Procedes de Separation Et Techniques Readings 130808075043 Phpapp01 PDF

Procds de sparation
et techniques lectro-analytiques
et spectrochimiques
Procds de sparation et techniques
lectro-analytiques et spectrochimiques
Par Vincent MAKOKHA
African Virtual university

Universit Virtuelle Africaine
Universidade Virtual Africana
Note
Ce document est publi sous une licence Creative Commons.
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Attribution
http://creativecommons.org/licenses/by/2.5/
License (abrviation cc-by ), Version 2.5.
Dr Scott Van Bramer (spectromtrie de masse) ainsi que Dr William Reush (spectroscopie
molculaire) de lUniversit du Michigan ont autoris la reproduction de certains textes
et diagrammes provenant de leur cours de chimie organique.
Table des matires
I.

Procds de sparation et techniques lectro-analytiques

et spectrochimiques . ................................................................................ 3
II. Prrequis................................................................................................... 3
III. Temps........................................................................................................ 3
IV. Matriels didactiques................................................................................. 3
V. Justification............................................................................................... 4
VI. Contenu..................................................................................................... 4

6.1 Rsum................................................................................................ 4
6.2 Vue d'ensemble................................................................................... 5
6.3 Reprsentation graphique.................................................................... 7
VII. Objectifs gnraux..................................................................................... 7

VIII. Objectifs spcifiques dapprentissage........................................................ 8
IX. Activits denseignement et dapprentissage............................................ 10
X. Liste des concepts cls (glossaire).......................................................... 15
XI. Liste des lectures obligatoires.................................................................. 21
XII. Listes des liens utiles............................................................................... 23
XIII. Ressources multimdias........................................................................... 31
XIV. Activits d'apprentissage......................................................................... 33
XV. Synthse du module............................................................................... 106
XVI. valuation sommative............................................................................ 108
XVII. Auteur principal du module................................................................... 111
XIII. Rfrences............................................................................................. 112
XIX. Structure du document.......................................................................... 112

I. Procds de sparation et techniques

lectro-analytiqueS et spectrochimiques
Par Vincent Makokha
II. Prrequis/connaissances pralables

ncessaires

Structure de latome et concept de niveau dnergie

Introduction aux concepts doxydo-rduction (RedOx)
quilibrage dquations rdox
Potentiels de rduction standards
quation de Nernst
Concepts dchantillonnage
Calculs derreur et statistiques
Thorie des liaisons chimiques
lectrochimie
III. Volume horaire/temps

Techniques de sparation et chromatographie

Techniques lectrochimiques
Spectroscopie et techniques spectroscopiques atomiques
Spectroscopie molculaire 1 (UV et IR)
Spectroscopie molculaire 2 (RMN)
Spectromtrie de masse
25 heures
15 heures
20 heures
30 heures
15 heures
15 heures
IV. Matriels didactiques

Afin de complter ce module, les ressources et outils suivants seront ncessaires :

Ordinateur, CD-ROMs et ressources virtuelles

Pouvoir accder ce module, examens et autres matriels ncessaires partir
dun ordinateur
Une connexion Internet afin daccder au module et aux autres rfrences
suggres.
Pouvoir accder des forums de discussion interactifs.
Manuels et matriels de rfrence recommands pour lapprentissage et la
comprhension des thmes du module.
Programme Macromedia Flash Player
V. Justification/importance du module
Les diffrents procds de sparation et techniques lectro-analytiques et spectrochimiques constituent la base de lanalyse instrumentale et leur application est
largement rpandue en industrie, en chimie, en biochimie et dans les domaines de
lenvironnement et de lenseignement des sciences. Ces techniques sont bases sur les
principes de chimie enseigns au niveau scolaire. Ainsi, tout au long de ce module,
nous tudierons les principes sur lesquels ces techniques sappuient et acquerrons
les habilets ncessaires lutilisation de ces techniques. Ltude de cette discipline
augmente la comprhension des principes de chimie sous-jacents et permet aux apprenants de transmettre un meilleur enseignement au niveau scolaire.
VI. Contenu
6.1 Rsum
Ce module est constitu de trois parties indpendantes relatives aux thmes suivants:
procds de sparation, techniques chromatographiques, techniques lectro-analytiques et mthodes spectroscopiques. Il est subdivis en six units dapprentissage
refltant les concepts et approches courants.
Les units portant sur les procds de sparation et les techniques chromatographiques expliciteront les techniques de sparation lmentaires qui sont couramment
enseignes dans les coles. Par la suite, nous nous intresserons aux techniques de
chromatographies en exposant successivement les points suivants: thorie gnrale,
applications et diffrentes techniques de chromatographie planaire et sur colonne.
La section sur les techniques lectro-analytiques introduit les principes sur lesquels
est base la potentiomtrie et indiquera les applications courantes de celle-ci. Suit
la section sur la voltampromtrie (ou voltammtrie) qui dbute par les techniques
dites polarographiques et qui se terminera par les voltampromtries cyclique et
redissolution anodique.
Lunit sur la spectroscopie et les techniques de spectroscopie atomique revoit les
concepts suivants: les interactions entre lnergie et la matire ainsi que les niveaux
dnergie dans les atomes et les molcules. Lunit se termine par une tude des
diffrentes techniques utilises en spectroscopie atomique.
La premire unit portant sur la spectroscopie molculaire sintresse dabord la
thorie spectroscopique dans le spectre de lumire visible et dans la rgion des rayons
ultraviolets (UV). Il est ensuite question de la place de ce concept et de son utilisation
dans lanalyse qualitative et quantitative, ainsi que linstrumentation dans le cadre de
la spectrophotomtrie moderne dans lUV-visible. Ltude se poursuit ensuite sur la
spectroscopie infrarouge (IR) en dbutant par une introduction sur le spectre IR. Il est
ensuite question des pics dnergie caractristiques relis aux groupes fonctionnels
des molcules et de lapplication de lIR dans lidentification de composs chimiques
ou de groupements fonctionnels molculaires.
La deuxime unit sur la spectroscopie molculaire commence par une introduction
sur le phnomne de rsonnance magntique nuclaire (RMN). Ensuite il est question de la RMN du proton, de la relation entre le dcalage chimique du proton et
son environnement chimique et molculaire ainsi que de lutilisation de la RMN du
proton dans lidentification de groupe fonctionnels molculaires. Lunit se termine
par ltude la RMN du carbone et de son rle dans lanalyse de composs.
La dernire unit dapprentissage porte sur la spectromtrie de masse et dbute par
une introduction sur les principes de base de la technique. Il est ensuite question de
lutilisation de la spectromtrie de masse dans lidentification de composs organiques
et de linstrumentation de la technique.
6.2 Vue d'ensemble
UNIT I

Sparation et techniques chromatographiques - 25 heures
Techniques de sparation
- Extraction au solvant
- Distillation
Chromatographie
- Thorie de la chromatographie
- Le processus dentranement
Types de techniques de chromatographie
-
-
-
-
Chromatographie planaire
Chromatographie sur colonne
Chromatographie liquide
Chromatographie en phase gazeuse
UNIT II

Techniques lectro-analytiques - 15 heures
Potentiomtrie
- lectrodes slectives ioniques

- lectrodes pH en verre
- Titrages potentiomtriques
Voltampromtrie (voltammtrie)
-
-
-
-
Polarographie
Polarographie impulsionnelle
Voltampromtrie cyclique
Voltampromtrie redissolution anodique
UNIT III

Spectroscopie et techniques de spectroscopie atomique - 20 heures
Spectroscopie
- Rayonnement lectromagntique
- Latome et la spectroscopie atomique
- Loi de Beer
Techniques de spectroscopie atomique
UNIT IV

Spectroscopie molculaire 1: uv-visible et ir- 30 heures
Spectroscopie dans lultraviolet/visible
- Transitions lectroniques
- Utilisation de lUV dans lidentification de groupes fonctionnels
- Instrumentation de la spectromtrie UV-visible
Spectroscopie infrarouge
-
-
-
Vibrations molculaires et spectroscopie infrarouge (IR)

nergies relatives et absorption dans lIR
Utilisation de la spectroscopie IR dans lidentification de groupes
fonctionnels
UNIT V

Spectroscopie molculaire 2: rsonance magntique nuclaire

- 15 heures
Spectroscopie de rsonance magntique nuclaire (RMN)
- RMN du proton
- Dplacement chimique
- RMN du proton et structure de la molcule
Spectroscopie de RMN du carbone
UNIT VI Spectromtrie de masse - 15 heures

-
-
Patrons de fragmentation
Spectre empreinte digitale
6.3 Schma-synthse
PROCDS DE SPARATION ET TECHNIQUES LECTROANALYTIQUES ET SPECTROCHIMIQUES
TECHNIQUES DE
SPARATION ET DE
CHROMATOGRAPHIE
SPECTROSCOPIE
MOLCULAIRE 1
TECHNIQUES LECTROANALYTIQUES
INTRODUCTION LA
SPECTROSCOPIE /
SPECTROSCOPIE
ATOMIQUE
SPECTROSCOPIE
SPECTROMTRIE DE
MOLCULAIRE 2
MASSE
VII. Objectifs gnraux

Les objectifs gnraux de ce module sont au nombre de trois: expliquer les concepts
fondamentaux de certaines techniques danalyses modernes, donner aux apprenants
du module les habilets de base pour appliquer ces concepts lors de simulations de
problmes de la vie courante et approfondir la comprhension des tudiants des
principes de chimie qui rgissent ces techniques.
VIII. Objectifs spcifiques dapprentissage

Unit
Objectifs dapprentissages
1. Procds de
sparation et
techniques de
chromatographie
la fin de cette unit, les lecteurs seront capables de:

--Rintgrer les mthodes de sparation enseignes lcole
--Expliquer les principes de base de lextraction au solvant
--Rsoudre des problmes numriques hypothtiques concernant lextraction
au solvant
--Nommer et dessiner les appareils utiliss pour lextraction au solvant
--Nommer les techniques courantes de chromatographie sur colonne et planaire
--Expliquer la thorie sous-tendant chacune des techniques de chromatographie planaire et sur colonne
--Rappeler lquipement ncessaire pour la chromatographie sur planaire et sur
colonne
2. Techniques
lectro-analytiques

--Rappeler la thorie sur laquelle se base la potentiomtrie
--Expliquer les applications de la potentiomtrie la mesure de pH, aux lectrodes slectives ioniques et aux stations de titrage automatique
--Rintgrer la thorie sous-tendant la voltampromtrie
--Interprter qualitativement et quantitativement des donnes voltampromtriques
--Expliquer les concepts de base de lanalyse polarographique
--Interprter des donnes polarographiques afin didentifier et de quantifier des
composs chimiques
--Nommer les parties du spectre lectromagntique
--Rappeler les effets du rayonnement sur les atomes et les molcules
--Rappeler la loi de Plank et lappliquer aux problmes de spectroscopie
--Rviser les niveaux dnergie des lectrons dans les atomes et les molcules
--Rintgrer la loi de Beer et lappliquer des problmes quantitatifs
--Expliquer les niveaux dnergie des lectrons dans les atomes et les transitions
lectroniques causes par labsorption de radiations
--Expliquer les concepts sur lesquels sont bases les spectroscopies dmission
atomique (SEA), de fluorescence atomique (SFA), et dabsorption atomique
(SAA)
--Rintgrer les notions dinstrumentation des SEA, SFA et SAA
--Faire les calculs ncessaires en se basant sur des observations de SAA, SFA et
SEA hypothtiques
3. Introduction aux
techniques
spectroscopiques
et spectroscopiques atomiques
Unit
Objectifs dapprentissages
4. Spectroscopie
molculaire 1:
spectroscopie dans
lUV-visible et
dans lIR

--Rintgrer la notion de transition lectronique cause par labsorption de
rayons UV-visibles
--Faire la corrlation entre labsorption de rayons UV-visibles de frquences
spcifiques et les groupes fonctionnels molculaires
--Utiliser des donnes hypothtiques pour trouver la concentration dun liquide
en utilisant lUV
--Rappeler les parties dun spectrophotomtre UV moderne et leurs fonctions
--Rintgrer les notions de transitions lectroniques causes par labsorption de
rayons IR
--Faire la corrlation entre labsorption de rayons IR de frquences spcifiques et
les groupes fonctionnels molculaires
--Faire la corrlation entre labsorption de rayons IR de frquences spcifiques et
la structure de molcules organiques simples
--Rappeler les parties dun spectrophotomtre IR moderne et leurs fonctions
--Expliquer le phnomne de rsonance magntique nuclaire
--Rappeler les proprits nuclaires dmontres par la RMN
--Expliquer le phnomne de RMN du proton (HRMN)
--Corrler les frquences spcifiques dabsorption HRMN aux groupes fonctionnels molculaires
--Corrler les frquences spcifiques dabsorption HRMN la structure molculaire de molcules organiques simples.
--Expliquer les particularits du phnomne de RMN du carbone-13
--Rappeler la nature des informations fournies par une RMN du carbone-13
--Rappeler les parties dun spectromtre RMN moderne et leurs fonctions
--Expliquer comment se produit le phnomne du spectre de masse
--Expliquer les rgles suivies par la fragmentation dans un spectre de masse
--Faire la corrlation entre le spectre de masse et des lments structurels
spcifiques dans une molcule
--Utiliser un spectre de masse pour identifier diffrentes catgories de molcules
--Utiliser un spectre de masse haute rsolution et un calculateur de masse
molculaire afin didentifier des lments structurels
--Rappeler les diffrentes parties dun spectromtre de masse et leurs fonctions
5. Spectroscopie
molculaire 2:
Spectroscopie
de rsonance
magntique
nuclaire (RMN)
6. Spectromtrie de
masse
Universit Virtuelle Africaine 10
IX. Activits denseignement et

dapprentissage
valuation formative
1) Un atome de bryllium possde 4 protons, 5 neutrons, et 4 lectrons. Quel est le
nombre de masse de cet atome ?
A) 4
B) 9
C) 8
D) 7
2) Le nombre quantique principal le plus bas pour un lectron est:

A) 1
B) 0
C) 2
D) -1
3) Concernant les acides et les bases, lequel des noncs suivants est vrai ?
a) Les acides et les bases ne ragissent pas ensemble

b) Les acides et les bases se neutralisent lun lautre
c) Un acide mlang une base donne une base plus forte
d) Un acide mlang une base donne un acide plus fort
4) Les solutions neutres ont un pH de:
A) 0
B) 1
C) 7
D) 10
5) Comparativement la charge et la masse dun proton, un lectron a:

a)
b)
c)
d)
la mme charge et une masse infrieure

la mme charge et une masse gale
une charge oppose et une masse infrieure
une charge oppose et une masse gale
6) Quelle est la formule empirique du compos ayant la formule molculaire

P4O10
a)
b)
c)
d)
PO
PO2
P 2O 5
P8O20
7) Laquelle des conversions suivantes ncessite un agent oxydant ?

a)
b)
c)
d)
Mn3+ --> Mn2+

C2H4 --> C2H6
(2CrO4)2- --> (Cr2O7)2SO2 --> SO3
8) Les halognures dhydrogne sont des molcules polaires qui forment des solutions acides. Lequel des acides suivants est le plus faible ?
a)
b)
c)
d)
HI
HF
HBr
HCL
9) Calculez la [H+] dans une solution ayant un pH de 8,38.

