Banda C

La tcnica de Banda C fue descubierta por casualidad y originado en un

experimento en donde ADN satlite marcado en ratn fue hibridizado in situ con
cromosomas de raton. En este experimento, el ADN del cromosoma fue
desnaturalizado con NaOH y renaturalizado en buffer SSC. Los sitios hibridizados
fueron detectados por autoradiografa usando coloracin de Giemsa para
cromosomas. La prueba de hibridizacin preferencialmente fue en las regiones
centromericas de los cromosomas. Sin embargo tambin se noto que el Giemsa
coloreo otras regiones en otros cromosomas (Fukui y Nakayama, 1996)
Esta banda se caracteriza por teir aquellas regiones ricas en heterocromatina
constitutiva que corresponden a secuencias de ADN altamente repetitivas; se
encuentran principalmente en centrmero, telmeros y ADN satlite y en
ocasiones constricciones secundarias como son los NORs.
Despus del descubrimiento de las tcnicas de banda C se desarrolladas tcnicas
para cromosomas de mamferos. Mientras en animales se utiliza NaOH para el
paso de la desnaturalizacin, el Ba(OH)2 es usado para producir banda C en
cromosomas de plantas siguiendo el mtodo de Summer. l fue el primero en
sugerir que la coloracin oscura del Giemsa coloreaba heterocromatina
constitutiva causada por la preferencia de el ADN altamente repetitivo durante la
renaturalizacin (Fukui y Nakayama, 1996).
Los sitios de los cromosomas que presentan heterocromatina constitutiva y que
tien Banda C positiva son 1) en la regin del centrmero 2) alrededor de la regin
organizadora nucleolar 3) cerca del sitio del RNA para 5S y 4) en la parte final de
los cromosomas es decir la heterocromatina telomerica, en general estas
localizaciones se conocen como centromerica e intercalar y la ltima categora
incluye todas las otras posiciones (Yunis y Yasmineh, 1972 citado por Maclean y
Vaughan, 1978).
En el campo de la investigacin para aclarar que tipo de elementos son los que se
remueven dentro del tratamiento de esta banda, en un estudio en donde se
analiz HCl 0.2 N el cual es una de las soluciones utilizadas para realizar
tratamiento para banda C se encontr por medio de electroforesis la presencia de
las 5 protenas histnicas, la que presentaba una banda de mayor intensidad fue
la H3 y H4, estando presentes tambin las otras pero en menor cantidad
(Burkhoder & Duezek, 1980)
Para cromosomas de plantas, la estandarizacin de las tcnicas en Banda C han
mejorado en su resolucin y el mtodo ha sido utilizado para la identificacin de
cromosomas. En plantas esta tcnica identifica las secuencias que contienen gran
cantidad de ADN repetitivo. Por ejemplo en cultivos de centeno Secale cereale en
hibridizacin in situ es utilizada para detectar zonas de ADN altamente repetitivo
de las cuales solamente unas pocas colorean Banda C positiva (Fukui y
Nakayama, 1996).

Por su parte, en muchas especies de animales domsticos se han encontrado

complementos cromosmicos que por las tcnicas convencionales de coloracin
no pueden ser ordenados completamente, debido a la presencia de cromosomas
con rasgos morfolgicos muy similares. Esto sucede, por ejemplo: con los
cromosomas 8, 9 y X del cerdo; con el 11 y el 12 de la misma especie; con los
cromosomas 14, 15, 16, 17, 18 y 19 del equino; con los cromosomas 23, 24, 25,
26 y 27 tambin del equino; y con gran parte de los cromosomas del bovino, del
ovino y del caprino. Lo anterior gener la necesidad de desarrollar tcnicas de
coloracin denominadas de bandeo, o sea, aquellas que producen patrones
constantes de bandas claras y oscuras, caractersticos de cada cromosoma que
permiten identificar los cromosomas sin ambigedades (Henao y Gmez, 1997).
Las tcnicas de bandeo han permitido tanto en animales como en vegetales,
tambin, la deteccin de un gran nmero de aberraciones cromosmicas, con la
correspondiente definicin de los componentes del complemento comprometidos
en el problema.

