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MEDIOS DE CULTIVO

Es un sistema importante que nos ayuda a la identificacin de microorganismos, a observar su


crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El material
alimenticio en el que crecen los microorganismos es el medio de cultivo y el crecimiento de los
microorganismos es el cultivo.
Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial, este debe
reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presin de
oxgeno, pH. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento
necesarios y debe estar exento de todo microorganismo contaminante.

CLASIFICACIN DE MEDIOS DE CULTIVO


DE ACUERDO A SU ESTADO FSICO:
Medios de cultivo: Slido y Lquido
Una forma muy til de poder aislar, identificar y conservar los microorganismos es mediante
el uso de medios de cultivo, inicialmente ideados por Pasteur (que como ya sabemos se
considera el padre de la microbiologa), quien se dio cuenta que los microorganismos podan
crecer en soluciones que tuvieran azcar y una fuente de nitrgeno.
La forma ms sencilla de clasificar los medios de cultivo es por su consistencia, entonces
aparecen los medios de cultivo slidos y los medios de cultivo lquidos o tambin llamados
caldos. En ambos medios debe haber una buena cantidad de nutrientes que faciliten el
crecimiento bacteriano, la diferencia radica en la presencia de una sustancia que se llama
Agar o Agar-Agar y que es la encargada de darle la solidez y consistencia al medio. Esta
sustancia proviene, principalmente, de un alga llamada Gelidium, aunque muchos otros
gneros pueden servir como fuente de este polisacrido (es decir, un azcar grande
formado por la unin de azcares pequeos). Para obtener este polisacrido del alga, se
toman sus semillas, se lavan, se secan, se realizan procesos de extraccin, filtracin,
purificacin y desecacin para que queden hojuelas o polvo y luego si adicionarla al medio
de cultivo.
Fue, Robert Koch, mdico alemn dedicado al estudio de los microorganismos y considerado
uno de los autores de la teora microbiana, quien empez a cultivar y aislar
microorganismos. Koch, buscando mejorar la tcnica utilizada hasta ese momento, decidi
solidificar los medios de cultivo aadindoles gelatina. Sin embargo, y a sugerencia de una
ayudante, introdujo el agar.
La ventaja fundamental de usar un medio de cultivo lquido, es que permite que crezcan
bacterias que se encuentran en muy poca cantidad, es decir, cuya concentracin es muy
baja en la muestra que estemos analizando. Para el caso del medio de cultivo slido, la

ventaja radica en que permite detectar los diferentes tipos de bacterias que puedan
encontrarse en una sola muestra, entonces el usar uno u otro medio de cultivo depender
de lo que busquemos o queramos: aislar una bacteria que se encuentre en cantidades muy
pequeas (medio lquido) o todas las bacterias que puedan haber en una muestra (medio
slido)

Solido
Liquido
Medios semislidos
Se preparan a partir de los medios lquidos, agregando a stos un agente solidificante en una
proporcin menor que para preparar medios slidos. Uno de sus usos es la investigacin de
la movilidad de las bacterias.

SEGN SU UTILIZACIN:
1) Medios comunes: Poseen componentes mnimos para
que pueda producirse el crecimiento de bacterias que no
necesiten requerimientos especiales. El medio ms
conocido de este grupo es el agar nutritivo o agar
comn, que resulta de la adicin de agar al caldo
nutritivo.

2) Medios de enriquecimiento: Son aquellos que,


adems de sustancias nutritivas normales, incorporan
una serie de factores indispensables para el
crecimiento de microorganismos exigentes. Este
enriquecimiento se hace por adicin de sangre u otros
productos biolgicos (sangre, suero, leche, huevo, bilis,
etc.) que aportan dichos factores.

3) Medios selectivos: Son medios utilizados para favorecer


el crecimiento de ciertas bacterias contenidas en una
poblacin polimicrobiana. El fundamento de estos medios
consiste en facilitar nutricionalmente el crecimiento de una
poblacin microbiana especfica. Un ejemplo de medio
selectivo es el caldo selenito, que se utiliza para favorecer el
crecimiento de salmonellas y frenar el del resto de
enterobacterias.