a)
b)
c)
d)
1,21 x 10-2
3,8 x 10-8
2,40 x 108
4,17 x 10-9
10) Dans toutes les cellules lectrochimiques, le processus qui prend place lanode
est ______________ et celui qui se produit la cathode est ______________.
a)
b)
c)
d)
oxydation, rduction
rduction, rduction
rduction, oxydation
oxydation, oxydation
11) Quel est ltat doxydation du soufre (S) dans le compos H2SO3 ?
a)
b)
c)
d)
+4
+2
0
+6
12) Llectrode standard hydrogne a un potentiel de rfrence de :

a)
b)
c)
d)
-1,00 volt
0,76 volt
0
1,00 volt
13) Choisissez lquation qui ne reprsente pas une raction redox:

a)
b)
c)
d)
Zn + CuSO4 ZnSO4 + Cu
2H2O2 2H2O + O2
H2O + CO2 H2CO3
2H2 + O2 2H2O
14) Une mole dlectrons a une charge de 96485 coulombs. Cette quantit est connue
des chimistes commetant :
a)
b)
c)
d)
1 watt
1 ampre
1 joule
1 faraday
15) Parmi ces proprits de leau, laquelle explique sa capacit dissoudre lacide
actique ?
a) La tension de surface leve de leau, qui est cause par la formation de liens
hydrogne entre les molcules deau adjacentes.
b) La capacit de leau dagir comme tampon; absorbant les protons librs par
lacide actique.
c) La capacit de leau de former des liens hydrogne avec les groupements
carbonyles et hydroxyles de lacide actique.
d) Aucune des rponses ci-dessus.
16) Le pH dune solution correspond :
a)
b)
c)
d)
e)
La concentration de lion hydrogne, [H+]

log [H+]
-log [H+]
-ln [H+]
-ln [H+]
17) Si la concentration de H + dans une solution est 10 - 3 M, quelle sera la concentration de OH dans cette mme solution 25C ?
a)
b)
c)
d)
e)
10 - 3 M
10 - 11 M
1011 M
2 x 10 - 11 M
10 - 14 M
18) Quelle quantit (en ml) dune solution de HCl 0,4 M est requise pour amener le
pH dune solution de 10 ml de NaOH 0,4 M 7,0 (pH neutre) ?
a)
b)
c)
d)
e)
4
40
10
20
2
19) Un atome duquel des lments suivants a la plus grande capacit dattirer un
lectron ?
a)
b)
c)
d)
Silicium
Soufre
Azote
Chlore
20) Lequel des lments suivants a la plus haute nergie de premire ionisation ?
a)
b)
c)
d)
Aluminium
Sodium
Calcium
Phosphore
Elments de rponse
1. b
2. a
3. b
4. c
5. a
6. c
7. d
8. b
9. d
10. a
11. a
12. c
13. c
14. d
15. c
16. c
17. b
18. c
19. d
20. d
Commentaire pdagogique pour les lecteurs/apprenants
Moins de 30%
de bons rsultats
Il est fortement recommand lapprenant(e) de rviser les concepts et connaissances

pralables requis avant dentreprendre ltude de ce module.
Entre 30 et 60% de bons rsultats
Lapprenant(e) est prpar entreprendre ce module, mais aura peut-tre besoin de
recourir une rvision de certains concepts.
Au-del de 60% de bons rsultats
Lapprenant(e) est bien prpar et matrise suffisamment les connaissances pralables.
X. Concepts-cls (Glossaire)
Sparation et chromatographie
luant (ou, plus rarement, Solvant) est le terme qui dsigne le la phase mobile
liquide.
Diluant: terme dsignant un liquide inerte utilis pour dissoudre lextractant, et
pour diluer le systme.
Extractant: terme qui dsigne un agent dextraction dions mtalliques.
Raffinat: dsigne la phase mobile aprs quun solut en ait t extrait (le mlange
appauvri en solut).
Extrait: dsigne la phase enrichie en solut que lon obtient aprs lextraction.
Extraction: dsigne lopration qui extrait un solut non-dsir dun liquide organique
Revaporisation (Stripping): Prenons le cas dune chaudire vapeur qui contient
de leau (et de la vapeur au dessus du plan deau) sous 210C - 19 bars (absolus). Si
lon soutire de leau celle-ci va se trouver la pression atmosphrique, or p = patm
la temprature peut tre au maximum de 100C : une partie de leau va se vaporiser
pour atteindre cette temprature : cest la revaporisation. Ce procd peut servir en
rduire la teneur dun liquide en produits trop volatils, par exemple.
Asymtrie: cest un facteur dcrivant la forme du pic chromatographique. La thorie
assume une courbe de Gauss symtrique. Le facteur dasymtrie du pic est le ratio
(mesures prises 10% de la hauteur) de la distance entre lapex et la deuxime moiti
de la courbe chromatographique sur la distance entre lapex et la premire moiti de
la courbe. Une valeur suprieure 1 aura pour rsultat une trane (tailing peak) alors
quune valeur infrieure 1 indique un front diffus (fronting peak).
Ligne de base: la ligne de base est celle qui est dessine par le systme danalyse
quand le seul signal dtect provient de la phase mobile.
Chromatographie : Cest un procd physique de sparation bas sur la diffrence
daffinit des substances constituantes analyser lgard de deux phases, lune
stationnaire ou fixe, lautre mobile.
Volume mort (Vm): Cest en quelque sorte tout volume externe aux particules
imprgnes de liquide (phase stationnaire) contenues dans la colonne. Le volume
interstitiel (intra-particules et inter-particules contenues dans la colonne) ajout au
volume extra-colonne (auquel contribue linjecteur, le dtecteur, les tubes connecteurs
et les raccords) se combinent pour former le volume mort. Ce volume mort peut tre
dtermin en injectant dans la colonne un compos inerte, par exemple un liquide
qui ninteragirait pas avec la phase stationnaire. On retrouve aussi les abrviations
V0 ou Vm (pour volume mort).
Dtecteur: Cest un dispositif lectronique qui met en vidence de faon quantitative

la prsence des composs spars pendant llution. Il existe diffrents types de dtecteurs. Les plus courants sont: les dtecteurs de rayonnement dans lUV-visible, les
dtecteurs rfractomtre diffrentiel, les dtecteurs lectrochimiques, les dtecteurs
de conductivit et les dtecteurs de fluorescence.
Chromatographie de dplacement: cest un procd chromatographique o la
phase mobile a plus daffinit que le solut (lchantillon) pour la phase stationnaire.
Lchantillon est plac sur la colonne et est donc ensuite dplac par la phase mobile
qui est plus fortement absorbe que les diffrentes composantes de lchantillon. Les
molcules de lchantillon sont donc pousses devant par la phase mobile. On obtient
pour rsultat une meilleure lution du solut. Ces techniques de dplacement sont
utilises principalement en chromatographie liquide haute performance (CLHP,
ou HPLC).
Standard externe: cest un chantillon distinct contenant des quantits connues des
composs (ou soluts) dintrt. Les standards externes sont utiliss principalement
pour lidentification de pics en comparant les temps dlution.
Hydrophile: dsigne laffinit pour leau. Ce terme convient autant aux phases
stationnaires compatibles avec leau quaux molcules solubles dans leau. La plupart des colonnes utilises pour la sparation de protines sont de nature hydrophile
et ne devraient pas absorber ni dnaturer les protines contenues dans une solution
aqueuse.
Injecteur: cest un dispositif servant injecter de faon prcise une quantit prdtermine dchantillon dans le flot de la phase mobile. Linjecteur peut tre un simple
dispositif manuel ou encore un appareil sophistiqu dchantillonnage permettant
linjection automatise de plusieurs chantillons diffrents (peut tre une opration
sans surveillance humaine).
Coefficient de partage (K): rapport entre la quantit de solut dans la phase stationnaire et la quantit de solut dans la phase mobile. Il peut aussi tre appel coefficient
de distribution, KD.
Temps de rtention (tr): dsigne le temps entre linjection et lapparition du sommet
du pic. Le temps de rtention ajust ou rduit, tr, est le temps de rtention soustrait
du temps pass dans la phase stationnaire.
Volume de rtention (Vr): correspond au volume de la phase mobile requis pour luer
une substance de la colonne. On dsigne galement par Vm le volume mort ou volume
nul, KD le coefficient de distribution et Vs, le volume de la phase stationnaire.
Phase stationnaire: cest la phase immobile implique dans le processus de chromatographie. En chromatographie liquide, cette phase peut tre un solide, ou encore
une paroi ou un support solide enduit de la substance qui joue le rle de la phase
stationnaire. La phase stationnaire choisie est souvent une caractristique du mode
de chromatographie liquide (LC) utilis. Par exemple, le gel de silice est utilis en
chromatographie dadsorption, lenduit doctadcylsilane est typique de la chromatographie en phase inverse, etc.
Chimie lectro-analytique
Courant de bruit de fond: courant qui nest pas li la raction chimique de
lanalyte.
Courant capacitifou chargeant : courant de bruit de fond produit par llectrode
jouant le rle de capaciteur et devenant charge.
Diffusion: mouvement dans une solution caus par un gradient de concentration.
Demi-cellule: cest la moiti dune cellule lectrochimique contenant une lectrode, un systme conducteur avec un solvant, un analyte et un pont salin assurant
la conductivit.
Potentiel de demi-vague: cest le potentiel la moiti du pic, une mesure du potentiel formel.
lectrode indicatrice: lectrode utilise en potentiomtrie dont le potentiel dpend
de lactivit de lanalyte.
lectrode slective ionique: lectrode utilise en potentiomtrie qui donne un signal
de potentiel en prsence de lion auquel elle est slective.
Voltampromtrie balayage linaire: cest laction de mesurer le courant lorsque
le potentiel change de faon rgulire (linairement augment ou diminu).
Migration: mouvement dans une solution caus par un gradient de potentiel.
Polarographie: mthode de voltampromtrie o llectrode de travail est llectrode
gouttes de mercure.
Potentiel ou potentiel lectrochimique: mesure de lnergie dune raction lectrochimique.
Fentre de potentiel: fentre de potentiel pour une lectrode ou un solvant donn(e)
o les mesures analytiques peuvent tre faites.
lectrode de rfrence: demi-cellule de potentiel lectrochimique connu et constant
; units gnralement en volts, (V).
lectrode dargent/chlorure dargent: lectrode de rfrence qui consiste en un fil
dargent recouverte dun enduit de chlorure dargent et immerg dans une solution
aqueuse sature.
Spectroscopie
Spectroscopie dabsorption: type de spectroscopie o lon mesure la quantit de
rayonnement dune longueur donde particulire absorbe par un chantillon dintrt. La longueur donde dabsorption dpend de la molcule et de ses diffrentes
transitions lectroniques.
Loi de Beer-Lamber: cest une fonction de labsorbance, la longueur du trajet de
la lumire, le coefficient dabsorption molaire et la concentration de lchantillon:
A = cl.
Chromophore: groupement fonctionnel responsable de labsorption. Ex.: un alcne
absorbe unemax de 177 nm.
Conjugaison: cest une longue srie de liaisons simples, doubles et/ou triples alternes, qui provoque le recouvrement des orbitales p. Les systmes conjugus tendent
absorber dans la rgion visible.
Double liaison: une liaison chimique ou lorbitale s et deux des orbitales p shybrident
pour former 3 orbitales sp2 qui formeront une liaison sigma (), avec lhydrogne
ou le carbone, par exemple. Lorbitale p restante formera une liaison pi () avec un
autre carbone hybrid sp2.
Spectre lectromagntique: cest la rgion dnergie lectromagntique o les
longueurs donde vont de 105 (ondes radio) 10-14 (rayonnement gamma). Entre ces
deux extrmes se trouvent les rgions de linfrarouge, du visible, de lultraviolet et
des rayons X.
Fluorescence: La fluorescence a lieu lorsquun lectron ltat excit qui se trouve
dans un tat excit, transite vers ltat fondamental. Cette transition saccompagne
dune perte dnergie qui se produit en premier lieu par perte de chaleur travers la
relaxation vibrationnelle et ensuite par mission de lumire (fluorescence) lors du
retour ltat fondamental
HOMO: acronyme pour Highest Occupied Molecular Orbital ; lorbitale de plus
haute nergie quoccupe un lectron dans la molcule au zro absolu.
LUMO: acronyme pour Lowest Unoccupied Molecular Orbital ; lorbitale de plus
basse nergie inoccupe par un lectron dans la molcule au zro absolu
Coefficient dabsorption molaire: cest une mesure de la quantit de radiation absorbe par unit de concentration dchantillon dont lquation peut tre rarrange
pour donner: = A/cl (loi de Beer-Lambert). Cette valeur est constante pour une
substance donne.
Orbitales molculaires: orbitales qui rsultent de linteraction des orbitales atomiques lorsque des liaisons chimiques sont formes. Les orbitales liantes sont de
moindre nergie que les orbitales atomiques dorigine, les orbitales anti-liantes sont
de plus haute nergie et les non-liantes sont dnergie gale.
Spectroscopie: cest la mthode o des donnes sont produites et analyses permettant la dtermination de structures de molcules.
Transmittance: La quantit de rayonnement qui passe travers un chantillon, cest-dire qui nest pas absorbe par ce dernier. On obtient le pourcentage de transmission
(transmittance) en multipliant par 100 la valeur du quotient du rapport de la quantit
dnergie mise sur la quantit dnergie passant travers lchantillon.
Rgion de lultraviolet: cest la rgion du spectre lectromagntique denviron 400
10 nm. Elle est spare en trois sous-domaines: les UV proches (400 300 nm), les
UV loigns (300 200 nm) et les UV extrmes (exploits dans le vide uniquement,
moins de 200 nm). Ces derniers sont appels UV extrmes ou exploits dans le vide
(sous vide), car leur radiation est absorbe par loxygne. Cela signifie que si lon
dsire utiliser les UV extrmes, lappareil doit tre mis sous vide.
Rgion du visible: la rgion du spectre lectromagntique de 700 400 nm laquelle
lil humain est sensible et peut voir la lumire blanche et les couleurs.
Longueur donde: cest la mesure des ondes de pic pic. Par exemple, les ondes radio
ont des longueurs donde pouvant aller jusqu 10 km alors que les rayons gamme
possdent des longueurs donde aussi courtes que 10-14m (0,00000000000001m).
Spectromtrie de masse : cest la technique dans laquelle un instrument est employ
pour produire des ions partir datomes ou de molcules (la source). Ces ions sont
spars selon la valeur du quotient du rapport de leur masse sur leur charge (m/z)
(lanalyseur) et ensuite, dtects.
Double focus: une combinaison de champs lectrostatique et magntique qui est
utilise pour compenser les variations dans les nergies des ions forms dans la source
et ainsi, amliorer la rsolution (qv) de lanalyseur (voir aussi systmes gomtrie
normale/ conventionnelle et inverse).
Tension dacclration: potentiel appliqu la source pour acclrer le mouvement
des ions lintrieur de lanalyseur.
Unit de masse atomique unifie : lunit de masse atomique est le 1/12 me de
la masse dun atome de carbone 12 ( 1 u.m.a = 1,66.10-24 g = 1,66.10-27 kg). . m/z
est le rapport de la masse sur la charge de lion dtect. Z est souvent gal 1, mais
peut tre un nombre entier plus grand, particulirement en spectroscopie de masse
ionisation par lectron-bullisation (ESI-MS).
Ion molculaire: dsigne lion form partir de la molcule dorigine lintrieur
de la source.
Radical ion: cest un ion possdant un lectron non appari.
Masse moyenne ou relative (Mr): cest la masse dune particule ou molcule de

formule empirique donne, calcule en utilisant la masse atomique pour chaque
lment.
Masse exacte: les isotopes ont une masse prcise et unique, cela a pour consquence
que la composition en lments de toute molcule, ou fragment de molcule, peut tre
calcule partir de sa masse si elle est dtermine de faon suffisamment prcise.
Trucs dapprentissage
Le matriel pdagogique contenu dans ce module est prsent en ordre croissant de
complexit, du dbut la fin de chaque unit. Cest pourquoi il est suggr dtudier
chaque unit du dbut jusqu la fin, dans lordre de prsentation. Il est galement
conseill lapprenant de sen tenir au nombre dheures propos pour chaque
unit.
Quatre ressources majeures sont proposes pour ce module: le module lui-mme, les
rfrences en ligne, les livres de rfrence et lvaluation formative.
Lapprenant devrait utiliser le matriel contenu dans ce module en tant que premier
outil dapprentissage et parcourir lunit intgralement avant de se rfrer aux livres
de rfrence et linternet.
Les ressources en ligne sont indiques dans le corps du texte du module partout o
il serait bnfique ltudiant de les consulter.
Lvaluation formative est incluse dans le module afin daugmenter la comprhension
des concepts-cls et de renforcer les comptences. Les apprenants devraient tenter de
faire les valuations ds la fin de la section et les utiliser comme une pratique.
Lvaluation sommative examine la comprhension des concepts et value ce que
lapprenant a retenu dune unit donne.
XI. Lectures obligatoires

