg
MUESTRA
3525
BLANCO O RUIDO
10575
3 * RUIDO
ANALlTO ppm
0.5
4215
6954
9267
1.5
2
11045
2.5
13578
El LD se estima en 2 ppm, que es la cantidad de analito inmediatamente posterior a 3

veces el ruido.
9.2 CURVA DE CALIBRACiN BASADO EN LA DESVIACiN ESTNDAR DE LOS
BLANCOS.
A) FRMULAS PARA LA CURVA DE CALIBRACiN
PENDIENTE
respuesta analtica ).
r2
= __ (n(xy)-(x)(y2
-'-::-O-.-~'-:-''--~-:-~
(n(x 2)-(x)2)(n(l)-(y)2)
INTERVALO DE CONFIANZA PARA LAPENDIENTE
GUiA
DE
VALIDACIN
DE
MTODOS
ANALTICOS
t O.975,n-2 =Referirse al Anexo 20 para determinar el valor de la t de Student.

B) FRMULA PARA LOS BLANCOS
DESVIACiN ESTNDAR DE LOS BLANCOS:
n(>2)_(y)2
n(n -1)
n =nmero de blancos
C) FRMULA PARA EL lMITE DE DETECCIN.
3.3 x s,
LD=-b--"-
D) PROCEDIMIENTO DE CLCULO PARA CURVA DE CALIBRACiN.

CANTIDAD ADICIONADA (x) - RESPUESTA ANAlTICA (y)
MUESTRA
1
2
3
4
5
6
7
8
x (ppm)
y (absorbancia)
0,963
0.963
1.284
1.284
1.605
1.605
1.926
1.926
0.315
0.314
0.417
0.418
0.522
0.521
0.629
0.629
2)
Calcular ~x, ~y, LX2, Ly2, LXY y determinar n:
~x
= 0.963 + 0.963 +.. oo + 1.926 = 11.556
~Y
=0.315 + 0.314 + oo. + 0.629'= 3,765
L x2 = 0.963 2 + 0.9632 +
... +
1.926 2 = 17.72305
~ y2 =
0.3152 + 0.314 2 + oo' + 0.629 2 = 1.88164
~xy =
0.963*0.315 + 0.963*0.314 +oo. + 1.926*0.629 = 5.77479
n=8
ANEXOS'
72
GUiA
3)
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS
Calcular b, y r2.
q = 8x5.77479-11.556x3.765 =0.32632
8 x 17.72305 -11.556 2
r2 =
(8x5.77479-11.556x3.765)2
2 =0.99989
(8x 17.72305 -11.5562)x (8 x 1.88164 -3.765 )
El valor es mayor de 0.98

4)
Calcular bo'
Sy/x
Sbl:
b = 3.765 - 0.32632 x 11.556 =-0.00075

o
8
Sylx =
Sbl =
_1.88164 - 0.32632x 5.77479 - (-Q.00075)x 3.765 =0.00143

8-2
0.00143
11.5562
17.72305 8
= 0.00141
tO.975.n'2
y calcular IC(f31)'
tO.975,6 = 2.447
IC(PI) = 0.32632 2.447 x 0.00141 = 0.32288,0.32977
E) PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA LOS BLANCOS.
BLANCOS
Y (Absorbancia)
1
2
3
4
5
0.003
0.004
0.006
0.002
0.004
2) Calcular 1:y, 1:y2y determinar n:
=0.003 + 0.004 + .,. + 0.004 =0.019

1: y2 =0.003 2 + 0.004 2 + + 0.004 2 = 0.00008
1: y
oo.
n=5
ANEXOS'
73
GUA
3) Calcular
DE
VALIDACIN
DE
MTODOS
ANALTICOS
s;
2
Sb =
5 x 0.00008 - 0.019 =0.00148

5(5 -1)
F) CLCULO DEL LIMITE DE DETECCiN.
= 3.3xO.00148 =0.015ppm
LD
0.32632
9.3 CURVA DE CALIBRACiN BASADA EN LA DESVIACiN ESTNDAR DE REGRESiN.

A) FRMULAS
PENDIENTE
nxy-X'y
b = nL,x
"'" 2 -(L,X)
"'"
2
(n(LXY)-(LX)(LY)/
r = (n(Lx 2)-(Lx)2)(n(Li)-(Ly)2)
2
tO.975 ,n.2 =Referirse al Anexo 20,
para determinar el valor de la t de Student.
LMITE DE DETECCiN.
3.3 xS y 1x
LD=--b~-
ANEXOS'
74
I,
i
I
GUiA
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS
1)
CANTIDAD ADICIONADA (x) - RESPUESTAANALiTICA (y)
f
MUESTRA
1
2
3
4
5
6
7
8
2) Calcular Lx, Ly, Lx2 ,
Lx = 0.963 + 0.963 +
L Y =0.315 + 0.314 +
Lx =
2
x (ppm)
y (absorbancia)
0.963
0.963
1.284
1.284
1.605
1.605
1.926
1.926
0.315
0.314
0.417
0.418
0.522
0.521
0.629
0.629
Ly2 , LXY y determinar n:

+ 1.926 = 11.556
+ 0.629
0.963 + 0.963 +
=3.765
+ 1.9262 = 17.72305
L y2 =0.315 2 + 0.314 2 + + 0.629 2 = 1.88164

LXY = 0.963*0.315 + 0.963*0.314 + ... + 1.926*0.629 = 5.77479
n=8
3) Calcular b, y r2
b = ~~_5:~~~22..=-_!J~~56x2??~'i_ = 0.32632
8x 17.72305-11.556"2
r2 =
2
(8x 5.:.?2.~79-11.556x 3.765)
_= 0.99989
2)
2)x
(8x 17.72305-11.556
(8x 1.88164- 3.765

4) Calcular bo' Sy/x y Sbl:
b = 3.765-0.32632xI1.556 =-0.00075
a
8
I.88164-0.32632x5.77479 -(-0.00075)x3.765 = 0.00143

8-2
Sbl
= 0.00143
=0.00141
17.72305 _ L1.556
8
ANEXOS
75_
GUiA
DE
VALIDACiN
IC(P.)
MTODOS
ANALTICOS
tO.975,n-2 y calcular 1C(f3,).
(0.975,6
DE
=2.447
= 0.32632 2.447 x 0.00141 = 0.32288,0.32977

6) Calcular el lmite de deteccin.
LD = 3.3xO.00143 = 0.014
0.32632
PP
9.4 CURVA DE CALIBRACiN BASADO EN LA DESVIACiN ESTNDAR DE LA

ORDENADA AL ORIGEN.
A) FRMULAS
PENDIENTE
nLxy- LxLy
b = nI>2 -CLX)2
S" =S,,
~LX2 _ (L
nX)2
L y -bLXy-boLY
_ I
SYIX-~
b
n-2
L>-bLx
==--~-
tO.975,n-2 = Referirse al Anexo 20, para
determinar el valor de la t de Student.
DESVIACiN ESTNDAR DE LA ORDENADA AL ORIGEN.
ANEXOS'
76
GUiA
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS
- >
X=--
n
LMITE DE DETECCiN.
LD=
3.3xSb
b,
1)
CANTIDAD ADICIONADA (x) - RESPUESTA ANALTICA (y)
MUESTRA
x (ppm)
y (absorbancia)
0.963
0.963
1.284
1.284
1.605
1.605
1.926
1.926
0.315
0.314
0.417
0.418
0.522
0.521
0.629
0.629
1
2
3
4
5
6
7
8
L.X, L.y, L.X2, L.y2, L.xy y determinar n:
2)
Calcular
L.X
=0.963 + 0.963 +
+ 1.926
=11.556
L. y = 0.315 + 0.314 + + 0.629 = 3.765

L. x2 = 0.963 2 + 0.963 2 + + 1.9262 =17.72305
L. y2 = 0.315 2 + 0.314 2 + + 0.629 2 = 1.88164
L.xy = 0.963*0.315 + 0.963*0.314 + ... + 1.926*0.629 = 5.77479
n=8
3)
Calcular b, y r 2
b = 8x5.77479-11.556x3.765 =0.32632
1
8 x 17.72305-11.556 2
r2 =
(8x5.77479-11.556 x 3.765)2
=0.99989
(8 x 17.72305-11.556 2) x (8 x 1.88164 -3.765 2)

4)
Calcular bo'
Sy/x
y Sb1
b = 3.765-0.32632x11.556 =-0.00075
8
ANEXOS
77
GUA
S Y/ J:
S61
VALIDACIN
DE
MTODOS
1.88164-0.32632 x 5.77479 - (-0.00075) x 3.765

8-2
=:
=:
DE
0.00143
1
=0.00141
2
17.72305 _ 11.556
8
(0975,6
IC(j3I)
tO.97S.n-2
=y calcular IC({3J
2.447
=:
0.32632 2.447xO.00141 =: 0.32288,0.32977
6) Calcular
=:
x y s,
11.556 =1.4445
8
2
5 60 =0.00143
1.
1.4445
8'+-----=0.00210
2
17.72305- 11.556
8
7) Calcular el lmite de deteccin.
LD = 3.3xO.0021O =0.021 m
0.32632
PP
ANEXOS'
78
=:
ANALTICOS
0.00143
GUA
ANEXO 10.
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS
FRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CLCULO CON EJEMPLO

PARA liMITE DE CUANTIFICACiN
10.1 SEAL RUIDO

1)
SEAL
MUESTRA
ANALlT/CA
pA*seg
PLACEBOANALITICO (BLANCO O RUIDO)

10" RUIDO
ANALlTO ppm
3525
35250
5
10
15
20
25
15228
26250
37145
42180
59624
El LC se estima en 15 ppm, que es la cantidad del analito, inmediatamente posterior a 10

veces el ruido.
10.2 CURVA DE CALIBRACiN BASADO EN LA DESVIACiN ESTNDAR DE LOS

BLANCOS.
A) FRMULAS PARA LA CURVA DE CALIBRACiN
PENDIENTE
n = nmero de mediciones (concentracin - respuesta analtica ).

