2012NANT2042 - KOUAME - These PDF

THESE UNIQUE
de LUNIVERSIT DE NANTES et de LUNIVERSITE DE COCODY-ABIDJAN
COLE DOCTORALE NANTAISE 3MPL
Anne 2012
N attribu par la bibliothque
Valorisation de quatre plantes mdicinales

ivoiriennes : tude phytochimique
THSE DE DOCTORAT
Discipline : Chimie
Spcialit : Chimie organique
Prsente et soutenue publiquement par
Franois-Prvost Bi Koffi KOUAME

Le 12 octobre 2012, devant le jury ci-dessous
M. Jol BOUSTIE
Professeur Universit de Rennes
Mme. Isabelle BILLAUT
Matre de confrences (HDR) Universit ParisSud, Orsay
Directeur de thse
M. Gustave BEDI
Co-directeur de thse
Invit
Invite (Encadrant)
M. Richard ROBINS
M. Jacques LEBRETON
Mme. Illa TEA
Matre de confrences(CAMES) Ecole Normale

Suprieure, Abidjan
DR1 au CNRS Universit de Nantes
Professeur Universit de Nantes
Matre de confrences Universit de Nantes
Rapporteurs
Remerciements
Ce travail a t ralis en cotutelle au sein des Laboratoires de Chimie Organique Biologique
(LCOB) de lUniversit de Cocody-Abidjan et de Chimie Et Interdisciplinarit : Synthse,
Analyse, Modlisation (CEISAM, LUNAM-CNRS UMR6230) de lUniversit de Nantes.
Je remercie Messieurs Zana Flix TONZIBO et Bruno BUJOLI, respectivement directeur du
Laboratoire Chimie Organique Biologique et directeur du laboratoire CEISAM qui ont bien
voulu maccepter dans leur quipe pour raliser ce travail.
Je remercie trs cordialement les responsables de la coopration universitaire francoivoirienne aussi bien au niveau de lInstitut Franais de Coopration quau niveau du
ministre de lenseignement suprieur et de la recherche scientifique de la Cte dIvoire pour
avoir financ mes sjours Nantes durant mon parcours de thse.
Je remercie Monsieur Jacques LEBRETON Professeur lUniversit de Nantes, qui a bien
voulu accepter de participer au jury de cette thse. Pour le temps quil y a consacr, je
voudrais quil reoive mes remerciements.
Ensuite quil me soit permis dadresser mes remerciements Monsieur Jol BOUSTIE,
Professeur lUniversit de Rennes, et Madame Isabelle BILLAULT, Matre de confrences
(HDR) lUniversit Paris-Sud, Orsay pour avoir bien voulu faire partie du jury et tant que
rapporteur, quils reoivent ici mes remerciements sincres.
Je tiens exprimer particulirement ma profonde gratitude et ma sincre reconnaissance
Monsieur Gustave BEDI, Matre de Confrences membre du Conseil Africain et Malgache de
lEnseignement Suprieure (CAMES), directeur de cette thse. Lorigine de cette belle
symphonie lui est imputable car depuis ma maitrise en chimie organique, il ma inculqu le
virus de la recherche. Ce qui ma valu un splendide mmoire de DEA pour lequel son savoirfaire ma beaucoup galvanis. Grace lui, la collaboration a t noue avec le laboratoire
CEISAM pour permettre ce sujet de thse dbut en Cte dIvoire, de sachever Nantes. Je
voudrais quil accepte ici mes remerciements, pour ses prcieux conseils, son aide inestimable
et pour son optimisme contagieux qui me fascine de tout temps.
Je noublie pas Monsieur Yao Thomas NGUESSAN, Professeur titulaire, ancien membre de
LCOB, qui a eu le flair dautoriser Monsieur Gustave BEDI pour conduire la direction de
cette thse et aussi pour tous ses conseils lors de ma formation doctorale.
Je tiens remercier sincrement et sans rserve Monsieur Richard ROBINS, Directeur de
Recherche au CNRS de la Facult des Sciences et Technique de Nantes, co-directeur de cette
thse, pour mavoir bien accueilli dans son quipe, pour les discussions fructueuses que jai
eues avec lui et pour sa gentillesse et sa modestie ingales lors de lexcution de la dernire
partie de cette thse Nantes.
Que ma profonde gratitude soit exprime ici Madame Illa TEA, Matre de Confrences la
Facult des Sciences et Technique de Nantes, mon encadrante de Nantes, pour mavoir fait
partager ses nombreuses connaissances. Elle ma souvent donn le courage davancer dans
mes recherches, notamment en me remotivant lorsque jen prouvais le besoin, merci chre
matre pour votre apport inestimable.
Merci Madame Isabelle BILLAULT et Monsieur An ADJOU qui ont accept de juger ce
travail tout au long de son excution. Je les remercie pour tout ce temps quils y ont consacr.
Mes vifs remerciements sadressent Mesdames Julie HEMEZ et Virginie SILVESTRE et
Monsieur Denis LOQUET du Laboratoire CEISAM, pour leur enthousiasme et avec qui jai
eu le plaisir de travailler.
Je remercie les membres du Laboratoire LCOB pour lamiti quils mont tmoigne tout au
long de ces annes de thse. Mes remerciements sadressent galement aux membres de
lquipe EBSI (lucidation de Biosynthse et Spectromtries Isotopiques) du laboratoire
CEISAM pour leur accueil et leur soutien
Merci tous les thsards et stagiaires que jai eu la chance de ctoyer au laboratoire au cours
de ces trois annes : Estelle, Julie, Chama, Alexis, Didier, Kevin, David, Hubert, Ugo,
Maxime, Meerakhan, Yakn, Mamadou, Kasia lUniversit de Nantes et Landry, Djeda,
Faustin, Zana, Diane, Florence, Akpa de lUniversit de Cocody, merci pour votre bonne
humeur, votre sympathie.
Merci Monsieur Gbazik Gagouehi Alexis dit Posner, indicateur botanique habitant du
village de BOBIA, dans le centre Ouest de la Cote dIvoire, pour sa collaboration franche et
dsintresse lors de la rcolte des plantes de cette tude.
Merci tous mes amis pour tous les moments de franche insouciance et de douce gaiet quil
ma t donn de partager avec eux entre les lignes de cette thse.
Enfin, je ne saurais terminer cette liste sans adresser un remerciement particulier Monsieur
Frdrique DUGUE et ceux qui mont soutenu dans lombre, mes parents, mes surs et mes
frres, sans qui ce travail naurait jamais pu voir le jour. Je leur ddie ce travail en tmoignage
de ma profonde affection pour toute la patience et les sacrifices quils ont consentis pour moi
et dont je serai jamais redevable, et davoir port ce travail terme reprsente pour moi
aujourdhui la plus belle des rcompenses.
Que tous ceux qui mont aid de prs ou de loin dans llaboration de ce travail trouvent ici
lexpression de ma sincre gratitude.
II
Abrviations et symboles
Les abrviations ont gnralement t indiques sous la forme la plus couramment utilise
dans la littrature, elles sont donc souvent issues de terminologie anglo-saxonne.
AcOEt
actate dthyle
ADN
Acide dsoxyribonuclique
AINS
Anti-inflammatoire non strodien
AIS
Anti-inflammatoire strodien
AMP
Adnosine monophosphate
ATP
Adnosine triphosphate
Bcl-2
B cell lymphoma 2
Bcl-xL
B cell lymphoma-extra large
BF3-Et2O
Ethoxyethane - trifluoroborane (1:1)
C18 ou RP-18
silice greffe
CC
Chromatographie sur Colonne ouverte
CC50
Concentration cytotoxique mdiane
CCM
Chromatographie sur Couche Mince
CE50
Concentration Efficace mdiane
Chrom1, Chrom2, etc Dsignation des composs isols de Chromolaena odorata

Concentration Inhibitrice 50%
CI50
Concentration ncessaire pour avoir 50% dinhibition de croissance
CL50 ou DL50
Concentration Ltale mdiane
CMI
Concentration Minimale Inhibitrice
COSY
COrrelated SpectroscopY
COX
Cyclooxygnase
dplacement chimique du carbone.
dplacement chimique du proton.
Doublet
III
Da
Dalton (unit de masse molculaire)
dd
doublet ddoubl
ddd
doublet ddoubl ddoubl
DE50
Dose Efficace qui induit la moiti de leffet maximal
DEPT
Distortionless Enhancement by Polarization Transfer
DHB
Acide dihydroxybenzoque
DMEM
Dubelccos Modified Eagles Medium
DMSO
dimthyl sulfoxyde
DMSO-d6
dimthyl sulfoxyde deutr.
dt
doublet dtripl
EDL
Equivalent de Double Liaison
ESI
ionisation par electrospray (ElectroSpray Ionization)
FACS
Fluorescence Activated Cells Sorter
FAS
Fatty Acid Synthase
FL2-H
Histogram of the fluorescence 2
FSC-H
Forward Scatter Histogram
5-FU
5-fluorouracile
GC
chromatographie en phase gazeuse (Gaz Chromatography)
GC-SM
chromatographie en phase gazeuse couple la spectromtrie de masse

(Gaz Chromatography-Mass Spectrometry)
Hex
Hexane
HIV
Virus de l'immunodficience humaine (Human Immunodeficiency Virus)
HMBC
Heteronuclear Multiple Bond Correlation.
HMQC
Heteronuclear Multiple Quantum Coherence
HPLC
chromatographie liquide haute performance (High Performance Liquid

Chromatography)
HR
Haute resolution (High Resolution)
HSQC
Heteronuclear Single Quantum Coherence
Hz
Hertz
IV
IC ou CI
ionisation chimique (Chemical Ionisation)
IE ou EI
ionisation par impact lectronique (Electron Impact ionization)
IR
Infra-Rouge
constante de couplage
KI
indice de Kovats (Kovats Indices)
LDL
Lipoprotine de basse densit (Low Density Lipoprotein)
Lep1, Lep2, etc
Dsignation des composs isols de Leptoderris fasciculata
m/z
rapport masse/charge atomique.
Mor1, Mor2, etc
Dsignation des composs isols de Morinda lucida
MS
spectromtrie de masse (Mass Spectroscopy)
NIST
Base de donnes (National Institute of Standards and Technology)
NOE
Nuclear Overhauser Effect
NOESY
Nuclear Overhauser Enhancement Spectroscopy
OMS
Organisation mondiale de la sant
PBS
Phosphate Buffer Salin
PE
Phycorythrine
PEG 4000
Polythylne glycol 4000
ppm
partie par millions.
PSM
Poste de scurit microbiologique
q.s.p
quantit suffisante pour
RI
Indice de rfraction (Refractive Index)
RMN
Rsonance Magntique Nuclaire
RMN 1D, 2D
RMN une ou deux dimensions
RMN-1H
Rsonance magntique nuclaire du proton
RMN-13C
Rsonance magntique nuclaire du carbone
ROS ou ERO
Espces ractives de loxygne (Reactive Oxygen Species)
rpm
Rotations par minute
Singulet
SSC-H
Side Scatter histogram
SVF
Srum de veau ftal
Syn
Synonyme
THF
Ttrahydrofurane
Tol
Toluene
uma
Unit de masse atomique
UV
Ultra-violet
VI
Sommaire
REMERCIEMENTS
ABREVIATIONS ET SYMBOLES
I
III
INTRODUCTION
PARTIE 1 : SELECTION DES PLANTES DE LETUDE
CRITERES DE SELECTION DES PLANTES ___________________________________ 3
1.1
UTILISATION DES PLANTES EN MEDECINE TRADITIONNELLE.......................................... 3
1.2
LES APPORTS DE LA LITTERATURE................................................................................. 4
OBJECTIFS DE LETUDE _______________________________________________ 5
2.1
OBJECTIFS SCIENTIFIQUES ............................................................................................. 5
2.2
OBJECTIFS SOCIO-ECONOMIQUES .................................................................................. 5
PARTIE 2 : SYNTHESE BIBLIOGRAPHIQUE
1
PRESENTATION DE CHROMOLAENA ODORATA (L.) R. M. KING & H. ROBINSON
(ASTERACEAE) _____________________________________________________________ 6
1.1
GENERALITE ................................................................................................................. 6
1.1.1
Rpartition gographique
1.1.2
Origine
1.1.3
Intrusion et invasion en Afrique
1.2
DESCRIPTION................................................................................................................. 8
1.3
CARACTERISTIQUES BOTANIQUES ................................................................................. 8
1.4
UTILISATIONS TRADITIONNELLES .................................................................................. 8
1.5
METABOLITES SECONDAIRES SIGNALES DE CHROMOLAENA ODORATA ........................... 9

1.5.1
Mtabolites secondaires volatils et activits biologiques
1.5.2
Mtabolites secondaires non volatils et activits biologiques
9
10
PRESENTATION DE LEPTODERRIS FASCICULATA (BENTH.) DUNN (FABACEAE) ___ 15
2.1
REPARTITION GEOGRAPHIQUE ..................................................................................... 15
2.2
DESCRIPTION............................................................................................................... 15
2.3
CARACTERISTIQUES BOTANIQUES ............................................................................... 16
Sommaire
2.4
UTILISATIONS TRADITIONNELLES ................................................................................ 16
2.5
METABOLITES SECONDAIRES SIGNALES DE LEPTODERRIS FASCICULATA ...................... 16

2.5.1
Mtabolites secondaires volatils : Huiles essentielles
16
2.5.2
Mtabolites secondaires non volatils
16
PRESENTATION DE MORINDA MORINDOIDES BAKER (RUBIACEAE) ___________________ 17

2.6
2.7
DESCRIPTION............................................................................................................... 17
2.8
2.9
UTILISATION TRADITIONNELLE ................................................................................... 18
2.10
METABOLITES SECONDAIRES SIGNALES DE MORINDA MORINDOIDES ........................... 18

2.10.1
Mtabolites secondaires volatils : huiles essentielles
18
2.10.2
18
PRSENTATION DE MORINDA LUCIDA BENTH. (RUBIACEAE) _________________ 22
3.1
3.2
DESCRIPTION............................................................................................................... 22
3.3
3.4
UTILISATION EN MEDECINE TRADITIONNELLE ............................................................. 23
3.5
METABOLITES SECONDAIRES SIGNALES DE MORINDA LUCIDA ..................................... 23

3.5.1
23
3.5.2
24
LES HUILES ESSENTIELLES ____________________________________________ 27
4.1
DEFINITION ................................................................................................................. 27
4.2
ROLE PHYSIOLOGIQUE ................................................................................................. 27
4.3
LOCALISATION ET LIEU DE SYNTHESE ......................................................................... 27
4.4
METHODES DEXTRACTION ......................................................................................... 27

4.4.1
Enfleurage et Macration
27
4.4.2
Expression
28
4.4.3
Distillation : Hydrodistillation
28
4.4.4
Entranement la vapeur
28
4.4.5
Extraction aux solvants volatils
28
Sommaire
4.4.6
Extraction au CO2 supercritique
28
4.5
CALCUL DU RENDEMENT ............................................................................................. 29
4.6
COMPOSITION CHIMIQUE DES HUILES ESSENTIELLES ................................................... 29
4.7
FACTEURS INFLUENANT LA COMPOSITION CHIMIQUE ................................................ 30
LES TERPENODES ___________________________________________________ 31
5.1
MONOTERPENES .......................................................................................................... 31
5.2
SESQUITERPENES......................................................................................................... 32
5.3
DITERPENES ................................................................................................................ 33
5.4
TRITERPENES ET STERODES ........................................................................................ 33
LES COMPOSES PHENOLIQUES _________________________________________ 36
6.1
GENERALITES .............................................................................................................. 36
6.2
LES FLAVONODES ....................................................................................................... 36

6.2.1
Dfinition
36
6.2.2
Classification et caractristiques des flavonodes
37
6.2.3
Proprits des flavonodes
39
LES ANTHRAQUINONES ______________________________________________ 43
7.1
GENERALITES .............................................................................................................. 43
7.2
PROPRIETES DES ANTHRAQUINONES ............................................................................ 43
7.2.1
Proprit photosensibilisante
43
7.2.2
Proprit antibactrienne
43
7.2.3
Proprit antifongique
44
7.2.4
Proprit antivirale
45
7.2.5
Proprit anticancreuse
45
7.2.6
Proprit laxative
45
7.2.7
Proprit antipaludique
46
7.2.8
Proprit antituberculeuse
46
INFLAMMATION ET CANCER ___________________________________________ 47
CONCLUSION PARTIELLE
48
Sommaire
PARTIE 3 : RESULTATS ET DISCUSSIONS
49
ETUDE PHYTOCHIMIQUE DES FEUILLES DE CHROMOLAENA ODORATA __________ 49
1.1
METABOLITES SECONDAIRE VOLATILS : HUILES ESSENTIELLES ................................... 49
1.2
1.1.1
Rendement en huiles essentielles
49
1.1.2
Composition chimique des huiles essentielles
51
METABOLITES SECONDAIRES NON VOLATILS .............................................................. 52

1.2.1
Interprtation des CCM prliminaires de lextrait hexanique C1
52
1.2.2
Purification de lextrait hexanique C1
53
1.2.3
Dtermination structurale des composs isols de lextrait hexanique C1
55
ETUDE PHYTOCHIMIQUE DES FEUILLES DE MORINDA MORINDOIDES ___________ 65
ETUDE PHYTOCHIMIQUE DES FEUILLES, FRUITS ET ECORCES DE MORINDA LUCIDA67
3.1
METABOLITES SECONDAIRE VOLATILS DES FEUILLES ET FRUITS : HUILES ESSENTIELLES67
3.2
METABOLITES SECONDAIRE NON VOLATILS DES ECORCES .......................................... 68
3.2.1
Interprtation des CCM prliminaires de lextrait dactate dthyle M3
68
3.2.2
Purification de lextrait dactate dthyle M3
69
3.2.3
Dtermination structurale des composs isols de M3
70
ETUDE PHYTOCHIMIQUE DES FEUILLES DE LEPTODERRIS FASCICULATA ________ 79
4.1
INTERPRETATION DES CCM PRELIMINAIRES DES EXTRAITS DE DICHLOROMETHANE (L2)

ET DACETATE DETHYLE (L3) ................................................................................................... 79
4.2
PURIFICATION DE LEXTRAIT DE DICHLOROMETHANE L2 ............................................ 81

4.2.1
Isolement du compos Lep1
82
4.2.2
83
4.2.3
83
4.2.4
83
4.2.5
Isolement des composs Lep5, Lep6, Lep7 et Lep8
83
DETERMINATION STRUCTURALE DES COMPOSES ISOLES DE LEXTRAIT DE

DICHLOROMETHANE L2 ............................................................................................................. 84
4.3
4.3.1
Dtermination de la structure du compos Lep6
84
4.3.2
88
4.3.3
90
Sommaire
4.4
4.5
4.3.4
95
4.3.5
100
4.3.6
Dtermination de structure du compos Lep1
101
4.3.7
102
4.3.8
103
PURIFICATION DE LEXTRAIT DACETATE DETHYLE L3............................................. 104

4.4.1
Isolement de Lep9
105
4.4.2
Isolement de Lep10, Lep11 et Lep12
105
DETERMINATION STRUCTURALE DES COMPOSES ISOLES DE L3 ................................. 105

4.5.1
105
4.5.2
108
4.5.3
109
4.5.4
110
TESTS BIOLOGIQUES DES COMPOSES ISOLES DE C. ODORATA ________________ 111
5.1
EFFETS SUR LA VIABILITE CELLULAIRE ..................................................................... 111
5.2
EFFETS SUR LAPOPTOSE ........................................................................................... 112
5.3
EFFETS SUR LA CLONOGENEICITE DES CELLULES....................................................... 113
CONCLUSION GENERALE
115
PARTIE 4 : MATERIELS ET METHODES
119
MATERIEL VEGETAL ET EXTRACTION __________________________________ 119
1.1
MATERIEL VEGETAL.................................................................................................. 119
1.2
PROTOCOLE DEXTRACTION ...................................................................................... 119

1.2.1
Huiles essentielles
119
1.2.2
Extraits bruts totaux
119
METHODES CHROMATOGRAPHIQUES ANALYTIQUES ______________________ 122
2.1
CHROMATOGRAPHIE SUR COUCHE MINCE (CCM) ..................................................... 122

2.1.1
Ractif lacide phosphomolybdique (rvlateur universel)
123
2.1.2
Ractif la Vanilline sulfurique (rvlateur polyvalent)
123
2.1.3
Ractif de Neu ou NP/PEG (rvlateur des flavonodes)
123
Sommaire
2.1.4
Ractif de Liebermann et Burchard (rvlateur des strols, strodes, terpnes)

123
2.1.5
Ractif la potasse (rvlateur des anthraquinones)
124
2.2
CHROMATOGRAPHIE GAZEUSE COUPLEE A LA SPECTROMETRIE DE MASSE (CG-SM)124
METHODES CHROMATOGRAPHIQUES PREPARATIVES ______________________ 124
3.1
CHROMATOGRAPHIE SUR COLONNE OUVERTE (CC).................................................. 124
3.2
CHROMATOGRAPHIE PREPARATIVE SUR COUCHE MINCE ........................................... 125
3.3
CHROMATOGRAPHIE LIQUIDE HAUTE PERFORMANCE SEMI-PREPARATIVE (HPLC

............................................................................................................................... 125
SEMIPREP)
METHODES PHYSICO-CHIMIQUES _____________________________________ 125
4.1
SPECTROMETRIE DE MASSE (SM) .............................................................................. 125

4.1.1
Ionisation par Electrospray (ESI)
125
4.1.2
Impact Electronique (IE)
126
4.1.3
Ionisation chimique (IC)
126
4.1.4 Spectromtrie
(MALDI)
4.2
de
masse
Matrix-Assisted
Laser
Desorption-Ionization
126
SPECTROMETRIE DE RESONANCE MAGNETIQUE NUCLEAIRE (RMN) ........................ 127

4.2.1
Corrlations homonuclaires
127
4.2.2
Corrlations htronuclaires
127
4.3
DIFFRACTION AUX RAYONS X ................................................................................... 127
TESTS BIOLOGIQUES _______________________________________________ 128
5.1
CONDITIONS DE CULTURE DES LIGNEES CELLULAIRES............................................... 128

5.1.1
Lignes et cultures cellulaires
128
5.1.2
Passage cellulaire
128
5.1.3 Comptage cellulaire sur lame de comptage KOVA Glasstic Slide 10 de chez
Hycor
128
5.1.4
5.2
5.3
Ensemencement
129
DEPOT DES DROGUES ................................................................................................ 129

5.2.1
Drogues ou molcules potentiel anticancreux tester
129
5.2.2
ABT 737 ou Abbott laboratory drug 737
129
TESTS CELLULAIRES UTILISES ................................................................................... 130

5.3.1
Test APO 2.7
130
Sommaire
5.3.2
Test de la viabilit cellulaire
131
5.3.3
Test de clonognicit
132
REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES
134
LISTE DES TABLEAUX
148
LISTE DES FIGURES
149
LISTE DES COMMUNICATIONS PUBLIEES PENDANT LA THESE
153
ANNEXES
154
Introduction
Introduction
Les plantes ont depuis longtemps prsent un rle trs important pour l'humanit, car elles
peuvent synthtiser un grand nombre de molcules organiques complexes dotes souvent
d'activits biologiques potentielles. Elles constituent des merveilleuses usines vgtales qui
nous donnent la joie de gurir par un geste thrapeutique [1]. On s'en sert traditionnellement
pour se soigner, se dtendre, aromatiser la nourriture et conserver les aliments (ou les
cadavres).
Jusqu' aujourd'hui, l'usage populaire des plantes reste d'une grande importance. D'aprs les
donnes fournies par l'OMS (Organisation Mondiale de la Sant), 80% de la population
mondiale traitent leurs problmes de sant par des remdes traditionnels, d'une part parce
qu'elles n'ont souvent pas accs aux mdicaments prescrits par la mdecine moderne et,
d'autre part, parce que ces plantes ont souvent une relle efficacit [2]. La majorit des
mdicaments actuels, sont d'origine vgtale ou fabriqus partir de leurs modles (synthse
ou hmisynthse chimique des principes actifs). La mdecine par les plantes est donc devenue
une grande science, dans laquelle on part de la plante vers le principe actif.
Cependant, lvaluation des proprits phytothrapeutiques demeure une tache trs intressante
et utile, en particulier pour les plantes utilises dans la pharmacope traditionnelle. En effet, les
mtabolites secondaires font et restent lobjet de nombreuses recherches in vivo comme in vitro,
notamment la recherche de nouveaux constituants naturels tels que les composs phnoliques,
les terpnes dans les huiles essentielles.
Le traitement par les plantes se trouve surtout facilit par le fait que cette pratique est
intimement lie aux coutumes et traditions, ce qui instaure un climat de confiance et une
approche aise des tradipraticiens. Ces dtenteurs du savoir traditionnel sont d'un grand secours
dans des pays comme la Cte dIvoire o la sant des populations est remise en cause par de
nombreux facteurs notamment le cot lev des prestations et des mdicaments conventionnels,
linsalubrit de lenvironnement, l'insuffisance de campagnes dducation pour la sant, pour ne
citer que ceux-ci.
Les syndromes inflammatoires sont trs frquemment rencontrs en pratique courante. La
raction inflammatoire d'origine infectieuse ou non infectieuse peut entraner un tat de choc
avec dfaillance multi-viscrale qui engage le pronostic vital (dcs dans 50% des cas).
Les inflammations qui englobent fivre et douleur sont dune trs grande diversit et voluent
gnralement vers la chronicit en labsence dun traitement complet et efficace do la
ncessit de la recherche et de la mise au point de mdicaments anti-inflammatoires accessibles
par tous.
La communaut scientifique continue de chercher des composs chimiques capables
dattnuer les douleurs, de lutter contre les maladies cardiovasculaires, contre lhmophilie et
enfin contre des vecteurs de douleurs que sont les virus et les bactries.
-1-
Introduction
Cette ncessit passe par la recherche de molcules naturelles nouvelles isoles des plantes
mdicinales qui sont utilises par la mdecine traditionnelle. Notre tude a choisi de sinscrire
dans ce cadre.
-2-
Partie 1 : Slection des plantes de ltude

1
Critres de slection des plantes
Afin disoler des substances nouvelles de plantes, de trouver de nouvelles voies dapplications
dans le domaine de la pharmacie et de rendre la stratgie disolement la plus efficace, il
convient de slectionner avec soin les plantes tudier.
Dans cette optique, un certain nombre de critres ont t pris en compte pour slectionner les
plantes de cette tude.
1.1
Utilisation des plantes en mdecine traditionnelle
Une tude ethnobotanique axe sur les plantes pouvant avoir une quelconque activit antiinflammatoire est le critre principal qui domine le choix. Ainsi, les indications du gurisseur
traditionnel qui certifie lusage empirique des diffrentes prparations traditionnelles des
plantes, sont donc extrmement importantes pour une slection efficace, puisque la plupart
des mtabolites secondaires de plantes employes en mdecine moderne ont t dcouverts
par lintermdiaire dinvestigations ethnobotaniques [3].
En effet, ltude des plantes mdicinales a rellement commenc en Afrique depuis les
Indpendances. Dans certains pays africains, des programmes dtude ont t labors.
En Cte dIvoire, depuis 1974, un programme national de recherche sur les substances
naturelles a t mis sur pied par le Ministre de la recherche scientifique. En 1999, une
division de la mdecine traditionnelle a t cre au sein du Ministre de la sant publique.
Cest ainsi que plusieurs laboratoires se sont penchs sur ltude des plantes mdicinales.
Dautres pays de la sous-rgion ont aussi labor des programmes dtudes des plantes
mdicinales :
- Au Togo, un centre national de recherche sur la mdecine traditionnelle et la pharmacope
africaine a t fond au sein de loffice national de pharmacologie (TOGOPHARMA).
- Au Sngal, les recherches sur la mdecine traditionnelle figurent parmi les priorits du
dveloppement conomique et social.
- Au Mali, il existe un institut national de recherche sur la mdecine traditionnelle.
- En Guine, en 1971, par dcret prsidentiel, des gurisseurs et des accoucheuses
traditionnelles ont t officiellement associes au systme de sant publique.
Lethnobotanique et lethnopharmacologie mettent en relation les savoirs ancestraux des
mdecins traditionnels et les connaissances scientifiques actuelles. Ce sont avant tout des
domaines de recherche interdisciplinaire l'interface des sciences de l'Homme, comme
-3-

l'ethnologie, l'histoire, la linguistique et des sciences de la nature, comme la botanique, la
pharmacologie, la pharmacognosie, la mdecine.
Les informations de terrain recueillies auprs des populations (les vritables tradipraticiens ne
subsistent plus que dans des zones recules) sont le reflet dune approche culturelle de la
maladie qui, en Cte dIvoire comme dans dautres mdecines traditionnelles, est fonde sur
la symptomatologie. Un tel mlange de plantes est indiqu pour une douleur ou un symptme
donn et non pour soigner une maladie. La traduction de ces donnes symptomatiques brutes
en termes de mdecine tiologique est dlicate et le recours dun mdecin est souvent
indispensable la caractrisation de la maladie. Le traitement varie selon le comportement du
malade, ses dires, le rang social avec la prise en compte de son histoire familiale. De plus, le
tryptique aliment-mdicament-poison rend difficile la catgorisation entre actifs et toxiques
qui peuvent tre employs, dessein, simultanment. Il est galement ncessaire davoir
lesprit que lutilisation mdicinale des plantes est souvent associe des concepts
irrationnels qui font appel au mystique. La difficult vient ainsi de la ncessit de dceler,
dans les mlanges traditionnellement employs, les plantes dont la prsence frquente fait
penser quelles sont susceptibles de traiter un aspect donn de la maladie.
Dans le cadre de cette thse, nous avons donc ralis auprs des gurisseurs traditionnels, une
tude ethnobotanique. Cette tude sest principalement focalise sur les plantes utilises dans
la pharmacope traditionnelle impliquant des activits hmostatiques, antibactriennes et antiinflammatoires (employes en cas de grande fivre).
En tenant compte de tous ces critres, nous avons slectionn quatre plantes : Chromolaena
odorata (L) King & Robinson (Asteraceae), Morinda morindoides Baker (Rubiaceae),
Morinda lucida Benth (Rubiaceae) et Leptoderris fasciculata (Benth.) Dunn (Fabaceae). Ces
plantes sont authentifies par le centre national de floristique de lUniversit Cocody-Abidjan.
1.2
Les apports de la littrature
Les critres que nous venons dvoquer ayant permis dtablir une liste prliminaire de
plantes potentiellement intressantes, nous avons ralis une bibliographie dtaille des
connaissances phytochimiques des espces et de leurs activits biologiques.
Dans loptique de la dcouverte de nouvelles molcules et/ou de nouvelles voies dapplication
thrapeutiques, il est plus judicieux de choisir des plantes qui ont t peu ou pas tudies en
phytochimie. Ainsi, dans cette tude, aucune donne phytochimique nest disponible dans la
littrature pour Leptoderris fasciculata et pour les huiles essentielles de Morinda
morindoides. Cependant, si la famille, le genre ou lespce ont dj t tudis, ce qui est le
cas de Chromolaena odorata et de Morinda lucida, il sera plus facile de trouver des procds
analytiques, didentifier rapidement les composs dj connus et dtudier leur potentielle
activit biologique. Cela permet galement dliminer les genres et/ou les espces connues
pour leur toxicit.
.
-4-
2
2.1
Objectifs de ltude
Objectifs scientifiques
Notre objectif est de rechercher les composs responsables des activits biologiques travers
une tude des mtabolites secondaires volatils (huiles essentielles) et non volatils (composs
phnoliques, terpnodes, anthraquinones).
Pour ce faire, les matires vgtales doivent tre soumises lhydrodistillation ou
lentrainement la vapeur en vue dextraire les huiles essentielles. Dans le cas de
Chromolaena odorata (C. odorata), une tude de chmotype des huiles essentielles de la
plante dans la ville dAbidjan devra tre mene afin den connatre la composition chimique
dune zone une autre.
En ce qui concerne ltude des mtabolites secondaires non volatils, lextraction devra
immdiatement dbuter aprs celle des huiles essentielles. Cependant les purifications ainsi
que llucidation structurale feront lobjet dun travail ncessitant du matriel de haute
technologie (chromatographie, RMN, MS, RX). Enfin, quelques composs chimiques isols
pourront tre soumis des tests biologiques sur les cellules cancreuses en raison du lien
troit entre inflammation et cancer, tabli rcemment par Coussens et al. en 2002 [4].
2.2
Objectifs socio-conomiques
Pour le grand public, identifier les principes actifs de ces plantes et caractriser leur structure
na peut-tre pas un impact dans limmdiat. Cependant long terme la connaissance de leurs
activits biologiques, pourrait permettre dagir sur les doses de consommation en mdecine
traditionnelle car cest la dose qui semble constituer une des problmatiques majeures de
lutilisation des mdicaments traditionnels.
Dautre part, la contribution la valorisation des vertus de ces plantes pourra rduire le cot
trs lev du traitement mdical moderne. Par ailleurs, dans le cas de C. odorata, la grande
majorit des chercheurs et agronomes la considrent actuellement comme une "peste"
vgtale qu'il faut liminer par tous les moyens en raison de son caractre invasif et nfaste
pour les populations agricoles. Cest ainsi que de nombreuses recherches ont t menes pour
sa gestion chimique et biologique. Dans cette tude, il sagit dune rorientation de la
recherche en vue de contribuer sa valorisation.
Ltude que nous allons exposer et dont les rsultats constituent un intrt indniable pour les
scientifiques et le grand public, prsente dans une premire partie une synthse
bibliographique de lexistant concernant lutilisation des plantes en thrapie, dans une
deuxime partie la prsentation et la rationalisation des rsultats obtenus au cours de ce travail
et enfin, la conclusion et les perspectives de ltude.
-5-
Partie 2 : Synthse bibliographique

1
1.1
1.1.1
Prsentation de Chromolaena odorata (L.) R. M. King & H.

