ESCUELA POLITCNICA NACIONAL

INGENIERIA QUMICA
LABORATORIO DE ANLISIS INSTRUMENTAL I

PRCTICA No. 5
ANLISIS DE SUSTANCIAS COLOREADAS POR ESPECTROFOTOMETRA
Rojo 40

Realizado por:
-

Evelyn Alquinga

Kerly Carrin

Michelle Molina

Eduardo Rueda

Grupo: 3

Fecha de realizacin: Martes, 11 de noviembre del 2014

Fecha de entrega: Martes, 18 de noviembre del 2014

ANLISIS DE SUSTANCIAS COLOREADAS POR ESPECTROFOTOMETRA

RESUMEN EJECUTIVO
La presente prctica tuvo como objetivo el anlisis de sustancias coloreadas por medio del mtodo de
espectrofotometra. El principio de esta tcnica es el anlisis espectral cualitativo y semicuantitativo de
sustancias coloreadas, gracias a la interaccin que tienen las mismas para absorber o transmitir radiaciones
electromagnticas, que se presentan en forma de ondas, es as que se puede medir la cantidad de: radiacin
visible ultravioleta absorbida por la solucin a una longitud dada. Se realizaron cinco diluciones de una
solucin madre de Rojo 40 y se midi la absorbancia de cada una para poder formar una curva de calibracin.
Posteriormente, se midi la absorbancia de una solucin de Mora Ya, la misma que contena Rojo 40 tambin,
la cual fue de 0,093 y con ayuda de la ecuacin obtenida de la curva de calibracin se calcul la concentracin
de la solucin cuyo valor fue de 1,148mg/L y la molaridad fue igual a 2,31110-6 mol/L. Finalmente, se
calcul la concentracin de la solucin de Mora Ya, debido a que se realiz una dilucin, y su valor fue de
28,7 mg/L. Tambin se determin que en 0,15g de jugo soluble Mora Ya existe 1,435mg de Rojo 40 lo que
equivale a un porcentaje de 0,96%, adems con la ecuacin del Grfico2 se obtuvo el coeficiente de
absortividad molar el cual fue de 40238 [M -1cm-1]. Gracias a la curva de calibracin se concluy que la
relacin entre la absorbancia y concentracin de una solucin descrita segn la ley de Lambert y Beer es
directamente proporcional.

1. Tablas de datos y diagramas

Tabla1. Datos experimentales obtenidos de la solucin madre en la prctica.
Solucin

Concentracin (mg/L)

Rojo 40

10

(nm)
505

Tabla2. Datos bibliogrficos del Rojo 40.

Sustancia

Peso molecular (g/mol)

Rojo 40

496,420

(Barros, C., 2009, Los aditivos en la alimentacin de los espaoles y la legislacin que regula su autorizacin y uso)

Tabla3. Datos experimentales obtenidos de cada disolucin en la prctica.

Dilucin

Alcuotas (mL) para la

dilucin

Concentracin (mg/L)

Molaridad (mol/L)

Absorbancia

25,0

5,0

1,00710-5

0,401

10,0

2,0

4,02910-6

0,168

5,0

1,0

2,01410-6

0,086

2,5

0,5

1,00710-6

0,045

1,5

0,3

6,04310-7

0,031

Tabla4. Cantidades de solvente y soluto usadas para la preparacin de la solucin de Mora Ya.
Soluto

Mora Ya

0,15g

Solvente

Agua

50,00mL

Tabla5. Absorbancia de la solucin diluida de Mora Ya.

Disolucin

Absorbancia

Mora Ya

0,093

Tabla6. Resultado de la concentracin de la solucin diluida de Mora Ya.

