Comparacin de niveles de coliformes totales en el ro

Rmac

UNIVERSIDAD NACIONAL DE
INGENIERA

Facultad de Ingeniera
Ambiental

INSPECCION TECNICA

Curso :

Profesor:
Alumnos:

MICROBIOLOGIA SANITARIA I
ALEJANDRO MENDOZA
CASTILLON GARCIA, WILFREDO C
HUARCAYA QUISPE, OMAR
LOBA CHACA, MIGUEL
RICRA OSORIO, JUAN CARLOS
GARAY, ELIAS
VILLANUEVA,OSCAR

Fecha de Presentacin

16/11/2014

UNI - 2014 - II

Comparacin de niveles de coliformes totales en el ro

Rmac

INDICE
I)

INDICE

.1

II)

TITULO Y ANTECEDENTES

.2

III) JUSTIFICACION Y PLANTEAMINETO

DEL PROBLEMA
..3
IV) MARCO TEORICO

..4

V)

...5

MARCO LEGAL E HIPOTESIS

VI) VARIABLES Y OBJETIVOS

.......6

VII) METODO

...7

VIII) MATERIALES Y RESULTADOS

....11

IX) DISCUSION Y CONCLUSION

...12

X)

..14

RECOMENDACIONES Y ANEXOS

TITULO:
2

Comparacin de niveles de coliformes totales en el ro

Rmac

ANTECEDENTES
Los agentes patgenos transmitidos por el agua constituyen un problema mundial que
demanda un urgente control mediante la implementacin de medidas de proteccin
ambiental a fin de evitar el incremento de las enfermedades relacionadas con la calidad
del agua.
Han sido propuestos varios bioensayos microbianos usando diferentes criterios y
especies. Los mtodos comnmente aplicados usan la tasa de crecimiento, biomasa y
nmero de clulas de un cultivo bacteriano (puro. o mezclado) como bioensayo de
toxicidad (Mayfield, 1999;' APHA, 1995).
Pseudomonas fIuorescens y Pseudomonas putida son frecuentes organismos de
bioensayo (Dutka y Kan, 1982; ISO, 1995 en Janssen, 1996). Varios bioensayos
microbianos estn basados en la medicin de propiedades bioqumicas bacterianas.
Estos indicadores bioqumicos de dao provocado por txicos incluyen la concentracin
de ATP, la actividad de la ATPasa, la actividad de la deshidrogenasa y la actividad de
otras enzimas como la fosfatasa, ureasa, y esterasa. Cambios en la concentracin de A
TP en varias especies de Pseudomonas aeruginosa, Enterobacter aerogenes,
Escherichia coli, y Nitromonas europea, expuestas a compuestos txicos, han sido
usados como un criterio de bioensayo de toxicidad (Hao .Y Dutka, 1986; Hickey y col,
1991; Vanhala y col, 1994; De Lima y Hofer, 1993; Espigares y col, 1994; Koopman y col,
1988; Mayfield, 1999).

Determinacin de la toxicidad de afluentes del ro Rmac mediante la

inhibicin de la deshidrogenasa de Bacillus cereus.
-CORONADO FERNANDEZ ORLANDO-

Microorganismos indicadores de la calidad del agua de consumo humano

de Lima Metropolitana.
-MARCHAND PAJARES EDAGAR ORLANDO-

JUSTIFICACIN
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Comparacin de niveles de coliformes totales en el ro

Rmac

Este trabajo se hace con el inters de dar a conocer a los pobladores los datos
obtenidos, para que estn prevenidos y tengan una mayor educacin e higiene
ambiental. Sobre todo la zona que identifiquemos como la ms contaminada.

PLANTEAMIENTO DEL
PROBLEMA
La contaminacin del ro Rmac generado por la actividad humana es un
problema. El peligro ms comn con relacin al agua de consumo humano
es el de su contaminacin, directa o indirectamente, debido a la accin de
aguas residuales, excretas de hombres y animales, adems de factores
fisicoqumicos y ambientales. Es por esto que las familias que viven a orillas
de este ro estn propensas a ser infectadas por diversas enfermedades ya
sea intestinales o de cualquier otra especie.
La comparacin de los niveles de coliformes totales en las aguas del ro
Rmac nos brindara la visin necesaria de cuan contaminada se encuentra
en la actualidad tal ro, adems de poder averiguar cual o cuales son los
riesgos que corren los pobladores de las zonas que fueron analizadas por
nuestro grupo de investigacin.

