Un biorreactor es un recipiente o sistema que mantiene un ambiente biolgicamente

activo. En algunos casos, un biorreactor es un recipiente en el que se lleva a cabo un

proceso qumico que involucra organismos o sustancias bioqumicamente activas derivadas
de dichos organismos. Este proceso puede ser aerbico o anaerbico. Estos biorreactores
son comnmente cilndricos, variando en tamao desde algunos mililitros hasta metros
cbicos y son usualmente fabricados en acero inoxidable.

Biorreactor a escala de laboratorio conteniendo clulas animales.

Un biorreactor puede ser tambin un dispositivo o sistema empleado para hacer crecer
clulas o tejidos en operaciones de cultivo celular. Estos dispositivos se encuentran en
desarrollo para su uso en ingeniera de tejidos.

En trminos generales, un biorreactor busca mantener ciertas condiciones ambientales

propicias (pH, temperatura, concentracin de oxgeno, etctera) al organismo o sustancia
qumica que se cultiva. En funcin de los flujos de entrada y salida, la operacin de un
biorreactor puede ser de tres modos distintos:
1. Lote (Batch)
2. Lote alimentado (Fed-Batch)
3. Continuo o quimiostato

1. 4. 10. Protoplastos Vegetales - biorreactor de Levantamiento por Aire (O 2

) en Rgimen Laminar (Re2300)
Los protoplastos son clulas vegetales desprovistas de su pared celular, esto se logra
utilizando enzimas proteolticas (proteasas y lipasas) que degradan la pared celular.
Actualmente, el cultivo de protoplastos no es muy acostumbrado, pero de realizarse,
requiere de una cama de aire (burbujas muy finas) que opere en rgimen laminar
(Re2300), para evitar los esfuerzos cortantes (esquileo) e hidrodinmicos (agitacin)
generados en el medio de cultivo daen (lisis celular) las clulas en suspensin (tamao de
Kolmogorov de los Eddies). Tambin es indispensable que el medio de cultivo contenga las
proteasas y lipasas necesarias para evitar la regeneracin de la pared celular.

1. 4. 11. Clulas Animales - biorreactor de Lecho Fluidizado (O 2 )

Los cultivos de clulas animales requieren de proximidad mutua y de un soporte slido
(anclaje) para interactuar (comunicacin clula-clula) y poder metabolizar (producir); esto
por cuanto, las clulas animales, por lo general, no son independientes y deben estar unidas
a un sistema (p.ej; heptico) para funcionar adecuadamente. Para suministrar esa
proximidad y el soporte necesario, los diseos de biorreactores para clulas animales deben
aumentar la densidad celular (concentrar) de las clulas en cultivo. Una forma de hacerlo es
incorporar un lecho fluidizado formado por cantidad de microesferas acarreadores hechas
de material cermico poroso inerte que, por su tamao (micromtrico) forman una interfase
con el medio de cultivo (fluido) que permite la transferencia de masa (nutrientes y OD),
energa (calor) y momentun (agitacin) entre el medio de cultivo y las clulas en cultivo; lo
que es llamado lecho fluidizado. Los cultivos celulares animales, por la delicada naturaleza
de las membranas plasmticas requieren adems de oxgeno disuelto (OD) en el medio de
cultivo (tamao de Kolmogorov de los Eddies) y de un rgimen de agitacin laminar
(Re2300).

1. 4. 12. Clulas Inmovilizadas - biorreactor de Fibra Hueca (O 2 )

La inmovilizacin celular es otra forma de lograr proximidad celular y aumentar la
densidad celular y la concentracin de metabolitos dentro de las clulas. La inmovilizacin
es un mtodo mucho ms eficiente y logra rendimientos muy superiores a los del lecho
fluidizado. Pero, los fenmenos de transferencia (masa, momentun y energa) se ven muy
limitados por la inmovilidad. Esto es especialmente crtico en cultivos de clulas de
mamfero por cuanto ya clula no recibe la nutricin adecuada.

Los reactores de fibra hueca son los dispositivos ms utilizados para inmovilizar y
concentrar cultivos celulares animales. Su diseo consiste en una batera de fibras hueca y
porosa en su interior, colocadas en paralelo. Las clulas se concentran y aumenta la
densidad celular, en los intersticios de las fibras huecas. El medio de cultivo fluye en
contrasentido desde el exterior del reactor o a travs de una carcasa como si fuera un
intercambiador de calor de doble tubo. Para solventar el problema de la escasa transferencia
de masa (nutrientes y OD) dentro de la fibra hueca, un diseo novedoso es el tambor
rotativo en el cual, el tambor externo rota sobre la batera de fibras huecas, generando una
circulacin constante de masa y de momentun, aumentando las tazas de transferencia.

1. 4. 13. Clulas empaquetadas - biorreactor de Lecho Empacado (O 2 )

El empaquetamiento celular es una forma menos drstica de inmovilizacin; pues sta es
parcial. Tambin tiene el objetivo de aumentar la concentracin y la densidad celular; pero
al no estar enclaustradas las clulas, la transferencia de masa es mayor, aunque siempre
limitada. Un lecho empacado es una matriz de soporte slido que retiene las clulas, bien
por geometra (dentro de los intersticios o espacios huecos de la matriz), bien por afinidad
(paso o adherencia selectiva). Un biorreactor con este propsito debe contener un lecho de
soporte slido, sumergido en el medio de cultivo. La oxigenacin generalmente se realiza
en el exterior del lecho, a travs del medio de cultivo.

1. 4. 14. Cultivos enzimticos - Reactores de Lecho Cataltico

Los cultivos enzimticos se comportan en algunos aspectos como cultivos celulares y en
otros como reactivos qumicos. Debido a que un sustrato enzimtico es un cataltico de una
reaccin biolgica, la cintica de estos reactores puede simularse como la qumica, pero sin
olvidar que el compuesto es biolgico. Los sustratos enzimticos deben estar anclados a un
lecho semislido o a uno semifluido - segn sea el caso - dependiendo de la naturaleza
enzimtica del sustrato; que por la naturaleza de la enzima se conocen como lechos
catalticos. Muchas veces el medio de cultivo, adems de la enzima, requiere, para un
sustrato determinado, su respectivo precursor metablico llamado cofactor, ms algn
componente especial que agilice el proceso metablico.

1. 5. Modo de Operacin y Sistemas de Cultivo

El modo de operacin de un sistema de cultivo, es sinnimo del modo de operar del
biorreactor o fermentador. ste no solo influye en el diseo propio del reactor, tambin, en
el modelo cintico de crecimiento del cultivo y en el proceso de produccin. Existen tres
modos de cultivo aunados a tres modos bsicos de operacin:

Discontinuo(batch): por lotes o tandas, sin alimentacin (F); se coloca dentro del
biorreactor la carga total de cada proceso (tanda o lote) de cultivo o fermentacin y
se dejar que se lleve a cabo el proceso productivo o la fermentacin por el tiempo
que sea necesario; el cul se denomina tiempo de retencin.

Semicontinuo (feed batch): por lotes alimentados, con alimentacin de entrada

(F1); se alimenta una lnea de entrada o alimentacin (F1) para que el sistema de
cultivo tenga un producto (biomasa) con mximo de crecimiento (exponencial) y
aumente la productividad.

Continuo (continuos): por quimioestato, se alimenta una lnea de entrada F1 o

alimentacin y se drena una lnea de salida F2 o lavado; de manera que los flujos o
caudales de ambas lneas sean iguales y la produccin sea contnua.

1. 6. Balances y ecuaciones
La parte terica del diseo consiste en modelar; es decir, poner en ecuaciones el proceso
biolgico (bioproceso) que se lleva a cabo, para que, a partir de esas ecuaciones,
dimensionar (dar dimensiones) y simular el comportamiento terico de un modelo
prototipo. Si la teora corresponde a la prctica, el comportamiento del modelo se acercar a
la realidad; est en la habilidad del diseador, que esto sea lo ms cercano posible. Antes de
modelar en ecuaciones un diseo es necesario saber que tamao va a tener el modelo,
de cuanto se dispone y cuanto vamos a requerir para realizar un proyecto de ese
tamao. Eso es, hacer un balance para igualar todas las variables o parmetros de las
ecuaciones y llevar la contabilidad de nuestro proyecto.

1. 6. 1. Balance general
El primer balance que debe realizarse en cualquier sistema es el Balance General o Global;
en el se toma en consideracin nicamente - el sistema - como una caja negra - el ambiente
externo y - los flujos - que entran (F1) y salen (F2) e interaccionan con el ambiente externo.
De esta forma el primer balance es:

1. 6. 2. Balance general biomasa

Velocidad de Acumulacin = Velocidad de Entrada - Velocidad de Salida + Velocidad de
Formacin - Velocidad de Consumo

1. 6. 3. Balance General por componente

Una vez dado el balance general de biomasa, debe tomarse en cuenta que, en un sistema de
cultivo, existen muchos componentes: sustratos, productos, compuestos metablicos que
conforman el caldo de cultivo (medio interno); incluso la biomasa, se considera un
componente en s misma. A partir del balance general, debe establecerse un balance general
para cada componente del cultivo o la biomasa.
De acuerdo al enunciado del balance general: la velocidad de acumulacin del componente
es el flujo de entrada

por la concentracin inicial del componente

[velocidad de entrada] menos el flujo de salida

por la concentracin del componente i

[velocidad de salida]; ms la velocidad de formacin del componente

menos la velocidad de consumo del componente [consumo]:

[formacin]

Ec.1
Respecto a las velocidades de formacin y consumo:
Si se trata de un componente metablico, responden a la acumulacin (formacin) del
componente dentro de la clula y al consumo del metabolito por parte de la clula
(consumo).
Si se trata de biomasa, formacin corresponde a la generacin de biomasa y el consumo al
consumo de biomasa durante el bioproceso; esto es, a la produccin metablica en el
primer caso y a la produccin o productividad en el segundo.

1. 6. 4. Nomenclatura

= volumen del cultivo (m)

= caudal de alimentacin (m/s)
= caudal de salida (m/s)

= concentracin del componente en la alimentacin (kg/m)

= concentracin del componente en el lavado (kg/m)

= velocidad de formacin del componente

= velocidad de consumo del componente

(kg/ms)
(kg/ms).

1. 6. 5. Balance General por componente para cada modo de operacin

La ecuacin de balance general por componente Ec. 1, por ser general, se define para una
operacin contnua. La condicin fundamental de toda operacin contnua es:
En una operacin contnua el flujo de entrada (F1) debe ser igual al flujo de salida (F2): F1
= F2
Esta condicin se conoce como flujo en estado estacionario (FEE). Para modelar el
comportamiento de la biomasa del cultivo en el estado estacionario (EE) adems de la
condicin de flujo (FEE) debe haber equilibrio en la densidad o concentracin de sta. Esto
se conoce como quimioestsis o equilibrio quimioesttico y es por eso que a los sistemas de
cultivo continuo se les llama quimioestatos. Est condicin est dada por la ecuacin:
dV/dt = F1 - F2 Ec. 2. Bajo la condicin de FEE y suponiendo que la densidad del cultivo
y de la alimentacin son iguales (Ec.2, quimioestsis) la Ec.1 se reduce a: dCi/dt = F (Ci1 Ci) + V (rfi - rci) Ec. 3. La ec.3 que se conoce como ecuacin de balance para una
operacin contnua en estado estacionario.

De no existir el estado estacionario (EE) se produciran dentro del biorreactor dos

condiciones de flujo indeseables:
Si F1 > F2 se produce el rebalse o desborde del biorreactor, condicin que se da cuando el
flujo de entrada sobrepasa la capacidad del reactor.
Si F2 > F1 se produce el lavado o drenado de producto o biomasa, condicin que se da
cuando el flujo de salida sobrepasa la capacidad del reactor.
Cuando el modo de operacin es semicontinuo (feed batch) el caudal de salida F2 es nulo
(F2 = 0) por lo que, el volumen V aumentar con el tiempo en funcin del caudal de
entrada: dV/dt = F Ec.4. Y en el balance de materia se anula el trmino F2Ci resultando:
d(VCi/dt) = FCio + V (rfi - rci) Ec.5.
Observe que el volumen que permanece dentro del operador diferencial es porque vara con
el tiempo (Ec.4), en tanto que el otro no lo hace (Ec.3). Esa es la razn por la que una
operacin semicontnua tiene duracin limitada en el tiempo (el volumen no puede
incrementarse ms all del volumen de trabajo o volumen til del biorreactor). El tiempo
que dura una operacin semicontnua se conoce como tiempo de residencia (tr) y es el
tiempo que dura el cultivo o bioproceso en un sistema semicontinuo.
Cuando el modo de operacin es discontinuo (batch) ambos caudales son nulos (F1 = F2 =
0) por lo que, el volumen es constante y se anulan los trminos F1 Cio, F2 Ci en la
Ec.1.Eso da como resultado: dCi/dt = rfi - rci Ec.6.
La duracin de un cultivo discontinuo (batch) es tambin, limitada en el tiempo, pero se
diferencia de la del cultivo semicontinuo (feed batch) en que depende nicamente de las
condiciones iniciales del cultivo; esto por cuanto, no existe alimentacin (F1). Una vez
cargado el biorreactor e inoculado el medio de cultivo, la concentracin de la biomasa
aumenta gracias a los nutrientes, pero una vez que el sustrato que limita el crecimiento se
haya agotado, el crecimiento ya no es posible y finaliza el cultivo. Por este motivo, el
tiempo que dura el cultivo dentro de un biorreactor con un modo de operacin discontinuo
se llama tiempo de cultivo (tc).