Disolucin

Concentracin (mg/L)

Molaridad (mol/L)

Mora Ya

1,148

2,31110-6

Tabla7. Resultados obtenidos de Rojo 40

Solucin

Concentracin (mg/L)

Masa de Rojo 40 (mg)

%wRojo 40

(M-1cm-1)

Mora Ya

28,700

1,435

0,960

40238

Solucin madre

Diluciones

Celdas

Espectrofotmetro UV - Visible

Figura1. Esquema de la prctica de espectrofotometra

Figura2. Longitud de onda mxima de la solucin madre de Rojo 40, obtenida en la prctica

Absorbancia vs. Concentracin

0.45

Absorbancia

0.4

0.401

0.35

y = 0.081x
R = 0.9987

0.3
0.25
A vs. [C (mg/L)]

0.2
0.15

0.168

Tendencia de la
curva

0.1
0.045

0.05

0.086

0.031

0
0

0.5

1.5

2.5

3.5

4.5

5.5

Concentracin (mg/L)
Grfico1. Absorbancia vs. Concentracin

Absorbancia vs. Molaridad

0.45
0.4

0.401

Absorbancia

0.35

y = 40238x
R = 0.9987

0.3
0.25
0.2

A vs. M

0.168

0.15

Tendencia de
la curva

0.1
0.045
0.05

0.086

0.031

0
0

0.000002

0.000004

0.000006

0.000008

Molaridad (mol/L)
Grfico2. Absorbancia vs. Molaridad

0.00001

0.000012

2. Clculos
Preparaciones de las diluciones a partir de solucin madre:
Ejemplo de clculo:
-

Primera dilucin: Volumen requerido para obtener un C1 = 5 mg/L

Clculo de la concentracin de Rojo 40 en la solucin diluida de Mora Ya:

Se conoce el espectro de absorcin de la solucin de Rojo 40 (Grfico1)
-

Absorcin = 0,093

Concentracin (C0,093) = ?

Se obtuvo la ecuacin de la recta:

Donde: y = absorbancia
x = concentracin (mg/L)

Clculo de la molaridad de Rojo 40 en la solucin diluida de Mora Ya:

Se conoce el espectro de absorcin de la solucin de Rojo 40 (Grfico2)
-

Absorcin = 0,093

Molaridad (M0,093) =?

Se obtuvo la ecuacin de la recta:

Donde:
y = absorbancia
x = concentracin (mol/L)

Clculo de la concentracin de la solucin a analizar de Mora ya:

-

Se diluyeron 2mL de la solucin a analizar en un matraz de 50 mL.

Clculo de la cantidad de Rojo 40 en 0,15g de Mora Ya:

Clculo del porcentaje (% w) de rojo 40 en la solucin de Mora ya:

Sabiendo que se diluyeron 0,15g de Mora Ya en una matraz de 50mL

Clculo del valor de la absortividad molar:

Se sabe que:

Dnde:
A= absorbancia
= absortividad molar
L = longitud que atraviesa la luz a travs de la muestra (L = 1cm)
C = concentracin (mol/L=M)
Se obtuvo en el Grfico2 la ecuacin de la recta:
Se compara con la ecuacin general de la recta:
Donde:
m = pendiente de la recta
y = absorbancia
x = concentracin (mol/L = [M])
b = corte en el eje de las ordenadas

Entonces:
Se igualan las Ecuaciones 1 y 2

Si b=0

Sea:

Pero:

Si se igualan las Ecuaciones 4 y 5:

Se reemplaza la Ecuacin 3 en la Ecuacin 6 y se tiene que:

Si se divide para L a cada lado de la Ecuacin 7:

Se sabe que L=1cm

3. Resultados y discusin
Se obtuvo el espectro de absorcin, el cual es propio de cada sustancia, de la solucin madre de Rojo 40, lo
que permiti encontrar la longitud mxima de absorcin del mismo,

mxima

= 505 nm (Tabla1), valor en el

que la sensibilidad es mxima. El anlisis se lo realiz a esa longitud de onda definida, debido a que la
absorcin de una sustancia tambin depende de la intensidad de la longitud de onda que incida sobre la
muestra. Se determin la absorbancia de las diluciones preparadas y se pudo observar, de acuerdo a los datos
obtenidos en la Tabla3, que a medida que aumenta la concentracin, la absorbancia tambin aumenta. Se
puede concluir que la absorbancia es directamente proporcional a la concentracin, a una longitud de onda
definida de acuerdo a los resultados en la Tabla3, lo que permite observar el cumplimiento de la ley de
Lambert y Beer. En el que:
Con los datos de absorbancia obtenidos se graficaron las curvas de calibracin (Grfico1 y Grfico2). En
estos grficos el R2 de cada uno fue de 0,9987, valor que muestra un alto grado de confianza, pero que no

