Академический Документы
Профессиональный Документы
Культура Документы
Integrantes:
Grupo B3
- Francisca Figueroa
- Felipe Martnez
- Mara Fernanda Pinto
- Valentina Prenafeta
- Gabriela Sez
- Macarena Uribe
I. INTRODUCCIN
Espectrofotmetro y cubetas
Reactivo de Bradford diluido
Solucin de BSA 2 mg/ml
Pipeta
Tubos Eppendorf
Tanto las muestras de plasma como a las muestras de orina que estaban en los
tubos Eppendorf fueron descongeladas
Una forma de medir la funcin renal es a travs de la cuantificacin de
protenas en muestras de sangre y orina. Las protenas en la orina normalmente
no aparecen salvo en determinadas circunstancias, y una de ellas es una falla a
nivel de la filtracin glomerular o en la reabsorcin a nivel tubular .
Se dispondr con diferentes tubos Eppendorf donde se realizarn las mezclas
mencionadas en la gua de trabajo prctic o, siendo cautelosos en las diluciones
pedidas en cada una para as obtener resultados fiables. Finalmente con los
resultados obtenidos de absorbancia mediante el espectrofotmetro y las
concentraciones requeridas, se debe realizar una curva de calibracin para as
obtener la concentracin de protena s.
b) Concentracin Cf
=
Materiales:
- Osmmetro Crioscpico
- Tubos Eppendorf
- Muestras de orina y plasma sanguneo
El osmmetro crioscpico permite determinar la osmolaridad de la orina y del
plasma midiendo la disminucin del punto de congelacin de las muestras en
comparacin a la del agua pura ya que esta es el disolvente de ambas.
Se utilizaron seis tubos Eppendorf cada uno con una muestra distinta ya sea de
plasma (normal, consumo restringido o abundante de agua) o de orina (normal,
consumo restringido o abundante de agua ). La mquina congela la muestra y
arroja los resultados que mientras ms diluida est la muestra, menor ser su
punto de congelacin y por ende tendr una menor osmolaridad.
MEDICIN DE ELECTROLITOS
Materiales:
-
FE Na+ o
K+=
valores obtenidos de
se procedi a calcular la
fraccin excretada de sodio y de potasio con la
Ucr x PNa+ o K+
Finalmente,
con
los
CP =
Frmula
x 3,62
mg/dl
C O=
x 72,4 mg/dl
MEDICION DE CREATININA
Materiales:
-
Espectrofotmetro y cubetas
Kit de reaccin en base a cido pcrico
Muestras de sangre y orina
Pipetas
Ccr
=
Ucr x
V
Pcr
III. Resultados
MEDICIN DE PROTENAS
De acuerdo al procedimiento realizado segn el mtodo de Bradford y la
medicin del espectrofotmetro, los resultados fueron los siguientes:
TABLA 1
TUBO
Blanc
o
1
2
3
4
Veces
diluido
0
20
8
4
2,7
Agua
(uL)
200
190
175
150
125
BSA 0,4
mg/ml
0
10
25
50
75
Bradfo
rd (uL)
1000
1000
1000
1000
1000
Concentrac
Absorbanc
in Cf
ia 595 nm
(mg/ml)
0
0,003
0,008
0,016
0,025
0
0,221
0,391
0,585
0,963
Tabla 1. Esta tabla incluye; los valores de dilucin, el volumen de agua, la cantidad de
BSA, el volumen de Bradford, la concentracin final del tubo y la absorbancia de cada
uno de los tubos que se analizaron en el trabajo experimental. Cf (concentracin final)
descrita en la parte de materiales y mtodos.
TABLA 2
Tipo de
muestra
ON
ON
OA
OA
OR
OR
1
2
1
2
1
2
Absorbanci
a 595 nm
0,173
0,166
0,089
0,69
0,39
0,322
Absorban
cia
Promedio
0,1645
0,079
0,356
TABLA 3
Tipo de
muestra
Absorbanci
a 595 nm
PN 1
PN 2
PA 1
PA 2
PR 1
PR 2
0,771
0,792
0,797
0,831
0,774
0,771
Absorban
cia
Promedio
0,7815
0,814
0,7725
GRAFICO 1
Y= 32,899x + 0,1123
En este caso, y representa la absorbancia y x la concentracin de protenas
presentes en la muestra. Adems se tuvo que corregir los valores de dilucin
tanto para las muestras de plasma como en las de orina, utilizando un factor de
dilucin de 6000 y 24 respectivamente.