MARCO TEORICO
o

Definicin de coniformes

Comparacin de niveles de coliformes totales en el ro

Rmac
Se considerarn miembros del grupo de coliformes todos los
microorganismos que producen colonias rojas con brillo metlico tras 24
horas de incubacin a 35C en medio tipo Endo. El brillo puede cubrir la
totalidad de la colonia, o aparecer nicamente en la zona central o en la
periferia. El grupo coliforme as definido se caracteriza por producir aldehdos
a partir de la fermentacin de la lactosa. Aunque esta caracterstica
bioqumica forma parte de la va metablica de la produccin de gas en la
prueba de los tubos mltiples, pueden observarse variaciones en el
desarrollo del brillo metlico entre las distintas cepas de coliformes. Sin
embargo, esta ligera diferencia en la definicin del indicador no altera su
significado sanitario, sobre todo si se han hecho estudios adecuados para
establecer la relacin entre los resultados por el mtodo del filtro de
membrana y los obtenidos con el de dilucin en tubos de estndar.
o Concentracin
Las placas petri mostraran la presencia de colonias con un brillo metlico
esto nos indicara que realmente esta presente la escherichia coli, de haber
mayor numero de colonias en una placa respecto de otra esto demostrara
que hay mayor concentracin del coliforme respecto de otro punto tomado de
otra placa.

o Temperatura
Conseguiremos ver fcilmente la temperatura por medio de un termmetro.
Las bacterias que buscamos son coniformes fecales y estas a su vez son
entero bacterias por lo que se desarrollan adecuadamente a una temperatura
alrededor de 37 , y de acuerdo a esto deduciremos si el ambiente es optimo
para su estancia en el ro.

o Toma de muestra
Se ha tomado muestras de tres puntos puente nuevo, puente Trujillo, puente
santa rosa, para ello hemos hecho uso de tres recipientes previamente
esterilizados para que al tomar la muestra no se altere el resultado.

MARCO LEGAL

Comparacin de niveles de coliformes totales en el ro

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Artculo 82.- Para los efectos de Proteccin de las Aguas, correspondientes a
los diferentes usos, regirn los siguientes valores lmites:
1. Lmites bacteriolgicos (*) (valores en n.m.p./100 mil)

PARAMETRO
COLIFORMES
FECALES
COLIFORMES
TOTALES

II

III

IV

VI

8.8

20,000

5,000

5,000

10,000

20,000

4,000

1,000

1,000

200

4,000

(*) Entendidos como valor mximo en 80 % de 5 ms muestras mensuales

HIPTESIS
Que en una determinada zona punte nuevo- existe mayor concentracin
de coliformes totales. Debido a que es en esta zona donde los pobladores se
sienten con libertad de arrojar sus desperdicios sin reparo alguno.

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OBJETIVOS
Generales

Comparar el nivel de coliformes encontrados con el patrn determinado en el

marco legal.

Encontrar coliformes en las aguas del ro Rmac en los tres puntos tomados
para el anlisis.

Ver en que punto del ro Rmac hay mayor contaminacin y proporcionar

ayuda a la zona donde se encuentra mayor cantidad de contaminacin.

Especficos
Determinar coliformes fecales en puente nuevo y compararlo con las normas
permitidas y ver la concentracin de la contaminacin en ese punto.
Determinar coliformes fecales en puente Trujillo, compararlo con las normas
adems de ver cuan contaminado esta y compararlo con los datos que se
obtuvieron en puente nuevo.
Determinar coliformes fecales en puente santa rosa y compararlos con los dems
puntos anteriores.

METODO
a.