(n(xy)-(x)(y2
r = (n(x 2)_(x)2)(n(y2)-(y)2)
2
leefi)=b 1 IO.975,n-2 S b
~.
ANEXOS'
79
GUiA
tO.975.n-2
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS
= Referirse al Anexo 20, para determinar el valor de la t de Student.
B) FRMULA PARA LOS BLANCOS

DESVIACiN ESTNDAR DE LOS BLANCOS:
n(y2)_(2
= .I--=~----"'=--
Sb
n(n-l)
n = nmero de blancos
C) FRMULA PARA EL LIMITE DE CUANTIFICACiN.
Le = IOxSb
b)
D) PROCEDIMIENTO DE CLCULO PARA CURVA DE CALIBRACiN.
1)
CANTIDAD ADICIONADA (x) - RESPUESTAANALlTICA (y)
PLACEBO
ANAL\nco
x (ppm)
y (absorbancia)
0.963
0.963
1.284
1.284
1.605
1.605
1.926
1.926
0.315
0.314
0.417
0.418
0.522
0.521
0.629
0.629
ADICIONADO
1
2
3
4
5
6
7
8
2)
Calcular LX, LY, LX2 , Ly2 ,LXY determinar n:
LX
= 0.963 + 0.963 +.oo + 1.926
=11.556
L y = 0.315 + 0.314 + oo. + 0.629 = 3.765

L x2 = 0.963 2 + 0.963 2 + oo. + 1.926 2 =17.72305
L y 2 =0.315 2 + 0.314 2 + oo. + 0.629 2 =1.88164
LXY
=0.963*0.315 + 0.963*0.314
+ oo. + 1.926*0.629
=5.77479
n=8
Calcular b, y r2
3)
= 8x5.77479-11.556x3.765 = 0.32632
)
r2 =
8x 17.72305-11.556 2
2
(8x5.77479-11.556 x3.765)
2 =0.99989
(8 x 17.72305-11.556 2 ) x (8 x 1.88164 -3.765 )
ANEXOS'
80
GUA
DE
VALIDACiN
DE
M.TODOS
ANALTICOS
El valor excede 0.98

4) Calcular ba, Sytx y Sb'
ha = 3.765-0.32632xl1.556 = -0.00075
8
1.88164- 0.32632x 5.77479 - (-0.00075) X 3.765 = 0.00143
8-2
Sbl
= 0.00143
17.72305_ 11.556
8
=0.00141
5) Determinar en el Anexo 20 tO.975.n-2 y calcular 1C({3,).

10.975,6
= 2.447
IC(Pl)= 0.326322.447xO.00141 = 0.32288,0.32977

E) PROCEDIMIENTO DE CLCULO PARA LOS BLANCOS.
1)

PLACEBO ANALTICO (BLANCOS) Y (Absorbancia)
2)
PLACEBO
ANALiTICO
(BLANCOS)
y (Absorbancia)
0.003
0.004
0.006
0.002
0.004
Calcular "iy, "iy2 y determinar n:
"i y =0.003 + 0.004 + ... + 0.004 =0.019

"i y2 = 0.003 2 + 0.004 2 + ... + 0.004 2 =0.00008
n=5
3)
Calcular
Sb =
s;
5xO.00008-0.019
5(5-1)
=0.00148
F) CLCULO DEL LMITE DE CUANTIFICACiN.
Le = 10xO.00148
0.32632
= 0.045
PP
ANEXOS'
81
GUiA
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS
10.3 CURVA DE CALIBRACiN BASADA EN LA DESVIACfN ESTNDAR DE

REGRESiN.
A) FRMULAS
PENDIENTE
n = nmero de mediciones (concentracin - respuesta analtica ).

2
(n(xy)-(x)(y))2
- (n(x 2)_(x)2)(n(y2)-(y)2)
r -
tO.975.n-2
=Referirse al Anexo 20, para determinar el valor de la t de Student.
LMITE DE CUANTIFICACiN.
lOxS y t x
LC=---
bl
ANEXOS'
82
GUA
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS
8) PROCEDIMIENTO DE CLCULO.
1)

CANTIDAD ADICIONADA (x) - RESPUESTA ANAlTICA (y)
PLACEBO
ANAlTICO
x (ppm)
y (absorbancia)
0.963
0.963
1.284
1.284
1.605
1.605
1.926
1.926
0.315
0.314
0.417
0.418
0.522
0.521
0.629
0.629
ADICIONADO
1
2
3
4
5
6
7
8
2)
Calcular
LX, LY, LX2 , Ly 2 , LXY y determinar n:
LX = 0.963 + 0.963 +
+ 1.926 = 11.556
L Y =0.315 + 0.314 + + 0.629 =3.765

L x2 = 0.963 2 + 0.963 2 + + 1.926 2 =17.72305
L y2 = 0.315 2 + 0.314 2 + + 0.629 2 = 1.88164
LXY =0.963*0.315 + 0.963*0.314 + ... + 1.926*0.629 =5.77479

n=8
Calcular b, y r2
3)
b - 8x5.77479-11.556x3.765 =0.32632
1-
8xI7.72305-11.5562
2
(8x5.77479-11.556 x3.765)
=0.99989
r 2
- (8 xI7.72305-11.556 2)x(8 x1.88164-3.765 )
2
El valor excede 0.98

4)
Calcular b a, Sy/x y Sbl
b = 3.765 - 0.32632 x 11.556 = -0.00075
1.88164-0.32632x5.77479-(-0.00075) x3.765 = 0.00143

8-2
Sbl
= 0.00143
17.72305_
11.5;6
5) Determinar en el Anexo 20,
2 =0.00141
tO.975,n-2 y calcular 1C(f31) .
t 0.975,6 = 2.441
JCCPI) = 0.32632 2.447 x 0.00141 = 0.32288 , 0.32977
ANEXOS'
83
GUA
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS

6) Calcular el lmite de cuantificacin.
LC = 10xO.00143 = 0.044 ppm

0.32632
10.4 CURVA DE CALIBRACiN BASADO EN LA DESVIACiN ESTNDAR DE LA
ORDENADA AL ORIGEN.
A) FRMULAS
PENDIENTE
n = nmero de mediciones ,..:oncentracn - respuesta analtica ).

s = fy2 -bxy-boy
yIx
n-2
bo ===-y_-_b---,=--X
n
t O.975,n-2= Referirse al Anexo 20, para determinar el valor de la t de Student.
DESVIACiN ESTNDAR DE LA ORDENADA AL ORIGEN.
- LX
X=--
n
LIMITE DE CUANTIFICACiN.
LC=
10xSb
ANEXOS'
84
GUiA
DE
VALIDACIN
DE
MTODOS
ANALTICOS
1)

CANTIDAD ADICIONADA (x) - RESPUESTA ANALTICA (y)
PLACEBO
ANALTICO
x (ppm)
y (absorbancia)
0.963
0.963
1.284
1.284
1.605
1.605
1.926
1.926
0.315
0.314
0.417
0.418
0.522
0.521
0.629
0.629
ADICIONADO
1
2
3
.
4
5
6
7
8
2) Calcular
L.X, L.y, L.X2 , L.y2, L.xy y determinar n:
L.X =0.963 + 0.963 + + 1.926 =11.556

L. Y = 0.315 + 0.314 + + 0.629 = 3.765
L. x2 = 0.963 2 + 0.963 2 + oo. + 1.9262 = 17.72305
L.y2 = 0.315 2 + 0.314 2 + oo. + 0.629 2 = 1.88164
L.xy = 0.963*0.315 + 0.963*0.314 + .oo + 1.926*0.629 = 5.77479
n=8
3) Calcular b, y r2 .
_ 8x5.77479-11.556 x3.765 =0.32632

b 8 x 17.72305 -11.556 2
l
(8x5.77479-11.556x3.765)
=0.99989
2
2
r = (8x 17.72305-11.556 ) x (8 x 1.88164- 3.765 )
2

4) Calcular b o'
Sy/x
Sbl:
b = 3.765 - 0.32632 x 11.556

o
8
Sylx
Sbl
=-0.00075
1.88164 0.32632x 5.77479 -(-0.00075)x3.765 = 0.00143

8-2
= 0.00143
1 - - - - - - - - ; ;2-
11.556
17.72305 8
=0.00141
ANEXOS'
85
GUiA
DE
VALIDACiN
DE
MTO(')OS
5) Determinar en el Anexo 20, to.975,n-2 y calcular 1C(f3J

(0975,6 =
JC(P.)
2.447
= 0.32632 2.447 x 0.00141 = 0.32288,0.32977

6) Calcular
xy Sbo
X = 11.556 = 1.4445
8
SbO =
1
1.4445 2
0.00143 - +
=0.00210
2
8 17.72305 _ 11.556
8
7) Calcular el lmite de cuantificacin.
0064 ppm
Le =.10xO.00210 =.
0.32632
ANEXOS'
86
ANALTICOS
GUA
ANEXO 11.
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS
FRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CLCULO CON EJEMPLO PARA ROBUSTEZ.

