BENMERITA UNIVERSIDAD AUTNOMA DE PUEBLA

VICERRECTORA DE DOCENCIA
DIRECCIN GENERALDE EDUCACIN SUPERIOR
FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS

LICENCIATURA EN FARMACIA
REA: BIOQUMICA - ALIMENTOS

ASIGNATURA: LABORATORIO DE
BIOQUMICA I
(MOLECULAR)

CDIGO: FARM-015 L
ELABORADO POR:
M.C. Ma. Bertha Alvarado Hidalgo
M. C. Rosa Mara Dvila Mrquez
M.C. Eustoquia Ramos Ramrez
M.C. Leticia Garca Albarrn
M. C. Gonzalo A. Flores Mendoza

DICIEMBRE 2008
PE: LICENCIATURA EN FARMACIA

REGLAS DE HIGIENE Y SEGURIDAD EN EL LABORATORIO

Usar siempre bata y lentes de proteccin

Eliminar de la zona de trabajo los artculos personales (libros, cuadernos, suter,
bolsa, etc.

No fumar. Fumar es peligroso porque hay materiales y vapores flamables, adems
de que contamina el ambiente

No ingerir bebidas ni alimentos en el laboratorio, porque hay la posibilidad de
contaminar los alimentos, bebidas y manos con sustancias txicas y / o corrosivas

No usar el material de laboratorio como recipientes para comer o beber

Lavarse las manos peridicamente

Desechar el material defectuoso (material de vidrio estrellado, tubo de hule
desgatado, cables elctricos pelados, etc.)

Mantener el rea de trabajo perfectamente limpia. De preferencia con una franela

En caso de cualquier accidente por leve que sea avisar de inmediato a su profesor

Realizar el experimento siguiendo la tcnica indicada. En caso de querer
modificarla consultar a su profesor

Leer perfectamente las etiquetas antes de usar cualquier reactivo. NUNCA
regresar el reactivo sin usar al frasco. Si se toma una cantidad excesiva, dejar el
exceso para otro estudiante o trasvasarlo a otro vacio y etiquetarlo.

Cuando caliente el material de vidrio, hgalo con proteccin y lentamente, si es un
tubo de ensayo NUNCA apuntar la boca del recipiente hacia uno o hacia sus
compaeros

NUNCA probar el sabor de un reactivo. Cuando necesite olerlo, no lo haga
directamente del recipiente, abanicar con la mano los vapores hacia la narz

NUNCA verter agua sobre un cido. Siempre agregar lentamente el cido sobre el
agua

Si se desprenden vapores durante un experimento , realizarlo bajo la campana de
extraccin

Verter los reactivos lquidos que ya no sirven en un contenedor que indique su
profesor. Si se tira directamente al desage dejar correr agua abundante

No tirar los slidos en el lavabo

Los disolventes orgnicos son insolubles en el agua por lo que deben guardarse
en contenedores que proporcione su profesor

Al terminar cualquier prctica se debe lavar perfectamente el material con agua y
jabn antes de guardarlo

PE: LICENCIATURA EN FARMACIA

CROMATOGRAFA DE AMINOCIDOS
INTRODUCCIN
Varios factores son importantes en la separacin de sustancias por cromatografa
en papel, entre ellos hay que citar la particin, una combinacin de particin y adsorcin y
en algunos casos el intercambio inico.
El factor predominante en la separacin de solutos por cromatografa en papel es la
particin entre dos fases no miscibles (coeficiente de reparto); fase estacionaria (agua) y
fase mvil (solventes orgnicos).
El soluto se mueve en la direccin del flujo del solvente a una velocidad
determinada por la atraccin que ejerzan sobre las fases del sistema, a esto se le
denomina Rf.
Los principales factores con este mtodo influencian los Rf de los aminocidos son
el pH, tipo de papel, temperatura y longitud de la mecha. Es conveniente analizar al
mismo tiempo y con el mismo disco soluciones estndar y soluciones desconocidas.
OBJETIVOS:
1. Realizar una cromatografa circular de aminocidos.
2. Separar una mezcla de aminocidos.
MATERIAL: (Que debern traer los alumnos)
Tijeras

