Vibrio Cholerae

Vibrio cholerae es un organismo del tipo procariota, perteneciente al gnero

Vibrio, de la familia Vibrionaceae, en conjunto con los gneros Moritella,
Enterovibrio, Grimontia y Photobacterium.
Todos los miembros del genero Vibrio, con excepcin de V. rnetschnikovii y V.
gazogenes, son oxidasa positivos y reducen los nitratos a nitritos. La familia
Vibrionaceae incluye muchas especies, que en su mayor parte son habitantes
normales del ambiente acuatico. De mas de 30 especies del complejo VibrioPhotobacterium, solo 12 se han reconocido como patgenos para el ser
humano (. Aunque la mayor parte de estas 12 especies se aislan en caso de
infecciones intestinales y extraintestinales, solo V.Cholerae se asocia con el
clera epidmico
Los vibriones no identificados se han denominado "especies marinas" o,
simplemente, "vibriones marinos". Estas especies marinas se definen como
cepas de Vibrio o Photobacterium oxidasa positivas; fermentan la D-glucosa,
no crecen en caldo nutritivo sin NaCI, pero crecen si este se agrega. La mayor
parte de los microorganismos aislados de aguas de los ocanos o los estuarios
pertenecen al grupo de "vibriones marinos" y son difciles de identificar excepto
en unos cuantos laboratorios especializados, Debido a que no se asocian con
enfermedades humanas, los vibriones marinos de ordinario no tienen que ser
identificados. Los laboratorios clnicos y de salud pblica por lo general
notifican los vibriones patgenos para el ser humano indicando el gnero y la
especie, y todos los dems como "vibriones marinas".
El Vibrio Cholerae presenta las siguientes caractersticas:
Es una bacteria del tipo GRAM NEGATIVO no esporulada con forma de
Bacilo corto y curvado, a manera de una coma. Su nombre genrico
proviene del latn vibrare por su caracterstico movimiento observable
al microscopio; comma se deriva del latn y denota la forma curvilnea
como de coma. Cholerae proviene del griego y significa corriente o
flujo, esto es diarrea o flujo bilioso.
El bacilo mide de 0.2 y 0.4 m de ancho por 1.5 a 2.4 m de largo
aproximadamente.
En cultivos puros y frescos se presenta de tamao uniforme, mientras
que en cultivos viejos se torna pleomrfica, con formas ocasionales
esfricas o filamentosas y cadenas de bacilos.
Posee un flagelo polar largo que le imparte un movimiento vibrtil.
Es una bacteria anaerobia facultativa, lo que significa que pueden
realizar su metabolismo respiratorio en presencia como fermentativo en
ausencia de oxgeno.
Es Oxidasa positivo, lo que significa que puede usar el oxgeno para la
produccin de energa. Esta caracterstica es fundamental a la hora de
determinar la presencia de dicha bacteria ya que se distingue de esta
manera de las Enterobacterias fermentadoras de azcares.
Tienen la capacidad de fermentar la glucosa lo que las distingue de otras
pseudomonadceas.

 Son halotolerantes(toleran la sal), con afinidad por el medio alcalino y

altamente sensibles a los cidos.
El rango de temperaturas de crecimiento estn entre 16 y 42 C con un
ptimo de 37C.

Serogrupos
Presenta un antigeno Lipopolisacarido tipo O y existen alrededor de 150
serotipos, pero sin embargo solo el O1 y O139 producen el clera epidmico.
Se han descrito dos biotipos(variedad biolgica) de V. Cholerae O1: el
Clsico y el El Tor. Se cree que el biotipo clsico gener las pandemias del
siglo XIX. Las primeras cepas de El Tor fueron aisladas a principios del siglo
XX, de cadveres de peregrinos que haban estado en la estacin de
cuarentena El Tor en la Peninsula de Sina, siendo este el predominante en la
Sptima pandemia que comenz en 1961.
Los biotipos se diferencian entre s por caractersticas biolgicas y
epidemiolgicas. El clsico se distingue por su alta tasa de letalidad de 10
hasta el 50%. El Tor, en cambio, tiene una tasa de ataque menor y una
letalidad considerablemente ms baja que el clsico. Mientras este ltimo ha
ido desapareciendo dejando un reducto en Bangladesh, El Tor muestra
tendencia a persistir en el ecosistema de muchos pases tornndose endmico.