A) FRMULAS
MEDIA ARITMTICA DE LA CONDICiN NORMAL DE OPERACiN
- Yo
Yo=-no
no
=nmero de muestras de la condicin normal de operacin.
MEDIA ARITMTICA DEL ANLISIS DE CADA CONDICiN DE OPERACiN.

DIFERENTE A LA CONDICiN NORMAL
ni = nmero demuestras de la i-sima condicin de operacin.

DIFERENCIAABSOLurA DE LA MEDIAARITMTICA DE CADA CONDICiN
RESPECTO DE LA MEDIA ARITMTICA DE LA CONDICiN NORMAL
. VALORACiN (%) DELANALlTO
ROBUSTEZ AL % DE UN COMPONENTE DE LA FASE MVIL DE UN MTODO
CROMATOGRFICO
CONDICION
0.31%
0.34%
0.37%
BAJA
NORMAL
ALTA
(Y,)
(Yo)
(Y2)
101.88
100.55
B9.QO
101.88
100.22
98.74
101.37
103.63
99.33
MUESTRA
2) Calcular LYo'
LY" LY2 Y determinar. no' n, Y n2

LYo = 100.55 + 100.22 + 103.63 = 304.40
LY, =101.88 + 101.88+ 101.37 =305.13
LY2 = 99.00 + 98.74+ 99.33 = 297.07
no
=3
=3
n, =3
n2
ANEXOS'
87
GUA
3) Calcular
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
Yo, y32 :
Yo = 304.4 = 101.4667
3
YI = 305.13 = 101.71
3
Y2 = 297.07 = 99.0233
3
4) Calcular 1dil:
dll =
/YI-., =1101.71-101.46671 = 0.2433
El valor excede el 2%.
ANEXOS'
88
ANALTICOS
GUA
ANEXO 12.
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS
FRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CLCULO CON EJEMPLO PARA TOLERANCIA.
A) FRMULAS
MEDIA ARITMTICA:
y
n
y=DESVIACiN ESTNDAR:
n(/)-(y)2
s=
n(n-l)
CV = :'*100
y
n
=nmero de muestras de contenido I potencia I valoracin.
1)

VALORACiN DEL ANALlTO
TOLERANCIA DE UN MTODO CROMATOGRFICO A EQUIPOS
2) Calcular LY,
Ly =98.69
MUESTRA
CLAR 1
CLAR2
98.69
97.9
98.51
97.5
98.35
98.11
Li y determinar n.
+ 98.51 + oo. + 98.11
=589.06
L y2 = 98.69 + 98.51 +oo.+ 98.112 = 57832.8908

n=6
2
3) Calcular y y S :
y= 589.06 =98.1767
6
/6 x 57832.8908 - 589.06
~
6x(6-1)
= 0.4344
4) Calcular el CV:
CV = 0.4344 X 100-044/
-.
/0
98.1767
El valor no es mayor de 2%.
EXOS .
89
GUA
ANEXO 13.
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS

REPETIBILlDAD EN EXACTITUD PARA COMPARACiN DE 2 MTODOS ANALTICOS.
A) FRMULAS
VARIANZA
Nota: Calcular la varianza de cada mtodo y para fines de clculo del intervalo de
confianza para la razn de varianzas, se debe establecer:
S,2 =varianza menor.

S/
=varianza mayor.
INTERVALO DE CONFIANZA PARA LA RAZN DE VARIANZAS

2
2 S2
< a 2 . < ...-LxF,
S2 r:"
2 x rO.025,n 2 -l,n,-l 2 - S2
O.975,n2- 1,nl-1
~
al
FO.025,llrl,Il,-1 y FO.975,1l2_1,1l,.1=Referirse al Anexo 21, para determinar el valor de la F de

Fisher. nz-1 son grados de libertad de la varianza mayor, que corresponden a los grados
de libertad del numerador; y n 1-1 son los grados de libertad de la varianza menor, que
corresponden a los grados de libertad del denominador.
n, =nmero de recobros del mtodo de varianza menor.

nz
=nmero de recobros del mtodo de varianza mayor.
1)
% DE RECOBRO
PLACEBO
ANALTICO
METODOA
METODO B
101.22
99.56
100.39
99.11
100.19
100.95
100.08
100.59
100.22
99.97
100.47
99.85
ADICIONADO
1
2
3
4
5
ANEXOS'
90
GUA
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS
2) Calcular ~y, ~y2 Y determinar n, para cada mtodo analtico:

% DE RECOBRO
MTODO B
MTODO A
~y
~y2
101.22 + 99.56 + ... + 100.95 =601.42
100.08 + 100.59 + ... + 99.85 =601.18

2
2
2
101.22 + 99.56 + ... + 100.95 =60287.5648 100.082 + 100.59 2 + ... + 99.852 =60236.6472
6
3) Calcular la varianza de cada mtodo:
Mtodo A:
s2
==
6 x 60287.5648 - 60 1.42
6x(6-1)
== 0.6457
Mtodo B:
S2 === 6x60236.6472-601.18
6x(6-1)
==0.0830
4) Determinar la varianza mayor (S22) y la varianza menor (S,2)
s? == 0.0830
si == 0.B457
F0.025.0
2,1.0,,1
YF0.975.02,1.0,,1'.
FO.025.S.S = 0.14
F097SSS=7.15
6) Calcular el intervalo de confianza para la razn de varianzas:
2
0.6457 xO.14S~S 0.6457 x7.15

0.0830
0'2
0.0830
El intervalo de confianza no incluye el valor de 1.
ANEXOS'
91
GUiA
:0 14.
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS
FRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CLCULO CON EJEMPLO PARA REPETIBILlDAD

EN LINEALIDAD DEL MTODO PARA COMPARACiN DE 2 MTODOS ANALTICOS.
A) FRMULAS
VARIANZA
:y2 _(_~_)_~
., (n -1)
S/ varianza menor.
S/ varianza mayor.
y Fo.975.n2-I.n,-= Referirse al Anexo 21, para determinar el valor de la F de

Fisher. n2-1 son grados de libertad de la varianza mayor, que corresponden a los grados
eje libertad del numerador; y n,-1 son los grados de libertad de la varianza menor, que
Fo.025.n2.1.n,-1
=nmero de recobros del mtodo de varianza menor.
n2 =nmero de recobros del mtodo de varianza mayor.
MTODO A
CANTIDAD
ADICIONADA
(mg/g)
400.00
400.00
400.00
400.00
500.00
500.00
500.00
500.00
550.00
550.00
550.00
550.00
MTODO B
CANTIDAD
RECUPERADA
(mg/g)
CANTIDAD
ADICIONADA
(mg/g)
CANTIDAD
RECUPERADA
(mg/g)
392.88
389.88
397.72
393.76
513.65
497.20
494.00
489.00
543.02
535.15
545.82
534.38
400.00
400.00
400.00
400.00
400.00
500.00
500.00
500.00
'500.00
500.00
550.00
550.00
550.00
550.00
550.00
407.72
409.24
398.36
405.60
398.36
493.95
511.90
493.85
393.80
497.20
534.49
545.10
550.17
551.93
535.21
ANEXOS'
92
GUA
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS
2) Calcular el porcentaje de recobro de cada muestra en cada mtodo (y), al obtener el

cociente de la cantidad recuperada respecto de la cantidad adicionada expresada en
porcentaje.
% DE RECOBRO
MTODO A
(392.88/400.00)*100
MTODO B
=98.22
{407.72/400.00)*100
97.47
102.31
99.43
98.44
99.56
101.40
102.73
99.44
99.59
=101.93
98.79
102.38
98.77
98.80
97.80
98.73
98.76
99.44
97.30
99.24
97.18
99.11
100.03
97.16
100.35
97.31
3) Calcular Sy, Sy2 y determinar n, para cada mtodo analtico:
MTODO B
MTODO A
"Ly
98.22 + 97.47 +
"Ly2
98.22 2 + 97.47 2 +
oo'
oo.
+ 97.16 = 1184.7609
+ 97.16 2 = 116996.0999
101.93 + 102.31 + + 97.31 = 1496.9118

101.932 + 102.31 2 + + 97.31 2 = 149420.3404
oo.
15
12
oo.

Mtodo A:
2
S2 = 12x116996.0999-1184.7609 =2.2332
12x(l2-1)
Mtodo B:
2
S2 == 15x149420.3404-1496.9118 =2.6672
15x(l5-1)
5) Determinar la varianza mayor (S/) y la varianza menor ( S/)
s; =2.2332
si = 2.6672
ANEXOS'
93
GUA
DE
VALIDACiN
F0025.14,11
F0975.14,11
DE
MTODOS
F0.0_5.n,-1.n
~
YF0.975.n ,-I.n ,-1\
,-1
= 0.32
= 3.36
2.6673
- - - x0.32
2.2332
0.39
0-;
2
0-,
2.6673
------x3.36
2.2332
~ o-~ ~ 4.01
0-,
El intervalo de confianza incluye el valor de 1.
ANEXOS'
94
ANALTICOS
GUiA
ANEXO 15.
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALiTICOS
FRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CLCULO CON EJEMPLO EN EXACTITUD

PARA COMPARACiN DE 2 MTODOS ANAlTICOS.
1.0 COMPARACiN DE REPETIBILlDAD DE AMBOS MTODOS
A) FRMULAS
VARIANZA
2
n 2:>2
-el> )2
S = ~=----'=--n (n -1)
S/
S/
varianza menor.
varianza mayor.