Comps

Lpiz

Reglas

Algodn

Caja de petri
Capilares
Papel filtro
Estufa a 55C
REACTIVOS:

Aminocidos en solucin 0.05

Solvente: n-Butanol: cido actico glacial: Agua (4:1:5)
Revelador: Solucin de Ninhidrina
Hidrxido de amonio concentrado

PE: LICENCIATURA EN FARMACIA

DESARROLLO:
1. Doble por la mitad el crculo de papel filtro con ayuda de dos escuadras.
2. Con lpiz y regla divida en cuatro cuadrantes el crculo de papel filtro.
3. Con un comps trace un circulo de un centmetro de radio en el centro del papel
(origen).
4. En el extremo ms alejado del centro de cada cuadrante escriba el nombre de
cada aminocido y en un cuadrante la palabra mezcla.
5. Con ayuda del comps haga un orificio en el centro del papel.
6. Con un pedazo de algodn haga una pequea mecha e introdzcala por el
orificio, procure que la mecha no sea muy gruesa. La mecha por la parte inferior
debe tener de 1.5 a 2 cm de largo y por la parte superior debe estar casi al ras
del papel.
7. Coloque en la base de la caja de petri el solvente (aproximadamente 15 ml).
Tpela para que se sature.
8. Aplique en el papel sobre el origen, utilizando los capilares, el aminocido que
corresponda al nombre escrito en cada cuadrante, para la mezcla, deber colocar
una gota de cada aminocido procurando que seque entre cada aplicacin.
9. Una vez secas todas las muestras pase el papel sobre el bocal de una botella de
hidrxido de amonio concentrado para neutralizar los aminocidos.
10.Coloque el papel dentro de la caja petri (sobresalen los bordes) presione
ligeramente.
11.Espere que corra el solvente y saque el papel cuando el solvente est en el
borde de la caja. Quite la mecha jalndola hacia abajo, marque con el lpiz el
frente del solvente para cada cuadrante .
12.Seque por aereacin el papel y roce el revelador , espere que seque un poco e
introdzcalo a la estufa hasta aparicin de color.
CUESTIONARIO.
1. En qu orden migran los aminocidos de los diferentes grupos?
2. Es la Ninhidrina un revelador selectivo? Por qu?
3. Como se calcula el Rf?

PE: LICENCIATURA EN FARMACIA

CROMATOGRAFA DE AMINOCIDOS
(2)
INTRODUCCIN
Varios factores son importantes en la separacin de sustancias por cromatografa
en papel; entre ellos hay que citar la particin, una combinacin de particin y adsorcin y
en algunos casos el intercambio inico.
El factor predominante en la separacin de solutos por cromatografa en papel es la
particin entre dos fases no miscibles (Coeficiente de reparto); fase estacionaria (Agua) y
fase mvil (Solventes orgnicos).
El soluto se mueve en la direccin del flujo del solvente a una velocidad
determinada por la atraccin que ejerzan sobre l las fases del sistema, a esto se le
denomina Rf.
Los principales factores que afectan al Rf de los aminocidos son el pH, tipo de
papel y temperatura. Es conveniente analizar al mismo tiempo y en el mismo papel
soluciones estndar y desconocidas.
OBJETIVOS:
1. Realizar una cromatografa ascendente de aminocidos.
2. Separar una mezcla de aminocidos.
MATERIAL:

Cmara cromatogrfica
Papel para cromatografa (16 cm largo X 18 cm ancho)
Estufa 90 0 C
Capilares

LOS ALUMNOS DEBERN TRAER:

Lpiz
Reglas
REACTIVOS:
Aminocidos en solucin 0.05 M
Solvente: n - Butanol: cido actico glacial: Agua
4 :
1
: 5
Revelador: Solucin de Ninhidrina
Hidrxido de amonio concentrado

PE: LICENCIATURA EN FARMACIA

DESARROLLO
1. Cuidando de tocar SOLO en la esquina superior, marque una lnea horizontal a
2 cm del borde inferior a todo lo ancho de la hoja de cromatografa (Origen)
2. Sobre el origen marque respecto de la orilla las siguientes medidas: 3.5 , 7.5 ,
11.5 y 15.5 cm respectivamente.
3. En estos puntos escriba el nombre del aminocido que corresponda y la palabra
mezcla.
4. Coloque en la cmara el solvente (aproximadamente 20 ml) tpela para que se
sature.
5. Aplique con los capilares sobre el punto que marc en el origen el aminocido

