Validación de Métodos Cualitativos

UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA
FACULTAD DE QUMICA FARMACUTICA

DEPARTAMENTO DE FARMACIA
LABORATORIO DE BIOQUMICA Y TOXICOLOGA
5-324
MANUAL DE LABORATORIO DE TOXICOLOGA
PRACTICA # 4 _ VALIDACIN DE MTODOS CUALITATIVOS
ELABORADO POR:
Andrs Felipa Zapata
Betancur
REVISADO:
Diana Patricia Cardona Snchez
APROBADO POR:
Gloria Ins Jaramillo
VALIDACIN DE MTODOS CUALITATIVOS

Objeto
Identificar las caractersticas y principios de los mtodos de anlisis cuya respuesta es la
presencia o ausencia de la sustancia de inters. Evaluando su adecuabilidad en presencia
o ausencia de otros analitos que pueden reaccionar y originar resultados falsos positivos o
falsos negativos segn el caso.
Objetivos Especficos
Aplicar una estrategia metodolgica para validar un mtodo analtico no cuantitativo
que puede ser utilizado en el anlisis de un tipo de sustancias especficas, en este caso
fenotiazinas.
Aplicar una metodologa de anlisis cualitativo para determinar la presencia y/o
ausencia de Fenotiazinas.
Determinar la sensibilidad, especificidad, confiabilidad diagnstica y lmite de
deteccin del mtodo utilizado para identificar fenotiazinas en un rango determinado
de concentraciones.
Establecer si el mtodo tiene una buena adecuabilidad de acuerdo a los parmetros
anteriormente calculados para cada uno de ellos.
Fecha Elab: 03/08/2011
Feche Rev: 10/09/2013
C:\Documents and Settings\Adres Felipe Zapata\Mis documentos\Dropbox\Laboratorio\Toxicologa
Versin 2
Pgina 1 de 5
5-324
ELABORADO POR:
Andrs Felipa Zapata
Betancur
REVISADO:
APROBADO POR:
Definiciones
Adecuabilidad: Proceso que consiste en corroborar que los componentes,
reactivos o equipos incorporados en la generacin de datos, funcionen de forma
apropiada.
Confiabilidad Diagnstica: Probabilidad de que en una serie de muestras a doble
ciego, se detecte correctamente el metabolito, reactivo o analito de inters,
debido a que ocurri una adecuada reaccin o interaccin de los reactivos,
generando una respuesta analtica positiva.
Evidencia: Interpretacin visible e igual para todos.
Especificidad: Es la probabilidad de que la respuesta analtica resulte negativa
debido a que en la muestra estudiada no existe fsicamente el analito de inters
diagnstico, o se encuentra por debajo del lmite de deteccin.
Resultado Positivo: Respuesta analtica generada cuando la matriz de estudio
contiene una cantidad mnima detectable del analito de inters.
Resultado Negativo: Respuesta analtica no generada cuando se considera que no
esta presente en la matriz de estudio el analito de inters o se encuentra en una
cantidad inferior a la mnima detectable.
Selectividad: Extensin en la que un mtodo puede utilizarse para determinar
analitos particulares en muestras o matrices sin interferencias de otros
componentes con un comportamiento similar.
Sensibilidad: Es la probabilidad de que la respuesta analtica resulte positiva
cuando en la muestra estudiada est realmente presente el analito de inters
diagnstico, en los lmites de deteccin o por encima de ste.
Validacin: Proceso mediante el cual a travs de evidencia documentada se
demuestra la adecuabilidad de una metodologa analtica que puede ser Cualitativa
o Cuantitativa.
Validacin de Mtodo no Cuantitativo: Procedimiento que consiste en aplicar una
prueba diagnstico en un mismo nmero de muestras o testigos verdaderos
positivos, que presenten la caracterstica de referencia exacta a estudiar y en
testigos verdaderos negativos ausentes de la caracterstica.
Feche Rev: 10/09/2013
Versin 2
Pgina 2 de 5
5-324
ELABORADO POR:
Andrs Felipa Zapata
Betancur
REVISADO:
APROBADO POR:
Generalidades
Obtencin de pruebas convenientemente documentadas
Las pruebas convenientemente documentadas son evidencia de que un mtodo de
fabricacin o anlisis es lo suficientemente fiable como para producir el resultado
previsto. Para ello es muy importante seguir las etapas de un proceso de validacin y
considerar los parmetros o atributos de calidad de acuerdo al mtodo de anlisis:
cualitativo o cuantitativo a utilizar. Por tanto, a continuacin se describe un proceso
general de validacin y los parmetros a evaluar en la metodologa analtica no
cuantitativa que aplicaremos en esta prctica.
*USP: Farmacopea de Estados Unidos