2
~1.2 x F,O.025,n, -l,n-l

S1
2
:;;(J'2
2
S2 x F,
S2
O.975,n, -I,n,-l
(J'I
FO.o:!5.n, . (,n ' . 1 y Fo.975,n2. l. n , . 1 Referirse al Anexo 21, para determinar el valor de la F
de Fisher. nz-1 sangrados de libertad de la varianza mayor, que corresponden a los
grados de libertad del numerador; y n 1-1 son los grados de libertad de la varianza
menor, que corresponden a los grados de libertad del denominador.
n 1 = nmero de recobros del mtodo de varianza menor.
n 2 =nmero de recobros del mtodo de varianza mayor.
Las varianzas son iguales si en el intervalo de confianza incluye la unidad.
2.0 IGUAL REPETIBILlDAD (VARIANZAS EQUIVALENTES).
A) FRMULAS.
MEDIA ARITMTICA DEL MTODO 1:
Y2
Y2 = - - n2
VARIANZA DEL MTODO 1
'L>l -
2
ni
(YI)2
SI = ---'=---==-ni (ni -1)

2
n2 Y~ _(Y2)2
n2(n2 - l)
S2 =..
ANEXOS'
95
GUA
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALITICOS
INTERVALO DE CONFIANZA PARA LA DIFERENCIA DE 2 MEDIAS POBLACIONALES.
to.975.n, +n,-2
n, = nmero de rec-obros del mtodo 1.

n2 = nmero de recobros del mtodo 2.
1)

% DE RECOBRO
PLACEBO
ANALTICO
MTODO A
MTODO B
98.22
101.58
98.44
99.44
100.25
97.16
101.93
99.56
101.40
98.79
102.38
99.11
ADICIONADO
1
2
3
4
5
6
2) Calcular "i.y, "i.y2 y determinar n, para cada mtodo analtico:

MTODO A
MTODO B
=
=
"i.y2
98.22 + 101.58 +oo. + 97.16 595.09

98.22 2 + 101.58 2 + .oo + 97.16 2 59034.5401
"i.y

Mtodo A:
52
,
= 6~~?O~,!:5401- 59?09 = 2.5044

6x(6-1)
Mtodo B:
52
= .6:<~~~42:?_~?! -=_~?3.172
2.4249
6x(6-1)
4) Determinar la varianza mayor (S/) y la varianza menor (S,2):
S,2
= 2.5044
si = 2.4249
F002555
F O.975,5,5
F-0.025.n, -\.n 1-\ Y Fo. 975.n, -Ln, -1 :
= 0.14
= 7.15
ANEXOS'
96
=603.17
=60647.7991
101.93 + 99.56 +oo. + 99.11

101.93 2 + 99.56 2 + oo. + 99.112
GUA
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS
6) Calcular el intervalo de confianza para la razn de varanzas:
ai
2.S044
2.S044
--xO.14:$-- < - - x 7 IS
2.4249
a,2 - 2.4249
.
El intervalo de confianza incluye el valor de 1.

7) Tabular otra vez los resultados:
% DE RECOBRO
Calcular Ly,. Ly/.
8)
MTODO 1
MTODO 2
98.22
101.93
101.58
99.56
98.44
101.40
99.44
100.25
97.16
98.79
102.38
99.11
LY2 , LY/ y determinar n, y n2 :
LY,= 98.22 + 101.58 + + 97.16 =595.09

LY/ = 98.22 2 + 101.58 2 + ... + 97.16 2 = 59034.5401
LY2 = 101.93 + 99.56 + + 99.11 = 603,17
LY/= 101.93 2 + 99.56 2 + + 99.112 = 60647.7991
"0
oo'
oo.
n1 = 6
n2 = 6
- 603.17 = 100.5283
6
10) Calcular S/.
Y2
st
S2
~.~ S9034oS4~~-=-~~:..~~2
2.5044
6x(6-1)
s: = 6 x 606~7.7??.1..:-_?~~~.!]_ =2.4249
2
6x(6-1)

(0.975,10
tO.975.n\ +n,-2
y calcular 1C(lld.l2)O
= 2.228
ISX2.S044+SX2.4249.[1 1]
ICCf-l1 - f-l2) = (99.1817 - 100oS283)2.228, 1--'------ - + .. = -3.37,0.67
ID
El intervalo de confianza incluye el cero.

ANEXOS'
97
GUiA
DE
VALIDACIN
DE
MTODOS
ANALTICOS
8)
Calcular Yl' Y/o y2 Y/ y determinar n, y n2:

y,= 102.15 + 98.26 + ... + 99.15 = 602.38
Y/= 102.152 + 98.26 2 + ... + 99.15 2 = 60500.4108
Y2= 100.93 + 99.56 + ... + 99.11 = 600.16
Y/= 100.932 + 99.56 2 + ... + 99.112 =60034.1916
n1=6
n2= 6
9) Calcular Y"
Y1 2:
YI = 602.38 = 100.3967
6
Y2 = 600.16 =
100.0267
6
10) Calcular
S~
S/. S/=
= 6x60500AI08-602.38 2
=4.6933
6x(6-1)
S2
2
6 x 60034.1916 = -----.--
600.16
6 x (6 -1)
= 0.4375
11) Calcular gl.
t 0.975.6
tO.975.gl
y calcular IC(Jld12)'
=2.447
.
[4.6933 0.4375
JCCPI - P2) = (100.3967 -100.0267) 2.447,1-- + - - = -1.89,2.63
'1
ANEXOS'
98
GUiA
2)
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALiTICOS
Calcular y, y2 y determinar n, para cada mtodo analtico:

MTODO A
MTODO B
102.15 + 98.26 + ... + 99.15 = 602.38
y2
102.152 + 98.26 2 + ... + 99.15 2 = 60500.4108
100.93 + 99.56 + ... + 99.11 = 600.16

100.93 2 + 99.56 2 + .z, + 99.11 2 = 60034.1916
3)
Calcular la varianza de cada mtodo:
Mtodo A:
2
= 6 x 60500.4108 -
602.38 =4.6933
6x(6-1)
S2
A
Mtodo 8:
2
6 x 60034.1916 - 600.16 = 0.4375

SB 6x(6-1)
2 _
4) Determinar la varianza mayor (8 22) y la varianza menor (8/)

S2
= 0.4375
si = 4.6933
5) Determinar en el Anexo 21 Fo.o25.nz.l.n,.1
FO.025.5,5
y Fo.975.nz.l.n,.1
= 0.14
F097555=7.15
4.6933 xO.14:o:::;
2
u2
0.4375
u2
s 4.6933 x7.15
0.4375
u2
1.50:0:::; _2 :o: :; 76.67
u 12
7)
Tabular otra vez los resultados:
MTODO 1
MTODO 2
102.15
98.26
100.65
98.51
103.66
99.15
100.93
99.56
100.40
99.79
100.37
99.11
./
lt
:1
J
l'1
1
jI
1I
11
ANEXOS'
99
GUiA
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS
3.0 DIFERENTE REPETIBILlDAO (VARIANZAS DIFERENTES).

FRMULAS.
:>\
y\=-nI
- Y2
)') =---
n2
2
SI
/1:>? _(YI)2
= ---------.ni
(/11 -1)
/12Y2
2
" " 2 -(Y2)
""
2
S1 =. ----------.
-- -.
/12 (n2 -1)
INTERVALO DE CONFIANZA PARA LA DIFERENCIA DE 2 MEDIAS POBLACIONALES_
t 0 975 . gl =Referirse al Anexo 20, para determinar el valor de la t de Student.

nl = nmero de recobros del mtodo 1.
m = nmero derecobros del mtodo 2.

gl =.
[ ~12 +~i]2
/11
n2
fS{Jl
: 111
'e.. _ . ,__..
111 +
rI ~l.l
2 -
/12
h..__~_
/1 2 + 1
El valor de gl, debe ser redondeado al entero inmediato anterior.
n, = nmero de recobros del mtodo 1.

n 2 = nmero de recobros del mtodo 2.
1)
% DE RECOBRO
PLACEBO ANAlTICO ADICIONADO
MTODO 1
MTOOO2
102.15
100.93
98.26
99.56
100.65
100.40
4
5
6
98.51
103.66
99.15
99.79
100.37
ANEXOS'
100
99.11
GUiA
ANEXO 16.
DE
VALIDACIN
DE
MTODOS
ANALTICOS
FRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CLCULO CON EJEMPLO EN LINEALIDAD

DEL MTODO PARA COMPARACiN DE 2 MTODOS ANALTICOS.
16.1 CANTIDAD ADICIONADA (x) VS CANTIDAD RECUPERADA (y)
A)
FRMULAS.
SUMATORIAS.
MTODO 1
MTODO 2
Lx,
LX,2
Lx,
LX22
LY2
Ly/
LXY2
LY,
Ly,2
LXYl
El subndice, indica la sumatoria del mtodo respectivo.

PENDIENTE DEL MTODO 1.
n, = nmero de mediciones (cantidad adicionada - cantidad recuperada) del mtodo 1.

PENDIENTE DEL MTODO 2.
n2 = nmero de mediciones (cantidad adicionada - cantidad recuperada) del mtodo 2.