Robinson (Asteraceae)
Gnralit
Sa rpartition mondiale actuelle stend le long de la ceinture intertropicale situe entre le

30me parallle sud et le 30me parallle Nord.
Figure 1 : Rpartition mondiale de Chromolaena odorata (zones indiques en couleur jaune) [5]
1.1.2
Origine
C. odorata (L.) King & Robinson (syn. Eupatorium odoratum L.) est un arbuste originaire
d'Amrique centrale et australe, qui s'est impos dans tous les pays tropicaux [6]. Elle aurait
t introduite dans les annes 1920 comme plante de couverture dans le Sud-est Asiatique,
do lun de ses noms communs dherbe du Laos. Elle sest rapidement rpandue et y est
devenue une composante part entire des vgtations anthropises.
-6-

1.1.3
Intrusion et invasion en Afrique
Il semble quelle ait t introduite en Afrique tropicale, et plus prcisment au Nigeria, dans les
annes 1940 [7]. Aprs une phase dextension lente vers les annes 1970, elle sest rpandue
depuis comme un feu de brousse dans toute lAfrique occidentale et centrale. En Cte
d'Ivoire, sa propagation de l'Est vers l'Ouest tait due la fois aux vents dominants. Connue
sous le nom de lancien dictateur guinen Skou Tour en Cte dIvoire, Acheampong
au Ghana, JaBinDe (lenvahissante) en Centrafrique, Matapa Mbala (lenvahisseur) au
Congo, Mighbe (celle qui crase tout) au Cameroun : ce sont l quelques un des noms
locaux donns C. odorata en Afrique, noms qui traduisent la fois lpoque de linvasion de
cette plante et le caractre massif et inexorable de cette invasion (Figure 2). C. odorata, connue
de tous les paysans des pays tropicaux, pose tous, paysans, chercheurs, agronomes, dcideurs,
un dfi entirement nouveau et dune importance cruciale pour le dveloppement des zones
rurales. Il sagit donc dapprendre grer cette plante de faon minimiser les effets nfastes et
maximiser les effets bnfiques.
Figure 2 : Effet invasif de Chromolaena odorata
-7-
1.2
Description
C. odorata est une herbe ou arbuste vivace odorifrante appartenant la famille des
Asteraceae.
Figure 3 : Espce Chromolaena odorata (L) R. M. King & H. Ronbinson
1.3
Caractristiques botaniques
Lespce est une herbe terrestre, annuelle, dresse, non enracine aux nuds avec des racines
pivotantes de couleur blanche ou brune. Les tiges section arrondie et pleine sont
pubescentes. Les stipules sont absentes. Les feuilles sont simples, opposes, ptioles, ovales,
de plus de 3 cm de long/large, marge grossirement dente. Lapex et la base sont pointus
avec une nervation penne. Absence de gaines foliaires. Fleurs hermaphrodites, regroupes en
capitules terminales, sont tubulaires et sessiles de couleur blanche ou pourpre. Le fruit est un
akne avec la prsence de pappus [8].
1.4
Utilisations traditionnelles
Les extraits de diffrents organes de C. odorata ont t utiliss en mdicine traditionnelle pour
lutter contre divers maux. La dcoction des feuilles a t utilise pour traiter l'asthme et pour
baisser la fivre chez les enfants atteints de la varicelle [9] et comme remde contre la toux
[10]. Elle est utilise dans le traitement des infections de la peau (imptigo et la teigne) et dans
le maintien de l'homostasie [11, 12]. Les feuilles fraiches ou la dcoction ont t utilises
pendant longtemps au Vietnam et dans dautres pays tropicaux pour le traitement de la morsure
de sangsue, de la blessure de tissus mous, blessures de brulures, de linfection de la peau et de
la dentoalvolaire [13-16].
Les extraits aqueux des feuilles de C. odorata ont t utiliss dans le traitement du paludisme
[10, 17, 18], comme cataplasme pour arrter une hmorragie externe [19] et favoriser la
gurison de la plaie [20]. En Cte-d'Ivoire, ils ont t utiliss dans la pharmacope pour soigner
les douleurs abdominales et les cphales [21], comme cicatrisant et agent antiseptique local
[22]. La dcoction des feuilles est utilise comme boisson pour le traitement du paludisme et du
-8-

diabte. Le ptrissage des feuilles est employ, aprs solubilisation de la pte obtenue dans de
leau, comme purge pour le traitement de la diarrhe [23].
En Thalande, la dcoction des tiges de la plante peut tre utilise en cas d'hmorragie
pulmonaire. Elle est galement utilise comme agent hmostatique pour arrter des saignements
de coupures fraches et du nez [10].
1.5
1.5.1
Mtabolites secondaires signals de Chromolaena odorata

Mtabolites secondaires volatils et activits biologiques
Plusieurs travaux de recherche raliss sur la composition chimique des huiles essentielles de
C. odorata dans diffrents pays ont montr que les huiles essentielles des feuilles sont
principalement constitues de terpnodes. Ltude compare de chmotypes rencontrs dans la
littrature montre une diversit de la composition chimique des huiles essentielles de C.
odorata (Figure 4).
En Chine les constituants majoritaires des huiles sont le -caryophyllne (14) (16.58%), cadinne (11) (15.85%), -copane (12) (11.58%) et oxyde de -caryophyllne (15) (9.63%).
Leffet inhibiteur de lhuile la concentration de 0.8 mg/mL sur trois champignons
phytopathognes, a t valu. Leffet antifongique est important pour Pyricularia grisea
(61.4%), moyen pour Phytophtora nicotianae (29.3%) et faible pour Fusarium oxysporum
(14.4%) [24].
Au Cameroun, elles prsentent quatre produits majoritaires : le bicyclogermacrne (9) (12.5%),
gijrne (7) (11.8%), -farnesne (6) (9.98%) et l-pinne (1) (9.36%). Elles sont toxiques
sur les tiques Rhipicephalus lunulatus Neumann, ectoparasites de la chvre naine de Guine
[25]. Bouda et al., sans prsenter la composition chimique des huiles, ont montr ses proprits
insecticides contre les insectes ravageurs du grain de mas, le Sitophilus zeamais avec une DL50
de 6.78% (environ 1.36 mL mlang avec 20 g de grains) [9].
Au Nigeria, l-pinne (1) (42.2%), le -pinne (2) (10.6%), le germacrne-D (10) (9.7%) et le
-copaen-4--ol (13) (9.4%) sont les constituants prdominants. Ces huiles prsentent une
activit antibactrienne contre Bacillus cereus avec une concentration minimale inhibitrice
(CMI) de 39 g/mL et une activit antifongique contre Aspergillus niger avec une CMI de 78
g/mL [26]. Dans ce mme pays, Inya-agha et al. [27] ont prsent un autre chmotype pinne (1) (19.32%), cadinne (19.09%), camphor (16) (15.46%), limonne (3) (10.22%) et caryophyllne (14) (7.05%). Cette diffrence serait lie certainement au lieu gographique de
rcolte. Ce chmotype a une activit antibactrienne contre Staphylococcus aureus and
Escherichia coli.
En Cte dIvoire, les composs majoritaires sont -pinne (1) (21.15%), prgijrne (8)
(19.61%), gijrne (7) (11.68%), -pinne (2) (10.12%) et germacrne-D (10) (9.50%) [21,
28]. Ses huiles essentielles sont dexcellentes inhibitrices de la lipoxygenase L-1 de soja,
modle de la lipoxygenase humaine (15-LO) implique dans les processus de linflammation
-9-

[21]. Ces mmes huiles essentielles augmentent l'activit de la fonction cyclooxygnase de
prostaglandine H synthase avec une concentration de 87.5 g/mL [29].
Au Congo, le chmotype est marqu par le p-cymne (4) (22.2%), le thymylactate (17)
(15.8%), le prgijrne (8) (14.8%), le -caryophyllne (14) (9.8%) et l-pinne (1) (8.5%).
Au Bnin, il a t signal un chmotype -caryophyllne (14) (21.0%), germacrne-D (10)
(15.3%), oxyde de -caryophyllne (15) (8.0%) [30]. Le chmotype prsente uniquement deux
composs majoritaires au Vietnam : le gijrne (7) (42.5%) et le -cubebne (5) (12.5%) [31].
Figure 4 : Composs majoritaires des huiles essentielles des feuilles de C. odorata
1.5.2
Mtabolites secondaires non volatils et activits biologiques
Les mtabolites secondaires non volatils signals de cette plante sont principalement des
composs phnoliques dont les plus nombreux sont les flavonodes et quelques acides
phnoliques. Peu dalcalodes, de terpnodes et trs peu danthraquinones, dacides gras, de
phtalates et dalcanes ont t rencontrs.
- 10 -

1.5.2.1
Composs phnoliques
Flavonodes
Les plus nombreux sont les flavonols (Figure 5) comme la querctine (18), tamarixetin (19),
ombuin (20) [32], les flavanones (Figure 6) comme sakuranetin (21) [33], isosakuranetin (22)
[34], persicogenin (23) [32] et les flavones (Figure 7) comme leupatilin (24) [16], salvigenin
(25) [35], sinensetin (26) [36]. Les moins nombreux sont les chalcones comme lodoratin (27)
[37] et les flavanols comme le padmatin (28) (Figure 8) [32]. Les travaux de Suksamrarn et
al. [34] sur lactivit biologique des flavonodes isols de cette plante ont montr que la
flavanone 5,7-dihdroxy-4-mthoxyflavanone ou isosakuranetin (22) (Figure 6) prsente une
activit antimycobactrienne importante contre les Mycobacterium tuberculosis. Quelques
flavonodes glycosides comme le rutin (29) [32] (Figure 9) ont t aussi isols des feuilles de
cette espce vgtale. Tous les flavonodes isols de cette espce sont prsents dans le
Tableau 1 dans lAnnexe.
Figure 5 : Exemples de flavonols de C. odorata
Figure 6 : Exemples de favanones de C. odorata
Figure 7 : Exemples de flavones de C. odorata
- 11 -
Figure 8 : Exemples de chalcone et flavanol de C. odorata
Figure 9 : Exemple de flavonode glycoside de C. odorata
Acides phnoliques
Les acides phnoliques (Figure 10), p-hydroxybenzoque (30), protocatchique (acide 3,4dihydroxybenzoque) (31), vanillique (32), p-coumarique (33) et frulique (34), prsents dans
lextrait thanolique sont de puissants antioxydants pour la protection des cellules de la peau
contre les dommages oxydatifs [16].
Figure 10 : Acides phnoliques de C. odorata
1.5.2.2
Alcalodes
Biller et al. en 1994 [38] ont signal, dans les racines, la prsence de N-oxydes de cinq
alcalodes pyrrolizidine : les N-oxydes de 7-angeloylretrorecine (35), de 9-angeloylretrorecine
(36), de intermedine (37), de rinderine (38) et de 3-O-actylrinderine (39) (Figure 11). Cest
- 12 -

rcemment en 2007 que Thoden et al. [39] ont obtenus des alcalodes 1,2dehydropyrrolizidine libres aprs un traitement lacide sulfurique et au zinc de lextrait de
mthanol des racines de C. odorata. Ils ont montr leffet nmaticide de ces alcalodes contre
Meloidogyne incognita, un important parasite des plantes.
Figure 11 : Alcalodes de C. odorata
1.5.2.3
Terpnodes
Talapatra et al. en 1974 [35] ont isol lactate de lupol (40) de lextrait dactate dthyle de
la plante et ont identifi un mlange de lupol (41) et de -amyrin (42) (Figure 12) partir de
lextrait dther de ptrole. Rcemment en 2005 Amatya et Tuladhar [40] ont men une tude
phytochimique sur l'extrait l'ther de ptrole des racines. Elle a abouti l'isolement de trois
terpnodes triterpne, 3-hydroxy-28-carboxyolean-12-ne nomm acide eupatorique (43),
poriferastrol (44) et l'actate de butyrospermol (45) (Figure 12).
Figure 12 : Terpnodes de C. odorata
- 13 -

1.5.2.4
Anthraquinones
Deux anthraquinones, chrysophanol (46) et physcion (47) (Figure 13), ont t isoles aussi par
Amatya et Tuladhar partir de lextrait dther de ptrole des racines. Ltude cytotoxique
ralise dans un test de ltalit contre Artemia salina (crevette de saumure) a rvl une
activit significative des deux anthraquinones avec des valeurs de CL50 respectives de 289.0
et 158.1 g/mL [40].
Figure 13 : Anthraquinones de C. odorata
1.5.2.5
Acide gras, phtalate et alcane
Un acide gras lacide palmitique (48), un phtalate le bis (2-thylhexyl) phtalate (49) (Figure
14) et un alcane loctadecane ont t signals par Amatya et Tuladhar. Le phtalate a prsent
une activit cytotoxique contre A. salina avec une valeur de CL50 de 538.1g/mL [40].
Figure 14 : Acide gras et phtalate de C. odorata
Ces groupes de composs possdant des activits biologiques intressantes (anti-oxydante,

antibactrienne, antifongique, anti-inflammatoire,etc.) sont tout fait typiques des plantes
du genre Chromolaena en particulier et de la famille Asteraceae en gnral. Leur prsence
explique en grande partie les activits biologiques dcrites prcdemment.
- 14 -
2.1
Prsentation
(Fabaceae)
de
Leptoderris
fasciculata
(Benth.)
Dunn
Lespce est retrouve uniquement en Afrique dans la zone intertropicale en Sierra Leone,
Guine, Cte dIvoire, Ghana, Gabon et Tanzanie [41]. Cette espce a t identifie en Cte
dIvoire depuis 1988, dans la fort classe du Haut-Sassandra [42].
Figure 15 : Rpartition mondiale de L. fasciculata (zones indiques en jaune) [43]
2.2
Description
Leptoderris fasciculata est une liane ligneuse de la famille des Fabaceae denviron 10 m de
longueur, avec une tige de 30 cm de diamtre. Elle pousse gnralement sur les bords ou dans
les clairires des forts [44].
Figure 16 : Espce Leptoderris fasciculata (Benth.) Dunn
- 15 -
2.3
Cest une espce prenne dont les feuilles mesurent 20 47 cm de long avec des rachis
(prolongement des feuilles composes pennes) prolongs de 2 3 cm. Les stipules subules
sont ovales et caduques de 3 4 mm de long. La corolle blanchtre ou crme mesure 7 12
mm de long avec la prsence parseme de petits poils. Les bractes sont groupes en
fascicules avec des fleurs linaires-lancoles ovales de 1-2 mm de long. Les fruits sont
linaires arrondis aux extrmits, de 6 10 cm de long et de 2 3 cm de large avec un aspect
ressemblant du papier. A lintrieur, on trouve 1 2 graines [45].
2.4
Utilisations traditionnelles
La plante entire est utilise dans le traitement de lhydropisie, des dmes, troubles
pulmonaires et comme laxatif. Les corces sont employes contre les maladies cutanes, les
infections parasitaires sous-cutanes, la malnutrition, la dbilit et les maux destomac [44].
Elle est utilise par les populations du Sud-est de la Cte dIvoire pour larrt dhmorragie
chez les femmes aprs laccouchement ou dans le cas des mnorragies.
2.5
2.5.1
Mtabolites secondaires signals de Leptoderris fasciculata

Mtabolites secondaires volatils : Huiles essentielles
Aucune tude sur les huiles essentielles na t faite dans la littrature sur cette espce
vgtale.
2.5.2
Cette plante na jamais fait lobjet dune tude phytochimique. A ce jour, seule la prsence de
rotnones (50) (Figure 17) dans les feuilles de Leptoderris micrantha, une plante utilise
traditionnellement au Nigeria pour le traitement de la maladie mentale (schizophrnie), a t
souponne dans une enqute ethnobotanique [46].
Figure 17 : Rotnone souponne de Leptoderris micrantha
Lespce Leptoderris fasciculata est intressante tudier en raison de labsence de donnes

phytochimiques dans la littrature.
- 16 -
Prsentation de Morinda morindoides Baker (Rubiaceae)

2.6
Cette plante est uniquement prsente en Afrique, sa distribution gographique est

essentiellement guino-congolaise.
Figure 18 : Rpartition mondiale de M. morindoides (zones indiques en jaune) (Baker) [47]
2.7
Description
Figure 19 : Espce Morinda morindoides
Morinda morindoides (Baker) est une liane grimpante, glabre de la famille des Rubiaceae qui
se retrouve dans les lisires des forts.
- 17 -
2.8
Les feuilles sont opposes, oblongues elliptiques ou obovales elliptiques cuniformes la

base. Ces feuilles longuement acumines, glabres, mesurent 6-15 cm de longueur sur 3-8 cm
de largeur. Le limbe porte, environ, six paires de nervures latrales. Les fleurs, blanches,
groupes et capitules, ont le tube de la corolle court et robuste. Les fruits, bossels, jaunes
maturit, mesurent 4 cm de diamtre [48].
2.9
Utilisation traditionnelle
M. morindoides est une plante qui est cite de faon rcurrente dans plusieurs prescriptions
thrapeutiques contre diverses maladies. Le dcoct des feuilles est utilis contre le
paludisme, le diabte, la diarrhe, la constipation, la blennorragie, les douleurs causes par le
rhumatisme, les ruptions cutanes, les infections microbiennes, la gale, les vers intestinaux et
amibiase [49-55]. Il est aussi pris en bain de corps contre le prurit. Ce dcoct est aussi
prescrit dans le traitement des infections uro-gnitales par voie orale [56]. La dcoction
aqueuse des racines soignerait per os le diabte et les gastralgies [57]. Le dcoct aqueux du
mlange des feuilles de M. morindoides et des fruits de Citrus aurantifolia est utilis per os
dans le traitement du paludisme [58]. En Cte dIvoire, lextrait des feuilles est utilis dans le
traitement du paludisme, de la diarrhe, la rougeole et la varicelle en raison de ses proprits
anti-fivreuses.
2.10 Mtabolites secondaires signals de Morinda morindoides

2.10.1
Il nexiste aucune donne dans la littrature sur les huiles essentielles de cette plante ce jour.
2.10.2
Des travaux antrieurs ont permis certains auteurs disoler partir des feuilles, des
composs phnoliques flavonodes, des iridodes et un terpnode.
2.10.2.1 Compos phnoliques flavonodes
A partir des fractions dactate dthyle et de n-butanol provenant de lextrait au mthanol des
feuilles, Cimanga et al. en 1995 ont isols pour la premire fois neuf flavonodes (Figure 20)
dont deux aglycones quercetin (18), quercetin 7,4-dimthylther (51) et sept glycosides
luteolin 7-glucoside (cynaroside) (52), apigenin 7-glucoside (cosmosiin) (53), quercetin 3rhamnoside (quercitrin) (54), kaempferol 3-O-rhamnoside (55), quercetin 3-rutinoside (rutin)
(29), kaempferol 3-rutinoside (nicotiflorin) (56) et chrysoeriol 7-O-neohesperidoside (57)
[50]. A cette liste sest ajout un flavonode glycoside kaempferol 7-O-[-Lrhamnopyranosyl-(16)]-[-D-glucopyranosyl-(12)]--D-glucopyranoside (morindaoside)
(58) en 1997 [59]. Le chrysoeriol (59), kaempferol (60), luteolin (61) et apigenin (62) ont t
obtenus en 1999 par hydrolyse acide de leurs correspondants [49].
- 18 -
Figure 20 : Flavonodes de M. morindoides
Tous ces composs, ont t tudis pour leurs activits biologiques. A lexception des
composs (54), (57) et (59), ces flavonodes ont tous prsent des proprits antioxydantes en
inhibant la xanthine oxydase et en pigeant les anions superoxides O2 [49]. Cimanga et al.
en 2006 [51] ont montr, in vitro, une activit antiamibienne modre des flavonodes
glycosides cosmosiin (53) et cynaroside (52) contre Entamoeba histolytica avec des valeurs
respectives de CI50 de 22.3 et 37.4 g/mL. Les flavonodes aglycones kaempferol (60),
apegenin (62), et luteolin (61) ont prsent une activit antiamibienne plus importante avec
des valeurs respectives de CI50 de 10.3, 12.7 et 17.8 g/mL. La querctine (18) et la
querctine 7,4-dimthylther (51) se sont rvls cytotoxiques sur les cellules MT-4 (ligne
de cellules T humaines transformes par le virus HIV1) avec des concentrations cytotoxiques
mdianes (CC50) respectives de 14.2 et 21.7 g/mL.
- 19 -

Cimanga et al. en 2010 [52] ont tudi, in vitro l'activit antispasmodique de certains
flavonodes isols des feuilles de la plante sur deux agonistes spasmognes (lactylcholine et
la solution de KCl dpolarise) qui induisent des contractions de lilon du cobaye. Les
travaux ont montr que la querctine (18), quercitrin (54) et le rutin (29) ont une activit
antispasmodique modre contre les deux agonistes avec des valeurs CI50 infrieures 0.1
g/mL.
2.10.2.2 Terpnodes
Iridodes
Un autre traitement des fractions dactate dthyle et de n-butanol a conduit lisolement de
huit iridodes (Figure 21) gaertneroside (63), actylgaertneroside (64), dehydrogaertneroside
(65), dehydromthoxygaertneroside (66), acide gaertnerique (67), mthoxygaertneroside (68),
epoxygaertneroside (69) et epoxymthoxygaertneroside (70) [60].
Figure 21 : Iridodes de M. morindoides
Gaerneroside (63), acide gaertnerique (67), mthoxygaertneroside (68) et epoxygaertneroside

(69) ont prsent une trs bonne activit antiamibienne contre Entamoeba histolytica avec des
- 20 -

valeurs de CI50 infrieures 8 g/mL. Les plus actifs sont epoxygaertneroside (70) (CI50 = 1.3
g/mL) et mthoxygaertneroside (68) (CI50 = 2.3 g/mL), suivi de gaertneroside (63) et de
lacide gaertnerique (67) avec des CI50 de 4.3 et 7.1 g/mL, respectivement [51].
Ltude des proprits antispasmodiques des composs isols de la plante a montr que les
iridodes epoxygaertneroside (70) et gaertneroside (63) possdent une bonne activit
antispasmodique sur les deux agonistes spasmognes (lactylcholine et la solution de KCl
dpolarise) avec des CI50 comprises entre 4 et 7 g/mL [52].
Tamura et al. ont isol un nouvel iridode actylmthoxygaertneroside (71) et quatre dj
connus (63), (64), (66) et (68). Ces composs prsentent tous des proprits antipaludiques en
inhibant la prolifration de P. falciparum. Le plus actif est le dehydromthoxygaertneroside
(66) (CI50 = 0.04 M), suivi de lactylmthoxygaertneroside (71) (CI50 = 0.1 M),
gaertneroside (63) (CI50 = 0.8 M) et de lactylgaertneroside (64) (CI50 = 4.1 M) [61].
Strode
En 2009, Ramiarantsoa et al. ont isol un 3-ctostrode, (22E)-2-hydroxy 24-thylcholesta4,22-din-3-one (72) (Figure 22), partir de lextrait dther de ptrole des feuilles [62].
Figure 22 : Terpnode de M. morindoides
- 21 -
3
3.1
Prsentation de Morinda lucida Benth. (Rubiaceae)

Espce principalement prsente en Afrique dans la zone guino-congolaise, a t signale en

Allemagne.
Figure 23 : Rpartition mondiale de M. lucida [63]
3.2
Description
Figure 24 : Espce Morinda lucida (Benth)
Lespce Morinda lucida Benth est ordinairement un petit arbre trs clectique. On la trouve
dans le fourr littoral et dans les savanes ctires, tantt simple arbuste, tantt arbre atteignant
15 m de haut et 0.40 m de diamtre. Mais elle existe aussi en fort, cest alors un grand arbre
de 25 m de haut et de 0.60 m de diamtre. Lcorce rugueuse cailleuse se dtache en petites
- 22 -

cailles avec des tranches cassantes de couleur jaune-bruntres ; parfois les tranches sont
blanchtres avec des granulations brunes. Le bois jaune apparat immdiatement sous lcorce
[64, 65].
3.3
Les stipules larges, suborbiculaires et foliaces sont trs caduques. Les rameaux rougetres
reflets vernisss sont trs largis aux nuds. Les feuilles sont oblongues-elliptiques ou
elliptiques, attnues au sommet ou brivement acumines, ordinairement cuniformes la
base. Elles mesurent 8 20 cm de long, 4 8.5 cm de large et sont glabres sauf quelques poils
laisselle des nervures latrales ; celles-ci au nombre de 6-9 paires. Les pdoncules florifres
par 3 ordinairement, sont glabres et mesurent jusqu 3 cm de long. Les calices sont
cupuliformes, charnus, trs pais, libres, mais serrs les uns contre les autres en une petite
masse subglobuleuse do pointent les corolles. Les fleurs glabres sont odorantes avec des
corolles blanches trs caduques. La corolle est tubulaire paroi paisse denviron 2.5 cm de
long ; 5 lobes de 4 mm de long environ. Les anthres subsessiles, linaires et incluses sont
soudes vers la partie suprieure du tube de la corolle. Les fruits forment une petite masse
globuleuse bossele, charnue, atteignant 1.5 cm de diamtre [65].
3.4
Utilisation en mdecine traditionnelle
En Afrique de louest, M. lucida est une plante importante en mdecine traditionnelle. Les
dcoctions et infusions ou les empltres de racines, corces et feuilles sont des remdes
reconnus contre diffrents types de maux, notamment la fivre, le paludisme [66-70], la
trypanosomiase [71, 72] et les pousses de fivre lors de laccouchement. Une dcoction de
l'corce du tronc est utilise pour le traitement de l'ictre svre [69]. La plante est galement
employe en cas de diabte [66, 73], hypertension artrielle [68, 74, 75], helminthiase [72],
damnorrhe [66], comme fbrifuge [69], purgatif [76], analgsique gnral et laxatif [69,
76]. Le dcoct aqueux des feuilles fraches est utilis en bain de corps contre les ruptions
cutanes [56].
M. lucida est cite dans quatre pays africains pour son usage contre les hpatites [77]. Au
Nigeria, cette espce est lun des remdes traditionnels les plus utiliss contre la fivre. Les
feuilles presses et mlanges avec du vin de palme, sont utilises contre le paludisme et
l'hypertension artrielle [78].
3.5
3.5.1
Mtabolites secondaires signals de Morinda lucida

Les huiles essentielles des feuilles et des racines rcoltes au Nigeria ont t tudies par
Okoh et al. en 2011 [79]. Cinquante composs ont t identifis dans l'huile des feuilles et les
principaux composs sont l'-terpinne (73) (17.8%) et le -bisabolne (74) (16.3%) (Figure
25). Dans l'huile des racines, 18 composs ont t identifis, les principaux constituants sont
le 3-fluoro-p-anidine (51.8%) et l'acide hexadcanoque ou acide palmitique (48) (12.0%).
- 23 -

Ces huiles ont prsent des proprits antioxydantes avec une plus forte activit pour celles
extraites des racines.
Bankole, depuis 1997, a dmontr lactivit antifongique des huiles essentielle des feuilles sur
Aspergillus flavus. Ces huiles inhibent la synthse de laflatoxine B1 produite par le
champignon inocul dans les grains de mas [80].
Figure 25 : Composs majoritaires des huiles essentielles des feuilles et des racines de M. lucida
3.5.2
Des tudes antrieures ont permis disoler dix-sept anthraquinones, deux anthraquinols et un
iridode.
3.5.2.1
Anthraquinones
En 1973 Adesogan [81] a isol dix anthraquinones (Figure 26) partir de lextrait dther de
ptrole du tronc. Ce sont alizarin-1-mthyl ther (75), 1-mthoxy-2-mthylanthraquinone
(76), 1-hydroxy-2-mthylanthraquinone (77), anthraquinone-2-aldhyde (78), 2mthylanthraquinone (79), rubiadin (80), rubiadin-1-mthyl ther (81), damnacanthal (82),
nordamnacanthal (83), soranjidiol (84).
Sept nouvelles anthraquinones, le digitolutein (85) isol partir des corces du tronc et des
racines par Koumaglo et al. en 1999 [82], le 3-hydroxyanthraquinone 2-carbaldhyde (86), 3hydroxy-2-hydroxymethylanthraquinone (87), tectoquinone (88), damnacanthol (89),
morindon (90) et 1,5,6-trimthoxy-2-mthylanthraquinone (91) isols partir de lextrait de
dichloromthane des racines par Rath et al. en 1995 [83].
- 24 -
Figure 26 : Anthraquinones des racines, tiges et corces de M. lucida
Des tests biologiques sur plaques prparatives ont montr des activits antifongiques, de
alizarin-1-mthyl ther (75) contre Cladosporium cucumerinum (0.5 g) et contre Candida
albicans (1.0 g), de 3-hydroxy-2-hydroxymthylanthraquinone (87) contre C. cucumerinum
(2.0. g) et contre C. albicans (5.0 g) et de nordamnacanthal (83) contre C. cucumerinum
(1.0 g) [83, 84].
Les effets de digitolutein (85), rubiadin-1-methyl ther (81) et damnacanthal (82) sur la
croissance de Plasmodium falciparum, in vitro, ont t tudis. Le nombre de parasites a
diminu significativement d'une manire dose-dpendante, et 100% d'inhibition a t obtenue
avec 30 40 g de chaque compos test [82].
3.5.2.2
Anthraquinols
Deux anthraquinols loruwal (92) et oruwalol ont t isols pour la premire fois en 1973 par
Adesogan. La structure de loruwalol na pas t identifie de faon prcise. Lexamen des
donnes spectrales suggre une structure 5-hydroxyoruwal (93) ou 8-hydroxyoruwal (94) [81]
(Figure 27).
Figure 27 : Anthraquinols de tige de M. lucida
- 25 -

3.5.2.3
Iridode
Liridode oruwacin (95) (Figure 28) a t identifi par Adesogan en 1979 des extraits dther
de ptrole des feuilles [85].
Figure 28 : Iridode des feuilles de M. lucida
Oruwacin (95) possde des proprits molluscicides contre Bulinus globosus, Bulinus rohlfsii,
Biomphalaria pfeifferi et Lymnea natalensis qui sont des htes intermdiaires de Fasciola
hepatica (parasite responsable de la fasciolose) et de Schistosoma haematobium (parasite
responsable de la bilharziose) [86].
3.5.2.4
Acide gras
Un acide gras lacide hexacosanoque (96) (Figure 29) a t identifi dans la fraction de
lther de ptrole des extraits de tronc darbre [81].
Figure 29 : Acide gras du tronc darbre de M. lucida
A lissue de cette recherche bibliographique, il est relev aisment que les anthraquinones
constituent la majorit des mtabolites secondaires isols de M. lucida. Ces mtabolites sont
caractriss par les diffrentes mthodes spectroscopiques savoir : RMN-1D, Masse, UV, IR
et par comparaison aux spcimens authentiques. Ces composs possdent des activits
biologiques
intressantes
(anti-oxydante,
antiparasitaire,
antifongique,
antidiarrhique,etc.).
- 26 -
4
4.1
Les huiles essentielles

Dfinition
Selon Smallfield [87], les huiles essentielles sont des mlanges naturels de composs
aromatiques dans les plantes, qui sont extraites par distillation la vapeur ou au solvant.
Dans la 8me dition de la pharmacope franaise (1965), les huiles essentielles
(essences=huiles volatiles) sont dfinies comme: des produits de composition gnralement
assez complexe renfermant les principes volatils contenu dans les vgtaux et plus ou moins
modifis au cours de la prparation [88].
4.2
Rle physiologique
Beaucoup de plantes produisent les huiles essentielles en tant que mtabolites secondaires,
mais leur rle exact dans les processus de la vie de la plante est peu connu [89].
Il y a beaucoup de spculation au sujet du rle des huiles essentielles des plantes. Les plus
clbres sont la rduction de la comptition avec les autres espces de plante (alllopathie) par
inhibition chimique de la germination des graines, la protection contre la flore microbienne
infectieuse par les proprits fongicides et bactricides et la protection contre les herbivores
par got et effets dfavorables sur le systme nerveux [90]. Certains auteurs pensent que la
plante utilise lhuile pour repousser ou attirer les insectes, dans ce dernier cas, pour favoriser
la pollinisation. Dautres considrent lhuile comme source dnergie facilitant certaines
ractions chimiques et permettant la conservation de lhumidit des plantes dans les climats
dsertiques [91].
4.3
Localisation et lieu de synthse
Les huiles essentielles peuvent tre stockes dans tous les organes vgtaux : feuilles, fleurs,
corces, bois racines, rhizomes, fruits et graines. La synthse et laccumulation sont
gnralement associes la prsence de structures histologiques spcialises, souvent
localises la surface de la plante : cellules huiles essentielles des Lauraceae ou des
Zingiberaceae, polis scrteurs des Lamiaceae, des poches scrtrices des Myrtaceae ou des
Rutaceae, canaux scrteurs des Apiaceae ou des Asteraceae [88]. Plusieurs catgories de
tissus scrteurs peuvent coexister simultanment chez une mme espce, voire dans un
mme organe [92, 93].
4.4
4.4.1
Mthodes dextraction
Enfleurage et Macration
Cette technique est la plus ancienne, trs couteuse et peu employe aujourdhui. On lemploie
pour des fleurs sensibles, ne supportant pas un chauffage trop lev, comme par exemple le
- 27 -

jasmin, la violette et la rose. Les fleurs sont mises macrer dans des graisses ou des huiles et
chauffes (bain-marie ou soleil) puis tales sur des chssis en bois pendant plusieurs jours.
Une fois gorgs de parfum, les corps gras sont filtrs au travers de tissus de lin ou de coton.
Les huiles sont ensuite laves lalcool pur, filtres et vapores [54, 124-126].
4.4.2
Expression
Cest une technique simple o les corces des agrumes sont presses froid pour extraire les
huiles essentielles [54, 124-126].
4.4.3
Distillation : Hydrodistillation
La distillation est la mthode la plus employe pour extraire les huiles essentielles. Le
matriel vgtal dans un minimum deau est chauff jusqu bullition ; lhuile essentielle
svapore alors avec les vapeurs dgages, puis est condense (elle redevient liquide
lorsquon la refroidit) et spare de leau [54, 124-126].
4.4.4
Entranement la vapeur
Pour viter certains phnomnes dhydrolyse sur des composants de lhuile essentielle ou des
ractions chimiques pouvant altrer les rsultats, le procd de lentranement la vapeur a
t mis au point. La masse vgtale repose sur une grille vers laquelle la vapeur est pulse.
Les cellules se distendent et les particules dhuile se librent. Ces dernires sont alors
vaporises et condenses dans un serpentin rfrigr. La rcupration de lhuile essentielle se
fait de la mme manire que dans le cas de lhydrodistillation [54, 124-126].
4.4.5
Extraction aux solvants volatils
Cette technique est utilise avec des fleurs ne supportant pas la chaleur, les solvants trs
volatils par exemple lther et lhexane qui svaporent facilement basse temprature sont
employs. Les vgtaux sont placs dans d'normes cuves en acier appeles extracteurs et
soumis des lavages successifs aux solvants qui se chargent ainsi de leur parfum. Aprs
dcantation et filtration, le solvant est vapor afin d'obtenir une sorte de pte fortement
odorante appele concrte. Aprs une srie de lavages l'alcool dans des batteuses
mcaniques et de glaages, la concrte donne naissance une essence pure appele absolue
[54, 124-126].
4.4.6
Extraction au CO2 supercritique
Il sagit du procd le plus rcent dextraction froid des matires premires vgtales
utilisant le gaz carbonique : le CO2. Sous pression (plus de 75 bars) et temprature de 31C,
le gaz carbonique se trouve dans un tat supercritique. Au dpart de lextraction au CO2
supercritique, les vgtaux broys sont placs dans des paniers cylindriques quips de
filtres aux deux extrmits. Les paniers sont ensuite placs dans lextracteur, o une pompe
assure la circulation du CO2 ltat supercritique. Lhuile essentielle est alors dissoute dans le
- 28 -

CO2 sous forme de fluide. Celui-ci est ensuite rendu ltat gazeux et se spare du compos
extrait, avant dtre envoy dans le liqufacteur pour tre rutilis [54, 124-126].
4.5
Calcul du rendement
Le rendement en huile essentielle exprim en pourcentage, est le rapport entre le poids (P 1) de

lhuile extraite et le poids (P2) du matriel vgtal utilis, multipli par 100 [94]. Le
rendement est calcul par la formule suivante :
R (%) = P1/P2 X 100
4.6
Les huiles essentielles sont des mlanges trs complexes. Les constituants sont principalement
des monoterpnes, des sesquiterpnes qui sont estims plus de 1000 et 3000 respectivement.
Les huiles essentielles renferment des composs oxygns drivs de ces hydrocarbures et
aussi des phnylpropanes [95]. La Figure 30 ci-dessous prsente les structures de quelques
composants retrouvs dans les huiles essentielles.
Figure 30 : Quelques composs des huiles essentielles [96, 97]
- 29 -
4.7
Facteurs influenant la composition chimique
La composition chimique et le rendement en huiles essentielles varient suivant diverses

conditions : lenvironnement, le gnotype, lorigine gographique, la priode de rcolte, le
schage, lieu de schage, la temprature et dure de schage, les parasites, les virus et la
qualit des herbes [87, 95]. Cest ainsi que laction des huiles sinterprte par le rsultat de
des effets combins de leurs composs actifs et inactifs. Ces composs inactifs pourraient
influencer la disponibilit biologique des composs actifs et plusieurs composants actifs
pourraient avoir un effet synergique [95].
Nonobstant la complexit des huiles [95], les proportions des diffrents constituants dune
huile essentielle peuvent varier de faon importante tout au long du dveloppement. De plus,
les chmotypes ou races chimiques sont trs frquents chez les plantes aromatiques. Par
exemple on compte pour Thymus vulgaris, espce morphologiquement homogne, sept
chmotypes diffrents [88].
Les conditions principales requises pour une production rentable en huile essentielle sont :
bon matriel vgtal, varit de la plante, le sol, quipement dextraction, le climat [87].
- 30 -
Les terpnodes
Les terpnodes constituent une vaste famille de substances naturelles. Leur squelette carbon
rsulte de la condensation dunits 5 atomes de carbone lisoprne (1-mthyl-buta-1,3dine) [98-100]. La dnomination des diffrentes classes de molcules terpniques repose sur
le nombre de motifs isoprnes constituant leur squelette. Ainsi on rencontre : les hmiterpnes
(C5), monoterpnes (C10), sesquiterpnes (C15), diterpnes (C20), sesterpnes (C25),
triterpnes (C30), tetraterpnes (C40), et les polyterpnes. Certains groupes de molcules
nobissent pas cette rgle et, parmi ceux-ci, les strodes qui ne comptent que 27 carbones.
De nombreux isoprnodes comme le pinne, le thymol, le menthol ou le limonne sont des
substances odorifrantes, souvent rencontres dans les huiles essentielles. Dautres jouent un
rle physiologique important, comme les carotnodes, la vitamine E et le cholestrol.
Le nombre de rptitions de ce motif isoprnique, mais aussi, les ractions de cyclisation, les
rarrangements et les diverses oxydations et rductions que peuvent subir le squelette carbon
sont lorigine de la grande diversit structurale de ces molcules.
5.1
Monoterpnes
Les monoterpnes (Figure 31) sont les plus simples constituants des terpnes dont la majorit
est rencontre dans les huiles essentielles (90% des huiles essentielles sont des monoterpnes)
[101]. Ils comportent dix (10) atomes de carbones et sont issus de la condensation de deux
units isoprne, selon le mode de couplage tte-queue [102].
Figure 31 : Exemples de quelques monoterpnes
Larrangement de leur squelette peut tre : acyclique, mono, bi, et tricyclique [88].
- 31 -

Les iridodes et les pyrthrines forment deux classes de composs tout fait particulires des
monoterpnes. Les iridodes sont des monoterpnes caractriss par un squelette
cyclopenta[c] pyrane ou iridane (Figure 32).
Figure 32 : Squelette iridane
Les monoterpnes sont largement distribus chez les vgtaux de la famille Asteraceae [88]
laquelle appartient C. odorata.
5.2
Sesquiterpnes
Les sesquiterpnes (Figure 33) forment une srie de composs qui renferment 15 atomes de
carbones, ils se trouvent sous forme dhydrocarbures ou sous forme dhydrocarbures
oxygns comme : les alcools, les ctones, les aldhydes, les acides et les lactones dans la
nature. On peut galement rencontrer dans les plantes des sesquiterpnes lactones (Figure 33).
Ces mtabolites secondaires sont issus de loxydation dun groupe mthyle du groupement
isopropyle attach au squelette de base sesquiterpnique [103]. Les sesquiterpnes et les
monoterpnes sont souvent en mlange dans les huiles essentielles des plantes, notamment
chez les espces des familles Lamiaceae, Myrtaceae, Pinaceae et Rutaceae [104].
Figure 33 : Exemples de quelques sesquiterpnes
- 32 -
5.3
Diterpnes
Les diterpnes constituent un grand groupe de composs en C-20 issus du mtabolisme du 2E,
6E, 10E-granylgranylpyrophosphate. Trs rpandus chez les vgtaux suprieurs, ils sont
aussi prsents chez certains insectes et chez divers organismes marins [88]. On peut les
trouver encore dans les rsines, les exsudats et les gommes naturelles. Il est rare de rencontrer
les diterpnes comme constituants des huiles essentielles, cause de leurs points dbullition
levs [105]. Ils peuvent tre acycliques ou cycliques. Deux alcools importants sont connus
(Figure 34), le phytol, rencontr sous forme dester dans les vgtaux chlorophylle et la
vitamine A essentielle la croissance normale des mammifres et indispensable pour la
reproduction et la vue [106].
Figure 34 : Exemples de quelques diterpnes
5.4
Triterpnes et strodes
Ce sont des composs en C-30 issus de la cyclisation du 3S-2,3-poxysqualne, ou plus

rarement du squalne lui-mme [98-100]. Ils sont presque toujours hydroxyls en position C-3
du fait de louverture de lpoxyde. Les triterpnes (Figure 35 et Figure 36) prsentent une
trs forte unit structurale, les diffrences majeures sont dordre strochimiques ayant trait
la conformation adopte par lpoxysqualne avant la cyclisation initiale. Le cation form lors
de cette cyclisation peut ensuite subir une srie de dplacements 1, 2 de protons et de
mthyles conduisant aux diffrents squelettes ttra- et pentacycliques qui caractrisent ce
groupe de substances naturelles [98-100].
- 33 -
Figure 35 : Squelettes de triterpnes ttracycliques et pentacycliques
Figure 36 : Exemples de quelques triterpnes
La famille des triterpnes ttracycliques prsente une importance particulire par son
homognit et surtout par ses rapports troits avec les strodes [107]. Leur structure de base
commune est le noyau strane (Figure 37).
Figure 37 : Structure de noyau strane
Les strodes (Figure 38) sont des composs qui contiennent le noyau
perhydrocyclopentnophnanthrne. Ils comprennent une grande varit de composs naturels
parmi lesquels se trouvent les strols proprement dits, les acides biliaires, les hormones
- 34 -

sexuelles, les hormones corticosurrnales, les glucosides cardiotoniques, les sapognines et
quelques alcalodes.
Pratiquement, la position 3 est occupe par loxygne dans tous les strodes naturels. Les
strols proprement dits nont aucun autre substituant oxygn. Les substituants situs du
mme ct du squelette polycyclique que le groupe mthyle C-19 (en C-10) sont dits , et les
autres [107].
Figure 38 : Exemples de quelques strodes
Lutilisation industrielle et lintrt thrapeutique des triterpnes et strodes reprsentent un

enjeu capital dans le domaine de la recherche des substances naturelles. Les proprits
pharmacologiques diverses [98, 100] attribues ces composs ont permis leur classement en
tant quun groupe de mtabolites secondaires de grande importance. Ces composs
manifestent entre autres :
-des potentialits thrapeutiques dans diffrents domaines : cytostatiques, anti-inflammatoires,
analgsiques, insecticides, molluscicides, etc...
-un intrt considrable dans le secteur de lindustrie pharmaceutique particulirement la
production de mdicaments strodiques ayant des proprits : contraceptifs, anabolisants,
anti-inflammatoire,etc.
-un intrt thrapeutique concernant lextraction des molcules bioactives, pour lobtention
des formes galniques simples ou pour celle de prparation en phytothrapie ;
-une importance conomique du fait de leur utilisation dans les industries agroalimentaires.
- 35 -
6
6.1
Les composs phnoliques