Rfrence 1
Titre : Spectrometric Methods of identification of organic Compounds
Auteurs : Robert M. Silverstein, Francis X. Webster et David J. Kiemle
diteur : Wiley; 7e dition, 2005
Rsum : Ce livre prsente une introduction approfondie sur les trois types de
spectroscopie les plus couramment utiliss pour lidentification spectromtrique de
composs: spectromtrie de masse, spectromtrie infrarouge et spectromtrie de
rsonance magntique nuclaire. Louvrage utilise une approche de rsolution de
problmes avec chartres et tableaux de rfrence complets et offre une gamme de
problmes ralistes mettant au dfi les chimistes dans lexercice de leur profession.
Justification : Lintention de cette rfrence est de donner aux tudiants lopportunit
dacqurir des comptences pratiques dinterprtation de spectres. Il est conseill
lapprenant dutiliser ce livre pour les questions pratiques et pour mieux matriser
les techniques. En essayant de rsoudre deux trois problmes sur chacune des
techniques, il est possible datteindre une matrise satisfaisante des techniques de
spectroscopie. Ce livre constitue une rfrence majeure concernant la spectroscopie
UV, IR, RMN et la spectromtrie de masse.
Rfrence 2
Titre : Principles of Instrumental Analysis
Auteurs : Douglas A. Skoog, F. James Holler et Stanley R. Crouch
diteur : Brooks Cole, 6e dition, 2006
Rsum : Ce livre met laccent sur la thorie de base de chacun des types dinstruments et de leur principal champ dapplication ou dutilisation, ainsi que de leur
sensibilit, leur prcision et leurs limites.
Justification : Cette rfrence couvre tous les aspects du module de manire trs
simplifie, mais reste tout de mme la rfrence principale en matire de techniques
lectro-analytiques et chromatographiques.
Rfrence 3
Titre : The Essential Guide to Analytical Chemistry
Auteur : Georg Schewdt
diteur : John Wiley and Sons, 2e dition, 1997
Rsum: Ce livre est une suggestion de rfrence pratique pour ce module ; il contient
tous les lments du cours dans un format de poche facile lire. Son format unique
contenant des diagrammes colors, accompagns de textes concis le rend facile
consulter et permet de trouver rapidement linformation pertinente. En plus de bien
illustrer les procds et instruments, les diagrammes prsentent de faon claire et
schmatique des exemples de la vie courante de diverses applications au moyen de
simples spectres.
Justification : Ce livre est suggr en tant que rfrence complmentaire dans le but
de raffiner la comprhension du module pour les apprenants. Il ne devrait pas tre
utilis comme principale rfrence dapprentissage puisque les sujets ny sont pas
autant traits en profondeur que dans les rfrences 2 et 3.
XII. Liens utiles

Adresse : http://www.mhhe.com/physsci/chemistry/carey/student/olc/ch13ir.html
Rsum: Ce lien fait rfrence une partie dun vaste cours de chimie qui sapplique ce module. Toutefois, il nest ncessaire pour lapprenant de lire les chapitres
autres que le treize. Ce chapitre traite du contenu de ce module de faon simple et
facile comprendre. Cette rfrence apporte une approche alternative pour ltude
du module, comprenant des tutorats de concepts thoriques ainsi que des exemples
de problmes rsolus de diffrents spectres.
Justification: Les exemples de spectres fournis par cette rfrence procurent une
bonne pratique de rsolution de problmes associs au module et permettent une
meilleure comprhension des concepts.
Adresse : http://ull.chemistry.uakron.edu/analytical/Spectrophotometry/
Rsum : Ce site contient des notes rsumes sur les concepts tudis dans ce module.
Justification : Ce site est bien et peut aider lapprenant mmoriser les notions du
module et les concepts-cls.
Adresse: http://www.nd.edu/~smithgrp/structure/workbook.html
Rsum : Ce site contient un recueil de problmes de pratique.

Justification: Ces problmes sont utiles pour une meilleure matrise des concepts de
la spectroscopie molculaire et de la spectromtrie de masse.
Adresse : http://www.cem.msu.edu/~reusch/VirtualText/Spectrpy/spectro.htm#contnt
Rsum : Ce site contient un cours complet de chimie organique.

Justification : Lapproche utilise dans ce cours peut apporter une comprhension
plus en profondeur du contenu de ce module.
Adresse : http://www.chromatography-online.org/topics/gas/chromatography/detectors.
html
Rsum : Ce site est lun des sites sur la chromatographie les plus complets.
Justification: Sur ce site, les diffrents aspects sont traits avec plus de profondeur
que ce qui est requis pour le module, mais il peut tre utilis comme rfrence.
Adresse: http://www.cis.rit.edu/htbooks/nmr/bnmr.htm
Rsum : Ce site offre une bonne revue de la RMN du carbone 13 avec beaucoup
dexplications accompagnes dexemples de spectres.
Justification: Les objets dtude du module sont traits sur ce site moins en profondeur que ce qui est requis dans le module; il est donc conseill lapprenant de ne
lutiliser quen tant que rfrence.
Adresse: http://weather.nmsu.edu/Teaching_Material/soil698/Student_Reports/Spectroscopy/report.htm
Rsum : Ceci est un rapport dun tudiant sur la spectroscopie dabsorption atomique (SAA). Justification: Cette page prsente la spectroscopie atomique dans une
forme simplifie.
Adresse: http://www.chemguide.co.uk/index.html#top
Rsum : Ce site sadressait originalement aux tudiants du niveau A de chimie du

Royaume-Uni. Il a cependant t approfondi et englobe maintenant les objets dtude
des niveaux A, IB, Scottish Advanced Higher et Cambridge International. En fait, ce
site est utilis par les personnes (ges de 16 18 ans environ) suivant lquivalent de
ces cours travers le monde et par les tudiants dbutant leurs cours universitaires.
Justification : Ce site contient des explications trs simplifies des objets concerns
par ce module.
XIII. Ressources multimdias

http://www.colby.edu/chemistry/NMR/H1pred.html
Rsum : Une bonne slection dapplications servant interprter les spectres IR, de
RMN et de masse, ralise par le Colby College, dans ltat du Maine (USA).
Justification : Ce site offre plusieurs outils multimdias pour le renforcement de
lapprentissage de cette unit.
http://www.shsu.edu/~chemistry/primers/primers.html
Rsum : Ce lien prsente un vaste recueil de ressources multimdias concernant

tous les thmes couvert par ce module.
Justification : Ce site devrait tre utilis comme une source de rfrences multimdias.
XIV. Activits dapprentissage

Unit I
Procds de sparation et techniques de chromatographie
Rsum de lactivit dapprentissage


Rintgrer les mthodes de sparation enseignes lcole

Expliquer les principes de base de lextraction au solvant
Rsoudre des problmes numriques hypothtiques concernant lextraction
au solvant
Nommer et dessiner les appareils utiliss pour lextraction au solvant
Nommer les techniques courantes de chromatographie sur colonne et chromatographie planaire.
Expliquer la thorie sous-tendant chacune des techniques de chromatographie
planaire et sur colonne
Rappeler lquipement ncessaire pour la chromatographie planaire et sur
colonne
Liste des lectures obligatoires

Procds de sparation
http://en.wikipedia.org/wiki/Separation_process
http://en.wikipedia.org/wiki/Distillation#Laboratory_scale_distillation
http://en.wikipedia.org/wiki/Liquid-liquid_extraction
http://en.wikipedia.org/wiki/Separating_funnel
http://en.wikipedia.org/wiki/Distillation
Chromatographie
http://en.wikipedia.org/wiki/HPLC
http://en.wikipedia.org/wiki/Chromatography
http://hplc.chem.shu.edu/HPLC/index.html
http://www.waters.com/watersdivision/ContentD.asp?watersit=JDRS-5LTGBH
http://www.chemguide.co.uk/analysis/chromatography/hplc.html
http://www.chemguide.co.uk/analysis/chromatography/column.html#top
Liste de liens utiles pertinents

http://www.chromatography-online.org/Principles/Introduction/rs1.html
http://antoine.frostburg.edu/chem/senese/101/matter/chromatography.shtml
http://www.chemguide.co.uk/analysis/chromatogrmenu.html#top
http://www.chemguide.co.uk/analysis/chromatography/thinlayer.html#top
http://www.rpi.edu/dept/chem-eng/Biotech-Environ/CHROMO/be_types.htm
http://www.forumsci.co.il/HPLC/modes/modes3.htm
http://www.chem.ubc.ca/courseware/121/tutorials/exp3A/columnchrom/
http://teaching.shu.ac.uk/hwb/chemistry/tutorials/chrom/gaschrm2.htm
Procds de sparation
Extraction au solvant
Lextraction liquide-liquide, aussi connue sous le nom dextraction au solvant (ou
plus rarement, extraction par partage), est une mthode de sparation des composs base sur leur solubilit relative dans deux liquides diffrents non-miscibles,
habituellement leau et un solvant organique. Cest une extraction dune substance
dune phase liquide dans une autre phase liquide. Dans cette mthode, une solution
(gnralement aqueuse) contenant un ou des solut(s) est mise en contact avec un
solvant (gnralement organique) dans le but de transfrer un solut (ou plus) de la
solution aqueuse vers le solvant. Le mlange est agit vigoureusement afin daugmenter lentre en contact des particules de la solution avec celles du solvant, on utilise
gnralement une ampoule dcantation pour cette opration. Lappareil est ensuite
laiss au repos afin de permettre aux deux phases de se sparer.
Coefficient de partage
Le coefficient de partage ou de distribution (K) est le rapport des concentrations
dun compos (ou solut) dans les deux phases dun mlange de deux solvants nonmiscibles lquilibre. Ce coefficient est une mesure de la diffrence de solubilit
du compos entre les deux solvants prsents.
Normalement, un des solvants choisis est leau (ou une solution aqueuse), et le second est un solvant organique (donc hydrophobe), comme loctanol, par exemple.
Ainsi, les coefficients de partage et de distribution sont en quelque sorte une mesure
de lhydrophilie (affinit ave leau) ou de lhydrophobie (incompatibilit avec leau)
dune substance chimique.
Facteurs influenant lextraction au solvant
La polarit du solut et la polarit du solvant: en gnral, les composs polaires
seront dissous dans les solvants polaires et les soluts non-polaires se retrouveront
dans le solvant organique, moins que celui-ci ne contienne un nombre suffisant de
groupes fonctionnels hydrophiles tels que les groupements hydroxyles ou sulfoniques.
Gnralement, on ne pourra extraire les composs ioniques laide dun liquide organique. Ceux-ci pourront tre extraits en les faisant ragir avec des agents chlatants
(ou complexants) afin de former de grosses entits non-polaires.
Distillation
Les distillations opres lchelle du laboratoire sont presque exclusivement des
distillations discontinues, cest--dire que lon distille compltement le mlange en
ses composs avant de recharger lappareil avec le mme mlange, et lon rpte le
processus. Lappareil utilis, souvent appel distillerie, est minimal est consiste en
une sorte de bouilloire, un bouilleur, dans lequel le liquide de dpart est chauff; un
condensateur (ou rfrigrant) dans lequel la vapeur est refroidie et revient ltat
liquide; puis un rceptacle o le liquide purifi concentr (appel distillat) est recueilli.
Il existe plusieurs techniques pour la distillation en laboratoire.
Distillation simple
Dans la distillation simple, toutes les vapeurs chaudes produites sont immdiatement
canalises dans le condensateur qui refroidit et condense les vapeurs. Par contre, le
distillat ne sera pas pur ; sa composition sera identique la composition de la vapeur
une temprature et une pression donnes, et peut tre dtermine par la loi de
Raoult.
La distillation simple est donc utilise uniquement pour sparer des liquides dont
les points dbullition diffrent significativement (dau moins 25C selon la recommandation) ou encore pour sparer des liquides davec des solides non volatiles ou
des huiles. Dans ces cas, les pressions de vapeur des composants sont gnralement
suffisamment diffrentes pour que lon puisse ngliger les effets relatifs la loi de
Raoult, ceci tant attribuable au fait que les composantes non volatiles contribuent
peu la vapeur. Toujours dans ce cas et selon lutilisation vise, le distillat obtenu
pourrait tre suffisamment pur.
Distillation fractionne
Dans plusieurs cas, les points dbullition des composantes du mlange seront trop
proches lun de lautre. On doit alors utiliser la distillation fractionne afin de sparer
adquatement les composs. Ceci se fera laide de cycles rpts de vaporisationcondensation lintrieur dune colonne Vigreux.
Figure 1 : Appareil de distillation fractionne. (Schma modifi)

Rfrence: http://en.wikipedia.org/wiki/Fractional_distillation
Comment la distillation fractionne fonctionne-t-elle ?
mesure que la solution purifier est chauffe, la vapeur slve dans la colonne de
fractionnement. Lors de llvation de la vapeur, celle-ci se refroidit, se condensant
sur les parois du rfrigrant et la surface du matriau de garnissage. Ici, le condensat
continue tre chauff par les vapeurs chaudes qui slvent, et il se vaporise une
fois de plus. La composition des nouvelles vapeurs est toutefois dtermine par la
loi de Raoult. Chaque cycle de vaporisation-condensation (appel plateau thorique)
donnera une plus pure solution du compos le plus volatile. En ralit, chaque cycle
une temprature donne na pas lieu la mme position exactement dans la colonne
fractionner, le plateau thorique est donc plus un concept quune ralit concrte.
Plus on augmente le nombre de plateaux thoriques, meilleure est la sparation. Le
garnissage se trouvant lintrieur de la colonne de fractionnement a cette utilit. Il
est souvent constitu dun systme danneaux vrills, faits de tflon ou de mtal, ce
afin daugmenter la surface de contact entre la vapeur et le condensat liquide. Ceci
amliore les changes entre les phases pour un volume de colonne donn et permet
ainsi daugmenter le nombre de plateaux thoriques.
Hydrodistillation ou Entranement la vapeur
Figure 2 : Hydrodistillation. Rfrence: http://en.wikipedia.org/wiki/Steam_distillation (dernier accs en mars 2008).(Schma modifi)

Comment lhydrodistillation fonctionne-t-elle ?
Lhydrodistillation, aussi appele entranement la vapeur, est une mthode servant
distiller des composs sensibles la chaleur. Ce procd implique lutilisation de
vapeur surchauffe (ou vapeur vive) qui sera injecte dans le liquide brut (le liquide
organique distiller). Selon la loi de Raoult, certains des composs cibls vont
svaporer, en accord avec leur pression partielle. Le mlange de vapeur est refroidi
et condens, et gnralement on obtiendra une couche huileuse ou organique ainsi
quune couche aqueuse.
Distillation sous pression rduite
Figure 3 : Appareil de distillation sous pression rduite

Certains composs ont de trs hauts points dbullition. Pour amener ces composs au
point dbullition, il est souvent prfrable de rduire la pression plutt que daugmenter la temprature. Une fois la pression abaisse la pression de vapeur du compos
( une temprature donne), lbullition ainsi que le reste du processus de distillation
peut dbuter. Cette technique fait rfrence la distillation sous pression rduite et
ce procd est souvent opr en laboratoire laide dun vaporateur rotatif.
La distillation sous pression rduite est utile pour les mlanges qui ont un point
dbullition plus leve que leur temprature de dcomposition la pression atmosphrique et qui se dcomposeraient si lon tente de les amener bullition sans avoir
au pralable abaiss la pression.
Chromatographie
Thorie sur la chromatographie
La chromatographie est un procd de sparation bas sur les diffrences daffinit
des substances analyser lgard de deux phases, une phase stationnaire et une
phase mobile.
Ces composantes contenues dans la phase stationnaire sont retenues plus longtemps
dans le systme que celles qui sont distribues slectivement dans la phase mobile.
En consquence, les soluts sont lus du systme diffrents temps, selon lordre
croissant de leurs coefficients de distribution dpendamment de la phase stationnaire ;
cest de cette faon que la sparation saccomplit.
Les chantillons peuvent tre de nature gazeuse, liquide ou solide et peuvent varier
de simple mlange de deux nantiomres mlange complexe contenant plusieurs
substances chimiques de types trs diffrents. Qui plus est, lanalyse peut tre faite
moyennant des cots trs levs et une instrumentation complexe ou encore trs
simplement sur une plaque de couche mince trs peu coteuse. La chromatographie
constitue le fondement dun trs grand nombre de techniques analytiques. Cette
partie du module prsente les techniques chromatographiques les plus courantes et
leurs applications.
Le processus dentranement
Lentranement (ou dveloppement du chromatogramme) est le terme utilis pour
dcrire la faon dont les composantes dun mlange sont spares durant le procd
chromatographique. Il y a trois mthodes de base : le dveloppement frontal, le
dveloppement par dplacement, et llution. La plupart des dveloppements chromatographiques analytiques se font par lution.
Processus dlution
Llution peut tre dcrite telle quune srie de processus dabsorption-extraction
continus partir du moment o lchantillon est inject ou dpos dans le systme
chromatographique jusquau temps o le solut en est extrait. Le processus dlution
est illustr dans la figure reprsente ci-dessous.
Figure 4 : Le processus dlution.