6.
7.
8.
9.

que corresponda, para la mezcla deber colocar una gota de cada aminocido
procurando que seque entre cada aplicacin.
Una vez secas todas las muestras pase el papel sobre el bocal de una botella
de hidrxido de amonio concentrado para neutralizar los aminocidos.
Tomando las esquinas del borde superior nalas (Formando un rollo) e
introdzcalo a la cmara, cierre.
Espere que corra el solvente y saque el papel cuando el solvente est
aproximadamente a un cm. del borde de la cmara.
Seque por aereacin el papel y roce el revelador, espere que seque un poco e
introdzcalo a la estufa hasta aparicin de color.

CUESTIONARIO
1. En qu orden migran los aminocidos de los diferentes grupos?
2. Es la ninhidrina un revelador selectivo? Por qu?
3. Cmo se calcula el Rf?

PE: LICENCIATURA EN FARMACIA

PUNTO ISOELCTRICO DE PROTENAS

INTRODUCCIN:
La conducta de una protena ante una titulacin, depende del nmero y la carga de
cada uno de los grupos ionizables de los aminocidos que las formen (grupo guanidlico,
fenlico, imidazlico, amino y carboxilo).
El pH al que una protena muestran un mnimo de solubilidad es su punto
isoelctrico o pH isoelctrico, definido como el valor de pH al que una molcula posee
carga neta de cero y es incapaz de desplazarse en un campo elctrico. En estas
condiciones no existe repulsin electrosttica ente molculas de protenas vecinas y
tienden a coalecer y flocular o precipitar segn sea el caso.
OBJETIVOS:
1. Determinar el pI de diferentes protenas.
2. Observar el efecto del alcohol como agente precipitante.
MATERIAL:
9 tubos de ensaye
1 gradilla.
REACTIVOS:
Caseinato de sodio 0.1 N
Gelatina al 1.0 %
Ovoalbmina en KCl 1:16
cido actico: 0.01 N, 0.1 N, 1.0 N.

NaOH 1.0 N
Acetato de sodio 0.1 N
Alcohol etlico
Agua destilada

DESARROLLO:
DETERMINACIN DEL PUNTO ISOELCTRICO DE LA CASEINA.
Preparar 9 tubos como lo indica la tabla siguiente
NMERO DE TUBO
REACTIVOS.(ml.)
Agua destilada
Ac actico 0.01 N
Ac actico 0.1 N
Ac actico 1.0 N

1
8.38
0.62
-----

2
7.75
1.25
-----

3
8.75
--0.25
---

4
8.5
--0.5
---

5
8
--1
---

6
7
--2
---

7
5
--4
---

8
1
--8
---

9
7.4
----1.6

Agitar los tubos y agregar 1 ml de solucin de casena (Caseinato de sodio 0.1 N).
Agitar los tubos inmediatamente. Observar los enturbiamientos que se producen despus
de agitar, esperar 15 minutos y anotar los resultados marcando con "0" la falta de
turbidez, marcar con una "+" los grados de turbidez y con una "X" la precipitacin. El pH
de cada tubo se determina usando la ecuacin de Henderson Hasselbach.

PE: LICENCIATURA EN FARMACIA

DETERMINACIN DEL PUNTO ISOELCTRICO DE LA GELATINA

La gelatina y otras protenas se disuelven por completo en el agua an en su punto
isoelctrico, por lo tanto deben aadirse agentes precipitantes como el alcohol etlico para
hacerlo de manifiesto.
Preparar 9 tubos como lo indica la tabla siguiente:
NMERO DE TUBO
REACTIVOS (ml)
Acetato de sodio
0.1 N
Ac. Actico 0.1 N
Ac. Actico 1.0 N
Agua destilada
Gelatina al 1 %