Gnralits
Ces composs ont tous en commun la prsence dun ou de plusieurs cycles benzniques
portant une ou plusieurs fonctions hydroxyles [108]. La structure des composs phnoliques
naturels varie depuis les molcules simples (acides phnoliques simples) vers les molcules
les plus hautement polymrises (tanins condenss) [109]. Cependant, ils ont tous la mme
origine, la voie de phnylpropanode prcde par la voie de shikimate.
Les composs phnoliques participent activement aux interactions de la plante avec son
environnement en jouant soit le rle de signaux de reconnaissance entre les plantes
(alllopathie), soit lui permettant de rsister aux diverses agressions vis--vis des organismes
pathognes. Ils participent de manire trs efficace la tolrance des vgtaux des stress
varis. Ces composs jouent donc un rle essentiel dans l'quilibre et ladaptation de la plante
au sein de son milieu naturel [109].
D'un point de vue appliqu, ces molcules constituent la base des principes actifs que l'on
trouve chez les plantes mdicinales. Chez l'homme, ces molcules traces jouent un rle
important en agissant directement sur la qualit nutritionnelle des fruits et lgumes et sur la
sant des consommateurs (effet antioxydant, effet protecteur contre l'apparition de certains
cancers...) [109].
Parmi les nombreux composs phnoliques que sont les flavonodes, acide benzoques, acides
hydroxycinnamiques, coumarines, stilbnes, subrines et les lignanes, nous nous intresserons
aux flavonodes. Dune part parce quils sont plus reprsents dans notre tude et dautre part
parce quils prsentent quelque fois des activits biologiques importantes.
6.2
6.2.1
Les flavonodes
Dfinition
Le terme flavonode provenant du latin "flavus", signifiant "jaune" est attribu aux
composs possdant un squelette 15 atomes de carbones, qui son niveau le plus simple,
consiste en deux cycles phnyles, les cycles A et B, connects par un pont trois carbones
(structure en C6-C3-C6). Le pont C3 entre les cycles A et B est communment cyclis pour
former le cycle C (Figure 39).
- 36 -
Figure 39 : Structure de base des flavonodes
Les flavonodes dsignent une trs large gamme de composs naturels appartenant la famille
des polyphnols. Ils sont considrs comme des pigments quasi universels des vgtaux. Ils se
trouvent dune manire systmatique dans toutes les plantes vasculaires, comme celles
appartenant aux familles des Asteraceae et des Fabaceae. Ils peuvent tre localiss dans divers
organes : racines, tiges, bois, feuilles, fleurs et fruits. Structuralement, les flavonodes se
rpartissent en plusieurs classes de molcules, dont les plus importantes sont les flavones,
flavanols, dihydroflavonols, isoflavones, chalcones, aurones, anthocyanes et les tanins.
Ils ont t isols par le scientifique E. Chevreuil en 1814, mais ont t rellement dcouverts
en 1937, par Albert Szent-Gyrgyi, qui mit en exergue leur influence pour rduire la
permabilit des vaisseaux sanguins.
6.2.2
Classification et caractristiques des flavonodes
Les diverses classes de flavonodes diffrent en fonction de la cyclisation, du degr

dinsaturation et doxydation du cycle C alors que les composs individuels au sein dune
classe se distinguent par les substitutions des cycles A et B. Parmi les nombreuses classes de
flavonodes, existent : les flavones, flavanols, flavanones, dihydroflavonols, flavan-3-ols,
flavane-3,4-diols, chalcones, aurones, anthocyanes et isoflavones [98, 110] (Figure 40).
- 37 -
Figure 40 : Les principales classes de flavonodes
Les flavonodes sont souvent hydroxyls en positions 3, 5, 7, 3, 4 et/ou 5 (suivant la

numrotation prsente pour les flavones, Figure 40). Un ou plusieurs de ces groupes
hydroxyles sont frquemment mthyls, actyls, prnyls ou sulfats. Dans les plantes, les
flavonodes sont souvent prsents sous forme C- ou O-glycosides ; les formes libres, sans
sucres attachs, sont appeles gnines. Les O-glycosides, de loin les plus frquents, portent
leurs substituants sur les groupements hydroxyles de la gnine, alors que pour les Cglycosides, la liaison se fait directement avec un carbone de la gnine, les C-6 et/ou C-8. En
effet, la formation de la (ou des) liaison(s) htrosidique(s) est sous la dpendance de
transfrases trs spcifiques quant au substrat et la position dosylation [98].
- 38 -

6.2.3
6.2.3.1
Proprits des flavonodes

Proprits anti-radicalaires
Les flavonodes sont capables de piger les radicaux libres en formant des radicaux flavoxyles
moins ractifs, cette capacit peut tre explique par leur proprit de donation d'un atome
d'hydrogne partir de leur groupement hydroxyle (Figure 41). Cette raction de pigeage
donne une molcule stable (RH) et un radical flavoxyle (FLO). Ce dernier va subir un
changement de structure par rsonance ; redistribution des lectrons impaires sur le noyau
aromatique pour donner des molcules de faible ractivit par rapport aux R . En outre les
radicaux flavoxyles peuvent interagir entre eux pour former des composs non ractifs.
Figure 41 : Pigeage des espces ractives drives de loxygne (R) par les flavonodes et formation d'une
structure stable [111]
La proprit anti-radicalaire des flavonodes est troitement lie leur structure, en particulier
au phnomne de rsonance lectronique stabilisant exerc par les noyaux aromatiques, cette
activit ncessite :
- la structure ortho-dihydroxyphnolique du cycle B (3',4' dihydroxystructure), cette structure
est importante pour l'activit anti-radicalaire des flavonodes possdant un htrocycle satur ;
- la double liaison C2-C3 conjugue avec la fonction 4 oxo qui est responsable de la
dlocalisation des lectrons, en amliorant ainsi la capacit anti-radicalaire ;
- les groupements hydroxyles libres en C3 et C5 [112].
A titre d'exemple ; la querctine et la myrictine rpondent tous ces critres ncessaires pour
avoir une activit antiradicalaire efficace et importante [113].
- 39 -
Figure 42 : Critres structuraux essentiels pour une bonne activit antiradicalaire des flavonodes [112]
6.2.3.2
Proprits chlatrices des ions mtalliques
Les ions mtalliques sont ncessaires pour le fonctionnement des processus biochimiques et
physiologiques cellulaires, mais dans certains cas et lorsque leur mcanisme d'action n'est pas
bien contrl ces mmes ions peuvent tre l'origine d'une peroxydation lipidique, un stress
oxydatif, ou une blessure des tissus, titre d'exemple Cu2+ est un stimulateur de la
peroxydation des lipoprotines de basse densit (LDL=low-density lipoprotein) [111].
Grce leur structure chimique spcifique, les flavonodes peuvent facilement chlater les
ions mtalliques en crant des composs complexes inactifs [114]. La chlation des ions
mtalliques ncessite trois sites principaux (Figure 43) :
- site situ entre le groupe 3'-OH et le groupe 4'-OH du cycle B ;
- site situ entre le groupe 3-OH et 4-C=O de lhtrocycle C ;
- site situ entre le groupe 5-OH du cycle A et le groupe 4-C=O de lhtrocycle C.
Figure 43 : Principaux sites impliqus dans la chlation des ions mtalliques (Me n+) [111]
6.2.3.3
Proprits antibactriennes
Les polyphnols notamment les flavonodes et les tannins sont reconnus pour leur toxicit vis-vis des microorganismes. Le mcanisme de toxicit peut tre li l'inhibition des enzymes
- 40 -

hydrolytiques (les protases et les carbohydrolases) ou d'autres interactions pour inactiver les
adhsines microbiennes, les protines de transport et d'enveloppe cellulaire [115].
Une tude de Suksamrarn et al. [34] a montr que la flavanone 5,7-dihdroxy-4mthoxyflavanone prsente une activit antimycobactrienne contre les Mycobacterium
tuberculosis avec une valeur de CMI de 175 M, tandis que la 4-hydroxy-5,6,7trimthoxyflavanone, lacacetine et luteoline ont une activit faible avec les valeurs de CMI
respectives de 606, 704 et 699 M.
6.2.3.4
Proprits anticancreuses
Des tudes montrent que certains flavonodes particulirement ; lutoline, querctine,

kaempfrol, apignine, taxifoline inhibent d'une faon marque la lipogense des cellules
cancreuses. Dautres flavonodes sont plutt capables d'induire l'apoptose. En effet certains
flavanols (pigallocatchine-3-gallate) prsentent des effets cytotoxiques sur les cellules
cancreuses de prostate. Ces effets sont corrls avec leur capacit inhiber les enzymes cls
lipogniques i.e. FAS (Fatty Acid Synthase) [116].
Les travaux raliss par Caltagirone et al. en 2000 (cits par Depeint et al. [117]) ont montr
que l'apignine et la querctine ont la capacit dinhiber la phase de mtastase.
Des travaux montrent aussi que la lutoline a une activit cytotoxique modre contre les
cellules humaines BC de cancer du sein avec une valeur de CI50 de 38 M et contre les
cellules NCI-H187 de cancer du poumon avec une CI50 de 19 M. Lacactine montre
galement un effet modr avec une CI50 de 25 M sur les cellules NCI-H187 [34].
Deng et al. [118] ont montr que la (S)-5-hydroxy-7,4'-dimthoxyflavanone (naringenin-7,4dimthylther) a un effet cytotoxique contre les cellules LNCaP de cancer de prostate
hormono-dpendant, les cellules Lu1 de poumon humain et les cellules MCF-7 humaines de
cancer du sein, avec des valeurs de DE50 de 6.7, 4.7 et 1.1 M, respectivement.
L'activit anticancreuse des flavonodes est aussi assure par l'intervention de plusieurs
mcanismes : pigeage des radicaux libres, inhibition du mtabolisme d'acide arachidonique,
formation d'un complexe inactif avec le carcinogne [119], prvention de l'activation des
mtabolites carcinognes, inhibition de la prolifration des cellules cancreuses, arrt du cycle
cellulaire des cellules cancreuses, induction de l'apoptose, inhibition des processus
d'angiognse [120].
Rcemment deux flavonodes glycosides, genkwanin 4-O-[-L-rhamnopyranosyl(12)--Dglucopyranoside] et sakuranetin 4-O-[-D-glucopyranosyl(12)--D-glucopyranoside],
isols de Chromolaena odorata ont t valus in vitro pour leur activit cytotoxique contre
les lignes cellulaires cancreuses LLC et HL-60. Le compos genkwanin 4-O-[-Lrhamnopyranosyl(12)--D-glucopyranoside] a montr une cytotoxicit contre les lignes de
cellules cancreuses LLC et HL-60 avec des valeurs de CI50 respectives de 28.2 et 11.6 M.
Le compos sakuranetin 4-O-[-D-glucopyranosyl(12)--D-glucopyranoside] a montr
une faible activit cytotoxique contre LLC (valeur CI50 suprieure 50 M) [121].
- 41 -

6.2.3.5
Proprits anti-inflammatoires
De nombreuses tudes semblent indiquer que les flavonodes possdent des proprits antiinflammatoires et qu'ils sont capables de moduler le fonctionnement du systme immunitaire
par inhibition de l'activit des enzymes qui peuvent tre responsables des inflammations. Ils
peuvent aussi moduler l'adhsion des monocytes durant l'inflammation athrosclrosique en
inhibant l'expression des mdiateurs inflammatoires [122] et certains sont capables d'inhiber
l'histamine [123].
Les flavones et les flavonols sous forme glycosyle ou libre comme la querctine, kaempfrol,
myrectine ont une activit inhibitrice de COX (Cyclooxygnase) [124].
Kaempferide a t signal comme inhibiteur de l'inflammation induite par la promotion
tumorale de lester de phorbol ; et la flavone eupatilin inhibe slectivement la 5-lipoxygnase
de cellules mastocytomes cultives [16, 125].
6.2.3.6
Proprits antivirales
L'activit antivirale des flavonodes contre HIV peut tre lie directement leurs effets sur les
enzymes responsables de sa rplication (HIV-1 reverse transcriptase ou HIV-1 integrase)
[126]. Querctine, apignine, catchine et hesperdine sont, parmi les flavonodes,
caractriss par leurs proprits antivirales contre onze types de virus. Les flavonodes
aglycones pourvus dun groupement hydroxyle libre en C3 ont montr une bonne activit
antivirale, les flavanes sont gnralement plus efficaces que les flavones et les flavanones
contre HIV-1 et HIV-2 [124].
6.2.3.7
Proprits antiallergiques
Ces effets antiallergiques sont attribus l'influence des flavonodes sur la production de
lhistamine. En effet, les flavonodes inhibent les enzymes, telles que l'AMP cyclique
phosphodiesterase et ATPase Ca2+ dpendante, responsables de la libration de l'histamine
partir des monocytes et des basophiles. Par exemple, l'ATPase Ca2+ dpendante dgrade
l'ATP produisant ainsi de l'nergie afin de faciliter l'absorption du calcium par les membranes
cellulaires, ce qui favorise la libration de l'histamine stocke dans les vsicules. En inactivant
cette enzyme, la querctine montre un potentiel d'action suprieur celui du cromoglycate de
sodium utilis comme mdicament pour empcher la libration de l'histamine et d'autres
substances endognes qui causent l'asthme [127].
- 42 -
7
7.1
Les Anthraquinones
Gnralits
Les anthraquinones sont des principes assez frquents chez les Rubiaceae. Elles appartiennent
la famille des anthracnosides et existent dans les plantes ltat de gnine libre ou sous
forme dhtroside [128].
Ces composs sont constitus de trois cycles accols, dont un des cycles est le plus souvent
oxyd (Figure 44). Les cycles benzniques peuvent porter une ou plusieurs fonctions
hydroxyles, carboxyles, mthyles, mthoxyles, hydroxymthyles et former des O-htrosides
avec diffrents sucres [128].
Figure 44 : Anthraquinone
Les anthraquinones sont des composs aromatiques oxyds, principalement d'origine

polyctidique driv de la cyclisation d'une chane octactide . Les composs polyctides
proviennent de chaines polycetomthylne (CH2-CO)n. La prsence de groupes
fonctionnels et leur disposition sont dtermines par la squence de ractions d'alkylation, de
dshydratation, d'oxydation, de condensation, d'hydroxylation et de glycosidation [100, 129].
7.2
7.2.1
Proprits des anthraquinones

Proprit photosensibilisante
Plusieurs drivs d'anthraquinone ont t tudis pour leurs proprits photosensibilisantes

dans les ractions photodynamiques [6,7]. Ainsi, par exemple, certains d'entre eux prsentent
une bonne activit antibactrienne et antivirale en produisant des espces ractives de
loxygne (ROS), telles que lanion superoxyde (O2-), le radical hydroxyle (OH) et la
molcule doxygne singulet (1O2), qui provoquent des dommages oxydatifs ultrieurs [130].
7.2.2
Proprit antibactrienne
Des travaux raliss sur six anthraquinones isoles de Morinda angustifolia ont montr que la
1,8-dihydroxy-2-mthyl-3,7-dimthoxyanthraquinone la dose de 13 g/disque prsente une
activit antimicrobienne contre Bacillus subtilis, E. coli, Micrococcus luteus avec des
- 43 -

diamtres de zones dinhibition de 14.0, 12.5 et 13.0 mm respectivement. [131]. Six
anthraquinones isoles de trois espces du genre Xanthoria (X. falla, X. elegans et X.
policarpa), physcion, erythroglaucin, xanthorin, emodin, fallacinal et teloschistin, ont montr
une activit antibactrienne la dose de 25 g/disque contre Pseudomonas fluorescens, P.
glicinea et P. phaseolicola avec une inhibition de la croissance de 5-15%, 5-25% et 5-8%
[132]. Les anthraquinones isoles de Heterophyllaea pustulata, savoir soranjidiol, rubiadin,
damnacanthal et le 5,5'-bisoranjidiol, ont montr une activit antibactrienne sur S. aureus
avec des CMI comprises entre 32 et 64 M [130].
L'activit inhibitrice de la croissance de Helicobacter pylori ATCC 43504 des constituants
isols des corces de Tabebuia impetiginosa a t examine en utilisant la diffusion des
disques en papier et la CMI des essais biologiques. L'activit des composs isols a t
compare celle des agents anti-Helicobacter pylori disponibles dans le commerce,
amoxicilline, le mtronidazole et la ttracycline. Avec la mthode de diffusion de disque en
papier, la 2-(Hydroxymthyl) anthraquinone a prsent une forte activit contre Helicobacter
pylori ATCC 43504 partir de 0.01 mg/disque. Lacide anthraquinone-2-carboxylique, et le
mtronidazole ont t moins efficaces en prsentant une activit anti-Helicobacter pylori
modre 0.1 mg/disque. Pour la CMI des essais biologiques, la 2-(hydroxymthyl)
anthraquinone (2 g/mL) et lacide anthraquinone-2-carboxylique (8 g/mL) ont t plus
actifs que le mtronidazole (32 g/mL) mais moins efficace que l'amoxicilline (0.063 g/mL)
et la ttracycline (0.5 g/mL) [133].
Le test de ltalit des crevettes de saumure a donn une valeur de DL50 de 533 g/mL pour
lanthraquinone 1,5-dihydroxy-3-mthoxy-7-mthyl-anthraquinone. Elle est active contre
deux bactries gram positif (B. anthracis et Corynebacterium pseudodiphthericum) et deux
bactries gram ngatif (P. aeruginosa et P. pseudomalliae) la dose de 200 g/mL [134].
Deux anthraquinones, zenkequinones A et B ont t isoles partir des corces de la tige de
Stereospermum zenkeri. L'activit antimicrobienne des composs isols a t value contre
six souches multirsistantes d'agents pathognes. Zenkequinone B a montr la meilleure
activit antibactrienne contre les bactries gram-ngative P. aeruginosa avec une valeur de
CMI de 9.50 g/mL [135].
7.2.3
Proprit antifongique
Parmi les six anthraquinones isoles de M. angustifolia, la 1,8-dihydroxy-2-mthyl-3,7dimthoxyanthraquinone la dose de 13 g/disque, possde une activit antifongique contre
C. albicans avec un diamtre de zone dinhibition de 7.5 mm [131].
Les travaux de Manojlovi et al. [132] ont signal que les six anthraquinones isoles des trois
espces du genre Xanthoria prsentaient des activits fongicides contre Aspergillus niger,
Doratomyces stemonilis, Trhichoderma viride et Penicillium verucosum en inhibant la
croissance de 10 65% avec une dose de 100 g/disque.
- 44 -

Une tude de Kanokmedhakul et al. a dmontr que nordamnacanthal et damnacanthal isols
de Prismatomeris fragrans prsentaient des activits antifongiques contre C. albicans avec les
valeurs de CI50 de 6.0 et 22.6 g/mL respectivement [136].
Rhein, physcion, aloe-emodin et chrysophanol isols partir des rhizomes de Rheum emodi
ont montr une activit antifongique contre C. albicans, Cryptococcus neoformans,
Trichophyton mentagrophytes et Aspergillus fumigatus avec des valeurs de CMI comprises
entre 25 et 250 g/mL [137].
7.2.4
Proprit antivirale
Les deux anthraquinones emodin et barbaloin ont montr une activit antivirale. Lexcellent
agent virucide est lemodin [138]. Le damnacanthal isols des racines de Morinda elliptica a
montr une activit modre contre le VIH [139]. Un certain nombre danthraquinones, des
drivs danthrones et danthraquinones ont t valus pour leur activit antivirale contre le
cytomgalovirus humain (HCMV). Parmi les composs valus, quinalizarin, emodin, rhein,
hypericin, protohypericin, alizarin, emodin bianthrone et emodin anthrone ont montr une
activit antivirale contre la souche AD-169 de HCMV. Lors d'un essai sur une souche de
HCMV rsistante au ganciclovir, les valeurs de la CE50 pour quinalizarin, rhein et l'alizarine
taient suprieures aux valeurs obtenues pour la AD-169 [140].
7.2.5
Proprit anticancreuse
Parmi les anthraquinones isoles des racines de Morinda elliptica, le damnacanthal et le

lucidin--mthyl ther, sont cytotoxiques sur les lignes cellulaires MCF-7 (cellules
tumorales mammaires) et CEM-SS (leucmie lymphoblastique T). Le rubiadin et le
nordamnacanthal sont cytotoxiques sur la ligne CEM-SS [139]. Le nordamnacanthal,
damnacanthal et 1-hydroxy-2-hydroxymethyl-3-mthoxyanthraquinone isols de P. fragrans
ont montr une activit cytotoxique contre les cellules de la ligne BC avec les valeurs de CI50
respectives de 6.9, 10.1 et 8.0 g/mL. De plus, les anthraquinones 1,3-dihydroxy-2-mthyl5,6-dimthoxyanthraquinone, nordamnacanthal, damnacanthal, rubiadin, rubiadin-1-mthyl
ther de P. fragrans et la 1-hydroxy-2-mthyl-4,5,6-trimthoxyanthraquinone prpare
partir du traitement 1,3-dihydroxy-2-mthyl-5,6-dimthoxyanthraquinone ont montr une
activit cytotoxique contre les cellules de la ligne NCIH187 avec des valeurs de CI50 de 8.7,
1.9, 13.5, 14.2, 4.5, 9.4 et 5.1 g/mL respectivement. Le driv ther mthylique, 1-hydroxy2-mthyl-4,5,6-trimthoxyanthraquinone, est plus active contre NCI-H187 que son parent
[136].
7.2.6
Proprit laxative
Barbaloin (10-glucopyranosyl-1,8-dihydroxy-3-(hydroxymthyl)-9(10H)-anthracnone: aloin

A) est lanthraquinone majoritaire des exsudats et des gels d'Aloe vera [141], qui sont
largement utiliss pour la fabrication de plusieurs types de boissons, produits alimentaires,
cosmtiques et produits pharmaceutiques. Ces prparations ont montr plusieurs activits
pharmacologiques dont lactivit laxative est la principale [142]. Il a t soulign que le
- 45 -

clivage de la partie glycoside du barbaloin par la flore intestinale des rats conduit la
formation de son driv aglycone, l'aloe-emodin anthrone, qui possde un effet laxatif
puissant [143].
7.2.7
Proprit antipaludique
Des tudes ont montr lactivit antipaludique de certaines anthraquinones isoles des plantes.
Le digitolutein, l'ther rubiadin 1-mthyl et damnacanthal, des anthraquinones extraites de
l'corce du tronc et des racines de M. lucida ont inhib significativement la croissance de P.
falciparum in vitro. Le nombre de parasites (schizontes) a diminu d'une manire dosedpendante jusqu 100% d'inhibition obtenue avec 30 40 g pour chaque compos test
[82]. Lemodin, est l'anthraquinone la plus abondante et la plus active isole de Cassia
nigricans. Elle a induit environ 85% de mortalit sur les larves de moustiques Anopheles
gambiaea 50 et 25 g/mL en 24 h [144].
Onegi et al. ont montr que le sterekunthal A prsente une forte activit antiplasmodique
contre deux souches de P. falciparum (PoW et Dd2) avec des valeurs CI50 de 1.3 g/mL pour
la souche PoW et 0.4 g/mL pour la souche Dd2 [145].
7.2.8
Proprit antituberculeuse
Nordamnacanthal,
damnacanthal,
rubiadin
et
1-hydroxy-2-hydroxymthyl-3mthoxyanthraquinone, isols de P. fragrans, ont montr une activit antituberculeuse contre
Mycobacterium tuberculosis avec des valeurs de CMI respectives de 100, 25, 100 et 50
g/mL [136].
- 46 -
Inflammation et cancer
Linflammation est la rponse des tissus vivants une agression ; elle constitue lun des
mcanismes les plus importants des dfenses de lorganisme. Bien que bnfique, car elle
permet dliminer lagent pathogne, linflammation peut devenir nfaste notamment en
causant de nombreux dommages tissulaires suite une activit trs importante des cellules
inflammatoires, une libration accrue despces ractives oxygnes ou une trop grande
agressivit de lagent pathogne [146]. La raction inflammatoire peut se manifester de
manire aigu ou chronique. Cette dernire, caractrise notamment par sa grande dure peut
toutefois survenir spontanment [146-148]. De nombreuses pathologies peuvent tre lies
une inflammation chronique ; notamment, lasthme, la maladie dAlzheimer, le diabte de
type 2, les maladies cardiovasculaires et le cancer [147-149]. Le cancer est une maladie
chronique qui rsulte dune prolifration cellulaire anormale au sein dun tissu normal de
lorganisme [150]. Cette prolifration est due des altrations au niveau des proto-oncognes
et/ou des gnes suppresseurs de tumeurs [150, 151]. Ce processus, caractris par des tapes
dinitiation, de promotion et de progression, est responsable de 13% de la mortalit mondiale
selon les donnes de lOMS [152]. De nos jours, le cancer peut tre associ une
inflammation chronique [148, 153]. Des tudes ont montr avec certitude le lien entre
inflammation chronique et cancer. C'est par exemple le cas des cancers de l'estomac ou du col
de l'utrus. Le premier se dveloppe suite une infection bactrienne par Helicobacter pylori
et le second, la suite dune infection par un papillomavirus. Dans les deux cas, les agents
pathognes persistent des annes dans l'organisme, entranant une raction inflammatoire
durable [4, 154].
Le traitement du cancer, long, coteux et inaccessible la plupart des populations pauvres,
ncessite lutilisation des anti-inflammatoires non strodiens (AINS) et strodiens (AIS). Les
AINS et AIS agissent sur les effets initiateurs ou amplificateurs de linflammation (migration
des cellules inflammatoires, libration de prostaglandines et leucotrines, ERO). Toutefois,
lutilisation des molcules anti-inflammatoires, essentiellement dorigine synthtique, nest
pas sans effets nocifs pour lorganisme ; notamment, lusage prolong des AINS peut
entraner des troubles au niveau du tractus gastro-intestinal, des toxicits au niveau du rein et
de la peau [155]. Ds lors, la recherche de molcules actives dotes de faibles effets
secondaires savre ncessaire. De telles molcules sont prsentes dans les plantes qui
constituent, parfois, la seule source de traitement pour les populations pauvres [156, 157].
Nous avons donc entrepris dextraire et didentifier les mtabolites secondaires prsents dans
quatre plantes utilises en mdecine traditionnelle ivoirienne dans le traitement de plusieurs
pathologies inflammatoires chroniques telles que le paludisme, la diarrhe, la rougeole ou la
varicelle. Et enfin, tudier les proprits anti-inflammatoire et/ou anticancreuse des
mtabolites isols afin dtablir des bases scientifiques dun traitement traditionnel.
- 47 -
Conclusion partielle
La synthse bibliographique nous a montr que deux principaux types de composs existent
dans les extraits de plantes mdicinales. Il sagit des mtabolites secondaires volatils (les
huiles essentielles) et les mtabolites secondaires non volatils (les flavonodes et
anthraquinones). Les huiles essentielles extraites des feuilles de C. odorata, et celles des
feuilles et des racines de M. lucida, ont des activits insecticide, antibactrienne, antifongique
pour C. odorata et des activits antioxydante, anti-inflammatoire pour M. lucida.
Les flavonodes et les anthraquinones constituent la majorit des mtabolites secondaires non
volatils isols de C. odorata et de M. lucida, respectivement. Ces groupes de composs
possdent des proprits biologiques telles que les proprits antioxydante, antibactrienne,
anticancreuse, antiinflammatoire, antivirale, antiallergique pour les flavonodes et les
proprits photosensibilisante, antibactrienne, antifongique, antivirale, anticancreuse,
laxative, antipaludique, antituberculeuse pour les anthraquinones.
Cependant, les compositions chimiques des huiles essentielles des feuilles de M. morindoides,
des graines de M. lucida qui ne sont pas encore dcrites sont connatre.
Les mtabolites non volatils de L. fasciculata sont connatre et de nouveaux composs non
volatils de M. lucida sont dcouvrir afin dinterprter leurs activits biologiques in vitro et
comprendre les modes dactions thrapeutiques des plantes slectionnes.
- 48 -
Partie 3 : Rsultats et discussions

1
Etude phytochimique des feuilles de Chromolaena odorata
Lespce Chromolaena odorata King & Robinson (Asteraceae) a retenu notre attention en
premier lieu pour ses utilisations traditionnelles en Cte dIvoire dans le traitement des
douleurs abdominales, les cphales, le paludisme, le diabte et pour soigner les plaies et, en
second lieu, en raison de son invasion massive et inexorable.
1.1
Mtabolites secondaire volatils : huiles essentielles
Figure 45 : Carte de la ville dAbidjan
1.1.1
1.1.1.1
Rendement en huiles essentielles

Effets de la saison et du lieu gographique de rcolte
Lhydrodistillation des feuilles fraches de C. odorata provenant des cinq sites gographiques
de la ville dAbidjan : Cocody (Abidjan-Centre), Yopougon (Abidjan-Ouest), Port-Bout
(Abidjan-Sud), Abobo (Abidjan-Nord) et d'Akoudo (Abidjan-Est) (Figure 45) a permis
dextraire des huiles essentielles avec des rendements qui varient peu (Figure 46). Les
- 49 -
Rendements (%)
rendements sont faibles et varient de 0.13 0.20%. Pendant toute lanne, les feuilles du site
de Cocody (Centre) et de Yopougon (Ouest) donnent les meilleurs rendements 0.18-0.20 et
0.17-0.18% respectivement ; tandis que, celles du site dAbobo (Nord) donnent les plus
faibles rendements en huiles 0.13-0.14%. Les feuilles du site de Port-bout (Sud) sont
fortement influences par la saison. En effet, en saison pluvieuse, le rendement faible de
0.15% (identique celui du site dAkoudo en toute saison) augmente en saison sche
0.19%.
Figure 46 : Effet de la saison et du lieu gographique de rcolte
1.1.1.2
Effet de la dure de stockage
Afin de dterminer leffet de la dure de stockage des feuilles sur le rendement en huile, les
extractions ont t effectues le jour de rcolte (jour 0), deux jours aprs la rcolte (jour 2),
quatre jours aprs la rcolte (jour 4) et six jours aprs la rcolte (jour 6) pour chaque site
gographique de rcolte.
Au bout de six jours de stockage, les feuilles des sites de Yopougon, Port-Bout, Abobo et
d'Akoudo montrent une perte considrable dhuiles allant jusqu 0% pour Abobo et
Yopougon. En revanche, la teneur en huiles des feuilles rcoltes sur le site de Cocody reste
inchange.
Les pertes dhuiles observes pour les quatre lots suggrent que la majorit des glandes
scrtrices dhuile essentielle chez cette plante, se trouve dispose sur lpiderme, comme
dans le cas des Lamiaceae. Le schage aurait alors pour effet daccentuer les pertes dhuiles
essentielles par endommagement des glandes scrtrices et par vaporation [158]. Il reste
tablir la raison de la rsistance du lot de Cocody aux processus de dgradation, mais il est
clair qu'une telle stabilit est avantageuse pour une exploitation ultrieure.
- 50 -
Rendements (%)
Figure 47 : Effet de la dure de stockage des feuilles sur le rendement
1.1.2
Yopougon
Abobo
Abidjan-Ouest
Abidjan-Nord
Akoudo
Cocody
Abidjan-Est
Abidjan-Centre
Port-Bout
Abidjan-Sud
Figure 48 : Composition chimique des huiles essentielles dtermine par chromatographie en phase
gazeuse couple la spectromtrie de masse (CG-SM) en fonction du lieu de rcolte
Les huiles essentielles des cinq sites prsentent le mme chemotype domin par les
sesquiterpnes germacrne-D (15.3-20.0%), gijrne (14.1-16.9%), prgijrne (10.712.3%) et -caryophyllne (7.5-9.7%) et le monoterpne -pinne (7.6-10.3%). Il faut
cependant noter que le pourcentage de ces composs majoritaires varie faiblement selon le
site de rcolte. Les trois sesquiterpnes, germacrne-D, gijrne et prgijrne, des
puissants larvicides, pesticides [159, 160], sont plus abondants dans les huiles de Yopougon,
Akoudo, Abobo et Cocody et moins abondants dans celles de Port-bout. Il est donc plus
judicieux dviter dutiliser les huiles extraites des feuilles du Sud dAbidjan quand on
recherche les proprits larvicides et pesticides. De mme le monoterpne -pinne, un
- 51 -

antiinflammatoire, antiseptique et antiviral [159], est plus abondant dans les huiles essentielles
dAbobo et dAkoudo et moins abondant dans celles de Cocody.
Il est certain que les composs volatils de cette plante invasive peuvent tre utiliss comme
larvicides et insecticides en Cte dIvoire. Une telle exploitation donnerait un caractre
bnfique et une nouvelle orientation de la gestion de cette espce vgtale.
Son emploi traditionnel dans diffrents traitements impliquant des processus inflammatoires
serait d la prsence, en quantit importante, de monoterpnes comme l-pinne dans les
huiles.
1.2
1.2.1

Interprtation des CCM prliminaires de lextrait hexanique C1
Figure 49 : CCM prliminaires de C1. A lution au CH2Cl2. B lution Tol/AcOeEt/MeOH (80 :18 :2). 1UV visible. 2-UV 254 nm. 3-UV 365 nm. 4-Ractif la vanilline sulfurique. 5-Ractif de Neu observation
UV visible. 6-Ractif de Neu, observation UV 365 nm. 7-Ractif de Liebermann et Burchard, observation
UV 365 nm
Des chromatographies sur couche mince (CCM) prliminaires ont t menes sur lextrait
hexanique des feuilles de C. odorata (la fraction C1) pour avoir un aperu de la nature des
constituants que lon peut rencontrer dans cet extrait. Pour cela, une partie de lextrait a t
solubilise dans le solvant appropri et dpose sur plaques de CCM. Elles ont ensuite t
lues dans les systmes de solvants dcrits dans la partie Matriels et mthodes et rvles
avec divers ractifs pour permettre une premire orientation des classes de composs
- 52 -

prsentes dans lchantillon analyser (Figure 49). Les informations recueillies ont ensuite
t confrontes aux donnes bibliographiques collectes sur cette espce.
Le criblage chimique en CCM a permis de mettre en vidence la prsence de flavonodes
(ractif de Neu, fluorescence jaune-orange et verte sous lumire UV 365 nm). La couleur
jaune en UV visible indique la prsence probable de chalcones.
Les fractions apolaires semblent contenir des terpnes (coloration bleue violette par rvlation
la vanilline sulfurique et fluorescence 365 nm par rvlation avec le ractif de Liebermann
et Burchard (Figure 49).
1.2.2
Purification de lextrait hexanique C1
Plusieurs procds de purification ont t employs concernant essentiellement des techniques

chromatographiques qui seront dtailles dans la partie Matriels et mthodes (colonne
ouverte, colonne haute pression etc...). Les fractions prsentant des profils identiques en CCM
sont runies et purifies. Les fractions purifies contiennent soit un faible mlange de
produits, soit un mlange de produits ayant des polarits loignes permettant leur sparation
ou contiennent un produit majoritaire.
1.2.2.1
Isolement des composs Chrom1 et Chrom2
Le schma de fractionnement de lextrait C1 est prsent sur la Figure 50.

10 g de lextrait hexanique C1 est prlev puis fractionn grossirement par chromatographie
en phase normale sur colonne ouverte, lue par 100% de dichloromthane (CH2Cl2). 75
fractions sont obtenues, notes C1.1 C1.75.
Une CCM bilan du fractionnement de C1 est ralise avec 100% de CH2Cl2 comme phase
mobile. Les molcules les plus apolaires sont lues en premier puis viennent les molcules
les plus polaires. Les composs prsents dans les dernires fractions (C1.71 C1.75) ne
migrent pas car elles sont trop polaires pour ce solvant.
Les fractions apolaires C1.1 C1.3 qui sont des mlanges constitus certainement de terpnes
seront purifies par une autre mthode. Nous dcidons de purifier la fraction C1.4 qui contient
majoritairement des flavonodes. Les autres fractions sont conserves au rfrigrateur + 5C.
La fraction C1.4 subit un fractionnement sur colonne de silice normale que nous luons par un
mlange CH2Cl2/AcOEt (90:10). 4 fractions sont obtenues (C1.4.1 C1.4.4). Au vu des
CCM, la fraction C1.4.3 a subi une autre chromatographie sur colonne de silice normale lue
par Hex/CH2Cl2 (40:60) pour donner 6 sous-fractions (C1.4.3.1 C1.4.3.6). La sous-fraction
C1.4.3.2 est soumise un lavage hexanique des cristaux puis une dernire chromatographie
en phase normale sur colonne de silice lue par CH2Cl2/AcOEt (90:10) pour donner le
compos Chrom1. La sous-fraction C1.4.3.4 a subit aussi un lavage hexanique des cristaux
puis une dernire chromatographie en phase normale sur colonne de silice lue par CH2Cl2
pour donner le compos Chrom2. Le compos Chrom2 a galement t obtenu par lavage
hexanique des cristaux de C1.4.3.5.
- 53 -

C1
10 g
CC silice 63-200 m,
lution 100% CH2Cl2
C1.4
378.5 mg
CC silice 63-200 m,
lution isocratique CH2Cl2/AcOEt (90:10)
C1.4.1
91.7 mg
C1.4.2
143.8 mg
C1.4.3
111.6 mg
C1.4.4
82.5 mg
CC silice 63-200 m,
lution isocratique Hex/CH2Cl2 (40:60)
C1.4.3.1
11.2 mg
C1.4.3.2
8.1 mg
C1.4.3.3
16.6 mg
1- Lavage hexanique des cristaux

2- CC silice 63-200 m,
lution isocratique CH2Cl2/AcOEt (90:10)
C1.4.3.2.1
1.0 mg
Chrom1
0.6 mg
C1.4.3.4.1
6.2 mg
C1.4.3.5
10.4 mg
C1.4.3.4
23.5 mg
C1.4.3.6
9.0 mg
Lavage hexanique
des cristaux
1- Lavage hexanique des
cristaux
2- CC silice 63-200 m,
lution isocratique CH2Cl2
Chrom2
7.1 mg
Chrom2
4.5 mg
C1.4.3.4.3
3.1 mg
Figure 50 : Schma de fractionnement de lextrait hexanique C1 des feuilles de C. odorata et isolement des
composs Chrom1 et Chrom2
1.2.2.2
Isolement du compos Chrom3
Le schma de fractionnement est prsent sur la Figure 51.

