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Morado

TCNICAS EN BIOLOGA
MOLECULAR, APLICACIN EN
MEDICINA

INTEGRANTES:
GARAY FLORES, Luilly
MACO ROQUE, Ayhsli
MERINO AVENDAO, Lucia
TELLO QUISPE, Brian
DOCENTE:
SOTO CACERES CABANILLAS,
Rosario
SECCIN:
02D

SEMINARIO DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

INTRODUCCIN
La reaccin en cadena de la polimerasa, conocida como PCR por
sus siglas en ingls (Polymerase Chain Reaction), es una tcnica
de biologa molecular desarrollada en 1986 por Kary Mullis, cuyo
objetivo es obtener un gran nmero de copias de un fragmento de
ADN particular, partiendo de un mnimo; en teora basta partir de
una nica copia de ese fragmento original, o molde.
Esta tcnica sirve para amplificar un fragmento de ADN; su utilidad
es que tras la amplificacin resulta mucho ms fcil identificar con
una muy alta probabilidad virus o bacterias causantes de una
enfermedad, identificar personas (cadveres) o hacer investigacin
cientfica sobre el ADN amplificado. Estos usos derivados de la
amplificacin han hecho que se convierta en una tcnica muy
extendida, con el consiguiente abaratamiento del equipo necesario
para llevarla a cabo
Esta tcnica se fundamenta en la propiedad natural de las ADN
polimerasas para replicar hebras de ADN, para lo cual emplea
ciclos de altas y bajas temperaturas alternadas para separar las
hebras de ADN recin formadas entre s tras cada fase de
replicacin y, a continuacin, dejar que vuelvan a unirse las
polimerasas para que vuelvan a duplicarlas.

OBJETIVOS

1. Explique la tcnica PCR (Reaccin en cadena de polimerasa).

Aplicaciones en medicina.

El proceso de PCR por lo general consiste en una serie de 20 a 35

cambios repetidos de temperatura llamados ciclos; cada ciclo suele
consistir en 2-3 pasos a diferentes temperaturas.
La PCR comn se realiza con ciclos que tienen tres pasos de
temperatura. Los pasos de ciclos a menudo estn precedidos por un
choque trmico (llamado "hold") a alta temperatura (> 90 C), y
seguido por otro hold al final del proceso para la extensin de
producto final o el breve almacenaje. Las temperaturas usadas y el
tiempo aplicado en cada ciclo dependen de gran variedad de
parmetros. stos incluyen la enzima usada para la sntesis de ADN,
la concentracin de iones divalentes y de los dNTP en la reaccin, y la
temperatura de unin de los cebadores, as como la longitud del ADN
que se desea amplificar
Componentes:
ADN molde
ADN polimerasa
Cebadores o Primers
Nucletidos Libres
La reaccin en cadena de polimerasa est comprendida en 30 o 40
ciclos de 3 pasos:

Desnaturalizacin

Alineamiento

Extensin

1. Desnaturalizacin:

En primer lugar, se desnaturaliza el ADN (se separan las dos hebras de

las cuales est constituido). Este paso puede realizarse de diferentes
modos, siendo el calentamiento de la muestra la forma ms habitual. La
temperatura a la cual se decide realizar la desnaturalizacin depende,
por ejemplo, de la proporcin de G+C que tenga la hebra, como tambin
del largo de la misma. Otros mtodos, raramente empleados en la
tcnica de la PCR, seran la adicin de sales o agentes qumicos
capaces de realizar la desnaturalizacin.

2. Hibridacin:
A continuacin se producir la hibridacin del cebador, es decir, el
cebador se unir a su secuencia complementaria en el ADN molde. Para
ello es necesario bajar la temperatura a 40-68 C durante 20-40
segundos, permitiendo as el alineamiento. Los puentes de hidrgeno
estables entre las cadenas de ADN slo se forman cuando la secuencia
del cebador es muy similar a la secuencia del ADN molde. La polimerasa
une el hbrido de la cadena molde y el cebador, y empieza a sintetizar
ADN. Los cebadores actuarn como lmites de la regin de la molcula
que va a ser amplificada

3. Extensin:

Acta la ADN polimerasa, tomando el ADN molde para sintetizar la

cadena complementaria y partiendo del cebador como soporte inicial
necesario para la sntesis de nuevo ADN. La polimerasa sintetiza una
nueva hebra de ADN complementaria a la hebra molde aadiendo los
dNTP complementarios en direccin 3' 5', uniendo el grupo 5'fosfato de los dNTP con el grupo 3'-hidroxilo del final de la hebra de
ADN creciente. La temperatura para este paso depende de la ADN
polimerasa que usemos. Para la polimerasa Taq, la temperatura de
mxima actividad est en 75-80 C. El tiempo de extensin depende
tanto de la ADN polimerasa usada como de la longitud del fragmento
de ADN que se va a amplificar. Hay una regla comnmente usada: en
su temperatura ptima, la polimerasa de ADN polimerizar mil bases
en un minuto.

Aplicaciones en medicina:
En Oncologa, la deteccin de translocaciones, mutaciones,
deleciones, etc., aporta un mtodo ms objetivo y sensible al
establecer un diagnstico, dado que el estudio clsico de las
neoplasias se fundamenta en la identificacin histopatolgica de
clulas malignas las cuales, sin embargo, se reconocen slo si
al menos 1%-10% de las clulas son neoplsicas.
Identificacin de ciertos genes asociados a diferentes
enfermedades familiares como la fibrosis qustica, la distrofia
muscular de Duchenne y otras muchas.
En la serologa o el estudio histopatolgico de las muestras, la
amplificacin de cidos nucleicos por medio de la PCR aporta
grandes ventajas, como son una gran sensibilidad diagnstica,
as como una elevada especificidad. Uno de los ejemplos
paradigmticos de la utilidad clnica de la PCR es el diagnstico
de la encefalitis por el virus herpes simplex.
Establecer el pronstico de distintas infecciones por medio de la
determinacin cuali/cuantitativa del virus de la hepatitis C o por
medio de la determinacin de la viremia plasmtica en la
infeccin por el VIH, en la que est reconocida la importancia
de la determinacin de la carga vrica en sangre en el
pronstico de la infeccin y tambin en la evaluacin del
tratamiento.
Pruebas de paternidad
Deteccin de cepas resistentes a antibiticos
En Medicina Legal: Identificacin de individuos a partir de
muestras biolgicas

CONCLUSIN

BIBLIOGRAFIA