1. 6. 6. Balances individuales
Los principales balances por componente en su forma individual son:

Balance de Biomasa: d (VX) / dt = FiXi + VrgX - FoXo - VrcX

rgX = X (velocidad de crecimiento celular)
rcX = kdX (velocidad de muerte celular)
Balance de Sustrato: d (VS) / dt = FiSi - FoSo - VrcS
rcS = qSX / YX/S = X / YG + m X + qPX / YP
Balance de producto: d (VP) / dt = FiPi - FoPo - VrgP
rgP = qP X
Balance de Oxgeno: d (VCL) / dt = FiCLi - FoCLo - VrcO2 + VNiO2

Balance de Anhdrido Carbnico: d(VCCO2) / dt = FiCCO2i - FoCCO2o + VrgCO2 VNoCO2

1. 6. 7. Nomenclatura

V: Volumen del lquido en el biorreactor, L

t: Tiempo, h
y: Concentracin del componente y en el lquido dentro del biorreactor, g/L
X: Concentracin de biomasa en el lquido dentro del biorreactor, g/L
S: Concentracin de sustrato en el lquido dentro del biorreactor, g/L
P: Concentracin de producto en el lquido dentro del biorreactor, g/L
CL: Concentracin de oxgeno en el lquido dentro del biorreactor, g/L
C*: Concentracin de oxgeno en el lquido en equilibrio con el gas, g/L
CCO2: Concentracin de CO2 en el lquido dentro del biorreactor, g/L
F: Velocidad de flujo de lquido, L/h
Ni: Velocidad de transferencia de un componente del gas al lquido, g/Lh
No: Velocidad de transferencia de un componente del lquido al gas, g/Lh
rg: Velocidad de generacin, formacin o produccin, g/Lh
rc: Velocidad de consumo o utilizacin, g/Lh
: Velocidad especfica de crecimiento celular, h-1
qS: Velocidad especfica de consumo de sustrato, g/gh
qP: Velocidad especfica de formacin de producto, g/gh
m: Velocidad especfica de consumo de sustrato para mantenimiento celular, g/gh
Kd: Velocidad especfica de muerte o declinacin celular, h-1
YP: Coeficiente (estequiomtrico) de rendimiento de producto basado en el
consumo de sustrato consumido para formacin de producto, g/g
YP/S: Coeficiente de rendimiento de producto basado en el consumo total de
sustrato, g/g
YG: Coeficiente de rendimiento de biomasa basado en el consumo de sustrato para
crecimiento, g/g
YX/S: Coeficiente de rendimiento de biomasa basado en el consumo total de
sustrato, g/g
kLa: Coeficiente volumtrico de transferencia de oxgeno, h-1

1. Diseo de biorreactores
El diseo de biorreactores es una tarea de ingeniera bastante compleja. Los
microorganismos o clulas son capaces de realizar su funcin deseada con gran eficiencia
bajo condiciones ptimas. Las condiciones ambientales de un biorreactor tales como flujo
de gases (por ejemplo, oxgeno, nitrgeno, dixido de carbono, etc.), temperatura, pH,
oxgeno disuelto y velocidad de agitacin o circulacin, deben ser cuidadosamente
monitoreadas y controladas.

La mayora de los fabricantes industriales de biorreactores usan recipientes, sensores,

controladores y un sistema de control interconectados para su funcionamiento en el sistema
de biorreaccin (ver PLC).
La misma propagacin celular (fenmeno conocido en ingls como Fouling) puede afectar
la esterilidad y eficiencia del biorreactor, especialmente en los intercambiadores de calor.
Para evitar esto, el biorreactor debe ser fcilmente limpiable y con acabados lo ms
sanitario posible (de ah sus formas redondeadas).
Se requiere de un intercambiador de calor para mantener el bioproceso a temperatura
constante. La fermentacin biolgica es una fuente importante de calor, por lo que en la
mayor parte de los casos, los biorreactores requieren de agua de enfriamiento. Pueden ser
refrigerados con una chaqueta externa o, para recipientes sumamente grandes, con
serpentines internos.
En un proceso aerobio, la transferencia ptima de oxgeno es tal vez la tarea ms difcil de
lograr. El oxgeno se disuelve poco en agua (y an menos en caldos fermentados) y es
relativamente escaso en el aire (20,8 %). La transferencia de oxgeno usualmente se facilita
por la agitacin, que se requiere tambin para mezclar los nutrientes y mantener la
fermentacin homognea. Sin embargo, existen lmites para la velocidad de agitacin,
debidos tanto al alto consumo de energa (que es proporcional al cubo de la velocidad del
motor) como al dao ocasionado a los organismos debido a un esfuerzo de corte excesivo.
Los biorreactores industriales usualmente emplean bacterias u otros organismos simples
que pueden resistir la fuerza de agitacin. Tambin son fciles de mantener ya que
requieren slo soluciones simples de nutrientes y pueden crecer a grandes velocidades.
En los biorreactores utilizados para crecer clulas o tejidos, el diseo es significativamente
distinto al de los biorreactores industriales. Muchas clulas y tejidos, especialmente de
mamfero, requieren una superficie u otro soporte estructural para poder crecer y los
ambientes agitados son comnmente dainos para estos tipos de clulas y tejidos. Los
organismos superiores tambin requieren medios de cultivo ms complejos.

1. 1. Introduccin
El diseo en bioingeniera no es solo la aplicacin de conceptos bsicos y tericos que
conlleven a lograr un prototipo; para la realizacin integra de un modelo, otra gran parte,
trata de la adaptacin creativa y de la utilizacin del ingenio propio para lograr el objetivo
de conjuntar el ambiente biolgico de un cultivo vivo con el ambiente artificial de un
dispositivo controlado; este es el resultado denominado biorreactor o reactor biolgico. Un
biorreactor es por tanto un dispositivo biotecnolgico que debe proveer internamente un
ambiente controlado que garantice y maximice la produccin y el crecimiento de un cultivo
vivo; esa es la parte biolgica. Externamente el biorreactor es la frontera de protege ese
cultivo del ambiente externo: contaminado y no controlado. El biorreactor debe por tanto
suministrar los controles necesarios para que la operacin o proceso (bioproceso) se lleve a

cabo con economa, alto rendimiento (productividad) y en el menor tiempo posible; esa es
la parte tecnolgica.

1. 2. Cultivos y Fermentaciones
Lo primero que hay que entender en el diseo de reactores biolgicos es que contrario a los
qumicos, su cintica no esta determinada exclusivamente por la velocidad de reaccin y las
variables que la determinan. Aunque se puede describir de manera similar a la qumica, la
cintica biolgica tambin depende de caractersticas intrnsecas del organismo o cultivo
tales como crecimiento y taza de divisin celular, as como, del tipo de operacin que se
lleve a cabo. Por eso, lo primero que se define en el diseo de un biorreactor es el propsito
de utilizacin; es decir, que tipo de cultivo se va a utilizar, el modo de operar y/o el proceso
de cultivo. El conjunto biorreactor-sistema de cultivo debe cumplir con los siguientes
objetivos:
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.

Mantener las clulas uniformemente distribuidas en todo el volumen de cultivo.

Mantener constante y homognea la temperatura.
Minimizar los gradientes de concentracin de nutrientes.
Prevenir la sedimentacin y la floculacin.
Permitir la difusin de gases nutrientes a la velocidad requerida por el cultivo.
Mantener el cultivo puro.
Mantener un ambiente asptico.
Maximizar el rendimiento y la produccin.
Minimizar el gasto y los costos de produccin.
Reducir al mximo el tiempo.

Una fermentacin es un proceso biolgico o bioproceso que consiste en la descomposicin

de la materia orgnica por microorganismos fermentadores (bacterias y hongos).
Un cultivo tambin es un bioproceso; pero generalmente se asocia a organismos o
microorganismos superiores (en orden jerrquico) a las bacterias; los cultivos son casi todos
del Reino Eucariota.

1. 3. Clasificacin de los Biorreactores

1. 3. 1. Clasificacin Operativa
Tanto biorreactores como fermentadores se clasifican primeramente de acuerdo al modo de
operacin: discontinuo, semicontinuo, continuo. Esta es una clasificacin operativa y se
aplica a cualquier reactor, sea qumico o biolgico (biorreactor). En los reactores biolgicos
el modo de operacin define el sistema de cultivo que es el mismo y delimita la
clasificacin procesal-productiva del bioproceso (cultivo). Al operar un biorreactor en una
determinada categora (discontinuo, semicontinuo, continuo), automticamente queda
determinado el modo de cultivo del sistema y se definen los parmetros y las caractersticas
operativas y de diseo que intervienen en el proceso productivo del sistema.

1. 3. 2. Clasificacin Biolgica
Los sistemas biolgicos deben interaccionar con el ambiente externo para poder crecer y
desarrollarse; es por eso que los biorreactores se clasifican biolgicamente de acuerdo al
metabolismo procesal del sistema de cultivo: anaerbico, facultativo, aerbico. Los
bioprocesos de cultivo y las fermentaciones estn basados en el metabolismo celular del
cultivo. El metabolismo define los parmetros y caractersticas operativas-biolgicas de
diseo y de operacin del biorreactor. Estas caractersticas son las que intervienen en la
parte biolgica del sistema y tienen que ver con el crecimiento, productividad y
rendimiento del cultivo; por lo que, definen la clasificacin biolgica-procesal del sistema
de cultivo.

1. 3. 3. Clasificacin Biolgica-Operativa
Ambas clasificaciones; la biolgica y la operativa, son procesalmente interdependientes y
en su conjunto afectan el diseo final del biorreactor. Al conjuntarse ambas clasificaciones,
se conjuntan tambin la funcin operativa y la biolgica para establecer entre ambas un
propsito de utilizacin, el modo de cultivo y el bioproceso. Siendo el propsito de
utilizacin, el destino de cultivo del biorreactor; para qu tipo de cultivo va a ser utilizado
el biorreactor; el modo de cultivo es sinnimo de sistema de cultivo y el bioproceso es en
s, todo el proceso.

1. 4. Biorreactores y tipos de cultivo

Los sistemas biolgicos que determinan el metabolismo celular de cultivo y el modo
procesal-biolgico del sistema son:

1. 4. 1. Clulas y microorganismos anaerbicos

Bacterias en su gran mayora, son microorganismos de metabolismo degradativo
(catablico); generalmente unicelulares, estos microorganismos son autnomos y
nutricionalmente independientes (auttrofos); sus clulas (cuerpos) no respiran (no utilizan
la gluclisis para la respiracin celular), en cambio, utilizan vas alternas, donde una
molcula orgnica, producida durante el proceso metablico (catabolismo), es utilizada
como aceptor de electrones, en un proceso bioqumico conocido como respiracin
oxidativa; esta molcula es reducida a producto orgnico en un proceso comnmente
denominado fermentacin.

1. 4. 2. Clulas y microorganismos facultativos

Son ambivalentes, tienen la capacidad de vivir o sobrevivir entre ambientes: aerbico
(presencia de oxgeno) y anaerbico (ausencia de oxgeno); son microorganismos de
metabolismo mixto por lo que, pueden tanto degradar (catabolismo) como construir
(anabolismo) materia orgnica, a partir de diferentes sustratos (materia prima), tanto
orgnicos como inorgnicos. Pese a su versatilidad, sus mayores representantes son

microorganismos que presentan relaciones parsitas o simbiontes tales como: hongos y

levaduras, por lo que no son muy extensos.

1. 4. 3. Clulas y microorganismos aerbicos

Pertenecen en su mayora al Reino Eucariota - pero tambin los hay procariota - son
microorganismos y clulas que respiran (utilizan la gluclisis como forma de respiracin
celular); por lo que su metabolismo es constructivo (anablico) y deben obtener sus
nutrientes de diferentes fuentes. Sus principales grupos estn representados por: bacterias y
microorganismos aerbicos, plantas y animales; cuyas clulas se puedan cultivar en
suspensiones celulares o bien, en diferentes arreglos artificiales o modificadas.
A continuacin algunos de los posibles sistemas de cultivo que se pueden realizar y el tipo
de biorreactor asociado a cada uno:

1. 4. 4. Cultivos Microbianos Anaerbicos - Fermentador Bacterial (CO 2 )

Los microorganismos de metabolismo anaerbico son los ms simples de todos, tan solo
necesitan de un medio de cultivo adecuado, agitacin vigorosa y cierta cantidad de CO2
(dixido de carbono) disuelto (COD) para crecer y multiplicarse.

1. 4. 5. Cultivos Microbianos Facultativos - Fermentador Bacterial

Los microorganismos facultativos toleran la presencia oxgeno en bajas concentraciones y
adems de un sustrato adecuado, slo requieren agitacin moderada y un medio de cultivo
para crecer y desarrollarse.

1. 4. 6. Cultivos Microbianos Aerbicos - Fermentador Bacterial (O 2 )

Los microorganismos aerbicos necesariamente requieren la presencia de oxgeno (aire)
disuelto (OD) para sobrevivir; adems, agitacin moderada y un medio de cultivo rico en
nutrientes para poder crecer y desarrollarse.

1. 4. 7. Cultivos Celulares Aerbicos y Facultativos - Fermentador Mictico

(CO 2 )
Los cultivos celulares se diferencian de los bacteriales (microbios) en que no son
microorganismos procariota, son eucariota. Son microorganismos aerbicos o facultativos
pertenecientes al Reino Fungi (hongos y levaduras), generalmente llamados micticos,
requieren de la presencia de CO2 disuelto en el medio como sustrato limitante de la
velocidad de reaccin y generan estructuras reproductivas muy particulares. Un biorreactor
es recipiente o sistema que mantiene un ambiente biolgicamente activo. En algunos casos,
un biorreactor es un recipiente en el que se lleva a cabo un proceso qumico que involucra
organismos o sustancias bioqumicamente activas derivadas de dichos organismos. Este
proceso puede ser aerbico o anaerbico. Estos biorreactores son comnmente cilndricos,

variando en tamao desde algunos mililitros hasta metros cbicos y son usualmente
fabricados de acero inoxidable.
Un biorreactor puede ser tambin un dispositivo o sistema empleado para crecer clulas o
tejidos en operaciones de cultivo celular. Estos dispositivos se encuentran en desarrollo
para su uso en ingeniera de tejidos.
En trminos generales, un biorreactor busca mantener ciertas condiciones ambientales
propicias (pH, temperatura, concentracin de oxgeno, etctera) al elemento que se cultiva.
En funcin de los flujos de entrada y salida, la operacin de un biorreactor puede ser de tres
modos distintos:
Lote (Batch) Lote alimentado (Fed-Batch) Continuo o quimiostato

1. 4. 8. Cultivos Celulares Aerbicos Estrictos - Fermentador con Aireacin

(O 2 )
El cultivo de microorganismos celulares (no bacteriales) aerbicos estrictos requiere la
presencia de oxgeno disuelto en el medio de cultivo para el metabolismo celular; as como
una adecuada agitacin.