ORDENADA AL ORIGEN DEL MTODO 1.
ORDEtIADAAL ORIGEN DEL MTODO 2.
DESVIACiN ESTNDAR DE REGRESiN.
yl-bxy -boy + y~ -b2XY2 -b02Y2

SVlx =
n +n2-4
ANEXOS
101
GUiA
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS
INTERVALO DE CONFIANZA PARA LA DIFERENCIA 8E LAS 2 PENDIENTES
Donde:
t 0.975.n 1 + n,-I = Referirse al Anexo 20, para determinar el valor de la t de Student.
INTERVALO DE CONFIANZA PARA LA DIFERENCIA DE LAS ORDENADAS AL

ORIGEN
C(Po I
P02 ) = (b oI
b02) t 0.975'//1 +//2 -4 SbOl -b"2
Donde:
B) PROCEDIMIENTO DE CALCULO.
1)

MTODO A
CANTIDAD
ADICIONADA
(mg/g)
400.00
400.00
400.00
400.00
500.00
500.00
500.00
500.00
550.00
550.00
550.00
550.00
MTODO B
CANTIDAD
RECUPERADA
(mg/g)
CANTIDAD
ADICIONADA
(mg/g)
CANTIDAD
RECUPERADA
(mg/g)
392.88
389.88
397.72
393.76
513.65
497.20
494.00
489.00
543.02
535.15
545.82
534.38
400.00
400.00
400.00
400.00
400.00
500.00
500.00
500.00
500.00
500.00
550.00
550.00
550.00
550.00
550.00
407.72
409.24
398.36
405.60
398.36
493.95
511.90
493.85
393.80
497.20
534.49
545.10
550.17
551.93
535.21
ANEXOS'
102
GUA
2) Calcular
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS
2
XI' X,2 , X1 , YI ' y2 , xy , X2 ' >~ 'Y2' y~, xy
determinar n, y n2 .
METODO 1
x, = 400.00 + 400.00 + + 550.00 = 5800.0000

x; = 400.002+ 400.002+ + 550.002= 2850000.0000
oo.
oO.
YI = 392.88 + 389.88 + ... + 534.38 = 5726.4600

y2 = 392.882 + 389.882 +
Oo.
+ 534.382 = 2778528.1070
xy = 400.00*392.88 + 400.00*389.88 +
oo.
+ 550.00*534.38 = 28137245000
n,=12
METODO 2
x = 400.00 + 400.00 + ... + 550.00 = 7250.0000

I x ~ = 400.002+ 400.002+ + 550.00 = 3562500.0000
I Y2 = 407.72 + 409.24 + '" + 535.21 = 7226.7600
I y~ = 40772 + 409.24 + ... + 535.212 = 3533049.5062
2
'Oo
") Xl',
J-J
=:
400.00*407.72
40000*409.24
+ 55000*535.21
+.
= 354730900C;'~'
n 2= 15
3) Calcular b ll , b,2' bOl Y b o2 :
hl l
12x 2813724.5000 - 5800.0000x 5726.4600

'=
..- -
12x 2850000.0000 - (5800.0000) 2
b2
'=
bOl '=
15x3547309.0000-=-J??Q:OOOOx7~26:7600 =0.9321
15 x 3562500.0000 - (7250.0000)2
57?6:460~ -~-?~~~~.~8.9Q.~000 = 1 4445

12
b02
=09843
= 72~6:7~?g~.~.2~~J~2?50.:~0~0
= 31.2483
15
4) Calcular SlY y Sb ll " b'2:

Sylx
'=
i 2 778528.-107()::'O~83~ 28-1372'4.5'000'- 1'.4445'~ 5726.4600 +'3533049.5062 - . 93 2 I x 3S473OY GOnO - :;1.24X.'

.,J.------.
.--..---.. - -.. - --..-.----.. . -- . --.. -.. ----2-3---.. . ..-....- ...
SxIy = 7.3540
-7 3540
bll-bl2
-.
_.
r=_.====.-_~__._=~_=~-=-_==.~:~:~~=~T=~-.-_~ ~. ==0.0457
(5800.0000)2
'\ 2850000.0000 .'
~
12
l'
ANEXOS'
(7250.0000)2
3562500.0000 - ----- .. ----15
103
GUiA
DE
VALIDACiN
(0.975,23
(0975.23
DE
MTODOS
ANALITICOS
Y calcular IC( f3, 1-(3 12 ) :
= 2.069
IC(PII -
P12 ) = (0.9843 -
0.9321) 2.069 x 0.0457 = -0.0423 , 0.1467

6) Calcular
..
x
1
x~
x" x"
y S bo,-b o2
5800.0000
= -----.-.
= 483.3333
12
7~~~.:~00~ = 483.3333
15
: l'
Sb o l-b02
"1'- -.---.
(4li"J.3333)2
= 7.354 12 +"i"s +---------(5-800.0000)2

2850000.0000 -- --" .. -----12
-1;
(483.3333)2
+ ._' _.... -_._.--._..----_ ..- ._- _.
(7250.0000)2
3562500.0000 - --.-.-----15
SbOl -b o, = 22.2581
7) Calcular IC(f301-f30 ) .
= (1.4445 -
[CCPOI - P02)
31.2483) 2.069 x 22.2581 = 75.8482 , 16.2406

16.2 PORCENTAJE DE RECOBRO.
1.0 COMPARACiN DE REPETIBILlDAD DE AMBOS MTODOS
A) FRMULAS
VARIANZA
n y2
-(L> )2
n (n
._-
-1)
Nota: Calcular fa varianza de cada mtodo y para fines de calculo del intervalo de
S,2 varianza menor.
S22 varianza mayor.
si
0";
si
- 2 x F0.025,/12 -1,/1,-1 <

-=-2 --< S2 x Fo.975 ,/1, --,11 1
1SI
0"1
I
o
Fo.025.n,.I,n .1 Y F O.975.n,.I,nl.=Referirse al Anexo 21, para determinar el valor de la F de

Fisher. n2 son grados de libertad de la varianza mayor, que corresponden a los grados
de libertad del numerador; y n,-1 son los grados de libertad de la varianza menor, que
-1
n, = nmero de recobros del mtodo de varianza menor.

n2 =nmero de recobros del mtodo de varianza mayor.
Las varianzas son iguales si en el intervalo de confianza incluye la unidad. Si las
varianzas son iguales desarrolle el punto 2. Si las varianzas no son equivalentes
desarrolle el punto 3.
ANEXOS'
104
GUA
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS
2.0 IGUAL REPETIBILlDAD (VARIANZAS EQUIVALENTES).

A) FRMULAS. _
MEDIAARITMTICA DEL MTODO 1:
LY2
Y2=-n2
n2> _(LY2)2
SJ = -..--_ .... -. .----- ---n2(n 2 -1)
INTERVALO DE CONFIANZA PARA LA DIFERENCIA DE 2 MEDIAS POBLACIONALES.
t:975.n+ n,.~=
Referirse al Anexo 20, para determinar el valor de la t de Student.
n, = nmero de recobros del mtodo 1.

n2 = nmero de recobros del mtodo 2.
3.0 DIFERENTE REPETIBILlDAD (VARIANZAS DIFERENTES).
"-
FRMULAS,
LYI
YI = - - n

2 _
S) -
nlL>l-(LY~~
n (ni -1)
2 n2Lyi -(LY2)2
82 = -=---==--n2(n2 -1)
ANEXOS'
105
GUiA
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS
INTERVALO DE CONFIANZA PARA LA DIFERENCIA DE 2 MEDIAS

POBLACIONALES.
I-
S2I
'
/C(J.Ll - J.L2) = (YI - Y2) t o975,gl \: "
,C'~
.),
+-
Y nI
(:>9',,,,
/12
.d
(Y
ce qt. debe ser redondeado al entero inmediato anterior.

.le recobros del mtodo 1.
"
'''cONOS del mtodo 2.
1)

CANTIDAD ADICIONADA - CANTIDAD RECUPERADA - % DE RECOBRO EN
AMBOS MTODOS
---MTODOA
CANTIDAD
ADICIONADA
(mg/g)
!
I
,I
400.00
400.00
400.00
400.00
500.00
500.00
500.00
500.00
550.00
550.00
550.00
550.00
CANTIDAD
RECUPERADA
(mg/g)
392.88
389.88
397.72
393.76
513.65
497.20
494.00
489.00
543.02
535.15
545.82
534.38
MTODO B
%DE
RECOBRO (y)
98.22
97.47
99.43
98.44
102.73
99.44
98.80
97.80
98.73
97.30
99.24
97.16
CANTIDAD
ADICIONADA
(mg/g)
400.00
400.00
400.00
400.00'
400.00
500.00
500.00
500.00
500.00
500.00
550.00
550.00
550.00
550.00
550.00
CANTIDAD
RECUPERADA
(mg/g)
407.72
409.24
398.36
405.60
398.36
493.95
511.90
493.85
393.80
497.20
534.49
545.10
550.17
551.93
535.21
y = Es el cociente porcentual de la cantidad recuperada respecto de la cantidad

adicionada.
2)
Calcular LY, Ly2 y determinar n, para cada mtodo analtico:
ANEXOS'
106
%DE
RECOBRO (y)
101.93
102.31
99.56
101.40
99.59
98.79
102.38
98.77
98.76
99.44
97.18
99.11
100.03
100.35
97.31
GUiA
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
MTODO B
MTODO A
"Ly
"Ly2
=1184.7609
98.22 + 97.47 + ... + 97.16

2
98.22 +
97.47 2
+ ... + 97.16
ANALTICOS
101.93 + 102.31+ ... + 97.31
116996.0999
101.93 2 + 102.312 + ... + 97.31 2
=1496.9118
= 149420.3404
15
12

Mtodo A:
S ~ = 12 x 116996.0999 -1 184.7609
12x(l2-1)
= 2.2332
Mtodo B:
15x149420.3404-1496.9118
SR =
15x(l5-1)
2
=26672
4) Determinar la varianza mayor ( S/ ) y la varianza menor ( S/)
S? = 2.2332
si = 2.6672
Fo.025.n,ol.n,ol
y Fo.<J75.n , ol.n , ol :
F0 025.14,11 = 0.32
FO 975,14,11 = 3.36
El intervalo de confianza incluye el valor de 1, lo que indica que las varianzas sor.
iguales, por lo que es necesario desarrollar el ejemplo con base al punto 2.
ANEXOS'
107
GUA
7)
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS
Tabular otra vez los resultados:

% DE RECOBRO EN AMBOS MTODOS
MTODO A
MTODO B
ANALTICO
(BLANCOS)
%DE
RECOBRO (y)
98.22
101.93
97.47
102.31
99.43
99.56
98.44
101.40
102.73
99.59
99.44
98.79
98.80
102.38
97.80
98.77
98.73
98.76
99.24
99.44
97.16
99.44
99.11
100.03
100.35
97.31
8) Calcular :y" :y/ :Y2 ,:y/ y determinar n,y n 2:

:y,= 98.22 + 97.47 + ... + 97.16 = 1184.7609
:y/= 98.22 2 + 97.47 2 + ... + 97.16 2 =116996.0999
:Y2= 101.93 + 102.31+ '" + 97.31 = 1496.91118
:y/= 101.932 + 102.31 2 + .., + 97.312 = 149420.3404
n,= 12
n2 15
9) Calcular Y, y Y2:
}o1
= 1184.7609 =98.7301
12
Y2 = 1496.9118 = 99.7941
15
ANEXOS'
108
GUiA
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS
10) Calcular S/ y S/ :
82
= 12x1l6996.0999-1184.7609 2
82
=2.2332
12x(12-l)
= 15x 149420.3404-1496.9118 2

(0.975,25
= 2.6672
15x(l5-1)
t0975.n,+n2.2
y calcular
1C(J..ldIJ
= 2.06
IC(fll-fl2)=(98.7301_99.7941)2.06}I
X2.2332+14 X2.6672[
25
V
ANEXOS'
109
1 :-1 =-2.32 0.19

12 15
'
GUiA
DE
VALIDACIN
DE
MTODOS
ANALITICOS
FRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CLCULO CON EJEMPLO EN PRECISiN DEL MTODO PARA

COMPARACiN DE 2 MTODOS ANALTIcos.
ANEXO 17.
A) FRMULAS
VARIANZA
,"'C '" 17
:>.2 -(L)'
17 (17
)2
1)
Nota: Calcular la varianza de cada mtodo y para fines de calculo del intervalo de
Si
Si
varianza menor.
varianza mayor.
s~
O"i
....' : -r")?5.11.,1,11
. I
si
..
2 :S; Sl2
0"1
xF 9 ". 5 n ~ . "
-r ' ,
-1
"
FO ' I? 5.,,," l.n
.1 y F097S.n,.l.n,. = Referirse al Anexo 21, para det:rminar el valor de la F de

Fisher. 'n2-1 son grados de libertad de la varianza mayor, que corresponden a los grados
de libertad del numerador; y n,-1 son los grados de libertad de la varianza menor, que
n, = nmero de muestras analizadas del mtodo de varianza menor.

n2 = nmero de muestras analizadas del mtodo de varianza mayor.
1)
O
2
MTODO 1
MTODO 2
ANALISTA
ANALISTA
49.85
50.23
49.25
51.15
46.22
53.50
48.25
52.92
47.11
54.11
48.22
45.12
52.25
50.85
50.85
50.04
51.80
50.26
51.86
50.95
49.95
51.15
50.30
-c
o
2
ANEXOS'
110
53.40
GUA
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS
2) Calcular LY, Ly 2 y determinar n, para cada mtodo analtico:

MTODO A
MTODOS
LY
49.85 + 50.85 + ... + 50.30 = 608.09
49.25 + 46.22 + ... + 53.40 = 601.50
Ly2
49.85 2 + 50.85 2 + ... + 50.30 2 = 30819.6067
49.25 2 + 46.22 2 + ... + 53.40 2 = 30258.8618
12
12

Mtodo A:
s~
= 12 x 30~?6067 -
608.09
12x(l2-1)
0.4684
Mtodo S:
4) Determinar la varianza mayor ( S/ ) y la varianza menor ( S/):
S l2 = 0.4684
si =9.8795
5) Determinar en el Anexo 21 FO.O~5.n ,-I.n
,_1
FO.975.n ,-I.n ,-1 :
F0 025,11,11 = 0.29
F0 975,11,11 = 3.47
9.8795 xO.29 $
0.4684
O"?
O"f
?8795 x3.47
0.4684
6.07
S;
O"J
-'2
S;
73.26
0"1
ANEXOS'
111
GUiA
ANEXO 18.
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS

PROPORCIONALIDAD DE MTODOS EN 'ESTUDIOS DE CORRELACiN PARA
COMPARACiN DE 2 MTODOS ANAlTICOS.
A) FRMULAS
PENDIENTE
n = nmero de muestras analizadas con el mtodo no oficial y el mtodo oficial.

ORDENADA AL ORIGEN
= ==--)_)-_b-----'I=---X
()
lc(fJ, ) = bl t o 975.n-2 S bl
t0975n-2 =Referirse al Anexo 20, para determinar el valor de la t de Student.

COEFICIENTE DE VARIACiN DE REGRESiN.
CVy/x =~xlOO
y
Donde:
- y
y=--
ANEXOS
112
GUiA
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALiTICOS
1) Tabular los resultados (datos primarios):
MUESTRA
POTENCIA
RELATIVA
MTODO
OFICIAL (x) (%)
CONTENIDO
MTODO
NO OFICIAL
(y) (rng I rnL)
83.16
16.63
78.25
16.12
82.11
16.41
94.87
18.97
95.47
19.09
101.67
20.33
118.56
25.33
122.15
25.89
125.33
26.08
!
i
8
9
2) Calcular x, y. x2 y2 , xy y determinar n:
x=83.16+ 78.25+
+ 125.33=901.57
y = 16.63 + 16.12 +
+ 26.08 = 184.85
x2 = 83.16 2 + 78.25 2 +
+ 125.33 2 = 92917.0319
2
y2 = 16.63 + 16.12 2 +
+ 25.08 2 = 3935.3467
xy = 83.16*16.63 + 78.25*16.12 + ... + 125.33*26.08 = 19115.1179
n=9
3) Calcular b., bo y r2 .
b =
I
9 x 19115.1179- 90 1.57 x 184.85

-- - - ----------------------- = 0_2297
9x92917.0319-901.57 2
b = _1~~~_-=-Q.2~97x901.57 =-2.4719
o
9
r2
(9x19115.1179-901.57xI84.85)
?
= 0_9898
(9x92917.0319-901.572)x(9x3935.3647 -184.85-)
4) Calcular Sytx y s;
3935.3647 -0.2279x 19115.1179 - (-2.4719)x 184.85

9-2
r----l-------S
= 0.4497 ,61
---= 0.0088
901 57 2
~ 92917.0319--~---
ANEXOS'
113
=0.4497
GUiA
DE
VALIDACiN
5) Determinar en el Anexo
t 0975,7
t0975.n.2
DE
MTODOS
y calcular 1C({3,).
= 2.365
C({JI)
= 0.2297 2.365 x 0.0088 =0.2089 ,0.2506

6)
Calcular el CV y/ x :
\' = 184.85 = 20.5389
,. ..
(1
.l . r
0.4497
= ..._-
000
20.5389
x 100 --219
. 0//0
ANEXOS'
114
ANALiTICOS
GUA
ANEXO 19.
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS
FRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CLCULO CON EJEMPLO PARA PRECISiN DEL MTODO EN

ESTUDIOS DE CORRELACiN PARA COMPARACiN DE 2 MTODOS ANAlTICOS.
A)
FRMULAS
VARIANZA DEL MTODO OFICIAL
2 nl>~ _(::)2
SI = - - n)(nl -1)
n, = nmero de muestras analizadas utilizando el mtodo oficial.
n2 = nmero de muestras analizadas utilizando el mtodo no oficial.

LMITE UNILATERAL INFFRIOR DE CONFIANZA PARA LA RAZN DE VARIANZAS
2
0"2
2
0"1
S2
S2
1
--~-xF.
0.05,/1, -1,11,-1
FO.05.n , - l. n, . 1 = Referirse al Anexo 21, para determinar el valor de la F de Fisher. n2-1
son
grados de libertad de la varianza del mtodo no oficial, que corresponden a los grados
de libertad del numerador y n 1-1 son los grados de libertad del mtodo oficial, que
1)
Tabular los resultados (datos primarios):

PORCENTAJE
MTODO NO OFICIAL
MTODO OFICIAL
ANALISTA
ANALISTA
-c
O
2
103.95
98.25
101.44
97.80
98.91
99.21
99.06
100.65
102.64
101.26
102.56
103.15
102.75
98.27
97.92
98.54
98.41
101.67
99.72
100.26
1
~
2) Calcular Y" Y/' Y2' y} Y determinar
n, Y n2
Yl = 103.95 + 98.91 + ... + 100.26 =-1200.74

Y/ = 103.952 + 98.91 2 + ... + 100.26 2 = 120188.9554
Y 2 = 101.44 + 99.06 + ... + 104.32 = 1217.09
y} = 101.442 + 99.06 2 + ... + 104.32 2 = 123504.7041
ANEXOS'
115
104.40
103.56
99.13
104.32
GUiA
DE
VALIDACiN
DE
MTODOS
ANALTICOS
3) Calcular la varianza del mtodo oficial y del mtodo no oficial.