1
2

2
2

3
2

4
2

5
2

6
2

7
2

8
2

9
2

0.12
--3.88
2

0.25
--3.75
2

0.5
--3.5
2

1
--3
2

2
--2
2

4
----2

--0.8
3.2
2

--1.6
2.4
2

--3.2
0.8
2

Mezclar bien el contenido de los tubos y DESECHAR LA MITAD de cada uno, al

tubo No 5 aadir de 5 a 8 ml de alcohol etlico hasta producir una tenue nebulosidad,
adicionar a los dems tubos la misma cantidad de alcohol que la aadida al tubo No. 5.
Anote los resultados de la misma forma que para la casena.
DETERMINACIN DEL PUNTO ISOELCTRICO DE LA OVOALBMINA
Preparar 7 tubos como lo indica la tabla siguiente:
NMERO DE TUBO
REACTIVO (ml)
Acetato de sodio 0.1 N
Ac. Actico 0.01 N
Ac. Actico 0.1 N
Ac. Actico 1.0 N
NaOH 1.0 N
Agua destilada
Ovoalbmina
pH aproximado

1
1
------6.95
1.5
8

2
1
0.05
----0.05
6.95
1.5
7

3
1
--0.25
----6.75
1.5
5

4
1
--1
----6
1.5
4

5
1
--4
----3
1.5
4

6
1
----1.6
--5.4
1.5
3.4

7
----6.4
--0.6
1.5
2.8

Agite y anote los resultados igual que en los casos anteriores.

CUESTIONARIO:
1. Defina pI de una protena
2. Escriba la ecuacin de Henderson Hasselbach
3. Por qu el alcohol acta como agente precipitante para la gelatina?

PE: LICENCIATURA EN FARMACIA

ACTIVIDAD ENZIMTICA.
INTRODUCCIN:
Las enzimas son protenas especializadas en la catlisis de reacciones biolgicas
especficas.
La actividad de algunas enzimas depende solamente de su estructura como
protenas, mientras que otras necesitan adems, uno o ms componentes no proteicos
llamados COFACTORES. El cofactor puede ser un ion metlico o bien una molcula
llamada COENZIMA, algunas enzimas necesitan de ambos. Los cofactores son
generalmente estables frente al calor, mientras que muchas enzimas pierden la actividad
por calefaccin.
El complejo enzima-cofactor catalticamente activo recibe el nombre de
HOLOENZIMA, la protena por s misma es inactiva y recibe el nombre de APOENZIMA.
Algunas enzimas precisan de iones metlicos como cofactores y se les llama
+3
METALOENZIMAS, por ejemplo la catalasa que requiere de Fe .
La mayora de las enzimas posee actividad a un pH caracterstico al cual su
actividad es mxima; por enzima o por debajo de ese pH la actividad disminuye.
La velocidad de las reacciones catalizadas por enzimas se incrementa en general
por la temperatura, dentro del intervalo en que la enzima es estable y permanece
totalmente activa. La mayora de las enzimas se desactivan a temperaturas comprendidas
entre 55-60C. Esto depende del hecho de que son protenas; molculas que se
desnaturalizan con el calor, con la prdida simultnea de sus propiedades.
Si a un sistema enzimtico se aaden sustancias que impiden la realizacin de la
actividad propia de la enzima se dice que el sistema ha sido inhibido y la sustancia que se
usa con estos fines se llama INHIBIDOR.
La reaccin en que interviene la enzima Catalasa es:
2 H2O2

2 H2O

O2

Esta enzima pierde actividad a altas temperaturas o en presencia de inhibidores

como el grupo CN- que forma quelatos con su cofactor o el Pb- que acta sobre grupos SH de la enzima indispensable para su actividad.
OBJETIVOS:
1. El alumno observar la actividad de la enzima Catalasa utilizando diferentes
fuentes biolgicas.
2. El alumno comparar el efecto de la temperatura de algunos inhibidores como
el Pb y el CN- sobre la actividad enzimtica de la Catalasa

PE: LICENCIATURA EN FARMACIA

MATERIAL:
12 tubos de ensaye

REACTIVOS:
Cianuro de sodio al 5%

1 gradilla

Nitrato de plomo al 5%

Bao Mara 100C

El alumno deber traer:

H2O2
Papa *
Hgado de pollo*
Manzana *
* todo crudo

2 goteros
Pinzas pequeas.
Papel absorbente
Cuchillo

DESARROLLO:
1. Corte en trozos delgados (procure que sean todos del mismo tamao)cada
tejido disponible y pngalo sobre el papel absorbente anotando el nombre
correspondiente. No debe tocarse con los dedos, sino manipularse con las
pinzas.
2. De cada tejido separe una porcin y pngala en un tubo y cbrala con agua
destilada, introdzcala en el agua hirviente durante 5 minutos, coloque estas
porciones sobre el papel absorbente indicando que estn hervidas y anote su
nombre.
3. Prepare una serie de tubos para cada tejido como lo indica la tabla siguiente:
Contenido
Tejido
NaCN 5%
Pb(NO3)2 5%
H2O2

Tubo 1
Sin hervir
--------2 ml

Tubo 2
Hervido
--------2 ml

Tubo 3
Sin hervir
5 gotas
----2 ml

Tubo 4
Sin hervir
----5 gotas
2ml

Mezcle bien, marque con cruces de 1 a 5 segn aprecie la intensidad de burbujeo

en cada serie de tubos.
CUESTIONARIO:
1. Cul es el efecto de la temperatura sobre la actividad enzimtica.?
2. Qu es el factor Q-10?
3. escribir el complejo que se forma con el Fe y el CN-.

PE: LICENCIATURA EN FARMACIA

DETECCIN DE CARBOHIDRATOS REDUCTORES

INTRODUCCIN:
Los carbohidratos cuya molcula contiene un grupo carbonilo libre se denominan
azcares reductores. Los monosacridos y la mayora de los disacridos presentan un
carbonilo libre, estos azvares son oxidados con facilidad a adiversos productos en un
medio alcalino con iones metlicos reducibles tales como Cu+2 o la Ag+1. Los carbohidratos
como la sacarosa cuyos carbonos anomricos forman parte del enlace glucosdico, se
denominan azcares no reductores, los cuales no son oxidados con facilidad y por lo tanto
no reducen iones metlicos.
OBJETIVO:
3. Detectar la presencia de azcares reductores en una muestra problema por
medio de la reaccin de Trommer.
MATERIAL:
8 tubos de ensaye

REACTIVOS:
Glucosa al 1%

1 gradilla

NaOH al 10

Bao Mara 100C

Sulfato cprico al 1%

2 pipetas de 5 ml

Soluciones problema 1, 2, 3 al 1%

Pinza para tubo de ensaye

DESARROLLO:
4. Prepare una serie de tubos tal y como se indica en la siguiente tabla
Contenido
Glucosa
Problema 1
Problema 2
Problema 3
NaOH
Sulfato cprico

Tubo 1
2 ml

Tubo 2

Tubo 3

Tubo 4

2 ml
2 ml
2 ml
2 ml

2 ml
2 ml

2 ml
2 ml

2ml
2 ml
2 ml

5. El sulfato cprico debe aadirse con cuidado y gota agota, agitando los tubos.
En presencia de glucosa el precipitado de hidrxido cprico (+2) formado, se
disuelve coloreando el lqudo de color azul claro.
6. La capa superior del lquido se calienta hasta ebullicin, la aparicin de un
precipitado amarillo de hidrxido cuproso (+1) y luego de rojo de xido cuproso
indica que la reaccin de Trommer es positiva.
CUESTIONARIO:
PE: LICENCIATURA EN FARMACIA

4. Escriba la reaccin que ocurre al adicionar sulfato cprico e hidrxido de sodio

a la glucosa
5. Defina azcar reductor y azcar no reductor
6. Mencione 3 ejemplos de azcares reductores

PE: LICENCIATURA EN FARMACIA

DETERMINACIN DE LA PRESENCIA DE AZCARES Y

FORMACIN DE OSAZONAS
INTRODUCCIN:
Los carbohidratos son molculas que desde el punto de vista qumico se definen
como polihidroxialdehidos o polihidroxiacetonas (derivados aldehdicos o cetnicos de
polialcoholes), es necesario saber identificar a estas molculas del conjunto de
biomolculas presentes en una muestra, existen pruebas generales como la de Molish o
ms especficas como la de Seliwanoff, Bial Biuret, Formacin de osazonas, etc., que nos
permiten conocer diferentes aspectos de las molculas en cuestin,
En esta prctica realizaremos una prueba general de deteccin que es la de
Molish y una reaccin de identificacin por formacin de osazonas.
OBJETIVOS:
1. Detectar la presencia de carbohidratos en una solucin problema mediante la
prueba de Molish.
2. Identificar el azcar presente en la solucin problema por formacin de
osazonas.
MATERIAL:
5 tubos de ensaye
2 portaobjetos.
3 pipetas
REACTIVOS :
Solucin de glucosa al 10%
H2SO4 concentrado.
Soluciones problema A y B
Clorhidrato de fenilhidracina