Serotipos
Como bien se dijo, se reconocen tres serotipos(variedades
serolgicas) de V.Cholerae O1, dentro de cada uno de los dos
biotipos mencionados(El Tor y el Clsico). Los serotipos se
diferencian entre s por los antgenos somticos especficos que
contengan. El serotipo Inaba posee los antgenos A y C; el serotipo
Ogawa tiene los antgenos A y B; y el Hikojima tiene los tres
antgenos: A,B,C.

Tor

Ogawa

A,B

Inaba

A,C

Hikojima

A,B,C

Ogawa

A,B

Inaba

A,C

Hikojima

A,B,C

Serotipo O1

Clsico

En el laboratorio, los serotipos se diferencian mediante pruebas de

aglutinamiento en lmina de cepas que primero han aglutinado
francamente con suero de conejo polivalente anti-O1, y luego
aglutinan francamente con sueros anti-Inaba o anti-Ogawa
preparados en conejos.

Las cepas de V.Cholerae no-O1 son aquellas que no aglutinan en el

antisuero polivalente anti-O1, con el cual se identifica a las cepas
epidmicas. Al V.Cholerae no-O1 tambien se le denomina no
aglutinante, NAG o Vibrio no-colrico. Lo que debe tenerse claro
es que el V. Cholerae no-O1 no sintetiza la toxina colrica o
colergeno. Estos vibrios son, sin embargo, importantes
epidemiolgicamente por encontrarse distribuidos por todo el
mundo, aislndoseles del hombre, animales domesticos, mascotas,
y del ambiente acuoso. En el el mar se le encuentra en peces,
bivalvos y crustceos, cuyo consumo en platos cocinados
inadecuadamente se asocia con cuadros de diarrea. En el ser
humano, los vibrios no-O1 pueden causar gastroenteritis de uno a
tres das de evolucin, as como infecciones extraintestinales como
septicemia, otitis media, infeccin de heridas y cistitis.

Factores de Virulencia
Pilis de Adherencia: conocidos como pilis corregulados por toxina.
Toxina Colrica
El V.Cholerae O1 produce una toxina termolbil, similar a la
enterotoxina labil de Escherichia Coli y codificada en el cromosoma
bacteriano. La molcula se compone de una subunidad A noinmunognica, depositara su actividad txica, y 5 subunidades
inmunognica, reconocibles por el receptor celular(Gaglisido
GM1), para que la subunidad A pueda ser internalizada en
enterocitos de la mucosa intestinal.
El organismo humano sintetiza anticuerpos contra el
Vibrio(anticuerpos vibriocidas) y anticuerpos anti-toxina. La
presencia de stos anticuerpos son de ayuda para determinar si
una persona tiene infeccin con el bacilo o ha estado expuesta a la
bacteria. Si ha habido infeccin con el bacilo del clera se producen
anticuerpos vibriocidas y antitoxina en trmino de dos a cuatro
semanas despues de la infeccin. Puede haber casos de clera en
que no se demuestren los anticuerpos, por ejemplo si se prescribe
un antibitico adecuado al inicio del ataque. La toxina del clera y
de E.Coli son similares y puede haber respuesta serolgica
cruzada.

AFINIDAD POR SUBSUSTRATOS

Medio Alcalino
El bacilo del clera posee una marcada referencia por la alcalinidad,
tanto as, que su hbitat normal es el duodeno y la parte proximal
del yeyuno, cuya alcalinidad es notoria por verterse ah los jugos
intestinal y pancretico, que son muy alcalinos como la blis. Esa
propiedad es aprovechada por los microbilogos para aislarlo en
cultivo puro en el laboratorio.
Salinidad
La afinidad por la sal, o mejor, por el in sodio, se denomina
Halofilia. Las especies de vibriones importantes, V.Cholerae y V.
mimicus, son Haloflicas facultativas, esto es, crecen bien en
presencia del ion sodio, pero tambin pueden crecer en ausencia de
l. Las nueve especies restantes, son Haloflicas estrictas porque
necesitan obligatoriamente el sdio para crecer. Esa conducta puede
emplearse en la diferenciacin de las especies de Vibrio de la
siguiente manera: en un caldo nutritivo sin cloruro de sodio solo
crecen el V.Cholerae y V.mimicus; en un caldo con 1% de NaCl
crecen las demas especies; en caldo al 6% el crecimiento de
V.mimicus se reduce al 50%; en caldo al 8% se inhibe el
V.Cholerae, mientras que el V.alginolyticus puede resistir hasta el
12% de sal.