1. 4. 9. Clulas Vegetales en Suspensin - biorreactor de Levantamiento por

Aire (O 2 ) en Rgimen Turbulento (Re3000)
Las clulas vegetales pueden ser cultivadas en suspensiones celulares: pequeos agregados
celulares que se suspenden en el medio de cultivo mediante agitacin. Dado que las clulas
vegetales respiran, el diseo del biorreactor debe incorporar una lnea de aireacin (aire)
para suministrar oxgeno disuelto (OD) al medio de cultivo. El diseo debe contar con
agitacin vigorosa, pues los agregados celulares vegetales tienden a agruparse (clusters) y
de alcanzar gran tamao y peso, precipitaran. Por eso, la operacin de este tipo de
biorreactores debe ser en rgimen turbulento (Re3000). Los biorreactores para clulas
vegetales en suspensin generalmente son diseados con un mecanismo de levantamiento
por aire air lift que combina una agitacin vigorosa (turbulenta) con una adecuada
aireacin (oxgeno disuelto) del medio de cultivo.

1. 6. 8. Subndices

i = Ingreso
o = Salida
S = Sustrato
P = Producto
O2 = Oxgeno
CO2 = Anhdrido carbnico

2. Diseo de un Quimioestato: Cultivo continuo

Un quimioestto un sistema de cultivo en continuo; su operacin esquemtica es como la
que muestra la figura. Una operacin en continuo exige una serie de consideraciones para
modelar su comportamiento:
Mezcla perfecta (sin gradientes de concentracin y con agitacin turbulenta);
Flujo de entrada y salida iguales (F1 = F2 = F);
Volumen de operacin constante (volumen de lquido dentro del biorreactor: dV/dt = 0);
Parmetros constantes de transferencia (temperatura, pH, velocidad de transferencia de
oxgeno, etc.)
La operacin industrial de un quimioestto se ilustra en la figura.
Para iniciar un cultivo continuo; el biorreactor o el fermentado debe cargarse previamente
con el inculo del cultivo y luego de que este crece lo suficiente, alimentar el sistema con
medio fresco a un caudal F1 y lavar el producto por un rebalse a un caudal F2, de modo
que, el volumen se mantenga constante, el tiempo que dure el bioproceso o la fermentacin.
El caudal de salida F contiene clulas vivas (X), medio de cultivo con algn sustrato (S)
parcialmente agotado (So) y posiblemente algn producto (P). Al alimentar con medio
fresco (So) el caudal de entrada (F1), la biomasa (Xo) y el producto (Po) sern iguales a
cero para las condiciones de entrada; por lo que, slo se deber considerar la concentracin
de sustrato limitante del crecimiento (So) en la alimentacin.
Balances y Ecuaciones en el Estado Estacionario
Teniendo en cuenta estas consideraciones, los balances de materia para X, S y P en el
estado estacionario (E.E) sern:
Balance de Biomasa : VdX/dt = -FX + Vrx = -(F/V)X + X = 0; rX = mX; E.E dX/dt =
0. Por definicin D = velocidad de dilucin = F/V = D
Balance de Sustrato : VdS/dt = F (So - S) - Vrs; rs = X / YX/S; E.E dS/dt = 0. Por
definicin: SEE = KsD / m - D XEE = YX/S (S0 - S)
Donde: D = velocidad de dilucin; SEE = concentracin del sustrato limitante de la
velocidad en estado estacionario; XEE = concentracin de biomasa en estado estacionario.
Balance de Producto : VdP/dt = -FP + Vrp = PEE = qPX / D; rP = qPX; E.E dP/dt = 0
Donde: PEE = concentracin del producto en el estado estacionario.

Nota : cuando el sustrato limitante de la velocidad de crecimiento (S) es tambin la fuente

de carbono: X = DYX/S (So - SEE) / (D + msYX/S)

2. 1. Modelo Cintico de Monod para el Cultivo Continuo

El modelo de crecimiento que se aplica en los sistemas de cultivo continuo es el modelo
cintico de Monod: D = mS / (KS + S) S = KSD / (m - D) X = YX/S [S0 - KSD /
(m - D)]
Velocidad Crtica de Dilucin: existe un valor de dilucin por encima del cual es X = 0;
es decir, se produce lavado o arrastre de la biomasa por encima del valor de equilibrio que
permite el estado estacionario y F2 > F1.
Este factor se conoce como dilucin crtica (Dc); Dc = mSo / Ks + So
En condiciones normales de operacin contnua S0 >> KS DC = m por lo que, un
quimioestto debe trabajar a una fraccin de m. En trminos de crecimiento de la biomasa
esto significa que el quimioestto impone una condicin selectiva al crecimiento del cultivo
o el microorganismo.
Formacin de producto: PEE = rp/D = qPXEE/D
Determinacin de Parmetros de Crecimiento: un cultivo continuo es sumamente til
para determinar parmetros de crecimiento.
1/D = 1/m + Ks/m * 1/SEE
Se grafica 1/D en funcin de 1/S los puntos se ajustan a una recta cuya interseccin con el
eje 1/D es el valor de 1/m y cuya pendiente es Ks /m.
D (So - SEE) / XEE = D / YX/S + ms
La grfica de D (So-S) / X en funcin de D permite estimar 1/Y'x/s y s cuando el
sustrato limitante de la velocidad de crecimiento es la fuente de carbono.

2. 2. Ecuacin de Diseo de un Reactor de Mezcla Perfecta

La ecuacin de diseo nos da el tiempo de residencia (t) del cultivo dentro del biorreactor.
Para poder utilizar la ecuacin de diseo hay que modificar la definicin de componente X
y sustituirlo por conversin X del componente i. Por definicin: Xi = Nio - Ni / Nio
Donde: N = moles del componente i. Despejando: Ni = Nio (1 - Xi) dNi/dt = -Nio dXi/dt
= riV Con lo que, la ecuacin de balance de biomasa para el estado estacionario se
transforma en: -FXi + riV = VdXi/dt = 0 Reordenado: V/F = Xi / -ri = t = ecuacin de
diseo de un reactor de mezcla perfecta. Donde: t = tiempo de residencia del cultivo
dentro del biorreactor; Xi = Xi2 - Xi1 = dXi Otro termino comnmente utilizado en el
diseo de reactores es el tiempo espacial () el cual define el tiempo necesario para

procesar o fermentar en el biorreactor, un volumen de alimentacin, medido en condiciones

de entrada (presin y temperatura), igual al volumen de operacin del biorreactor (el que
define el estado estacionario). El tiempo espacial se obtiene dividiendo el volumen de
reactor (V) entre el caudal volumtrico de entrada al biorreactor (Q): = V/Q Observe que
al igual que t las unidades de son s-1.

3. Diseo de un Biorreactor Semicontinuo

Un cultivo semicontinuo posee una lnea de entrada o alimentacin (F1). Para iniciar un
cultivo alimentado (feed batch) son validas las mismas consideraciones que se hicieron para
el cultivo continuo; pero, se inicia la alimentacin del cultivo cuando el sustrato limitante
de la velocidad se ha agotado; esto permite controlar la velocidad de crecimiento, regulando
la velocidad de alimentacin (caudal); finalmente se debe alimentar el cultivo con medio
fresco.

3. 1. Balances y Ecuaciones
Los balances de materia respectivos para X, S y P son:

Balance de Biomasa: d (VX)/dt = Vrx = VX

Balance de Sustrato: d (VS)/dt = FSo - Vrs
Balance de Producto: d (VP)/dt = Vrp

Nota: en estos casos el volumen V permanece dentro del operador diferencial; esto se debe
a que vara con el tiempo.

3. 2. Casos
Si en la ecuacin de balance de sustrato la velocidad rs se reemplaza por rx / Yx/s se tiene:
d (VS)/dt = FSo - 1/Yx/s. d (XV)/dt
Para controlar la velocidad de crecimiento (rx) mediante el caudal de alimentacin (F) el
sustrato (S) debe ser cero en todo momento: S = 0 y por lo tanto: d (SV)/dt = 0. Esta
condicin equivale a que el sustrato sea consumido en su totalidad conforme ingresa al
biorreactor; es por eso que se aplica la condicin de alimentacin fresca. Bajo estas
condiciones, la ecuacin de balance de biomasa se transforma en: d (VX)/dt = FSoYx/s y
por integracin: XV = XeVe + FSoYx/st Donde: Xe y Ve representan la concentracin de
biomasa y el volumen de cultivo al iniciar la alimentacin.
La variacin del volumen con el tiempo es: V = Ve + Ft
El criterio para disear una alimentacin adecuada se obtiene por la ecuacin: FSo =
VeXe / Yx/s la ecuacin es vlida para cualquier rango de , hasta m.
Como criterio adicional, sobre todo en procesos de fermentacin se suele seleccionar un
valor de So tan alto como sea posible y lo contrario con F (uno relativamente pequeo); a

fin de evitar el lavado del cultivo por dilucin excesiva. No obstante esto ocasionara que la
duracin del cultivo (tiempo de fermentacin) se prolongarse excesivamente. Para buscar el
equilibrio se dise empricamente una solucin de compromiso: = 1 / VX. d (VX)/dt =
Yx/sFSo / XeVe + Yx/sFSot

3. 1. Ecuacin de Diseo de un biorreactor Semicontinuo Ideal

Un sistema de cultivo semicontinuo es un sistema transciende; es decir, hay un flujo
temporal o transitorio que alimenta o drena (lava) el sistema. El balance general de masa
que se aplica a un volumen de control (diferencial de volumen) para un componente i en un
sistema de flujo semicontinuo es:
Entra - Sale - Desaparece = Acumula Fi - (Fi+dFi) - (-rxi) dV = 0
Operando se obtiene: - dFi = (-rxi) dV Por definicin la conversin del componete i en
reactores en flujo (semicontinuo) es: Xi = Fio - Fi / Fio por lo que, sustituyendo en la
ecuacin de balance: FiodXi = -rxidV Integrando la expresin anterior: dV/Fio = dXi/rxi donde los lmites de integracin son: 0, V para el volumen y Xio, Xif para la
conversin. Resolviendo la integral obtenemos: V/Fio = dXi/-rxi = t la ecuacin de
diseo para un biorreactor de flujo (semicontinuo). La ecuacin es vlida tanto si existe o
no variacin de caudal (flujo) del sistema. Cuando se requiere una expresin en funcin de
la concentracin, podemos utilizar la siguiente ecuacin: Fio = CioQi donde Cio es la
concentracin del componente i en las condiciones de entrada y Qi es el caudal volumtrico
del componente i. Sustituyendo: V/Fio = V/QiCio = /Cio donde es el tiempo espacial
del biorreactor. En forma integral: = Cio dXi/-rxi Para sistemas de densidad constante:
= - dCi/-rxi
Nota: al comparar la ecuacin de diseo de un biorreactor semicontinuo ideal con la que se
obtiene para uno discontinuo ideal, se observa que la diferencia est la expresin que toma
el tiempo: t o t. En un biorreactor discontinuo, t representa el tiempo de cultivo tc y es igual
a la duracin del bioproceso o la fermentacin; lo que equivale a decir, el tiempo necesario
para que el sustrato limitante de la velocidad se agote. En un biorreactor semicontinuo (de
flujo) el tiempo t corresponde al equivalente para que la conversin de salida alcance su
mximo valor posible; es decir, para que la generacin de biomasa o bien, del componente
metablico X, alcancen su mximo de crecimiento (m) para un mismo componente i. Es
por eso que en un biorreactor de flujo el tiempo t se llama tambin tiempo de residencia tr;
ya que, es el tiempo que el cultivo reside dentro del biorreactor; el cual es diferente (mayor)
del tiempo de cultivo tc, puesto que an despus de agotado el sustrato limitante de la
velocidad, el cultivo (clulas o microorganismos) tiene la capacidad metablica de seguir
sintetizando metabolitos X o generar ms biomasa (crecer); es por eso que le incorporan los
adjetivos limitante de la velocidad al sustrato S.

4. Diseo de un biorreactor discontinuo

Una sistema de cultivo discontinuo no posee alimentacin (F1) o lavado (F2); se carga el
contenido del biorreactor (tanda o lote) con el medio de cultivo y luego se inocula con el

cultivo (clulas o microorganismos) y se deja crecer hasta obtener el producto (biomasa o

metabolito).

4. 1. Balances y ecuaciones
Dado que F1 = F2 = 0, las ecuaciones de balance son:

Balance de Biomasa: d (X)/dt = rx = X

Balance de Sustrato: d (S)/dt = rs = X / Yx/s
Balance de Producto: d (P)/dt = rp

4. 2. Casos
Generacin de Biomasa: cuando la operacin discontnua tiene como objetivo la
generacin de biomasa (clulas o microorganismos); se parte del supuesto de que no se
forma producto y que la relacin -S puede ser representada por la ecuacin de Monod,
con lo que las ecuaciones de balance de biomasa y balance de sustrato limitante de la
velocidad quedan:

Balance de biomasa: d (X)/dt = m (XS / Ks + S)

Balance de sustrato: d (S)/dt = -m / Yx/s (XS / Ks + S)

El sistema de ecuaciones posee solucin analtica, pero en sta, no aparece X en forma

explcita, por lo que, resulta de poca utilidad. Afortunadamente, es posible analizar casos
particulares, haciendo algunas suposiciones. En el caso de tomar en cuenta nicamente la
fase exponencial del crecimiento, cumple que: S Ks y las ecuaciones se reducen a las
originales, salvo que es substituida por m:

Balance de biomasa: d (X)/dt = mX

Balance de sustrato: d (S)/dt = mX / Yx/s

Dado que bajo tales condiciones el crecimiento ocurre al mximo valor de posible,
integrando la ecuacin de balance de biomasa con las condiciones: t = 0, X = Xo se obtiene
una expresin para la concentracin de biomasa en funcin del tiempo: X = Xo emt o
bien: lnX = lnXo + mt La ecuacin establece que para S Ks, el crecimiento es
exponencial y permite calcular el valor de m graficando el valor del logaritmo de X (ln X)
en funcin del tiempo (t). En forma similar, la concentracin de sustrato limitante de la
velocidad en funcin del tiempo es: S = So - [(Xo / Yx/s) (emt - 1)] Conforme el sustrato
se agota, S disminuye y la condicin de S se hace comparable a Ks con lo que dX/dt
comienza a disminuir (fase de desaceleracin), hasta hacerse finalmente nula (S = 0); en
este punto, se alcanza la mxima concentracin de biomasa y finaliza el cultivo, pues se ha
alcanzado la fase estacionaria.
La concentracin final de biomasa (Xf) se puede calcular si se conoce Yx/s: Yx/s = - (Xf Xo) / (Sf - So) Dado que Sf = 0, Xf = Xo + Yx/sSo Lo usual es utilizar estas ecuaciones
para calcular Yx/s.