20 g de lextrait hexanique C1 est prlev puis fractionn par chromatographie sur colonne
ouverte de silice, lue successivement par un mlange Hex/CH2Cl2, CH2Cl2/AcOEt puis par
lactone et enfin par le MeOH. 12 fractions sont obtenues C1.1 C1.12. La fraction
apolaire C1.2 subit une autre chromatographie en phase normale sur colonne de silice lue
par lhexane 100% pour donner le compos Chrom3.
- 54 -

C1
20 g
CC silice 63-200 m,
lution: Hex/CH2Cl2, CH2Cl2/ACOEt, actone, MeOH
C1.1
np
100%
Hex
C1.2
10 mg
C1.3
np
90:10
Hex/CH2Cl2
80:20
Hex/CH2Cl2
C1.4
np
C1.5
np
C1.6
np
60:40
Hex/CH2Cl2
40:60
Hex/CH2Cl2
20:80
Hex/CH2Cl2
C1.7
np
100%
CH2Cl2
C1.8
np
50:50
CH2Cl2/AE
C1.9
np
C1.10
np
20:80
CH2Cl2/AE
C1.11
np
100%
AcOEt
C1.12
np
100%
actone
CC silice 63-200 m,
lution 100% Hexane
C1.2.1
1.1 mg
Chrom3
5.5 mg
Figure 51 : Schma de fractionnement de C1 et isolement de Chrom3
1.2.3
Dtermination structurale des composs isols de lextrait hexanique C1
Note : Les constantes physiques et donnes spectrales des composs isols sont prsentes en
annexes.
1.2.3.1
Dtermination de la structure du compos Chrom1
Ce compos se prsente sous la forme dune poudre blanche qui cristallise aprs vaporation
lair libre de lactone sous forme daiguilles. Il ragit positivement au ractif de Neu en
affichant une fluorescence jaune sous UV 365 nm laissant envisager une structure de type
flavonode.
Spectromtrie de masse
Sur le spectre de masse obtenu par ionisation chimique (IC) en mode positif et ngatif, nous
observons un ion quasi-molculaire m/z 301 [M+H]+ en mode positif et un ion molculaire
m/z 300 M- en mode ngatif suggrant une masse atomique de 300 uma.
Spectromtrie RMN
Les protons du cycle A dun flavonode apparaissent sur un spectre RMN-1H entre 6 et 6.5
ppm [161]. Dans cette zone, sur le spectre de RMN-1H du compos Chrom1 (Figure 52),
nous observons deux protons aromatiques couplant entre eux avec la mme constante de
couplage formant deux doublets H 6.05 et 6.08 ppm (J = 2.2 Hz), typiques dun couplage
en mta sur un cycle aromatique. Ces signaux sont caractristiques du cycle A dun
- 55 -
100%
MeOH

flavonode substitu en C-5 et C-7 et peuvent tre attribus aux protons H-6 et H-8
respectivement [162].
Les protons du cycle B dun flavonode sont visibles sur un spectre RMN-1H (Figure 52) entre
6.7 et 7.9 ppm [161]. Sur le spectre de RMN-1H de Chrom1, nous observons la prsence de
deux couples de doublets couplant en position ortho H 7.51 (d, J = 8.7 Hz) et 7.51 ppm (d,
J = 8.7 Hz) pour H-2 et H-6 et H 7.02 (d, J = 8.7 Hz) et 7.02 ppm (d, J = 8.7 Hz) pour H-3
et H-5. Ce systme 2H AA, 2H XX sur le cycle B indique quil est substitu en position 4.
Nous observons aussi (Figure 52) :
- un groupement CH H 5.55 ppm correspondant au H-2 du cycle C dune flavanone [161] ;
- un mthylne avec deux protons non quivalents H 3.23 ppm et 2.8 ppm correspondant
aux protons H-3 dune flavanone [161]. Ils sont coupls entre eux avec un grand couplage
2
J=17.7Hz ;
- un singulet dintensit 1H H 12.13 ppm caractristique dun proton dun groupement
phnol qui ralise une liaison hydrogne avec une fonction carbonyle. La position 5 du cycle
A est donc substitue par un groupe hydroxyle [163] ;
- deux groupements mthoxyle sous forme de deux singulets H 3.85 et 3.87 ppm sont les
substituants en position 4 du cycle B [164] et en position 7 du cycle A respectivement.
H-2 & H-6
H-3 & H-5
H-8
H-6
H-2
7-OCH3
4-OCH3
H-3 eq
H-3 ax
5-OH
Figure 52 : Spectre de RMN-1H du compos Chrom1 dans lactone-d6
Le spectre COSY montre bien la corrlation entre le proton du groupement CH du cycle C

H 5.55 ppm et les deux protons du groupement mthylne.
- 56 -

2.80
3.23
3.23
CH-2
5.55ppm
Figure 53 : Spectre COSY du compos Chrom1
Le spectre HSQC montre aussi que le carbone C 42.7 ppm est corrl aux deux protons H
3.23 et 2.80 ppm.
Lensemble des donnes prcdentes nous permet ainsi dtablir la structure du compos
Chrom1 comme tant de la 5-hydroxy-7,4'-dimthoxyflavanone (Figure 54). Cette structure a
t confirme grce au spectre de masse obtenu en impact lectronique (IE).
Ce compos a t identifi pour la premire fois en 1984, de toute la partie arienne
dEupatorium odoratum, par Iwu et Chiori [33]. Il a t ensuite isol des feuilles de
Chromolaena odorata par Wollenweber en 1995 [32] et par Pisutthanan en 2006 [164].
Figure 54 : Structure de 5-hydroxy-7,4'-dimethoxyflavanone (Naringenin-7,4-dimethylether) et

corrlation HSQC du compos Chrom1 ; H en bleu et C en vert
- 57 -

1.2.3.2
Ce compos a t obtenu sous la forme de cristaux jaune-orang (aiguilles cristallisation aprs

vaporation de lactone). En CCM, il prend une couleur jaune avant et aprs rvlation au
ractif de Neu en lumire visible, et une fluorescence jaune sous UV 365 nm suggrant une
structure de type flavonode, probablement une chalcone.
Sur le spectre de masse IC ralis en mode positif et ngatif, nous observons un ion quasimolculaire m/z 345 [M+H]+ en mode positif et un ion molculaire m/z 344 M- en mode
ngatif, suggrant une masse atomique de 344 uma.
Spectromtrie RMN
Le spectre de RMN-1H du compos Chrom2 prsente (Figure 55) :
- un signal singulet H 6.35 ppm caractristique dun proton du cycle A dun flavonode
trisubstitu ;
- un signal singulet H 13.73 ppm dintensit 1H attribu OH-2 caractristique dune
liaison hydrogne intramolculaire entre un groupement phnol et une fonction carbonyle
[163] (Figure 55) ;
- un doublet H 7.89 ppm (J = 15.9 Hz) dintensit 1H attribu H- dune chalcone [161] ;
- un doublet H 7.83 ppm (J = 15.9 Hz) dintensit 1H attribu H- dune chalcone [161] ;
- deux couples de doublets couplant en position ortho H 7.73 (d, J = 8.8 Hz) et 7.73 ppm (d,
J = 8.8 Hz) pour H-2 et H-6 et H 7.05 (d, J = 8.8 Hz) et 7.05 ppm (d, J = 8.8 Hz) pour H-3 et
H-5. Ce systme 2H AA, 2H XX sur le cycle B indique quil est substitu en position 4 ;
- quatre groupements mthoxyle sous forme de quatre singulets, le mthoxyle H 3.79, 3.90,
3.95 et 4.00 ppm.
- 58 -
H-
H- H-2 & H-6

H-
H-3 & H-5
H aromatique
du cycle A
2-OH
Figure 55 : Spectre RMN-1H du compos Chrom2 dans actone-d6
A ce stade, nous pouvons dire que nous sommes en prsence dune chalcone renfermant 20
protons et 6 atomes doxygne. De plus, le spectre RMN-13C prsente 19 atomes de carbone.
Ce qui est en accord avec la formule brute de C19H20O6 avec un degr dinsaturation de 10.
Nous sommes donc en prsence dune chalcone dont le cycle B est substitu en position 4 par
un mthoxyle (Figure 56). Le cycle A est substitu par un hydroxyle et trois mthoxyles.
Ltude du spectre de RMN-2D HSQC et HMBC va nous permettre de positionner les
diffrents substituants sur le cycle A.
Le spectre HSQC montre que le proton H 6.35 ppm est port par le carbone C 96.5 ppm.
Les corrlations observes en HMBC montrent que le carbone C 96.5 ppm portant le proton
H 6.35 ppm du cycle A, corrle en 3J avec le proton H 13.73 ppm (OH-2) qui son tour
corrle avec les carbones C 162.6 ppm (C-2) et 108.3 ppm (C-1). Le proton H 6.35 ppm
et le carbone C 96.5 ppm sont donc en position 3 du cycle A (Figure 56).
Figure 56 : Structure 2-hydroxy-4,4,5,6-tetramthoxychalcon et corrlations HMBC du compos

Chrom2
- 59 -

Analyse aux rayons X
L'analyse du compos Chrom2 aux rayons X a confirm la structure du compos Chrom2.
Figure 57 : Structure par analyse aux rayons X du compos Chrom2
Le spectre de masse en IE a aussi permis de confirmer la structure du compos Chrom2

comme tant la 2-hydroxy-4,4,5,6-tetramthoxychalcone. Ce compos a dj t identifi
des feuilles de C. odorata [34, 37, 165].
1.2.3.3
Ce compos a t obtenu sous forme dhuile. En CCM, il prend une couleur bleue violette
aprs rvlation la vanilline sulfurique et une fluorescence rouge brune 365 nm par
rvlation avec le ractif de Liebermann et Burchard laissant envisager une structure de type
terpnique.
Sur le spectre de masse IC en mode positif, nous observons un ion quasi-molculaire m/z
199 [M+H]+ suggrant une masse atomique de 198 uma.
Spectromtrie RMN
Le spectre RMN 1H (Figure 58) montre 5 protons aromatiques (A, B, C, D, E). Le proton HA
(large signal) H 7.98 ppm est coupl en 4J = 2.2 Hz avec HC (mta). Le proton HB (d) H
7.94 ppm est coupl en 3J = 8.7 Hz (ortho) avec HC. HC (dd) H 7.37 ppm est donc coupl
HA et HB respectivement en 4J et 3J. Les protons HD (d) H 7.29 ppm et HE (d) H 7.22
ppm sont coupls entre eux en 3J. Le proton aliphatique HF (septuplet) H 3.75 ppm est
coupl aux 6 protons aliphatiques HI (d) H 1.36 ppm en J = 7.3 Hz signalant un groupement
isopropyle. Les 3HG (s) H 2.61 ppm et 3HH (s) H 2.53 ppm sont deblinds plus que la
normale ce qui montre la prsence de deux groupements mthyle lis des noyaux
aromatiques. La masse molculaire tant 198 uma, la prsence de 5H aromatiques, 2
- 60 -

groupements mthyle et un groupement isopropyle indiquent deux cycles aromatiques
accols.
F
D
A
B
C
G
H
E
F
Figure 58 : Spectre RMN-1H du compos Chrom3 dans actone-d6
Le spectre COSY (Figure 59) montre les corrlations entre HA et HC en 4J, entre HB et HC en
3
J, entre HD et HE en 3J. Les 3HH sont corrls avec HA, HB et HC, ils sont donc sur le mme
cycle.
- 61 -

HG HH
HA H
B
HC
HI
HD
HE
HF
HI
HH
HG
HF
HE
HD
HC
HB
HA
Spectre COSY du compos Chrom3
Figure 59 : Spectre RMN-2D COSY du compos Chrom3
Le spectre RMN 13C prsente 15 signaux carbone ce qui confirme bien les deux cycles
aromatiques accols (Figure 61), les deux groupements mthyle, le groupement isopropyle, la
masse molculaire 198 uma et donc la formule molculaire C15H18. De plus le spectre RMN13
C tant dcoupl protons avec effet NOE, les carbones qui portent des protons sont plus
intenses que les carbones quaternaires (5 carbones IV).
Le spectre HSQC a permis dattribuer les dplacements chimiques des carbones qui portent
les protons (HA, HB, HC, HD, HE, HF, HH et HI).
La squence HMBC (Figure 60) montre que le proton HD est corrl avec le carbone C 28.8
ppm qui porte HF en 3J. Le proton HE est corrl avec le carbone C 19.5 ppm qui porte les
protons HG en 3J. Les enchainements possibles sont :
ou
Les protons HA, HE, et 6HI sont corrls en 3J avec le carbone quaternaire C 142.9 ppm ce
qui confirme le premier enchainement.
- 62 -

HG HH
HA H
B
HD
HE
HC
HI
HF
19.5 ppm
C-1
C-2
28.8 ppm
C-4
142.9 ppm
Figure 60 : Spectre RMN-2D HMBC du compos Chrom3
Les corrlations de HA avec le carbone C 128 ppm qui porte HC en 3J, de HC avec le
carbone C 123.7 ppm qui porte le proton HA en 3J et de HA et HC avec le carbone
quaternaire C 132.2 ppm en 3J, confirment bien la structure 4-isopropyl-1,6dimthylnaphthalne (cadalne) du compos Chrom3 (Figure 61).
Figure 61 : Corrlation COSY (A) et HMBC (B) du compos Chrom3
- 63 -
Figure 62 : Structure 4-isopropyl-1,6-dimthylnaphthalne (cadalne) du compos Chrom3
La structure du compos Chrom3 a t confirme par le spectre IE. Cest la premire fois que
ce compos est isol de cette plante et dune espce de la famille des Asteraceae. Cependant,
il a dj t isol de Siparuna macrotepala (Monimiaceae) par El-Seedi et al. en 1994 [166],
et a t identifi partir des spectres de masse et RMN-13C. En 1999, Kuo et al. [167] ont
identifi ce compos dans Juniperus formosana var. concolor (Cupressaceae) en comparant le
spectre RMN-13C obtenu avec celui El-Seedi et al. Les donnes spectrales RMN-1H et RMN2D sont prsentes ici pour la premire fois.
- 64 -
Etude phytochimique des feuilles de Morinda morindoides
Lespce M. morindoides est intressante tudier en raison de ses proprits anti-fivreuses

observes dans le traitement traditionnel du paludisme, la rougeole et la varicelle.
Dans cette tude nous nous sommes limits pour linstant la composition chimique des
huiles essentielles. Ces huiles essentielles ont t extraites par entranement la vapeur avec
un rendement denviron 0.2%. Les constituants chimiques identifis par chromatographie en
phase gazeuse (CG) et par chromatographie en phase gazeuse couple avec la spectromtrie
de masse (CG-SM) sont dtaills dans le Tableau 2 dans lAnnexe. La Figure 63 prsente la
distribution en pourcentage de ces diffrents constituants.
(E)-Phytol
6,10,14-trimthyl
pentadecan-2-one
linalol
28.4%
thymol
pentadecanal
4.8%
7%
9.6%
8.4%
-caryophyllne
mthyle linolenate
benzyle salicylate
graniol
-terpineol
D-germacrne
octadecan-9-yne
Figure 63 : Distribution en pourcentage des diffrents composants de lhuile essentielle de Morinda

mthyle salicylate
morindoides
6-demethoxy
ageratochromne
acide
hexadecanoque
(Z)-hex-3-enyle
matires
volatiles.
benzoate
tiglate de benzyle
Cinquante composs ont t identifis reprsentant 91.8% de

Ces
composs volatiles sont constitus de 10 monoterpnes (14.7%), 36 sesquiterpnes (35.4%), 7
benzyle benzoate
composs aromatiques (12.1%) et 3 diterpnes (29.6%).
(E)-damascenone
diterpne
-selinne E-phytol
La composition des huiles essentielles est domine par la prsence du

(28.4%) suivie par 6, 10, 14-trimthyl pentadecan-2-one (9.6%), le linalol (8.4%)
et le thymol
vitispirane
(7.0%). Nous constatons aisment que le constituant majeur de lhuile, lE-phytol,
pourrait
(E)-hex-3-enyle
benzoate
transmettre ses diffrentes proprits biologiques aux huiles des feuilles
de cette plante
(E, E)--farnesne
utilise en mdecine traditionnelle. En effet lE-phytol, un excellent antibactrien
et antiviral
nerol
[168-171] pourrait justifier lemploi de la dcoction des feuilles dans plusieurs
traitements
-humulne
traditionnels comme la diarrhe, la rougeole, la varicelle etc. Cette plante -elemne
pourrait donc tre
une source potentielle dE-phytol.
geranyl actone
ttradecanal
hexyle benzoate
elemol
- 65 -
eudesm-7(11)-en4-ol
10-epi-gamma
eudesmol
(E)--ionone
7-epi-g eudesmol

Ltude phytochimique base sur les composs volatils de M. morindoides est originale car
une information sur la composition chimique et une indication thrapeutique des huiles
essentielles extraites des feuilles sont fournies ici pour la premire fois.
- 66 -
Etude phytochimique des feuilles, fruits et corces de Morinda

lucida
Lespce Morinda lucida a suscit notre attention pour son usage traditionnel dans le
traitement du paludisme en Cte dIvoire.
3.1
Mtabolites secondaire volatils des feuilles et fruits : huiles

essentielles
phytol
4.08%
4.37%
5.30%
33.20%
pentadcanal
(E)-caryophyllne
thymol
5.72%
9.91%
6-demthoxy-agerochromne
6,10,14-trimthyl-pentadcan-2one
Figure 64 : Distribution en pourcentage des diffrents composants de lhuile essentielle des feuilles de
Morinda lucida
phytol
n-octanol
-caryophyllne
14.80%
6.19%
5.54%
3.30%
3.75%
5.48%
4.10%
4.30%
4.46%
4.72%
6,10,14-trimthyl-pentandcan2-one
trieicosane
6-demthoxy-ageratochromne
heptadecan-8-ne
octadcan-9-n-1-ol
pentadcanal
pentaeicosane
Figure 65 : Distribution en pourcentage des diffrents composants de lhuile essentielle des fruits de
Morinda lucida
- 67 -

Les constituants chimiques des huiles essentielles des feuilles et des fruits de M. lucida qui
ont t identifis par GC et GC-MS sont dtaills dans le Tableau 3 dans lAnnexe. Les
Figure 64 et Figure 65 prsentent les distributions en pourcentage des diffrents constituants.
Quarante-sept composs ont t identifis dans l'huile des feuilles et les principaux composs
sont lE-phytol ou phytol (33.2%) et le pentadcanal (9.9%). Cette composition chimique est
trs diffrente de celle des huiles essentielles extraites des feuilles du Nigeria [79]. En effet,
l'-terpinne (17.8%) et le -bisabolne (16.3%), les composs majoritaires des huiles
obtenues au Nigeria sont absents dans les huiles extraites des feuilles de la Cte dIvoire.
Il faut noter que la quantit en phytol dans les huiles des feuilles de cette plante est plus
leve que celles des feuilles de M. morindoides. Les huiles des feuilles de M. lucida
pourraient donc prsenter des activits antivirale et antibactrienne trs importantes.
En raison du fait quune infection virale ou bactrienne saccompagne de fivre et que la
mdecine traditionnelle ne traite que les symptmes, lemploi de la dcoction des feuilles
dans le traitement des maux accompagns de fivre comme le paludisme, serait justifi par la
forte prsence du phytol, un puissant antiviral et antibactrien [168-171].
Des huiles des fruits, 37 composs ont t identifis, les principaux constituants sont le phytol
(14.8%) et le n-octanol (6.2%). Ltude de la composition chimique des fruits de cette plante
est obtenue ici pour la premire fois.
En Cte dIvoire, le phytol est le compos majoritaire des huiles extraites des feuilles et des
fruits, avec une quantit plus importante dans les feuilles. Il serait donc prfrable dopter
pour les huiles des feuilles quand on recherche les proprits biologiques du phytol [168-171].
Cette tude phytochimique sur les composs volatils de M. lucida apporte une information sur
la composition chimique des huiles essentielles des feuilles de la Cte dIvoire et des huiles
essentielles des fruits de cette plante. De plus nous donnons ici une indication thrapeutique
des huiles extraites des feuilles de M. lucida rcoltes en Cte dIvoire.
3.2
3.2.1
Mtabolites secondaire non volatils des corces

Interprtation des CCM prliminaires de lextrait dactate dthyle M3
Des CCM prliminaires ont t menes sur lextrait dactate dthyle M3 (Figure 66). Les
informations recueillies ont t confrontes aux donnes bibliographiques collectes sur cette
espce.
Le criblage chimique en CCM a permis de mettre en vidence la prsence majoritaire
danthraquinones (ractif la potasse alcoolique, taches roses). On note cependant, la
prsence minoritaire de flavonodes (ractif de Neu, fluorescence jaune-orange et verte sous
lumire UV 365 nm).
- 68 -
A1
A2
A3
A4
A5
A6
A7
B7
B1
B2
B3
B4
B5
B6
C1
C2
C3
C4
C5
C6
C7
Figure 66 : CCM prliminaires de M3. A lution au CH2Cl2. B lution Tol/AcOeEt/MeOH (80 :18 :2). C
lution au Hex/AcOEt (50 :50). 1-UV visible. 2-UV 254 nm. 3-UV 365 nm. 4-Ractif la vanilline
sulfurique. 5-Ractif de Neu observation UV visible. 6-Ractif de Neu, observation UV 365 nm. 7-Ractif
la potasse alcoolique.
3.2.2
3.2.2.1
Purification de lextrait dactate dthyle M3

Isolement du compos Mor1
Le schma de fractionnement de lextrait dactate dthyle M3 est prsent sur la Figure 67.
Lextrait M3 (130.5 mg) subit une premire chromatographie sur colonne de silice normale
lue, dabord laide de CH2Cl2 (100%) pour donner deux fractions (M3.1 et M3.2) puis
laide dun mlange hexane/AcOEt (30 :70) pour donner 20 fractions (M3.3 M3.22). La
fraction M3.2 pure est le compos Mor1.
3.2.2.2
Isolement des composs Mor2 et Mor3
La fraction M3.3 est traite par une autre chromatographie sur colonne de silice normale en
utilisant CH2Cl2 comme luant pour conduire aux composs Mor2 et Mor3. Les autres
- 69 -

fractions (M3.4 M3.22) ont subi le mme traitement pour donner 13 composs purs dont
leurs identifications structurales sont en cours.
M3
130.5 mg
CC silice 63-200 m,
lution 100% CH2Cl2
puis Hex/AcOEt (30:70)
M3.1
1.3 mg
Mor1
0.7 mg
M3.3
6.4 mg
CH2Cl2
CH2Cl2
Hex/AcOEt
M3.4 M3.22
100.3 mg
Hex/AcOEt
CC silice 63-200 m,
lution 100% CH2Cl2
CC silice 63-200 m,
lution 100% CH2Cl2
Mor2
1.2 mg
Mor3
1.4 mg
13 composs purs
Identifications en cours
Figure 67 : Schma de fractionnement de M3 et isolement de Mor1, Mor2 et Mor3
3.2.3
3.2.3.1
Dtermination structurale des composs isols de M3

Dtermination de structure du compos Mor1
Ce compos se prsente sous la forme dune poudre jaune soluble dans lactone. En CCM, il
donne une fluorescence orange sous UV 365 nm et une coloration rose-mauve avec la
potasse alcoolique laissant envisager une structure de type anthraquinonique.
Sur le spectre de masse IC obtenu en mode positif et ngatif, nous observons un ion quasimolculaire m/z 283 [M+H]+ en mode positif et un ion molculaire m/z 282 M- en mode
ngatif suggrant une masse atomique de 282 uma. Cette masse est confirme par la mesure
de masse exacte ralise en MALDI qui indique un ion quasi-molculaire m/z 305.0410
[M+Na]+.
Spectromtrie RMN
Le spectre de RMN-1H du compos Mor1 prsente (Figure 69) :
- un signal singulet H 13.37 ppm dintensit 1H attribuable au OH dun groupement
phnol ;
- deux massifs H 8.29 ppm et H 8.37 ppm chacun dintensit 1H attribuables aux protons
H-5 et H-8 respectivement dune anthraquinone non substitue sur le cycle A ;
- un massif H 8.00 ppm dintensit 2H attribuable aux protons H-6 et H-7 du cycle A ;
- 70 -

-un doublet H 8.24 ppm (J = 8.2 Hz) dintensit 1H attribuable H-3 du cycle C ;
- un doublet H 7.85 ppm (J = 8.2 Hz) dintensit 1H attribuable H-4 couplant ainsi en
ortho avec H-3 ;
- un groupement mthoxyle sous forme de singulet H 3.93 ppm.
Les signaux H 4.4 et 4.05 ppm et tous les signaux H infrieurs 3.5 ppm sont dus aux
impurets du solvant deutr actone-d6 [172].
Le spectre COSY montre bien les corrlations 3J entre H-3/H-4, H-5/H-6 et H-7/H-8.
Le compos Mor1 est donc une anthraquinone bisubstitue en 1 et 2. Les motifs suivants
peuvent tre dduits du spectre RMN-1H et du spectre COSY :
Figure 68 : Diffrents motifs de la structure du compos Mor1
Ces motifs donnent une masse de 254 uma qui compare celle du compos Mor1 (282
uma), laisse envisager un groupement carbonyle. Les substituants sont donc le groupement
hydroxyle OH et le groupement carboxyle COOCH3. Ce qui correspond la formule brute
C16H10O5.
H-3
H-6 & H-7

H-4
H-8
H-5
OCH3
OH
Figure 69 : Spectre RMN-1H du compos Mor1 dans lactone-d6
- 71 -

Le spectre RMN-13C prsente 16 signaux carbone dont 8 carbones quaternaires, 6 CH
aromatiques et 1 CH3 confirmant ainsi la formule brute envisage.
Ltude du spectre de RMN-2D HMQC et HMBC va nous permettre de positionner les deux
substituants du cycle C.
Le spectre HMBC montre une corrlation entre le proton du groupement hydroxyle avec les
carbones C 118.1 ppm (C-13) et C 126.3 ppm (C-2) en 3J. Les carbones C-2 et C-13
corrlent leur tour avec le proton H 7.85 ppm (H-4) en 3J. De plus le carbone du CO du
groupement carboxyle C 165.8 ppm (C-15) corrl avec le proton H 8.24 ppm (H-3) et
avec les trois protons du groupement mthoxyle H 3.93 ppm. Aucune tache de corrlation
nest observe entre ce carbone et le proton H-4.
8.24 ppm
7.85 ppm
H-3
H-4
13.37 ppm
OH-1
3.94 ppm
OCH 3 -15
C-13
118.1 ppm
C-2
126.3 ppm
C-15
165.8 ppm
Figure 70 : Spectre HMBC dans lactone-d6 et corrlations HMBC du compos Mor1
Figure 71 : Structure 2-actyl-1-hydroxyanthraquinone du compos Mor1
- 72 -

Ces rsultats suggrent une structure 2-actyl-1-hydroxyanthraquinone du compos Mor1
(Figure 71). 2-actyl-1-hydroxyanthraquinone est une nouvelle anthraquinone de M. lucida et
du genre Morinda. Cependant, il a t isol par Wu et al. en 2003 partir de lextrait de
mthanol des corces de Rubia wallichiana [173], une espce appartenant un autre genre de
la famille des Rubiaceae. Ils ont identifi ce compos partir des spectres SM, UV, IR, RMN1
H et NOESY. Nous prsentons ici pour la premire fois les donnes RMN-13C, HMBC et
HSQC. De plus, le spectre RMN-1H obtenu dans lactone-d6 a permis de diffrencier les
protons H-5 et H-8. De mme les spectres HSQC et HMBC ont permis de diffrencier les
carbones C-6 et C-7. Ces informations nont pas pu tre accessibles dans les travaux Wu et al.
3.2.3.2
Dtermination de la structure du compos Mor2
Le compos Mor2 a t obtenu sous la forme de cristaux jaune (aiguilles cristallisation aprs
vaporation de lactone). En CCM, il donne une fluorescence orange sous UV 365 nm et
une coloration rose-mauve avec la potasse alcoolique laissant envisager une structure de type
anthraquinonique.
Sur le spectre de masse IC, nous observons en mode positif un ion quasi-molculaire m/z
255 [M+H]+ et un ion molculaire m/z 254 M+ ; en mode ngatif un ion molculaire m/z
254 M-suggrant une masse atomique de 254 uma.
Spectromtrie RMN
Le spectre de RMN-1H du compos Mor2 (Figure 72) prsente des similitudes avec celui du
compos Mor1 :
- un large singulet H 9.26 ppm dintensit 1H attribuable au OH dun groupement phnol ;
- un massif H 8.24 ppm dintensit 2H attribuable aux protons H-5 et H-8 du cycle A ;
-un doublet H 8.04 ppm (J = 8.4 Hz) dintensit 1H attribuable H-4 du cycle C ;
- un massif H 7.89 ppm dintensit 2H attribuable aux protons H-6 et H-7 ;
- un doublet H 7.37 ppm (J = 8.4 Hz) dintensit 1H attribuable H-3 couplant ainsi en
ortho avec H-3 ;
Le spectre COSY confirme les corrlations 3J entre H-3/H-4, H-5/H-6 et H-7/H-8.
- 73 -
OCH3
H-4
H-3
H-6 & H-7
H-5 & H-8

OH
Le compos Mor2 est donc une anthraquinone bisubstitue avec un groupement hydroxyle et
mthoxyle comme substituants, ce qui correspond une formule brute C15H10O4. Cette
formule est confirme par le spectre RMN-13C qui prsente 15 atomes de carbone dont 8
carbones quaternaires, 6 CH aromatiques et 1 CH3.
Ltude des spectres de RMN 2D HMQC et HMBC ont permis de positionner le groupement
hydroxyle en position 1 et le groupement mthoxyle en 2 sur le cycle C. La structure du
compos Mor2 est donc 2-hydroxy-1-mthoxyanthraquinone connu sous le nom de alizarin-1mthylther. Ce compos dj t isol des corces de M. lucida [81].
Figure 73 : Corrlations HMBC du compos Mor2
- 74 -
Figure 74 : Structure 2-hydroxy-1-mthoxyanthraquinone (alizarin-1-mthylther) du compos Mor2
3.2.3.3
Dtermination de structure du compos Mor3
Le compos Mor3 a t obtenu aussi sous forme daiguilles jaunes aprs vaporation de
lactone. En CCM, il donne une fluorescence orange sous UV 365 nm et une coloration
rose-mauve avec la potasse alcoolique laissant envisager une structure de type
anthraquinonique.
Sur le spectre de masse IC obtenu en mode positif et ngatif, nous observons un ion quasimolculaire m/z 329 [M+H]+ en mode positif et un ion molculaire m/z 328 M- en mode
ngatif suggrant une masse atomique de 328 uma. La comparaison du spectre IE du compos
Mor3 avec ceux de la base de donnes spectrale indique les formules brutes C19H20O5 et
C18H16O6.
Spectromtrie RMN
Sur le spectre RMN-1H du compos Mor3 nous observons (Figure 75) :
- un large singulet H 9.23 ppm dintensit 1H attribuable au OH dun groupement phnol ;
- quatre doublets H 8.03 ppm (J= 8.0 Hz), 7.98 ppm (J= 8.5 Hz), 7.87 ppm (J= 8.0 Hz) et
7.36 ppm (J= 8.5 Hz) dintensit chacun 1H et couplant en ortho, sont les protons
aromatiques caractristiques dune anthraquinone ttrasubstitue (deux substituants sur
chaque cycle A et C) ;
-un singulet H 4.63 ppm dintensit 2H attribuable CH2O ;
- trois groupements mthoxyle sous forme de singulet H 3.93, 3.91 et 3.46 ppm.
- 75 -

OCH3
OCH3
OCH3
CH2O
4H aromatiques
OH
Le spectre RMN-13C avec dition DEPT90 et DEPT135 du compos montre 18 atomes de

carbone dont 10 carbones quaternaires (dont 2CO et 8 carbones quaternaires aromatiques),
4CH aromatiques, 1CH2 et 3CH3 suggrant la formule C18H16O6.
A ce stade nous pouvons dire que le compos Mor3 est une anthraquinone bisubstitue sur
chaque cycle A et C avec les quatre protons aromatiques coupls en ortho deux deux. Les
spectres HSQC et HMBC vont permettre dattribuer la structure de la molcule.
Les 3H de OCH3 H 3.46 ppm corrlent en 3J avec le carbone C 69.5 ppm qui porte les 2H
H 4.63 ppm de CH2O. Ces deux protons corrlent leur tour avec le carbone C 134.1
ppm portant le proton H 7.87 ppm et avec le carbone quaternaire C 158.7 ppm en 3J. Ils
corrlent aussi avec le carbone quaternaire C 141.0 ppm en 2J.
Le proton H 7.87 ppm corrle avec le carbone C 69.5 ppm du CH2O en 3J, avec les
carbones quaternaires C 137.2 et 158.7 ppm en 3J. Ce qui donne le motif suivant :
- 76 -

Le carbone quaternaire C 141.0 ppm corrle avec le proton H 8.03 ppm port par le
carbone C 123.5 ppm en 3J. Le carbone C 158.7 ppm est en corrlation avec les 3H du
groupement mthoxyle H 3.91 ppm ports par le carbone C 62.3 ppm. Ce qui donne le
cycle C et ses substituants :
Le proton H 8.03 ppm corrle avec les carbones quaternaires C 125.9 et 141.0 ppm en 3J
et avec le carbone carbonyle C 182.9 ppm.
Les 3H du groupement mthoxyle H 3.93 ppm ports par le carbone C 61.8 ppm
corrlent avec le carbone quaternaire C 147.8 ppm en 3J, qui son tour, corrle avec le
proton H 7.36 ppm port par le carbone C 121.9 ppm en 3J. Ce proton corrle en 3J avec
le carbone quaternaire C 129.3 ppm.
Le proton H 7.98 ppm port par le carbone C 125.6 ppm corrle en 3J avec les carbones
quaternaires C 181.9 ppm du groupement carbonyle, C 126.9 et 157.3 ppm. Le carbone
C 157.3 ppm est certainement celui qui porte le groupement hydroxyle. Do lobtention du
cycle A et ses substituants :
- 77 -
Les principales corrlations observes en HMBC sont dcrites la Figure 76.