Balanza granataria.
1 agitador.
Bao Mara.
Microscopio

Soluciones problema 0.01 M

H2O destilada.
Reactivo de Molish (a naftol 5% en
etanol)
CH3COONa

DESARROLLO: (Antes de iniciar espere las indicaciones del profesor)

PRUEBA DE MOLISH
1. En cuatro tubos de ensaye rotulados: blanco, testigo, problema A y problema B,
coloque 2.5 ml de cada solucin indicada al 10%.
2. Aada dos gotas de reactivo de Molish y mezcle bien.
3. Vierta con cuidado y deslizando por las paredes del tubo 2 ml de H2SO4
concentrado no agite!
4. La aparicin de un color violeta rojizo en la interfase es una prueba positiva de
la presencia de carbohidratos (compare con el testigo).

PE: LICENCIATURA EN FARMACIA

FORMACIN DE OSAZONAS.
En la balanza granataria:
1. Pese 2gr de clorhidrato de fenilhidracina y 3gr de acetato de sodio, mezcle
cuidadosamente bien (reactivo de fenilhidracina-acetato).
2. Pese 0.7gr de reactivo fenilhidracina-acetato por cada muestra positiva que
obtuvo en la prueba de Molish (Excepto para el testigo).
3. En un tubo de ensaye coloque 1ml de la solucin positiva a Molish pero ahora
con una concentracin de 0.01 M
4. Agregue el reactivo de fenilhidracina-acetato.
5. Adicione 2ml de agua destilada y mezcle bien.
6. Tape el (o los) tubos con algodn y colquelos en el bao Mara a ebullicin,
observe a los 15 minutos y deje hervir 10 minutos ms.
7. Rotule cada portaobjetos.
8. Retire el (o los) tubos del bao y deje enfriar, coloque cuidadosamente los
cristales en un portaobjetos con ayuda del agitador.
9. Observe los cristales al microscopio a seco dbil.
REPORTE:
1. Escriba los problemas con que trabaj e indique cul fue positivo a la prueba de
Molish
2. Dibuje la forma de los cristales de los azcares conocidos.
3. Dibuje la forma de sus cristales problema.
4. Escriba el nombre y estructura del problema identificado.
CUESTIONARIO
1. Cul es el fundamento de la prueba de Molish? Escriba la reaccin utilizando
glucosa y ribosa como ejemplos.
2. Cul es el fundamento de la formacin de osazonas? Escriba la reaccin
utilizando galactosa como ejemplo.
3. Explique a qu se debe que algunos azcares sean agentes reductores.

PE: LICENCIATURA EN FARMACIA

MTODOS ANALTICOS PARA LA CARACTERIZACIN DE LPIDOS

INTRODUCCIN:
Las funciones que desempean los lpidos en los organismos es muy variada, por
ejemplo : Como componentes estructurales de las membranas celulares, como fuentes de
energa, como disolventes para sustancias orgnicas, como precursores de otros
componentes celulares, etc.
Histricamente la qumica de los lpidos se ocup inicialmente de las propiedades
de mezclas de gran importancia comercial. Se aplicaban pruebas para establecer si los
lpidos eran comestibles o si servan para preparar jabones o productos de belleza (an
se realizan pruebas con estos fines)
Debido a la funcin que desempean en la clula o al uso que le asigne el hombre
a los lpidos, es importante saber aplicar diferentes tcnicas analticas para ellos.
OBJETIVOS:
1.
2.
3.
4.

Determinar el ndice de acidez del aceite de maz.

Formar complejos Urea - cido graso.
Determinar la presencia de insaturaciones en un cido graso.
Realizar reacciones caractersticas del colesterol.