En la figura se ilustran las distintas fases de crecimiento descriptas, que surgen de la

ecuacin de Monod. Note que antes de la fase exponencial existe una fase de retardo
durante la cual, la concentracin de biomasa no se modifica substancialmente pero, ocurren
cambios en la composicin macromolecular y en el "estado fisiolgico" de las clulas del
cultivo. Si por algn motivo debe tomarse en cuenta esta fase, se debe aplicar una
correccin a la ecuacin la concentracin de biomasa en funcin del tiempo: lnX = lnXo +
m (t - tr) donde tr es el tiempo de retardo; es decir, la modificacin consiste en restarle al
tiempo real, el tiempo transcurrido hasta que comienza el crecimiento exponencial.
Normalmente, la fase de retardo no es deseable, tanto por la prdida econmica como por el
tiempo desperdiciado; para minimizarla se hace crecer el inculo aparte, en un medio de
cultivo igual al que se va a emplear en el bioproceso (cultivo o fermentacin) y luego se
procede a transferirlo cuando las clulas ya se encuentran en la fase exponencial. La ltima
fase es la decaimiento o muerte y consiste en la disminucin de la concentracin celular de
la biomasa por lisis o muerte celular.

4. 1. Ecuacin de Diseo de un Biorreactor Discontinuo Ideal

Un sistema de cultivo discontinuo es un sistema discreto en cuanto al movimiento de
biomasa, ya no hay flujos. Como condiciones de idealizacin en un biorreactor discontinuo
ideal se supone que el cultivo y su medio estn perfectamente agitados y que los parmetros
de velocidad (r) son constantes en todo el volumen del sistema (volumen de control); es
decir, que la mezcla es perfecta. La otra consideracin es que se trabaja con velocidades y
componentes individuales (i), por lo que se utiliza la definicin de conversin del
componente i (Xi), en vez de biomasa; es decir, se trabaja el componente metablico, no la
clula. La ecuacin de balance del componente i es: d (Xi)/dt = rxi = Xi Teniendo en
cuenta la definicin de conversin y diferenciando Ni respecto al tiempo: dNi/dt = NiodXi/dt Sustituyendo en la ecuacin de balance: -NiodXi/dt = rxiV Separando en
variables e integrando: (Nio/-rxiV) dXi = dt donde los lmites de integracin son: Xio
(conversin de entrada) y Xf (conversin final) para la conversin y to = 0 (tiempo inicial)
y tf (tiempo total de reaccin) para el tiempo de reaccin. Integrando obtenemos: t = Nio
dXi/-rxiV la ecuacin general de diseo para un biorreactor discontinuo ideal.

5. Diseo de un Biorreactor con Aireacin

Un biorreactor con aireacin es por definicin un reactor continuo donde la entrada F1 es
una lnea de alimentacin de aire estril (O2); la salida F2 es una lnea de lavado de aire
estril y el sustrato limitante de la velocidad de crecimiento es el oxgeno disuelto (OD).
Existen dos tipos o diseos bsicos de biorreactores con aireacin; ambos, de uso muy
difundido: el primero es tanque agitado con lnea de aireacin y el segundo es el de
levantamiento por aire o "air lift". De este ltimo existe tambin, una variante que se utiliza
para cultivos aerbicos muy resistentes a esfuerzos cortantes e hidrodinmicos y es la cama
de burbujas o bubble bed.

5. 1. Estructura de un Reactor Continuo de Tanque Agitado Con Lnea de

Aireacin

Un CSTR con lnea de aireacin es utilizado, por lo general, como dispositivo fermentador
para clulas y cultivos aerbicos; su esquema se representa en la figura. En l, la aireacin
se da en rgimen laminar o de transicin (Re3000) por cuanto estas fermentaciones son
destinadas a cultivos de clulas y microorganismos aerbicos sensibles a esfuerzos
cortantes e hidrodinmicos altos. La agitacin extra requerida se realiza mecnicamente,
por medio de: un eje transmisor de potencia provisto de aletas o turbinas de agitacin y
accionado por un motor de corriente alterna con control de potencia y velocidad.
Adems de esto, es indispensable que el sello mecnico del eje del motor sea hermtico y
esterilizadle; que las lneas de entrada y salida de aire sean estriles y que la difusin del
aire dentro del biorreactor sea controlada en presin, flujo y concentracin. Para completar
el esquema de diseo: el aire se inyecta por la parte inferior del tanque y es difundido a
travs de toda la mezcla por una corona con pequeos orificios espaciados regularmente o
una boquilla de difusin. La cama de aire debe ser un chorro de finas burbujas de aire
de pequeo dimetro, que salen de cada orificio de la corona o el difusor (boquilla) y y al
ser "golpeadas" por las paletas de la turbina o el agitador, se distribuyen por todo el
volumen, generndose miles de pequeas burbujas de aire que, difunden el 02 disuelto
hacia el seno del lquido. El sistema de agitacin se completa con cuatro o seis deflectores o
baffles que rompen el movimiento circular que imprimen las paletas de la turbina o el
agitador al lquido y generan mayor turbulencia y mejor mezclado; pero sin daar el tejido
o la pared celular de las clulas y microorganismos (tamao de Kolmogorov de los Eddies).
Finalmente, el tanque debe poseer un intercambiador de calor formado por una camisa por
la que circule agua, para poder controlar la temperatura del cultivo y evitar que este muera
o sufra un estrs trmico.

5. 2. Estructura de un biorreactor de Levantamiento por Aire

Cuando el volumen es muy grande (mayor que 1000 l) o se requiere de un mayor volumen
de aireacin, el sistema CSTR, ya no es eficiente y se requiere del levantamiento por aire.
Debido a que, a mayor volumen de cultivo, tambin es mayor la cantidad de calor
generado; se hace necesario, aumentar el rea de transferencia de calor y la eficiencia de
refrigeracin; por lo que, el intercambiador de calor de camisa debe ser reemplazado por
uno de serpentn en contra flujo o con circulacin adyacente a la pared interior del tanque.
Ver esquema representado en la figura.
Al igual que en el diseo de tanque agitado, el aire que ingresa al biorreactor debe ser
estril; esto se consigue, hacindolo pasar por un filtro microporo de dimetro de poro
inferior a los 0,45 micrones (0,2 m - 0,1 m) que impida el paso de microorganismos
contaminantes. En los biorreactores de levantamiento por aire o "air lift" la cama de aire
tambin funciona como medio de agitacin; de modo que, se genere una circulacin fluida
de lquido con aire (burbujas) que asciende el compartimiento interno y luego desciende
por el compartimiento externo, favoreciendo el mezclado perfecto.

5. 3. Transferencia de 02 y Balance de Oxgeno

La velocidad de transferencia de 02 (r02) desde el seno de la fase gaseosa (burbujas) hasta

la fase lquida (medio lquido) est determinada por la siguiente ecuacin: rO2 = Kla (C*C) donde KLa es el coeficiente volumtrico de transferencia de oxgeno; C la
concentracin de 02 disuelto en el seno del lquido y C* la concentracin de O2 disuelto en
equilibrio con la presin parcial de oxgeno de la fase gaseosa. El KLa y por lo tanto el
grado de transferencia de oxgeno desde el seno del lquido hasta las clulas o
microorganismos en cultivo, dependen del diseo del biorreactor y de las condiciones de
operacin del sistema de cultivo: caudal de aire, volumen del lquido, rgimen de agitacin,
rea de transferencia y viscosidad del cultivo. En general, disminuyen el KLa: la viscosidad
y el volumen del lquido y aumentan el KLa: el rea de transferencia, la agitacin y la
presencia de dispositivos que aumenten una, la otra, o ambas.
La ecuacin de balance de oxgeno en el estado estacionario es: d(VCO2) / dt = F (C C*) - VrO2 + VNiO2 donde Ni es la velocidad de transferencia de un componente del gas
(oxgeno) al lquido (medio). Dado que el oxgeno es el sustrato limitante de la velocidad
de crecimiento, cuando el cultivo se encuentra en crecimiento, el flujo de entrada oxgeno
(FiO2) ser mayor al flujo de salida de oxgeno (FfO2) debido al consumo de oxgeno
disuelto en el lquido por parte de las clulas o microorganismos en crecimiento y/o
divisin celular. En este caso, la ecuacin de balance de oxgeno para clulas o
microorganismos en crecimiento es: d(VCO2) = FiO2C - FfO2C* - VrO2 + VNiO2 es
decir, debe utilizarse la ecuacin general.

5. 4. Sistema de Aireacin
El sistema de aireacin externamente comprende las lneas de entrada Fi y salida de aire Ff
e internamente debe optimizar la transferencia de gases nutrientes (aire) hacia el medio
lquido. Un sistema de aireacin consta de cuatro partes mecnicas: fuente de aire; tubera y
filtros de entrada; boquilla y difusor de aire; tubera y filtros de salida. Y tres partes de
control: control de flujo aire; control de presin de aire; control de difusin de oxgeno
disuelto.
Fuente de Aire: dado que el sistema de aireacin, en su conjunto, depende de la correcta
eleccin del dispositivo que suministrar la fuente de aire, se siguieren dos opciones:
1. Compresor de Aire: su principal caracterstica es que opera con: alta presin y bajo caudal
de aire; por eso, cuando operan, es de manera continua o, cuando se requiere capacidad,
debe haber un tanque de almacenamiento a alta presin como parte del sistema. Una
segunda e importante caracterstica es que produce un alto nivel de ruido 80dB y una
tercera es que, si el compresor es de tipo pistn debe lubricarse con aceite, por lo que,
sta caracterstica se incluye en el diseo como: autolubricado (oiless) o no lubricado (oil
lubricated). Existen dos tipos de diseo constructivo para compresores de aire:

a) El compresor de diafragma: esta diseado para un trabajo de operacin contnua; su

presin operacin es moderada 60 psia y como su nombre lo indica, utiliza un diafragma
o fuelle para impulsar y comprimir el aire. El compresor de diafragma resulta adecuado
para oxigenar volmenes medianos de cultivos o microorganismos aerbicos.

b) El compresor de pistn: es ms utilizado comercialmente, no obstante, para cultivos

celulares sensibles (clulas de membrana plasmtica), no es recomendable, por cuanto, su
presin de operacin es muy alta (80 psia o ms) para estos cultivos y puede causar dao
celular severo o la lisis de las clulas; y porque, el pistn debe lubricarse con aceite y esto
ocasiona que se filtre en pequeas cantidades a la corriente de aire.
1. Soplador Regenerativo: se caracteriza por funcionar como si fuera una bomba centrfuga
de succin y desplazamiento de aire por lo que, opera con presin negativa (vaco) en la
succin y presin positiva (compresin) en el desplazamiento. Aunque su rango de accin
es pequeo: 20H2O a 40H2O en cuanto a las presiones de operacin, su capacidad de
desplazamiento de aire es muy alta 30 cfm - 50 cfm o 1000 L/min - 1500 L/min por lo que,
puede movilizar grandes volmenes de aire.

Tubera - Lnea de Aire: esta debe ser de acero inoxidable.

Filtros de las Lneas de Aire: para sistemas pequeos de dimetros de tubera estndar, se
utilizan filtros en lnea con la tubera; estos son de membrana microporo que filtran el
99,99% de los contaminantes. Para sistemas mayores (industriales) debe disearse un
mtodo de esterilizar in situ la lnea de aire; generalmente se hace calentando fuertemente
la lnea de aire y luego enfriarla. Las membranas microporo que filtran el aire tienen un
punto de burbuja que es la presin de agua mxima que pueden soportan antes de romperse
(recuerde que el sistema tiene un medio lquido) y un flujo mximo el cual es el mximo
caudal que puede soportar la membrana antes de su ruptura.
Sistema de Difusin de Oxgeno Disuelto: debe optimizar al mximo la transferencia de
oxgeno disuelto al medio lquido. El sistema consta de dos partes mecnicas: boquilla y
difusor de aire; una parte de medicin: sensor de oxgeno disuelto y una de control:
controlador de oxgeno disuelto.
Difusor de Aire: los cultivos aerbicos requieren que la corriente de aire estril que se
difunda en la forma de miles de pequeas burbujas, desde el difusor de aire, hacia el
volumen del lquido; esta accin se realiza mediante un plato o domo cilndrico de acero
inoxidable finamente perforado. Alternativamente y si el sistema es pequeo o mediano en
escala, se puede utilizar un difusor de material cermico poroso el cual, tiene la ventaja de
que, provee una cama ms fina de burbujas (de menor dimetro) y mayor rea de
transferencia (volumen de burbujas).
Control y Regulacin del Flujo de Aire: recuerde que las membranas que filtran el aire
tienen un punto de burbuja y un flujo mximo por encima del cual, se rompen; por eso, se
debe regular el flujo de aire y controlar la presin en la lnea de aire. La forma ms
econmica de hacerlo es manualmente, con un manmetro para presin. Existe tambin la
versin digital, ms costosa, pero que, controla de forma automtica el flujo de aire y la
presin, segn se escoja.
Control y Medicin del Oxgeno Disuelto (OD): adems de regular el flujo y la presin
del aire en la lnea o tubera, se debe controlar el valor y la concentracin del oxgeno

disuelto (OD) dentro del medio lquido; variable que puede medirse en dos formas
(parmetros):
a) Oxgeno Disuelto (OD): es la concentracin de oxgeno disuelto requerido para la
reduccin qumica de un equivalente en iones sulfito (de sodio) a la cantidad de materia
orgnica presente en el medio lquido que se debe oxidar.
b) Demanda Bioqumica Oxgeno (DBO): es la taza de oxidacin biolgica o demanda
bioqumica de oxgeno disuelto requerida por el microorganismo o clula en cultivo para
oxidar la materia orgnica presente en el medio lquido.
La tasa especfica de consumo de oxgeno de un cultivo est determinada por la
velocidad de transferencia de oxgeno (r02) y el KLa que la correlaciona; recuerde que: rO2
= Kla (C*- C). Se debe conocer la r02 para poder determinar el KLa; el valor de r02 se
consigue en la literatura; la concentracin de oxgeno disuelto en el lquido (C) es
equivalente al valor de OD, e instrumentalmente, se llama: razn de toma de oxigeno
(OUR) por sus siglas en ingls; el equivalente a C* (concentracin de oxgeno disuelto en
el lquido en equilibrio con el gas) es la demanda bioqumica de oxgeno (DBO) que,
instrumentalmente se llama: razn especfica de toma de oxigeno: SOUR (specific
oxygen uptake rate). Ambas razones pueden medirse regularse con un controlador
OUR/SOUR de uso comercial.
Una probeta o electrodo OD es un sensor que mide la concentracin de oxgeno disuelto
en el medio lquido. Similarmente, una probeta o electrodo BOD mide la concentracin de
oxgeno disuelto en el medio lquido en equilibrio con el gas. ) En ambos casos, el material
de su construccin debe ser acero inoxidable y su especificacin es por la longitud de
inmersin (H) y dimetro (D) de la probeta.
Nota: todas la imgenes de los instrumentos y equipos fueron tomadas del Catlogo en
Internet de Cole Parmer: www.coleparmer.com.

