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Relatrio
de
aula
prtica
apresentado Prof.. Dr. Dbora
Santana como avaliao parcial da
disciplina Mtodos de Separao
em Qumica.
Discentes: Isaas Silva; Mateus
Duarte; Paulo Henrique; Poliana
Fernandes Oliveira.
ITAPETINGA-BA
Dezembro/2014
INTRODUO
Segundo1, a cromatografia lquida uma tcnica importante, pois a maioria dos
compostos no so suficientemente volteis para cromatografia gasosa. A cromatografia
lquida de alta eficincia (CLAE) um tipo de cromatografia onde o solvente empurrado
pelas dimenses da coluna que recheada de partculas muito pequenas, o que proporciona
uma separao muito eficiente. Utiliza-se uma presso para ajudar a passagem do solvente
pelo interior na coluna.
Para uso dessa tcnica de separao necessrio ter um sistema adequado, que
composto por um sistema de distribuio de solvente, uma vlvula de injeo de amostra, uma
coluna de alta presso, um detector e um computador para controlar o sistema e apresentao
dos resultados.
Figura
Equipamento
para
cromatografia
lquida
de
alta
eficincia
(CLAE).
(http://www.shimadzu.com.br/analitica/produtos/hplc/lc-20a_prominence.shtml)
Para1 a eficincia de uma coluna aumenta com a diminuio do tamanho das partculas
da fase estacionria, sendo que a eficincia de uma coluna est tambm relacionada com o
aumento da quantidade de pratos e a diminuio da altura dos pratos, podendo ser obtidos
picos mais estreitos nos grficos que mostram as respostas do detector em funo do tempo de
eluio, no qual denominamos cromatograma. Um dos parmetros utilizados nos clculos
deste trabalho o tempo de reteno, que o tempo necessrio, a partir da injeo da mistura
na coluna, para que cada componente alcance o detector, sendo que, quanto maior a interao
com fase estacionrio, maior ser o tempo de reteno, e em contrapartida, quanto menor a
interao de um composto com a fase estacionrio, menor ser o seu tempo de reteno, e
consequentemente, moveras mais rpido pela coluna.
O fator de reteno (K), em um experimento pode ser calculado a partir da seguinte
frmula:
(t r t m )
Equao 1
tm
Rs
t r
Equao 2
(Wmd )
Sendo (tr) a diferena nos tempos de reteno e (Wmd) a largura mdia medida na
linha-base nas mesmas unidades que o numerador (tempo ou volume).
Para2 outros dois fatores podem influenciar na resoluo cromatogrfica, sendo o
nmero de pratos tericos (N) e a seletividade (), onde esses fatores so diretamente afetados
pelas condies: tipo de coluna, temperatura, deteco, fluxo, e quantidade de amostra. N e ,
podem ser calculados com as frmulas abaixo:
2
16.t r
(W 2 )
Equao 3
t rb t m
t ra t m
Equao 4
Onde, (tr) o tempo de reteno, (W) a largura da base do pico e (tm) o tempo morto e
(b) o soluto mais retido.
MATERIAIS E MTODOS
Instrumentos e Materiais Utilizados
01 Cromatografia lquido de alta eficincia Shimadzu, com sistema quaternrio de
solventes, vlvula de injeo com ala de amostragem de 20L, forno de coluna e
detector de arranjo de diodos;
01 coluna C18 Thermo Hypersil ODS (4,6 x 150mm, 5);
02 bqueres 50 mL;
01 balo volumtrico de 10 mL;
Seringa;
Filtro de Seringa;
Micropipeta.
Reagentes Utilizados
Padro de cido vanlico;
Padro de cido serngico;
Aceto nitrila;
gua destilada;
Soluo stock.
Procedimento Experimental
Foram realizados os seguintes procedimentos, que sero descritos a seguir:
1: Foi realizado o clculo de diluio:
As amostra iniciais tinha 2000 ppm, e foram diludas a 2 ppm, em uma micro vidraria
de 10 ml, dessa maneira utilizado 0,010 ml do analito;
3: Injeo de amostras:
4: Otimizao do processo:
RESULTADOS E DISCUSSO
Durante a realizao dessa pratica foi tomado como principio um fluxo inicial de
1mL/min para os padres estabelecidos de cido Vanlico e cido Sirngico, nesse processo
obteve-se os seguinte dados como demostra nos cromatograma da figura-1 e da figura-2 foi
estabelecido 2mL/min, o que permitiu realizar a otimizao da analise cromatogrfica, de
acordo os clculos de resoluo-Rs, e a parir da dai determinar o trs principais pontos que
influenciam a resoluo cromatogrfica: o numero de pratos tericos (N), fator de reteno
(K) e seletividade (a). Esses fatores por sua vez so afetados pelas variveis cromatogrficas
como tipo de coluna, temperatura, deteco, fluxo e quantidade de amostra, aqui foram
analisados apenas a varivel correspondente ao fluxo.