Extraccin de muestras para la determinacin de coliformes fecales

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Recipientes: Las muestras para estudios microbiolgicos se recogern en botellas
cuidadosamente lavadas y aclaradas, a las que se habr dado un enjuague final con
agua destilada, y esterilizadas. En algunos casos puede realizarse la recogida de
muestras en bolsas de plstico preesterilizadas.
Procedimiento de toma de muestra: Cuando se hagan toma directa de ros, corriente,
lagos, pantanos, fuentes o pozos, se obtendrn muestras representativas del agua
que llega a los consumidores. No es conveniente tomar muestras demasiado cerca de
la orilla o demasiado lejos del punto de extraccin ni a una profundidad superior o
inferior a la de dicho punto.
Tamao de la muestra: El volumen de la muestra debe ser suficiente para poder
realizar todos los anlisis necesarios; por lo general, no conviene que sea inferior a
100 ml.
Datos de identificacin: Las muestras irn acompaadas de datos descriptivos y de
identificacin exactos. No deben aceptarse para estudio muestras indebidamente
identificadas.
Tiempo y temperatura de conservacin: El estudio microbiolgico de la muestra debe
iniciarse inmediatamente despus de realizada la toma para evitar cambios
imprevisibles. Si no pueden procesarse las muestras en la hora siguiente a su toma,
se guardarn en una nevera de hielo durante el transporte al laboratorio. La
temperatura de todas las muestras de contaminacin de corrientes, aguas potables y
residuales se mantendr por debajo de 10C durante el transporte, que durar 6 horas
como mximo. Una vez en el laboratorio, se proceder a su refrigeracin y
procesamiento en las 2 horas siguientes.
Se extrajeron muestras de aguas residuales en frascos de vidrio estriles de 500 ml
de capacidad, las muestras correspondieron al Puente Huachipa, Puente Nuevo y
Puente Santa Rosa.
b. Mtodo o tcnica
La tcnica de filtro de membrana (FM) es altamente reproducible, puede utilizarse para
estudiar volmenes relativamente grandes de muestra y proporciona resultados
numricos ms rpidos que el mtodo de los tubos mltiples. La tcnica del filtro de
membrana es extraordinariamente til para controlar las posibles situaciones de
urgencia en relacin con el agua potable y para estudiar distintas aguas naturales. Sin
embargo, esta tcnica tiene limitaciones, sobre todo para estudiar aguas con elevada
turbidez o que contengan bacterias no coliformes. Para estas aguas, y tambin en caso
de que no se haya utilizado anteriormente la tcnica del filtro de membrana, es
preferible llevar a cabo pruebas paralelas mediante la tcnica de fermentacin en tubos
mltiples para demostrar la aplicabilidad y comparabilidad de aquella.
c. Procedimiento estndar de filtro de membrana para coliformes totales
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Comparacin de niveles de coliformes totales en el ro

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Medios de cultivo
La necesidad de uniformidad obliga a emplear medios deshidratados. Siempre que
existan medios deshidratados adecuados, no se utilizarn medios preparados a partir
de sus ingredientes bsicos. Para rehidratar y esterilizar los medios se seguirn las
instrucciones de los fabricantes. Tambin pueden utilizarse medios lquidos
comerciales (ampollas estriles u otros), si se saben que ofrecen resultados
equivalentes.
Comprubese la productividad de cada nuevo lote de medios preparando diluciones
de un cultivo de Enterobacter aerogenes y filtrando volmenes adecuados que
permitan obtener 20-80 colonias por filtro. Comprubese, para cada nuevo lote de
medio Endo, un mnimo de 10% de colonias de coliformes obtenidas a partir de
muestras naturales, con objeto de establecer la exactitud diferencial del lote del
medio.
a) Agar LES Endo:
Extracto de levadura
Casitona o tripticasa
Tiopeptona o tiotona
Triptosa
Lactosa
Fosfato de hidrgeno
dipotasio, K 2 HPO 4
Fosfato de dihidrgeno
potasio, KH 2 PO 4
Cloruro de sodio, NaCl
Desoxicolato de sodio
Lauril sulfato de sodio
Sulfito de sodio, Na 2 SO 3
Fucsina bsica
Agar
Agua destilada

1.2 g
3.7 g
3.7 g
7.5 g
9.4 g
3.3 g
1.0 g
3.7 g
0.1 g
0.05 g
1.6 g
0.8 g
15.0 g
1L

Rehidrtese en 1 L de agua destilada con 20 ml. de etanol al 95% (que controla el

crecimiento de fondo y el tamao de las colonias de coliformes). Calintese hasta casi
ebullicin para disolver el agar y aprtese rpidamente del calor, enfriando hasta 4550C. Divdase en porciones de 5-7 ml. en placas de Petri de vidrio o plstico de 60
mm. de seccin menor. Si se utilizan placas de otros tamaos, ajstese la cantidad
para conseguir una profundidad similar. Las placas no se expondrn a la luz directa,
sino que se conservarn en la oscuridad a 2-10C, desechndose las no utilizadas
despus de 2 semanas.
d. Anlisis Microbiolgico

Comparacin de niveles de coliformes totales en el ro

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Un mtodo enriquecido suele mejorar la valoracin de la calidad del agua potable. Sin
embargo, en los estudios habituales de este tipo de agua, en los que repetidos
anlisis han demostrado que con la tcnica de FM de un solo paso se obtienen
resultados adecuados, puede eliminarse el enriquecimiento, que tampoco suele ser
necesario en el estudio de las aguas no potables y residuales. Comprubense todas
las muestras de las aguas potables que den resultados positivos de la forma descrita
anteriormente.