Bandas Ag-NOR
Se
conoce
como
bandas
Ag-NOR
aquella
que
colorea
las Regiones Organizadoras Nucleares ( de ah la nomenclatura NOR) en
ocasiones son tambin llamadas Banda N, su coloracin es debido a la afinidad
con el Nitrato de Plata.
La Regin Organizadora Nucleolar es el sitio en donde estn localizados los genes
de ADNr; el nucleolo esta compuesto por cinco componentes estructurales, el
centro fibrilar, el componente fibrilar, el componente granular, el intersticio
nucleolar, y la cromatina condensada asociada. (Goessens, 1984)
En eucariotas el organizador nucleolar consiste de mltiples repeticiones
arregladas en tandem, de las secuencias para ARN-r 18S y 28S intercalado con
secuencias espaciadoras. Los espacios pueden ser transcritos, pero
su transcripcin nunca incluye un ribosoma maduro. Usualmente se refiere a ADN
ribosomal (ADN-r) como una repeticin de genes con secciones en tamdem
arregladas y agrupadas dentro de uno o varias regiones del set de cromosomas
(Champman y may, 1993)
Este tipo de banda se debe especficamente a la presencia de las protenas afines
a la actividad transcripcional en los cistrones ribosomales (Henao y Gmez,
1997).Durante la metafase estos estn localizados generalmente dentro de la
constriccin secundaria (Howell 1982) Citado por (Fakan y Hernndez-Verdun,
1986).
El comportamiento del nucleolo en proliferacin celular es llamado ciclo nucleolar,
se considera que el ciclo comienza en el momento en que en interfase este o no

la decisin de entrar en proliferacin o diferenciacin, se considera que el ciclo

comienza cuando el nucleolo se organiza nuevamente seguido de las fases de la
mitosis, es decir el nucleolo no es una entidad nuclear individual (De la Torre y
Jimnez-Martn, 1982)
Ante todo y de gran importancia es de anotar que esta banda es funcional, es
decir, es positiva siempre y cuando las Regiones Organizadoras Nucleolares
hayan estado en actividad la interfase inmediatamente anterior al momento de
realizar la banda, es decir la banda se expresa en las metafases obtenidas cuando
los genes de ADNr hayan sido transcritos.
Un anlisis morfo-funcional de las Regiones Organizadoras Nucleolares teniendo
en cuenta los ciclos circadianos demostr la relacin directa de los centro
fibrilares ( uno de los componentes del NOR) con la actividad nucleolar. (Fakan y
Hernndez-Verdun, 1986
En un estudio sobre protenas asociadas con los NORs se estableci que estas
son no histonicas y son argyrophilic Las proteinas NOR estn estrictamente
localizadas dentro del centro fibrilar y el componente fibrilar denso del nucleolo
interfasico(Fakan y Hernndez-Verdun, 1986). En general, el nucleolo crece
durante la interfase, algunas veces el volumen es proporcional al incremento tanto
de el componente fibrilar y el granular, pero en mayor proporcin de la
acumulacin del componente granular. La talla final del nucleolo maduro en el
ciclo celular aparentemente no es una funcin estrictamente lineal del numero de
genes ribosomales que el NOR posee (De la Torre y Jimnez-Martn, 1982).
Son varias las aplicaciones de las bandas NOR entre otras se tiene que: (tomado
de Camacho, 1999) con la banda NOR se puede establecer el grado de
variabilidad de los patrones inter e intra especficos entre especies y/o
poblaciones, pues tanto los cromosomas portadores de NOR como la posicin en
el cromosoma son usualmente diversos entre especies (Disney y Wright, 1987;
Takai y Ojima, 1986 citado por Oberdorff et al, 1990). La diferencia en talla entre
NORs homlogos ha sido descrita en varias especies de vertebrados (Miller et al.,
1977; Ruiz el al., 1981; Galetti et al., 1984 citados por Sanchez et al., 1990).
Esta variacin interespecfica ha sido utilizada para probar hiptesis filogenticas
e inferir otras, antes basadas principalmente en datos morfolgicos (Amemiya y
Gold, 1990); parece ser que las alteraciones en los NOR ocurren normalmente con
relacin a la diferenciacin y evolucin de las especies (Oberdorff et al, 1990).
La variacin intraespecfica puede ser usada para averiguar el origen maternal y
paternal de los cromosomas en un individuo (Mellink et al, 1994) constituyndose
la actividad del NOR como una propiedad heredable cuyo tipo de transmisin
puede ser mendeliana (Jotterand y Van Melle, 1981); adems los NOR activos
muestran variacin de generacin en generacin mientras los inactivos no
(Zakharov et al, 1982 citado por Mellink et al, 1994).