uV
4000000
3500000
3000000
2500000
2000000
1500000
1000000
500000
0
0.00
0.25
0.50
0.75
1.00
1.25
1.50
1.75
2.00
2.25
2.50
2.75
3.00 min
Figura 1: Cromatograma de padres cido vanlico (rosa) e cido sirngico (azul), 100 % aceto nitrila
-1
Cromatograma-1
Tr
Tr1
Vanlico
1,544
1,368
Sirngico
1,599
1,473
Tm
0,5
Rs
1,721 0,353
306,10
2,088
1,052
0,1818
1,725 0,252
644,192
2,198
1,052
0,1818
Tr2
Wb
Fator de reteno
Seletividade
Resoluo
tericos:
,088
Fator de reteno
Seletividade
Resoluo
uV
4000000
3500000
3000000
2500000
2000000
1500000
1000000
500000
0
0.00
0.25
0.50
0.75
1.00
1.25
1.50
1.75
2.00
2.25
2.50
2.75
3.00
3.25
min
Figura 2: Cromatograma de padres cido vanlico (rosa) e cido sirngico (azul) 100 % aceto nitrila
-1
fluxo 2,0 mL min
Cromatograma-2
Tr
Tr1
Tr2
Wb
Rs
Vanlico
0,804
0,703
0,906
0,203
250,98
0,608
1,026
0,0455
Sirngico
0,812
0,738
0,886
0,148
481,62
0,624
1,026
0,0455
Tm
0,5
Fator de reteno
Seletividade
Resoluo
08
Fator de reteno
Seletividade
Resoluo
Discusso: Os dados aqui discutidos esto nas tabelas descritas cima, sendo que
alguns dados no foram descritos, mas esto subtendidos nas tabelas, tais como tempo de
reteno e tempo morto.
Desempenho do cido vinlico em comparao com a eficincia no cromatografo-1
com fluxo de 1mL/min e no cromatografo-2 com fluxo de 2 mL/min. Como podemos
no tempo requerido para a separao dos componentes. Diante dessa abordagem, segundo1,
quanto maior for resoluo melhor ser a separao entre dois picos, e dessa forma podemos
visualizar atravs dos dados, que o cromatogrma-1 apresentou um melhor desempenho em
relao ao cromatogama-2, uma vez que sua resoluo do 1 foi de Rs= 0,1818.
De modo geral, ao analisarmos os dois cromatogramas, verificamos a que o tempo de
reteno apresentou caractersticas peculiares, entretanto, podemos discutir algumas
mudanas significativas, segundo2, o tempo de reteno Tr o tempo decorrido entre a
injeo da amostra e o aparecimento do pico do soluto no detector de uma coluna
cromatogrfica, partindo dessa ideia notamos que quanto maior a diferena do tempo de
reteno entre dois compostos maior a eficincia da coluna, vejamos que o cromatogram-1
apresentou uma melhor separao entre os picos, j o cromatogama-2 quase coeluram.
Outro aspecto interessante a se discutir est relacionado ao fluxo, pois de inicio foi
utilizado um fluxo de 5mL/min no tendo bom resultados, depois foi utilizamos fluxos de
1mL/min e 2mL/min, que elucidaram dois cromatogramas diferentes, no primeiro gerou um
tempo de corrida mais demorado que no segundo, isso nos permite entender que, quando
aumenta o fluxo a corrida mais rpida, no entanto, corre se o risco de coeluir os compostos
(cromatograma-2), e se diminumos o fluxo a corrida fica mais demorada, como ilustra o
cromatogram-1.
CONCLUSO
Conclumos que a cromatografia lquida de alta eficincia um dos mais modernos mtodos
cromatogrficos, que se destaca entre os demais devido ao fato de ser capaz de quantificar
uma ampla variedade de compostos, e que o processo de injeo manual do analito na coluna
pode causar erros no cromatograma, o que pode ser minimizado com a automatizao do
processo. Alm disso, verificamos que quanto mais fortemente absorvida for uma substncia,
mais retida ela ficar, e quanto mais solvel for uma substncia, mais rapidamente ela vai se
mover dessa forma, de modo geral os dois cromatogramas analisados no apresentaram um
alto rendimento uma vez que seus valores que deveriam indicar uma boa separao no
ficaram dentro dos padres estabelecidos pela literatura, como exemplo o valor de Resoluo,
onde ambos os cromatogramas no tiveram to bom desempenho ficando muito distante do
valor de Rs=1,5, no entanto, o que podemos dizer diante dos dados e das analises feitas que
o cromatogafo-1 foi o que apresentou uma melhor eficincia de separao em relao ao
cramotograma-2, tendo um maior numero de pratos tericos, melhor fator de reteno, boa
seletividade, melhor resoluo e assim conclumos que a metodologia proposta na pratica foi
alcanada, pois se determinou todos os parmetros que medem a eficincia de uma coluna.
REFERNCIA
1
2
SKOOG, D.A; West, D.M; Holler, F.J. & Stanley, R.C. Fundamentos da Qumica
Analtica, Traduo da 8 edio norte americana. So Paulo, Ed.Thomson, 2007.