MATERIAL:
2 vasos de precipitado 200 y 50 ml
1 papel filtro
Bao de hielo
5 tubos de ensaye
Bao Mara a 60 C

REACTIVOS:
cido oleico
Almidn 2 %
Fenolftalena.
H2SO4 concentrado
NaOH 0.1 N

1 bureta
1 microscopio
1 probeta
1 embudo

Colesterol
Etanol neutralizado
cido esterico
Urea en metanol

El alumno deber traer:

ceite de oliva
ceite de maz

PE: LICENCIATURA EN FARMACIA

DESARROLLO:
I. INDICE DE ACIDEZ
Fundamento:
La acidez se debe a la hidrlisis que por diversas causas presentan los aceites
(mezclas de triacil-glicridos de P.F. bajos); este factor permite cuantificar la calidad o
rancidez de un aceite, valores aceptables estn dentro del siguiente rango: 1.2 a 3.5.
El ndice de acidez se define como la cantidad de miligramos de KOH necesarios
para neutralizar la acidez libre de 1 gramo de muestra.
Se calcula:

I. a =

56 N V
m

56= Peso molecular del KOH

N= Normalidad de NaOH utilizado
V= mls de NaOH de normalidad N utilizados
m= gramos de muestra utilizados

Procedimiento:
1. Pese exactamente una muestra entre 10 y 15 gramos de aceite de maz, sobre
un vaso de precipitado o un matraz previamente tarado.
2. Agregue 50 mls. de etanol neutralizado.
3. Introduzca al bao a 60 C, adicione 10 gotas de fenolftalena y titule con NaOH
0.1N hasta obtener un color rosa persistente.
4. Calcule el ndice de acidez usando la frmula.
II. FORMACIN DE COMPLEJOS CIDOS GRASOS
CON UREA.
Fundamento:
La formacin de complejos permite la obtencin de compuestos cristalinos
fcilmente aislables cuyo punto de fusin y forma de cristalizacin ayudan a la
identificacin del cido graso.
Procedimiento:
1. Si el cido graso es slido disuelva 1 gr. en 2 ml. de metanol calentando
suavemente en bao Mara, tome 1 ml. y colquelo en el vaso de precipitado de
50 ml, si el cido graso es lquido coloque directamente 1 ml. en el vaso de
precipitado.
2. Agregue 5 ml. de disolucin de urea en metanol, agite intensamente y deje
enfriar a 0C en un bao de hielo o en el refrigerador.
3. Filtre, seque los cristales por aereacin y observe al microscopio. Dibuje los
cristales.

PE: LICENCIATURA EN FARMACIA

III. ABSORCIN DE I2 POR CIDOS GRASOS INSATURADOS

Fundamento:
Los cidos grasos insaturados presentan reacciones de adicin de algenos
formando derivados halogenados saturados.
Cuando esta prueba es cuantitativa permite conocer adulteracin de los alimentos,
as cuando el aceite de oliva tiene valores superiores de 88 probablemente est
adulterado con aceite de semilla de algodn cuyo ndice de iodo es 175 - 202.
Procedimiento:
1. Ponga en un tubo de ensaye 2 ml. de aceite de oliva o cido oleico, agregue 5
gotas de lugol y agite, esta mezcla debe ser rojiza, como la disolucin de iodo.
2. Caliente a la flama y observe que el color va cambiando. Cuando el color inicial
ha desaparecido totalmente, deje enfriar y agregue 10 gotas de disolucin de
almidn, observe e interprete sus resultados.
IV. REACCIONES DEL COLESTEROL.
Fundamento:
El colesterol por accin de agentes deshidratantes como el cido sulfrico y
anhdrido actico se transforma en colesterileno, compuesto de dobles enlaces
conjugados que presenta color.
PROCEDIMIENTO:
1. En un tubo de ensaye perfectamente seco, ponga 100 mg. Aproximadamente
de colesterol. Agregue 3 ml. de cloroformo para disolverlo. Reparta esta
disolucin en dos tubos para efectuar, con cada mitad las reacciones
siguientes.
a) Reaccin de SALKOVSKY.
A unos de los tubos agregue 1 ml de H2SO4 concentrado, mezcle suavemente
y deje separar las capas, en la capa superior que contienen cloroformo
aparecer color rojo y en la inferior un color rojo amarillento con fluorescencia
verde.
b) Reaccin de LIEBERMAN - BURKHARDT
Aadir 10 gotas de anhdrido actico y 2 gotas de H2SO4 concentrado,
mezcle cuidadosamente. Observe los cambios de coloracin que se suceden.