6. Diseo de un Fermentador Semicontinuo

Los cultivos anaerbicos y facultativos estn constituidos por clulas y microorganismos
cuyo metabolismo ante la ausencia de oxgeno, utiliza vas metablicas alternas para la
oxidacin de los compuestos que le sirven de nutrientes. En estas clulas y
microorganismos, la respiracin celular se sustituye por una ruta oxidativa alterna llamada
fermentacin en la que, el piruvato no produce CO2 como producto final de desecho; por el
contrario, se consume CO2 y esta es incorporado, junto al piruvato, en la fermentacin,
cuyo producto final de desecho, le da nombre; por ejemplo: en la fermentacin alcohlica
el piruvato se oxida a acetaldehdo y al final de la cadena oxidativa se produce etanol como
producto final de desecho.
Un fermentador es un dispositivo de tipo tanque agitado en el que se realiza una
fermentacin controlada. Los fermentadores suelen operar en modo semicontinuo; por

cuanto, debe alimentarse una lnea de sustrato limitante de la velocidad de crecimiento (S)
para mantener el crecimiento celular o microbial durante la fermentacin.
El catabolismo celular de las fermentaciones adems del producto final, produce gran
cantidad de subproductos de desecho y metabolitos secundarios que son excretados al
medio de cultivo, por las clulas en cultivo, y esto genera gran cantidad de espuma en el
caldo de fermentacin. Las espumas modifican la acidez del medio de cultivo ya que,
cambian el pH del medio de cultivo y por tanto, debe regularse y controlarse la acidez del
medio adecuadamente. Adicionalmente, la turbidez y la cantidad de espuma, deben
mantenerse en niveles adecuados para evitar prdidas y el mal funcionamiento del
biorreactor. Finalmente, la mayora de los procesos fermentativos generan gran cantidad de
calor debido a la naturaleza exergnica del catabolismo celular de estos microorganismos,
por lo que, la temperatura tambin debe ser controlada.
En la mayora de los cultivos anaerbicos el dixido de carbono (CO2) es el sustrato
limitante de la velocidad de crecimiento por lo que, la cintica del sistema de cultivo debe
modificarse incorporando la ecuacin de balance de consumo de CO2: d(VCCO2)/dt =
FiCCO2i - FoCCO2o + VrgCO2 - VNoCO2 Donde: CCO2 = concentracin de CO2 en el
lquido; rg = velocidad de generacin; No = velocidad de transferencia de un componente
del lquido al gas; i = ingreso; o = salida.
Control y Medicin del CO2 Disuelto (COD): la curva de generacin de CO2 se debe
determinar experimentalmente para determinar la velocidad de consumo de sustrato
limitante de la velocidad (rgCO2) del cultivo; para eso, es necesario mantener el
crecimiento mximo del cultivo.
En la prctica la curva de consumo de CO2 se determina basndola en la concentracin de
dixido de carbono disuelto (COD) en el medio de cultivo; esta puede ser medida y
controlada con un dispositivo comercial diseado para ese propsito, un controlador COD y
la sonda o probeta COD respectiva.
El suministro de CO2 se obtiene con un cilindro de CO2 recargable.
La regulacin del flujo de CO2 se realiza manualmente con un regulador manual de flujo
o manmetro; se debe hacer de forma que, se mantenga la concentracin mxima de de
dixido de carbono disuelto, medida en el controlador COD, para que, la velocidad
especfica de consumo de sustrato para mantenimiento (m) se mantenga en todo momento.
El control de flujo de CO2 se realiza utilizando una vlvula solenoide electrnica que el
controlador COD dirige al recibir la seal de la probeta COD y en base a su valor, comanda
la apertura o clausura de una vlvula solenoide, mediante una seal de paso (abrir o cerrar)
que regula el flujo de CO2 proveniente del tanque de CO2 comprimido. Las vlvulas
solenoides son servo mecanismos elctricamente controlados y se escogen de acuerdo al
material, al nmero de vas, al calibre y la presin y si permanecen abiertas o cerradas,
entre otros.

La difusin del CO2 en el medio lquido se realiza utilizando una boquilla de difusin o
un difusor de gases de material cermico poroso.

6. 1. Sistema de Control de Espuma

La presencia de oxigeno en el ambiente interno del biorreactor ocasiona que los productos
de desecho del catabolismo celular de los microorganismos facultativos, sean oxidados, por
lo que, las espumas se tornan densas y jabonosas ocasionando serios problemas
funcionales y contaminado el cultivo.
Un sistema de control de espuma (ver diagrama) consta de dos subsistemas sistemas
que funcionan en conjunto:
1. Subsistema Antiespuma formado por:

Controlador de antiespuma: comanda la bomba peristltica que dispensa el

antiespumante y recibe la seal de medicin del sensor de espuma
Probeta o sensor antiespuma: es el sensor que mide el nivel de espuma en el medio de
cultivo; se especifica de acuerdo al tamao del frasco dispensador de antiespumante
Frasco dispensador de antiespumante: debe contar con su propio sistema de filtracin y
equiparacin de presin (externa e interna)

1. Subsistema de Bombeo Peristltico: formado por:

Mangueras flexibles;
Bomba peristltica;
Frasco dispensador;

El frasco dispensador es factor comn en ambos subsistemas.

La bomba peristltica maja la manguera flexible e impulsa el flujo del fluido
antiespumante dentro del biorreactor.
La manguera flexible se escoge segn el material, el tipo de bomba y la longitud; se
recomienda una de silicn curado o Tygon y para un sistema de bombeo L/S (bomba
sencilla de velocidad fija o variable).
Nota: la manguera flexible se conecta al sistema (biorreactor) mediante un tubo de adicin
de reactivo. Este debe ser de acero inoxidable y su dimetro (puerto) debe ser el dimetro
interno de la manguera flexible.

7. Sistema de Control de pH
El sistema controla el pH del medio de cultivo; que es generada por los productos de
desecho y el metabolismo propio del cultivo celular o microorganismos. Un sistema de
control de acidez consta de:

Dos subsistemas mecnicos servo controlados

1. Sistema Dispensador de cido: que consta de:

Dispensador asptico de cido (HCl);

Filtro microporo en lnea;
Manguera flexible resistente al cido;
Bomba peristltica;

1. Sistema Dispensador de lcali: que consta de:

Dispensador asptico de lcali (NaOH);

Filtro microporo en lnea;
Manguera flexible resistente al lcali;
Bomba peristltica;

Nota: recuerde que las mangueras flexibles se deben conectar al sistema (biorreactor)
mediante un tubo de adicin de reactivo para cada una de ellas.
Un sistema de control formado por:

Controlador de pH: ordena y regula la accin del motor que controla a las bombas
peristlticas que suministran el cido y el lcali.

Un sistema de medicin: formado por:

Sensor de pH: sonda o probeta electroqumica que mide la acidez y dice al controlador
de pH, la situacin del medio.
pH ptimo: toda clula y microorganismo poseen un rango de acidez (pH) dentro del cual,
es posible su crecimiento con normalidad; dentro de ese rango, existe un pH ptimo en el
cual el crecimiento es mximo y muy bien definido.

Al crecer los microorganismos en ambientes naturales, su rango de pH se acerca a los

valores del hbitat en que se desarrolla; el rango normal de acidez en que pueden
sobrevivir la mayora de los microorganismos es 2,0 pH 10,0. La mayora de los
hbitats tienen valores de pH de 5,9 por lo que, los microorganismos que viven en esos
hbitats tienen un pH ptimo equivalente (5,9). Algunos rangos de pH ptimo son: para
levaduras entre 3,5 y 5,5; para bacterias entre 6,0 y 7,5; para mohos, segn la cepa, se
extiende entre 3 y 7; para clulas en cultivo entre 6,0 y 7,5. La forma exacta de la curva de
acidez es muy variada y depende del metabolismo propio de cada microorganismo o clula
por lo que, no se ha formulado un modelo general y simple para representarla.

7. 1. Sistema de Control de Temperatura

Mantiene estable y dentro de un rango ptimo requerido por el cultivo para su mximo
crecimiento, la temperatura interna del sistema.

Un sistema de control de temperatura consta de:

Dos sistemas de intercambio trmico:

Intercambiador de Calor: dispositivo de intercambio trmico que genera calor o absorbe

el calor excedente. El intercambiador de calor de caso y tubos es el ms usado y se define
por su rea de transferencia de calor; a mayor rea de transferencia de calor, mayor
capacidad de absorber calor.

Serpentn: medio fsico por el cual el calor es absorbido o transmitido al fluido. El tubo del
serpentn debe ser de acero inoxidable 304 o 316 (preferiblemente) y se recomienda que
sea delgado para una mejor transferencia de calor.

Un sistema de control:

Controlador de Temperatura: sistema que ordena y regula la accin del motor que
controla las servo vlvulas que regulan el flujo de lquido fro o caliente.

Un sistema de medicin:

Sensor de temperatura: sonda (termocopla) que mide la temperatura.

Un servo control:

Servo Controlador de Temperatura: controla la temperatura a la que debe abrir o cerrar

la vlvula solenoide.

Un sistema regulador de paso de flujo:

Vlvula Solenoide: servo mecanismo actuador que regula el flujo (paso) de lquido por la
tubera o lnea de paso (abre o cierra el flujo del lquido)

Un sistema de conduccin de fluido:

Tuberas de Conduccin de Agua: el agua es fluido trmico por excelencia para la

transferencia de calor por conduccin a travs de las paredes metlicas de la tubera. stas
deben ser de acero inoxidable.

Nota: las tuberas deben anclarse al cuerpo del biorreactor mediante un puerto de entrada
que es soporte hermtico que la sujeta a la superficie plana.
Temperatura ptima: la temperatura es otro factor ambiental que influye y que afecta el
crecimiento del cultivo microbiano y celular; poniendo el juego, la propia supervivencia de
la clula o microorganismo. La temperatura afecta a las clulas y microorganismos
cultivados de dos formas distintas:

1. Conforme aumenta la temperatura, aumenta tambin la velocidad de las reacciones

enzimticas y el crecimiento se hace ms rpido;
1. Por encima de un mximo temperatura, se produce la desnaturalizacin de las protenas
celulares y la descomposicin de los componentes celulares esenciales para mantener la
vida, causando la muerte de las clulas o microorganismos en cultivo.

En este punto analizaremos nicamente el primer tem; ms adelante veremos el segundo.

Para cada clula y microorganismo existe una temperatura mnima por debajo de la cual,
no hay crecimiento; es decir se inhibe el crecimiento celular. Y una temperatura mxima
por encima de la cul, la clula o microorganismo muere. Entre ese rango de temperaturas
existe una temperatura ptima para la cual, el crecimiento es el ms rpido posible. Estas
tres temperaturas son caractersticas de cada clula y microorganismo y pueden variar
ligeramente con la composicin del medio de cultivo.

7. 1. 1. Clasificacin de los microorganismos de acuerdo a sus temperaturas

Tipo de microorganismo Temp. Mnima (C) Temp. ptima (C) Temp. Mxima (C) Psicrfilo -5 +5
12 - 15 15 - 20 Psicrtrofo -5 +5 25 - 30 30 - 35 Mesfilo 5 - 15 30 - 45 35 - 47 Termfilo 40 - 45 55 75 60 - 90

Determinacin de la Temperatura ptima de Crecimiento: se realiza desde el punto de

vista cintico, aplicando la Ley de Arrhenius para el crecimiento y la muerte de clulas o
microorganismos: dln (k)/dt = Ea/RT2; dln (k) = -(Ea/R)*d(1/T) Donde: k = mx (para
el crecimiento), k = mx (para la muerte), T = temperatura absoluta, R = constante general
de los gases ideales, Ea = energa de activacin del proceso: EC para el crecimiento, Em
para la muerte; EC = 8 - 12.000 cal/g-mol K (crecimiento), Em = 50 - 100.000 cal/g-mol K
(muerte). La realizacin de la curva de crecimiento EC en conjunto a la curva de muerte
Em representada por su logaritmo ln (k) versus el inverso del tiempo 1/T conduce a la
determinacin grfica de la temperatura ptima.

8. Diseo de un Biorreactor de Tanque Agitado

Componentes de Diseo de un Biorreactor de Tanque Agitado
Para lograr el cumplimiento de objetivos descritos, un biorreactor de tipo tanque agitado o
CSTR (ver figura), debe contar con los siguientes componentes bsicos en su diseo: [1]

Cuerpo del Biorreactor: recipiente o contenedor que alberga al cultivo o microorganismo.

El contenedor es la frontera fsica entre el ambiente externo contaminado y el ambiente
interno controlado. Un tanque contenedor o cuerpo del biorreactor se debe construir en
acero inoxidable austentico, por sus caractersticas qumicas y fsicas superiores;
usualmente se prefiere los aceros de las series 316.

Dimensionamiento del Cuerpo del Biorreactor: el primer paso en el diseo de cualquier

biorreactor es dimensionar el tamao del tanque o del cuerpo del biorreactor; la
prctica comn es, hacerlo a travs de variables adimensionales: variables que

representan una razn entre dos parmetros con las mismas dimensiones. De esta forma,
es posible escalar; es decir cambiar de dimensin o tamao, el biorreactor y adaptarlo a
otra escala de proceso. Las principales relaciones adimensionales que se utilizan en
tanques agitados son: la razn de la altura de trabajo (H) al dimetro del tanque (Dt): 3
H/Dt 1 en reactores tubulares (largos) esta relacin es de 4 - 6; la razn del dimetro del
tanque (Dt) al dimetro de las hojas o aspas (Da): Da/dt cuando el rgimen de
agitacin es laminar y las revoluciones del motor menores a 150 rpm, la relacin aumenta
; la razn entre el dimetro de la hoja (Da) y el dimetro del espacio libre o hueco entre
el rotor y el cuerpo de la hoja (Dd): 2 Da/Dd 1 en turbinas axiales y hojas planas esta
relacin aumenta de 2 - 4; la razn entre el ancho de la hoja o aspa (L) y el espesor o
grosor de esta (W): 4 L/W 1 en turbinas axiales y hojas planas esta relacin se invierte
L/W 1/16. En la figura aparece como gap - (G) es el espacio libre que se deja
cuando se utilizan baffles o dispositivos amortiguadores de la turbulencia; normalmente el
valor de G es: 1/12 - 1/16 del valor de J donde J es el ancho del baffle o amortiguador; J
por su parte se disea de acuerdo al dimetro del tanque (Dt) pero valor de diseo es el
mismo que el del espacio libre: 1/12Dt J 1/16Dt. (Hs), no aparece en la figura, es la
altura de techo o espacio libre que se deja entre la superficie libre del lquido (H) y el techo
o tapa del biorreactor, para facilitar la operacin del sistema; el valor mnimo de la luz (Hs)
es 10% de la altura total del tanque (Ht) y el valor mximo es 50% Ht que representa el
valor mnimo de volumen de operacin . Finalmente, C es la altura de piso del agitador altura desde el fondo del tanque hasta el punto ms bajo de las aspas u hojas; C se
dispone en base a la altura de la columna de fluido (H), normalmente: C/H .

