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Cuestin1,tema3

Imaginaqueestsinvestigandolospasostempranosdelatranslocacinyprocesadodedela
protena secretada Prolactina. Y decides utilizar una aproximacin experimental similar a la
diseadaporDr.RapoportparaidentificarSec61acomolaprotenaquemediaeltransporte
de las protenas a travs de la membrana del retculo Endoplsmico (RE). Este abordaje te
permite controlar la longitud de las cadenas polipeptdicas nacientes de Prolactina que se
sintetizan. Cuando se traduce in vitro el mRNA de prolactina que carece del codn de
terminacin(Stop),lacadenapolipeptdicaresultantequedarunidaalribosomaporelltimo
codn del mRNA, permitiendo as la generacin de cadenas polipeptdicas de una longitud
determinadaunidasalribosoma.
Siguiendo tu diseo experimental has generado mRNAs de prolactina que codifican para
segmentosdelextremoNterminaldelaprotenadelongitudescrecientes.Cadaunodeestos
mRNAspuedesertraducidoinvitroporunextractocitoslicoquecontieneribosomas,tRNAs,
aminoaciltRNA sintetasas, GTP, y factores de iniciacin y elongacin. Cuando se aaden
aminocidos marcados radiactivamente, slo se produce el pptido codificado por el mRNA
quehasaadido.Despusdecompletarlatraduccin,cadamezcladereaccinseresuelvepor
electroforesis en geles de poliacrilamida en presencia de SDS y los pptidos radiactivos se
identificanmedianteunaautorradiografadelgel.

a) Elautorradiogramadeabajomuestralosresultadosdeunexperimentoenelquecada
reaccin de traduccin se ha llevado a cabo en presencia (+) o ausencia () de
membranasmicrosomales.Basndoteenlamovilidaddelospptidossintetizadosen
elgelyenlapresencia/ausenciademicrosomasenlareaccindetraduccin,deduce
lalongitudnecesariadelaprolactinaparaqueelpptidosealentreenellumendel
RE y sea cortado por la peptidasa de la seal. (Hay que tener en cuenta que las
preparacionesdemicrosomascontienenciertacantidaddeSRPunidadbilmentealas
membranas.)

b) Dadaesalongitudquehasdeterminadoanteriormente,qupuedesconcluirsobreel
estado(estados)conformacionaldelpptidonacientedeProlactinacuandoescortado
por la peptidasa seal? Las siguientes medidas puede que te sean tiles en tus
clculos:lasealdelaprolactinasecortatraselresiduo31;lalongituddelcanalenel
ribosoma ocupado por el polipptido naciente es de 150 A; la bicapa lipdica tiene
unos50Adeespesor;enpolipptidosestructuradosenahlice,laextensindecada
residuoesde1,5A,mientrasqueenpolipptidosextendidoscompletamenteesde3,5
A.
c) Sellevaacabounexperimentoidnticoaldescritoenelapartadoa,peroenestecaso
se aaden las preparaciones de membranas microsomales despus de que la
traduccin haya tenido lugar. En el anlisis de los resultados no se observa ningn
cambioenlamovilidaddelospolipptidos.Qupuedesconcluirsobrelaposibilidad
de que la prolactina pueda ser translocada al interior de los microsomas
postraduccionalmente?
d) En otro experimento, cada reaccin de traduccin se lleva a cabo en presencia de
microsomas. Entonces, se purifican los ribosomas unidos a los microsomas de los
ribosoma libres y las protenas solubles por centrifugacin. Para cada reaccin, la
fraccin total (T) y la de membrana (M) se resuelven por SDSPAGE en pocillos
contiguosdelgel.Basndoteenlascantidadesdepolipptidounidoalafraccionesde
membranaquesemuestranenelautorradiogramaabajo,deducelalongitudnecesaria
del polipptido naciente para que el complejo polipptidoribosoma pueda ser
reconocidosporlaSRPyunirsealasmembranasdelosmicrosomas.