De tout ce qui prcde, nous pouvons attribuer le compos Mor3 la structure 1,5,15trimthylmorindol.
Figure 76 : Structure 1,5,15-trimthylmorindol et corrlations HMBC du compos Mor3
Le compos Mor3 est une nouvelle anthraquinone de M. lucida. Il a t isol pour la premire
fois des feuilles de Morinda citrifolia par Takashima et al. en 2007 [174]. Dans la mme
anne, Akihisa et al. [175] lont isol des fruits de M. citrifolia. Les tudes de Takashima et
al. ont montr que le compos 1,5,15-trimthylmorindol ne prsente pas une activit
cytotoxique importante sur les cellules de la ligne leucmique humaine T, Jurkat ; mais
dmontre une cytotoxicit importante (CI50 de 14.5 15.0 g/mL) lorsquil est combin avec
0.5 1.5 g/mL de protine TRAIL (Tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing
ligand), un ligand inducteur dapoptose reli au facteur de ncrose tumorale. Ces rsultats
suggrent que le traitement combin du compos 1,5,15-trimthylmorindol avec la protine
TRAIL pourrait tre une nouvelle stratgie pour le traitement du cancer [174].
Il faut noter quil sagit ici du premier isolement des composs 2-actyl-1hydroxyanthraquinone (Mor1), alizarin-1-mthylther (Mor2) et 1,5,15-trimthylmorindol
(Mor3) des feuilles de lespce M. lucida de cte dIvoire.
- 78 -
Etude phytochimique des feuilles de Leptoderris fasciculata
Lespce Leptoderris fasciculata a suscit notre intrt dune part pour son usage traditionnel
en Cte dIvoire (arrt dhmorragie chez les femmes aprs accouchement) et dautre part,
cette espce na fait lobjet daucune tude phytochimique dans la littrature. Dans cette
tude, seuls les extraits de CH2Cl2 (L2) et dAcOEt (L3) ont t soumis des investigations
phytochimiques plus approfondies.
4.1
Interprtation des CCM prliminaires

dichloromthane (L2) et dactate dthyle (L3)
des
extraits
de
Ltude des diffrentes CCM de lextrait de CH2Cl2 (L2) nous a montr la prsence de
composs phnoliques, tels que les flavonodes (ractif de Neu, fluorescence jaune-orange,
bleue et verte sous lumire UV 365 nm) (Figure 77).
Les produits apolaires de lextrait de CH2Cl2 (L2) semblent tre des terpnes ou des strodes
(coloration bleue violette par rvlation la vanilline sulfurique et fluorescence 365 nm par
rvlation avec le ractif de Liebermann et Burchard) (Figure 77).
Lextrait polaire dAcOEt (L3) semble contenir des acides phnoliques assez polaires
(fluorescence bleue en UV 365 nm).
- 79 -
L2
L3
Figure 77 : CCM prliminaires de lextrait de dichloromthane (L2) et dactate dthyle (L3). A lution
au CH2Cl2. B lution Tol/AcOeEt/MeOH (80 :18 :2). C lution lAcOEt. 1-UV visible. 2-UV 254 nm. 3UV 365 nm. 4-Ractif la vanilline sulfurique. 5-Ractif de Neu observation UV visible. 6-Ractif de Neu,
observation UV 365 nm. 7-Ractif de Liebermann et Burchard, observation UV visible. 8-Ractif de
Liebermann et Burchard, observation UV 365 nm.
Lisolement de molcules des extraits de CH2Cl2 L2 et dAcOEt L3 de L. fasciculata sest

rvl tre particulirement difficile en raison de la prsence de traines sur CCM. Ces
traines (de couleur marron en UV 254 nm) sont prsentes dans toutes les gammes de polarit
- 80 -

ce qui rend lisolement de molcules pures extrmement dlicat. Par consquent le travail
prliminaire ltude des composs de cette plante a consist tester de nombreuses
mthodes chromatographiques en association avec divers systmes de solvants afin de mettre
au point un systme de fractionnement permettant la sparation des composs de lextrait.
Lutilisation en alternance des techniques de chromatographie dadsorption, de partage et
dinteraction hydrophobe permet en partie de remdier ce problme mais de nombreuses
phases de purification sont ncessaires rendant le rendement final en compos pur trs faible.
Purification de lextrait de dichloromthane L2
4.2
Les schmas disolement des produits Lep1, Lep2, Lep3 et Lep4 (Figure 78), Lep5, Lep6,
Lep7, et Lep8 (Figure 79) partir de lextrait L2 sont prsents ci-dessous.
L2
8.45 g
CC silice 63-200 m, lution: Hex/CH2Cl2,
(gradient 75:25 0:100)
L2.1
31.5 mg
L2.2
42.5 mg
L2.3
35.0 mg
75:25
75:25
CC sephadex LH20,
lution 100% CHCl3
L2.1.1
8.9 mg
L2.1.2
8.6 mg
L2.1.3
7.7 mg
L2.4
34.0 mg
60:40
CC sephadex LH20,
lution 100% CHCl3
L2.3.1
20.8 mg
L2.3.2
10.3 mg
CC silice 63-200 m,
lution: Tol/AcOEt
(gradient 100:0 et 80:20)
L2.1.2.1
0.6 mg
L2.3.2.1
1.9 mg
80:20
CC silice C18,
lution: MeOH/H2O
(gradient 80:20 90:10)
L2.1.2.2.1
0.8 mg
L2.1.2.2.2
1.5 mg
80:20
85:15
L2.1.2.2.3
3.1 mg
90:10
L2.3.2.1.1
0.2 mg
L2.3.2.1.2
1.5 mg
90:10
88:12
Lep1
0.7 mg
L2.4.3
15.7 mg
80:20
L2.4.3.1
2.3 mg
L2.4.3.2
6.8 mg
95:05
MeOH/H2O
100:0
90:10
MeOH/H2O MeOH/CH2Cl2
L2.4.3.3
4.9 mg
90:10
MeOH/H2O
L2.9.2
23.8 mg
100:0
MeOH/H2O
95:05
MeOH/H
L2.4.3.3.1.2
0.5 mg
100:0
MeOH/H2O
Lep4
0.7 mg
L2.4.3.3.2
0.7 mg
Lep3
2.6 mg
90:10
MeOH/CH2Cl2
Figure 78 : Schma disolement de Lep1, Lep2, Lep3 et Lep4. (a) L2.5 184 mg Hex/CH2Cl2 (60:40); L2.6
127.3 mg Hex/CH2Cl2 (50:50); L2.7 126.1 mg Hex/CH2Cl2 (40:60); L2.8 136.9 mg Hex/CH2Cl2 (40:60)
- 81 -
L2.9.3
30.5 mg
50:50
MeOH/CH2Cl2
C Plaque prparative silice C18,

lution: MeOH/H2O 95:05
CC silice C18,
lution gradient MeOH/H2O
puis MeOH/CH2Cl2
L2.4.3.3.1.1
0.2 mg
L2.10
470.8 mg
0:100
CC silice C18,
lution gradient MeOH/H2O
puis MeOH/CH2Cl2
CC sephadex LH20,
lution 100% CHCl3
L2.4.3.3.1
3.6 mg
Lep2
0.9 mg
0:100
L2.9.1
4.7 mg
70:30
CC silice C18,
lution MeOH/H2O
puis MeOH/CH2Cl2
CC silice 63-200 m,
lution: Hex/AcOEt 84:16
L2.3.2.1.2.1
0.4 mg
L2.9
95.6 mg
CC silice 63-200 m, 60:40 40:60

lution: Hex/CH2Cl2,
(gradient 100 :0 70:30)
22.4.2
2.7 mg
L2.3.2.2
6.8 mg
CC silice 63-200 m,
lution: Hex/AcOEt
CC silice 63-200 m,
lution: Tol/AcOEt 80:20
L2.1.2.2.2.1
0.4 mg
L2.4.1
1.2 mg
100:0
CC silice C18,
lution: MeCN/CHCl3 95:05
L2.1.2.2
7.3 mg
100:0
60:40
L2.5-L2.8
(a)

L2.10
470.8 mg
CC silice 63-200 m,
lution: Hex/AcOEt
L2.10.1
50.1 mg
L2.10.2
62.7 mg
80:20
80:20
L2.10.3
51.3 mg
70:30
CC silice C18,
lution: MeOH/H2O
(gradient 80:20 90:10)
L2.10.2.1
8.2 mg
L2.10.2.2
20.0 mg
80:20
L2.10.4
73.0 mg
70:30
L2.10.4.1
21.1 mg
Lep6
1.0 mg
90:10
C Plaque prparative
silice normale,
lution: hex/AcOEt 70:30
L2.10.2.2.1
7.6 mg
CC silice C18,
lution MeOH/H2O 70:30
C Plaque prparative
silice C18,
L2.10.4.2
6.7 mg
CC sephadex,
lution MeOH
extraction
hexanique
puis
rcristallisation
L2.10.2.2.2
4.8 mg
Lep7
1.0 mg
L2.10.4.2.1
2.7 mg
L2.10.4.2.2
3.8 mg
C Plaque prparative
silice normale,
lution: hex/AcOEt
50:50
CC sephadex,
lution CHCl3
L2.10.2.2.1
1.4 mg
L2.10.2.2
3.1 mg
L2.10.4.2.2.1
2.7 mg
C Plaque prparative
silice normal
lution: hex/AcOEt 70:30
Lep5
2.0 mg
L2.10.4.2.2.2
1.6 mg
C Plaque
prparative
silice C18,
Lep8
0.7 mg
Figure 79 : Schma disolement des composs Lep5, Lep6, Lep7, Lep8
Lextrait L2 (8.45 g) a subi un premier fractionnement par chromatographie en phase normale

sur colonne ouverte laide dun gradient hexane/CH2Cl2 pour donner dix fractions (L2.1
L2.10).
4.2.1
La fraction L2.1 a t soumise un fractionnement par chromatographie dinteraction

hydrophobe sur gel de Sephadex LH20 lue au CHCl3. Trois fractions sont obtenues
(L2.1.1 L2.1.3). La sous-fraction L2.1.2 est traite par chromatographie en phase normale
laide dun gradient Tol/AcOEt permettant dobtenir deux sous-fractions (L2.1.2.1 et
L2.1.2.2). La fraction L2.1.2.2 subit une chromatographie en phase inverse et est lue sur
colonne C18 laide dun gradient MeOH/H2O pour donner trois sous-fractions (L2.1.2.2.1
L2.1.2.2.3). La sous-fraction L2.1.2.2.2 est soumise une dernire chromatographie en phase
normale avec comme luant Tol/AcOEt (80:20), pour donner le compos Lep1. Ce produit se
dgrade trs rapidement lorsquil est chauff une temprature voisine de 40C.
- 82 -

4.2.2
La fraction L2.3 a subi une chromatographie dinteraction hydrophobe sur gel de Sephadex
LH20 lue au CHCl3 pour donner deux fractions L2.3.1 et L2.3.2. Cette dernire est soumise
une chromatographie en phase inverse (C-18) et est lue sur une colonne C18 avec un
mlange de MeCN/CHCl3 (95:05) permettant dobtenir 3 sous-fractions (L2.3.2.1 L2.3.2.3).
La sous-fraction L2.3.2.3 est purifie par deux chromatographies successives sur colonnes en
phase normale lues avec des mlanges de Hex/AcOEt pour obtenir le compos Lep2.
4.2.3
La fraction L2.4 a t soumise une chromatographie sur gel de silice laide dun gradient
Hex/CH2Cl2 pour donner 3 fractions (L2.4.1 L2.4.3). La fraction L2.4.3 subit une
chromatographie en phase inverse laide dun gradient MeOH/H2O puis dun mlange de
MeOH/CH2Cl2 (90:10) pour donner 3 sous-fractions (L2.4.3.1 L2.4.3.3). Un traitement de la
sous-fraction L2.4.3.3 par chromatographie dinteraction hydrophobe avec du CHCl3 conduit
deux fractions L2.4.3.3.1 et L2.4.3.3.2. La fraction L2.4.3.3.1 subit enfin une
chromatographie en phase inverse, est lue laide dun gradient MeOH/H2O puis un
mlange de MeOH/CH2Cl2 (90:10) pour conduire au compos Lep3.
4.2.4
La fraction L2.9 subit une chromatographie en phase inverse sur colonne lue avec un
gradient MeOH/H2O puis un mlange de MeOH/CH2Cl2 (90:10) pour donner 3 sous-fractions
(L2.9.1 L2.9.3). La sous-fraction L2.9.1 est soumise une chromatographie en phase
inverse sur plaque prparative lue par un mlange MeOH/H2O (90:10) pour obtenir le
compos Lep4.
4.2.5
Isolement des composs Lep5, Lep6, Lep7 et Lep8
La fraction L2.10 est soumise une chromatographie sur gel de silice laide dun gradient
hexane/AcOEt pour donner 4 fractions (L2.10.1 L2.10.4). La fraction L2.10.2 subit un
fractionnement par chromatographie en phase inverse sur colonne, en utilisant un gradient
MeOH/H2O permettant ainsi dobtenir 3 sous-fractions (L2.10.2.1 L2.10.2.3).
La sous-fraction L2.10.2.2 est traite par deux chromatographies en phase normale sur
plaques prparatives lues avec un mlange hexane/AcOEt. Entre elles, est interpose une
chromatographie dinteraction hydrophobe sur gel de Sephadex LH20 lue au CHCl3 pour
obtenir le compos Lep5.
La fraction L2.10.3 sur CCM montre la prsence dun polyphnol. Il a t, isol par
chromatographie en phase inverse sur plaque prparative lue avec le MeOH/H2O (90:10), et
nomm Lep6.
- 83 -

La fraction L2.10.4 est fractionne par chromatographie de partage sur silice RP-18 en
utilisant le systme MeOH/H2O (70:30) comme luant. Deux sous-fractions sont obtenues
(L2.10.4.1 et L2.10.4.2).
Une extraction hexanique suivie dune recristallisation dans lhexane de la sous-fraction
L2.10.4.1 donne le compos Lep7.
La sous-fraction L2.10.4.2 est soumise une chromatographie dinteraction hydrophobe et est
lue au MeOH pour donner deux fractions L2.10.4.2.1 et L2.10.4.2.2. Cette dernire subit
successivement deux chromatographies sur plaques prparatives. Une en phase normale lue
avec un mlange de Hex/AcOEt (50:50) puis une en phase inverse lue avec MeOH/H2O
(75:25) pour obtenir le compos Lep8.
4.3
4.3.1
Dtermination structurale des composs isols de lextrait de

dichloromthane L2
Le compos Lep6 se prsente sous forme de fines aiguilles jaunes pales solubles dans le
chloroforme. Ce compos ragit avec le ractif de Neu en affichant une fluorescence UV
365 nm (marron fonc) laissant envisager une structure de type flavonode.
Le spectre de masse obtenu en IC puis en haute rsolution electrospray en mode positif
(HRESI+) prsentent un ion quasi-molculaire m/z 343 [M+H]+ (pour IC) et m/z
343.11713 [M+H]+ (pour HRESI+) suggrant une masse atomique de 342 uma et une formule
brute C19H18O6.
Spectromtrie RMN
Le proton H-2 du cycle C dune isoflavone apparat comme un singulet sur un spectre RMN1
H entre 7.79 et 7.81 ppm dans CDCl3 [176, 177] et entre 8.02 et 8.48 ppm dans les solvants
polaires DMSO-d6, actone-d6, CD3OD [178-180]. Lexamen du spectre RMN 1H du
compos Lep6 ralis dans CDCl3 (Figure 80) montre un singulet dintgration 1H H 7.81
ppm caractrisant le proton H-2 dune isoflavone. Cette structure est confirme par la
prsence dun singulet 1H H 8.07 ppm sur un spectre RMN-1H ralis dans lactone-d6.
Nous observons aussi :
- un singulet dintensit 1H H 6.69 ppm caractristique dun proton du cycle A dun
flavonode [161] indiquant une trisubstitution du cycle A de la gnine isoflavone ;
- deux doublets dintgration 2H chacun, couplant en ortho, H 6.96 ppm (J = 8.8 Hz) et H
7.48 ppm (J = 8.8 Hz), attribuables H-3, H-5et H-2, H-6 respectivement [161] Ce
systme 2H AA, 2H XX sur le cycle B indique quil est substitu en position 4 ;
- 84 -

- quatre groupements mthoxyle sous forme de quatre singulets ; le mthoxyle H 3.84 ppm
est le substituant en position 4 du cycle B [164] et les trois groupements mthoxyles H
3.92, 3.96 et 3.97 ppm sont les trois substituants du cycle A.
OCH 3
4-OCH3
OCH 3
H-2
H-2 & H-6
H du
H-3 & H-5 cycle A
OCH 3
Figure 80 : Spectre RMN-1H du compos Lep6 dans CDCl3
Le spectre RMN-13C avec dition DEPT90 et DEPT135 du compos Lep6 prsente dix-neuf
signaux carbone dont neuf quaternaires dont un groupement carbonyle (C 175.32 ppm), six
CH et quatre CH3 confirmant ainsi la formule brute C19H18O6 et la gnine isoflavone
tetrasubstitue.
Le spectre RMN-2D HSQC permet aisment dattribuer les dplacements chimiques, des
carbones qui portent les protons du cycle B, du carbone qui porte le proton H 7.81 ppm (H2), du carbone qui porte le proton du cycle A et du carbone du substituant mthoxyle du cycle
B.
Ltude des spectres RMN-2D HSQC et HMBC va nous permettre de positionner les
diffrents substituants sur le cycle A.
Les corrlations observes en HMBC (Figure 81) montrent que les protons du groupement
mthoxyle H 3.92 ppm corrlent avec le carbone C 140.76 ppm qui corrle son tour
avec le proton H 6.69 ppm. Ce dernier corrle avec le carbone C 154.79 ppm qui corrle
son tour avec le proton H-2 H 7.81 ppm correspondant lenchainement suivant :
- 85 -
Lensemble des donnes prcdentes nous permet didentifier le compos Lep6 comme tant
la 4,5,6,7-tetramthoxyisoflavone.
3.92 ppm
6-OCH3
7.81 ppm
6.69 ppm
H-2
H-8
C-6
140.76 ppm
C-9
154.79 ppm
Figure 81 : Spectre RMN-2D HMBC du compos Lep6
Le spectre NOESY confirme bien les effets NOE entre les protons du mthoxyle H 3.96
ppm et le proton H 6.69 ppm du cycle A et entre le proton H 7.81 ppm du cycle C et le
proton H 7.48 ppm du cycle B.
- 86 -
Figure 82 : Corrlation COSY (rouge), NOESY (vert) et HMBC (noir) du compos Lep6
Figure 83 : Structure 4,5,6,7-tetramthoxyisoflavone du compos Lep6
Analyse aux rayons X

L'ensemble des donnes aux rayons X a confirm la structure du compos Lep6.
Figure 84 : Structure par analyse aux rayons X du compos Lep6
Le compos Lep6 est un nouveau produit naturel qui na jamais t identifi ni isol dune
plante. Cependant il a t synthtis partir du 3,4,5-trimthoxyphnol et du pmthoxyphnyl actyl chloride en presence du complexe BF3-Et2O pour donner dabord la 6hydroxy-2,3,4-trimthoxyphnyl p-mthoxybenzyle ctone qui aprs cyclisation avec un
mlange de N,N-carbonyldiimidazole/acide formique dans THF conduit la 4,5,6,7tetramthoxyisoflavone [176].
- 87 -

4.3.2
Le compos Lep8 se prsente sous forme de fines aiguilles jaunes pales soluble dans le
CHCl3. Ce compos prsente une tache orange avec le rvlateur vanilline sulfurique et ragit
avec le ractif de Neu en affichant une fluorescence jaune en UV 365 nm laissant envisager
un polyphnol de type flavonode
Sur le spectre de masse IC ralis en mode positif et ngatif, nous observons un ion quasi
molculaire m/z 329 [M+H]+ en mode positif et m/z 327 [M-H]- en mode ngatif,
suggrant une masse atomique de 328 uma et une formule brute de C18H16O6. La mesure de
masse exacte ralise en MALDI haute rsolution indique un ion quasi-molculaire m/z
329.1023 [M+H]+ confirmant ainsi la formule brute envisage.
Spectromtrie RMN
Le spectre RMN-1H ralis dans lactone-d6 du compos Lep8 (Figure 85) prsente une trs
grande similarit avec celui du compos Lep6. En effet, nous retrouvons le signal du proton
du cycle C et les signaux des protons aromatiques des cycles A et B dune isoflavone
substitue en 5,6,7 et 4 : H-2 H 8.01 ppm (s), H-8 H 6.74 ppm (s), H-2et H-6 H 7.51
ppm (d, J = 8.8 Hz), H-3 et H-5 H 6.96 ppm (d, J = 8.8 Hz) (Figure 87).
Nous observons aussi trois groupements mthoxyle sous forme de trois singulets. Le
groupement mthoxyle H 3.83 ppm est le substituant en position 4 du cycle B [164] et les
deux groupements mthoxyle H 3.889 et 3.891 ppm sont sur le cycle A. Il nous manque un
substituant du cycle A, certainement un groupement hydroxyle (absence surprenante sur le
spectre RMN-1H) vu la formule brute envisage : C18H16O6.
- 88 -
OCH3
OCH3
4-OCH3
H-2
H-2 & H-6
H-3 & H-5
H-8
Figure 85 : Spectre RMN-1H du compos Lep8 dans lactone-d6
Le spectre RMN-13C avec dition DEPT90 et DEPT135 du compos Lep8 prsente dix-huit
signaux carbone dont neuf quaternaires dont un groupement carbonyle (C 174.84 ppm), six
CH et trois CH3 confirmant le groupement hydroxyle comme tant le quatrime substituant.
Des donnes prcdentes et des spectres RMN-2D (HSQC et HMBC) mais aussi des spectres
NOESY, on peut en conclure aisment que le proton H 6.74 ppm situ sur le cycle A
portant la fois le groupement hydroxyle et les deux groupements mthoxyle ne peut pas tre
ct dun groupement mthoxyle car aucune tache de corrlation en NOESY nest visible
entre ce proton et les protons dun des groupements mthoxyle. Le proton ne peut tre qu
ct du groupement hydroxyle.
De plus le spectre RMN-2D HMBC montre des taches de corrlation entre le proton H 6.74
ppm avec le carbone C 113.38 ppm (forte intensit) et avec le carbone C 155.57 ppm
(intensit moyenne) qui corrle son tour avec le proton H 8.01ppm (corrlation intense).
- 89 -
Figure 86 : Corrlation COSY (rouge), NOESY (vert) et HMBC (noir) du compos Lep8
Lensemble des donnes prcdentes nous permet didentifier le compos Lep8 comme tant
la 7-hydroxy-4,5,6-trimthoxyisoflavone.
Figure 87 : Structure 7-hydroxy-4,5,6-trimethoxyisoflavone du compos Lep8
Ce compos a t isol des racines de Baphia bancoensis Aubrv. [180] et des corces de
Dipteryx alata Vogel [177], deux espces de Fabaceae. Les donnes RMN de Lep8 repass
dans le CDCl3 sont en accord avec les dplacements chimiques (1H) et (13C) obtenus dans
les travaux prcdents.
4.3.3
Le compos Lep3 se prsente sous la forme dune poudre blanche, soluble dans le CHCl3. Ce
compos prend une coloration violette aprs rvlation en CCM par de la vanilline sulfurique
et une fluorescence bleue au ractif de Liebermann-Burchard ( 365 nm) suggrant un
compos de type triterpnique.
Le spectre de masse IC prsente en mode positif un ion quasi-molculaire m/z 427 [M+H]+
et en mode ngatif, un ion quasi molculaire m/z 425 [M-H]- et un ion molculaire m/z
426 M+.
La mesure du spectre de masse IE en mode positif (Figure 88) montre un ion m/z 426 qui
correspond lion molculaire M+. Le spectre du compos Lep3 prsente galement des ions
rsultant de la fragmentation de la molcule et notamment lion B m/z 207 qui est
caractristique des cycles A et B dun triterpne (voir schma Figure 88) [181, 182]; la perte
- 90 -
Relative Abun
60
50
40
30
20
18.99les cycles A et B portent un groupement

par cet ion10 dune
molcule deau
indique que
19.03 19.14
18.40 18.49
19.20 19.29 19.34 19.39 19.51 19.59 19.64 19.69
18.64 18.72 18.78
hydroxyle, trs
probablement
en
position
3
pour
des
raisons
de biosynthse.
0
18.4
18.5
18.6
18.7
18.8
18.9
19.0
19.1
Time (min)
19.2
19.3
19.4
19.5
19.6
19.7
KFP10076_GCIE #4396-4409 RT: 18.86-18.91 AV: 14 SB: 141 18.49-18.70 , 19.36-19.69 NL: 1.13E6
[B]
T: + c Full ms [ 20.00-600.00]
207.1
[B-18]
100
189.2
90
[A]
Relative Abundance
80
[M+]
218.2
426.4
70
121.1
95.1
93.1
60
135.1
50
69.1
67.1
40
30
81.0
147.1
43.1
175.2
[M-15]
219.2
20 41.1
411.4
315.3
234.2
427.4
257.2
272.3 299.3
10
317.3
393.4
344.3 370.3
428.4
0
50
100
150
200
250
300
m/z
350
400
450
481.2
521.3
500
553.2
550
590.3
600
Figure 88 : Spectre de masse IE du compos Lep3
Spectromtrie RMN
La majorit des signaux du spectre RMN-1H du compos Lep3 (Figure 89) est observe dans
la rgion des hauts champs indiquant la prsence de protons aliphatiques. Parmi ceux-ci, le
spectre prsente un profil typique de triterpne avec la prsence de sept groupements mthyles
: six formant des singulets (H 1.05, 0.98, 0.96, 0.84, 0.81 et 0.77 ppm) et un formant un
doublet ddoubl H 1.70 ppm (dd, J = 1.3 Hz, J = 0.6 Hz) [183].
- 91 -
Me-26
Me-24
Me-23
Me-27
H-29a
H-29b
Me-25 Me-28
H-30
H-3
H-19
Nous observons galement la prsence du signal caractristique dun proton CH hydroxyl en

position 3 H 3.22 ppm et des signaux de deux protons olfiniques H 4.58 et 4.71 ppm.
Les 30 signaux du spectre RMN-13C du compos Lep3 confirment la prsence dun triterpne
(Figure 90) avec sept mthyles dont lexprience HSQC a permis de dfinir les corrlations
protons (C 28.0/H 1.70, C 15.4/H 0.81, C 16.1/H 0.96, C 16.0/H 1.05, C 14.6/H 0.84, C
18.0/H 0.77 et C 19.3/H 0.98 ppm). Par ailleurs, nous observons la prsence dun carbone
quaternaire olfinique C 151.1 ppm et dun carbone secondaire olfinique C 109.4 ppm.
Les dplacements chimiques du CH C 79.1/H 3.22 ppm confirment la prsence dun
groupement hydroxyle (Figure 90).
Les signaux dun CH C 55.3/H 0.70 ppm sont caractristiques du CH-5 dune transdcaline A/B [184].
Lobservation conjointe des spectres de RMN-1H et 13C nous indique la prsence des signaux
caractristiques dun groupement isoprne. En effet, les deux protons du CH2 olfinique (C
109.4/H 4.58 et 4.71 ppm) couplent entre eux formant chacun un doublet (J = 2.5 Hz)
ddoubl par le couplage avec les protons du mthyle H 1.70 ppm (dd, J = 1.3 Hz, J = 0.6
Hz).
Toutes ces informations nous permettent de dduire la formule brute du compos Lep3
C30H50O et de calculer les quivalents de doubles liaisons (EDL) afin denvisager le nombre
de liaisons conjugues et/ou de cycles que compte la structure. La formule brute indique 6
- 92 -

degrs dinsaturations, nous pouvons mettre lhypothse que le compos Lep3 est un
triterpne pentacyclique dont le cycle E est 5 liaisons et est substitu par un groupement
isoprnyle. Le compos Lep3 peut donc tre de type lupane ou hopane [184].
Toutes les autres valeurs de protons et de carbones ont t attribues daprs lanalyse des
spectres COSY, HSQC et HMBC (Figure 90), elles concordent avec une structure de type
lupne. [185, 186]
Figure 90 : Corrlations observes sur le spectre HMBC du compos Lep3
En effet, en raison de lloignement de la chane latrale trois carbones dans le squelette

hopne (Figure 91), le C-13 et le groupement mthyle en position 27 (Me-27) sont beaucoup
plus dblinds que dans le squelette lupne [184].
Figure 91 : Squelettes de hopne et lupne
Pour le compos Lep3, le dplacement chimique du C-13 est de C 38.1 ppm alors quon
observerait une valeur denviron 50 ppm dans le cas dun hopne ; de la mme manire, le
Me-27 C 14.6 ppm dans le compos Lep3 serait plus dbind (C ~ 18 ppm) dans une
structure de type hopne [187, 188].
Le dplacement H 2.40 ppm est caractristique du H-19 dun lupne [189] (Figure 91). Les
corrlations observes sur le spectre HMBC entre dune part H-19 et C-20 et dautre part
- 93 -

entre H-30, H-29 et C-19 (C 48.0 ppm) permettent de confirmer que le groupement isoprne
est port par le carbone C-19.
Les valeurs des constantes de couplage entre H-3 et les protons H-2 (dt, J = 11.3 Hz, J = 5.1
Hz) impliquent un couplage trans-diaxial entre H-3 et le proton H-2 axial permettant de
placer le groupement hydroxyle OH-3 en position quatorial (Figure 90). La configuration
-oriente de ce groupement est confirme par le dplacement chimique du C-3 C 79.1 ppm
(alors quelle serait proche de 76 ppm dans le cas dune orientation ) [184].
Sur le spectre NOESY, les corrlations entre H-3 et Me-23 et H-5 et H-9 suggrent une
configuration pour ces groupements, en accord avec la prsence dune trans-dcaline. Le
groupement Me-25 est positionn en quatorial () dans une trans-dcaline La position du
groupement isoprne a t dduite de la corrlation spatiale, sur le spectre NOESY, entre le
proton H-19 et le signal du proton H 0.81 ppm (Me-28) positionn via les corrlations NOE
entre Me-25, Me-26 et Me-28.
Figure 92 : Principales corrlations observes sur le spectre NOESY
En comparant ces donnes avec celles de la littrature, nous pouvons identifier le compos
Lep3 au (20)29-lupn-3-ol ou lupol [190-192] et les pics m/z 426, 218, 207 et 189 sur le
spectre de masse IE (Figure 88) sont les pics caractristiques [193].
Figure 93 : Structure du (20)29-lupn-3-ol (compos Lep3)
- 94 -

4.3.4
Le compos Lep7 se prsente sous forme de poudre blanche soluble dans le chloroforme et
lactone. En CCM, il donne une tache avec le ractif de Liebermann-Burchard suggrant un
compos de type terpnique.
Le spectre de masse IC montre des ions quasi-molculaire m/z 214 [M+NH4]+, 197 [M+H]+
en mode positif et m/z 195 [M-H]- en mode ngatif suggrant une masse atomique de 196
uma. Les formules brutes envisages sont C11H16O3 et C12H20O2.
Spectromtrie RMN
Des spectres RMN-1H (Figure 94) et HSQC nous observons :
- 1H sous forme de singulet H 5.68 ppm port par le carbone thylnique C 113.3 ppm. Il
sagit donc dun CH thylnique ;
- un proton sous forme de sextuplet H 4.29 ppm (3J = 3.3 Hz) port par le carbone C 66.8
ppm est proche de 5H avec lesquels il a des valeurs de J trs proches ;
- 1H sous forme de doublet H 4.13 ppm (3J = 3.3 Hz) port par aucun carbone est
attribuable au proton dun groupement hydroxyle. Ce proton couple en 3J avec le proton
sextuplet H 4.29 ppm ;
- 1H sous forme de doublet ddoubl ddoubl H 2.39 ppm (2J = 13.4 Hz, 3J = 2.8 Hz, 3J =
2.5 Hz) port par le carbone C 46.5 ppm ;
- 1H sous forme de doublet ddoubl H 1.72 ppm (2J = 13.4 Hz, 3J = 3.9 Hz) est port par
le carbone C 46.5 ppm. Ce carbone porte donc les deux protons H 2.39 et 1.72 ppm
suggrant ainsi un groupement mthylne avec des protons non quivalents ;
- 1H sous forme de doublet ddoubl ddoubl H 2.00 ppm (2J = 14.2 Hz, 3J = 2.4 Hz, 3J =
2.3 Hz) est port par le carbone C 47.9 ppm ;
- 1H sous forme de doublet ddoubl H 1.54 ppm (2J = 14.3 Hz, 3J = 3.7 Hz) est port par
le carbone C 47.9 ppm. Ce carbone porte donc les deux protons H 2.00 et 1.54 ppm
suggrant ainsi un groupement mthylne avec des protons non quivalents ;
- 3H sous forme de doublet H 1.74 ppm (J = 0.6 Hz) port par le carbone C 27.5 ppm est
de type CH3-C=C ou CH3-COOR ou CH3-C-OCOR ;
- deux groupements mthyle sous forme de singulets chacun H 1.47 et 1.26 ppm ports par
les carbones C 27.0 et 31.1 ppm respectivement, de types CH3-C.
- 95 -
CH3
CH3
CH3
OH
CH=C
Le spectre COSY montre bien les taches de corrlation du proton CH sextuplet H 4.29 ppm
avec les quatre protons mthylniques, les 3H du groupement mthyle (doublet) H 1.74
ppm et le proton du groupement hydroxyle H 4.13 ppm. Le proton mthylnique H 2.39
ppm corrle avec le proton mthylnique H 1.72 ppm, les 3H H 1.74 ppm et le proton
mthylnique H 2.00 ppm. Ce proton corrle aussi avec le proton mthylnique H 1.54
ppm. Les motifs suivants peuvent tre dduits des spectres RMN-1H, HSQC et COSY :
Le spectre RMN-13C avec dition spectrale DEPT90 et DEPT135 prsente 11 signaux

carbones dont 4 carbones quaternaires (dont 1 CO et 1 thylnique), 2CH dont 1 thylnique,
2CH2 et 3CH3. En comptant le groupement hydroxyle, ces donnes spectrales sont en accord
avec la formule brute C11H16O3. Le nombre dinsaturations est de 4, la RMN nous donne de
- 96 -

faon certaine une fonction carbonyle et une fonction thylnique soit un nombre
dinsaturations de 2. Il nous manque donc deux insaturations pouvant correspondre deux
cycles.
Le spectre HMBC montre que les 3H H 1.26 ppm ports par le carbone C 31.1 ppm
corrlent avec le carbone C 27.0 ppm qui porte les 3H H 1.47 ppm en 3J. On peut donc
envisager un motif :
Le carbone quaternaire C 183.6 ppm (C=O ou C=C) corrle en 3J avec les protons des trois
groupements mthyle H 1.74, 1.47 et 1.26 ppm. Ce qui correspond lenchainement
suivant :
Le carbone C 47.9 ppm qui porte les 2H non quivalents H 2.00 et 1.54 ppm corrle avec
les protons des deux groupements mthyle H 1.47 et 1.26 ppm en 3J.
Le proton sextuplet H 4.29 ppm port par le carbone C 66.8 ppm corrle avec les
carbones quaternaires C 36.5 et 87.1 ppm. Ce dernier corrle avec les 3H H 1.74 ppm, le
proton H 1.72 ppm et avec le proton thylnique H 5.68 ppm. De plus le carbone
- 97 -

quaternaire C 183.6 ppm (C=O ou C=C) corrle avec le proton thylnique H 5.68 ppm
qui corrle son tour avec les carbones quaternaires C 87.1 ppm et C 171.9 ppm (C=O
ou C=C). Ces corrlations nous amne considrer le carbone quaternaire C 183.6 ppm
comme un thylnique et le carbone C 171.9 ppm comme un carbonyle. Lenchainement
suivant est donc dduit :
En considrant la formule brute C11H16O3, il nous manque une insaturation et un oxygne.

Nous pouvons donc attribuer la structure suivante au compos Lep7.
Figure 95 : Structure du compos Lep7
- 98 -

1.74
H-10
5.68
H-3
4.29
H-7
1.47
H-12
1.26
H-11
27.0
C-12
36.5 C-9
47.9 C-8
87.1 C-5
171.9 C-2
183.6 C-4
Figure 96 : Spectre HMBC du compos Lep7
Figure 97 : Corrlations HMBC du compos Lep7
Des spectres NOESY on peut dire que le proton H 4.29 ppm nest pas du mme ct du
plan que les groupements mthyles H 1.74 et 1.47 ppm. En effet aucune tache de
corrlation NOESY nest visible entre ce proton et les groupements mthyles qui ont entre
eux des taches de corrlation NOESY. De plus, ce proton H 4.29 ppm a des taches de
corrlation NOESY avec les protons H 1.54 et 1.72 ppm. Le proton H 1.54 ppm a une
tache de corrlation NOESY avec le groupement mthyle H 1.26 ppm, ce qui signifie que le
proton H 4.29 ppm est du mme ct du plan que les protons H 1.54, 1.72 et 1.26 ppm.
- 99 -

Enfin, lexistence dune tache de corrlation NOESY entre le proton thylnique H 5.89
ppm et le groupement mthyle H 1.26 ppm tend vers la configuration de la molcule
suivante :
Figure 98 : Principales corrlations NOESY du compos Lep7
Figure 99 : Structure loliolide du compos Lep7
Ce compos a t isol de Medicago sativa une Fabaceae du genre Medicago [194], de Salvia
divinorum (Lamiaceae) [195], de Mondia whitei (Apocynaceae) [196], de Toona cilita
(Meliaceae) [197], des algues Undaria pinnatifida (Alariaceae), Sargassum ringgoldianum
(Sargassaceae), Cladostephus spongiosus f. verticillatus (Cladostephaceae), Briareum
excavatum (Briareidae) et Codium Divaricatum (Codiaceae) [198-202]. Les dplacements
chimiques (1H) et (13C) du compos Lep7 sont en accord avec ceux de littrature. Ce
compos prsente des proprits antioxydantes [202] et antidpressives [196].
4.3.5
Le compos Lep5 se prsente sous forme de poudre blanche soluble dans le CHCl3 et
lactone. En CCM, il donne une tache aprs rvlation la vanilline sulfurique et une tache
au ractif de Liebermann-Burchard ( 365 nm) suggrant un compos de type terpnique.
Sur le spectre de masse obtenu IC en mode positif et ngatif, nous observons un ion quasimolculaire m/z 474 [M+NH4]+ et un ion molculaire m/z 456 M- en mode positif. En
- 100 -

mode ngatif nous observons un ion quasi-molculaire m/z 455 [M-H]- et un ion
molculaire m/z 456 M- suggrant une masse atomique de 456 uma. La comparaison du
spectre IE avec ceux de la base de donnes spectrale indique lacide olanolique de formule
C30H48O3 (Figure 100).
Figure 100 : Acide olanolique
Spectromtrie RMN
La structure du compos Lep5 a t tablie aprs analyse des spectres de RMN (voir les
dtails dattribution en Annexe) et comparaison des rsultats aux donnes de la littrature
[203-205].
Lacide olanolique (Lep5) a t isol de Adina rubella (Rubiaceae) [204], Psorothamnus
arborescens (Fabaceae) [206], Sambucus. australis (Caprifoliaceae) [203], Salvia divaricata
(Lamiaceae) [205], Rosa woodsii (Rosaceae), Prosopis glandulosa (Fabaceae), Phoradendron
juniperinum (Viscaceae), Syzygium claviflorum (Myrtaceae), Hyptis capitata (Labiatae) et
Ternstroemia gymnanthera (Theaceae) [207]. Les donnes spectrales obtenues pour Lep5
sont en accord avec celles de la littrature. Ce compos est connu pour ses proprits antiinflammatoires, antimicrobiennes (contre Staphylococcus aureus et Mcrosporium lenosum),
anticariogne (contre Streptococcus mutans), anti-hyperlipidmiques et hpatoprotectrices in
vivo [208, 209]. Il a galement des actions anti-tumorale et antivirale [207, 208]. Il inhibe de
faon importante la rplication du VIH-1 dans les cellules H9 infectes avec une valeur CE50
de 1.7 g/mL, et inhibe la croissance des cellules H9 avec une valeur CI50 de 21.8 g/mL
[207]. Des rsultats suggrent que l'acide olanolique amliore l'adiposit viscrale et la
tolrance au glucose chez la souris. Il aurait un effet anti-obsit grce la modulation du
mtabolisme des glucides et des lipides [203].
4.3.6
Dtermination de structure du compos Lep1
Le compos Lep1 se prsente sous forme dhuile de couleur vert-olive. Ce compos prsente
une tache fluorescente en UV 254 et 365 nm laissant envisager la prsence de doubles
liaisons conjugues, certainement des cycles aromatiques.
- 101 -

Les spectre de masse obtenus en ionisation chimique puis en haute rsolution electrospray en
mode positif (HRESI+) prsentent un ion quasi-molculaire m/z 170 [M+H]+ (pour IC) et
m/z 170.09662 [M+H]+ (pour HRESI+) suggrant une masse atomique de 169 uma et une
formule brute de C12H11N.
La comparaison du spectre de masse IE du compos Lep1 avec la base de donnes NIST
indique la structure de la diphnylamine de formule brute C12H11N
Spectromtrie RMN
Cette structure a t confirme par les spectres RMN-1H, RMN-13C, COSY, HSQC et HMBC
(voir les dtails dattribution en Annexe).
Figure 101 : Structure diphnylamine du compos Lep1
4.3.7
Le compos Lep2 se prsente sous forme dhuile soluble dans le chloroforme. Il prsente une
tache fluorescente en UV 254 et ragit avec le ractif de Liebermann et Burchard en
affichant une fluorescence 365 nm suggrant une structure terpnique.
Le spectre de masse IC du compos Lep2 indique en mode positif un ion quasi-molculaire
m/z 297 [M+H]+ et un ion molculaire m/z 296 M+.
Le spectre de masse IE du compos compar avec ceux de la base de donnes NIST indique la
formule brute C20H40O et la structure du phytol.
Spectromtrie RMN
Toutes les donnes RMN compares avec celles se trouvant dans la littrature [210-212]
confirment la structure (E)-phytol du compos Lep2 (voir les dtails dattribution en Annexe).
Figure 102 : Structure (E)-phytol du compos Lep2
- 102 -

4.3.8
Le compos Lep4 se prsente sous forme de poudre de couleur jaune champagne soluble dans
le chloroforme. Ce compos prsente des taches sous lampe Wood 254 et 365 nm qui laisse
envisager la prsence de noyau aromatique.
Le spectre de masse IC montre des ions quasi-molculaire m/z 123 [M+H]+ en mode positif
et m/z 121 [M-H]- en mode ngatif suggrant une masse atomique de 122 uma et une
formule brute de C7H6O2.
Le spectre de masse IE du compos Lep4 compar avec ceux de la base de donnes NIST
indique la formule brute C7H6O2 et la structure 4-hydroxybenzaldhyde.
Spectromtrie RMN
La structure 4-hydroxybenzaldhyde du compos Lep4 est confirme par les spectres RMN
(voir les dtails dattribution en Annexe).
Figure 103 : Structure 4-hydroxybenzaldhyde du compos Lep4
Le spectre RMN-13C avec dition DEPT90, DEPT135, HSQC et HMBC confirment la

structure 4-hydroxybenzaldhyde du compos Lep4. Ce compos a t isol de Diplomorpha
canescens (Thymelaeaceae) par Devkota et al. en 2012 [213].
- 103 -
Purification de lextrait dactate dthyle L3
4.4
L3
1809.1 mg
CC sephadex LH20 ,
lution isocratique 100% MeOH
L3.1
L3.2
L3.3
L3.4
L3.5
88.7 mg
366.5 mg
421.5 mg
755.5 mg
130.9 mg
CC silice 63-200 m,
lution isocratique 100% CH2Cl2
L3.4.1
L3.4.2
L3.4.3
L3.4.4
L3.4.5
L3.4.6
L3.4.7
3.8 mg
1.9 mg
6.1 mg
150.3 mg
241.9 mg
13.8 mg
16.6 mg
C Plaque prparative silice C18,

lution: MeOH/H2O (80:20)
CC silice 63-200 m, lution:CH2Cl2/MeOH

(gradient 100:0 90:10)
Lep9
0.7 mg
L3.4.5.1
L3.4.5.2
L3.4.5.3
L3.4.5.4
L3.4.5.5
L3.4.5.6
1.6 mg
22.4 mg
28.9 mg
57.3 mg
99.1 mg
8.4 mg
100:0
98:2
100:0 Solubilisation dans CH2Cl2 98:2

puis rotavaporation
Extraction CH2Cl2
95:5 HPLC smi-prparative,

lution:MeOH/H2O
(gradient 5:95 50:50)
90:10
Extraction MeOH
L3.4.5.2.1
L3.4.5.2.2
L3.4.5.5.1
L3.4.5.5.2
L3.4.5.5.3
2.2 mg
19.8 mg
19.5 mg
7.5 mg
11.8 mg
CC silice 63-200 m,
5:95
lution isocratique CH2Cl2/MeOH (90:10)
5:95
50:50
Extraction
CH2Cl2
MeOH
L3.4.5.2.2.1
L3.4.5.2.2.2
L3.4.5.2.2.3
L3.4.5.5.3.1
L3.4.5.5.3.2
2.6 mg
2.7 mg
6.4 mg
9.9 mg
0.8 mg
CC silice 63-200 m,
lution isocratique 100% AcOEt
CC silice C18,
lution: MeOH/H2O (60:40)
L3.4.5.2.2.2,1
Lep10
L3.4.5.5.3.1.1
L3.4.5.5.3.1.2
0.8 mg
1.3 mg
1.6 mg
4.5 mg
C Plaque prparative silice normale,
lution: AcOEt
Lep11
Lep12
0.6 mg
2.2 mg
Figure 104 : Schma de fractionnement de lextrait dactate dthyle L3
Le schma de fractionnement de lextrait L3 est prsent sur la Figure 104.