V.Cholerae prolifera bien en una salinidad de a 4 a 17 gramos de

cloruro de sodio por litro de agua. En tales condiciones puede
sobrevivir por un largo tiempo. El sudor corporal presenta una
salinidad y nutrimentos favorables a la transmisin de la infeccin
entre personas que entran en contacto personal.

Quitina
El bacilo del clera sintetiza quitinasa, una enzima que le permite
adherirse al carapacho de los crustceos(como cangrejos),
tornndose ah muy resistente al calor. Por lo tanto, la ebullicin o
tratamiento al vapor no garantiza la destruccin del vibrin, por lo
que se recomienda hervir los cangrejos por lo menos durante 30
minutos.

Sedimento orgnico
V.Cholerae, al igual que muchas otras especies patgenas,
empieza a morir en el agua cuando la temperatura desciende
paulatinamente hasta debajo de 10C. Sin embargo, el V.Cholerae
puede permanecer viable a una baja temperatura sin que llegue a
congelarse, si hay abundante sedimento orgnico, como en
reservorios de agua contaminados. Ah puede sobrevivir muchos
meses, para proliferar y tornarse una amenaza para las poblaciones
cercanas, cuando las condiciones ambientales le son favorables.
EFECTOS DE AGENTES FSICOS

Calor
El vibrin es sumamente sensible al calor, efecto evidente a partir
de 60C. Siempre se ha dicho que 15 minutos a 55C es suficiente
para matarle. Cuando la temperatura llega a 80C, casi todos los
vibriones han muerto, mientras que la ebullicin garantiza la
destruccin total de los vibrios en ese medio. El tiempo de
eliminacin del vibrin por el calor es de segundos o minutos

dependiendo del medio en que se encuentre. Esa condicin no se

aplica si el vibrin esta adherido a material quitinoso.

Frio
El vibrin empieza a morir a temperaturas a 16C. Sin embargo, el
bacilo es resistenca a la congelacin y sobrevive por muchos das
en el hielo. Los microbilogos suelen bajar la temperatura muy
rpidamente para congelar la bacteria en forma sbita hasta
alcanzar temperaturas muy bajas de -60C e incuso -195C en
NITRGENO LQUIDO. Las bacterias mantenidas en ese estado
pueden reactivarse colocndolas en un medio apropiado, como lo
es el agua peptonada alcalina(APA).

Sequedad
El Vibrio es altamente sensible a la desecacin ambiental, por lo
que la mayora de los bacilos que pudieren caer sobre el piso,
mobiliario, ropaje, mesas de laboratorio, tablas para cortar verduras
y otras superficies, mueren al poco tiempo. Obviamente, la
humedad relativa del trpico contrarresta el efecto de la sequedad,
favoreciendo la transmisin durante los meses clidos y hmedos.
Otros agentes
El bacilo del clera es sensible a la luz blanca, rayos ultravioleta,
rayos infrarrojos y microondas empleadas para cocinar.

SENSIBILIDAD A AGENTES QUMICOS

CIDOS
La caracterstica mas notable de bacilo del clera es su altsima
susceptibilidad a los cidos inorgnicos y orgnicos,en forma pura o
en sus sustratos(vinagre, jugo de ctricos y leches fermentadas).
Unas pocas gotas de cido eliminan millones de vibriones en pocos
minutos.