Frmula para el clculo de la concentracin de protenas:
x
=
y0,1123
32,899
TABLA 4
MUESTRA
Absorbancia
promedio
ON
OA
OR
PN
PA
PR
0,1645
0,079
0,322
0,7815
0,814
0,7725
Concentraci
n de
protenas
(mg/ml)
0,0063
0,0203
0,0213
0,02
Factor de
dilucin
24
24
24
6000
6000
6000
Concentracin
de protenas
ajustada
(mg/ml)
0,1512
121,8
127,8
120
OSMOLARIDAD
Se tomaron todas las muestras, tanto de orina como de plasma para ser
analizadas en un osmmetro con la intencin de medir la osmolaridad de estas.
Los valores entregados fueron los que se muestran en la tabla 4.
TABLA 5
Tabla
5. Contiene
los valores de
Muest
Osmolarid
osmolaridad
de
las
diferentes
ra
ad
muestras, que
fueron
arrojados
por
mOsm/kg
el osmmetro.
ON (Orina normal),
ON
484
OA OA
(Orina abundante),
OR (Orina
246
restringida), PN (Plasma normal), PA
OR
870
(plasma abundante), PR (plasma
PN
319
restringido).
PA
PR
324
333
GRFICO 2
MEDICIN DE ELECTROLITOS
Se midieron los electrolitos, especficamente sodio y potasio, de todas las
muestras plasmticas y de orina con un analizador ion selectivo. Luego de
configurar dicho aparato para las diferentes muestras, los resultados obtenidos
fueron los que se mencionan en la siguiente tabla adjunta.
TABLA 5
UCr
UNa
131,768
131,768
396,752
73
45
173
PCr
PNa
0,724
1,158
1,086
FENa+
143
146
146
0,28
0,27
0,324
TABLA 7
TABLA 7. Contiene los valores tanto de
creatinina como de potasio en el plasma
y en la orina, adems de los resultados
obtenidos sobre la fraccin excretada
de potasio en las diferentes muestras.
Ucr (Creatinina en la orina), Uk (Potasio
en orina), Pcr (Creatinina en el plasma),
Pk (Potasio en el plasma), FEK+
(fraccin excretada de potasio).
MEDICIN DE CREATININA
Tabla 8
Ingesta de
Agua
Normal
Abundant
e
Restringid
a
Ucr
131,76
8
131,76
8
396,75
2
Uk
Pcr
Pk
FEK+
28,6
0,724
4,4
0,28
20,1
1,158
5,5
0,27
36,8
1,086
4,8
0,324
Tabla 9
Ingesta
agua
de Creatinina en Creatinina en
el
plasma la
orina
(mg/dl)
(mg/dl)
Normal
0, 724
129,984
Abundante
1,1584
131,768
Restringida
1,086
396,752
CLERARENCE DE CRATININA
En la tabla que se muestra a continuacin se vern los valores obtenidos del
clearence de creatinina, a partir de la frmula descrita en materiales y mtodos.
Tabla 10
Ingesta
de Agua
Normal
Abundant
e
Restringi
da
Ucr
Volumen
de orina
(L)
131,76
8
131,76
8
396,75
2
Pcr
Clearence de
creatinina
1,2
0,724
218,4
1,92
1,158
218,475
0,5
1,086
182,666
IV. Discusin
MEDICIN DE PROTENAS
La cuantificacin de protenas tanto en las muestras de sangre como de orina
fueron hechas mediante el mtodo de Bradford, cuyo principio se basa en la
unin de un colorante a las protenas y la comprara contra diferentes cantidades
agua. En primer lugar, se obtuvo una orina normal (ON), con una ingesta ad
libitum, una orina restringida (OR) cuando el voluntario ingiri menos de un litro
de agua, y finalmente una orina abundante (OA), caso en que el voluntario
ingiri agua en abundancia (idealmente sobre los dos litros) .
Los resultados obtenidos en la orina normal, 73 mEq/L de sodio y 28,6 mEq/L de
potasio, se encuentran dentro de los rangos normales dados por la literatura,
los cuales son 40 a 220 mEq/L/da y 25 a 125 mEq/L6 al da respectivamente.