mesure que le solut pntre dans la phase mobile du systme chromatographique,
sa concentration saccrot et devient suprieure la limite requise (concentration
dquilibre) la le solut passe dans la phase stationnaire. Le solut commence immdiatement entrer dans la phase stationnaire. Le solut commence immdiatement
entrer dans la phase stationnaire. Puisque la quantit de phase mobile atteint la
phase stationnaire augmente rgulirement alors la concentration en solut de cette
dernire augmente jusqu atteindre la concentration dquilibre et commencera
dsorber, cest--dire retourner dans la phase mobile. De l, le solut sera entran
plus loin dans (ou sur) la phase stationnaire.
La phase mobile va continuellement faire progresser le profil de concentration du
solut dans la phase stationnaire, les concentrations dans les deux phases tant
constamment en relation. Ceci est illustr grossirement en figure 4.
Ce dplacement amne la concentration du solut de la phase mobile au devant du
pic (fig. 4) excder la concentration dquilibre requise dans la phase stationnaire.
En consquence, une bonne quantit de solut dans la partie avant du pic (voir figure
4) sort de la phase mobile et pntre continuellement la phase stationnaire, tentant
de rtablir lquilibre. larrire du pic (fig. 4), cest la raction inverse qui se produit: mesure que le profil de concentration de solut progresse, la concentration
de solut dans phase stationnaire larrire du pic devient en excs par rapport la
concentration lquilibre.
Une quantit de solut doit alors quitter la phase stationnaire et entrer dans la phase
mobile afin de rtablir lquilibre. Ainsi, le solut progresse travers le systme
chromatographique, suite lentre de solut dans la phase mobile larrire du
pic et son retour dans la phase stationnaire lavant du pic. Le solut est toutefois
toujours en transfert entre les deux phases travers le pic entier, tentant sans cesse
datteindre ou de maintenir lquilibre thermodynamique.
En rsum, la bande de solut progresse travers le systme chromatographique suite

un transfert net de solut de la phase mobile dans la phase stationnaire dans la moiti
avant du pic. Ce transfert net de solut est compens par le passage de solut de la
phase stationnaire jusqu la phase mobile dans la moiti arrire du pic.
Efficacit de la sparation chromatographique
La distribution des analytes (A) entre les phases peut tre dcrite de faon assez
simple. Un analyte (solut) est en quilibre entre les deux phases:
APhase mobile
APhase stationnaire
La constante dquilibre, K, est appel le coefficient de partage. Il se dfinit comme

tant le rapport de la concentration molaire de lanalyte dans la phase stationnaire
sur la concentration molaire de lanalyte dans la phase mobile.
Le temps entre linjection de lchantillon dans le systme et latteinte du dtecteur par
le pic danalyte est appel temps de rtention (tr). Chaque solut ou analyte contenu
dans lchantillon inject aura un temps de rtention diffrent. Le temps ncessaire
la phase mobile pour passer travers la colonne est appel temps mort (tm).
Figure 5 : Les concepts de temps de rtention et de temps mort

Une variable appele facteur de rtention (parfois appel facteur de capacit), k,
est souvent utilise pour dcrire le taux de migration dun analyte sur une colonne.
k varie avec la force dlution du solvant; quand celle-ci augmente, k diminue. Le
facteur de rtention de lanalyte A est dfini comme suit: kA = (t r tm) / tm
Les constantes t r et tm sont obtenues facilement partir du chromatogramme. Lorsque
le facteur de rtention dun analyte est infrieur 1, alors llution est si rapide que
la dtermination du temps de rtention est trs difficile. Les facteurs de rtention
levs (suprieurs 20), indiquent une lution trs longue. Idalement, le facteur de
rtention pour un analyte se situe entre 1 et 5.
La quantit , appele facteur de slectivit, dcrit la sparation de deux substances

(A et B) sur la colonne: = k B / k A
Lors du calcul de , lanalyte A lue plus rapidement que lanalyte B. Le facteur de
slectivit est toujours suprieur 1.
largissement des pics et efficacit de colonne
Pour une sparation optimale, lobtention de pics nets (effils) et symtriques est
ncessaire. Cela signifie que les causes de llargissement des pics doivent tre minimises le maximum possible.
Modle des plateaux thoriques en chromatographie
Le modle des plateaux thoriques suppose que la colonne chromatographique
contienne un grand nombre de niveaux distincts, on les appelle plateaux thoriques.
Les quilibrations de lchantillon spares entre les deux phases mobile et stationnaire
se produit sur ces plateaux. Lanalyte traverse la colonne par transfert de la phase
mobile lquilibre dun plateau lautre.
Figure 6 : Le concept des plateaux thoriques

Les plateaux de la colonne sont un concept thorique pour la mesure de lefficacit
de la colonne, soit en tablissant le nombre de plateaux dune colonne, N (plus il y
a de plateaux, mieux cest), ou la hauteur dun plateau (la hauteur quivalent un
plateau thorique, HEPT), (plus la hauteur est petite, mieux cest).
Si la longueur de la colonne est dfinie comme L, alors la HEPT est:
HEPT = L/N
Le nombre de plateaux thoriques rellement contenus dans une colonne peut tre
trouv en examinant le pic chromatographique aprs llution:
O w1/2 correspond la largeur du pic mi-hauteur.

Tel que suggr par lquation ci-dessus, les colonnes se comportent comme si leur
nombre de plateaux thoriques changeait en fonction des diffrents soluts dun
mlange.
Thorie dynamique de la chromatographie
Voici une description plus raliste du processus soprant lintrieur de la colonne
qui prend en compte le temps ncessaire au solut pour atteindre lquilibre entre
les phases mobile et stationnaire (contrairement au modle des plateaux thoriques
qui assume que larrive lquilibre est infiniment rapide). La forme du pic chromatographique rsultant est ainsi affecte par la rapidit dlution. La forme du pic
est galement influence par le fait que plusieurs chemins diffrents peuvent tre
emprunts par les molcules de solut lorsquelles progressent entre les particules
de la phase stationnaire. Si lon considre les nombreux phnomnes contribuant
llargissement des pics, on obtient lquation de Van Deemter pour la hauteur des
plateaux:

HETP = A + B / u + C u
O u est la vitesse moyenne de la phase mobile. A, B, et C sont trois facteurs qui

contribuent llargissement des pics ; ils sont expliqus ci-dessous.
A Diffusion dEddy ou diffusion turbulente
La phase mobile progresse dans la colonne remplie de phase stationnaire. Les molcules de solut prendront diffrents chemins au hasard travers les particules contenues
dans la phase stationnaire. Puisque les diffrents chemins emprunts seront de longueurs variables, cela occasionnera un largissement du pic chromatographique.
B Diffusion longitudinale
cause du flux chromatographique, la concentration de lanalyte est moindre sur les
bords de la colonne quen son centre, de mme que les particules au centre du flux
chromatographique progressent plus rapidement. Lanalyte diffuse du centre vers les
cts, ce qui cause un largissement du pic. Lorsque la vitesse de la phase mobile est
leve, alors lanalyte reste moins longtemps sur la colonne et cela diminue leffet
de diffusion longitudinale.
C - Rsistance au transfert de masse
Lanalyte prend un certain temps pour arriver lquilibre entre la phase mobile et la
phase stationnaire. Si la vitesse de la phase mobile est leve et que lanalyte a une
forte affinit pour la phase stationnaire, alors la phase mobile va se placer au devant
de lanalyte lintrieur de la phase stationnaire. Le pic chromatographique de cet
analyte sen trouvera largi. Plus la vitesse de la phase mobile est leve, moins
les molcules peuvent pntrer dans la phase stationnaire. Dans ce cas, lquilibre
nest pas favoris, la colonne devient moins performante et llargissement du pic
augmentera.
Courbe de Van Deemter

Voici un graphique illustrant la relation entre la hauteur du plateau thorique versus
la vitesse moyenne linaire de la phase mobile:
Figure 7 : Graphique de la Courbe de Van Deemter

Des courbes comme celles-ci sont dune grande utilit pour dterminer la vitesse
optimale de flux de la phase mobile.
Rsolution
Mme si le facteur de slectivit dcrit la sparation des centres des pics, il ne
tient pas compte de la largeur de ces pics. La mesure de la rsolution est une autre
mesure de la bonne sparation des pics. La rsolution de deux pics de soluts, A et
B, est dfinie ainsi:

La rsolution de ligne de base est atteinte lorsque R = 1,5.
Il est utile de faire le lien entre la rsolution, le nombre de plateaux thoriques de la
colonne, le facteur de slectivit et le facteur de rtention de deux soluts:

Afin dobtenir une haute rsolution, les trois variables doivent tre maximises. Une
augmentation de N (nombre de plateaux thoriques), en allongeant la colonne mne
une augmentation du temps de rtention et un largissement du pic qui nest pas
souhaitable. la place, afin daugmenter le nombre de plateaux thoriques, la hauteur
quivalente au plateau thorique (HEPT) peut tre rduite en diminuant la taille des
particules de la phase stationnaire.
On remarque souvent que, en contrlant le facteur de capacit k, la sparation peut

tre grandement amliore. Cela peut tre accompli en modifiant la temprature (en
chromatographie gazeuse), ou alors la composition de la phase mobile (en chromatographie liquide).
Le facteur de slectivit peut aussi tre manipul afin damliorer la sparation.
Lorsque est prs de 1, loptimisation de k et laugmentation de N ne sont pas
suffisantes pour lobtention dune bonne sparation en un temps raisonnable. Dans
ces cas, k est dabord optimis, et ensuite est augment par lune des procdures
suivantes:
-
-
-
-
Changer la composition de la phase mobile ;

Changer la temprature de la colonne ;
Changer la composition de la phase stationnaire ;
Utiliser des effets chimiques spciaux comme par exemple incorporer un
agent qui a la proprit de se complexer avec un des soluts dans la phase
stationnaire).
Types de techniques chromatographiques

Chromatographie planaire
La chromatographie planaire regroupe des techniques de sparation dans lesquelles
la phase stationnaire ou se retrouve sur une surface plane. La surface peut tre du
papier servant de phase stationnaire (chromatographie sur papier), ou une couche de
particules solides tendue sur un support tel quune plaque de verre (chromatographie
sur couche mince).
Chromatographie sur papier
La chromatographie sur papier est une technique impliquant le dpt dune petite
quantit de la solution-chantillon en un point situ sur la partie infrieure du papier
chromatographique. Le papier est plac dans une cuve scelle dont le fond est recouvert dune petite quantit de solvant,. mesure que le solvant monte sur le papier
par capillarit, il rencontre le dpt contenant lchantillon et celui-ci commence se
dplacer sur le support de papier avec le solvant. Les divers composs contenus dans
lchantillon vont migrer et parcourir des distances diffrentes selon quelles interagissent plus ou moins fortement avec le papier. La vitesse de migration est galement
influence par la solubilit des composs dans le solvant. Elle permet le calcul de la
valeur dune grandeur note Rf et, qui est gale au rapport de la distance parcourue
par lchantillon sur la distance parcourue par le solvant. Cette valeur calcule sera
compare aux valeurs de Rf de composs standards contenues dans un tableau afin
didentifier la substance inconnue contenue dans lchantillon dpos.
Chromatographie sur couche mince (CCM)

La chromatographie sur couche mince est semblable la chromatographie sur papier.
Toutefois, au lieu dutiliser une phase stationnaire de papier, on utilise une plaque
de verre ou de plastique enduite dune mince couche dadsorbant inerte, tel que le
gel de silice, dalumine ou de cellulose. Comparativement au papier, cette mthode
a lavantage de permettre des lutions plus rapides, de meilleures sparations, et le
choix entre diffrents adsorbants. Les diffrents composs contenus dans lchantillon
vont migrer et parcourir des diffrentes distances selon quils interagissent plus ou
moins fortement avec ladsorbant. Elle permet aussi de calculer une valeur de Rf qui
sera compare aux valeurs de Rf de composs standards contenues dans un tableau
afin didentifier la substance inconnue.
Figure 8 : Processus de sparation par chromatographie sur couche mince

(CCM). Rfrence: http://www.waters.com/watersdivision/ContentD.
asp?watersit=JDRS-5LTGBH
quipement ncessaire pour CCM et chromatographie sur papier

Prparation de la plaque
En CCM, une varit denduits (phase stationnaire) sont disponibles, mme si le gel
de silice est de loin le plus courant. Les couches minces de cellulose sont ralises
en tendant une mixture aqueuse de poudre de cellulose laide dun applicateur
commercial. Le mlange de cellulose est prpar en ajoutant environ 15g de poudre
dans 90ml deau distille et en agitant pendant environ 1 minute dans un mlangeur.
La poudre de cellulose utilise pour les CCM inorganiques provient dun type spcial de micro cristal. En chromatographie de partage, des couches minces prtes
lutilisation et prpares avec les adsorbants les plus courants sont disponibles sous
forme de plaques de verre ou de plastiques pr-enduites. Des feuilles de plastique
pr-enduites de cellulose (qui peuvent galement contenir un compos fluorescent
aidant la dtection des soluts aprs llution) sont sur le march et trs utiles pour
les CCM inorganiques puisquelles peuvent tre coupes au format dsir.
Dpt de lchantillon
La solution-chantillon dposer doit contenir entre 0,1 et 10 mg de cations par ml
et peut tre une substance neutre, ou acide mais dilue. Environ 1 l de solution est
dpos avec une micro-seringue ou micro-pipette prs de lune des extrmits de la
plaque (environ 1,5 2 cm du bas de la plaque) et sch lair. Il nest pas ncessaire
dquilibrer la plaque et le dveloppement (llution) peut commencer immdiatement
aprs que le dpt soit sec.
lution de la plaque
Le chromatogramme est habituellement obtenu par une technique ascendante dans
laquelle la plaque est immerge dans le solvant/luant (on devrait utiliser des solvants
redistills ou de grades chromatographie) une profondeur de 0,5 cm. La cuve ou
chambre est prfrablement tapisse de papiers filtres tremps dans lluant; cela a
pour effet de provoquer la saturation de la chambre en vapeur de solvant. Llution
se fait jusqu ce que le front dluant (front de migration) ait parcourue la distance
requise (gnralement 10 15 cm). La plaque est ensuite retire de la chambre et
le front de migration est immdiatement marqu dun trait laide dun crayon de
plomb.
Identification des analytes en CCM et en chromatographie sur papier
Les substances colores peuvent tre identifies directement sur la phase stationnaire
qui est blanche, alors que les composs incolores peuvent tre dtects en vaporisant
sur la plaque un ractif (rvlateur) appropri qui provoque la coloration des zones occupes par ces soluts. Certains composs sont fluorescents par irradiation de lumire
ultraviolette (UV) et peuvent tre reprs de cette faon. Une substance fluorescente
est parfois incorpore dans la phase stationnaire et permet ainsi lidentification de
certains composs (ceux qui ont absorption dans la rgion au-dessus de 230 nm);
le solut peut tre repr aprs llution comme un point sombre lorsquexpos la
lumire UV (lorsque cette mthode de dtection est utilise, lexprimentateur doit
porter des lunettes spciales afin de protger ses yeux des rayons UV). Les points
ou taches localiss ainsi peuvent tre marqus laide dune aiguille ou dun crayon
de plomb.
Chromatographie sur colonne
La chromatographie sur colonne est une technique de sparation dans laquelle la
phase (ou le lit) stationnaire est place lintrieur dun tube vertical.
La phase stationnaire consiste en de trs petites particules ou encore des particules
enduites dun liquide; dans chacun des cas les particules solides agissent comme support et sont places dans la colonne. Les particules de la phase stationnaire peuvent
emplir compltement lintrieur du tube (colonne remplie) ou tre concentres sur
la paroi intrieure du tube laissant un passage ouvert pour la phase mobile au centre
du tube (colonne tubulaire ouverte).
Chromatographie liquide
La chromatographie liquide (LC) est un type de chromatographie sur colonne dans
lequel la phase mobile est un liquide. LC peut tre opre laide dune colonne ou
sur une surface plane. Actuellement, la LC qui utilise gnralement de trs petites
particules de remplissage et une pression relativement haute est appele chromatographie liquide haute performance (CLHP, ou HPLC en anglais).
La CLHP est une technique analytique utilise pour la sparation et lidentification de
soluts organiques ou inorganiques dans divers mlanges, notamment des chantillons
biologiques, pharmaceutiques, alimentaires, provenant de lenvironnement, industriels, etc. Dans un tel processus de sparation, le liquide pntre la phase stationnaire
poreuse et lue les soluts par passage dans un dtecteur flux continu. La phase
stationnaire est gnralement sous forme de particules uniformes de petit diamtre
qui remplissent la colonne cylindrique. Une colonne typique est fabrique dans un
matriel rigide (tel que du plastique ou de lacier inoxydable) et est gnralement
longue de 5 30 cm, avec un diamtre interne de 1 9 mm environ.
Composantes dun systme CLHP
Figure 9: Les diffrentes composantes dun systme de chromatographie liquide