4) Medios inhibidores: Cuando las sustancias aadidas


a un medio selectivo impiden el crecimiento de una
poblacin microbiana, se denomina inhibidor. Los
medios inhibidores se consiguen habitualmente por
adicin de sustancias antimicrobianas o de cualquier
otra que inhiba completamente el desarrollo de una
poblacin determinada. Un medio inhibidor es el
MacConkey que permite el crecimiento de los
grmenes Gram negativos e impide el crecimiento de
los Gram positivos.
5) Medios diferenciales: Se utilizan para poner en
evidencia caractersticas bioqumicas que ayuden a
diferenciar gneros o especies. La adicin de un azcar
fermentable o un sustrato metabolizable se utilizan para
este fin. El medio MacConkey es un medio diferencial
porque permite distinguir los grmenes que fermentan la
lactosa de aquellos que no lo hacen.

6) Medios de identificacin: Son los destinados


a comprobar alguna cualidad especfica que
puede servirnos para reconocer la identidad de
un microorganismo. Estos medios han de
poseer los elementos necesarios para asegurar
el crecimiento de los microorganismos, el

sustrato especfico que vaya a ser metabolizado y el indicador que nos muestre el
resultado. El agar Kligler, el medio de Simmons y en general, cualquier medio al que se le
haya aadido un elemento diferencial de un microorganismo, son medios utilizados en
identificacin.
7) Medios de multiplicacin: Sirven para obtener una gran
cantidad de clulas a partir de un microorganismo ya
aislado. Se emplean en la obtencin de vacunas, en la
investigacin y en la industria. Los medios ms adecuados
para la multiplicacin suelen ser lquidos. El caldo-infusin
cerebro-corazn (BHI), es medios.

8) Medios de conservacin: Se utilizan para conservar una


cepa que, por diversas razones nos interese mantener.
Fundamentalmente se utilizan como controles de calidad
de las pruebas y reactivos utilizados en el Laboratorio de
Microbiologa. En el laboratorio se pueden conservar las
cepas de tres formas:
a) haciendo pases peridicos de placa a placa
b) mediante liofilizacin de una suspensin
bacteriana
c) congelando las cepas en leche descremada
estril al 0,1%.
9) Medios de transporte: Se usan para el transporte de muestras
clnicas que no pueden sembrarse inmediatamente. Su utilizacin
debe hacerse introduciendo la torunda con la que se obtuvo la
muestra en el interior del medio (generalmente en un tubo). Son
ejemplos tpicos de este grupo los medios de Stuart Amies, CaryBlair, etc.

DE ACUERDO A SU COMPOSICIN:
Segn las sustancias que entren a formar parte en su composicin,
los medios de cultivo pueden ser clasificados en:
1) Medios complejos: se preparan a partir de tejidos animales, y
ms raramente de vegetales. Su composicin no es exactamente
definida, y por consiguiente no es rigurosamente constante. Esto

puede tener ciertos inconvenientes en condiciones experimentales, donde la


reproductibilidad no podr ser exacta. En la prctica corriente estos medios dan
excelentes resultados y son los ms empleados.
2) Medios sintticos: Son aquellos que contienen en su
composicin exclusivamente sustancias qumicas conocidas
y disueltas en agua destilada en proporciones
determinadas, resultando un medio de composicin
perfectamente definida.

3) Medios semi-sintticos: El gran nmero de


factores de crecimiento exigidos para ciertos
grmenes hace que la fabricacin de un medio
sinttico para estos grmenes sea imposible o
demasiado cara. En este caso se aportan los factores
de crecimiento bajo la forma de un extracto
orgnico complejo (extracto de levadura, extracto
de tejidos, etc.).Ciertos grmenes no crecen en
ningn medio por muy enriquecido que est ste,
hacindolo exclusivamente en clulas vivas con unas
caractersticas determinadas. Ejemplos de este tipo son, aparte de los virus, las
Chlamydias, Rickettsias, etc.
SEGN SU ORIGEN:
a) NATURALES: son los preparados a partir de
sustancias naturales de origen animal o vegetal como
ser extractos de tejidos o infusiones y cuya composicin
qumica no se conoce exactamente.

b) SINTTICOS: son los medios que contienen una composicin qumica definida cuali y
cuantitativamente. Se utilizan para obtener resultados reproducibles.
c) SEMI-SINTTICOS: son los sintticos a los que se les aaden factores de crecimiento
bajo una forma de un extracto orgnico complejo, como por ejemplo extracto de
levadura.