Los resultados obtenidos en la orina abundante, arrojan valores de 45 mEq/L y
20,1 mEq/L para sodio y potasio respectivamente. Estos cambios no son
significativos, sin embargo, se pueden entender, ya que como la ingesta de
agua aument, la concentracin, es decir, la cantidad de una sustancia por
unidad de volumen, disminuy, dado que el volumen aument y por ende, esta
proporcin disminuye.
El caso ms evidente, es el de la orina restringida, cuyos valores de sodio y
potasio (173 mEq/L y 36,8 mEq/L respectivamente), se encuentran
drsticamente por sobre los obtenidos en la ON. Esto ocurre, dado la baja
ingesta de agua, el rin intenta retener la mayor cantidad de agua posible,
con ayuda de la hormona antidiurtica, y as mantener el equilibrio hdrico del
cuerpo.
Otra hiptesis a estos valores elevados de sodio podra ser el uso de ciertos
medicamentos como diurticos, una baja actividad de las glndulas
suprarrenales o bien una inflamacin del rin que ocasionase prdida de sal
(nefropata por prdida de sal).
En el caso del potasio, se podra adjudicar sus altos valores a un dao en las
clulas tubulares renales, hipomagnesemia, etc. 7
Claramente, adjudicar a una de estas causas nuestros resultados, es muy
prematuro y requerira otros exmenes complementarios, para verificar qu es
lo que realmente ocurre en el rin.
En relacin a los valores del plasma de sodio y potasio, stos se mantienen
dentro de rangos normales (142 mEq/L para el sodio y 4 mEq/Lpara el potasio) 8,
observndose solo pequeas variaciones que no fueron significativas, por los
mecanismos descritos previamente en la seccin de osmolaridad, sin embargo,
como las muestras corresponden a tres individuos distintos, no podemos afirmar
ciertamente lo que ocurre.
MEDICIN DE CREATININA
La creatinina es un compuesto orgnico y subproducto de la creatina, la cual es
utilizada por nuestro organismo como nutriente para los msculos y as
brindarles energa, eliminando la creatinina como producto de desecho de este
metabolismo13. Habitualmente la creatinina tiene una tasa constante de filtrado
en los riones que luego es eliminada en la orina. El examen de creatinina es
normalmente realizado para ver el grado de funcin renal, ya que es eliminada
por estos rganos14. Los valores normales de creatinina en la sangre para los
hombres son de 0,7 a 1,3 mg/dL y para las mujeres es de 0,6 a 1,1 mg/d L, si
estos valores se llegaran a encontrar alterados podran encontrarse afecciones
muy importante a nivel de los riones como obstruccin de las vas urinarias o
insuficiencia renal en el caso de que la creatinina en la sangre aumentase o
problemas musculares como la distrofia muscular en el caso de que estos
valores estuvieran bajo los parmetros normales.9
De la tabla 7 podemos concluir que, una dieta abundante en agua provoca que
la creatinina no se logre filtrar completamente por el rin, esto conlleva a
tener un mayor porcentaje de creatinina en la sangre. Al revs ocurre en la
dieta restringida de agua, en donde la creatinina se encuentra altamente
filtrada a nivel glomerular. Esta comparacin se hizo mediante una muestra
control, la orina y el plasma sanguneo de un voluntario, pero con una dieta
normal.
Por otro lado, tenemos el clearence o aclaramiento de la creatinina, el cual
compara el nivel de creatinina en la orina con su nivel en la sangre. 10 Este es
muy importante cuando se encuentra bajo, como en el caso de la dieta
restringida, pero como en el trabajo experimental no se encuentra
extremadamente bajo los rangos normales, se puede decir que es solo efecto de
la dieta. Pero si esto se encuentra en personas normales con ninguna restriccin
de agua, se podra pensar que esta persona se encuentra con algn comienzo
del desarrollo de una patologa renal, y en casos ms extremos, con la
reduccin del clearence en menos de un 50% respecto a los rangos normales,
se puede estar ante un paciente con insuficiencia renal aguda. 11
V. Referencias
[1] Gallardo PA, Velarde V, Vio CP, Alvo M, Pacheco A, Rodrigo R.
Fisiologa Renal y Metabolismo Hidrosalino. 1st ed. Santiago de Chile:
Ediciones Universidad Catlica de Chile; 2007. Chapter 1, Funciones Generales
del rin; p. 1718.
[2] PUC. Apuntes de fisiopatologa de sistemas. [Internet]. Clase de Circulacin
Renal
y
Filtracin
Glomerular.
[Citado
01-09-14].