haute performance.
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-
-
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Le systme de distribution de solvant (ou dluant): pousse le flux de solvant

travers linstrument dbit constant.
Le systme dinjection de lchantillon: introduit lchantillon lintrieur
du flot de liquide dans linstrument.
La colonne: un tube dacier inoxydable rempli de billes de silicone qui sparent les soluts inconnus que lon cherche identifier (par exemple sparer la
cafine du sucre).
Le dtecteur: un capteur optique (gnralement) qui dtecte les changements
dans les caractristiques du flux de solvant.
Le systme de donnes: un moyen de contrler les composantes du systme
ainsi que dentreposer, traiter et prsenter les donnes recueillies.
Une pompe haute pression est requise pour forcer le passage de la phase mobile
travers la colonne un dbit de 0,1 2 ml par minute. Lchantillon sparer est
introduit dans la phase mobile par le dispositif dinjection. Celui-ci est manuel ou
automatique et est plac avant la colonne.
chelles de chromatographie :
La CLHP possde un grand nombre dapplications:
-
-
-
CLHP analytique: identification exacte et haute sensibilit

Semi-prparative: identification et obtention de petites quantits dun analyte
pur (quantit de lordre des grammes)
Prparative: obtention de grandes quantits danalytes purifis (haute capacit)
(de lordre des kilogrammes)
Modes de sparation en CLHP

La sparation danalytes peut soprer par diffrentes procdures ; chacun de ces
mcanismes donne lieu chacun des diffrents modes dapplication de la CLHP.
Chromatographie en phase normale
La CLHP en phase normale spare les analytes en se basant sur la polarit. Cette
technique utilise une phase stationnaire polaire et une phase mobile non-polaire, et
est employe lorsque lanalyte en jeu est plutt de nature polaire. Lanalyte polaire
sassocie la phase stationnaire et est retenu par elle. La force dadsorption augmente
avec la polarit, et linteraction entre lanalyte polaire et la phase stationnaire, aussi
polaire, augmente le temps dlution (relativement la phase mobile).
Chromatographie en phase inverse ou inverse
La CLHP en phase inverse (en anglais: RP-HPLC) consiste en une phase stationnaire
non-polaire et une phase mobile aqueuse, modrment polaire. Une phase stationnaire
courante est une silice traite avec RMe2SiCl (dimthylchlorosilane), o R reprsente un groupement alkyle tel que C18H37 ou C8H17 . Le temps de rtention est
par consquent plus long pour les molcules non polaires, celles-ci permettant aux
molcules polaires de sluer plus facilement. Le temps de rtention est augment
par lajout de solvant polaire la phase mobile et raccourci par lajout dun solvant
plus hydrophobe.
Chromatographie dexclusion strique
La chromatographie dexclusion strique, aussi connue sous le nom de chromatographie permation de gel ou chromatographie de filtration sur gel, spare les molcules
sur la base de leur taille (volume). Cest gnralement une chromatographie de basse
rsolution. Elle est ainsi souvent rserve pour ltape finale de perfectionnement de
la purification. De plus, cette technique est utile pour la dtermination de la structure
tertiaire et quaternaire de protines purifies; elle est aussi la technique de base pour la
dtermination du poids molculaire moyen de polymres naturels et synthtiques.
Chromatographie dchange dions ou changeuse dions
En chromatographie dchange dions, la rtention est base sur laffinit entre les
ions du solut et les sites chargs qui se trouvent sur la phase stationnaire. Les ions
de mme charge que ceux situs sur cette phase stationnaire sont exclus. Certains
types dchangeurs dions comprennent:
1. les rsines polystyrnes: permettent les liaisons covalentes qui augmentent
la stabilit de la chane. Plus de liaisons rduit les dviations et augmente le
temps datteinte de lquilibre, et ventuellement amliore la slectivit.
2. les changeurs dions de cellulose et de dextrine (gels): ils possdent des pores
de taille plus grande et une faible densit de charges et sont ainsi appropris
pour la sparation de protines.
3. les changeurs dions de verre pore contrl ou de silice poreuse.
Chromatographie de bio-affinit
Ce procd chromatographique repose sur la proprit de certaines substances qui
prsente une affinit biologique (bio-affinit) pour dautres composs (par exemple
ceux de lchantillon) et forment avec eux des complexes stables, spcifiques et rversibles. La formation de ces complexes fait intervenir des interactions telles que:
les forces de Van der Waal ; les interactions lectrostatiques, diple-diple, hydrophobes ainsi que les liaisons hydrognes. Une liaison efficace et bio-spcifique se
forme par une action simultane et concerte de plusieurs de ces forces aux sites de
liaisons complmentaires.
Exercices formatifs sur la chromatographie liquide et la CLHP
i) Nommez les principales composantes de la CLHP.
ii) Citez trois modes de CLHP.
iii) Nommez les diffrentes chelles en CHLP et un exemple de leur
application.
La chromatographie en phase gazeuse (CPG), aussi parfois appele chromatographie
gaz-liquide, est une technique de sparation dans laquelle la phase mobile est un gaz.
Cette technique est toujours opre en colonne, laquelle est normalement de type
remplie ou de type capillaire.
La CPG est base sur un principe dquilibre de partage de lanalyte entre une phase
stationnaire solide (souvent un matriel base de silicone liquide) une phase mobile
gazeuse (le plus souvent de lhlium ou de lazote). La phase stationnaire est fixe
lintrieur dun tube de verre de petit diamtre (colonne capillaire) ou une matrice
solide lintrieur de tube de mtal plus large (colonne remplie). Les hautes tempratures utilises en CPG la rendent inapproprie pour la sparation des protines ou
de biopolymres de hauts poids molculaires.
Instrumentation de la chromatographie en phase gazeuse
Figure 10 : Composantes du systme chromatographie en phase gazeuse
Un systme typique de chromatographie en phase gazeuse est form de six composantes majeures qui sont explicits ci-dessous:
Gaz porteur ou gaz vecteur
Le gaz porteur doit tre chimiquement inerte. Les gaz couramment utiliss sont lazote,
lhlium, largon et le dioxyde de carbone. Le choix du gaz porteur est souvent impos
par le type de dtecteur utilis. Le systme de gaz porteur contient des dispositifs qui
purifient le gaz en en retirant lhumidit et le dioxygne.
Injecteur
Pour une efficacit optimale de la colonne, la quantit dchantillon ne devrait pas tre
trop grande et devrait tre introduite dans la colonne la manire dun jet de vapeur
(une injection lente de gros chantillons cause llargissement de pic et la perte de
rsolution). La mthode dinjection la plus commune est la suivante ; on utilise une
micro-seringue pour injecter lchantillon travers le septum de caoutchouc, dans le
chambre dinjection se trouvant la tte de la colonne. La temprature de la chambre
dinjectiono est inject lchantillon est gnralement plus leve denviron 50 que
la temprature dbullition du compos le moins volatile contenu dans lchantillon.
Pour les colonnes remplies, les formats dchantillons varient du dixime de microlitre
jusqu 20 l. Les colonnes capillaires, quant elles, ncessitent beaucoup moins de
quantit dchantillon, gnralement autour de 0,1 3 l.
Colonnes
Il existe deux types de colonnes ; remplie et capillaire (ou tubulaire). Les colonnes
remplies contiennent un support (habituellement fait la base de terre de diatomes)
inerte et finement divis, et sur lequel est imprgne la phase stationnaire liquide.
La plupart des colonnes remplies sont longues de 1,5 10 mtres et possdent un
diamtre de 2 4 mm.
Les colonnes capillaires ont un diamtre interne de quelques diximes de millimtre.
On peut retrouver les types suivants: colonne tubulaire ouverte paroi tapisse (wallcoated open tubular, WCOT) ou colonne ouverte capillaire o la paroi est recouverte
dun matriau support (support-coated open tubular, SCOT). Les colonnes paroi
tapisse consistent en un tube capillaire ayant ses parois recouvertes dune couche
de phase stationnaire liquide. Dans les colonnes matriau support, la paroi interne
du capillaire est recouverte dun mince film du matriau support en question, tel que
la terre de diatomes, sur lequel la phase stationnaire a t adsorbe. Les colonnes
SCOT sont gnralement moins efficaces que les colonnes WCOT. Ces deux derniers
types sont toutefois plus efficaces que les colonnes remplies.
Four pour colonnes
Pour obtenir des rsultats reproductibles, la temprature des colonnes doit tre contrle et maintenue dans des intervalles de lordre des diximes de degrs. La temprature
optimale de colonne est impose par la temprature dbullition de lchantillon.
Afin de maintenir une temprature reproductible, la colonne chromatographique est
conserve dans un four pouvant tre rgl diffrentes tempratures.
Dtecteurs
Plusieurs types de dtecteurs sont utiliss en chromatographie. Des dtecteurs diffrents ont des slectivits diffrentes. Un dtecteur non-slectif ragit tous les
composs except le gaz porteur. Un dtecteur slectif ragit une gamme de composs ayant en commun une proprit physique ou chimique, alors quun dtecteur
spcifique ragira un seul compos chimique. Les dtecteurs peuvent galement tre
regroups en deux principaux ensembles: les dtecteurs dpendant de la concentration et ceux dpendant du dbit massique. La forme du signal donn par un dtecteur
dpendant de la concentration est lie la concentration du solut dans le dtecteur.
Ceci naffecte gnralement pas lchantillon. La dilution de lchantillon par les
gaz auxiliaires/dappoint rduira la rponse du dtecteur. Les dtecteurs dpendants
du dbit massique vont habituellement dtruire lchantillon lors de la dtection. Le
signal reu est li au taux auquel les molcules de solut entrent dans le dtecteur. La
rponse de ce type de dtecteur nest pas affecte par les gaz auxiliaires.
Gaz auxiliaires/
Slectivit
Sensibilit
dappoint
La plupart
Ionisation flamme
Dbit massique Hydrogne, air des composs 100 pg
(FID)
organiques.
Halognures,
nitrates, nitriles,
Capture dlectrons
peroxydes,
Concentration Gaz auxiliaires
50 fg
(ECD)
anhydrides,
organomtalliques.
Thermo-ionisation
Azote, phos(TID) ou Dtecteur Dbit massique Hydrogne, air
10 pg
phore.
azote-phosphore
Soufre, phosphore, tain,
Hydrogne, air,
bore, arsenic,
Photomtrique (FPD) Dbit massique possiblement
100 pg
germanium,
oxygne
slnium,
chrome
Composs
aliphatiques,
aromatiques,
ctones, esters,
Photo-ionisation
Gaz auxiliaires aldhydes, amiConcentration
2 pg
(PID)
nes, htrocycliques, sulfures
organiques,
quelques organomtalliques.
Dtecteur
Type
Gamme dynamique de rponse

107
105
106
103
107
Systme de contrle des donnes

La chromatographie en phase gazeuse moderne utilise des interfaces logicielles
programmables et des systmes ordins afin de contrler les paramtres des chromatographes tels que le dbit gazeux, ainsi que la temprature du four qui est contrl
par un programme informatique. Les donnes gnres sont collectes et stockes
laide dordinateurs.
La chromatographie en phase gazeuse nest strictement quun ensemble dinstruments analytiques pour lidentification et la quantification de composs chimiques
gazeux.
Applications qualitative et quantitative de la CPG
cause des complexits des interactions entre les analytes et la colonne, chaque
analyte est lu un temps unique, appel temps de rtention (tr). Si deux analytes
sluent en mme temps sur un chromatogramme, cest probablement parce quil
sagit du mme compos. On peut obtenir une confirmation en analysant les deux
analytes en utilisant diffrentes colonnes et dans des conditions diffrentes; si les
deux sluent au mme moment sous toutes les conditions testes, il sagit alors dune
seule et mme substance.
Le signal produit par le dtecteur est gnralement li la quantit danalyte, que
ce soit un dtecteur soit dpendant du dbit massique ou de la concentration. La
concentration de lanalyte dans un chantillon inconnu est obtenue en dterminant
la rponse du dtecteur une srie de solutions standards de concentrations connues,
que lon met en graphique, sous forme de droite (courbe standard). La concentration
de linconnu peut alors tre calcule laide de ce graphique.
valuation formative
1) i) Citez les principales composantes des chromatographes en phase gazeuse
ii) Citez deux types de colonnes en CPG
iii) Citez les gaz porteurs les plus courants et indiquez une proprit chimiques
commune aux gaz porteurs
iv) Citez un type dchantillon non analys en CPG et expliquez pourquoi.
v) Expliquez clairement ce quest un dtecteur slectif.
2) Pour une sparation chromatographique typique donnant des pics nets (rsolution
ligne de base = 1,5), assumez que N = 3600, k = 2, and a = 1.15. Indiquez les
effets obtenus si lon change un de ces paramtres.
a) N = 1600
b) k = 0,8
c) a = 1,10
3) Afin de rduire la hauteur des plateaux thoriques et damliorer la rsolution,
quels moyens peut-on employer ? Quels sont les inconvnients de chaque mthode ?
4) Les facteurs de rponse relatifs pour le p-dichlorobenzne et le p-xylne (relativement la valeur du benzne, assigne 1) ont t dtermins 0.624 0.034
and 0.917 0.018, respectivement. Aprs intgration des pics, les rsultats du
tableau ci-dessous ont t obtenus. Calculez le pourcentage de chacun de ces
gaz dans la composition de chaque chantillon.
chantillon
1
2
Surface du pic
Benzne
4592
512
p-xylne
2984
3527
Tolune
1238
5495
Unit II
Techniques lectro-analytiques