2
S2 _ ~.~~_!2188.9554-12.7~_
= 3.7191
12x(l2-1)
1 -
12x12354.741-1217.9
S2 =
12x(l2-1)
2
5.6696
o
4) Determinar en el Anexo 21 Fo.05.n, . l. n, . 1 :
FO.05;11.11 = 0.35
5) Calcular el limite unilateral inferior de confianza para la razn de varianzas:
(Ji2 >- 5.6696 x 035

.
(JI
3.7191
El lmite unilateral inferior de confianza no excede el valor de 1.

ANEXO 20. TABLA ESTADISTICA DE LA DISTRIBUCiN t DESTUDENT.
GRADOS DE
LIBERTAD
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
t 0975
GRADOS DE
LIBERTAD
t 0975
GRADOS DE
LIBERTAD
12.706
26
2.056
4.303
27
2.052
3.182
28
2.048
2.n6
29
2.045
2.571
30
2.042
2.447
31
2.040
2.365 ~Lo_._ .__o~'L..
-----2.306
33
2.035
2.262
34
2.032
2.228
35
2.030
2.201
36
2.028
.2.179
37
2.026
2.160
38
2.024
2.145
39
2.023
.. o'
2.131
40
2.021
2.120
41
2.020
2.110
42
2.018
2.101
43
2.017
2.093
44
2.015
2.014 __ _ o.
2.086
45
2.080
46
2.013
...
2.074
47
2.012
2.069
48
2.011
2.064
49
2.010
2.060
50
.. __ o~OOL__o
51
52
53
54
55
56
57
58
59
60
61
62
63
64
65
66
67
68
69
70
71
72
73
74
75
t 0975
2.008
2.007
2.006
2.005
2.004
2.003
2.002
2.002
2.001
2.000
2.000
1.999
1.998
1.998
1.997
1.997
1.996
1.995
1.995
1.994
1.994
1.993
1.993
1.993
1.992
Losgrados delibertad (gl) sefijan con base ala frmula indicada enel subndice del slnt>olo dela1de Student.
ANEXOS'
116
ANEXO 21. TABLAS ESTADSTICAS DE LA DISTRIBUCiN F DEFISHER.
FO.975, gln, gld

91 numerador I
I denom inador
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
21
28
10
15.44
9.98
7.76
6.60
5.89
5.42
5.08
4.83
4.63
4.47
4.35
.4.24
4.15
4.08
4.01
3.95
3.90
3.86
3.82
3.78
3.75
3.72
3.69
3.67
3.65
3.63
15.10
9.60
7.39
6.23
5.52
5.05
4.72
4.47
4.28
4.12
4.00
3.89
3.80
3.73
3.66
3.61
3.56
3.51
3.48
3.44
3.41
3.38
3.35
333
331
329
14.88
9.36
7.15
5.99
5.29
4.82
4.48
4.24
4.04
3.89
3.77
3.66
3.58
3.50
3.44
3.38
3.33
3.29
3.25
3.22
3.18
3.15
3.13
3.10
3.08
14.73
9.20
6.98
5.82
5.12
4.65
4.32
4.07
3.88
3.73
3.60
3.50
3.41
3.34
3.28
3.22
3.17
3.13
3.Q9
3.05
3.02
2.99
2.97
14.62
9.07
6.85
5.70
4.99
4.53
4.20
3.95
3.76
3.61
3.48
3.38
3.29
3.22
3.16
3.10
3.05
3.01
2.97
2.93
2.90
2.87
2.85
294
2.82
280
14.54
8.98
6.76
5.60
4.90
4.43
4.10
3.85
3.66
3.51
3.39
3.29
3.20
3.12
3.06
3.01
2.96
2.91
2.87
2.84
2.81
2.18
2.75
2..13
14.47
8.90
6.68
5.52
4.82
4.36
4.03
3.78
3.59
3.44
3.31
3.21
3.12
3.05
2.98
2.93
2.88
2.84
2.80
2.76
2.73
2.10
2.
2.65
2.63
14.42
8.84
6.62
5.46
4.76
4.30
3.96
3.72
3.53
3.37
3.25
3.15
3.06
2.99
2.92
2.87
2.82
2.77
2.73
2.70
2.67
2.64
2.61
2.59
2.51
2.55
2.53
2.51
2.50
2.48
2.47
2.45
2.44
2.43
2.42
2.41
2.40
2.39
'a:5t! .22
33
34
35
36
37
38
39
40
3.54
3.53
3.52
3.50
3.49
3.48
3.47
3.46
292
3.002.84
3'-20 2.98
3.19 . 2.97
3.18 2.96
3.17 2.94
3.16 2.93
3.15 2.92
3.14 2.91
3.13 2.90
2.82
2.81
2.80
2.78
2.77
2.76
2.75
2.74
211
2.69 2..61
a,61 . 2~59
2:65 2.57
2.64 2.56
2.71 2.62 2.54
2.70 - 2.61 2.53
2.69 2.59 2.52
2.68 2.58 2.50
2.66 2.57 2.49
2.65 2.56 2.48
2.64 2.55 2.47
2.63 2.54 2.46
262 253 2.45
3..06 2.90 2.18

. ;':2;7&
.,;';~~i75
5 2.73
11
12
13
14
14.37 14.34 14.30 14.28

8.79 8.75 8.72 8.68
6.57 6.52 6.49 6.46
5.41 5.37 5.33 5.30
4.71 4.67 4.63 4.60
4.24 4.20 4.16 4.13
3.91 3.87 3.83 3.80
3.66 3.62 3.58 3.55
3.47 3.43 3.39 3.36
3.32 3.28 3.24 3.21
3.20 3.15 3.12 3.08
3.09 3.05 ,3.01 2.98
3.01 2.96 2.92 2.89
2.93 2.89 2.85 2.82
2.87 2.82 2.79 2.75
2.81 2.77 2.73 2.70
2.76 2.72 2.68 2.65
2.72 2.68 2.64 2.60
2.68 2.64 2,60 "'?;~
2.65
2.62
2.59
156 2.51 '%:e' 2.44
2.54 2.'- 2.45 242
251 247 243 239
2.49 2.45 2.41 2.37
2.48 2.43 2.39 2.36
246 2.41 2.37 2.34
2.44 2.40 2.36 2.32
2.43 2.38 2.34 2.31
2.41 2.37 2.33 2.29
2.40 2.35 2.31 2.28
2.39 2.34 2.30 2.27
2.37 2.33 2.29 2.25
2.36 2.32 2.28 2.24
2.35 2.31 2.27 2.23
2.34 2.30 2.26 2.22
2.33 2.29 2.25 2.21
15
14.25
8.66
6.43
5.27
4.57
4.10
3.77
3.52
-3.33
3.18
3.05
2.95
2.86
2.79
2.72
2.67
2.62
2,5.7
16
17
18
19
20
14.23 14.21 14.20 14.18 14.17