Seleccin del tamao de la muestra: El tamao de la muestra depender de la

densidad bacteriana que se espere, que en las muestras de agua potable slo estar
limitada por el grado de turbidez o por el crecimiento de no coliformes en el medio.
Filtracin de la muestra: Se coloca con pinzas estriles un filtro de membrana
estril (con la trama hacia arriba) sobre la placa porosa del receptculo. Sitese con
cuidado la unidad de embudo correspondiente sobre el receptculo y fjese. La
filtracin se lleva a cabo bajo un vaco parcial. Todava con el filtro en su lugar,
aclrese el embudo filtrando tres porciones de 20-30 ml. de agua de dilucin estril.
Tras el enjuagado final y la desconexin al vaco del proceso de filtrado, desbloquese
y retrese el embudo e inmediatamente qutese el filtro de membrana con unas pinzas
estriles, colocndolo en el medio seleccionado con un movimiento de rotacin para
evitar que quede aire atrapado. Introdzcase una muestra de agua de lavar estril
(100 ml.) despus de filtrar una serie de 10 muestras para comprobar posibles
contaminaciones cruzadas o contaminacin del agua de lavado. Incbese la
membrana de control en las mismas condiciones que las de la muestra.
Tcnica de enriquecimiento: Colquese una compresa absorbente estril en la
mitad superior de una placa de cultivo estril y llvese con la pipeta una cantidad
suficiente de medio enriquecido (1.8-2.0 ml. de medio de lauril triptosa) para que se
sature la compresa, retirando cuidadosamente de la misma el exceso de lquido.
Colquese aspticamente sobre la compresa el filtro por el que se ha filtrado la
muestra. Incbese el filtro sin invertir la placa durante 1.5-2 horas a 35 0.5C en una
atmsfera con humedad relativa de al menos el 90%. Si se utiliza un medio con agar,
retrese el cultivo de enriquecimiento de la incubadora, levntese el filtro de la
compresa de enriquecimiento y arrllese sobre la superficie del agar. Es fcil observar,
si la colocacin del filtro es incorrecta, que aparecen parches de membrana sin teir
que indican atropamiento de aire. En estos casos, vulvase a colocar cuidadosamente
el filtro sobre la superficie del agar. Si se utiliza un medio lquido, preprese el cultivo
final, retirando el cultivo de enriquecimiento de la incubadora y separando las dos
mitades de la placa. Sitese una nueva compresa estril en la mitad inferior de la
placa y satrese con 1.8-2.0 ml. de medio M-Endo final. Transfirase a la nueva
compresa el filtro con las precauciones antes mencionadas, desechndose la ya
utilizada. Tanto en el caso del agar como del medio lquido, invirtase la placa e
incbese durante 20-22 horas a 35 0.5C, procedindose despus como se indica
en el prrafo e.
Tcnica alternativa de un solo paso: Si se utiliza un medio con agar, sitese en el
agar el filtro preparado directamente, como se ha descrito antes, y se incuba a 35
0.5C durante 22-24 horas. Si se utiliza medio lquido, colquese la compresa en la
placa de cultivo y satrese con 1.8-2.0 ml. de medio M-Endo. Sitese el filtro

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preparado directamente sobre la compresa, invirtase la placa e incbese durante 2224 horas a 35 0.5C.

Recuento: La tpica colonia de coliformes tiene un color rojo oscuro, con un brillo
metlico en superficie. El rea brillante puede ser slo un pequeo punto, o bien
cubrir por completo la superficie de la colonia. Recuntense las colonias con brillo, con
ayuda de una lupa estereoscpica binocular de campo amplio y bajos aumentos (1015 aumentos) o de otro instrumento ptico, con una luz blanca fra fluorescente
colocada directamente y lo ms perpendicular posible al plano del filtro. Las colonias
sin brillo pueden ser rosadas, rojas, blancas o incoloras y se consideran como no
coliformes. El recuento total de colonias (coliformes y no coliformes) no tiene relacin,
en un medio tipo Endo, con el nmero total de bacterias que existen en la muestra
original. Sin embargo, un elevado recuento de colonias no coliformes puede interferir
con el mximo desarrollo de las coliformes. La incubacin anaerobia a 35C durante
24 horas permite inhibir, en el caso de algunas aguas naturales, las colonias no
coliformes, pero el proceso debe valorarse cuidadosamente para comprobar que no
se producen perdidas en la recuperacin de coliformes. Las muestras de agua
desinfectada o de efluentes de aguas residuales contienen a veces microorganismos
en condiciones anmalas que crecen de forma relativamente lenta y producen un brillo
mximo al cabo de 22-24 horas. Los microorganismos procedentes de aguas no
desinfectadas pueden producir brillo a las 16-18 horas, decayendo despus de 24-30
horas.
Verificacin de coliformes: Los microorganismos no coliformes producen a veces
tpicas colonias con brillo. Por tanto, se deber comprobar mediante una prueba de
fermentacin de lactosa o utilizando procedimientos alternativos, como una prueba
rpida (4 horas) de dos reacciones bioqumicas clave o un sistema multiprueba para
especificacin.