Rappeler la thorie sur laquelle se base la potentiomtrie

Expliquer les applications de la potentiomtrie la mesure de pH, aux lectrodes slectives ioniques et aux stations de titrage automatique
Rintgrer la thorie sous-tendant la voltampromtrie
Interprter qualitativement et quantitativement des donnes voltampromtriques
Expliquer les concepts de base de lanalyse polarographique
Interprter des donnes polarographiques afin didentifier et de quantifier des
composs chimiques
Lectures obligatoires
http://en.wikipedia.org/wiki/Electroanalytical_methods
http://www.chem.vt.edu/chem-ed/echem/electroc.html
http://www.chem.vt.edu/chem-ed/echem/potentio.html
http://electrochem.cwru.edu/ed/encycl/art-a03-analytical.htm
http://ull.chemistry.uakron.edu/analytical/Voltammetry/
http://ull.chemistry.uakron.edu/analytical/index.html
Potentiomtrie
En potentiomtrie, le systme de mesure comporte toujours en deux lectrodes:
llectrode de mesure, aussi appele llectrode indicatrice, et llectrode de rfrence.
Chacune des lectrodes constitue la moiti de la cellule galvanique. Cest seulement
quand elles sont places ensemble dans une solution quelles produisent un certain
potentiel.
Le potentiel tel que dcrit ci-haut mesure lactivit des ions plus que leur concentration. Lactivit a de lion mesur, qui est aussi utilis dans lquation de Nernst,
est li la concentration analytique C laquelle on sintresse habituellement par le
coefficient dactivit :
a = C
Pour les solutions dilues des concentrations (cM) denviron 0,0001 mol/L, le
coefficient dactivit tend vers 1 et lactivit de lion est estime correspondre sa
concentration. est fonction du contenu total en lectrolyte. La relation mathmatique
entre lactivit (aM) de lion mesur dans une solution dions et le potentiel mesure
entre llectrode de rfrence et llectrode de mesure est dcrite par lquation de
Nernst ci-dessous:
E = o +

a
2.303 xRXT
Log oxid
ZXF
a re
O E0 est la diffrence de potentiel entre les deux lectrodes une activit de 1 sous
des conditions standards, R dsigne la constante universelle des gaz, T est la temprature absolue et F est la constante de Faraday.
Llectrode indicatrice contient habituellement une des formes de lion en jeu ou un
autre type dions qui la rend apte mesurer la forme de lion en jeu en solution.
En mesurant E, il est donc possible de mesurer la concentration de lanalyte en jeu.
lectrodes pH en verre
La couche de verre recouvrant llectrode pH en verre consiste en une structure
de silicate contenant des ions lithium. Quand la surface de verre est immerge dans
une solution aqueuse, une fine couche solvate (une couche de gel) se forme la
surface du verre dans laquelle la structure du verre devient moins dure. Ceci sapplique autant la paroi interne qu la paroi externe du verre. Comme la concentration
en ions hydrogne dans le tampon interne de llectrode est constante (pH = 7), un
tat stationnaire sinstalle sur la surface interne de la couche de verre. Au contraire,
si la concentration en ions hydrogne dans la solution mesurer change, alors un
change dions aura lieu la paroi solvate externe et causera une modification du
potentiel la surface du verre. Cest seulement quand cet change dions atteindra
lquilibre que le potentiel de llectrode de verre sera nouveau stable. Cela signifie
que le temps de rponse dune lectrode de verre dpend toujours de lpaisseur de
la couche solvate. Un contact continu avec la solution aqueuse cause lpaississement continuel de la couche solvate mme si cela se fait trs lentement, ce qui
causera des temps de rponse plus longs. Cela explique pourquoi le conditionnement
de llectrode dans un lectrolyte appropri est absolument ncessaire pour assurer
une couche solvate initiale la plus stable possible, afin dobtenir des rsultats aussi
reproductibles que possible.
Titrages potentiomtriques
Lors de titrages potentiomtriques, une lectrode sensible aux ions est utilise pour
suivre les changements de potentiel dans le rcipient de titrage. La cellule potentiomtrique, telle que dcrite ci-dessus est compose dune lectrode indicatrice et dune
lectrode de rfrence. Le titrant ajout la raction dans le rcipient de titrage ragit
avec lanalyte et le consume. Au point dquivalence, il y a un brusque et important
changement de potentiel qui indique la consommation totale de lanalyte.
La courbe du potentiel en fonction du volume de titrant montre une importante inflexion au point dquivalence (E versus volume).
Figure 11 : Courbes de potentiel en fonction du volume de titrant (gauche)

et courbe de la drive du potentiel dE/dV en fonction du temps.
Considrons par exemple le titrage de Fe2+ avec Ce4+:
Au dbut, la solution a seulement des ions Fe2+, et en ajoutant Ce4+, une petite quantit
de Fe3+ est forme, ainsi le potentiel augmente.
Plus lon ajoute dions Ce4+, plus le potentiel augmente jusqu ce que tout le Fe2+
soit consomm et E atteint une sorte de limite.
Stations de titrages potentiomtriques
Les stations de titrages sont des titrateurs lectroniques modernes, destins au titrage
de plusieurs ions. Dans une station de titrage, une seringue motorise lectroniquement contrle est utilise pour donner des volumes mesurs de titrant (V), alors que
llectrode sert mesurer le potentiel correspondant (E). Ces donnes sont automatiquement traduites en graphique pour dterminer le point dinflexion. Les stations de
titrages les plus sophistiques peuvent fournir les rsultats finaux dun titrage avec
la possibilit de garder en mmoire les donnes relatives E et V.
Voltampromtrie (ou voltammtrie)

La voltampromtrie rfre la mesure de courant rsultant de lapplication dune
diffrence de potentiel. Contrairement aux mesures potentiomtriques qui emploient
seulement deux lectrodes, les mesures voltampromtriques utilisent une cellule
lectrochimique trois lectrodes. Lusage de trois lectrodes (llectrode de travail,
la contre-lectrode et llectrode de rfrence) conjointement linstrument nomm
potentiostat, offre opportunits trs prcises pour lapplication de potentiel et la
mesure du courant rsultant.
Llectrode de travail est habituellement polarise, cest--dire que la concentration
des ions la surface de llectrode est diffrente de la concentration des ions en solution. Ainsi, la diffusion des ions de la solution jusqu llectrode de travail devient
un phnomne important. Le courant total I est quivalent : I = Im+ Id.
O Imest le courant de migration et Id dsigne le courant de diffusion.
Dans le but de maintenir un courant de migration constant, un autre lectrolyte est
ajout la solution. Ce deuxime lectrolyte est appel lectrolyte support ; le
chlorure de potassium est habituellement utilis (KCl).
Les diverses techniques voltampromtriques utilises se diffrencient les unes des
autres en premier lieu par le potentiel appliqu llectrode de travail pour conduire
la raction, et par le matriau utilis comme lectrode de travail. Les techniques
courantes qui seront discutes dans ce module sont les suivantes:

Polarographie
Polarographie impulsionnelle normale ou intgrale (PIN)
Polarographie impulsionnelle diffrentielle (PID)
Voltammtrie redissolution anodique
Polarographie
En polarographie, llectrode de travail consiste en une succession de gouttelettes de
mercure (tombant lentement dun tube capillaire) et est habituellement la cathode.
Lanode (contre-lectrode) est habituellement un bassin de mercure. Llectrolyte
dsigne la solution danalyte, lequel doit tre un matriau lectroactif, auquel on
ajoute un lectrolyte support en excs (gnralement le KCl). Ce type dlectrode
de travail est appel llectrode gouttes de mercure (EGM).
Figure 12 : lectrode gouttes de mercure.

Si lon impose un voltage lEGM, un courant total It circulera, lequel est compos
des courants suivants:

It = Id +Im +Ir
O Ir dsigne le courant rsiduel.

Un petit courant jaillira, caus par la charge capacitive des gouttes de mercure et les
impurets rductibles contenues dans llectrolyte support.
Courant de migration Im
Les substances lectroactives de la solution atteignent lEGM par deux mcanismes:
par migration et par diffusion. Si la concentration de llectrolyte support est leve,
plus de 100 fois plus importante que celle de lanalyte, alors tout le courant de migration sera port par llectrolyte support.
Id = 607nD1/2m2/3t1/6c
Avec lexcs dlectrolyte support, la substance lectroactive va atteindre lEGM par
diffusion. Lorsque le voltage appliqu lEGM est augment, le courant de diffusion
augmente jusqu ce quil atteigne une valeur limite: Id.
D est le coefficient de diffusion de lespce lectroactive, n est le nombre dlectrons

impliqus dans la raction lectrochimique, m est le dbit du mercure du capillaire (en
mg/s), t est le temps en secondes et c est la concentration de lespce lectroactive. Il
apparat clairement que le courant de diffusion est proportionnel la concentration
de lanalyte lectroactif.
Figure 13: Courant en fonction du voltage.

En appliquant un voltage de plus en plus lev lEGM, le courant change tel que
le montre le diagramme. Initialement, on ne trouve que le courant rsiduel, lequel
est stable et faible. En augmentant le voltage, on atteindra le point de potentiel de
rduction de lanalyte. L, le courant commence augmenter avec le voltage jusqu
latteinte du courant Id, ceci tant le point limite. E1/2 est appele le potentiel de demivague et identifie de faon unique la substance lectroactive dans lanalyte.
Il y a un certain nombre de limitations aux expriences polarographiques au niveau des
mesures analytiques quantitatives. Parce que le courant est mesur continuellement
pendant laccroissement de la goutte de mercure, il y a une contribution substantielle
du courant capacitif. Comme le mercure afflue du bout du tube capillaire, il y a initialement une grande augmentation de la surface de llectrode. En consquence, le
courant initial est domin par les effets de charge capacitive mesure que se charge la
surface, cette charge de la surface qui augmente rapidement. Jusqu la fin de la dure
de vie de la goutte, il y a un petit changement de surface qui diminue la contribution
des changements de capacitance au courant total. Au mme moment, tout processus
rdox qui surviendra rsultera en courant faradique qui dclinera approximativement
selon la racine carre du temps (caus par laugmentation des dimensions de la couche
de diffusion de Nernst). La dcroissance exponentielle du courant capacitif est bien
plus rapide que la dcroissance du courant faradique ; ainsi, le courant faradique st
plus grand la fin de la dure de vie de la goutte. Malheureusement, ce processus est
compliqu par le changement continuel de potentiel appliqu llectrode de travail
(lEGM) tout au long de lexprience.
En soi, le rapport typique signal/bruit de fond dune exprience polarographique

permet une limite de dtection de seulement 10-5 ou 10-6 M approximativement. Une
meilleure discrimination, dans le but de contrer le courant capacitif, peut tre obtenue
en utilisant les techniques de polarographie impulsionnelle.
Polarographie impulsionnelle
Les techniques de polarographie impulsionnelle sont des mesures voltampromtriques, qui sont des variantes des techniques de polarographie dcrites plus haut,
et qui tentent de minimiser le bruit de fond auquel contribue le courant capacitif en
liminant la rampe de potentiel qui varie continuellement et en la remplaant par une
srie de sauts de potentiels de courte dure.
Polarographie impulsionnelle normale (PIN)
En PIN, chaque saut de potentiel commence la mme valeur (un potentiel auquel
aucune lectrochimie faradique na lieu), et lamplitude de chaque saut subsquent
augmente par petits incrments. Lorsque la goutte de mercure se dtache du capillaire
(ceci se fait laide dun marteau lectromcanique des intervalles de temps prcis),
le potentiel est remis la valeur initiale en prparation dun nouveau saut.
Figure 14 : Forme de la vague de potentiel appliqu en polarographie impulsionnelle normale.
Pour cette exprience, le polarogramme est obtenu en mettant en relation dans un

graphique le courant mesur en fonction du potentiel chaque saut. Consquemment,
le courant nest pas mesur durant la croissance de la goutte de mercure, et le polarogramme impulsionnel normal a typiquement une forme sigmode. En utilisant des sauts
de potentiel discontinus la fin de la dure de vie de la goutte de mercure (la dure
du potentiel appliqu est habituellement celle des dernires 50 100 ms de la vie de
la goutte qui est denviron 2 4 secondes) lexprience polarographique a lieu un
potentiel constant appliqu une lectrode ayant une surface presque constante. Aprs
le saut initial de potentiel, le courant capacitif dcline exponentiellement tandis que
le courant faradique dcline selon la racine carre du temps. Le courant de diffusion
est mesur juste avant le dtachement de la goutte, ce qui permet de bien contrer le
bruit de fond occasionn par le courant capacitif. La polarographie impulsionnelle
normale augmente la sensibilit analytique dun trois ordres de magnitude (limites
de dtection de 10-7 10-8 M) relativement la polarographie traditionnelle.
La polarographie impulsionnelle diffrentielle est une technique polarographique
qui utilise aussi une srie de sauts de potentiels discontinus plutt quune rampe de
potentiel linaire et continue pour obtenir un polarogramme exprimental. Plusieurs
des paramtres exprimentaux sont les mmes que pour la polarographie impulsionnelle normale (comme par exemple la dure de vie prcise des gouttes de mercure,
la dure du saut de potentiel de 50 100 ms la fin de la dure de vie de la goutte).
Contrairement la polarographie impulsionnelle normale, toutefois, chaque saut de
potentiel a la mme amplitude, et aprs chaque impulsion le potentiel ne retourne
pas la valeur initiale, mais une valeur un peu plus leve que celle de limpulsion
prcdente.
Polarographie impulsionnelle diffrentielle
Figure 15 : Forme de la vague de potentiel appliqu en polarographie impulsionnelle diffrentielle.
De cette faon, la forme globale de la vague de potentiel applique lEGM ressemble plus une combinaison dune rampe linaire de potentiel superpose une
vague discontinue. Le polarogramme en polarographie impulsionnelle diffrentielle
est obtenu en mesurant le courant immdiatement avant le saut de potentiel, et aussi
juste avant la fin de la dure de vie de la goutte de mercure. Le courant analytique
dans ce cas se trouve tre la diffrence entre le courant la fin du saut de potentiel
et celui mesur avant le saut (courant diffrentiel). Ce courant diffrentiel est ensuite
mis en graphique en fonction du potentiel moyen (la moyenne du potentiel de saut
et du potentiel davant le saut) afin dobtenir le polarogramme impulsion diffrentielle. Parce que le courant est diffrentiel, le polarogramme ressemble en plusieurs
aspects la courbe sigmodale obtenue en polarographie impulsionnelle normale. En
consquence, le polarogramme impulsion diffrentielle est form de pics.
La polarographie impulsionnelle diffrentielle a une capacit encore meilleure pour
contrer le courant capacitif parce que cette technique mesure la diffrence de courant
(ce qui aide soustraire tout courant capacitif rsiduel quil pourrait rester avant
chaque saut). Les limites de dtections avec cette mthode polarographique sont de
10-8 10-9 M.
La voltampromtrie cyclique est une mthode lectrochimique qui utilise des microlectrodes ainsi quune solution non agite. Ainsi le courant mesur est limit
par la diffusion de lanalyte la surface de llectrode. Le potentiel est appliqu
llectrode progressivement vers un potentiel plus ngatif, et ensuite inversement
jusqu atteindre le voltage de dpart.
Le balayage progressif produit un pic de courant pour tous les analytes qui peuvent
tre rduits lintrieur de lintervalle de potentiel appliqu. Le courant augmentera
mesure que le voltage atteindra le potentiel de rduction de lanalyte, mais ensuite
diminuera mesure que la concentration de lanalyte dcrot lorsque celui-ci se
consomme prs de la surface de llectrode. Lorsque le potentiel appliqu est renvers,
un potentiel sera atteint et celui-ci roxydera le produit form dans la premire raction
de rduction, et un courant de polarit inverse (par rapport la premire partie du
balayage) est produit. Ce pic doxydation aura habituellement une forme similaire au
pic de rduction. Le courant de pic, ip, est dcrit par lquation de Randles-Sevcik:

ip = (2.69x105) n3/2 A C D1/2 v1/2
O n est le nombre de moles dlectrons transfrs dans la raction, A est la surface de

llectrode, C est la concentration de lanalyte en moles/ml, D dsigne le coefficient
de diffusion et v est la vitesse de balayage du potentiel appliqu.
La diffrence de potentiel entre les pics de rduction et doxydation est thoriquement
de 59 mV pour une raction rversible. En pratique, cette diffrence est typiquement
de 70 100 mV. Des diffrences plus importantes, ou encore des pics asymtriques
de rduction ou doxydation sont un indice dune raction non-rversible. Ces paramtres du voltamprogramme cyclique rendent cette technique approprie pour la
caractrisation et ltude mcanistique de ractions rdox llectrode.
Voltammtrie redissolution anodique

La voltammtrie redissolution anodique est une mthode o une lectrode de mercure
est maintenue un potentiel ngatif afin de rduire les ions de mtaux lourds en solution et de les faire samalgamer sur llectrode. La solution est agite pour transporter
le plus de particules mtalliques possible llectrode et ainsi concentrer lamalgame.
Aprs avoir procd la rduction des particules et leur accumulation pendant une
certaine priode, le potentiel llectrode est augment pour roxyder les particules
et gnrer un signal de courant. Le potentiel appliqu utilise gnralement le principe
de sauts comme en polarographie impulsionnelle normale ou diffrentielle.
La concentration de lanalyte dans llectrode de mercure, CHg, est donne par:

CHg = (il td) / (n F VHg)
O il est le courant limitant durant la raction de rduction du mtal, td est la dure de

laccumulation, n est le nombre de moles dlectrons transfrs pendant la premire
moiti de la raction, F est la constante de Faraday (96,487 coulombs/mole dlectrons)
et VHg est le volume de llectrode. Lexpression pour le courant produit lors de cette
mthode dpend du type particulier dlectrode, mais est directement proportionnel
la concentration de lanalyte accumul sur llectrode. Le principal avantage de
lanalyse redissolution anodique est la pr-concentration de lanalyte lintrieur
de llectrode avant de procder la mesure de courant. La mthode de redissolution
anodique peut dtecter des concentrations aussi faibles que 10-10 M.
Unit III
Spectroscopie et techniques spectroscopiques atomiques
Nommer les parties du spectre lectromagntique
Rviser les nergies relatives des diffrentes rgions du spectre lectromagntique
Se rappeler les units de mesure couramment utilises en spectroscopie
Rappeler les effets du rayonnement sur les atomes et les molcules
Rviser les niveaux dnergie des lectrons dans les atomes et les molcules
Rintgrer la loi de Beer et lappliquer des problmes quantitatifs
Expliquer les niveaux dnergie des lectrons dans les atomes et les transitions
lectroniques causes par labsorption de radiations
Expliquer les concepts sur lesquels sont bases les spectroscopies dmission
atomique (SEA), de fluorescence atomique (SFA), et dabsorption atomique
(SAA)
Rintgrer les notions dinstrumentation des SEA, SFA et SAA
Faire les calculs ncessaires en se basant sur des observations de SAA, SFA
et SEA hypothtiques

http://en.wikipedia.org/wiki/Atomic_Orbital
http://en.wikipedia.org/wiki/Energy_level
http://en.wikipedia.org/wiki/Atomic_absorption_spectroscopy

http://ull.chemistry.uakron.edu/analytical/Atomic_spec/
http://www.chem.vt.edu/chem-ed/spec/atomic/aa.html
Spectroscopie
La spectroscopie est ltude de linteraction entre le rayonnement dondes, de lumire
ou de particules et la matire. La spectromtrie est la mesure de ces interactions et
linstrument utilis pour cela est un spectromtre ou un spectrographe. Le graphique
trac par linstrument qui illustre linteraction est un spectre.
La spectroscopie est souvent utilise en chimie physique et analytique pour lidentification et la quantification de substances grce au spectre dmission ou dabsorption
de ces dernires. Cette unit introduit de manire simple le concept de rayonnement
et dinteraction avec la matire, la terminologie courante utilise en spectroscopie
ainsi que la loi de Beer qui est rgulirement applique en spectroscopie quantitative.
Il sera par la suite question des techniques spectroscopiques atomiques courantes.
Rayonnement lectromagntique
La lumire est une forme de rayonnement lectromagntique. Dautres formes de
rayonnements lectromagntiques incluent les ondes radio, les micro-ondes, le rayonnement infrarouge, les rayons ultra-violets (UV), les rayons X et les rayons gamma.
Tous ces types de rayons, connus collectivement comme le spectre lectromagntique, sont fondamentalement semblables au sens o ils dplacent 3 x 108 mtres
par seconde, tout comme la lumire. Lunique diffrence entre eux est leur longueur
donde, laquelle est directement lie la quantit dnergie transporte par les ondes.
Plus la longueur donde de la radiation est courte, plus leve en est lnergie.
Classification des rayonnements lectromagntiques
Les ondes radio sont utilises pour la transmission de signaux pour la radio et la tlvision. Les ondes radio ont des longueurs donde variant de moins dun centimtre
des dizaines ou mme des centaines de mtres.
Les micro-ondes ont des longueurs donde pouvant aller du millimtre (lpaisseur
dune mine de crayon) jusqu environ trente centimtres (environ douze pouces).
Linfrarouge est la rgion du spectre lectromagntique qui part de la rgion visible
jusqu environ un millimtre (en longueur donde). Les ondes infrarouges incluent
la radiation thermale. Par exemple, un pole au charbon en fonction nmet pas de lumire, mais met des rayons infrarouges qui sont ressentis sous forme de chaleur.
La radiation visible (dans le spectre visible) est la partie de la radiation qui peut tre
perue par lil humain.
Le rayonnement ultraviolet a des longueurs dondes de lordre de 400 nanomtres
(nm) jusqu environ 10 nm. Les rayons du soleil contiennent des ondes UV qui
peuvent brler la peau.
Les rayons X sont des ondes de haute nergie qui ont un fort pouvoir pntrant et
qui sont utiliss extensivement en mdecine et dans linspection de soudures. Des
images de rayons X de notre soleil peuvent fournir dimportants indices propos
des ruptions solaires et dautres changements sur cet astre qui peuvent affecter la
temprature de lespace. Ltendue de la longueur donde des rayons X va de lordre
du billionime de mtre jusqu environ 10 trillionimes de mtre.
Les rayons gamma ont des longueurs donde encore plus petites que 10 trillionimes
de mtre. Ils sont plus pntrants que les rayons X. Les rayons gamma sont gnrs
par les atomes radioactifs et lors dexplosions nuclaires, et sont utiliss dans plusieurs
applications mdicales. Des images de notre univers pris laide des rayons gamma
ont fourni de linformation importante sur la vie et la mort dtoiles ainsi que sur
dautres processus violents dans lunivers.
Figure 16 : Le spectre de rayonnement lectromagntique.

Rfrence: http://en.wikipedia.org/wiki/Image:EM_Spectrum3-new.jpg#file
Units de mesure de lnergie du rayonnement lectromagntique

La radiation est prsume tre de nature particulaire. Une unit de radiation est appele photon. Chaque photon dune frquence particulire est reli une quantit
dnergie. Cette nergie est donne par: E= h ; o E est la quantit dnergie, h la
constante de Planck (h= 6.624x10-34 JS-1) et la frquence de radiation exprime en
hertz. Lnergie sexprime gnralement en joules.
Interaction de la radiation avec la matire
Les nergies requises lors de tous les processus physiques qui passent aux niveaux
molculaire et atomique sont de lordre du quanta (minuscules paquets dnergie
indivisibles). Sil ny a pas de niveau dnergie disponible ayant un espace adapt au
quantum dnergie du rayon incident, alors le corps sera en quelque sorte transparent
pour la radiation, et les rayons le traverseront. Ainsi, lorsquun corps nabsorbe
aucune quantit dnergie quil est transparent pour le rayonnement.
Latome et la spectroscopie atomique
La spectroscopie atomique comprend trois techniques dusage analytique: lmission atomique, labsorption atomique et la fluorescence atomique. Ces techniques
dpendent des transitions lectroniques dans les atomes isols. Parce que les atomes
sont isols, leurs niveaux dnergie ne sont pas affects par les atomes avoisinants.
Afin de comprendre les relations qui existent entre ces techniques, il est ncessaire
de comprendre latome lui-mme et les processus atomiques impliqus dans chaque
technique.
Figure 17 : Niveaux dnergie atomiques

Latome est constitu dun noyau entour dlectrons. Chaque lment chimique a
un nombre spcifique dlectrons qui sont associs au noyau. Le plus bas tat dnergie ; la plus stable configuration lectronique, appele tat fondamental , est la
configuration orbitale normale pour un atome. Latome comporte dautres orbites
permises pouvant contenir des lectrons, mais qui sont de plus haute nergie. Si
de une quantit dnergie convenable est fournie un atome, elle est absorbe par
latome et un lectron vers un autre tat dit tat excit . Puisque cet t est instable,
latome va immdiatement et spontanment retourner ltat fondamental. Llectron
va revenir sa position orbitale initiale stable, et de lnergie radiante quivalente
lnergie initialement absorbe lors du processus dexcitation sera mise. Le processus
est illustr en figure 18. Remarquez que dans ltape 1 du processus, lexcitation est
force par de lnergie fournie de lextrieur. Le processus de dsintgration (tape
2) impliquant lmission de lumire se produit spontanment.
Figure 18 : Excitation et mission (image adapte de Perkin Elmer Corporation).

La longueur donde de lnergie mise est directement lie lnergie de la transition
lectronique qui sest produite. Puisque chacun des lments chimiques a une structure
lectronique unique, la longueur donde de la lumire mise est une proprit unique
de chaque lment. Comme la configuration dun gros atome peut tre complexe,
plusieurs transitions lectroniques peuvent se produire, chacune rsultant de lmission
dune lumire de longueur donde caractristique. Ceci est illustr en figure 18.
Molcules et spectroscopie molculaire
Pour un processus donn dexcitation, la molcule ou latome absorbe une quantit
dnergie distincte. Cela devrait correspondre une frquence absorbe. Toutefois,
en pratique, un groupe de molcules existe avec plusieurs tats dnergie, chacun se
distinguant des autres par une petite quantit dnergie. Ainsi, un groupe de molcules contenu dans un chantillon donnera lieu une absorption de quantit dnergie
comprise dans un intervalle assez troit, laquelle donnera une petite bande ou pic
dabsorption.
Question formative
Expliquez pourquoi le spectre dabsorption pour un atome consiste en des lignes
distinctes des longueurs donde spcifiques plutt que des larges bandes telles
quobtenues pour les molcules.
La loi de Beer (ou de Beer-Lambert)
Lorsquun rayonnement traverse une rgion contenant des atomes ou des molcules,
la radiation est absorbe. Le diagramme reprsent ci-dessous montre un faisceau de
radiation monochromatique de pouvoir radiant P0 (aussi appel intensit lumineuse,
I0), envoy sur une solution-chantillon. Labsorption a lieu et le faisceau de radiation
qui quitte lchantillon a un pouvoir radiant quivalant P (ou I).
Po
Figure 19: Dmonstration de la loi de Beer.

La quantit de radiation absorbe dpend de la nature de lchantillon, de sa concentration et de la longueur du trajet que doit parcourir la lumire pour traverser lchantillon (en quelque sorte, la longueur de lchantillon).
La quantit de radiation absorbe peut tre mesure laide dun certain nombre de
paramtres:
Transmittance: T = P / P0 ;
Pourcentage de transmittance: %T = 100 T
Absorbance:
A=log10 P0 /P
A=log10 1/T
A=log10 100/%T
A=2-log10 %T
La dernire quation, A=2-log10 %T, vaut la peine dtre retenue car elle permet
de calculer aisment labsorbance partir dune donne de pourcentage de transmittance.
La relation entre labsorbance et la transmittance est illustre en figure 20.
Si une lumire traverse une solution sans quil y ait absorption, alors labsorbance
est de zro et le pourcentage de transmittance est de 100%. Si toute cette lumire
est absorbe, alors le pourcentage de transmittance est de zro et labsorbance est
infinie.
La loi de Beer-Lambert
La loi de Beer ou de Beer-Lambert sexprime comme suit:
A=bc
O A dsigne labsorbance (sans units, car A = log10 P0 / P), est le coefficient
dabsorption molaire (units: L mol-1 cm-1), b est la longueur du trajet de la lumire
lorsquelle traverse lchantillon qui se trouve tre la largeur de la cuvette qui
contient lchantillon ; et o c est la concentration du compos en solution, exprime
en moles par litre (mol.L-1).
A=bc
%T = 100 P/P0 = e -bc
Supposons que nous avons une solution de sulfate de cuivre (qui parat bleue parce
que son absorption maximale est de 600 nm). Nous observons la faon avec laquelle
lintensit de la lumire (pouvoir radiant) change mesure quelle passe travers la
solution dans une cuvette de 1 cm de largeur. Nous regarderons la rduction chaque 0,2 cm tel que montr dans le diagramme reprsent ci-dessous. La loi stipule
que la fraction de lumire absorbe par chaque couche de solution est la mme.
Pour notre illustration, nous supposerons que cette fraction est de 0,5 pour chaque
couche de 0,2 cm et les donnes suivantes seront calcules:
Figure 20 : Courbes de la transmittance et de labsorbance en fonction du trajet

de lumire

A = bc nous dit que labsorbance dpend de la quantit totale de compos se trouvant dans le trajet de lumire travers la cuvette. Si nous traons le graphique de
labsorbance en fonction de la concentration, nous obtiendrons une droite passant par
lorigine (0, 0). Notez que la loi nest pas valable pour les concentrations leves. La
non validit de cette loi ne sera pas considre ici.
Figure 21 : La loi de Beer et la concentration de lchantillon analys

La relation linaire entre la concentration et labsorbance est simple et directe, cest
pourquoi nous prfrons exprimer la loi de Beer-Lamber utilisant labsorbance comme
la mesure de labsorption plutt que le pourcentage de transmittance.
Absorption molaire
Le coefficient dabsorption molaire est une mesure de la quantit de lumire absorbe par unit de concentration.
Labsorption molaire tant constante pour une substance particulire donne, alors
si la concentration de la solution diminue de moiti, labsorbance diminuera de la
mme faon tel quattendu.
Prenons un compos ayant une trs grande valeur dabsorption molaire: 100 000 L
mol-1 cm-1, lequel tant en solution dans une cuvette de 1 cm de largeur et donnant
une absorbance de 1.

= 1 / 1b c
Alors, c = 1 / 100 000 = 1X10-5 mol/L

Considrons un compos ayant une valeur trs faible de , disons 20 L mol-1 cm-1,
lequel tant en solution dans une cuvette de 1 cm de largeur et donnant une absorbance de 1.