8.63 8.61 8.59 8.58 8.56
6.40 6.38 6.36 6.34 6.33
5.24 5.22 5.20 5.18 5.17
4.54 4.52 4.50 4.48 4.47
4.08 4.05 4.03 4.02 4.00
3.74 3.72 3.70 3.68 3.67
3.50 3.47 3.45 3.44 3.42
3.30 3.28 3.26 3.24 3.23
3.15 3.13 3.11 3.09 3.07
3.03 3.00 2.98 2.96 2.95
2.92 2.90 2.88 2.86 2.84
2.84 2.81 2.79 2.77 2.76
2.76 2.74 2.72 2.70 2.68
2.70 2.67 2.65 ~.~~ .~:q2
2.64 2.62 2;60.
2.59
..'."-.2...
.:.... _..:..
-I~
~E,le'~i~~~~'i~~~f'1F
2.. 41
239
236
2.34
2.32
2.31
2.29
2.28
2.26
2.25
2.23
2.22
2.21
2.20
2.19
2.18
2.38
2.36
2.34
2.32
2.30
2.28
2.26
2.25
2.23
2.22
2.21
2.20
2.18
2.17
2.16
2.15
2.36
2.34
2.31
2.29
2.27
2.26
2.24
2.22
2.21
2.20
2.18
2.17
2.16
2.15
2.14
2.13
2.34
2.31
2.29
2.27
2.25
2.23
2.22
2.20
2.19
2.17
2.16
2.15
2.14
2.13
2.12
2.11
2.32 2.30
2.29 2.28
2.27 2.25
2.25 2.23
2.23 2.21
2.21 2.20
2.20 2.18
2.18 2.16
2.17 2.15
2.15 2.13
2.14 2.12
2.13 2.11
2.12 2.10
2.11 2.09
2.10 ..2.08
2.09 2.07
.................
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.,=~,C"'";,.,="-,,,_'7'''''''''_~
(Continuacin)
23
31
32
22
24
25
26
27
28
29
30
91 numerador
21
33
34
35
36
gl denominador
14.16 14.14 14.13 14.12 14.12 14.11 14.10 14.09 14.09 14.08 14.07 14.07 14.06 14.06 14.06 14.05
3
4
8.55 8.53 8.52 8.51 8.50 8.49 8.48 8.48 8.47 8.46 8.45 8.45 8.44 8.44 8.43 8.43
5
6.31 6.30 6.29 6.28 6.27 6.26 6.25 6.24 6.23 6.23 6.22 6.21 6.21 6.20 6.20 6.19
5.10 5.09 5.08 5.07 5.07 5.06 5.05 5.05 5.04 5.04 5.03
6
5.15 5.14 5.13 5.12 5.11
7
4.45 4.44 4.43 4.41 4.40 4.39 4.39 4.38 4.37 4.36 4.36 4.35 4.34 4.34 4.33 4.33
8
3.98 3.97 3.96 3.95 3.94 3.93 3.92 3.91 3.90 3.89 3.89 3.88 3.87 3.87 3.86 3.86
9
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0.340.360.370.390.400.41 0.:420.430.440.450.460046
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CL2e
02:9
O 32
035
0.37
O 38
O 40
O 41
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O 45
046
047
047
048
029
G 32
1)
31
039
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046
0.31
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1iJ41
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0.46
0.46
0.46
0.46
0.46
0.47
0.47
0.47
0.47
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0.47
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1)
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CU2
o 12
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28
29
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34
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37
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39
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0.12
0.12
0.12
0.12
0.12
0.12
0.12
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0.17
0.17
0.17
0.17
0.17
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0.22
0.22
0.22
0.22
0.22
0.22
0.22
15
02S
r.t11 0.22
21
14
on
fU2
e..a
0.26
0.26
0.26
0.26
0.26
0.26
0.26
0.26
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0.30
0.30
0.30
0.30
0.30
0.30
0.30
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0.33
0.33
0.33
0.33
0.33
0.33
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0.35
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0.35
0.35
0.35
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0.~9
0.37
0.37
0.37
0.37
0.37
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0.38
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0.39
0.39
0.39
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0.39
0.40
040
.41
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0.41
0.41
0.41
0.41
0.41
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0.42
0.42
0.42
0.43
0.43
0.43
0.43
0.44
0.44
0.44
0.44
0.44
0.44
0.44
0.44
""'-
Fo.os.
91 numerador
gl denominador
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
'14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
gln. gld
(Continuacin)
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
0.33
0.35
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0.48
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0.50
0.50
0.50
0.50
0.50
0.50
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0.51
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0.50
0.50
0.50
0.50
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0.51
0.51
0.51
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0.50
0.50
0.50
0.50
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0.51
0.51
0.51
0.51
0.51
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0.52
0.52
0.52
0.52
0.52
0.52
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0.49
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0.50
0.50
0.50
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0.51
0.51
0.51
0.51
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0.52
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0.50
0.50
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0.51
0.51
0.51
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0.52
0.52
0.52
0.52
0.52
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0.53
0.53
0.53
0.53
0.53
0.53
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0.50
0.50
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0.53
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050
0.50
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0.51
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0.52
0.52
0.52
0.52
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053
0.53
0.53
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0.54
0.54
0.54
0.54
054
0.54
0.34
0.37
0.39
0.41
0.42
0'44
0.45
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0.46
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0.50
0.50
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0.51
0.51
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0.52
0.52
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0.53
0.53
0.53
0.54
0.54
0.54
0.54
0.54
0.54
0.54
0.55
055
0.55
0.55
0.34
0.37
0.39
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0.50
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0.51
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0.53
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0.54
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0.55
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0.50
0.50
0.51
0.51
0.51
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0.52
0.52
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0.53
0.53
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0.54
054
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0.55
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056
0.56
0.56
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0.49
0.50
0.50
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0.52
0.52
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0.54
0.54
0.54
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0.55
0.55
0.55
0.55
0.56
0.56
0.56
0.56
0.56
0.56
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0.48
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0.50
051
051
0.52
0.52
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0.54
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0.55
055
0.55
0.55
0.56
0.56
0.56
0,56
0.56
0.56
0.56
0.57
0.35
0.38
0.40
042
0.43
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0.47
0.48
0.49
0.49
0.50
0.50
0.51
0.51
0.52,
0.52
0.53
0.53
0.53
0.54
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0.54
0.54
055
0.55
0.55
0.55
056
0.56
0.56
0.56
0.56
0.56
0.57
0.57
0.57
0.57
0.35
0.38
0.40
0.42
0.44
0.45
0.46
0.47
0.48
0.49
0.49
0:50
0.51
0.51
0.52
0.52
0.53
0.53
0.53
0.54
0.54
0.54
0.55
0.55
0.55
0.55
0.55
056
0.56
0.56
0.56
0.56
0.57
0.57
0.57
0.57
0.57
0.57
0.35
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0.50
0.51
0.51
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0.56
0.56
0.56
0.56
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0.57
0.57
0.57
0.57
0.58
0.58
0.35
038
0.40
0.42
0.44
0.45
0.46
0.47
0.48
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0.50
0.51
0.51
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0.54
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0.55
0.55
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0.56
0.56
0.56
0.56
0.57
0.57
0.57
0.57
0.57
0.58
0.58
0.58
0.58
0.35
0.38
0.40
0.42
0.44
0.45
0.47
0.48
0.49
0.49
0.50
0.51
0.51
0.52
0.52
0.53
0.53
0.54
0.54
0.54
0.55
0.55
0.55
056
0.56
0.56
0.56
0.57
0.57
0.57
0.57
0.57
0.58
0.58
0.58
0.58
0.58
0.58
0.35
0.38
0.35
0.38
0.41
0.43
0.44
0.46
0.47
-0.48
0.49
0.50
0.50
0.51
0.52
0.52
0.53
0.53
0.54
0.54
0.55
0.55
0.55"
0.56
0.56
0.56
0.56
0.57
0.57
0.57
0.57
0.57
0.58
0.58
0.58
0.58
0.58
0.59
0.59
0.59
0.35
038
0.41
0.43
0.44
0.46
0.47
0.48
0.49
0.50
0.51
0.51
0.52
0.53
0.53
0.54
0.54
0.54
0.55
0.55
0.55
0.56
0.56
0.56
0.57
0.57
0.57
0.57
0.58
0.58
0.58
0.58
0.58
0.58
0.59
0.59
0.59
0.59
0.~1
0.43
0.44
0.46
0.47
0.48
0.49
0.50
0.50
0.51
0.52
0.52
0.53
0.53
0.54
0.54
0.54
0.55
0.55
0.55
0.56
0.56
0.56
0.56
0.57
0.57
0.57
0.57
0.57
0.58
0.58
0.58
0.58
0.58
0.58
0.59
COMENTARIOS RESPECTO A LOS CALCULOS y REGLAS DE REDONDEO.
Todos los clculos llevados a cabo parten delos resultados demanera tabular, los cuales sedenominan datos primarios.
En el caso del % de recobro, por omisin los clculos se redondearon a 2 decimales. Los clculos segn las frmulas,
fueron llevados a cabo con una hoja de clculo; y sereportan hasta 2 decimales ms de los datos primarios. Puede ser
que al verificar los clculos con ayuda de una calculadora de bolsillo, estos puedan diferir de los aqu reportados, ya que
la hoja declculo efecta las operaciones hasta con una precisin de 15decimales.
Se sugiere que en los clculos que usted lleve a cabo al analizar los datos primarios y llegue a utilizar calculadora de
bolsillo, como minimo maneje 4 decimales ms que el de los datos primarios y que el resultado final, lo redondee como
mnimo alnmero dedecimales asociados al delos datos crudos.
Para redondear observe las siguiente reglas:
1) Determinar al decimal a redondear, al cual vamos a definir como X
Por ejemplo, si sevaa redondear a 3 decimales, X vale 3.
2) Determinar en el valor, el decimal X+1.
En nuestro ejemplo corresponde al decimal 4.
3) Determinar el valor del decimal X+1 del nmero.
Por ejemplo el nmero 3.23456
El valor del decimal 4 deeste nmero es5.
4) Siel valor del decimal X+1 es 5 o ms, el decimal X seredondea al siguiente entero osi el valor del decimal X+1 es
4 o menos, el valor del decimal X semantiene.
._4,
En nuestro ejemplo ya que el cuarto decimal es5, el valor del decimal 3,que en este
entero, por lo que elnmero 3.23456, seredondea a 3.235, considerando redondearl
Ejemplos:
102.6731 redondeando a 2 decimales es 102.67.
102.6761 redondeando a 2 decimales es 102.68.
0.0050 redondeando a 2 decimales es0.01
0.0041 redondeando a 2 decimales esO
....
se redondea al siguiente
ales.
El Colegio Nacional de
Qumicos Farmacuticos
Bilogos Mxico, A.C.
AGRADECE EL APOYO DE .
Boehringer - Ingelhelm Pro
Laboratorios de Contro .
Lambda Cien
(Q\
~IIIIIII
Boehringer 1
PromeCO
L\
~~2
i.aboratorio de

Guía para Validación de Métodos Analíticos-CNQFB 2002

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QUIMICOS FARMACEUTICOS DIOLOGOS

Con Registro ante la DGP

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Ma. Araceli Garca

LA VALIDACiN DE MTODOS ANALTICOS es parte fundamental

Bajo este marco y considerando a la validacin de mtodos analticos

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4.6. Especificidad.- Capacidad de un mtodo analtico para obtener una respuesta

4.7. Estudio colaborativo.- Reproducibilidad realizada en distintos laboratorios,

4.8. Exactitud.- Concordancia entre un valor obtenido empleando el mtodo y el

4.9. Estabilidad analtica de la muestre Propiedad de una muestra, preparada

4.10.lntervalo.- Concentraciones incluidas entre la concentracin superior einf~:;?,;'~fJ'S

4.11. Lmite de cuantificacin.- Concentracin mnima del analito, que puede

4.12. Lmite de deteccin.- Concentracin mnima del analito en una muestra,

4.13. Lnealidad.- Habilidad para asegurar que los resultados obtenidos

4.14. Metodologa de prueba.- Procedimiento o grupo de procedimientos, para

4.15. Mtodo analtico.- Descripcin de la secuencia de actividades, recursos

4.16. Mtodo analtico desarrollado internamente.- Mtodo desarrollado por el

4.17. Mtodo analtico indicativo de estabilidad.- Mtodo cuantitativo capaz de

4.18. Mtodo analtico oficial.- Mtodo que aparece en la literatura oficial