La susceptibilidad del vibrin al jugo gstrico fue prontamente

reconocida por los cientficos y clnicos del siglo pasado. Luego se
demostr el alto poder vibriocida de los cidos sulfricos y
clorhdricos aun a dilucines 1:15000. Tambin se observ el
mismo efecto con cidos orgnicos(actico, lctico,ctrico),
consabidamente tolerados en altas concentraciones por el paladar
humano. La accin vibriocida es dependiente de la concentracin
de iones hidrgeno. Un pH de 4,5 o menor garantiza la destruccin
de los vibrios. Entre mas bajo sea el pH, ms fuerte y ms rpido es
su efecto vibriocida.
ALCOHOL
El vibrin colrico es altamente sensible al alcohol, el cual le mata
en pocos segundos. El efecto del alcohol se observa en todas las
bebidas espirituosas, incluso tambin en bebidas cuya
concentracin de alcohol se halla al 5%.
OZONO Y CLORO
El bacilo del clera es altamente sensible al ozono y al
cloro.(Obviamente, otros halgenos como el bromo y el yodo son
letales para el mismo). Desde hace dcadas se reconoci que el
ozono elimina instantneamente el bacilo del cler, as como a
muchas bacterias patgenas.
El cloro acta de igual manera, si se agrega a la concentracin
adecuada. Sin embargo, si el material a tratar(por ejemplo, agua de
beber) contiene mucha materia orgnica, el poder vibriocida del
cloro disminuye, al neutralizarse parte o toda su capacidad cuando
entra en contacto con la materia orgnica presente en el agua. Por
lo tanto, el efecto del cloro y del ozono sobre el bacilo es ptimo si
el agua ha sido previamente filtrada y clarificada.
Otros agentes
El vibrin es muy sensible al contacto con la mayora de los
bactericidas y desinfectantes como el fenol al 0,5 %.

AISLAMIENTO DEL VIBRIO CHOLERAE A PARTIR DE

MUESTRAS FECALES
Aunque V. Cholerae O1 crece en diversos medios de agar que se
utilizan comnmente , el aislamiento a partir de muestras fecales se
realiza con mayor facilidad empleando medios selectivos. Se
recomienda el agua peptonada alcalina (APW) como caldo de
enriquecimiento, y el agar con tiosulfato, citrato, sales biliares y
sacarosa (TCBS) como el medio de agar selectivo preferible para el
aislamiento de V. Cholerae O1. En algunos casos (por ejemplo,
cuando el paciente se encuentra en fases muy tempranas de la
enfermedad y tiene evacuaciones liquidas), puede ser innecesario
el uso de muestras enriquecidas o medios selectivos en placa. Sin
embargo, siempre se debe usar el caldo de enriquecimiento y un
medio selectivo en placa cuando se trata de personas
convalecientes, infecciones presuntivas asintomticas, muestras
ambientales, y cuando es probable que la muestra contenga gran
cantidad de microorganismos competidores.
A) Enriquecimiento en agua peptonada alcalina
Vibrio spp. crece muy rpidamente en agua peptonada alcalina,
y al cabo de 6 a 8 horas est presente en mayor cantidad que
otros microorganismos. EI enriquecimiento en dicho medio
favorece el aislamiento de V. Cholerae 01 cuando hay pocos
microorganismos, como en muestras de personas convalecientes
y de portadores asintomticos.
Se han descrito otros caldos de enriquecimiento para el cultivo
de V.Cholerae. Entre ellos se puede mencionar el medio de
enriquecimiento de Monsur, que contiene tripticasa, telurito de
potasio y taurocolato de sodio (sales biliares). A veces se utiliza
una modificacin del agua peptonada al. calina, en la cual se
agrega telurito de potasio en concentraciones de 1:100.000 a
1:200.000. Los medios de enriquecimiento que contienen un agente
selectivo quiz no ofrezcan ventaja alguna sobre el agua
peptonada alcalina si esta se utiliza con un periodo de incubacin
breve (6 a 8 horas).
B) Medios selectivos en placa

Agar con tiosulfato, citrato, sales biliares y sacarosa

EI agar con tiosulfato, citrato, sales biliares y sacarosa (TCBS) es el
medio que se prefiere para el aislamiento de V. Cholerae y se utiliza
ampliamente en todo el mundo. EI agar TCBS se expende en el
comercio y es fcil de preparar; no requiere esterilizacin en el
autoclave y es diferencial y selectivo Sin embargo, tiene una vida de
almacenamiento relativamente corta una vez preparado (de 3 a 5
das), a menos que las placas se protejan cuidadosamente de la
desecacin. La selectividad del agar TCBS est sujeta a variaciones
de un lote a otro y de una marca a otra, y el cultivo en este medio
no es conveniente para las pruebas de aglutinacin con antisueros
contra V. Cholerae 01.
EI agar TCBS es verde cuando se prepara. EI crecimiento de un dia
para otro (18 a 24 horas) de V. Cholerae producir colonias grandes
(2 a 4 mm de dimetro), ligeramente aplanadas, amarillas, con el
centro opaco y la periferia translucida EI color amarillo se debe a la
fermentacin de la sacarosa en el medio. Los microorganismos que
no fermentan la sacarosa, como es el caso de V. Parahaemolyticus,
producen colonias de color verde a azul verde. Las colonias
sospechosas que se sometern a pruebas ulteriores deben
resembrarse en un medio no inhibitorio, como agar gelatina, agar
infusin de corazn (RIA) ,agar hierro de Kligler (KIA) o agar hierro
con tres azcares (TSI).