Sistema de Agitacin: tiene la funcin de generar la potencia necesaria para producir una
mezcla perfecta para el sistema de cultivo y producir un rgimen de agitacin adecuado
que, maximice la difusin de gases en el lquido y minimice la produccin de esfuerzos
cortantes y la presin hidrodinmica local y global, para optimizar los fenmenos de
transferencia de momentum, calor y masa.

Un sistema de agitacin consta de cuatro partes mecnicas:

Motor Impulsor: suministra la potencia al eje de potencia; debe ser de corriente alterna
(a.c), preferiblemente de induccin y su potencia debe calcularse para manejar el doble
(200%) de la potencia terica requerida para agitar el fluido y el cultivo a Re3000. Motor
de Induccin (A.C): dado que un biorreactor debe operar de forma continua durante todo el
proceso de cultivo; se requiere un motor capaz de resistir largos periodos de operacin
continua y trabajo duro; por eso, el motor debe ser de induccin de corriente alterna (a.c) y
debe ser acorazado, preferiblemente en acero inoxidable.
Eje trasmisor de la potencia: es una barra cilndrica de acero inoxidable 316L y por lo
general se disea en dimetros estndar: , , etctera para mayor facilidad de ajuste a
los estndares de motores a.c. Su longitud depende de la profundidad del contenedor
(tanque).
Acople del Eje Transmisor: ajusta y fija al motor, el eje transmisor de potencia. Existen
dos tipos de acople:

Acople-adaptador de tipo taladro el puerto de entrada se acopla al eje del motor por
fijacin directa. El puerto de salida es un dispositivo que se adapta a varios dimetros de
broca y sujeta o abraza firmemente el eje transmisor de potencia por presin y abrasin;
similar al que utilizan los taladros mecnicos.
Acople-ajustador de tipo tornillo-rosca el puerto de entrada se enrosca o se fija
firmemente al eje del motor. El puerto de salida es un dispositivo que abraza el eje
transmisor de potencia por un mecanismo de tornillo-rosca.
En ambos casos, el dimetro del puerto de entrada del acople que es la unin de ste con el
eje del motor debe ser de dimetro interno igual al dimetro externo del eje del motor y el
dimetro del puerto de salida que es dispositivo sujetador del eje transmisor de potencia
debe ser el mismo que el dimetro externo del respectivo eje.
Puerto de Entrada del Biorreactor: se denomina puerto a la superficie fsica sobre el cual
se instala un dispositivo de entrada o salida al biorreactor, un anclaje o un aparato mecnico
o de medicin; el puerto es el medio por el cual, se ajusta o fija, tal dispositivo o artefacto a
la pared o superficie del tanque o del biorreactor. Como se observa en la fotografa, el
puerto de entrada es la tapa o cara superior del tanque biorreactor y en donde se anclan o
sujetan todos los dispositivos y perifricos que se requieren para su operacin. Cada
dispositivo de anclaje o sujetador tambin un puerto menor cuyo dimetro externo es la
superficie externa total y cuyo dimetro interno es el dimetro externo del dispositivo que
sujeta. Algunos puertos tienen dos dimetros internos, cuando el dispositivo que sujetan
tiene dimetro externo y dimetro interno; por ejemplo, los sensores o probetas medidores y
el sello mecnico del eje del agitador.
Sello Mecnico: su funcin es triple: evitar la contaminacin, mantener hermtico el
sistema, servir de amortiguador de friccin. El sello mecnico tambin debe permitir la
esterilizacin in situ del biorreactor, mediante una lnea de vapor sobrecalentado. Un sello
mecnico, generalmente se disea en una de dos configuraciones:
Cartucho rgido: que permite el rodamiento del eje de potencia a travs de soporte de
cuerpo rgido que sella y asla el paso de cualquier materia al interior del depsito.
Cartucho flexible: que permite el rodamiento del eje de potencia a travs de un soporte fijo
al exterior pero flexible en el interior y que tambin sella y asla el paso de contaminantes
al interior del depsito.
En ambos caso el sello mecnico se especifica de acuerdo al dimetro eterno del eje
transmisor de potencia; el cual es el dimetro interno del puerto del sello mecnico. Dentro
de lo posible se recomienda el uso de sellos flexibles ya que amortiguan mejor las
vibraciones mecnicas del eje transmisor de potencia; la desventaja es que esa flexibilidad
obliga a cambiarlos ms frecuente, pues el desgaste es mayor.
Eje Transmisor de Potencia: transmite la potencia del motor al impulsor, a travs de, las
hojas de agitacin. Existen ejes en los cuales ya vienen incorporadas hojas o aspas de

agitacin, se disean para operar en uno de dos sistemas de flujo, segn sea, la orientacin
espacial de las hojas o aletas:
Flujo axial: suministran mayor efectividad de mezclado (distribucin) y reducen la
potencia de mezclado requerida, al distribuir mejor la mezcla; sus hojas u aspas son planas.
Flujo radial: generan mayor potencia de mezclado (turbulencia) y pueden causar dao
celular; sus hojas o aspas son del tipo hlice.
Impulsores: son los dispositivos que impulsan el fluido y el movimiento, mediante hojas o
aspas unidas al eje transmisor de potencia; pueden ser del tipo mecnico (agitador) o
hidrulico (turbina).
Agitadores: es un impulsor formado por hojas o aspas de agitacin conectadas al eje
transmisor de potencia; pueden tener una distribucin de flujo axial o radial.
Los propulsores de flujo radial pueden tener gran variedad de formas y diseos; dentro de
stos, las hlices son las que ms se utilizan.
Hlices: existen en tres diseos bsicos que dependen de la orientacin espacial:
(a) - Plano XY, (b) - Plano ZX, (c) - Plano ZY
Cada orientacin (plano) describe una superficie curva que es determinada por dos (2) de
tres (3) ngulos de diseo:
(a) Plano XY, determina el ngulo de inclinacin (), este vara 15 45; (b) Plano
ZX, determina el ngulo de torsin (), este vara 16 32; (c) Plano ZY, determina el
ngulo de tensin (), este vara 15 45.
Como se observa en la figura:
(a) - Hlices de superficie curva en el Plano XY estn determinadas por los ngulos , ;
(b) - Hlices de superficie curva en el Plano ZX estn determinadas por los ngulos , ; (c)
- Hlices de superficie curva en el Plano ZY estn determinadas por los ngulos , .
Por su gran potencia y la turbulencia que generan, las hlices no se recomiendan para
cultivos de clulas sensibles; solo deben utilizarse para cultivos bacteriales o micticos y a
bajas velocidades de rotacin.
Turbinas: es un impulsor de flujo axial el cual opera como una centrfuga que distribuye el
flujo de lquido a travs de hojas planas, a todo el volumen de fluido.
El impulso axial ha demostrado ser la forma ms eficiente de diseo para reducir esfuerzos
cortantes e hidrodinmicos y disminuir la turbulencia y la potencia requerida para
homogenizar el mezclado; objetivo que se persigue en una mezcla perfecta. Por eso se

recomienda impulsores de flujo axial para cultivar clulas sensibles o de membrana

plasmtica. Dentro de stas, la turbina Rushton (b) es el impulsor de flujo axial ms
recomendado y ms eficiente para generar una mezcla perfecta de alto perfil
hidrodinmico, bajo en esfuerzos cortantes y alto en distribucin.
Y una de control:
Control de Velocidad del Motor: los motores de induccin de corriente alterna (a.c)
tienen velocidades nominales de rotacin de 1800rpm o 3600rpm. Estas velocidades son
muy altas para los sistemas biolgicos causando la destruccin de las clulas y
microorganismos en cultivo. La velocidad de rotacin del motor debe entonces reducirse a
un mximo de 600rpm (revoluciones por minuto) para que no cause dao celular.
Usualmente se acopla a la salida de eje del rotor una caja de reduccin de 1/3 o 1/6 para
bajar la velocidad de rotacin a 600rpm. Adicionalmente se coloca un control de velocidad
que puede ser analgico o digital al motor para un control ms fino y preciso de la
velocidad de rotacin.
Agitacin y Mezclado
Relaciones de Potencia y Mezclado: conforme el dimetro de la hoja o aspa (Dd)
aumenta, tambin lo hace, la potencia (Pt) requerida para realizar el trabajo de mezclado; la
potencia de mezclado (Pm) es mayor porque el torque () se acrecienta, recuerde que el
torque es la relacin entre la fuerza (F) y el brazo de palanca (r) y que, el brazo de palanca
es el dimetro del aspa u hoja cuyo momentum (mv) aumenta al aumentar la velocidad de
rotacin (). As entonces, cuando Dd es muy grande, debe disminuirse para reducir Pt;
pero esto ocasiona que Pm tambin se contraiga; as como la turbulencia excesiva. Caso
contrario ocurre cuando Dd es muy pequeo, debe aumentarse para mejorar Pm y
extender la turbulencia, ya que, en estos casos, es localizada (se acumula alrededor de las
aspas y hojas). Este fenmeno local que se conoce como potencia fluida (Pf) provoca que el
volumen de lquido que es afectado por la turbulencia local (Rex) no sea suficiente para
oxigenar los tejidos y clulas en cultivo pues el Kla disminuye. Para que la Pf se transmita a
todo el volumen de operacin del fluido, es necesario que, se alcance el estado estacionario
(EE) en dicha operacin, y esto toma mucho tiempo lo que implica, un alto costo. La mejor
forma de combinar positivamente estos efectos hidrodinmicos que se contraponen; es
decir: bajar Pm y aumentar Pf es optimizar Dd. A esto se le conoce como potencia ptima
de mezclado (Pe) y se logra de dos maneras:

Colocar varias hojas o paletas (2-3) en dimetros (Dd) descendentes y distribuidas a

alturas equidistantes a lo largo de la altura de la columna de fluido (H);
Colocar varias hojas o paletas (2-3) de igual dimetro (Dd) a alturas equidistantes a lo largo
de la altura de la columna de fluido (H).

La primera alternativa minimiza la potencia de mezclado requerida y maximiza la potencia

fluida al aprovechar mejor el gradiente de mezcla. La segunda aumenta la potencia de
mezclado y la potencia fluida pero tambin, la potencia requerida y desaprovecha el
gradiente de mezcla y difusin.

Utilizacin de Bafles: son una mejora muy utilizada ya que pueden instalarse fcilmente en
los sistemas de agitacin, disminuyen (deflectan) la turbulencia ocasionada por las hojas o
aspas del impulsor, rompen (disgregan) los cmulos celulares y micelios que se forman en
los respectivos cultivos y mejoran la eficiencia de mezclado. La relacin ptima del
dimetro del bafle (Db o J) al dimetro de tanque (Dt) es: Db/Dt = 1/10-1/12. El nmero
indicado de bafles es 4 para sistemas moderadamente agitados y 6 para sistemas
turbulentos.

9. Anlisis de Fenmenos de Transporte

9. 1. Sistemas de Intercambio Trmico
La transferencia de calor es un proceso el que se intercambia energa en forma de calor
entre distintos cuerpos o entre diferentes partes de un mismo cuerpo que estn a distinta
temperatura. El calor se transfiere por una combinacin de dos o ms de estos tres procesos:
conveccin, conduccin o radiacin. Uno de los mecanismos trmicos (proceso) suele
predominar sobre los otros dos, tambin es posible que los tres procesos se den
simultneamente. La conduccin es el proceso dominante en los intercambiadores de calor
de casco y tubos y en el tubo serpentn. Aunque el mecanismo exacto de la conduccin no
se comprende, se sabe que se debe al movimiento (energa cintica) de los electrones libres
que se mueven por la red cristalina del slido y transportan energa cuando existe una
diferencia (gradiente) de temperatura.
Ley de Fourier: J = KT/x Donde J = densidad de corriente de energa (J/ms); K =
conductividad trmica (constante caracterstica del material). La velocidad de conduccin
de calor (J) a travs de un cuerpo slido (medida por unidad de seccin transversal) es
proporcional directamente al negativo del gradiente de temperatura que existe en dicho
cuerpo.
Tabla de Conductividades Trmicas y Propiedades de Metales [1]
Metal Densidad Calor especfico Conductividad trmica Aluminio 2700 880 209,3 8,8110-5
Acero 7800 460 45 1,2510-5 Cobre 8900 390 389,6 11,2210-5 Latn 8500 380 85,5 2,6510-5
Plata 10500 230 418,7 17,3410-5 Plomo 11300 130 34,6 2,3510-5

Las unidades de las magnitudes estn expresadas en el Sistema Internacional de Unidades

de Medida.

9. 2. Clculo de Resistencias Trmicas

Para calcular la resistencia trmica es necesario transformar las ecuaciones que modelan los
distintos mecanismos de transferencia de calor para que presenten la siguiente forma: (Ta Tb) / Q-punto = expresin matemtica = Rth La expresin de la resistencia trmica Rth es
diferente en cada sistema y depende del mecanismo de transferencia:
Resistencia trmica en la conduccin:

En estos casos se debe distinguir entre las diferentes geometras que se presentan en cada
elemento resistivo; las configuraciones geomtricas ms usuales: pared plana, pared
cilndrica y pared esfrica.