Disponible
en:
http://escuela.med.puc.cl/paginas/cursos/tercero/IntegradoTercero/Mec231_37.h
tml
[3] Caldern, J., & Montero, F. J. C. (2007). Fisiologa aplicada al deporte. Editorial
Tbar.
[4] Strasinger, S. K., & Di Lorenzo, M. S. (2010). Anlisis de Orina y de los
Lquidos Corporales. Ed. Mdica Panamericana.
[5] Morera, L. M. T. (2001). Tratado de cuidados crticos y emergencias. Arn
Ediciones.
[6] Escuela medicina PUC [internet]. Santiago: Pontificia Universidad Catlica de
Chile; c2001. Exmenes de laboratorio para el diagnstico diferencial de
hipokalemia; 2001 Sept [cited 2014 Agosto 31]; [about 4 screens]. Disponible
en: http://escuela.med.puc.cl/publ/TemasMedicinaInterna/hipokalemia.html
[7] Nlm [internet]. Maryland: U.S. National Library of Medicine; c2013. Excrecin
fraccionada de sodio; 2013 Nov 11 [cited 2014 Agosto 31]; [about 1 screens].
Available
from:
http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003602.htm
[8] PUC. Apuntes de fisiopatologa de sistemas. [Internet]. Clase de Circulacin
Renal
y
Filtracin
Glomerular.
[citado
01-09-14].
Disponible
en:
http://escuela.med.puc.cl/paginas/cursos/tercero/IntegradoTercero/Mec231_37.h
tml
[9] MedLine Plus [Internet]. Maryland: U.S. National Library of Medicine; [cited
2014
Aug.
30]
Available
from
http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003475.htm
[10] MedLine Plus [Internet]. Maryland: U.S. National Library of Medicine; [cited
2014
Aug.
30]
Available
from
http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003611.htm
[11] FERNANDO BARAONA Y PATRICIO DOWNEY. Insuficiencia
aguda.PUC.2001
[internet]
[citado
01-09-13]
Disponible
http://escuela.med.puc.cl/publ/TemasMedicinaInterna/ira.html
renal
en:
[12] MedLine Plus [Internet]. Maryland: U.S. National Library of Medicine; [cited
2014
Aug.
30]
Available
from
http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003622.htm
[13] Torres L. Tratado de cuidados crticos y emergencias. [Internet] Espaa:
Aran ediciones 2001 [cited 2014 Aug. 30] 3000 p. Available from
http://books.google.cl/books?
id=znLW2kwTieEC&pg=PA119&dq=medicion+creatinina&hl=es&sa=X&ei=8Rs
BVKPrKae_sQTw6oLgCQ&ved=0CC4Q6AEwAw#v=onepage&q=medicion
%20creatinina&f=false
[14] Daz J. Fernndez M, Paredes F. Aspectos bsicos de bioqumica clnica.
[Internet]Espaa: Ediciones Daz de Santos, 1997 [cited 2014 Aug. 30] 293 p.
Available
from:
http://books.google.cl/books?
id=Y1Qm0nRmAtsC&pg=PA84&lpg=PA84&dq=reacci
%C3%B3n+de+jaffe&source=bl&ots=b8UxLd75mg&sig=Eq_tkERQXPKEsoW07R
8GmeC17EI&hl=es&sa=X&ei=XyIBVOb8JPbIsAS2noHYBg&ved=0CFEQ6AEwCg#
v=onepage&q=reacci%C3%B3n%20de%20jaffe&f=false
[15] Girarldo G, Loango N, Meja C. Laboratorio de bioqumica: una visin
prctica. [Internet] Ediciones Elizcom, 2010 [cited 2014 Aug. 30] Available from:
http://books.google.cl/books?
id=dAbMDrXcTHsC&pg=PA108&dq=metodo+de+bradford&hl=es&sa=X&ei=XA
4CVOTmBPPIsASM44G4Bw&ved=0CBsQ6AEwAA#v=onepage&q=metodo
%20de%20bradford&f=false
[16] Gennaro A. Remington farmacia [Internet] Uruguay: Ed. Mdica
Panamericana, 2003 [cited 2014 Aug. 30] 1388 p. Available from:
http://books.google.cl/books?id=Av4IIsyHqcC&pg=PA672&dq=proteinas+orina&hl=es&sa=X&ei=4EoCVIviGovIsAT_voDY
BA&ved=0CCEQ6AEwAQ#v=onepage&q=proteinas%20orina&f=false