Agar Taurocolato-Telurlto-Gelatlna (agar TTG o medio de

Monsur).
EI agar taurocolato-telurito-gelatina (TTG) es un agar diferencial y
selectivo ideado especficamente para el aislamiento de V.
Cholerae . EI agar TTG tiene una vida de almacenamiento
relativamente larga despus de preparado, y se pueden utilizar
las colonias tomadas directamente del medio para efectuar las
pruebas de la oxidasa y de aglutinacin.Este medio tiene como
inconvenientes que no se expende en el comercio y que las
colonias .de V. Cholerae incubadas de un da para otro
en el tienden a ser ms pequeitas (1 a 2 mm) que las cultivadas
en agar TCBS. Tambin varia la calidad del telurito de potasio, que
se agrega al medio para aumentar la selectividad; por lo tanto,
debe titularse cada lote para determinar la concentracin ptima
que ha de usarse en el agar TTG.
EI crecimiento de un da para otro (18 a 24 horas) de V. Cholerae
en agar TTG se caracteriza por colonias pequeitas y opacas con el
centro ligeramente oscuro .AI cabo de 24 horas, el centro de la

colonia se hace mas oscuro y, al final, toda ella toma un color de

"acero pavonado". Ademas del color oscuro, que se debe a la
reduccin del telurlto, hay una zona opaca semejante a un halo
alrededor de las colonias. EI efecto de halo, debido a la produccin
de la enzima gelatinasa, se puede intensificar mediante
refrigeracin breve (15 a 30 minutos) de la placa. Como muchos
miembros del genera Vibrio tienen caractersticas similares en el
agar TTG, se requieren pruebas adicionales (antisueros, pruebas
bioqumicas o ambos) para identificar los microorganismos aislados
en este medio.

Agar de MacConkey
Para aislar especies de la familia Enterobacteriaceae se utiliza
mucho el agar de MacConkey, que tambin permite el crecimiento
de algunas cepas de V. Cholerae. Las colonias de este bacilo
incubadas de un da para otro en agar de MacConkey tienden a ser
pequeitas o medianas (1 a 3 mm) y por 10 general se ven como
lactosa negativas a ligeramente rosadas; con frecuencia recuerdan
a las colonias de microorganismos que producen fermentacin
"tarda" o "Ienta" de la lactosa. Las colonias que presuntivamente
correspondan a V. Cholerae se resembraran en medios no
inhibitorios para efectuar pruebas adicionales.

Medios no selectivos en placa

Agar gelatina
EI agar gelatina es un buen medio no selectivo para el cultivo de V.
Cholerae. La produccin de gelatinasa, que es una caracterstica de
los vibriones en general, se puede determinar en el agar gelatina y
se reconoce por la aparicin de una zona opaca parecida a un halo
alrededor de las colonias. EI efecto de halo se puede identificar
mediante la refrigeracin breve (15 a 30 minutos) de la placa. Las
colonias de V. Cholerae en el agar gelatina son lisas, opacas,
blancas y de 2 a 4 mm de dimetro tras la incubacin de 18-24
horas a una temperatura de 35 a 37C. Cuando las colonias se
observan con luz transmitida oblicuamente con aumentos de 10x a
20 x, pueden aparecer finamente granulosas e iridiscentes, con un
brillo verdoso como de bronce. Las colonias provenientes de este
medio pueden someterse directamente a las pruebas de
aglutinacin con antisueros, de la oxidasa y del hilo o hebra
mucoide. Se puede utilizar agar gelatina sin sales como un media
selectivo para descartar los vibriones marinas halfilos (que
requieren sal) semejantes a V. Cholerae, que frecuentemente se
aslan de pescados y mariscos y de muestras ambientales.
Agar de extracto de carne (agar nutritivo alcalino)
EI agar de extracto de carne es similar al agar gelatina en su
capacidad para permitir el crecimiento de V. Cholerae. Sin embargo,
a diferencia de este, las colonias que aparecen en el no tienen
caractersticas distintivas. AI cabo de la incubacin de 18 a 24
horas, las colonias de V. Cholerae en agar de extracto de carne son
de 2 a 4 mm de dimetro, lisas, opacas y de color crema. Cuando
se observan con luz oblicua can aumentos de 10x y 20x, las
colonias se ven finamente granulares e iridiscentes, con un brillo
verdoso como de bronce. Las pruebas de oxidasa y del Hilo
Mucoide y la aglutinacin con antisueros se pueden realizar
directamente can colonias presuntivas aisladas en placas de agar
de extracto de carne.