Cilindro
Circuito elctrico anlogo para cilindro
Paredes conectadas en serie
Circuito elctrico anlogo para paredes compuestas conectadas en serie
Paredes compuestas conectadas en paralelo
Circuito elctrico anlogo para una pared compuesta conectada en paralelo

9. 3. Intercambiadores de Calor
Un intercambiador de calor es un dispositivo diseado para transferir calor por un
mecanismo mixto de conveccin entre la pelcula de un lquido procesado (medio cultivo) y
la pared de un slido metlico, seguido de la conduccin del calor transferido al rea
transversal del slido metlico (tubo o placa) y nuevamente la transmisin de calor por
conveccin desde la pared del slido metlico a otro fluido procesado (agua).
Como se observa en las figuras existen diversas formas de disear un intercambiador de
calor. Arriba: un serpentn es un tubo metlico que se encarga del intercambio trmico; el
lquido refrigerante recoge (absorbe) o transmite el calor. Abajo: una camisa o chaqueta es
un dispositivo cerrado de intercambio trmico; en tanto que, un regenerador de calor es un
dispositivo abierto. En todos los casos el mecanismo mixto de intercambio trmico es la
conveccin que conduce el calor entre slidos metlicos estticos y superficies fluidas
mviles.
Intercambiadores de Tubos:

Doble Tubo: es el tipo ms sencillo de intercambiador de calor; est formado por dos
tubos metlicos concntricos (paralelos) de dimetros diferentes; el fluido que se debe
calentar o enfriar entra y fluye por el tubo de menor dimetro; el fluido trmico que
ejecuta la accin, fluye por el espacio anular entre los dos tubos; ste espacio es el rea de
transferencia de calor.

Como se observa en la figura existen dos configuraciones para la direccin del flujo fluido:
a) Flujo paralelo: los dos fluidos entran por el mismo extremo y fluyen en el mismo
sentido. b) Contraflujo: los fluidos entran por los extremos opuestos y tambin fluyen en
sentidos opuestos.
En un intercambiador de calor en flujo paralelo la temperatura de salida del fluido fro
nunca puede ser superior a la temperatura de salida del fluido caliente. En un
intercambiador de calor en contraflujo la temperatura de salida del fluido fro puede ser
superior a la temperatura de salida del fluido caliente.

El caso lmite ocurre cuando la temperatura de salida del fluido fro es igual a la
temperatura de entrada del fluido caliente. La temperatura de salida del fluido fro nunca
puede ser superior a la temperatura de entrada del fluido caliente.

Compactos: son intercambiadores de calor multitubulares y estn diseados para alcanzar

una gran rea superficial de transferencia de calor por unidad de volumen. La razn entre
el rea superficial de transferencia de calor y su volumen se denomina densidad de rea
(b). Un intercambiador con b > 700 m2/m3 se clasifica como compacto.

Como se observa en la figura en los intercambiadores de calor compactos los dos fluidos
fluyen en direcciones ortogonales entre s (90) esta configuracin de flujo recibe el
nombre de flujo cruzado y se clasifica en funcin del mezclado:
a) Flujo cruzado mezclado: uno de los fluidos fluye libremente en direccin ortogonal al
otro sin restricciones; b) Flujo cruzado no mezclado: se disponen las placas para guiar el
flujo de uno de los fluidos en direccin ortogonal al otro sin que se mezclen.

Casco y Tubos: es el tipo ms comn de intercambiador para aplicaciones industriales;

estn formados por gran cantidad de tubos metlicos contenidos dentro en un casco o
carcasa metlica. Los tubos se disponen con sus ejes paralelos al eje del casco; la
transferencia de calor tiene lugar, a medida que el fluido que se desea calentar o enfriar,
se mueve (fluye) por el interior de los tubos metlicos; mientras que, el fluido trmico se
fluye por fuera de stos, dentro del rea de transferencia encerrada por el casco.

Como se observa en la figura los intercambiadores de casco y tubos se clasifican segn:

a) Nmero de pasos por el casco; b) Nmero de pasos por los tubos.

10. Enlaces externos

11. Referencias
1. Koshkin N. I., Shirkvich M. G. (AO). pgs 36, 74-75, 85-86, Manual de Fsica Elemental,
ditorial Mir 1975. ISBN.
Categoras: Wikipedia:Wikificar, Wikipedia:Wikificar ciencia, Wikipedia:Wikificar tecnologa,
Bioqumica aplicada, Biotecnologa, Bioingeniera
En otros idiomas: English, Catal, Deutsch, Franais, Italiano, , , Polski, Bahasa
Indonesia, , esky, Ms...

DISEO DEL SISTEMA DE CONTROL PARA UN BIORREACTOR

DE TANQUE AGITADO
Morgan G. Vsquez

Resumen
El presente trabajo muestra de forma general los elementos que hacen parte del sistema de control de un biorreactor
de tanque agitado. Se presentan los sensores y actuadores comnmente utilizados y un esquema de conexiones
para el proceso.

Palabras Clave: Biorreactor de tanque agitado.

1
BIORREACTORES
El biorreactor, es sin duda, uno de los equipos fundamentales de la microbiologa industrial. Es
el recipiente donde se realiza el cultivo, y su diseo debe ser tal que asegure un ambiente
uniforme y adecuado para los microorganismos [1].
Las "tareas" que realiza el biorreactor pueden
resumirse del siguiente modo:
a) Mantener las clulas uniformemente distribuidas en todo el volumen de cultivo a fin de
prevenir la sedimentacin o la flotacin.
b) Mantener constante y homognea la temperatura.
c) Minimizar los gradientes de concentracin de
nutrientes.
d) Suministrar oxgeno a una velocidad tal que
satisfaga el consumo.
e) El diseo debe ser tal que permita mantener el cultivo puro; una vez que todo el sistema ha
sido esterilizado y posteriormente sembrado con el microorganismo deseado.
Para satisfacer los cuatro primeros puntos es necesario que el biorreactor est provisto de un
sistema de agitacin, adems para el punto d) se requiere de un sistema que inyecte aire en el
cultivo.
1.1 ELEMENTOS DEL BIORREACTOR
El biorreactor de tanque agitado es de uso muy difundido. La agitacin se realiza
mecnicamente mediante un eje provisto de turbinas accionado por un motor, como muestra
la figura 1.
El aire se inyecta por la parte inferior del tanque y es distribuido por una corona que posee
pequeos orificios espaciados regularmente. El chorro de aire que sale de cada orificio es
"golpeado" por las paletas de la turbina inferior generndose de este modo miles de pequeas
burbujas de aire, desde las cuales difunde el 02 hacia el seno del lquido. El sistema de
agitacin se completa con cuatro o seis deflectores que tienen por finalidad cortar o romper el
movimiento circular que imprimen las turbinas al lquido, generando de este modo mayor
turbulencia y mejor mezclado.
El tanque est rodeado por una camisa por la que circula agua, lo que permite controlar la
temperatura. Para tanques mayores que 1000 o 2000 litros este sistema ya no es eficiente y
es reemplazado por un serpentn que circula adyacente a la pared interior del tanque. Debe
tenerse en cuenta que a medida que es mayor el volumen de cultivo tambin lo es la cantidad
de calor generado, por lo que se hace necesario una mayor rea de refrigeracin. Los tanques
son de acero inoxidable y estn pulidos a fin de facilitar la limpieza y posterior esterilizacin.
El aire que ingresa al biorreactor debe estar estril, lo que se consigue hacindolo pasar por
un filtro cuyo dimetro de poro es de 0,45 micrones, que impide el paso de microorganismos y
esporos.

CRECIMIENTO MICROBIANO

Cuando se siembran microorganismos en un medio de cultivo apropiado, los

mismos comienzan a dividirse activamente empleando los nutrientes que le aporta
el medio de cultivo para "fabricar" nuevos microorganismos. Este proceso contina
hasta que algn nutriente del medio de cultivo se agota (sustrato limitante) y el
crecimiento se detiene. Tambin puede detenerse el crecimiento por acumulacin
de alguna substancia inhibidora formada por los mismos microorganismos, pero
supngase por ahora que ste no es el caso y que la primera alternativa es la
vlida. Luego hay dos aspectos claramente diferenciables que hacen al
crecimiento microbiano: uno estequiomtrico, por el cual la concentracin final de
microorganismos obtenidos depender de la concentracin y composicin del
medio de cultivo, y el otro cintico, el que dir con qu velocidad se lleva a cabo el
proceso.
Estequiometra del crecimiento microbiano

La aplicacin de la estequiometra requiere conocer los rendimientos. Estos se

definen como la relacin entre el producto obtenido y el sustrato consumido
(usualmente la fuente de carbono y energa). Por ejemplo el rendimiento celular se
define como:

X y S representan la concentracin de biomasa y sustrato respectivamente. En la

prctica, para el clculo del Yx/s se emplea la expresin:

En el captulo 4 se vio que para obtener 30 gl-1 de levadura para panificacin, se

consuman 60 gl-1 de fuente carbonada, luego el rendimiento ser

Si adems de microorganismos se forma algn producto en particular, el

rendimiento en producto estar dado por:

Antes de avanzar en el tema, convendr hacer algunas consideraciones sobre la

composicin elemental de los microorganismos con respecto a los elementos
mayoritarios (C, N, H, O) ya que la misma ser el punto de partida para realizar los
clculos estequiomtricos. Adems, y antes de aplicar los balances
estequiomtricos deberemos responder a esta pregunta: qu peso de clulas (o
biomasa) corresponde a "un mol"?.
Se ha encontrado que la composicin elemental de un microorganismo dado
durante un cultivo no se modifica mayormente y, lo que es ms, las composiciones
elementales de distintos tipos de microorganismos (bacterias y hongos) son
semejantes. De este modo se puede definir un "microorganismo promedio"
como aqul cuya composicin es (% p/p):
C = 46.5; H = 6.49; 0 = 31.0; N = 10.85,
siendo el contenido de sales aproximadamente 5%. Es importante recalcar que si
bien la composicin elemental de la biomasa se mantiene constante durante el
cultivo, no ocurre lo mismo con la composicin macromolecular, esto es:
protenas, cidos nucleicos, cte., la cual puede variar sensiblemente.
Teniendo en cuenta la composicin media anterior, es posible escribir la "frmula
mnima" de un microorganismo promedio como: CH1.79O0.5N0.2 (en la que est
representado el 95% p/p de la biomasa) y con fines netamente prcticos definir "un
C-mol de biomasa" como la cantidad de biomasa que contiene un tomo gramo de
Carbono.

Por tanto una concentracin de X en gl -1 de biomasa es equivalente a X / 25.8 Cmol de biomasa l -1, o bien Xox / 12 C-mol de biomasa l -1 . Donde ox es la fraccin
de Carbono de la biomasa (0.465 para el "microorganismo promedio"). Esta ltima
forma de calcular los C-moles de biomasa es ventajosa ya que slo requiere
conocer ox ; un dato que se puede obtener fcilmente de la bibliografa. En caso

de no existir datos disponibles, se puede suponer ox = 0.465 sin temor a cometer

errores groseros.
De forma anloga a la anterior se definen 1 C-mol de fuente de Carbono y
energa, y tambin 1 C-mol de producto. Por ejemplo para la glucosa (C6H12O6) 1
C-mol de glucosa estar representado por CH20 y pesar 30 g, mientras que 1 Cmol de etanol (C 2H60) estar representado por CH 300.5 y pesar 23 g. En general
para un compuesto de la formaC n H 1 Oq Nm , 1 C-mol estar representado por C
H1/n Oq/n Nm/n.
En base a lo anterior, el crecimiento puede representarse mediante la siguiente
"reaccin qumica", en la que supondremos que el NH 3 (o alguna sal de amonio)
es la fuente de nitrgeno:

Debe notarse que en esta ecuacin todos los coeficientes estequiomtricos estn
referidos a 1 C-mol de fuente de Carbono y energa (fuente C y E).
El valor de yx/s representa los C-moles de biomasa formada por cada C-mol de
fuente de C y E consumida, el de b los moles de 02 consumido por cada C-mol de
fuente de C y E consumida, etc.
Ya se ha visto que Yx/s e Yp/s son los rendimientos en biomasa y en producto
respectivamente. Son parmetros de importancia fundamental dentro de la
microbiologa industrial, pues dan una medida de la eficiencia del proceso de
produccin. De este modo en un proceso destinado a la produccin de biomasa, el
objetivo ser maximizar Y x/s y minimizar Yp/s . Si lo que interesa es el producto, se
tendr el caso inverso. Los valores de yx/s e yp/s se calculan a partir de Yx/s e Yp/s
mediante las expresiones:

Antes de efectuar los balances de materia y energa, introduciremos un nuevo

concepto que nos permitir simplificar los clculos: el "grado de reduccin" al que
denotaremos con la letra y.
Un par de ejemplos servirn para aclarar el significado de y. En la tabla 4 pueden
observarse los valores de y para la oxidacin de 1 C-mol de distintos compuestos
orgnicos a C02 y H2O, como as tambin el calor de reaccin.

De la tabla 4 surge que:

1) El valor de y corresponde al nmero de electrones que fueron transferidos
desde el compuesto a oxidar, al O2 , tomando como base 1 C-mol. Por tanto
expresa el nmero de "electrones disponibles" por cada C-mol.
2) La cantidad de calor liberado por cada mol de electrones transferidos al oxgeno
(q/y), se mantiene prcticamente constante. Del anlisis de un gran nmero de
compuestos resulta un valor promedio de
qo = 27.5 k cal (mol electrones transferidos al O2)-1
De la conjuncin de ambos puntos resulta que el valor de y es una medida de la
energa contenida en un compuesto. As, por ejemplo, 1 C-mol de etanol brinda
ms energa que 1 C-mol de glucosa.
En general para calcular el grado de reduccin de un compuesto se plantea la
ecuacin de oxidacin del mismo a C02 y H2O, y el valor de y se obtiene
multiplicando por 4 el coeficiente estequiomtrico del O2 (ver tabla 4). Si el
compuesto contiene nitrgeno, deber especificarse cul ser el estado de
oxidacin final de ste. Por ejemplo, supongamos un compuesto dado por

CH aObNc, y deseamos calcular el valor de y con respecto al nivel de referencia

dado por C02, H2O y NH3 .
La ecuacin de oxidacin ser:

La ecuacin (7) es muy til ya que permite calcular y sin necesidad de plantear la
ecuacin de oxidacin. Debe quedar claro que tanto para el CO2, como el H2O y el
NH3 es y = 0 (no tienen electrones disponibles) por ser ste el nivel de referencia
elegido. Si en lugar de NH3 , hubisemos elegido N2 , se demuestra fcilmente que
para ese caso y = 4 + a - 2b. La eleccin del nivel de referencia es tan slo una
cuestin de conveniencia.
Con todos estos elementos estamos en condiciones de aplicar balances de
materia y energa a la "reaccin qumica" que representa al cultivo.
Para simplificar el tratamiento supondremos que la fuente de C y E no contiene
nitrgeno (es lo usual) y que la fuente de nitrgeno es una sal de amonio, por lo
que y estar dado por la ecuacin (7).
I Balance de Carbono:

Puesto que los rendimientos estn referidos a 1 C-mol de fuente de Carbono y

energa, resulta

II. Balance de grado de reduccin:

Los electrones disponibles a la izquierda y a la derecha de la reaccin debern ser

iguales, luego:

Debe recordarse que para el NH3 , H2O y C02 es y = 0. Adems el grado de

reduccin del O2 es -4.
Reordenando la ecuacin (9) queda:

representan la fraccin de energa (de la fuente de carbono y energa)

transferida a la biomasa, al producto y al oxgeno respectivamente. Puesto que por
cada mol de electrones transferidos al O2 se liberan qo = 27.5 k cal, el calor
producido estar dado por:
q = 4 b qo (k cal / C-mol fuente de C y E) (15)

De acuerdo con esto, e representa la fraccin de energa disipada como calor.