equivale a 1, debido errores cometidos en la preparacin de las diluciones, ya sea en el momento de tomar el
valor exacto de la mezcla patrn para la dilucin o por no aforar correctamente, errores pequeos, pero a
pesar de ello se obtuvo un modelo confiable y casi exacto.
Se obtuvo una absorbancia de 0,093 de la solucin diluida de Mora Ya, valor con el que se encontr la
concentracin de esta dilucin 1,148mg/L y molaridad de 2,31110-6 (mol/L) (Tabla6), lo que permiti
encontrar la concentracin inicial de la solucin de Mora Ya (solucin analizada) cuyo valor fue de 28,7mg/L,
que comparado con las diluciones preparadas a partir de la mezcla patrn, la solucin de Mora Ya tiene una
gran cantidad de Rojo 40, solucin concentrada. Se obtuvo que en 0,15g de Mora Ya existen 1,435mg de
Rojo 40, lo mismo que representa un porcentaje de 0,96% de contenido del mismo. Y finalmente con la
obtencin de la pendiente del Grfico2 se logr determinar el valor del coeficiente de absortividad molar el
cual fue de 40238 [M-1cm-1], este coeficiente es una propiedad caracterstica de la solucin y representa la
cantidad de luz absorbida por la dilucin, en este caso en la de Rojo 40.

4. Recomendaciones
Se recomienda, que antes de introducir la celda al espectrofotmetro, se la seque y limpie correctamente, se
debe manejar con cuidado, de tal manera que no se toque la parte por donde va a incidir el haz de luz. Hay
que cerciorase que la muestra colocada en la celda no contenga interferencias (como pelusas, o burbujas), que
vayan a influir en los resultados. En el caso de que las celdas sean desechables enjuagar con abundante agua
destilada, no utilizar detergente.
Se recomienda preparar las soluciones lo ms exactas posibles, y trabajar con 4 a 5 diluciones, para obtener
un buena curva de calibracin.
Se recomienda calibrar el espectrofotmetro, ajustar con el blanco a 0% de absorbancia, antes de cada lectura,
lo que va a permitir eliminar el registro de absorbancia que pueden presentar los dems componentes que
forman parte de la muestra a analizar o el solvente utilizado. Tomar en cuenta que el blanco que contiene
todos los componentes del sistema excepto el que se desea medir.

Se recomienda trabajar con soluciones diluidas y que la absorbancia no sea mayor que 2.

5. Bibliografa
-

Barros, C., 2009, Los aditivos en la alimentacin de los espaoles y la legislacin que regula su
autorizacin y uso, http://books.google.com.ec/books?id=JuLQjrDgQAoC&pg=PA208&dq=rojo+
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Giannini, C. & Roani, R., 2003, Diccionario de restauracin y diagnstico, http://books.

google.com.ec/books?id=N6ro8FkEqtIC&pg=PA85&dq=tecnica+de+espectrofotometria&hl=es-419

&sa=X&ei=jVFqVPmCO8f9yQSn-4IY&ved=0CC4Q6AEwBA#v=onepage&q=tecnica%20de%20e
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-

Quesada, S., 2007, Manual de experimentos de laboratorio para Bioqumica, http://books.

google.com.ec/books?id=8SAtkthrFEkC&pg=PR27&dq=curva+de+calibracion+espectrofotometria
&hl=es-419&sa=X&ei=L61qVModwpY2npGEyAM&ved=0CBsQ6AEwAA#v=onepage&q=curva
%20de%20calibracion%20espectrofotometria&f=false (Noviembre, 2014).

Pickering, W. F., 1980, Qumica analtica moderna, http://books.google.com.ec/books?id=

ZF9jSBZCghAC&pg=PA143&dq=coeficiente+de+absortividad+molar&hl=es-419&sa=X&ei=Hb9q
VPqGN8iUNoOZgZgO&ved=0CBsQ6AEwAA#v=onepage&q=coeficiente%20de%20absortividad
%20molar&f=false (Noviembre, 2014).