*ICH: Conferencia internacional de armonizacin
Parmetros de calidad para mtodos analticos cualitativos
o
o
o
o
o
o
Adecuabilidad
Selectividad
Especificidad y sensibilidad
Valores predictivos: positivos y negativos
Confiabilidad Diagnstica
Lmite de deteccin
Feche Rev: 10/09/2013
Versin 2
Pgina 3 de 5
5-324
ELABORADO POR:
Andrs Felipa Zapata
Betancur
REVISADO:
APROBADO POR:
Materiales
Placas de Vidrio 20 x 20
Set de muestras
Contraste para placas
Reactivos
Soluciones de 2 muestras de fenotiazinas en diferentes rangos de concentracin de
acuerdo a cada set de muestras.
Reactivo FPN (Reactivo General para Fenotiazinas):
o FeCl3 5 % (w/v)
o HClO7 20%
o HNO3 50%(v/v).
o Se mezclan en una relacin de 1 : 9 : 10
Nota: Cada semestre se utilizarn 2 fenotiazinas diferentes, por tanto, el color
considerado positivo para cada metodologa deber ser indicado al inicio de cada prctica.
Seccin Experimental
Para la realizacin de la prctica y validar el mtodo analtico para la determinacin de
la fenotiazina indicada por el profesor, por medio de la reaccin con el reactivo FPN,
proceder de la siguiente forma:
Ubicar la placa de vidrio de 20 x 20 sobre el contraste.
Tomar una gota de cada una de las muestras (viales) contenidos en el set. Cada vial
contiene aproximadamente 1 ml de muestra desconocida por el analista.
Adicionar una gota del reactivo FPN a la gota de muestra en la placa de vidrio.
Este procedimiento se debe realizar muestra por muestra, no se deben dispensar
todas las muestras simultneamente.
Observar el comportamiento de la muestra al reaccionar con el reactivo.
Feche Rev: 10/09/2013
Versin 2
Pgina 4 de 5
5-324
ELABORADO POR:
Andrs Felipa Zapata
Betancur
REVISADO:
APROBADO POR:
Registrar el resultado como positivo (+) o negativo (-), para la presencia de la

fenotiazina de acuerdo a las indicaciones del profesor.
Recomendaciones
Tener presente que cada muestra posee su propia pipeta para su dispensacin,
para no contaminar las mismas y alterar los resultados.
Cada grupo de trabajo debe realizar como mnimo este procedimiento con 7 sets
diferentes la metodologa.
Cuando finalicen la totalidad de las pruebas, cada grupo de trabajo debe de
entregar un pre-informe con los resultados para cada muestra.
Al final se les informara las concentraciones de cada una de las muestras, con el fin
de que los estudiantes realicen un comparativo con sus resultados y obtengan el
nmero de resultados Verdaderos positivos, Falsos positivos, Verdaderos negativos
y Falsos negativos, datos con los cuales elaboraran un cuadro 2 x 2 para el informe
final.
Bibliografa
Medina MM, Torres AH, Rodrguez AG. Normas de Trabajo en el laboratorio de
toxicologa. Notas del curso. Laboratorio de Toxicologa. Universidad de Antioquia:
Medelln, Colombia.
Trullols E, Ruisnchez I,Rius FX. Validation of qualitative analytical methods. TrAC
Trends in Analytical Chemistry. 2004 Feb; 23(2): 137-145.
Ellison SL,Fearn T. Characterising the performance of qualitative analytical
methods: Statistics and terminology. TrAC Trends in Analytical Chemistry. 2005
Jun; 24 (6): 468-476.
Snchez JF, Tejada ME, Koch W, Mora JLA, Marroqun R, Hernndez V, et al.
Validacin de mtodos analticos no cuantitativos. Revista Mxicana de Ciencias
Farmacuticas. 2010 Abr-Jun; 41 (2): 15-24.
Feche Rev: 10/09/2013
Versin 2
Pgina 5 de 5

Validación de Métodos Cualitativos

Загружено:

Сведения о документе

Авторское право

Доступные форматы

Поделиться этим документом

Поделиться или встроить документ

Параметры публикации

Этот документ был вам полезен?

Это неприемлемый материал?

Авторское право:

Доступные форматы

Validación de Métodos Cualitativos

Загружено:

Авторское право:

Доступные форматы

UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA

FACULTAD DE QUMICA FARMACUTICA

VALIDACIN DE MTODOS CUALITATIVOS

Fecha Elab: 03/08/2011

Feche Rev: 10/09/2013

C:\Documents and Settings\Adres Felipe Zapata\Mis documentos\Dropbox\Laboratorio\Toxicologa

Fecha Elab: 03/08/2011

Feche Rev: 10/09/2013

C:\Documents and Settings\Adres Felipe Zapata\Mis documentos\Dropbox\Laboratorio\Toxicologa

*USP: Farmacopea de Estados Unidos

Fecha Elab: 03/08/2011

Feche Rev: 10/09/2013

C:\Documents and Settings\Adres Felipe Zapata\Mis documentos\Dropbox\Laboratorio\Toxicologa

Fecha Elab: 03/08/2011

Feche Rev: 10/09/2013

C:\Documents and Settings\Adres Felipe Zapata\Mis documentos\Dropbox\Laboratorio\Toxicologa

Registrar el resultado como positivo (+) o negativo (-), para la presencia de la

Fecha Elab: 03/08/2011

Feche Rev: 10/09/2013

C:\Documents and Settings\Adres Felipe Zapata\Mis documentos\Dropbox\Laboratorio\Toxicologa

Вам также может понравиться