PREPARACIN Y ESTERILIZACIN DE MEDIOS DE CULTIVO

Leer las indicaciones del frasco a preparar.


Realizar los clculos dependiendo la cantidad de medio que se vaya
a preparar
Pesar el medio de cultivo en polvo.
Adicionar el polvo en un matraz seco
Agregar el volumen de agua destilada para reconstituir el polvo
Homogenizar para mezclar el polvo con el agua
En un soporte colocar una tela de asbesto y colocar el matraz
encima
Calentar a temperatura de ebullicin por un minuto agitando
frecuentemente el matraz, para asegurar la completa disolucin del
polvo en el agua.
Una vez preparado el medio este se debe esterilizar lo antes posible
para evitar el crecimiento de microorganismos.
Tapar el matraz con tapn de algodn envuelto en gasa y cubrir con
papel de estraza si se trata de medio solido en placa.
Si se trata de medio liquido en tubo distribuirlo en la cantidad
indicada para cada tubo.
Llevar a esterilizar en el autoclave ( 121 C , 15 min).
Despus de la esterilizacin enfriar el matraz con agua corriente
a una temperatura entre 45 y 50.
Verter en cajas Petri y esperar a que se solidifiquen.
POSIBLES CAUSAS DE ERROR
ANORMALIDAD

FALLA EN
MEDIO

LA

pH incorrecto

SOLIDIFICACION

POSIBLE CAUSA
DEL

SOBRECALENTAMIENTO DEL MEDIO


DURANTE LA PREPARACION
PESO INCORRECTO DEL AGAR
AGAR MAL DISUELTO O
INCOMPLETA MEZCLA DE LOS
INGREDIENTES

POBRE CALIDAD DE AGUA

CALOR ANORMAL

POBRE CALIDAD DEL MEDIO


DESHIDRATADO
pH MEDIDO INCORRECTAMENTE
CONTAMINACION EXTERNA CON
QUIMICOS
SOBRECALENTAMIENTO DEL MEDIO
DURANTE LA PREPARACION
pH INCORRECTO
CONTAMINACION EXTERNA
POBRE CALIDAD DEL AGUA O DEL
MEDIO DESHIDRATADO.

EJEMPLOS DE MEDIOS DE CULTIVO MS USADOS:


Agar MacConkey:
Es un medio de cultivo especfico para bacterias Gram
negativas y cepas que fermenten la lactosa
Agar sangre:
Es una combinacin de un agar base con el agregado de 5 %
de sangre de oveja tambin puede usarse sangre humana. El
agar sangre aporta muchos factores de enriquecimiento. Se
usa tambin para ver la capacidad hemoltica de los
microorganismos. (mata glbulos rojos).
Agar chocolate:
Es un medio de cultivo enriquecido, y es una forma modificada
del agar sangre Este se quema aproximadamente 56C
calentado lento para eliminar los cidos nucleicos, y este se usa
para cultivar una bacteria respiratoria (q es una especie de
gripe) que ocupa el proceso de la lisis celular que es la rotura
de la membrana celular.
Agar SS (SHIGELLA- SALMONELLA):
Es un Medio de cultivo selectivo utilizado para el aislamiento de
Salmonella y de algunas especies de Shigella. A partir de heces, alimentos y
otros materiales en los cuales se sospeche su presencia.
Agar verde brillante:
Es un Medio de enriquecimiento altamente selectivo para el
aislamiento de Salmonella.

Agar nutritivo: El agar nutritivo es usado como medio de cultivo


para el crecimiento de bacterias y hongos, q necesitan de
muchos nutrientes pero no para virus (aunque los virus
bacterifagos crecen frecuentemente en bacterias cultivadas
en agar)