Lextrait L3 (1809.1 mg) a subi un premier fractionnement par chromatographie dinteraction
hydrophobe sur gel de Sephadex LH20 et a t lu au mthanol pour donner cinq fractions
(L3.1 L3.5). La fraction L3.4 a t soumise un fractionnement par chromatographie en
phase normale sur colonne ouverte lue laide de CH2Cl2 pour donner sept sous fractions
(L3.4.1 L3.4.7).
- 104 -

4.4.1
Isolement de Lep9
La fraction L3.4.2 a t purifie par une chromatographie en phase inverse sur plaque
prparative lue par un mlange MeOH/H2O (80 : 20) pour donner le compos Lep9.
4.4.2
Isolement de Lep10, Lep11 et Lep12
La fraction L3.4.5 est traite par une chromatographie en phase normale sur gel de silice
laide dun gradient CH2Cl2/MeOH pour donner six fractions (L3.4.5.1 L3.4.5.6).
Aprs solubilisation dans le dichloromthane et schage au rotavapor, la fraction L3.4.5.2 a
subi une extraction au dichloromthane puis au mthanol pour donner les sous-fractions
L3.4.5.2.1 et L3.4.5.2.2 respectivement. La sous-fraction L3.4.5.2.2 a t purifie dabord, par
une chromatographie sur colonne en phase normale sur gel de silice lue par un mlange de
CH2Cl2/MeOH (90 :10) puis par une chromatographie en phase inverse sur gel de silice C-18
lue par un mlange de MeOH/H2O (60 : 40) pour conduire au compos Lep10.
La fraction L3.4.5.5 a t fractionne par HPLC semi-prparative en phase inverse. La phase
mobile consistait en un gradient de MeOH/H2O (5 : 95 et 50 : 50), dbit fix 2 mL/min.
Trois fractions sont ainsi recueillies (L3.4.5.5.1 L3.4.5.5.3) en 20 minutes. La fraction
L3.4.5.5.3 a subi une extraction au dichloromthane puis au mthanol pour donner les sousfractions L3.4.5.5.3.1 et L3.4.5.3.2 respectivement. La sous-fraction L3.4.5.5.3.1 a subi une
chromatographie sur colonne en phase normale et une chromatographie en phase normale sur
plaque prparative lues laide de lactate dthyle pour donner les composs Lep11 et
Lep12.
4.5
4.5.1
Dtermination structurale des composs isols de L3

Le compos Lep9 se prsente sous la forme de cristaux blancs. En CCM, il prsente une tache
orange avec le rvlateur vanilline sulfurique. Ce compos ragit avec le ractif de Neu en
affichant une fluorescence verte en UV 365 nm laissant envisager une structure de type
flavonode
Les spectre de masse obtenu en ionisation chimique puis en haute rsolution electrospray en
mode positif (HRESI+) prsentent un ion quasi-molculaire m/z 211 [M+H]+ (pour IC) et
m/z 233.09399 [M+Na]+ (pour HRESI+) suggrant une masse atomique de 210 uma et une
formule brute de C15H14O.
- 105 -

Spectromtrie RMN
Sur le spectre RMN-1H ralis dans lactone-d6 (Figure 105) nous observons :
-un massif dintensit 2H entre H 7.99-8.05 ppm attribuables 2CH aromatiques
quivalents ;
- un triplet dtripl dintensit 1H H 7.61 ppm (3J = 7.4 Hz et 4J = 1.3 Hz) caractristique
dun CH aromatique dun phnyle monosubstitu ;
- un massif dintensit 2H entre H 7.48-7.54 ppm attribuables 2CH aromatiques
quivalents ;
- un massif dintensit 4H entre H 7.24-7.34 ppm correspondant quatre protons aromatiques
quivalents deux deux ;
- un triplet dtripl dintensit 1H H 7.17 ppm (3J = 7.0 Hz et 4J=1.6 Hz) caractristique
dun CH aromatique dun phnyle monosubstitu ;
- un couple de triplets dintensit chacun 2H, couplant entre eux avec la mme constante de
couplage, H 3.37 ppm (3J = 7.6 Hz) et H 3.03 ppm (3J = 7.6 Hz) sont attribuables au
fragment -CH2-CH2-.
1H
CH2
CH2
4H
2H
1H
2H
- 106 -

Les motifs suivants peuvent tre dduits du spectre RMN-1H et du spectre COSY :
Figure 106 : Motifs du compos Lep9 obtenus partir des spectres RMN-1H et COSY
Le spectre RMN-13C avec dition spectrale DEPT90 et DEPT135 prsente 11 signaux RMN13
C dont 3 carbones quaternaires (dont 1CO et 2CIV aromatiques), 6 CH aromatiques et 2CH2.
Vu la formule brute C15H14O, le nombre dinsaturations de 9, la prsence dun groupement
carbonyle et lensemble des donnes prcdentes, nous permet didentifier le compos Lep9
comme tant la dihydrochalcone.
Les diffrentes taches de corrlations en HSQC et en HMBC ont permis dattribuer les
dplacements chimiques des carbones et des protons du compos Lep9.
Figure 107 : Corrlation HMBC du compos Lep9
Figure 108 : Structure dihydrochalcone du compos Lep9
- 107 -

Le compos Lep9 est un nouveau produit naturel isol pour la premire fois dune plante.
Cependant il a t synthtis par Martnez et al. en 2006 [214] qui ont prsent des donnes
spectrales (H et C) comparables avec celles du compos Lep9.
4.5.2
Le compos Lep11 se prsente sous la forme de cristaux beiges solubles dans lactone et le
mthanol. Il est visible en UV 254 nm sur plaque CCM.
Le spectre de masse IC du compos Lep11 indique un in quasi-molculaire m/z 167 [M-H]en mode ngatif et un ion molculaire m/z 168 M+ en mode positif proposant une masse
atomique de 168 uma et une formule brute C8H8O4.
Spectromtrie RMN
Lanalyse du spectre RMN-1H (Figure 109) montre :
- un large massif de type proton changeable H 7.9-8.8 ppm attribuable un groupement
hydroxyle ;
- un proton aromatique H 7.59 ppm (dd, 3J = 8.20Hz et 4J = 1.90Hz) couplant avec deux
autres protons aromatiques en ortho et en mta ;
- un proton aromatique H 7.56 ppm (d, 4J = 1.90Hz) couplant en mta ;
- un proton aromatique H 6.91 ppm (d, 3J = 8.20Hz) couplant en ortho ;
Le spectre RMN-1H donnant au total trois protons aromatiques laisse envisager un noyau
benznique trisubstitu.
1H
1H
1H
OH
- 108 -

Les spectres RMN-13C, HSQC et les ditions spectrales DEPT90, DEPT135 prsentent huit
signaux carbone dont un CH3, trois CH aromatiques et quatre carbones quaternaires dont un
carbonyle. Au vu des intgrales protons, du nombre de carbone et de la formule brute
(C8H8O4) cela laisse supposer un cycle aromatique tri-substitu (de type vanilline) ayant pour
substituant un groupement acide carboxylique COOH, un groupement hydroxyle OH et un
groupement mthoxyle OCH3.
Le spectre RMN-2D HMBC montre que les protons du groupement mthoxyle H 3.91 ppm
corrlent avec le carbone C 148.09 ppm qui corrle son tour avec les protons H 6.91 et
H 37.56 ppm. De plus les corrlations observes entre le carbone C 167.48 ppm du
groupement COOH et les deux protons H 7.59 ppm et 7.56 ppm du cycle aromatique,
suggrent que le compos Lep11 est lacide 4-hydroxy-3-mthoxybenzoque (acide
vanillique) (Figure 110).
Figure 110 : Structure et principale corrlations HMBC du compos Lep11
Ce compos a t identifi de Melittis melissophyllum par Skrzypczak-Pietraszek et al. [215]

et isol des racines de Cynanchum paniculatum par Weon et al. [216]. Il a t aussi obtenu par
conversion de lacide trans-frulique dans les cellules Rhodotorula rubra [217].
4.5.3
Le compos Lep10 a t obtenu sous forme de cristaux de couleur beige solubles dans le
mthanol. En CCM, il est visible en UV 254 nm.
Le spectre de masse IC obtenu en mode ngatif indique un ion quasi-molculaire m/z 121
[M-H]- suggrant une masse atomique de 122 uma.
La comparaison du spectre de masse IE du compos Lep10 avec ceux de la base de donnes
NIST indique lacide benzoque de formule brute C7H6O2.
- 109 -

Spectromtrie RMN
Les spectres RMN-1H, RMN-13C, HSQC et HMBC confirment la structure acide benzoque
du compos Lep10 (voir les dtails de lattribution dans lAnnexe). Ce compos a t isol
des rhizomes dAnemarrhena asphodeloides (Liliaceae) par Youn et al. en 2010 [218].
Figure 111 : Structure dacide benzoque du compos Lep10
4.5.4
Le compos Lep12 a t obtenu sous forme de cristaux de couleur marron-claire solubles

dans le mthanol et lactone. En CCM, il est visible en UV 254 et 365 nm.
Le spectre de masse IC du compos Lep12 obtenu en mode ngatif indique un ion quasimolculaire m/z 137 [M-H]- proposant une masse atomique de 138 uma.
La comparaison du spectre de masse IE du compos Lep10 avec ceux de la base de donnes
NIST indique lacide 2-hydroxybenzoque de formule brute C7H6O3.
Spectromtrie RMN
Les donnes RMN confirment la structure acide 2-hydroxybenzoque du compos Lep12. Ce
compos a t isol de Lolium multiflorum une espce de la famille des Poaceae [219].
Figure 112 : Structure de lacide 2-hydroxybenzoque du compos Lep12
- 110 -
5
5.1
Tests biologiques des composs isols de C. odorata

Effets sur la viabilit cellulaire
Les composs isols Chrom2 (C2) et Chrom3 (C3) de C. odorata ont t tests sur les
lignes cellulaires du cancer du sein Cal51, MCF7, et la ligne cellulaire du cancer du col de
lutrus HeLa, afin de voir leurs effets sur la viabilit cellulaire.
Le resvratrol inducteur dapoptose est utilis comme contrle positif. La viabilit a t
value par dosage de l'ATP.
Aucun effet significatif n'a t observ pour Chrom3 sur la viabilit cellulaire (Figure 113).
Toutefois, la chalcone Chrom2 20 M diminue significativement la viabilit cellulaire de
Cal51, MCF7, et les cellules HeLa de 19, 18 et 30% respectivement (Figure 113). Leffet de
Chrom2 est nettement suprieur celui du resvratrol pour les lignes MCF7 et HeLa.
Luminescence (AU x 10-6)
20
15
Cal51
10
MCF7
HeLa
DMSO
C2
C3
Resveratrol
Test composition
Figure 113 : Effet des composs isols sur la viabilit des cellules. Cellules traites avec 20 M chalcone
(C2), 20 M cadalne (C3) ou 20 M resvratrol pendant 48 h, puis l'ATP a t quantifie en utilisant le
test de viabilit CellTiter Glo
Des travaux ont montr une activit non cytotoxique de la chalcone contre les lignes
cellulaires cancreuses KB, BC ou NCI-H187 mme lorsquelles sont exposes plus de 58
M [34], indiquant une certaine slectivit des lignes cellulaires. Par ailleurs Deng et al.
[118] nont signal aucune cytotoxicit contre les cellules MCF7 pour une autre chalcone (2'hydroxy-4,4',6'-trimthoxychalcone) troitement lie Chrom2. Ce qui indiquerait un rle
potentiellement important du groupement 5-mthoxyle. Toutefois, la cytotoxicit de Chrom2
- 111 -

est comparable celle rapporte pour les flavonodes glycosides des feuilles de C. odorata
[121].
5.2
Effets sur lapoptose
Les composs Chrom2, Chrom3 et le resvratrol ont t tests contre la ligne Cal51 au
cours de trois expriences indpendantes.
Seul le resvratrol a induit un effet apoptotique important en agent simple (Figure 114).
Toutefois lorsque la chalcone Chrom2 (10 M) est couple avec ABT737 (1 M)
(linhibiteur de BH3-mimtique Bcl2/BclxL : voir mode daction et structure dans le
paragraphe 5.2.2), on observe une augmentation de leffet apoptotique 3 fois suprieur celui
de la chalcone ou de lABT737 seuls, indiquant un effet synergique significatif (Figure 114).
L'ampleur de cet effet synergique sur linduction de l'apoptose pour cette ligne est
quivalente celle du resvratrol.
40
Apo2.7 (%)
30
20
10
+R
es
AB
T
+C
3
AB
T
AB
T
+C
2
73
7
AB
T
Re
s
C3
C2
DM
S
Test Composition
Figure 114 : Effet des composs isols sur l'apoptose. Cellules Cal51 ont t traites avec 20 M de
chalcone (C2), cadalne (C3) ou le resvratrol (Res) pendant 48 h en combinaison ou non avec l'activit
pharmacologique inhibiteur de Bcl2/BclxL ABT737 (Selleck) 1 M. Puis les cellules ont t rcupres et
analyses par cytomtrie de flux aprs immunomarquage Apo2.7. Les donnes (% de cellules positives
Apo2.7) sont la moyenne de 3 expriences indpendantes. Les barres reprsentent lcart type = effet
significatif par rapport au compos seul (p <0.05)
Afin de mieux comprendre l'efficacit des composs comme agents simples contre une
gamme de types de cellules cancreuses, les tests ont t effectus sur des lignes cellulaires
du cancer du sein MCF7, MDA-MB-231, BT549, U251, et HTC116 sans rplication. Aucun
effet significatif na t observ en agent simple ou en combinaison pour tous les composs
isols.
- 112 -
5.3
Effets sur la clonognicit des cellules
Les effets sur la viabilit long terme des lignes cellulaires de cancer du sein MCF7, Cal51
et MDA-MB-468 de Chrom2, Chrom3 et du resvratrol ont t valus pour leur influence
sur la clonognicit durant une incubation de 14 jours. Les tests ont t effectus 10, 20 et
50 M de produits dans des plaques de culture 6 puits. Le resvratrol inhibe fortement la
formation de colonies pour toutes les lignes (Figure 115). La chalcone Chrom2 (C2) a
montr une inhibition dose-dpendante contre les trois lignes. En revanche, aucun effet du
cadalne Chrom3 (C3) na t constat.
(B) 100
Number of colonies
60
40
20
80
60
40
20
Test Composition
C3
-2
0
C3
-5
0
Re
s10
Re
s20
Re
s50
C2
-5
0
C3
-1
0
C2
-1
0
C2
-2
0
SO
C3
-2
0
C3
-5
0
Re
s10
Re
s20
Re
s50
C2
-5
0
C3
-1
0
SO
DM
C2
-1
0
C2
-2
0
0
DM
Number of colonies
(A) 80
Test Composition
(C) 40
Number of colonies
30
20
10
Re
s20
C3
-5
0
C3
-2
0
C2
-5
0
C2
-2
0
DM
SO
Test Composition
Figure 115 : Effet des composs isols de feuilles de C. odorata sur la clonognicit des cellules. Tests de
clonognicit effectus par incubation des lignes cellulaires (A) Cal51, (B) MCF7 ou (C) MDA-MB-468
avec 10, 20 ou 50 M de la chalcone (C2), cadalne (C3) ou le resvratrol (Res) pendant 14 jours. Les
colonies sont mises en vidence au Crystal Violet et dnombres manuellement. Pour (A) et (B), les
donnes (nombre de colonies) sont la moyenne de 4 expriences indpendantes. La barre reprsente
l'cart-type. Pour (C), un seul test a t effectu
La chalcone 2-hydroxy-4,4,5,6-tetramthoxychalcone (Chrom2) diminue la viabilit

cellulaire des lignes du cancer du sein Cal51, MCF7, et la ligne cellulaire du cancer du col
de lutrus HeLa. Son effet est plus important sur les cellules MCF7 et HeLa par rapport
celui du resvratrol qui est une molcule dj connue pour son activit anticancreuse.
- 113 -

Concernant leffet apoptotique contre la ligne Cal51, lorsque la chalcone Chrom2 est
couple avec lABT737, nous constatons une augmentation de leffet apoptotique 3 fois
suprieur celui de la chalcone ou de lABT 737 seuls, indiquant un effet synergique
significatif. Cet effet synergique sur linduction de l'apoptose pour cette ligne est quivalent
celui du resvratrol.
Chrom2 montre une inhibition dose-dpendante contre la formation de colonies pour les
lignes cellulaires de cancer du sein MCF7, Cal51 et MDA-MB-468.
- 114 -
Conclusion gnrale
Conclusion gnrale
Les plantes restent la source prdominante de mdicaments pour la majorit de la population
mondiale, en particulier dans les pays en voie de dveloppement. Environ 40 % des
mdicaments sont ainsi drivs de la nature [220]. Dans le cas de la lutte contre les affections
dorigine inflammatoire, lutilisation des AINS avec ses effets secondaires par la mdecine
conventionnelle, encourage la recherche de nouvelles molcules antiinflammatoires issues de
la biodiversit vgtale.
Ce travail de thse sinscrit dans le cadre des travaux de recherche du laboratoire de chimie
organique et biologique (Universit de Cocody-Abidjan) dont lun des objectifs est de
dcouvrir de nouveaux principes actifs afin de valoriser les plantes utilises en mdecine
traditionnelle en Cte dIvoire.
Le but de ce travail tait disoler des mtabolites secondaires volatils et non volatils, de les
identifier et de leur attribuer des proprits biologiques par des tests activits biologiques.
Nous avons prsent les rsultats de ltude phytochimique des quatre plantes Chromolaena
odorata (L.) R. M. King & H. Robinson, Morinda morindoides Baker, Morinda lucida Benth
et Leptoderris fasciculata (Benth.) Dunn.
Chromolaena odorata
Ltude des rendements en huiles essentielles montre que les feuilles dAbidjan-centre
(Cocody) et dAbidjan-ouest (Yopougon) sont riches en huiles essentielles durant toute
lanne. Tandis que celles provenant dAbidjan-nord (Abobo) sont pauvres en huiles
essentielles. Nous notons globalement une influence de la saison sur le rendement. Cette
influence est plus forte pour les feuilles dAbidjan-sud (Port-Bout) avec une forte diminution
de la teneur en huiles essentielles en saison pluvieuse.
Ltude de leffet de la dure de stockage des feuilles sur la teneur en huiles essentielles,
montre une perte dhuiles pour tous les sites de rcoltes sauf Abidjan-centre dont les feuilles
rsistent aux processus de dgradation.
Les compositions chimiques des huiles essentielles des cinq sites gographiques de rcolte,
montrent que les huiles essentielles dAbidjan-ouest (yopougon), Abidjan-nord (Abobo),
Abidjan-est (Akoudo) et Abidjan-centre (Cocody) contiennent plus de sesquiterpnes et donc
seront plus larvicides et pesticides [159, 160]. Les huiles dAbidjan-nord et Abidjan-est
(Akoudo) pourront prsenter aussi plus de proprits antiinflammatoires, antiseptiques et
antivirales que les autres sites en raison de la quantit plus leve en -pinne [159]. Ce
compos expliquerait lemploi de la dcoction des feuilles de cette plante dans le traitement
traditionnel, en Cte dIvoire, des douleurs abdominales, cphales et du paludisme qui sont
des maux impliquant des phnomnes inflammatoires.
- 115 -
Conclusion gnrale
Ltude phytochimique de lextrait hexanique des feuilles C. odorata a permis disoler deux
flavonodes la 5-hydroxy-7,4'-dimhoxyflavanone (Chrom1) et la 2-hydroxy-4,4,5,6tetramthoxychalcone (Chrom2) et un terpenode le cadalne (Chrom3). Le cadalne na
jamais t isol de cette plante et cest la premire fois que les donnes spectrales RMN-1H et
RMN-2D sont obtenues.
Des donnes rcentes ont largi le concept que l'inflammation est une composante essentielle
de la progression tumorale. De nombreux cancers rsultent de sites d'infection, dune irritation
chronique et de l'inflammation. Il est dsormais clair que le microenvironnement de la
tumeur, qui est largement orchestr par les cellules inflammatoires, est un participant
indispensable dans le processus noplasique, favorisant la prolifration, la survie et la
migration [4]. Le lien troit entre inflammation et cancer pourrait suggrer des proprits
anticancreuses aux molcules isoles de C. odorata. Ltude dactivit anticancreuse
ralise tait de mettre en vidence les effets des molcules isoles (Chrom2 et Chrom3) sur
la viabilit cellulaire, lapoptose et sur la clonognicit des cellules cancreuses de
diffrentes lignes.
La chalcone 2-hydroxy-4,4,5,6-tetramthoxychalcone (Chrom2) diminue la viabilit
cellulaire des lignes du cancer du sein Cal51, MCF7, et la ligne cellulaire du cancer du col
de lutrus HeLa. Son effet est plus important sur les cellules MCF7 et HeLa par rapport
celui du resvratrol qui une molcule connue pour son activit anticancreuse.
Concernant leffet apoptotique contre la ligne Cal51, lorsque la chalcone Chrom2 est
couple avec lABT737, nous constatons une augmentation de leffet apoptotique 3 fois
suprieur celui de la chalcone ou de lABT 737 seuls, indiquant un effet synergique
significatif. Cet effet synergique sur linduction de l'apoptose pour cette ligne est quivalent
celui du resvratrol.
Chrom2 montre une inhibition dose-dpendante contre la formation de colonies pour les
lignes cellulaires de cancer du sein MCF7, Cal51 et MDA-MB-468.
Morinda morindoides
Ltude des huiles essentielles des feuilles de M. morindoides montre que le rendement en
huiles essentielles est comparable celui de C. odorata, une clbre plante aromatique et antiinflammatoire utilise comme antipaluden en Cte d'Ivoire [21]. De plus, le constituant
prdominant de ses huiles, lE-phytol (28.4%), prsente dexcellentes activits antibactrienne
et antivirale [168-171] qui pourraientt justifier lemploi de la dcoction des feuilles dans
plusieurs traitements traditionnels comme la diarrhe, la rougeole, la varicelle etc.
Morinda lucida
Ltude phytochimique des mtabolites secondaires volatils de M. lucida prsente pour la
premire fois la composition chimique des huiles essentielles des fruits de cette plante, avec le
phytol (14.8%) et n-octanol (6.2%) comme constituants majoritaires.
- 116 -
Conclusion gnrale
La composition chimique des huiles essentielles des feuilles est diffrente de celles extraites
des feuilles du Nigeria. En effet, nous avons un chmotype particulier phytol (33.2%) et
pentadcanal (9.9%) alors que celles du Nigeria indiquaient un chmotype -terpinne
(17.8%) et -bisabolne (16.3%) [79].
La teneur en phytol des huiles des feuilles de cette espce est plus leve que celle des feuilles
de M. morindoides. Les huiles de M. lucida pourraient donc avoir des activits antivirale et
antibactrienne plus importante [168-171]. Ces activits justifieraient lusage traditionnel de
la dcoction des feuilles dans le traitement de maux accompagns de fivre comme le
paludisme en Cte dIvoire.
Ltude phytochimique oriente vers les composs non volatils a permis disoler et
didentifier trois anthraquinone 2-actyl-1-hydroxyanthraquinone (Mor1), alizarin-1mthylther (Mor2) et 1,5,15-trimthylmorindol (Mor3). Cette tude a permis, pour la
premire fois, de diffrencier les protons H-5 et H-8, les carbones C-6 et C-7 et dobtenir les
donnes RMN-13C, HMBC, HSQC pour le compos 2-actyl-1-hydroxyanthraquinone.
Lanthraquinone 1,5,15-trimthylmorindol (Mor3) dmontrant une activit cytotoxique sur
les cellules cancreuses de la ligne leucmique humaine T [174] justifierait lemploi
traditionnel des corces contre diverses manifestations inflammatoires par le lien troit entre
inflammation et cancer [4].
Leptoderris fasciculata
Ltude phytochimique de L. fasciculata est ralise ici pour la premire fois. Elle a permis
disoler et didentifier 12 compos dont 3 flavonodes 4,5,6,7-tetramethoxyisoflavone
(Lep6), 7-hydroxy-4,5,6-trimthoxyisoflavone (Lep8) et la dihydrochalcone (Lep9) ; 2
triterpnes le lupol (Lep3) et lacide olanolique (Lep5) ; 3 acides phnoliques lacide 4hydroxy-3-mthoxybenzoque ou acide vanillique (Lep11), acide 2-hydroxybenzoque
(Lep12) et lacide benzoque (Lep10) ; un diterpne lE-phytol (Lep2) ; un monoterpne le
loliolide (Lep7) ; une diphnylamine (Lep1) et un hydroxybenzaldhyde le 4hydroxybenzaldhyde (Lep12).
Dans cette tude deux nouvelles molcules naturelles 4,5,6,7-tetramehoxyisoflavone (Lep6)
et dihydrochalcone (Lep9) ont t isoles pour la premire fois dune plante.
Le loliolide (Lep7) est connu pour ses proprits antidpressives [196] et antioxydantes [202].
De plus lacide olanolique (Lep5) a des proprits anti-inflammatoires, antimicrobiennes,
anti-cariogne, anti-hyperlipidmiques et hpatoprotectrices in vivo [208, 209]. Il a galement
des actions anti-tumorale, antivirale [207, 208] et anti-obsit [203]. Toutes ces activits
biologiques font de L. fasciculata une potentielle plante mdicinale renfermant de puissants
principes actifs.
Dautres composs devront tre isols des extraits polaires (extrait de mthanol) pour les
diffrentes espces tudies et particulirement pour Leptoderris fasciculata.
- 117 -
Conclusion gnrale
Des tests biologiques anticancreux, antiviraux et antibactriens devront tre raliss pour les
diffrents mtabolites secondaires isols. Une tude devra tre mene pour identifier les sites
des molcules actives afin de comprendre leur mode daction.
Par ailleurs, une fois les activits biologiques des composs seront connues, il serait
intressant de dvelopper des voies de synthse ou dhmi-synthse afin dobtenir une
quantit importante de principes actifs ou daugmenter leurs activits biologiques.
- 118 -
Partie 4 : Matriels et mthodes

1
Matriel vgtal et extraction
1.1
Matriel vgtal
Les 4 plantes de cette tude ont t rcoltes en Cte dIvoire et identifies par le botaniste
ivoirien, le Pr Ak-Assi du Centre National de Floristique de l'Universit de Cocody-Abidjan.
Les rcoltes ont t faites en avril 2008, dans les forts secondaires de Gagnoa (Centre-ouest
de la Cte dIvoire) pour Morinda morindoides et Morinda lucida, dAgboville (Sud-est de la
Cte dIvoire) pour Leptoderris fasciculata et Abidjan pour Chromolaena odorata.
Pour ltude du chmotype des huiles essentielles de Chromolaena odorata, les feuilles ont
t rcoltes en dbut de matine (8h00) dans cinq sites gographiques de la ville Abidjan :
Cocody (Abidjan-Centre), Yopougon (Abidjan-Ouest), Port-Bout (Abidjan-Sud), Abobo
(Abidjan-Nord) et d'Akoudo (Abidjan-Est). Les rcoltes ont t ralises pendant la saison
des pluies (mai-Juin) et pendant la saison sche (dcembre-janvier).
Afin d'tudier l'effet du stockage sur les rendements en huiles, 2 kg de feuilles fraches ont t
rcoltes pour chacun des 5 sites. Chaque lot de feuilles fraches a t divis en 4 parties de
500 g et conserves temprature ambiante (environ 25C).
1.2
1.2.1
Protocole dextraction
Huiles essentielles
Lextraction des huiles essentielles a t effectue par entranement la vapeur laide dun
appareil de type Clevenger. 500 g de matires vgtales est plac sur une grille mtallique
sous laquelle se trouve de leau bullition pendant 2h. Les huiles sont entranes par la
vapeur. Aprs condensation et liqufaction, lhuile surmonte leau dans lampoule dcanter.
Lhuile spare de leau est sche par conglation puis par le sulfate de magnsium, et
conserve 0C.
1.2.2
1.2.2.1
Extraits bruts totaux

Traitement prliminaire
Les feuilles ou corces ont t sches temprature ambiante au laboratoire labri de la

lumire et pulvrises laide dun broyeur concasseur Retsch avec un tamis de 0,5 mm.
Cette poudre est conserve ltuve (30C).
- 119 -

1.2.2.2
Extraction partir du matriel vgtal
Deux mthodes dextractions ont t utilises : extraction liquide-liquide pour C. odorata et

extraction solide-liquide pour M. lucida et L. fasciculata.
Extraction liquide-liquide partir des feuilles de C. odorata
Lextraction des produits non volatils est ralise partir de 3 kg de poudre des feuilles
sches macre dans lthanol 80 % temprature ambiante pendant 72 heures. Lextrait
thanolique dilu obtenu, est ensuite dgraiss lhexane par extraction liquide-liquide. La
fraction hexanique obtenue est appele C1 (67.2 g). Lextrait thanolique dgraiss est
vapor siccit puis le rsidu, solubilis dans leau, est partag par extraction liquide-liquide
entre le dichloromthane et leau puis entre lactate dthyle et leau. Les fractions de
dichloromthane et dactate dthyle obtenues sont nommes C2 (81.7 g) et C3 (78.8 g)
respectivement. Aprs passage de lactate dthyle, le rsidu est sch siccit ltuve 40
C. Enfin la fraction thanolique C4 (82.0 g) est obtenue par macration dans lthanol (99 %)
du rsidu sch ltuve. Chaque extraction est rpte 3 fois. La Figure 116 dcrit le
processus dobtention des diffrents extraits. Dans cette tude, seul lextrait C1 a t soumis
une investigation phytochimique plus approfondie.
- 120 -
Figure 116 : Schma dextraction des fractions C1 C4
Extraction solide-liquide partir des corces de M. lucida et des feuilles de L. fasciculata

Lextraction primaire, partir du matriel vgtal sch et broy (500g pour L. fasciculata et
100g pour M. lucida), est ralise par macration, en utilisant lhexane. Aprs filtration et
vaporation sec du solvant, lextrait hexanique obtenu est nomm F1. Le marc issu de cette
extraction est mis macrer dans le dichloromthane. La fraction de dichloromthane obtenue
est appele F2. Le rsidu obtenu est ensuite macr dans lactate dthyle pour conduire
lextrait dactate dthyle F3. Enfin, le rsidu est rcupr et mis macrer dans un solvant
polaire, le mthanol pour donner lextrait mthanolique F4. Les macrations sont ralises
sous agitation temprature ambiante pendant 72 heures. Chaque macration est rpte 3
fois pour extraire le maximum de substances. Les diffrentes tapes de cette extraction sont
rcapitules dans la Figure 117.
- 121 -
Figure 117 : Schma dextraction de M. lucida et L. fasciculata et obtention des fractions F1 F4
Nous obtenons ainsi les fractions M1 (fraction hexanique, 400 mg), M2 (fraction de
dichloromthane, 410 mg), M3 (fraction dactate dthyle, 130 mg) et M4 (fraction de
mthanol, 125 mg) pour les corces de M. lucida et les fractions L1 (fraction hexanique, 2.1
g), L2 (fraction de dichloromthane, 8.45 g), L3 (fraction dactate dthyle, 1.81 g) et L4
(fraction de mthanol, 25.9 g) pour les feuilles de L. fasciculata. Les fractions plus polaires
M3, L3 et L2 ont t soumises une tude phytochimique plus approfondie dans ces travaux.
2
2.1
Mthodes chromatographiques analytiques

Chromatographie sur Couche Mince (CCM)
Utiliss chaque tape pour le suivi et le contrle des purifications, les chromatogrammes sur
couche mince permettent de vrifier la prsence et ltat de puret des produits suivis.
Les analyses sur couche mince sont ralises en phase normale et/ou en phase inverse sur des
plaques daluminium Silicagel 60 F254 (Merck). Le dveloppement des plaques seffectue
dans des cuves en verre satures avec lluant appropri.
- 122 -

Cette phase mobile est constitue dun solvant pur ou dun mlange binaire ou tertiaire de
solvants selon le type de sparation souhaite.
Dans notre cas, les systmes de solvants pour les diffrentes classes de composs sont les
suivants (les proportions sont donnes en volume et ils sont classs par polarit croissante) :
Tol/AcOEt/MeOH (80:18:2)
CH2Cl2 100%
AcOEt 100%
MeOH/H2O (90:10)
Hex/AcOEt (30:70), (50 :50)
Lobservation des CCM seffectue en lumire visible et sous UV (254 et 365 nm), avant et,
dans certains cas, aprs rvlation par les ractifs appropris.
Lutilisation de diffrents ractifs permet de rassembler judicieusement les fractions rcoltes
suites aux diffrentes chromatographies.
Les ractifs utiliss pour le prsent travail sont les suivants :
2.1.1
Ractif lacide phosphomolybdique (rvlateur universel)
Prparer une solution de 22.1 g dacide phosphomolybdique dans 180 mL dthanol 95%.
Aprs pulvrisation, chauffer la plaque de CCM 110C pendant 5 minutes environ.
2.1.2
Ractif la Vanilline sulfurique (rvlateur polyvalent)
Prparer une solution compose de 1 g de vanilline, 2 mL dacide sulfurique et de lthanol

95% q.s.p. 100 mL. Aprs pulvrisation, chauffer la plaque de CCM 110C pendant 5
minutes environ. Plusieurs colorations apparaissent en fonction du type de composs.
2.1.3
Ractif de Neu ou NP/PEG (rvlateur des flavonodes)
Prparer une solution A compose de 1 g dacide amino-2-thyldiphnylborique et de 100 mL

de mthanol et une solution B compose de 5 g de PEG 4000 et de 100 mL dthanol.
Pulvriser un mlange de 10 mL de solution A et 8 mL de solution B. Chauffer la plaque de
CCM 110 C pendant 2 minutes environ [221]. Observs en lumire UV 365 nm, les
flavonodes apparaissent sous forme de taches fluorescentes jaunes, vertes ou orange.
2.1.4
Ractif de Liebermann et Burchard (rvlateur des strols, strodes, terpnes)
Prparer, basse temprature et juste avant emploi, une solution de 5 mL danhydride

actique, 5 mL dacide sulfurique concentr et q.s.p. 50 mL dthanol 95 %. Aprs
pulvrisation, chauffer la plaque de CCM 110C pendant 10 minutes. Les composs rvls
prsentent une fluorescence 365 nm.
- 123 -

2.1.5
Ractif la potasse (rvlateur des anthraquinones)
Prparer une solution de potasse 5 g de potasse dans 100 mL dthanol 95%. Aprs
pulvrisation, une coloration rose-mauve apparait immdiatement.
2.2
Chromatographie Gazeuse couple la Spectromtrie de Masse (CGSM)
Les analyses des huiles essentielles ont t ralises par chromatographie en phase gazeuse
(CG) et ensuite par CG couple la dtection par spectromtrie de masse (CG-SM). Relatif
lanalyse par CG, la chromatographie en phase gazeuse a t ralise en utilisant un Delsi DI
200 muni d'un dtecteur ionisation de flamme et une colonne DB5 (25m x 0.25 mm, df: 0.25
m) avec un dbit de 60 mL/min.
Les conditions opratoires sont les suivantes : azote comme gaz porteur, programmation de la
temprature 50C pendant 5min et 30C/min jusqu' 220C, temprature de l'injecteur
220C, temprature du dtecteur 250C.
Les analyses des huiles par CG-SM ont t effectues en utilisant un chromatographe en
phase gazeuse Hewlett-Packard modle 6890 coupl un modle Hewlett-Packard MS 6890
quip d'une colonne HP5 (30m x 0.25 mm df: 0.25 m) programm 50C (5 min) et
50C/min jusqu 300C (temprature stabilise pendant 5 min. Le gaz porteur 1.0 mL/min).
Linjection a t dfinie en mode split (1/10). Les tempratures de linjecteur et du dtecteur
sont 250C et 320C respectivement. Lionisation a t effectue par impact d'lectrons 70
eV, le multiplicateur d'lectrons a t fix 2200 V, et la temprature de source d'ions est de
230C.
Les donnes du spectre de masse ont t acquises dans le mode de balayage dans la gamme de
m / z 33-450. Lidentification des composs a t ralise par calcul des indices de rtention
(RI) ou Indices de Kovats (KI) et sont compars avec ceux des spectres de masse dans les
banques de donnes, Adams [222] ou Mc Lafferty et Stauffer [223].
Les analyses ont t ralises au Laboratoire de chimie des Htrocycles et des Glucides
lUniversit Blaise Pascal de Clermont-Ferrand.
3
3.1
Mthodes chromatographiques prparatives

Chromatographie sur Colonne ouverte (CC)
Pour les chromatographies sur colonnes ouvertes, plusieurs types de phases ont t mises en
uvre dans des colonnes en verre. La taille et le diamtre de la colonne sont choisis en
fonction de la quantit dchantillon purifier et de la rsolution souhaite.
Pour les chromatographies dadsorption, la phase stationnaire utilise est la silice en phase
normale 0.0630.200 mm, 70-230 mesh silica gel (Merck). Llution est ralise par simple
- 124 -

gravit. La quantit de silice utilise est gnralement 30 50 fois suprieure la quantit
dchantillon dpose. Lextrait fractionner est adsorb sur une quantit de silice
correspondant environ 2 fois sa masse et le dpt de lextrait a lieu sous forme solide.
Les chromatographies dinteraction hydrophobe sont ralises sur gel de Sephadex LH20.
Les fractions recueillies sont regroupes selon les rsultats de lanalyse par CCM.
3.2
Chromatographie prparative sur couche mince
Les plaques utilises sont des plaques gel de silice de 2 mm sur verre (Merck 60 F254). Les
chantillons ont t solubiliss dans le solvant adquat puis dpos sur la plaque. La plaque a
t dveloppe dans une cuve sature contenant le mlange de solvants appropri. La silice
contenant le compos a ensuite t rcupre laide dune spatule. La silice est ensuite
disperse dans une petite quantit de solvant, puis filtre sous vide pour permettre la
rcupration du compos.
3.3
Chromatographie Liquide Haute Performance semi-prparative