Aislamiento e Identlflcacin presuntiva

1. Inoculacin directa de muestras fecales
En los medios muy selectivos (agares TCBS y TTG) la siembra
se hace con un inculo abundante de heces liquidas, suspensin
fecal o hisopado rectal .Con medios de baja selectividad (agar
gelatina, agar de extracto de carne y agar sangre), se utiliza un
inculo ligero, el cual se siembra mediante estriacin con asa de
alambre para aislar colonias. No es necesario flamear el asa entre
la estriacin de los diferentes cuadrantes de la placa. Los medios de
alta selectividad requieren una estriacin ms cerrada en los
cuadrantes que se siembran primero, no as los medios de baja
selectividad. Despus de la inoculacin, se incuban las placas
durante 18 a 24 horas a una temperatura de 35 a 37 C.
2. Inoculacin de agua peptonada alcalina a partir de muestras
fecales
EI agua peptonada alcalina se puede inocular con heces
lquidas, suspensin fecal o hisopado rectal (Figura IV-4). EI
inculo de heces no debe exceder del 10% del volumen del caldo.
Se incuba el tubo con la tapa sin apretar a una temperatura de 35
a 37C durante 6 a 8 horas. Despus de este periodo de
incubacin, se resiembra en agar TCBS empleando una o dos
asadas de agua peptonada alcalina obtenidas de la porcin ms
alta del caldo, incluida la superficie, puesto que los vibriones
crecen preferentemente en esta zona. EI tubo no se agita ni se
mezcla antes de resembrar. Si el caldo no se puede subcultivar
despues de 6 a 8 horas de incubacin, se resiembra a las 18 horas
en un tubo nuevo de agua peptonada alcalina. Este segundo tubo
debe resembrarse en un medio solido despus de 6 a 8 horas de
incubacin.
Aislamiento de colonias presuntivas a partir de medios en
placa
Se seleccionan varias colonias presuntivas de la placa de agar
TCBS y se inoculan en agar de infusin de corazn con plano
inclinado u otro medio no selectivo. No debe utilizarse agar nutritivo
porque no contiene sal ni permite el crecimiento ptimo de V.
Cholerae. Se incuba a una temperatura de 35 a 37C.
Aglutinacin en lamina o portaobjeto
Las colonias sospechosas de V. Cholerae recin aisladas en un
medio de agar no selectivo se pueden someter a la prueba de