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CUESTIONARIO:
1.
2.
3.
4.
5.

Defina lpido.
Escriba la reaccin de hidrlisis cida de los triacil glicridos.
Escriba la frmula de los cidos grasos esenciales.
Escriba la reaccin de un cido graso insaturado y el I2.
Escriba la frmula del colesterol.

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AISLAMIENTO DE NUCLEOPROTENAS Y
RECONOCIMIENTO DE DNA
INTRODUCCIN:
Las nucleoprotenas son protenas compuestas constituidas de protenas como las
histonas y protaminas conjugadas con cidos nucleicos.
El DNA o cido desoxirribonucleico es un componente de los cromosomas del
ncleo celular, el DNA es un polinucletido, las unidades que lo conforman, llamadas
nucletidos estn constituidas por desoxirribosa, una base nitrogenada (que puede ser
prica o pirimdica) y fosfato.
Las nucleoprotenas de DNA son solubles en soluciones salinas concentradas, pero
son insolubles en soluciones salinas diluidas.
Una fuente importante de nucleoprotenas son los tejidos ricos en ncleos
(leucocitos, espermatozoides, clulas hepticas, etc.). En soluciones salinas concentradas
las desoxirribonucleoprotenas forman disoluciones muy viscosas y se solubilizan en
soluciones salinas diluidas.
Al ser precipitadas, las nucleprotenas se sedimentan en forma de hilos.
Una de las tcnicas empleadas para diferenciar nucleoprotenas de DNA de las
nucleoprotenas de RNA es la reaccin con difenilamina, que frente a las nucleoprotenas
de DNA da una coloracin azul a diferencia del color verde que da frente a las
nucleoprotenas de RNA
OBJETIVOS


Aislar desoxirribonucleoprotenas a partir de hgado de rata

Realizar una reaccin de identificacin de DNA

MATERIAL
Hgado de rata
Mortero con pistilo
Vidrio de reloj
Vaso de precipitado de 500 ml
Vaso de precipitado de 250 ml
Bureta
Tubos para centrfuga
Pinzas para tubo de ensaye
Bao mara
Gradilla
Pipetas de 5 y 10 ml.

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REACTIVOS
NaCl 1N
Agua destilada
Reactivo de difenilamina
Na OH al 4%
DESARROLLO.
AISLAMIENTO DE NUCLEOPROTEINA DE DNA
1. Pese 10 gr. de hgado de rata
2. Tritrelo durante 10-15 min. en el mortero agregando poco a poco 70 ml de
3.
4.
5.
6.
7.

NaCl.
La disolucin viscosa obtenida transfirala a tubos para centrifuga
Centrifugue los tubos durante 10 min. a 2500 rpm
Decante el lquido sobre la probeta y mida el volumen obtenido
En el vaso de precipitado de 500 ml. Agregue agua destilada en una relacin de
6 ml de agua por ml de sobrenadante obtenido.
Vierta lentamente el sobrenadante en el agua que est en el vaso de
precipitado y girando lentamente con la varilla de madera trate de enrollar los
hilos de nucleoprotena de DNA que se va precipitando.

REACCION DE RECONOCIMIENTO DE DNA

1. Filtre el precipitado de nucleoprotenas obtenido anteriormente
2. Tome una pequea cantidad del precipitado y disulvalo en un tubo de ensayo
con 1 ml de NaOH al 4%
3. Aada 1 ml de reactivo de difenilamina y ponga el tubo durante 15 o 20 min. en
bao mara hirviendo.
4. La aparicin de una coloracin azul indica la presencia de DNA
CUESTIONARIO:
1. Escriba la estructura de los cuatro nucletidos que podemos encontrar
en el DNA.
2. Qu funcin tienen los cromosomas?
3. Cul es la composicin de los cromosomas?
Qu diferencia existe entre los nucletidos de DNA y los de RNA?

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