(HPLC semiprep)
Les purifications ont t effectues l'aide d'une chane HPLC Agilent Srie 1100 munie
dune pompe isocratique et dun dtecteur indice de rfraction (RI) pilots par le logiciel
Chemstation dAgilent.
Les analyses ont t ralises en phase inverse avec une colonne HPLC de type Agilent
Zorbax 300SB-C18 (5 m, 250 x 9.4 mm). Les solvants utiliss sont de qualit HPLC et le
dbit est fix 2 mL/min.
4
4.1
Mthodes physico-chimiques
Spectromtrie de Masse (SM)
Les spectres de masse des produits purs isols ont t obtenus par plusieurs modes
dionisation. Les analyses ont t ralises par Julie Hemez du laboratoire CEISAM de
lUniversit de Nantes.
4.1.1
Ionisation par Electrospray (ESI)
Lionisation est ici produite par application, pression atmosphrique, dun fort champ
lectrique (3 6 keV) sur un liquide traversant un capillaire un faible dbit (1-10 L/min).
Ce champ provoque une accumulation de charges la surface du liquide, situ lextrmit
du capillaire. La rupture de la phase liquide forme des gouttelettes hautement charges
(Spray). Lvaporation du solvant contenu dans ces gouttelettes va provoquer leur
rtrcissement jusquau sommet o des forces coulombiennes rpulsives vont approcher le
niveau des forces de cohsion de celle-ci et provoquer leur explosion. Ces gouttelettes
- 125 -

subissent alors une cascade de fissions donnant des gouttelettes de plus en plus petites,
jusquau moment o le champ lectrique en leur surface devient suffisant pour provoquer la
dsorption des ions. Ces ions ainsi produits sont porteurs dun grand nombre de charges sil
existe plusieurs sites ionisables sur la molcule [224].
Les spectres de masse haute rsolution lectrospray (ESI) ont t raliss sur un spectromtre
de masse dot d'une trappe linaire couple un Orbitrap (LTQ-Orbitrap de ThermoFisher
Scientific) en mode d'ionisation lectrospray positif. L'appareil se situe au Laberca,
laboratoire d'Oniris (Ecole Nationale Vtrinaire, Agroalimentaire et de l'Alimentation de
Nantes Atlantique).
4.1.2
Impact Electronique (IE)
En IE, un faisceau dlectrons de haute nergie bombarde les molcules en phase gazeuse.
Les ions ainsi forms pas impact des lectrons avec les espces molculaires sont ensuite
acclrs vers lanalyseur afin dtre spars en fonction de leur rapport masse/charge (m/z).
Du fait de limpact des lectrons, les ions forms dans la source possdent une nergie interne
qui les conduit se fragmenter. Lionisation par impact lectronique prsente un inconvnient
quant au reprage de lion molculaire M+, dintensit souvent trs faible, voire indtectable.
Cette technique a tout de mme lintrt de donner des informations structurales avec laide
de banques de donnes par exemple.
Les spectres de masse IE des produits purs isols ont t raliss sur un spectromtre masse
DSQII (ThermoFisher Scientific) avec une tension dacclration des lectrons de 70 eV
4.1.3
Ionisation chimique (IC)
La source IC est similaire la source IE, seules sont modifies ses conditions dutilisation.
Lionisation se produit par interaction entre des ions ractifs (NH4+ ici), prpars eux-mmes
par ionisation lectronique, et les molcules de lchantillon. Le gaz ractif NH3, sous sa
forme protone NH4+, se comporte comme un acide de Brnsted vis--vis de la molcule. Il se
produit donc une raction de protonation de celle-ci via un complexe ion molcule
intermdiaire qui peut apparatre sur les spectres.
Les spectres de masse IC des produits purs isols ont t raliss sur un spectromtre masse
DSQII (ThermoFisher Scientific) avec une tension dacclration des lectrons de 70 eV et
lammoniac comme gaz ractant.
4.1.4
Spectromtrie de masse Matrix-Assisted Laser Desorption-Ionization (MALDI)
Un mlange de matrice/chantillon co-cristallis sur une surface mtallique conductrice est

dsorb et ionis par un faisceau laser puls travaillant gnralement dans lUV. Les ions
ainsi produits sont ensuite transports dans un analyseur temps de vol ou TOF (analyseur
couramment coupl la source Maldi) travaillant en mode rflectron.
- 126 -

Les mesures ont t ralises sur un spectromtre de masse de type MALDI-TOF-TOF
(Autoflex III de Bruker) en mode d'ionisation positif sur la plate-forme "Biopolymres,
Intractions, Biologie Structurale" de l'INRA de Nantes. La matrice utilise est lacide
dihydroxybenzoque (DHB).
4.2
Spectromtrie de Rsonance Magntique Nuclaire (RMN)
Les spectres de rsonance magntique nuclaire ont t enregistrs au sein de lquipe EBSI
du laboratoire CEISAM de lUniversit Nantes sur des appareils de type Brker Avance 400
(frquences de 400.13 (1H) et 100.03 MHz (13C)), ou Brker Avance 500 avec cryosonde
(frquences de 500.13 (1H) et 125.75 MHz (13C)) selon la quantit de produit analyser et la
rsolution souhaite.
Les chantillons ont t solubiliss dans les solvants deutrs CDCl3, actone-d6 et CD3OD
dans des tubes analytiques de 5 mm de diamtre.
Les dplacements chimiques () sont exprims en ppm par rapport au ttramthylsilane
(TMS) ; les constantes de couplage sont exprimes en Hz.
Les programmes de squence impulsionnelle standard fournie par Brker ont permis de
raliser les expriences bidimensionnelles COSY, NOESY, HSQC et HMBC.
4.2.1
Corrlations homonuclaires
- COSY (1H-1H) : cette exprience fournit des informations sur les couplages homonuclaires
2
J et 3J (protons spars par deux ou trois liaisons) entre les protons voisins et ceux qui sont
adjacents.
- NOESY (1H-1H) : cette technique permet dobserver, dans lespace, les corrlations entre
protons (effets Overhauser) dune mme molcule.
4.2.2
Corrlations htronuclaires
- HSQC (1JHC) : cette technique permet d'observer les couplages chimiques entre les
carbones et les protons directement lis entre eux.
- HMBC (2JHC, 3JHC) : cette technique permet la dtection des couplages longue distance
2
JHC et 2JHC.
4.3
Diffraction aux rayons X
Les expriences ont t menes au laboratoire sur un diffractomtre Nonius-Brker Kappa

CCD avec une radiation Mo-KL2,3 293K. La rsolution des structures a t faite laide du
logiciel SHELXS [225]. Les expriences ont t ralises par M. Aurlien Planchat du
Laboratoire CEISAM de lUniversit Nantes.
- 127 -
Tests Biologiques
Les tests biologiques ont t raliss par le Dr Sophie Barill-Nion de lINSERM-Universit

de Nantes au centre de recherche en cancrologie Nantes-Angers.
5.1
5.1.1
Conditions de culture des lignes cellulaires

Lignes et cultures cellulaires
Toutes les lignes cellulaires sont fournies dpourvues de mycoplasmes ou autre contaminant.
Les lignes humaines de cancer du sein utilises sont les lignes CAL51, BT549, U251,
HTC116, MCF7, MDA-MB-231 et MDA-MB-468. La ligne HeLa (cancer du col de
lutrus) est galement utilise pour les tests. Les cellules sont mises en culture dans du milieu
Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM) contenant 5% de srum de veau ftal (SVF),
4 mM de glutamine, de la pnicilline et de la streptomycine. Toutes les manipulations, de
ltape de mise en culture, celle de dpt des drogues se font en milieu strile sous les PSM
(poste de scurit microbiologique).
5.1.2
Passage cellulaire
Les lignes cellulaires utilises tant adhrentes au plastique, il est ncessaire de les diviser
quand elles arrivent confluence. Il faut donc passer les cellules c'est--dire les diluer dans
du milieu de culture propre afin quelles puissent nouveau se diviser dans de bonnes
conditions. Vingt passages maximum sont effectus partir dun mme chantillon de
cellules : au-del, des phnomnes de drive gntique par slection cellulaire involontaire
pourraient se produire. Dans un premier temps, les cellules sont laves par du phosphate
buffered-saline (PBS). Cette tape est ncessaire dans la mesure o le SVF contient des
inhibiteurs de la trypsine ; il faut donc totalement lliminer. La trypsine est ensuite ajoute et
incube 5 minutes 37C dans lincubateur 5% de CO2. Cette protase rompt les adhrences
entre les cellules entre elles, mais aussi entre les cellules et le plastique de la cuve. Elle va
donc permettre de rcuprer une suspension cellulaire quon va pouvoir diluer nouveau dans
du milieu DMEM.
5.1.3
Comptage cellulaire sur lame de comptage KOVA Glasstic Slide 10 de chez

Hycor
Une dilution au demi de notre suspension cellulaire dans de losine va nous permettre de
visualiser les cellules mortes. Ce colorant ne pntrant que dans les cellules dont la membrane
est altre, il va pouvoir mettre en vidence des dbris cellulaires et ainsi donner un premier
aperu de ltat gnral de notre culture cellulaire : cest un indicateur de la viabilit
cellulaire. Les cellules non colores sont dnombres par comptage au microscope. La surface
de la lame de comptage permet de dnombrer les cellules dans 1 L. On peut alors calculer le
nombre de cellules/mL contenues dans notre suspension puis diluer celle-ci pour obtenir le
nombre de cellules dsir dans un volume donn.
- 128 -

5.1.4
Ensemencement
Pour les tests dapoptose, des plaques 24 puits fond plat sont utilises et ensemences avec
500 L de suspension cellulaire 30 000 cellules/puits. Des plaques blanches opaques de 96
puits sont utilises pour les tests de viabilit cellulaire. En effet, pour doser lactivit
lucifrase, le support ne doit pas permettre la diffusion de la luminescence. Ces plaques sont
ensemences avec 50 L 10 000 cellules/puits. On utilise des plaques 6 puits fond plat
pour les tests de clonognicit : 2 mL 100 cellules/puits sont alors dposs. Il faut utiliser
dans ce cas une trs faible quantit de cellules initiales pour pouvoir dnombrer facilement le
nombre de clones forms.
5.2
Dpt des drogues
Les cellules sont traites par les diffrentes drogues initialement aliquotes qui sont alors
dilues dans du milieu DMEM. Le contrle ngatif au DMSO est toujours bas sur la
concentration la plus forte de drogue utilise. Ceci permet de sassurer de labsence deffet du
solvant. Chaque drogue est prpare dans une dilution intermdiaire 4X, et pour une plaque
de 24 puits on dpose 250 L de chaque drogue dans chaque puits pour obtenir la
concentration X finale, dans un volume final de 1 mL par puits. On teste aussi leffet crois
de deux drogues diffrentes. Les cellules sont laisses incuber avec les drogues pendant 48h
37C.
5.2.1
Drogues ou molcules potentiel anticancreux tester
La chalcone (2-hydroxy-4,4,6-trimethoxychalcone), le cadalne et la flavanone (5-hydroxy4,7-dimethoxyflavanone) sont les molcules isoles de C. odorata.
Le resvratrol (Figure 118) in vitro, induit l'apoptose [226, 227], probablement par une action
sur la COX et travers l'amlioration de la fonction mitochondriale [228], a t utilis comme
contrle positif.
Figure 118 : Structure du resvratrol
5.2.2
ABT 737 ou Abbott laboratory drug 737
LABT737 (Figure 119) (initialement produite par les Laboratoires Abbott), est un inhibiteur
de BH3-mimtique Bcl2/BclxL qui semble agir en bloquant l'activit anti-apoptotiques de la
- 129 -

famille des protines Bcl-2 surexprime dans les cellules cancreuses [229], d'o la
restauration de la mort cellulaire des cellules cancreuses.
Figure 119 : Structure de lABT737 ou 4-[4-[(4'-Chloro[1,1'-biphnyl]-2-yl)mthyl]-1-piperazinyl]-N-[[4[[(1R)-3-(dimthylamino)-1-[(phnylthio)mthyl]propyl]amino]-3-nitrophnyl]sulfonyl]benzamide
5.3
5.3.1
5.3.1.1
Tests cellulaires utiliss

Test APO 2.7
Principe
Pour tudier leffet de ces drogues sur lapoptose des cellules tumorales, nous avons dans un
premier temps fait des cultures cellulaires de diffrentes lignes de tumeurs cancreuses. Les
cellules sont ensemences jusqu 80% de confluence : cest en effet ce niveau de
confluence quun effet des drogues pourra tre observ. Ces lignes sont adhrentes, cest
pourquoi une tape de trypsination est ncessaire avant de pouvoir ensemencer ou rcuprer
les cellules. Pour ltude de combinaison dune drogue donne avec des agents anticancreux
avrs, une concentration fixe dune drogue donne sera dpose dans tous les puits dune
mme colonne, et une concentration donne dune autre drogue le sera dans tous les puits
dune mme ligne. Ainsi, en croisant les drogues nous pourrons valuer si un effet
synergique, additif ou mme antagoniste se produit. Ces expriences seront refaites avec
diverses lignes de cellules et avec des concentrations variables de chaque drogue.
Aprs incubation avec chaque drogue, les cellules sont analyses par un test de dtection de
lapoptose APO2.7. Lantigne APO2.7 (aussi appel antigne 7A6) est une protine de 38
kDa exprime la membrane des mitochondries durant la phase prcoce de lapoptose. Cet
antigne sexprime en rponse une induction dapoptose due divers stress (activation dun
rcepteur de mort Fas, irradiation ou encore en rponse un traitement par des drogues proapoptotiques). Des cellules viables ou ncrotiques sont donc ngatives en APO2.7. Grce un
- 130 -

anticorps monoclonal spcifique de cet antigne, le clone 2.7A6A3 coupl la phycorythrine
(PE), on peut marquer spcifiquement les cellules en apoptose. Aprs ce marquage, la fixation
de lanticorps sur les antignes APO2.7 est analyse au cytomtre en flux ou FACS
(Fluorescence activated cells sorting). Cet appareil permet danalyser la morphologie des
cellules sur deux paramtres ; la granulosit et la taille (FSC/SSC) ainsi que leur fluorescence
en FL2-H. Les cellules vont ainsi passer devant un laser les unes aprs les autres : leur
fluorescence en PE et leur morphologie permettra de les rpartir sur un dot-plot. Des contrles
positifs et ngatifs sont ncessaires afin de quantifier lautofluorescence des cellules en
absence de drogue (ce contrle sera constitu par les cellules traites au DMSO) et en
prsence dune drogue dont on sait daprs la littrature quelle induit de lapoptose (ici le
Resvratrol). On analyse donc le pourcentage de cellules positives lAPO2.7 au bout dune
dure de 48h dincubation avec les drogues.
5.3.1.2
Trypsination
Aprs incubation des cellules avec les drogues pendant 48h, une tape de trypsination est
ncessaire. On rcupre ainsi dans le surnageant les cellules mortes non adhrentes et les
cellules vivantes adhrentes. Le contenu de chaque puits de culture est transfr dans un
eppendorf, puis, aprs centrifugation, chaque culot cellulaire est dpos sur plaque 96 puits
fonds en V. On rcupre ainsi toutes les cellules adhrentes ou non, mortes ou vivantes. Les
plaques sont centrifuges 2 minutes 2000 rpm. Chaque culot cellulaire est repris dans 50 L
dune dilution de lanticorps monoclonal anti 7A6 coupl la PE (2 L danticorps pour
48L de PBS/puits). Lanticorps est ensuite incub 20 minutes lobscurit, puis rinc par du
PBS avant centrifugation 2 minutes 3000 rpm. Le surnageant est vid et 150 L de PBS
contenant 1% de formaldhyde pour fixer cellules et anticorps sont ajouts. Le contenu de
chaque puits est finalement transfr dans des tubes FACS bouchs puis conservs 4C
jusqu lanalyse en cytomtrie en flux. Celle-ci sera faite sur un FACS Calibur II de la plateforme cytomtrie de lU892.
5.3.2
5.3.2.1
Test de la viabilit cellulaire

Principe
On peut galement quantifier la viabilit cellulaire en mesurant la quantit d'adnosine

triphosphate (ATP) produite par les cellules. Pour ce faire la mthode de dosage de chez
Promega, la CellTiter Glo Luminescent Cell Viability Assay est utilise. Elle permet de
mesurer la quantit dATP prsente dans chaque culture cellulaire, quantifiant alors les
cellules mtaboliquement actives. Pour ce dosage, une enzyme particulire, la lucifrase, est
ajoute aux cellules en culture. Celle-ci met de la lumire en catalysant son substrat, la
lucifrine en prsence de Mg2+, dATP et de dioxygne. LATP utilis pour la raction sera
celui prsent dans le milieu de culture et la quantit de lumire mise sera donc
proportionnelle la quantit d'ATP utilise par les cellules : elle refltera donc indirectement
la quantit de cellules viables.
- 131 -

5.3.2.2
CellTiter Glo
La mesure de la luminescence est ralise aprs 72h dincubation des drogues grce un kit
spcifique CellTiter Glo. Le tampon et le substrat CellTiter Glo sont mlangs afin de
reconstituer le mlange enzyme lyophilise/substrat : ceci forme alors le ractif CellTiter
Glo. La luminescence basale est obtenue sur un puits de la plaque contenant le milieu de
culture mais pas de cellule. La plaque est laisse 30 minutes temprature ambiante et un
volume de ractif CellTiter Glo quivalant au volume de cellules prsent dans chaque puits
est ajout (soit 50 L ici). Aprs lyse cellulaire, la luminescence se stabilise et on peut la
mesurer automatiquement avec un luminomtre.
5.3.3
5.3.3.1
Test de clonognicit
Principe
Une des caractristiques majeure des cellules cancreuses est leur capacit former des
clones partir d'une seule cellule. Nous nous proposons donc de tester l'effet de nos drogues
sur cette capacit former ces clones. Ceux-ci peuvent se dvelopper en deux dimensions sur
une surface plastique et alors s'pandre sur cette surface, ou bien ils peuvent se dvelopper en
trois dimensions en s'insrant dans un support poreux. Ces conditions, qui sont alors plus
physiologiques, peuvent tre reproduites en cultivant les cellules dans un gel d'Agar,
permettant ainsi dtudier la conservation de ce caractre malin face aux drogues. Pour
pouvoir visualiser un effet des drogues sur la clonognicit une faible densit cellulaire au
dpart est ncessaire. Une quantit fixe et connue de cellules est donc mise en culture dans
chaque puits, et chaque drogue est ensuite ajoute en agent simple une concentration
connue. Aprs deux semaines de cultures, les clones sont colors au Crystal Violet et
dnombrs lil nu. La comparaison du nombre de clones obtenus en fonction des
diffrentes drogues mises en prsence permettra de statuer sur leffet de celles-ci sur la
clonognicit sur plastique ou sur Agar.
5.3.3.2
Prparation des gels
Pour la clonognicit sur plastique en deux dimensions, les drogues sont ajoutes selon le
mme protocole que pour le test APO2.7 la diffrence quelles sont testes uniquement en
agent simple.
Les gels dAgar des tests de clonognicit en milieu semi-solide 3D sont constitus sous
PSM. Ces gels se constituent en deux couches :
La couche infrieure est constitue dun mlange dAgar 2% fondue dans une solution de
PBS 1X (Ca2+, Mg2+) et conserve au bain-marie 40C. Cette solution dAgar est mlange
avec du milieu de culture DMEM dans les proportions 25 :75. 1 mL de ce mlange chaud est
ensuite dpos dans chaque puits quon laisse solidifier pendant une heure.
La couche suprieure est constitue dAgar 1,4% fondu dans du PBS 1X (Ca2+, Mg2+). 2mL
de cette solution sont dposs sur la couche infrieure : pour que les cellules soient
- 132 -

directement dans le gel, nous raliserons les suspensions cellulaires mlanges aux drogues
directement dans la solution dAgar. Il faut 14 mL dAgar/DMEM chaud pour ensemencer
une plaque (compter un puits de plus, soit, sept ici avec 2 mL/puits). Pour 100 cellules/puits,
il faut 700 cellules au total. Un volume adquat de cellules stock dj trypsines et
dnombres est donc ajout aux 14 mL de DMEM. La temprature de lAgar/DMEM ne doit
pas tre trop leve au risque de tuer les cellules, ni trop basse, auquel cas le gel
polymriserait avant dtre coul dans les puits. Aprs homognisation ce tube est spar en
6 tubes contenant chacun 2 mL de milieu qui recevront chacun le volume de drogue
ncessaire pour avoir la concentration finale voulue. On peut alors couler les 2 mL de couche
suprieure Agar/DMEM/cellules/drogues sur la couche infrieure polymrise. Les plaques
sont incubes deux semaines 37C, puis les colonies sont mises en vidence au Crystal
Violet et dnombres pour chaque puits.
5.3.3.3
Coloration au Crystal Violet
Afin de mieux visualiser le nombre de colonies qui ont pousses lors du test de
clonognicit, (que ce soit sur plastique ou sur gel dAgar) les colonies sont colores au
Crystal Violet qui est un colorant de lADN. Les cellules sont rinces en PBS et le Crystal
Violet 0.5% dilu dans du mthanol est ajout. On laisse agir 10 minutes et on retire le
colorant. Puis on rince en PBS et on laisse les plaques scher lair. On procde de mme
pour les plaques en milieu glifi sans passer par ltape dlimination du surnageant.
- 133 -
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- 147 -
Liste des tableaux
Liste des tableaux

Tableau 1 : Quelques mtabolites secondaires non volatils de Chromolaena odorata ....................................... 154
Tableau 2 : Composition chimique des huiles essentielles des feuilles de Morinda morindoides ...................... 156
Tableau 3 : Composition chimique des huiles essentielles des graines et des feuilles de Morinda lucida
KI :Kovats indices ; RI : Retention indices ..................................................................................... 158
- 148 -
Liste des figures
Liste des figures

Figure 1 : Rpartition mondiale de Chromolaena odorata (zones indiques en couleur jaune) [5]........................ 6
Figure 2 : Effet invasif de Chromolaena odorata ................................................................................................... 7
Figure 3 : Espce Chromolaena odorata (L) R. M. King & H. Ronbinson ............................................................ 8
Figure 4 : Composs majoritaires des huiles essentielles des feuilles de C. odorata ............................................ 10
Figure 5 : Exemples de flavonols de C. odorata ................................................................................................... 11
Figure 6 : Exemples de favanones de C. odorata.................................................................................................. 11
Figure 7 : Exemples de flavones de C. odorata .................................................................................................... 11
Figure 8 : Exemples de chalcone et flavanol de C. odorata .................................................................................. 12
Figure 9 : Exemple de flavonode glycoside de C. odorata .................................................................................. 12
Figure 10 : Acides phnoliques de C. odorata ...................................................................................................... 12
Figure 11 : Alcalodes de C. odorata .................................................................................................................... 13
Figure 12 : Terpnodes de C. odorata ................................................................................................................. 13
Figure 13 : Anthraquinones de C. odorata ............................................................................................................ 14
Figure 14 : Acide gras et phtalate de C. odorata................................................................................................... 14
Figure 15 : Rpartition mondiale de L. fasciculata (zones indiques en jaune) [43] ............................................ 15
Figure 16 : Espce Leptoderris fasciculata (Benth.) Dunn ................................................................................... 15
Figure 17 : Rotnone souponne de Leptoderris micrantha................................................................................ 16
Figure 18 : Rpartition mondiale de M. morindoides (zones indiques en jaune) (Baker) [47] ............................ 17
Figure 19 : Espce Morinda morindoides ............................................................................................................. 17
Figure 20 : Flavonodes de M. morindoides .......................................................................................................... 19
Figure 21 : Iridodes de M. morindoides ............................................................................................................... 20
Figure 22 : Terpnode de M. morindoides ........................................................................................................... 21
Figure 23 : Rpartition mondiale de M. lucida [63] .............................................................................................. 22
Figure 24 : Espce Morinda lucida (Benth) .......................................................................................................... 22
Figure 25 : Composs majoritaires des huiles essentielles des feuilles et des racines de M. lucida ..................... 24
Figure 26 : Anthraquinones des racines, tiges et corces de M. lucida ................................................................. 25
Figure 27 : Anthraquinols de tige de M. lucida ..................................................................................................... 25
Figure 28 : Iridode des feuilles de M. lucida........................................................................................................ 26
Figure 29 : Acide gras du tronc darbre de M. lucida ........................................................................................... 26
Figure 30 : Quelques composs des huiles essentielles [96, 97] ........................................................................... 29
Figure 31 : Exemples de quelques monoterpnes ................................................................................................. 31
Figure 32 : Squelette iridane ................................................................................................................................. 32
Figure 33 : Exemples de quelques sesquiterpnes ................................................................................................ 32
Figure 34 : Exemples de quelques diterpnes ....................................................................................................... 33
Figure 35 : Squelettes de triterpnes ttracycliques et pentacycliques .................................................................. 34
Figure 36 : Exemples de quelques triterpnes ....................................................................................................... 34
Figure 37 : Structure de noyau strane .................................................................................................................. 34
- 149 -
Liste des figures

Figure 38 : Exemples de quelques strodes ......................................................................................................... 35
Figure 39 : Structure de base des flavonodes ....................................................................................................... 37
Figure 40 : Les principales classes de flavonodes ................................................................................................ 38
Figure 41 : Pigeage des espces ractives drives de loxygne (R ) par les flavonodes et formation d'une
structure stable [111] ........................................................................................................................ 39
Figure 42 : Critres structuraux essentiels pour une bonne activit antiradicalaire des flavonodes [112] ........... 40
Figure 43 : Principaux sites impliqus dans la chlation des ions mtalliques (Me n+) [111] ................................ 40
Figure 44 : Anthraquinone .................................................................................................................................... 43
Figure 45 : Carte de la ville dAbidjan .................................................................................................................. 49
Figure 46 : Effet de la saison et du lieu gographique de rcolte .......................................................................... 50
Figure 47 : Effet de la dure de stockage des feuilles sur le rendement ................................................................ 51
Figure 48 : Composition chimique des huiles essentielles dtermine par chromatographie en phase gazeuse
couple la spectromtrie de masse (CG-SM) en fonction du lieu de rcolte .................................. 51
Figure 49 : CCM prliminaires de C1. A lution au CH 2Cl2. B lution Tol/AcOeEt/MeOH (80 :18 :2). 1-UV
visible. 2-UV 254 nm. 3-UV 365 nm. 4-Ractif la vanilline sulfurique. 5-Ractif de Neu
observation UV visible. 6-Ractif de Neu, observation UV 365 nm. 7-Ractif de Liebermann et
Burchard, observation UV 365 nm ................................................................................................... 52
Figure 50 : Schma de fractionnement de lextrait hexanique C1 des feuilles de C. odorata et isolement des
composs Chrom1 et Chrom2 ........................................................................................................... 54
Figure 51 : Schma de fractionnement de C1 et isolement de Chrom3 ................................................................ 55
Figure 52 : Spectre de RMN-1H du compos Chrom1 dans lactone-d6 ............................................................. 56
Figure 53 : Spectre COSY du compos Chrom1 .................................................................................................. 57
Figure 54 : Structure de 5-hydroxy-7,4'-dimethoxyflavanone (Naringenin-7,4-dimethylether) et corrlation
HSQC du compos Chrom1 ; H en bleu et C en vert ...................................................................... 57
Figure 55 : Spectre RMN-1H du compos Chrom2 dans actone-d6 .................................................................... 59
Figure 56 : Structure 2-hydroxy-4,4,5,6-tetramthoxychalcon et corrlations HMBC du compos Chrom2 . 59
Figure 57 : Structure par analyse aux rayons X du compos Chrom2 .................................................................. 60
Figure 58 : Spectre RMN-1H du compos Chrom3 dans actone-d6 .................................................................... 61
Figure 59 : Spectre RMN-2D COSY du compos Chrom3 .................................................................................. 62
Figure 60 : Spectre RMN-2D HMBC du compos Chrom3 ................................................................................. 63
Figure 61 : Corrlation COSY (A) et HMBC (B) du compos Chrom3 ............................................................... 63
Figure 62 : Structure 4-isopropyl-1,6-dimthylnaphthalne (cadalne) du compos Chrom3 .............................. 64
Figure 63 : Distribution en pourcentage des diffrents composants de lhuile essentielle de Morinda morindoides
.......................................................................................................................................................... 65
Figure 64 : Distribution en pourcentage des diffrents composants de lhuile essentielle des feuilles de Morinda
lucida ................................................................................................................................................ 67
Figure 65 : Distribution en pourcentage des diffrents composants de lhuile essentielle des fruits de Morinda
lucida ................................................................................................................................................ 67
Figure 66 : CCM prliminaires de M3. A lution au CH2Cl2. B lution Tol/AcOeEt/MeOH (80 :18 :2). C lution
au Hex/AcOEt (50 :50). 1-UV visible. 2-UV 254 nm. 3-UV 365 nm. 4-Ractif la vanilline
sulfurique. 5-Ractif de Neu observation UV visible. 6-Ractif de Neu, observation UV 365 nm. 7Ractif la potasse alcoolique. ......................................................................................................... 69
Figure 67 : Schma de fractionnement de M3 et isolement de Mor1, Mor2 et Mor3 ........................................... 70
Figure 68 : Diffrents motifs de la structure du compos Mor1 ........................................................................... 71
- 150 -
Liste des figures

Figure 69 : Spectre RMN-1H du compos Mor1 dans lactone-d6 ...................................................................... 71
Figure 70 : Spectre HMBC dans lactone-d6 et corrlations HMBC du compos Mor1 .................................... 72
Figure 71 : Structure 2-actyl-1-hydroxyanthraquinone du compos Mor1 ......................................................... 72
Figure 73 : Corrlations HMBC du compos Mor2 .............................................................................................. 74
Figure 74 : Structure 2-hydroxy-1-mthoxyanthraquinone (alizarin-1-mthylther) du compos Mor2 .............. 75
Figure 76 : Structure 1,5,15-trimthylmorindol et corrlations HMBC du compos Mor3 .................................. 78
Figure 77 : CCM prliminaires de lextrait de dichloromthane (L2) et dactate dthyle (L3). A lution au
CH2Cl2. B lution Tol/AcOeEt/MeOH (80 :18 :2). C lution lAcOEt. 1-UV visible. 2-UV 254
nm. 3-UV 365 nm. 4-Ractif la vanilline sulfurique. 5-Ractif de Neu observation UV visible. 6Ractif de Neu, observation UV 365 nm. 7-Ractif de Liebermann et Burchard, observation UV
visible. 8-Ractif de Liebermann et Burchard, observation UV 365 nm. ......................................... 80
Figure 78 : Schma disolement de Lep1, Lep2, Lep3 et Lep4. (a) L2.5 184 mg Hex/CH 2Cl2 (60:40); L2.6 127.3
mg Hex/CH2Cl2 (50:50); L2.7 126.1 mg Hex/CH2Cl2 (40:60); L2.8 136.9 mg Hex/CH2Cl2 (40:60)81
Figure 79 : Schma disolement des composs Lep5, Lep6, Lep7, Lep8 ............................................................. 82
Figure 80 : Spectre RMN-1H du compos Lep6 dans CDCl3................................................................................ 85
Figure 81 : Spectre RMN-2D HMBC du compos Lep6 ...................................................................................... 86
Figure 82 : Corrlation COSY (rouge), NOESY (vert) et HMBC (noir) du compos Lep6 ................................. 87
Figure 83 : Structure 4,5,6,7-tetramthoxyisoflavone du compos Lep6 ............................................................ 87
Figure 84 : Structure par analyse aux rayons X du compos Lep6 ....................................................................... 87
Figure 85 : Spectre RMN-1H du compos Lep8 dans lactone-d6 ...................................................................... 89
Figure 86 : Corrlation COSY (rouge), NOESY (vert) et HMBC (noir) du compos Lep8 ................................. 90
Figure 87 : Structure 7-hydroxy-4,5,6-trimethoxyisoflavone du compos Lep8 ................................................. 90
Figure 88 : Spectre de masse IE du compos Lep3 ............................................................................................... 91
Figure 89 : Spectre RMN-1H du compos Lep3 dans CDCl3................................................................................ 92
Figure 90 : Corrlations observes sur le spectre HMBC du compos Lep3 ........................................................ 93
Figure 91 : Squelettes de hopne et lupne ........................................................................................................... 93
Figure 92 : Principales corrlations observes sur le spectre NOESY .................................................................. 94
Figure 93 : Structure du (20)29-lupn-3-ol (compos Lep3) .............................................................................. 94
Figure 94 : Spectre RMN-1H du compos Lep7 dans lactone-d6 ...................................................................... 96
Figure 95 : Structure du compos Lep7 ................................................................................................................ 98
Figure 96 : Spectre HMBC du compos Lep7 ...................................................................................................... 99
Figure 97 : Corrlations HMBC du compos Lep7............................................................................................... 99
Figure 98 : Principales corrlations NOESY du compos Lep7 ......................................................................... 100
Figure 99 : Structure loliolide du compos Lep7 ................................................................................................ 100
Figure 100 : Acide olanolique ........................................................................................................................... 101
Figure 101 : Structure diphnylamine du compos Lep1 .................................................................................... 102
Figure 102 : Structure (E)-phytol du compos Lep2 ........................................................................................... 102
Figure 103 : Structure 4-hydroxybenzaldhyde du compos Lep4 ..................................................................... 103
Figure 104 : Schma de fractionnement de lextrait dactate dthyle L3 ......................................................... 104
Figure 105 : Spectre RMN-1H du compos Lep9 dans lactone-d6 .................................................................. 106
- 151 -
Liste des figures

Figure 106 : Motifs du compos Lep9 obtenus partir des spectres RMN-1H et COSY.................................... 107
Figure 107 : Corrlation HMBC du compos Lep9 ............................................................................................ 107
Figure 108 : Structure dihydrochalcone du compos Lep9 ................................................................................. 107
Figure 109 : Spectre RMN-1H du compos Lep11 dans lactone-d6 ................................................................ 108
Figure 110 : Structure et principale corrlations HMBC du compos Lep11 ..................................................... 109
Figure 111 : Structure dacide benzoque du compos Lep10 ............................................................................ 110
Figure 112 : Structure de lacide 2-hydroxybenzoque du compos Lep12 ........................................................ 110
Figure 113 : Effet des composs isols sur la viabilit des cellules. Cellules traites avec 20 M chalcone (C2),
20 M cadalne (C3) ou 20 M resvratrol pendant 48 h, puis l'ATP a t quantifie en utilisant le
test de viabilit CellTiter Glo ........................................................................................................ 111
Figure 114 : Effet des composs isols sur l'apoptose. Cellules Cal51 ont t traites avec 20 M de chalcone
(C2), cadalne (C3) ou le resvratrol (Res) pendant 48 h en combinaison ou non avec l'activit
pharmacologique inhibiteur de Bcl2/BclxL ABT737 (Selleck) 1 M. Puis les cellules ont t
rcupres et analyses par cytomtrie de flux aprs immunomarquage Apo2.7. Les donnes (% de
cellules positives Apo2.7) sont la moyenne de 3 expriences indpendantes. Les barres reprsentent
lcart type = effet significatif par rapport au compos seul (p <0.05) ........................................... 112
Figure 115 : Effet des composs isols de feuilles de C. odorata sur la clonognicit des cellules. Tests de
clonognicit effectus par incubation des lignes cellulaires (A) Cal51, (B) MCF7 ou (C) MDAMB-468 avec 10, 20 ou 50 M de la chalcone (C2), cadalne (C3) ou le resvratrol (Res) pendant
14 jours. Les colonies sont mises en vidence au Crystal Violet et dnombres manuellement. Pour
(A) et (B), les donnes (nombre de colonies) sont la moyenne de 4 expriences indpendantes. La
barre reprsente l'cart-type. Pour (C), un seul test a t effectu .................................................. 113
Figure 116 : Schma dextraction des fractions C1 C4 .................................................................................... 121
Figure 117 : Schma dextraction de M. lucida et L. fasciculata et obtention des fractions F1 F4 .................. 122
Figure 118 : Structure du resvratrol................................................................................................................... 129
Figure 119 : Structure de lABT737 ou 4-[4-[(4'-Chloro[1,1'-biphnyl]-2-yl)mthyl]-1-piperazinyl]-N-[[4-[[(1R)3-(dimthylamino)-1-[(phnylthio)mthyl]propyl]amino]-3-nitrophnyl]sulfonyl]benzamide ...... 130
Figure 121 : Corrlation COSY et HMBC du compos Lep1 ............................................................................. 167
Figure 122 : Spectre RMN-1H du compos Lep2 dans CDCl3............................................................................ 169
Figure 123 : Spectre RMN-1H du compos Lep4 dans CDCl3 .......................................................................... 172
Figure 125 : Structure et principales corrlations NEOSY du compos Lep5 .................................................... 177
Figure 126 : Spectre RMN-1H du compos Lep10 dans MeOD ......................................................................... 182
Figure 127 : Spectre RMN-1H du compos Lep12 dans lactone-d6 ................................................................ 186
- 152 -
Liste des travaux raliss pendant la thse
Liste des communications publies pendant la

thse
Publications
F.P. Bi Kouam, G. Bedi, A.M. Koffi, J.C. Chalchat and T. Y. NGuessan Volatiles
Constituents from Leaves of Morinda morindodes (Rubiaceae): A medicinal plant from

the Ivory Coast The Open Natural Products Journal. 3 (2010), 6-9.
F.P. Bi Kouam, Camille Jacques, Gustave Bedi, Virginie Silvestre, Denis Loquet, Sophie
Barill-Nion, Richard J Robins, Illa Tea Phytochemicals Isolated from Leaves of

Chromolaena odorata : Impact on Viability and Clonogenicity of Cancer-Cells Lines
Phytother Res, (2012). DOI: 10.1002/ptr.4787.
Actions de communication grand public

F.P. Bi Kouam, G. Bedi, A.M. Koffi, J.C. Chalchat et T. Y. NGuessan Etude chimique
des huiles essentielles des feuilles de Morinda morindodes (Rubiaceae) : une plante
mdicinale de Cte dIvoire JSA-SOACHIM 2009 (Yamoussoukro-Cte dIvoire).
F.P. Bi Kouam, G. Bedi, J.C. Chalchat and T. Y. NGuessan.Etude gographique du
chemotype des huiles essentielles de Chromolaena odorata de la ville dAbidjan, Cte

dIvoire JSA-SOACHIM 2010 (Niamey-Niger)
Franois P. Bi Kouam, Illa Tea, Gustave Bedi et Richard Robins Evaluation of the
chemical and biological properties of tropical medicinal plants : Chromolaena odorata

(Asteraceae), Morinda lucida (Rubiaceae), Leptoderris fasciculata (Fabaceae) JED 3MPL
2011 (Mans-France).
Posters
Franois P. Bi Kouam, Illa Tea, Gustave Bedi et Richard Robins Valorisation de plantes
mdicinales de Cte dIvoire: tude chimique et biologique de Chromolaena odorata JED