MATERIALES
a.

Materiales de Laboratorio
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Medios de Cultivo
o Agar selectivo para coliformes fecales, Agar endo
o Etanol
o Agua destilada
Materiales de vidrios
o Matraces
o Pipetas volumtricas de 10ml, 1ml
o Frascos de vidrio de boca ancha con tapa de plstico
Equipos de Laboratorio
o
o
o
o

Autoclave elctrico
Balanza Analtica
Incubadora bacteriolgica
Horno

RESULTADOS
Se pudo obtener el brillo metlico esperado, esto quiere decir que en las
muestras tomadas de Puente Huachipa, Puente Nuevo y Puente Santa
Rosa existe la presencia de coliformes, aunque eso no es todo el analisis.
Se pudo apreciar que en la muestra tomada del Puente Huachipa no se vio
muchas colonias con brillo metlico, la explicacin debe ser a que por ser
esta zona cercana a la parte sierra de lima ( cercana al nacimiento del Rio
Rimac ) las aguas que fluyen por esta parte del ro no estn muy
contaminadas, adems se hizo notar que las personas de esta zona no
arrogan desperdicios a esta parte del ro.
Por otra parte la muestra tomada en el Puente Nuevo fue todo lo contrario,
aqu se observo mayor cantidad de colonias con brillo metlico y es obvio
debido a la gran recurrencia de personas a botar sus desechos y
desperdicios. Aqu adems ya desembocan los desages de algunas zonas
de Lima cosa que no suceda en la zona de Huachipa. En los desages esta
la mayor posibilidad de hallar coliformes es esta una de las razones.

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Comparacin de niveles de coliformes totales en el ro

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En la muestra del Puente Santa Rosa tambin se hallo brillo metlico pero
en cantidades medias se debe quizs a que en est zona los trabajos
hechos por la municipalidad han dejado las aguas del ro estancadas.

DISCUSION
La contaminacin del agua se debe a la deficiente proteccin fsica y de la falta de
educacin sanitaria. As como la inadecuada limpieza de los desechos que los
pobladores arrojan al ro.
Debido a que el trayecto del ro Rmac la poblacin va creciendo, teniendo como
punto PUENTE HUACHIPA, va aumentando la contaminacin debido a que la
poblacin bota sus desechos al ro, en los puntos donde hay mayor presencia de
pobladores habr mayor contaminacin.
Siguiendo esta hiptesis se encontrara menor contaminacin en PUENTE
NUEVO, seguida en PUENTE SANTA ROSA para luego dar una mayor
contaminacin en la salida al mar.

CONCLUSION
1.

Se concluye que se encontr coliformes totales en el ro Rmac, por

lo que era de suponerse ya que los puntos tomados eran puntos
estratgicos (mayor concentracin de desperdicios).

2.

Tambin se concluye que la muestra tomada en el puente Nuevo era

la ms contaminada, esta conclusin era lgica ya que en la zona donde
tomamos la muestra estaba muy contaminada con desperdicios

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RECOMENDACIONES
1. Realizar cada seis meses la limpieza de los ros, estanques.
2. Comparar los resultados segn el marco legal permitido y dar a
conocer esto a las autoridades competentes.
3. Realizar estudios epidemiolgicos de salud publica en zonas que
no tienen agua potable y se abastecen de este ro.
4. Implementar un programa de vigilancia de agua de consumo
humano en zonas urbano-marginales.

ANEXOS
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PUENTE STA. ROSA

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PUENTE NUEVO

PUENTE HUACHIPA
ZZZZZZZZ

PUENTE STA. ROSA

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PUENTE NUEVO

PUENTE HUACHIPA

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FUNTES DE INFORMACION

www.coopeducativamoreno.com.ar
www.cepis.ops-oms.org/
http://www.digesa.sld.pe/

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