aglutinacin con antisuero polivalente contra V. Cholerae O1. Por lo

general, despus de 5 a 6 horas de incubacin, las colonias que
crecen en el plano inclinado son suficientes para llevar a cabo
pruebas serolgicas en Imina con antisueros polivalentes contra V.
Cholerae O1; si no es as, el cultivo se incuba de nuevo de un da
para otro. Los aislamientos que aglutinan con el antisuero
polivalente contra el Serogrupo O1 se identifican como presuntivo
V. Cholerae O1.EI presuntivo V. Cholerae O1 se puede someter a
confirmacin mediante aglutinacin con antisueros monovalentes o
con antisueros Ogawa o Inaba; pero quiz no se necesite la
confirmacin de todos los aislamientos, en especial cuando el
abasto de antisueros es limitado. La identificacin mnima de V.
Cholerae O1 requiere solamente la confirmacin serolgica de la
presencia de antgenos del serotipo O1 en los aislamientos
presuntivos. Sin embargo, a veces es necesaria la caracterizacin
ms completa del microorganismo, lo cual puede incluir pruebas de
produccin de la toxina, de hemolisinas, as como la de
determinacin de la sensibilidad a los antimicrobianos e
identificacin bioqumica, del biotipo o del subtipo molecular. Estas
pruebas solo se deben efectuar en ciertos aislamientos, como los
que se han recuperado al principio de un brote o en el curso de la
vigilancia epidemiolgica en zonas amenazadas por el clera
epidmico. Solamente los aislamientos que se confirman como V.
Cholerae O1 por pruebas serolgicas deben caracterizarse an
ms.
Pruebas bioqumicas de seleccin
Por lo general no son necesarias las pruebas bioqumicas de
seleccin para los aislamientos de V. Cholerae sospechosos a partir
de muestras fecales, puesto que las pruebas en laminilla con
antisueros polivalentes contra O1 bastan para la identificacin
presuntiva. Sin embargo, si el suministro de antisueros es limitado,
pueden ser de utilidad las pruebas del Hilo mucoide y de la oxidasa
u otras pruebas bioqumicas para lograr la seleccin ms completa
de los aislamientos antes de practicar las pruebas con antisueros.
No hay un solo procedimiento de seleccin de V. Cholerae O1 que
resulte ideal para todos los laboratorios y todas las muestras. El
laboratorista debe elegir un procedimiento de seleccin con base en
los recursos a su alcance (por ejemplo, las existencias de
antisueros), en los tipos y el nmero de microorganismos
competidores que probable mente haya en las muestras que se
cultivan, y en la capacidad del medio selectivo de placa para inhibir
el crecimiento de esos microorganismos competidores.

La prueba del hilo mucoide, en la que se utiliza un cultivo fresco en

agar no selectivo, es til para descartar los microrganismos distintos
de Vibrio spp., particularmente Aeromonas spp.). Tambin se puede
utilizar la prueba de la oxidasa para seleccionar los
microorganismos distintos de Vibrio spp., como los de la familia
Enterobacteriaceae. El agar hierro de Kligler (KIA) a el agar hierro
de tres azucares (TSI) descartan Pseudomonas y algunas especies
de Enterobacteriaceae. Por lo general, la prueba de la arginina es
ms til que la de la lisina para seleccionar Aeromonas y ciertas
especies de Vibrio, pero se puede recurrir a cualquiera de
estos medios. No hay necesidad de utilizar dos pruebas
bioqumicas que excluyan al mismo microorganismo. Por ejemplo, si
se utiliza la prueba de la arginina, por lo general no hay ventaja
alguna en seleccionar tambin con la prueba de la lisina, en virtud
de que ambos aminocidos descartan las mismas especies. Las
tapas de todos los tubos de las pruebas bioqumicas habrn de
mantenerse poco apretadas antes de la incubacin. Esto tiene
importancia particular para los tubos con medios de KIA a TSI en
plano inclinado, puesto que si las tapas estn demasiado apretadas
y existen condiciones anaerobias, quiz no se produzcan las
reacciones caractersticas de V.Cholerae.

Mtodos de diagnstico rpido

EI diagnstico rpido del clera en el laboratorio suele resultar
ventajoso para vigilar la propagacin de la enfermedad y para
establecer con celeridad las medidas de control. Se han obtenido y
utilizado mtodos diversos de deteccin rpida para la identificacin
de Cholerae O1 directa mente en las heces de enfermos en muy
mal estado o a partir de caldos de enriquecimiento. En ciertas
situaciones, estos mtodos rpidos pueden ser prcticos; sin
embargo, solo brindan un diagnstico preliminar. A pesar de sus
ventajas en lo que se refiere a rapidez y (en ocasiones) a las
necesidades de reactivos ms sencillos y de equipo, en general los
mtodos de diagnstico rpido no pueden sustituir por completo a
los mtodos tradicionales de cultivo. Es preciso recurrir a las
tcnicas rutinarias cuando se necesita un aislamiento para otras
pruebas, como son el anlisis de la produccin de toxina del clera,
la sensibilidad a los antimicrobianos, hemlisis, determinacin del
biotipo y subtipificacin molecular. Los mtodos rpidos suelen ser
ms tiles sobre el terreno, cuando se requiere llevar a cabo el
diagnstico inmediato para vigilar el curso de un brote de clera.