3MPL 2010 (Nantes-France).
Franois P. Bi Koffi Kouam , Illa Ta, Bdi Gustave et Richard Robins Evaluation of
chemical and biological properties of medicinal plants from the Ivory Coast: Chromolaena
odorata XXVth International Conference on Polyphenols 2010 (Montpellier-France).
- 153 -
Annexes
Annexes
Tableau 1 : Quelques mtabolites secondaires non volatils de Chromolaena odorata
Groupe Chimique et Structure
Nom
Ref.
Coumarines (acides
hydroxycinnamiques)
R=H Acide 3-(4-hydroxyphenyl)-prop-2-noque
[16]
Hydroxybenzoque
Acide p-hydroybenzoque
[16]
Flavonode Chalcone
R1=OH, R2=H 2',4-dihydroxy-4',5',6' trimethoxychalcone
[36]
R=OCH3 Acide frulique
R1=OCH3, R2=OCH3 2'-hydroxy-3,4,4',5',6'-pentamethoxychalcone
Flavonode- Flavanone
R1=OCH3, R2=H 2'-hydroxy-4,4',5',6'-tetramethoxychalcone (Odoratin)
[37]
R1=R3=OH, R2=R4=H, R5=OCH3 Isosakuranetin
[34]
R1=R3=R2=OCH3,R4=H,R5=OH 4'-hydroxy-5,6,7-trimethoxyflavanone
[36]
R1=R5=OH, R2=R4=H,R3=OCH3 Sakuranetin
[33]
R1=OH,R2=R3=R5=OCH3,R4=H; 5-hydroxy-6,7,4'-trimethoxyflavanone
[230]
R1=OH,R2=H,R3=R4=R5=OCH3 Eriodictyol-7,3',4'-trimethylether
R1=OH,R2=R4=H,R3=R5=OCH3; Naringenin-7,4'-dimethylether
[32]
R1=R4=OH,R2=H,R3=R5=OCH3 Persicogenin
R1=R3=R2=OCH3,R4=H,R5=OCH3; 5,6,7,4'-Tetramethoxyflavanone
[34]
R1=R3=OH,R2=R5=OCH3,R4=H; 5,7-dihydroxy-6,4'-dimethoxyflavanone
[164]
Flavonode- Flavanol
R1=R2=OH; Padmatin R1=H,R2=OCH3; Aromadendrin-7,4'-dimethylether
[32]
Flavonode- Flavone
R1=R3=R4=R6=OCH3, R2=R5=OH Quercetagetin-3,5,7,3'-tetramethyl ether
[33]
R1=OH, R2=R3=R5=OCH3, R4=R6=H; Salvigenin
[35]
R1=R2=R3=R5=OCH3, R4=R6=H; 5,6,7,4'- tetramethoxyflavone
[36]
- 154 -
Annexes
R1=R2=R3=R4=R5=OCH3, R6=H; Sinensetin
R1=R3=OH, R2=R5=OCH3, R4=R6=H; Scutellarein-6,4'-dimethylether
[32]
R1=R3=OH, R2=R6=H, R4=R5=OCH3; Luteolin-3',4'-dimethylether

R1=R3=OH, R2=R4=R6=H, R5=OCH3; Acacetin
R1=R3=OH, R2=R4=R5=OCH3, R6=H; Eupatilin
[16]
R1=OH,R2=R3=R4=R5=OCH3, R6=H; 5-hydroxy-6,7,3',4'-tetramethoxyflavone

Flavonode- Flavonol
R1=R3=OH, R2=R4=H, R5=OCH3 ; Kaempferid
[33]
R1=R3=R4=OH, R2=H, R5=OCH3; Tamarixetin
[32]
R1=R3=R4=R5=OH, R2=H; Quercetin
[32]
R1=R3=R4=R5=OH, R2=R4=H; Kaempferol

R1=R3=OH, R2=H, R4=R5=OCH3; Quercetin-3',4'-dimethylether
R1=OH, R2=H, R3=R4=R5=OCH3; Quercetin-3',4',7-trimethylether
R1=R4=OH, R2=H, R3=R5=OCH3; Ombuin
R1=R5=OH, R3=OCH3, R4=H; Rhamnocitrin
R1=OH, R2=R4=H, R3=R5=OCH3; Kaempferol-4',7-dimethylether
R1=R4=R5=OH, R2=H, R3=OCH3; Rhamnetin
R1=R3=R4=OH,, R2=R5=OCH3; Laciniatin
R1=R2=R3=R4=R5=OCH3; 3-hydroxy-3',4',5,6,7-pentamethoxyflavone
[231]
Flavonode glycoside
Rutin
[32]
Triterpenode
Lupeol
[35]
Sterol
-sitostrol
[35]
Alcalode pyrolizidine
R=OH Rinderine
[38]
R=OAc 3'-Actylrinderine
- 155 -
Annexes
Tableau 2 : Composition chimique des huiles essentielles des feuilles de Morinda morindoides
KI :Kovats indices ; RI : Retention indices
KI
RI
Composs
Pourcentage % v/v
Monoterpnes
1
1060
1060
-terpinne
0.2
1072
1068
n-octanol
0.1
1101
1096
linalol
8.4
1104
hortrienol
0.1
1193
1195
-terpineol
1.4
1197
1190
mthyle salicylate
1.2
1221
-cyclocitral
0.3
1225
1230
nerol
0.7
1251
1255
graniol
1.5
10
1283
vitispirane
0.8
Total monoterpnes
14.7
Sesquiterpnes
11
1322
1330
hex-3-enyle tiglate
0.2
12
1337
1340
-lmne
0.4
13
1380
1380
(E)--damascenone
0.9
14
1391
1389
-elemne
0.6
15
1424
1418
-caryophyllne
3.1
16
1429
1430
(E)--ionone
0.1
17
1447
1453
geranyl actone
0.6
18
1460
1454
-humulne
0.7
19
1464
1463
6-demethoxy ageratochromne
1.2
20
1480
1485
D-germacrne
1.3
21
1485
1489
(E)--ionone
0.4
22
1493
1498
-selinne
0.8
23
1499
1498
tiglate de benzyle
0.9
- 156 -
Annexes
24
1503
1506
(E, E)--farnesne
0.8
25
1516
1514
-cadinne
0.3
26
1520
1523
-cadinne
0.3
27
1529
zingigerone
0.2
28
1551
1549
lmol
0.5
29
1561
1564
nerolidol
0.3
30
1613
1613
ttradecanal
0.5
31
1628
1624
10-pi--eudesmol
0.4
32
1655
1654
-cadinol
0.2
33
1660
1664
7-pi--eudesmol
0.4
34
1666
1669
hex-3-enyle salicylate
0.1
35
1702
1700
eudesm-7(11)-en-4-ol
0.4
36
1715
pentadcanal
4.8
37
1836
1837
6, 10, 14-trimthyl pentadecan-2-one
9.6
38
1872
octadecan-9-yne
1.3
39
1878
mthyle linolnate
2.9
40
1886
farnsyle actone
0.3
Total sesquiterpnes
35.4
Composs aromatiques
41
1026
1025
p-cymne
0.2
42
1291
1290
thymol
43
1573
1578
(Z)-hex-3-enyle benzoate
44
1581
1580
hexyle benzoate
0.5
45
1587
1588
(E)-hex-3-enyle benzoate
0.8
46
1770
1760
Benzoate de benzyle
0.9
47
1860
1866
benzyle salicylate
1.7
Total composs aromatiques
12.1
Diterpnes
48
1918
1944
isophytol
0.1
49
1945
1987
acide hexadcanoque
1.1
50
2111
(E)-phytol
28.4
- 157 -
Annexes
Total diterpnes
29.6
TOTAL
91.8
Tableau 3 : Composition chimique des huiles essentielles des graines et des feuilles de Morinda lucida
KI :Kovats indices ; RI : Retention indices
FRUITS
N
KI
RI
FEUILLES
Composs
Pourcentage
%
KI
RI
Composs
Pourcentage
%
1071 1068
n-octanol
6.19
854
854
(E)-hex-3-nol
1099 1097
linalol
1.54
864
859
(Z)-hex-3-nol
0.27
1170
acide caprylique
2.20
868
871
n-hexanol
0.51
1193 1189
-terpinol
1.16
1025 1025
p-cymne
1196 1192
salicylate de mthyle
0.34
1058 1060
-terpinne
1250 1253
graniol
0.43
1071 1068
n-octanol
0.45
1262 1264
(E)-decan-2-enal
0.55
1099 1097
linalol
0.61
1289 1290
thymol
0.30
1193 1192
salicylate de mthyle
1.15
1378 1377
-copane
0.26
1200 1197
safranal
0.26
10 1386 1388
-bourbonne
0.50
10 1220
-cyclocitral
0.39
11 1391 1391
-lmne
0.90
11 1290 1290
thymol
5.30
12 1423 1419
-caryophyllne
5.54
12 1336 1338
-lmne
0.34
13 1430 1432
-copane
13 1378 1377
-copane
0.45
14 1433 1437
-lmne
14 1386
-bourbonne
0.27
15 1452 1446
(E)--farnesne
0.61
15 1391 1391
-lmne
0.89
16 1459 1455
-humulne
1.15
16 1411
(Z)-caryophyllne
0.45
17 1463 1463 6-demthoxy-ageratochromne
4.46
17 1423 1419
(E)-caryophyllne
5.72
18 1484 1485
germacrne-D
1.51
18 1428 1427
2,5-dimethoxy-p-cymne
19 1492 1496
-amorphne
0.37
19 1433 1430
(E)--ionone
0.34
20 1499 1496
bicyclogermacrne +
pentadcanal
0.77
20 1452 1446
(E)--farnesne
0.48
21 1503 1500
-muurolne
0.40
21 1459 1455
-humulne
1.07
22 1510 1506
(E, E)--farnesne
0.27
22 1463 1463
6-demthoxyagerochromne
4.37
- 158 -
Annexes
23 1519 1519
-sesquiphellandrne
0.37
23 1479 1485
(E)--ionone
2.06
24 1524 1523
-cadinne
0.41
24 1484 1486
-selinne
1.15
25 1563 1563
(E)-nerolidol
0.30
25 1492 1494
-selinne
1.15
26 1580 1578
spathulnol
0.37
26 1499 1499
-muurolne
0.92
27 1586 1583
oxyde de caryophyllne
1.25
27 1519 1519
-sesquiphellandrne
0.51
28 1612 1613
ttradcanal
0.61
28 1550 1549
lmol
1.17
29 1627 1624
10-pi--eudesmol
1.71
29 1581 1581
oxyde de caryophyllne
0.30
30 1658 1654
-cadinol
0.80
30 1612 1613
ttradcanal
1.24
31 1676
heptadecan-8-ne
4.30
31 1627 1619
10-pi--eudesmol
2.25
32 1698
heptadcane
0.52
32 1665 1664
7-pi--eudesmol
0.33
eudesm-7(11)-n-4-ol
0.46
33 1701 1700
eudesm-7(11)-en-4-ol
0.68
pentadcanal
3.75
34 1714
pentadcanal
9.91
benzoate de benzyle
0.45
35 1768
benzoate de benzyle
0.48
hexadcanal
0.98
36 1834 1837
6,10,14-trimthylpentadcan-2-one
4.08
6,10,14-trimthylpentandcan-2-one
5.48
37 2108 1996
phytol
33.20
38 1890
3,12,15-octadecatrienoate de
mthyle
1.38
39 1956
acide hexadcanoque
0.51
40 1993
octadcan-13-nal
0.87
41 2057
octadcan-9-n-1-ol
4.10
42 2099
heneicosane
1.70
phytol
14.80
44 2199
doeicosane
1.05
45 2289
trieicosane
4.72
46 2399
tetraeicosane
0.87
47 2499
pentaeicosane
3.30
TOTAL
88.68
TOTAL
82.75
33 1701 1700
34 1714
35 1769 1760
36 1779
37 1834 1837
43 2107 1996
- 159 -
760
Annexes
Compos Chrom1
5-hydroxy-7,4'-dimthoxyflavanone
ou
naringenin-7,4-dimthylether
C17H16O5
masse : 300
cristaux sous forme daiguilles
EI-MS (positif) m/z (int. rel) : 300 (100), 299 (37), 193 (12), 192 (5), 167 (7), 166 (16), 135
(7), 134 (57), 129 (5), 122 (5), 121 (55), 119 (19), 110 (5), 95 (11), 91 (15)
RMN (400 MHz, actone-d6)
position
78.9
5.55 (dd, J = 12.8, J = 3.3 Hz)
3ax
42.7
3.23 (dd, J = 17.7, J = 12.8 Hz)
3eq
42.7
2.80 (dd, J = 17.7, J = 3.3 Hz)
196.6
163.5
94.2
6.05 (d, J = 2.2 Hz)
167.1
93.1
9.08 (d, J = 2.2 Hz)
162.3
10
102.8
130.2
127.5
7.51 (d, J = 8.7 Hz)
113.6
7.02 (d, J = 8.7 Hz)
159.5
113.6
7.02 (d, J = 8.7 Hz)
127.5
7.51 (d, J = 8.7 Hz)
5-OH
12.13 s
7-OCH3
55.4
3.87 s
4-OCH3
55.7
3.85 s
- 160 -
Annexes
Compos Chrom2
2-hydroxy-4,4,5,6-tetramthoxychalcone
ou
odoratin
C19H20O6
masse : 344
cristaux sous forme daiguilles jaune-oranges
EI-MS (positif) m/z (int. rel) : 344 (100), 343 (11), 211 (10), 210 (81), 196 (7), 167 (25)
position
128.1
130.3
7.73 (d, J = 8.8 Hz)
114.6
7.05 (d, J = 8.8 Hz)
161.9
114.6
7.05 (d, J = 8.8 Hz)
130.3
7.73 (d, J = 8.8 Hz)
-CH
124.1
7.89 (d, J = 15.9 Hz)
-CH
143.1
7.83 (d, J = 15.9 Hz)
108.3
162.6
96.5
6.35 (s)
135.4
160.5
154.9
5-OH
13.73 (s)
4-OCH3
54.9
3.90 (s)
4-OCH3
60.4
3.79 (s)
5-OCH3
55.7
3.95 (s)
6-OCH3
61.4
4.00 (s)
C=O
192.7
- 161 -
Annexes
Compos Chrom3
4-isopropyl-1,6-dimthylnaphthalne
ou
cadalne
C15H18
masse : 198
huileux
(13), 153 (23), 152 (22), 141 (10)
RMN (500 MHz, CDCl3)
position
132.5
126.4
7.22 (d, J = 8.7 Hz)
122.2
7.29 (d, J = 8.7 Hz)
142.4
123.7
7.98 (d, J = 2.2 Hz)
135.5
128.0
7.37 (dd, J = 8.7 Hz, J = 2.2 Hz)
125.6
7.94 (d, J = 8.7 Hz)
132.2
10
132.6
19.4
2.61 s
28.8
3.75 (septuplet, J = 7.3 Hz)
23.9
1.36 (d, J =7.3Hz)
23.9
1.36 (d, J =7.3Hz)
21.9
2.53 s
- 162 -
Annexes
Compos Mor1
2-actyl-1-hydroxyanthraquinone
C16H10O5
masse : 282
poudre jaune
(46), 194 (23), 167 (17), 166 (13), 140 (12), 139 (100), 138 (67), 137 (29), 43 (10)
position
162.6
126.3
139.1
8.24 (d, J = 8.2 Hz)
118.7
7.85 (d, J = 8.2 Hz)
127.9
8.29 m
136.2
8.00 m
135.6
8.00 m
127.8
8.37 m
189.8
10
182.5
11
134.2
12
134.1
13
118.1
14
137.0
15
165.8
1-OH
13.37 s
15-OCH3
52.7
3.93 s
- 163 -
Annexes
Compos Mor2
2-hydroxy-1-mthoxyanthraquinone
ou
alizarin-1-mthylther
C15H10O4
masse : 254
cristaux sous forme daiguilles jaunes
(13), 183 (16), 180 (11), 168 (13), 155 (10), 152 (16), 139 (31), 127 (39), 126 (32), 77 (19),
76 (10)
position
148.3
157.3
120.9
7.37 (d, J = 8.4 Hz)
124.9
8.04 (d, J = 8.2 Hz)
126.2
8.24 m
133.6
7.89 m
133.8
7.89 m
126.7
8.24 m
183.0
10
181.5
11
133.0
12
134.8
13
126.6
14
127.0
1-OCH3
61.8
3.95 s
2-OH
9.26 s
- 164 -
Annexes
Compos Mor3
1,5,15-trimthylmorindol
C18H16O6
masse : 328
EI-MS (positif) m/z (int. rel) : 328 (60), 314 (19), 313 (100), , 297 (18), 296 (29), 295 (25),
283 (27), 270 (15), 265 (26), 250 (21), 225 (17), 224 (15), 223 (19), 222 (52), 221 (17), 181
(19), 152 (18), 139 (24), 127 (16), 126 (15), 45 (23)
position
158.7
141.0
134.1
7.87 (d, J = 8.0 Hz)
123.5
8.03 (d, J = 8.0 Hz)
147.8
157.3
121.9
7.36 (d, J = 8.5 Hz)
125.6
7.98 (d, J = 8.5 Hz)
181.9
10
182.9
11
126.9
12
129.3
13
125.9
14
137.2
15
69.5
4.63 s
1-OCH3
62.3
3.91 s
5-OCH3
61.8
3.93 s
6-OH
9.23 s
15-OCH3
58.8
3.46 s
- 165 -
Annexes
Compos Lep1
diphnylamine
C12H11N
masse : 169
huileux
EI-MS (positif) m/z (int. rel) : 169 (100), 168 (60), 167 (32), 166 (6), 84 (9)
Le spectre RMN-1H. du compos Lep1 montre un large singulet dintgration 1H H 7.32

ppm caractrisant le proton NH. Nous observons aussi :
- un multiplet dintgration 4H aromatiques H 7.23 ppm correspondant aux quatre protons
quivalents en position de lazote ;
- un multiplet dintgration 4H aromatiques H 7.12 ppm correspondant aux quatre protons
quivalents en position de lazote ;
- un triplet dtripl dintgration 2H aromatiques H 6.85 ppm (3J = 7.3 Hz, 4J = 1.1 Hz) qui
correspond aux deux protons quivalents en position de lazote.
4H-
4H-
4H-
NH
- 166 -
Annexes
Le spectre Cosy montre bien le couplage en ortho entre les protons H- et H- et le couplage
en mta entre les protons H- et H- mais aussi le couplage en ortho entre les protons H- et
H-.
Les spectres RMN-13C, HSQC et HMBC confirment bien la structure diphnylamine du
compos Lep1.
Figure 121 : Corrlation COSY et HMBC du compos Lep1
- 167 -
Annexes
Compos Lep2
E-phytol
C20H40O
masse : 296
huileux
EI-MS (positif) m/z (int. rel) : 137 (6), 126 (12), 125 (7), 124 (14), 123(47), 122 (6), 111 (13),
110 (5), 109 (10), 97 (15), 96 (11), 95 (21), 86 (7), 85 (16), 84 (10), 83 (26), 82 (22), 81 (43),
80 (7), 71 (100), 70 (18), 69 (25), 68 (18), 67 (11), 57 (36), 56 (17), 55 (31), 43 (43), 42 (6),
41 (32)
Ltude du spectre RMN-13C de ce compos et les squences DEPT 90 et DEPT135 montre la

prsence de vingt atomes de carbone rpartis comme suit :
- dix groupements CH2 hybrids sp3 dont un oxygn (C 59.61 ppm) ;
- quatre groupements CH dont un thylnique C 123.28 ppm ;
- cinq groupements CH3 ;
- un carbone quaternaire thylnique C 140.48 ppm.
A ce stade, on peut valuer le nombre datomes dhydrognes 39. Par ailleurs nous
remarquons sur le spectre RMN-1H (Figure 122) :
- un multiplet dintgration 1H H 5.41 ppm attribuable au CH thylnique ;
- un doublet dintgration 2H H 4.15 ppm (J = 6.9 Hz) attribuable au CH2 oxygn ;
- un multiplet dintgration 2H H 2.00 ppm qui ne peut tre attribu qu un CH2 voisin
un carbone thylnique.
Tous les autres signaux apparaissent dans lintervalle des dplacements chimiques infrieur
1.7 ppm.
Ces observations permettent de suggrer que latome doxygne signal plus haut sur un
groupement CH2, ne peut tre que sous la forme dun groupement hydroxyle. Ce qui confirme
la formule brute C20H40O du compos Lep2.
- 168 -
Annexes
CH=C
CH2-O
CH2
Lexamen du spectre COSY montre que les deux protons H 4.15 ppm du groupement
CH2OH corrlent avec le proton H 5.41 ppm du CH thylnique suggrant que ces protons
sont voisins. On peut crire, en tenant compte de ce qui a t dit prcdemment, une partie de
la molcule sous forme :
Le proton thylnique H 5.41 ppm corrle avec les 3H sous forme de singulet H 1.68
ppm. Un groupement mthyle est donc plac sur la double liaison ; ceci est dailleurs correct
vu la valeur du dplacement chimique de ce mthyle do la portion de structure :
Le CH2 H 2.00 ppm corrle avec un CH2 H 1.41 ppm qui corrle son tour avec un autre
CH2 H 1.26 ppm. Ce dernier corrle avec un CH H 1.38 ppm qui lui-mme corrle avec
un CH3 H 0.85 ppm et un CH2 H 1.25 ppm do la portion de structure :
- 169 -
Annexes
Lexamen du spectre HMBC confirme toutes ces donnes, notamment, les corrlations des
protons du groupe CH2 oxygn avec les carbones thylniques et le carbone du mthyle en
position 3 ; ainsi que des corrlations entre les protons de ce mthyle et les atomes de carbone
thylnique et le carbone du mthylne en position 4.
Outre le mthyle en position C-3, dj signal, deux apparaissent sous forme dun doublet
dintgration 6H H 0.87 ppm (J = 6.4 Hz) signifiant la prsence dun groupement
isopropyle dans la structure. Les deux autres apparaissent tous les deux sous forme de doublet
H 0.85 ppm, (J = 6.1 Hz) et H 0.85 ppm, (J = 6.6 Hz) signifiant la prsence de deux
mthyles sur un groupement CH.
Toutes ces donnes compares avec celles se trouvant dans la littrature [210-212] confirment
la structure (E)-phytol du compos Lep2.
- 170 -
Annexes
Compos Lep3
(20)29-lupn-3-ol
ou
lupol
C30H50O
masse : 426
poudre blanche
position
DEPT
CH2
38.7
1.68 m, 0.91 m
CH2
27.5
1.04 m, 1.61 m
CH
79.1
3.22 (dd, J = 11.3 Hz, J = 5.1 Hz)
38.9
CH
55.3
0.70 (d, J = 8.9 Hz)
CH2
19.3
1.40 m, 1.51 m
CH2
34.3
1.40 m
40.8
CH
50.5
1.28 m
10
37.2
11
CH2
20.9
1.23 m, 1.42 m
12
CH2
25.2
1.08 m, 1.69 m
13
CH
38.1
1.65 m
14
42.8
15
CH2
27.4
1.04 m, 1.61 m
16
CH2
35.6
1.45 m
17
43.0
18
CH
48.3
1.37 m
19
CH
48.0
2.40 (dd, J = 11.0 Hz, J = 5.6 Hz)
20
151.1
21
CH2
29.9
1.31 m, 1.93 m
22
CH2
40.0
1.20 m, 1.40 m
23
CH3
28.0
0.98 s
24
CH3
15.4
0.77 s
25
CH3
16.1
0.84 s
26
CH3
16.0
1.05 s
27
CH3
14.6
0.96 s
28
CH3
18.0
0.81 s
29
CH2
109.4
4.71 (dd, J = 2.5 Hz, J = 0.6 Hz)

4.58 (dd, J = 2.5 Hz, J = 1.3 Hz)
30
CH3
19.3
1.70 (dd, J = 1.3 Hz, J = 0.6 Hz)
- 171 -
Annexes
Compos Lep4
4-hydroxybenzaldhyde
C7H6O2
masse : 122
poudre jaune
Sur le spectre RMN-1H du compos Lep4 (Figure 123) nous observons :

- Un signal singulet H 9.88 ppm dintensit 1H attribuable au proton dune fonction
aldhyde CHO ;
- Deux doublets dintgration 2H chacun, couplant en ortho, H 7.81 ppm (J = 8.6 Hz) et
H 6.95 ppm (J = 8.6 Hz). Ce systme 2H AA, 2H XX sur le cycle aromatique indique quil
est bisubstitu en position 1 et 4 ;
- un large singulet dintgration 1H H 5.42 ppm caractrisant le groupement hydroxyle dun
phnol.
CHO
H-3 et H-5
- 172 -
H-2 et H-6
Annexes
Compos Lep5
acide olanolique
C30H48O3
masse : 456
poudre blanche
position
DEPT
CH2
39.4
1.61 m, 1.00 m
CH2
28.1
1.62 m, 1.52 m
CH
78.6
3.15 (dd, J = 11.1 Hz, J = 4.7 Hz)
39.5
CH
56.3
0.80 m
CH2
19.2
1.55 m, 1.51 m
CH2
34.5
1.40 m, 1.21 m
40.2
1.602 m
CH
48.6
10
37.9
11
CH2
24.2
1.89m, 1.603 m
12
CH
123.1
5.24 (t, J = 3.7 Hz)
13
145.0
14
42.6
15
CH2
28.5
1.81 m, 1.07 m
16
CH2
23.8
2.01 m, 1.61 m
17
46.91
18
CH
42.3
2.89 (dd, J = 13.9 Hz, J = 4.4 Hz)
19
CH2
46.87
1.72 m, 1.14 m
20
31.3
21
CH2
33.7
1.51 m, 1.30 m
22
CH2
33.38
1.76 m, 1.54 m
23
CH3
28.7
0.99 s
24
CH3
16.3
0.78 s
25
CH3
15.8
0.938 s
26
CH3
17.6
0.81 s
27
CH3
26.3
1.17 s
28
178.9
29
CH3
33.41
0.92 s
30
CH3
23.9
0.940 s
- 173 -
Annexes
Il s'agit d'un triterpne dont le squelette typique de l'olane est constitu de cinq cycles C6 :
A, B, C, D et E [207].
H-27
H-30 H-25
H-23
H-29
H-26
H-24
H-3
H-12
OH-3
Linterprtation des spectres RMN-13C avec ditions DEPT90 et DEPT135 permet de

dnombrer les 30 atomes de carbone dont huit quaternaires (dont un C=O et un thylnique),
5CH, 10CH2 et 7CH3.
A lexception des sept singulets dans la zone de dplacements chimiques (0.77-1.18 ppm),
dun large singulet H 3.31 ppm et dun triplet H 5.24 ppm, le spectre RMN-1H (actoned6) (Figure 124) est mal rsolu. Les sept singulets correspondent des mthyles ; le singulet
H 3.31 ppm est relatif au groupement hydroxyle en position 3- du cycle A. Le triplet H
5.24 ppm reprsente le signal du proton thylnique CH=C du cycle C (Figure 124).
Le spectre HSQC tablit la corrlation entre le proton thylnique H 5.24 ppm et le carbone
C 123.1 ppm. Le signal proton H 3.15 ppm port par le carbone C 78.6 ppm est
caractristique du proton CH hydroxyl en position 3. Sur le spectre COSY, ce proton est
corrl en 3J avec les 2H mthylniques CH2-2 dont le signal multiplet est centr H 1.59
ppm (1.62 et 1.52). Le spectre HMBC montre des corrlations du proton H 3.15 ppm avec
les carbones C 28.7 ppm (CH3-23) et C 16.3 ppm (CH3-24).
- 174 -
Annexes
Les 2H du CH2-2 dont le signal multiplet est centr H 1.59 ppm prsentent une corrlation
en 3J (COSY) avec le proton H 1.00 ppm. Ce dernier est corrl en 3J (HMBC) avec les
carbones C 15.8 ppm (CH3-25) et C 48.6 ppm (CH-9). Le dplacement chimique des 3H
de CH3-25 est H 0.938 ppm (HSQC). Sur le spectre HMBC, ils sont corrls avec les
carbones C 56.3 ppm (CH-5), 48.6 ppm (CH-9), 37.9 ppm (C-10) et 39.4 ppm (CH2-1). Il
faut noter en plus, la corrlation HMBC entre le proton CH-9 et le carbone quaternaire C-10.
Sur le spectre NOESY nous observons une corrlation entre le proton CH-5 H 0.80 ppm et
les 3H de CH3-25 sortant sous forme singulet. Par consquent ce mthyle est li au carbone
quaternaire C-10, confortant ainsi la corrlation observe en HMBC entre les protons CH3-25
et le carbone C-10. Or seul le proton CH-5 est corrl en 3J (COSY et NOESY) avec les
protons CH2-6 H 1.55 et 1.41 ppm ; ce qui exclut la possibilit de liaison C-10-C-6. On en
dduit la jonction C-10-C-5 permettant de constituer le cycle A.
- 175 -
Annexes
Le spectre NOESY prsente pour le proton CH-3 H 3.15 ppm des taches de corrlation
avec les protons H 0.99 ppm (CH3-23) et H 0.78 ppm (CH3-24) qui sont leur tour
corrls en HMBC aux mmes carbones C 78.6 ppm (CH-3), C 56.3 ppm (CH-5) et au
carbone quaternaire C-4 C 39.5 ppm. Les mthyles CH3-23 et CH3-24 sont donc gmins.
Le proton CH-12 (H 5.24 ppm) est corrl en 3J (COSY et NOESY) aux protons du CH2-11
H 1.89 et 1.603 ppm. Ces derniers sont corrls en HMBC aux carbones CH-9, CH2-11, C-14
et CH-18. Sur le spectre NOESY le proton CH-12 est corrl aux protons H 2.89 ppm (CH18) et aux 2H de CH2-11 H 1.89 et 1.603 ppm. Or le proton CH-18 nest pas corrl en 3J
(COSY) avec le proton CH-12, donc le carbone quaternaire entre CH2-11 et CH-18 est
hybrid sp2 : C-13 (C 145.0 ppm).
- 176 -
Annexes
Les corrlations HMBC dune part et NOESY dautre part observes pour les mthyles CH326 et CH3-27 permettent dtablir entre autres les liaisons C-14-C-8 et C-7C-8. La liaison C6-C-7 est conforte par la corrlation en HMBC entre les protons CH2-6 et le carbone CH2-7.
Sachant que le proton CH-12 est corrl en HMBC C-14 et que la liaison C-12-13 existe
dj, on en dduit la jonction C-13-C14 qui complte le squelette des cycles A, B et C.
En combinant les rsultats issus des spectres COSY, HSQC, HMBC, NOESY et ceux de la
littrature, on parvient reconstituer le squelette du triterpne lexception du groupement
COOH dont la prsence est indique par le signal C=O C 178.9 ppm. Les corrlations
HMBC relatives la fonction COOH nont pas t observes. Les protons mthylniques de
CH2-6 et CH2-22 et celui de CH-18 sont tous corrls en HMBC au carbone C-17. Ces
corrlations prcisent les liaisons C-17-CH2-16, C-17-C-18 et C-17-C-22. Le carbone
quaternaire C-17 sera donc li au groupement COOH.
Figure 125 : Structure et principales corrlations NEOSY du compos Lep5
- 177 -
Annexes
Compos Lep6
4,5,6,7-tetramthoxyisoflavone
C19H18O6
masse : 342
pales
(6), 132 (5)
position
150.6
7.81 s
125.6
175.3
153.2
140.8
157.9
96.2
6.69 s
154.8
10
113.8
124.4
130.5
7.48 (d, J = 8.8 Hz)
114.1
6.96 (d, J = 8.8 Hz)
159.7
114.1
6.96 (d, J = 8.8 Hz)
130.5
7.48 (d, J = 8.8 Hz)
5-OCH3
62.3
3.97 s
6-OCH3
61.7
3.92 s
7-OCH3
56.4
3.96 s
4-OCH3
55.5
3.84 s
- 178 -
Annexes
Compos Lep7
Loliolide
C11H16O3
masse : 196
poudre blanche
(54), 139 (15), 138 (8), 137 (12), 136 (14), 135 (46), 125 (14), 112 (23), 111 (100), 110 (19),
109 (26), 108 (11), 107 (34), 97 (20), 96 (10), 95 (36), 93 (18), 91 (16), 85 (26), 83 (9), 81
(19), 79 (18), 77 (11), 69 (20), 67 (35), 66 (9), 65 (14), 57 (33), 55 (13), 53 (13), 51 (8), 43
(93)41 (31), 39 (18)
position
171.6
113.1
5.68 s
183.4
87.1
46.5
1.72 H- (dd, J = 13.4 Hz, J = 3.9 Hz)

2.39 H- (ddd, J = 13.4 Hz, J = 2.8 Hz, J = 2.5 Hz)
66.8
4.29 (sextuplet, J = 3.3 Hz)
47.9
1.54 H- (dd, J = 14.3 Hz, J = 3.7 Hz)

2.00 H- (ddd, J = 14.2 Hz, J = 2.4 Hz, J = 2.3 Hz)
36.6
10
27.5
1.74 (d, J = 0.6 Hz)
11
31.1
1.26 s
12
26.9
1.47 s
7-OH
4.13 (d, J = 3.3 Hz)
- 179 -
Annexes
Compos Lep8
7-hydroxy-4,5,6-trimthoxyisoflavone
C18H16O6
masse : 328
pales
EI-MS (positif) m/z (int. rel) : 328 (18), 314 (17), 313 (100), 311 (5), 285 (6), 164 (8), 132 (8)
position
151.6
8.01 s
125.4
174.8
153.8
140.5
157.3
100.2
6.74 s
155.6
10
113.4
125.9
131.3
7.51 (d, J = 8.9 Hz)
114.3
6.97 (d, J = 8.9 Hz)
160.4
114.3
6.97 (d, J = 8.9 Hz)
131.3
7.51 (d, J = 8.8 Hz)
5-OCH3
62.1
3.891 s
6-OCH3
61.6
3.889 s
4-OCH3
55.6
3.83 s
- 180 -
Annexes
Compos Lep9
dihydrochalcone
C15H14O
masse : 210
cristaux blancs
position
142.6
129.3
7.24-7.34 m
129.2
7.24-7.34 m
126.8
7.17 (tt, J = 7.0 Hz, J = 1.6 Hz)
129.2
7.24-7.34 m
129.3
7.24-7.34 m
-CH2
40.8
3.37 (t, J = 7.6 Hz)
-CH2
30.7
3.03 (t, J = 7.6 Hz)
138.1
128.8
7.99-8.05 m
129.5
7.48-7.54 m
133.7
7.61 (tt, J = 7.4 Hz, J = 1.3 Hz)
129.5
7.48-7.54 m
128.8
7.99-8.05 m
C=O
199.4
- 181 -
Annexes
Compos Lep10
acide benzoque
C7H6O2
masse : 122
cristaux belges
EI-MS (positif) m/z (int. rel) : 123 (8), 122 (99), 106 (7), 105 (100), 78 (5), 77 (61), 76 (6), 74
(7), 51 (24), 50 (15)
RMN (500 MHz, MeOD)
Sur le spectre RMN-1H du compos Lep10 (Figure 126) nous observons :

- deux protons aromatiques H 7.99 ppm (3J = 7.3 Hz) sous forme de doublet ;
- un proton aromatique H 7.47 ppm (3J = 7.3 Hz) sous forme de triplet ;
- deux protons aromatiques H 7.39 ppm (3J = 7.4 Hz) sous forme de triplet
2H
2H
1H
Figure 126 : Spectre RMN-1H du compos Lep10 dans MeOD
Les signaux RMN-1H suggrent un noyau benznique monosubstitu.

Le spectre RMN-13C avec les ditions DEPT90 et DEPT135 montre 7 signaux carbone dont 2
quaternaires (du type CO et/ou aromatique), 5CH aromatiques dont 2 CH aromatiques deux
deux quivalents.
- 182 -
Annexes
Si on prend en compte la masse de 122 g/mol obtenue par le spectre IC et les donnes RMN
nous pouvons envisager une formule brute de C7H6O2 avec un nombre dinsaturations de 5.
La RMN nous donne de faon certaine un cycle aromatique et trs probablement une fonction
carbonyle CO, soit un nombre dinsaturations de 5. De la formule brute on en dduit aisment
que la fonction CO est une fonction acide carboxylique COOH. Ainsi le compos Lep10 est
lacide benzoque.
- 183 -
Annexes
Compos Lep11
4-hydroxy-3-mthoxybenzoque
ou acide vanillique
C8H8O4
masse : 168
cristaux belges
EI-MS (positif) m/z (int. rel) : 168 (100), 154 (6), 153 (73), 151(16), 125 (17), 123 (5), 97
(21), 52 (6), 51 (6)
position
123.0
113.5
7.56 (d, J = 1.9 Hz)
149.1
152.1
115.5
6.91 (d, J = 8.2 Hz)
124.9
7.59 (dd, J = 8.2 Hz, J = 1.9 Hz)
1-COOH
167.5
3-OCH3
56.4
3.91 s
4-OH
7.9-8.8 large s
- 184 -
Annexes
Compos Lep12
acide 2-hydroxybenzoque
ou
acide salicylique
C7H6O3
masse : 138
cristaux marron clairs
EI-MS (positif) m/z (int. rel) : 138 (43), 121 (11), 120 (100), 93(7), 92 (69), 65 (10), 64 (20),
63 (15), 39 (8)
position
113.7
163.0
118.0
6.94 (d, J = 8.1 Hz)
136.5
7.51 (td, J = 7.8 Hz, J = 1.2 Hz)
119.9
6.93 (t, J = 7.5 Hz)
131.3
7.90 (dd, J = 7.8 Hz, J = 1.2 Hz)
1-C=O
172.8
Sur le spectre RMN-1H du compos Lep12 nous observons :

- un proton aromatique H 7.90 ppm (3J = 7.8 Hz, 4J = 1.2 Hz) sous forme de doublet
dedoubl ;
- un proton aromatique H 7.51 ppm (3J = 7.8 Hz, 4J = 1.2 Hz) sous forme de triplet
dedoubl ;
- deux protons aromatiques entre H 6.85-7.02 ppm sous forme dun massif.
Des spectres RMN-1H et COSY, nous pouvons dire que le compos Lep12 possde un noyau
benznique bisubstitu en position 1 et 2.
- 185 -
Annexes
2H
1H
1H
La squence HSQC montre que massif compris entre H 6.85 et 7.02 ppm est constitu dun
doublet H 6.94 ppm (3J = 8.1 Hz) et dun triplet H 6.93 ppm (3J = 7.5 Hz).
Le spectre RMN-13C donne 7 signaux carbone dont trois quaternaires (dont probablement un
CO et deux aromatiques) et 4 CH aromatiques.
Si on prend en compte la masse de 138 g/mol obtenue par le spectre IC et les donnes RMN
nous pouvons envisager une formule brute de C7H6O3 avec un nombre dinsaturations de 5.
La RMN nous donne de faon certaine un cycle aromatique et une fonction carbonyle CO ;
soit un nombre dinsaturations de 5. Au vu des intgrales protons, du nombre de carbone et de
la formule brute, cela nous laisse supposer que cette molcule est un cycle aromatique bisubstitu ayant pour substituant une fonction acide carboxylique COOH et une fonction
hydroxyle OH. Ainsi le compos Lep12 est lacide 2-hydroxybenzoque
- 186 -

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