Mediante las ecuaciones (8) y (10) es posible analizar los resultados
experimentales y verificar si las determinaciones han sido correctas. Medidas
realizadas en el laboratorio debern encontrarse dentro de los siguientes
intervalos:

Cuando se tiene certeza en las determinaciones, es posible aplicar las ecuaciones

para calcular algn rendimiento que no ha sido medido, por ejemplo yp/s en base a
los dems.
Veremos seguidamente algunos ejemplos:
Ejemplo 1: Se cultiv la levadura Candida utilis en un medio conteniendo glucosa,
SO4(NH4) 2 y sales. La concentracin inicial de microorganismos fue de 0.53 g l -1
(Xo) y la glucosa 15.2 g l -1 (So ). Al cabo de 9.5 horas, se consumi totalmente la
glucosa (Sf = 0), se consumieron 0.123 mol de O2 l-1 , se produjeron 0.179 mol de
C02 l -1 y la biomasa alcanz un valor de 6.07 g l -1 (Xf). Se desea averiguar si,
adems de biomasa, se form algn producto.
Como no se dispone de datos relativos a la composicin elemental de C. utilis,se
supone que sta es cercana a la del "microorganismo promedio".

Del mismo modo se tiene que yco2/s = 0.354. Puesto que la suma de ambos
rendimientos es muy inferior a 1, es evidente que se ha formado algn producto
cuyo rendimiento ser:

Para aplicar la ecuacin (10) se requiere antes calcular el grado de reduccin de la

biomasa (y.) y de la glucosa (v s), para lo cual se emplea la ecuacin (7).

Adems el valor de b ser: b = 0.243 mol 02 . C - mol-1 Luego se calcula

Nuevamente la suma es inferior a 1 y de la ecuacin (10) resulta:

Este resultado confirma que se ha formado algn producto, pero adems se puede
estimar cul es el valor de yp .

Tratndose de una levadura es probable que el producto formado sea etanol, cuyo
gp es 6, y si bien el valor obtenido es inferior a ste, debe tenerse en cuenta que

para los clculos se emple la frmula mnima del "microorganismo promedio" y

no la de Candida utilis en particular.
Ejemplo 2: Calcular la cantidad de calor generado cuando se producen 100 g de
levadura para panificacin.
De acuerdo a la estequiometra vista en el Captulo 4, por cada 100 g de levadura
formada se consumen 3.1 mol O2 . Luego el calor generado en ste caso ser 3.1
x 4 x 27.5 = 342 k cal, valor muy cercano al dado por la ecuacin de Harrison.
Cintica de crecimiento

Debido a la naturaleza autocataltica del crecimiento microbiano, es lgico suponer

que la concentracin de microorganismos, X, influye en la velocidad con que
aumenta la poblacin, rx As:

En esta ecuacin, p es la velocidad especfica de crecimiento, la cual para un tipo

de microorganismo dado depende principalmente de la composicin y
concentracin del medio de cultivo, presencia de inhibidores, temperatura y pH.
Existen diversas expresiones para p: la ms difundida es la ecuacin de Monod,
que relaciona el valor de m con la concentracin de un componente del medio de
cultivo que est en defecto respecto de los requerimientos del microorganismo: el
sustrato limitante.

donde S es la concentracin de sustrato limitante, um es la velocidad de

crecimiento especfica mxima, y Ks se conoce como constante de saturacin. El
valor de Ks est inversamente relacionado con la afinidad del microorganismo por
el sustrato.
Cuando S Ks, m toma el valor de mm y rx slo depende de X.
En general Ks tiene valore muy bajos, del orden de los mg l -1 , por tanto
concentraciones relativamente bajas de S son suficientes para hacer que m=mm .

En promedio las bacterias poseen valores de mm cercanos a 0.9 h-1 , las levaduras
0.45 h-1 y los hongos filamentosos 0.25 h-1 ; de todos modos mm debe ser
determinado experimentalmente para cada caso en particular.
La presencia de inhibidores del crecimiento en el medio de cultivo causa
disminucin en el valor de p. La substancia inhibidora puede ser algn
componente del medio de cultivo o algn producto formado por los
microorganismos. El tipo de inhibicin, al igual que en cintica enzimtica, puede
ser competitiva o no competitiva. Para el primer caso:

siendo I la concentracin de inhibidor. El valor de K I est inversamente

relacionado con la afinidad del microorganismo por el inhibidor. En la inhibicin
competitiva, se modifica en valor de Ks . Puesto que a > 1 si existe inhibidor
(ecuacin (22)), resulta que la afinidad del microorganismo por el sustrato se ve
disminuda.
En la inhibicin no competitiva, es el valor de mm el que resulta afectado.
En ocasiones algn componente del medio de cultivo puede ser inhibidor del
crecimiento, sobre todo cuando se encuentra en concentraciones relativamente
elevadas. Esto es factible que ocurra con la fuente de carbono y energa por ser el
componente que se encuentra en mayor proporcin en los medios. Suele
emplearse la siguiente expresin para considerar ste efecto:

El hecho de que una concentracin de sutrato elevada pueda inhibir el

crecimiento, impone una restriccin a la concentracin de los medios de cultivo
que se pueden emplear en la prctica, y con esto a la concentracin final de
biomasa que se puede obtener. En el captulo 7 se ver cmo, empleando un
sistema de cultivo adecuado, es posible sortear esta dificultad.
Consumo de sustrato

Si reordenamos la ecuacin (1) y derivamos respecto del tiempo se obtiene:

o bien:

Introduciendo la ecuacin (18) en la (25):

Tambin puede expresarse la velocidad de consumo de sustrato como:

donde qs es la velocidad especfica de consumo de sustrato. Comparando las

ecuaciones (26) y (27) surge que

Si m=mm se tendr qs=qsm es decir que ambos parmetros estn directamente

relacionados.
Por lo expuesto hasta aqu es evidente que el crecimiento puede ser caracterizado
mediante tres parmetros: KS , mm e Yx/s. Estos dependen tanto del
microorganismo como del medio de cultivo empleado, por lo que su evaluacin
debe realizarse para cada caso en particular.
Mantenimiento celular

La ecuacin (25) establece que el consumo de sustrato slo es posible cuando

hay crecimiento, sin embargo cuando el sustrato considerado es la fuente de
carbono y energa, puede darse el caso en que el crecimiento es nulo (r x = 0) y el
consumo de sustrato no. A este consumo de sustrato que no redunda en aumento
de biomasa se lo asocia con el mantenimiento de funciones vitales tales como
recambio de material celular, mantenimiento de gradientes de concentracin y
movilidad.
Pirt ha propuesto la siguiente ecuacin para la velocidad de consumo de la fuente
de carbono y energa:

donde ms es el coeficiente de mantenimiento e Y'x/s es el rendimiento que se

obtendra si el mantenimiento fuese nulo. El valor de Y x/s es, oviamente, inferior al
de Y'x/s, la relacin entre ambos se obtiene dividiendo la ecuacin (29) por r x, e
introduciendo las ecuaciones (25) y (18).

De la ecuacin (30) surge claramente que cuando

Debe destacarse que Yx/s es el rendimiento observable, mientras que Y' x/s slo
puede ser evaluado indirectamente mediante la ecuacin (30), aspecto que se
discutir en el captulo 7.
Valores de ms de 0.01 a 0.04 gg h-1 son frecuentes de hallar, pero se incrementan
con la temperatura y con la presin osmtica del medio de cultivo. Por ejemplo
para Saccharomyces cerevisiae creciendo en anaerobiosis se encuentra un valor
de m 8=0.036 gg h-1 , mientras que es diez veces superior si el medio contiene
una concentracin de NaCl 1 M, lo cual da cuenta del trabajo osmtico que deben
realizar las clulas. De este modo el mantenimiento celular posee una implicancia
tecnolgica directa, ya que un proceso destinado a la produccin de biomasa debe
conducirse de modo tal que el valor de ms sea pequeo.
Requerimiento de oxgeno

En los microorganismos aerobios la obtencin de energa est ligada a la

presencia de oxgeno. En efecto, ste es aceptor final de los electrones
provenientes de la cadena de citocromos donde se genera abundante ATP
(adenosina trifosfato). Las molculas de ATP aportarn luego la energa necesaria
para las reacciones de sntesis con las que el organismo se "fabricar" a s mismo,
y la requerida para el mantenimiento celular.
Por analoga con la ecuacin (29) se puede expresar la velocidad de consumo de
oxgeno (r o2) como:

donde mo es el coeficiente de mantenimiento en base al O2 e Y'x/o es el

rendimiento, en base al O2 consumido, que se obtendra cuando mo = 0.
Dividiendo ambos miembros de la ecuacin anterior por x, se obtiene:

donde qo2 es la velocidad especfica de consumo de O2 . En un cultivo en medio

lquido los microorganismos utilizan substancialmente el O2 que est disuelto, y el
valor de qo2 depende de cual sea esta concentracin. Por analoga con la ecuacin
de Monod, y cuando el O2 es el sustrato limitante, se suele representar esta
dependencia como:

donde C es la concentracin de O2 disuelto, Ko es la constante de saturacin y

qo2m es la velocidad especfica mxima de consumo de O2 , la cual se obtiene
cuando C Ko.
En la prctica se utiliza principalmente el concepto de concentracin crtica de
oxgeno disuelto, Cc, entendindose por tal al valor por encima del cual qo2 es
independiente de la concentracin de O2 disuelto y por lo tanto el crecimiento no
est limitado por oxgeno. En estas condiciones el valor qo2 depende de cul sea
el valor se p, el cual ser funcin del sustrato que limita el crecimiento. Si la
concentracin de este es saturante, ser m=mm, y qo2=qo2m
Los valores de Cc para la mayora de los organismos estn en el orden de 0.1 a 1
mg l -1, valores relativamente bajos si se compara con el de la solubilidad del 0 2,
que a 30 C y 0.21 atmsferas en medios acuosos diludos es de 7.8 mg l -1 .
Esto podra conducir al error de suponer que no constituye un problema satisfacer
los requerimientos de O2 en los cultivos, pero el siguiente ejemplo demostrar todo
lo contrario. Supongamos que tenemos una concentracin celular de 10 g l -1
creciendo activamente en un medio de cultivo con un valor de p = 0.15 h -1 .
Suponiendo que mo = 2.6 mg g -1 h-1 , Yx/o=1 g g-1 y que inicialmente es C = 7.8 mg
l-1, calcular el tiempo transcurrido hasta que la concentracin de O 2 se hace crtica
e igual a 0.5 mg l-1 .
La velocidad de crecimiento ser (ec. 18)

Por tanto en escasos 17 segundos el crecimiento comenzar a estar limitado por

O2, y eventualmente llegar a detenerse cuando la concentracin sea nula, a
menos que sea repuesto continuamente y a una velocidad comparable a la de
consumo. Este aspecto es fundamental en el diseo de biorreactores destinados a
cultivos aerobios, ya que debern ser capaces de suministrar O2 a altas
velocidades a fin de satisfacer la demanda.
Efecto del pH y la temperatura sobre el crecimiento

Los microorganismos pueden crecer en una variada gama de pH que va desde pH

= 2 para los acidfilos hasta pH = 11 para alcalfilos. En general los
microorganismos que toleran pH cidos no toleran pH alcalinos y viceversa.
Independientemente del pH que pueda soportar un microorganismo, es importante
conocer cul es el pH ptimo para el crecimiento. En la fig. 11 est representada
en forma general la variacin de um con el pH para hongos y bacterias. De la
misma surge claramente que en general los hongos tienen un pH ptimo cercano
a 5 mientras que para bacterias se da alrededor de pH = 7; adems debido a la
forma "achatada" de las curvas, variaciones de 0.5 unidades de pH alrededor del
ptimo no tienen mayor influencia. Durante el crecimiento los microorganismos
modifican el pH del medio de cultivo, normalmente hacindolo disminuir; por tal

motivo es frecuente incluir en el medio substancias que acten como tampon

(buffer) a fin de evitar que el pH se aleje del ptimo.
El efecto de la temperatura sobre el crecimiento es complejo. Por un lado cada
reaccin qumica individual, de todas las que conforman el metabolismo, es
afectada por la temperatura, por lo que un incremento de sta resulta en una
mayor velocidad de reaccin. Esto se traduce en un aumento de pm con la
temperatura (ver Fig. 12).

Por otra parte, aumentos posteriores de temperatura inactivan las enzimas que
catalizan las reacciones, con lo que el valor de um decrece rpidamente. La
temperatura ptima resulta de la interaccin de estos dos efectos.
Como regla general, los microorganismos psicrofilos poseen temperatura ptima
entre 10 y 20 C, los mesfilos entre 30 y 40 C y, finalmente, los termfilos entre
50 y 60 C. La necesidad de mantener la temperatura de cultivo en el valor ptimo,
hace que los biorreactores (fermentadores) cuenten con dispositivos apropiados
para tal fin.
Lecturas recomendadas:

1. Energetics and kinetics in Biotechnology. J.A.Roels. Elsevier Biomedical Press,

1983.
2. Fermentation kinetics and modeling. C.G. Sinclair and B. Kristiansen Ed.: J.D.
Bu'Lock. Open University Press, 1987.
3. Principles of Microbe and Cell Cultivation. S.J.Pirt. Blackwel l Scientific
Publications,

1975.