En plantas se encontr tambin que el mtodo servia no solo para localizar

Regiones Organizadoras Nucleolares sino para identificar cromosomas en
cereales, adems de encontrar una relacin entre bandas C y Namda N lo cual fue
clarificado por Schlegel y Gill. Tambin se realizo tcnicas de una banda N
secuencial con hibridacin in situ para identificar cromosomas con las la posicin
especifica de ADN, la metafase primero es identificada en sus patrones de bandas
y despus se destina para hibridizacin in situ as se puede recurrir a la misma
clula en metafase, de esta manera se permite una asignacin directa de los sitios
de hibridizacin con cromosomas individuales (Fukui y Nakayama, 1996)

Bandas GTG
Las bandas G deben su nombre al hecho de que en todas sus modalidades se
emplea Giemsa para colorear los cromosomas. Esta tcnica que, en trminos
generales, es la ms usada en mamferos, por permitir excelentes preparaciones
permanentes sin requerir el uso de microscopio de fluorescencia, se basa en un
tratamiento que altera la estructura de las protenas cromosmicas seguido de una
coloracin. El mtodo de desnaturalizacin trmica descrito por Sumner et al.
(1971), es conocido como ASG (Acid-Saline-Giemsa) y se constituye en la primera
tcnica de bandas G conocida. En esta modalidad se logra la desnaturalizacin
proteica mediante un tratamiento con 2XSSC (Solucin Salina Citratada) caliente.
Sin embargo, el mtodo ms usado en la actualidad es el conocido con el nombre
de bandas GTC (bandas G por Tripsina usando Giemsa como colorante); fue
introducido por Seabright en 1971, y como su nombre lo indica, se basa en una
digestin enzimtica con Tripsina.
Se asume que el mecanismo por el cual se produce el patrn de bandeo G es
porque el colorante interactua con las protenas de cromosoma, al parecer ricas en
grupos disulfuro en las bandas positivas (oscuras), y en grupos sulfhidrilo en las
negativas (claras) (Verma y Babu, 1989). Se acepta, adems, que la extraccin
diferencial de protenas ocurrida durante la fijacin y los tratamientos de
denaturacin, juega un papel muy importante en la obtencin de estas bandas.
Rooney y Czepulkowski (1987), consideran que las bandas G oscuras
corresponden con las crommeras del paquiteno, que se presentan en segmentos
de DNA de replicacin tarda, con alto contenido de Adenina y Timina, y con
relativamente pocos genes activos (Henao y Gmez, 1999)
La banda G ha sido reportada en muchos grupos animales pero por ejemplo en
varias especies de peces esta banda no resulta positiva pues al parecer muchos
de ellos no poseen compartamentalizadin del ADN en isocoros quienes serian los
responsables del bandeamiento.
Por su parte en plantas los reportes son pocos, e inclusive su existencia se ha
puesto en duda. Sin embargo en un anlisis de centeno, S. cereale al construir el
cariograma despus de tratamiento de banda G, se identificaron los cromosomas

homlogos por los patrones de tipo de bandas oscuras y claras, se

estableci diferencias con los patrones obtenidos en banda C, mientras banda C
positiva produce grandes bandas telomericas y algunas intersticiales Banda G
produce ms intersticiales que banda C negativa. Aunque los resultados obtenidos
son prometedores en este caso se hace necesario mejorar antes las tcnicas
antes de utilizarlas en la identificacin de cromosomas en plantas (Fukui y
Nakayama, 1996)

Bandas RHG
Este patrn de bandas es, en trminos generales, el inverso (reverse) de las
bandas G, o sea, las bandas G-positivas son R-negativas, y las G-negativas son
R-positivas; se les denomina bandas RHG para significar que son bandas
reversas obtenidas por calor usando Giemsa como colorante. La tcnica original
se basa en una denaturacin trmica selectiva en buffers de diversa naturaleza,
seguida por una coloracin de cromosomas con Giemsa (Dutrillaux y Lejeune,
1971). Respecto al mecanismo de produccin de este patrn de bandeo, se
asume que depende de la denaturacim selectiva que produce el calor en ciertas
zonas del cromosoma, al parecer asociadas con segmentos de DNA ricos en
Adenina-Timina; en este caso las bandas oscuras son las zonas ricas en GuaninaCitocina, o sea, las que resisten el calor. Verma y Babu (1989) describen el
siguiente protocolo para estas bandas: (Henao y Gmez,1999).
Entre las mltiples tcnicas de coloracin diferencial conocidas hoy, es preciso
resaltar la importancia de las bandas G y de las bandas R en la definicin de los
cariotipos de la mayora de los animales de importancia zootcnica. Entre las
tcnicas selectivas, las de mayor importancia son las bandas C y las bandas NOR,
por su aporte tanto a la identificacin cromosmica como a los estudios de
heteromorfismos.