=1/1bc
Alors, c = 1 / 20 = 0,05 mol/L

Le -carotne est un compos organique contenu dans les lgumes et qui est responsable de la couleur orange des carottes. On le trouve des concentrations excessivement basses. Vous ne serez pas surpris dapprendre que le coefficient dabsorption
molaire du -carotne est de 100 000 L mol-1 cm-1.
valuation formative
1. Une mole de photons (le nombre dAvogadrode photons : 6,23 x1023 photons)
reprsente 1Einstein (de rayonnement). Calculez lnergie, en calories, dun
Einstein une longueur donde de 3000 .
2. Un compos de masse molculaire de 280 absorbe 65% de la radiation une
certaine longueur donde dans une cuvette de 2 cm, une concentration de
15 mg/mL. Calculez son absorption molaire cette longueur donde.
3. Une solution dADN (poids molculaire inconnu) de 20 ppm isole de Escherichia coli a donn une absorbance de 0,80 dans une cuvette de 2 cm. Calculez
labsorption molaire de la molcule.
Techniques spectroscopiques atomiques
Les lectrons, dans les atomes, existent sur les diffrents niveaux dnergie. Ces
niveaux ont des nergies bien dfinies et les lectrons qui sy dplacent absorbent
ou mettent lnergie quivalente la diffrence entre ces niveaux.
En spectroscopie atomique, lnergie absorbe pour dplacer un lectron un niveau
de plus haute nergie et/ou lnergie mise pour dplacer un lectron vers un niveau
de plus basse nergie est sous forme de photon (une particule de lumire). Parce que
cette nergie est prcisment dfinie, il est possible didentifier latome par lnergie
de cette transition. La longueur donde de la lumire peut tre relie son nergie.
Cest habituellement plus facile de mesurer la longueur donde de la lumire que de
mesurer directement son nergie.
La spectroscopie atomique peut par la suite tre divise en absorption, mission et
fluorescence.
En spectroscopie dabsorption atomique, la lumire traverse un grand nombre datomes. Si la longueur donde de la lumire a une nergie correspondant la diffrence
dnergie entre deux niveaux dnergie dans les atomes, une portion de la lumire
sera absorbe. La relation entre la concentration des atomes, la distance parcourue
par la lumire travers une solution datomes et la portion de lumire absorbe est
donne par la loi de Beer-Lamber.
Lnergie stocke dans les atomes peut tre mise de diffrentes faons. Lorsque cette
nergie est mise sous forme de lumire, on appelle cela la fluorescence. La spectroscopie de fluorescence atomique mesure cette mission de lumire. La fluorescence
est gnralement mesure un angle de 90 degrs de la source dexcitation afin de
minimiser le captage de lumire diffuse provenant de la source dexcitation. Pour
obtenir une telle rotation, on utilise souvent un prisme de Pellin-Broca install sur
une table tournante, lequel sparera aussi la lumire en son spectre pour une analyse
plus rigoureuse. La longueur donde, encore une fois, permet didentifier latome.
Pour de faibles absorbances (et ainsi des concentrations faibles), lintensit de la
lumire fluoresce est directement proportionnelle la concentration datomes. La
fluorescence atomique est habituellement plus sensible (peut dtecte de plus faibles
concentrations) que les techniques dabsorption atomique.
mission atomique
En mission atomique, un chantillon est plac dans un environnement de haute
nergie thermique dans le but damener latome un tat excit partir duquel il
sera capable dmettre de la lumire. La source dnergie peut tre un arc lectrique,
une flamme, ou, dcouvertes plus rcemment, les sources plasma (mlange gazeux
conducteur dlectricit). Le spectre dmission dun lment expos une telle source
dnergie consiste dterminer les longueurs donde dmissions permises, communment appeles lignes dmission cause de la nature distincte des longueurs donde
dmission (ce spectre dmission peut tre utilis comme caractristique unique pour
lidentification qualitative de llment chimique). Lmission atomique avec larc
lectrique comme source dnergie est largement utilise en analyse qualitative.
Les techniques dmission atomique peuvent galement tre utilises pour dterminer
la quantit dun lment prsent dans un chantillon. Pour une analyse quantitative
, lintensit de la lumire mise la longueur donde de llment chimique identifier est mesure. Lintensit dmission cette longueur donde est dautant plus
forte que le nombre datomes de lanalyte est grand. La technique de photomtrie de
flamme est une application dmission atomique pour lanalyse quantitative.
Absorption atomique
La capacit dun atome absorber des longueurs donde de lumire trs spcifiques
est utilise en spectromtrie dabsorption atomique.
La quantit qui nous intresse en absorption atomique est la quantit de lumire qui
est absorbe, la longueur donde de rsonance, mesure que la lumire traverse
le nuage datomes. mesure que le nombre datomes augmente dans le trajet de la
lumire, la quantit de lumire absorbe augmente aussi de manire prvisible. En
mesurant la quantit de lumire absorbe, il est possible de dterminer la quantit
de matire de llment-analyte prsent. Lusage de sources de lumires spcifiques
et une bonne slection de la longueur donde permet la dtermination quantitative
dun lment individuel en prsence dautres lments, rendant cette technique trs
slective.
Le nuage datomes requis pour la mesure dabsorption atomique est produit en fournissant suffisamment dnergie thermique lchantillon pour dissocier les composs
chimiques en atomes libres. Ceci est accompli en aspirant une solution danalyte
dans la flamme. Dans des conditions adquates, la plupart des atomes seront ltat
fondamental et ainsi pourront absorber la lumire provenant dune source lumineuse,
la longueur donde danalyse.
Fluorescence atomique
Dans cette technique, les atomes ltat fondamental crs dans une flamme sont
excits en les exposant un faisceau de lumire. Lmission rsultant de la dsintgration des atomes excits par la source lumineuse est mesure. Lintensit de
cette fluorescence augmente dans le mme sens que la concentration datomes,
fournissant la base pour la dtermination quantitative.
La lampe-source pour la fluorescence atomique est fixe un certain angle comparativement aux autres composantes du systme optique, ainsi le dtecteur de lumire
capte seulement la fluorescence de la flamme et non la lumire provenant de la lampe
elle-mme. Il est avantageux de maximiser lintensit de la lampe pour cette mthode,
car la sensibilit est directement relie au nombre datomes excits, (la sensibilit de
la mthode est fonction de lintensit de la lumire excitante). Les atomes nmettent
pas la mme longueur donde que la radiation utilise pour lexcitation.
Analyse quantitative par absorption atomique
Le processus dabsorption atomique est illustr en figure 22. La lumire la longueur
donde de rsonance, dintensit initiale Io, est dirige vers la zone de la flamme
contenant les atomes ltat fondamental. Lintensit lumineuse initiale est abaisse
dune quantit dtermine par la concentration datomes du compartiment. La lumire
est ensuite dirige vers dtecteur, o lintensit rduite, I, est mesure.
Figure 22 : Le phnomne dabsorption atomique.
valuation formative
i. Pourquoi est-il souhaitable davoir une source lumineuse nette et prcise en
spectroscopie dabsorption atomique ?
ii. Expliquez pourquoi la spectromtrie dmission atomique flamme est souvent aussi sensible que la spectromtrie dabsorption atomique, mme sil
est possible que seulement une petite fraction des atomes soient excits par
la flamme.
iii. Pourquoi une flamme doxyde nitreux/actylne de haute temprature est
parfois ncessaire en spectromtrie dabsorption atomique ?
iv. Pourquoi ajoute-t-on parfois des concentrations leves de sels de potassium
aux standards et aux chantillons dans les techniques dabsorption ou dmission utilisant la flamme ?
v. Les interfrences chimiques sont plus prsentes dans les flammes moins
chaudes, telles qu air-propane, cependant ce type de flamme est privilgi
pour la dtermination de mtaux alcalins. Dites pourquoi.
vi. On mesure la quantit de calcium dans une solution-chantillon par spectromtrie dabsorption atomique. Une solution stock de calcium est prpare
en dissolvant 1,834 g de CaCl 2H20 dans leau jusqu obtenir 1 litre. Cette
solution est ensuite dilue 1:10. Les standards de travail sont prpars en
diluant la seconde solution respectivement 1:20, 1:10 et 1:5. Lchantillon
est dilu 1:35. Du chlorure de strontium est ajout toutes les solutions avant
la dilution, suffisamment pour obtenir 1% (p/v) afin dviter les interfrences
causes par les phosphates. Un blanc est prpar 1% SrCl. Les signaux
dabsorbance obtenus par lordinateur suite laspiration des solutions dans
une flamme air-actylne sont les suivants:
Blanc: 1,5 cm
Standards: 10,6 ; 20,1 et 38,5 cm
chantillon: 29,6 cm
Quelle est alors la concentration en calcium de lchantillon, en parties par
million (ppm) ?
Unit IV
Spectroscopie molculaire I : UV-visible et infra-rouge

Expliquer les niveaux dnergie dans les molcules ainsi que les transitions
produites par labsorption de rayons UV et visibles.
Expliquer les concepts sur lesquels se base la spectroscopie en UV-visible
Utiliser un spectre UV-visible hypothtique afin didentifier des groupements
fonctionnels spcifiques dans une molcule
Expliquer comment le coefficient dextinction molaire est utilis pour lanalyse quantitative
Utiliser des donnes fictives pour calculer la concentration de solutions
Nommer les parties dun spectrophotomtre UV moderne et leurs fonctions
Rintgrer les notions de transitions lectroniques causes par labsorption
de rayons IR
Faire la corrlation entre labsorption de rayons IR de frquences spcifiques
et les groupes fonctionnels molculaires
Faire la corrlation entre labsorption de rayons IR de frquences spcifiques
et la structure de molcules organiques simples
Se remmorer les parties dun spectrophotomtre IR moderne et leurs fonctions

http://en.wikipedia.org/wiki/Molecular_energy_state
http://www.scienceofspectroscopy.info/edit/index.php?title=UV_Absorption_Table
http://teaching.shu.ac.uk/hwb/chemistry/tutorials/molspec/uvvisab4.htm
http://www.scienceofspectroscopy.info/edit/index.php?title=UV-Visible_Spectroscopy
http://ull.chemistry.uakron.edu/analytical/Spectrophotometry/
Liste de ressources multimdias pertinentes

http://www.cem.msu.edu/~parrill/AIRS/name_list.html
Spectroscopie dans le spectre ultraviolet-visible
Transitions lectroniques
Labsorption dnergie lumineuse par des composs organiques dans les rgions
du visible et de lultraviolet du spectre implique la transition dlectrons dans les
orbitales , , et n, de ltat fondamental vers des tats de plus haute nergie. Ces
tats dnergie plus grande sont appels orbitales anti-liantes. Lorbitale anti-liante
associe la liaison est note * (sigma toile) et lorbitale lie au lien est *
(pi toile).
Plusieurs molcules contiennent des atomes avec des lectrons de valence qui ne
sont pas directement impliqus dans la formation de liaisons, ceux-ci sont appels
non-liants ou lectrons n et sont principalement situs dans les orbitales atomiques
de loxygne, du soufre, de lazote et des halognes.
Les lectrons n ne font pas de liaisons, ainsi, il ny a pas dorbitales anti-liantes
associs eux. La prsence dun lectron sur une orbitale anti-liante indique que la
molcule est dans un tat de haute nergie. La densit lectronique entre les noyaux
atomiques est moindre qu la mme distance du noyau dans un atome isol. ltat
excit, quelques-uns des lectrons de la molcule (mais pas tous), occupent une
orbitale anti-liante.
Les transitions lectroniques () qui ne sont pas incluses dans les rgions de lUV ou
du visible sont des types suivants: *, n *, n *, and n *. Lnergie
requise pour la transition * est trs grande; consquemment, les composs dans
lesquels tous les lectrons de valence sont impliqus dans la formation de liaisons
simples, tels que les hydrocarbures saturs, nabsorbent pas dans la rgion normale
des ultraviolets.
Figure 23 : Les transitions lectroniques qui ont lieu suite labsorption de

rayons UV et de lumire visible.
Les composs ne contenant pas dlectrons non-liants dans les atomes doxygne,
dazote, de soufre et dhalognes sont capables dabsorption grce aux transitions
n*. Celles-ci sont de plus faible nergie que les transitions *, ainsi les molcules possdant des lectrons non-liants peuvent gnralement absorber dans la
rgion normale des ultraviolets.
Les transitions vers les orbitales non-liantes * sont seulement associes aux liaisons
insatures (doubles ou triples liens) de la molcule ; celles-ci requirent encore moins
dnergie et ont lieu des longueurs donde plus grandes, donc assez frquemment
lintrieur de la rgion des ultraviolets. Le diagramme ci-dessus montre les nergies
relatives gnrales dexcitation lectronique pour ces transitions. Les transitions de
haute nergie (*) ont lieu de plus courtes longueurs donde et les transitions
de plus faible nergie n* ont lieu des longueurs donde plus longues.
Effet de lenvironnement structural
Des groupements fonctionnels identiques se trouvant dans des molcules diffrentes
nabsorberont pas ncessairement exactement la mme longueur donde. Le changement dnergie pour une transition particulire dicte la position de labsorption
dun groupe donn. Les transitions au sein de groupements fonctionnels identiques,
mais se trouvant dans diffrentes molcules, nauront pas automatiquement le mme
besoin en nergie cause des environnements structuraux qui sont diffrents. Les
molcules avoisinantes ont un effet minime, mais non-ngligeable, sur ltat dnergie
dun chromophore.
Effet de conjugaison
Si deux groupes chromophores ou plus sont prsents dans une molcule et sont spars
par deux simples liaisons ou plus, leffet sur le spectre est gnralement additif ; il
y a une petite interaction lectronique entre les chromophores isols. Toutefois, si
deux groupes chromophores sont spars par une seule simple liaison (un systme
conjugu), un grand effet sur le spectre se produit parce que le systme dlectrons
stend sur au moins quatre centres atomiques. Quand deux chromophores sont
conjugus, la bande dabsorption de haute intensit est habituellement dplace de
15-45 nm vers les longueurs donde plus longues relativement au simple chromophore non-conjugu.
Le coefficient dextinction molaire
Lordre de grandeur du coefficient dextinction molaire pour une absorption particulire est directement proportionnelle la probabilit dune transition lectronique
particulire ; plus une transition donne est probable, plus grand est le coefficient
dextinction molaire. En gnral, un type donn de chromophore aura toujours un
coefficient dextinction molaire d peu prs la mme ampleur dans diffrentes molcules. Toutefois, lextinction devrait tre considre lorsque vient le temps dassigner
un pic dabsorption un chromophore donn, car labsorption est caractrise par
lnergie et la probabilit de transition.
Leffet de solvant
Les structures lectroniques des tats de haute nergie des molcules sont soit plus
polaires ou moins polaires qu ltat fondamental. Celles qui sont plus polaires
ltat excit voient leur pic dabsorption dplac de 10 40 nm vers de plus longues
longueurs donde dans les solvants polaires et vice versa.
Identification de groupements fonctionnels laide de lUV
Un groupement fonctionnel isol, non-conjugu avec un autre groupement est appel
chromophore sil a une absorption de nature distinctive ou caractristique dans la
rgion UV-visible. Si plusieurs composs possdent le mme groupement fonctionnel
sans prsence de complications, tous les composs vont gnralement absorber des
longueurs donde trs voisines et auront le mme (ou presque) coefficient dextinction
molaire. Ainsi, il est facile de voir que le spectre dun compos, lorsque compar avec
les donnes de la littrature pour des composs connus, peut tre dune aide prcieuse
pour lidentification de groupes fonctionnels prsents dans une molcule.
Instrumentation pour la spectromtrie UV-visible
Figure 24 : Spectrophotomtre double faisceau
La lumire vient de la source et un mince rayon pntre par la fente 1, le rseau de

diffraction slectionne la longueur donde requise et un mince rayon est nouveau
slectionn par la fente 2. Le filtre laisse passer le rayon la longueur donde permise
uniquement vers le miroir 2. Ce dernier dirige le faisceau travers un miroir (half
mirror) qui laisse passer la moiti du faisceau vers le miroir 3 et lautre moiti vers
le miroir 4 afin de former le faisceau de rfrence et le faisceau-chantillon.
valuation formative
Ces exercices renforcent les connaissances acquises dans la section prcdente sur
lidentification de chromophores laide de lUV.
1) Lequel, parmi les composs suivants, absorbe dans la rgion UV ?
a) CO2
b) H2
c) CH3CO
2) Placez les composs suivants dans lordre croissant de la frquence ou nombre

donde auquel ils vont absorber:
a) CH3CO
b) CH2=CH-CH=CH2 c) CH2=CH-CH=CH-CH=CH2
3) Identifiez les transitions lectroniques possibles qui pourront permettre labsorption dans lUV dans les composs suivants:
a) CH3CO
b) CH2=CH-CH=CH2
c) CH3CN
Spectroscopie infra-rouge (IR)

Vibration molculaire et spectroscopie IR
Une molcule nest pas un assemblage datomes rigide. Une molcule est un systme
de balles de masses varies, correspondant aux atomes dune molcule, ainsi que
de ressorts de diffrentes forces correspondant aux liens chimiques de la molcule.
Ceux-ci peuvent donc subir diverses vibrations. Il y a deux sortes de vibrations
fondamentales pour les molcules: les vibrations dlongation (stretching), o la
distance entre les atomes augmente ou diminue mais ceux-ci restent dans le mme axe
de liaison et les vibrations de dformation (bending ou deformation), o la position
de latome change relativement laxe de liaison dorigine. Les diffrentes vibrations dlongation et de dformation dune liaison demandent une certaine quantit
dnergie. Pour les transitions impliquant ces vibrations, la frquence correspond au
rayonnement infra-rouge. Lorsque de la lumire infra-rouge, cette mme frquence
se dirige sur la molcule (rayon incident), lnergie est absorbe et lamplitude de
cette vibration augmente. Lorsque la molcule retourne ltat fondamental depuis
ltat excit, lnergie absorbe au dpart est restitue sous forme de chaleur.
Bandes dabsorption fondamentale et non fondamentale

Une molcule non linaire qui contient n atomes a 3n-6 vibrations fondamentales
possibles. Des bandes dabsorption (non fondamentale) additionnelles peuvent avoir
lieu cause de la prsence soit de bandes harmoniques qui surviennent des intensits
considrablement plus basses, , 1/3, de la longueur donde (les harmoniques
apparaissent des frquences multiples de la vibration fondamentale ; donc X fois
le nombre donde), soit de bandes de combinaison (soit la diffrence ou la somme
de deux nombres donde diffrents ou plus). Si toutes les vibrations consistaient en
absorption infra-rouge, le nombre de pics obtenu serait trop grand pour tre utile,
cependant, une vibration qui absorbe en IR doit consistait en une variation du moment dipolaire lectrique. Ainsi, seules les liaisons reliant deux molcules diffrentes
peuvent absorber en IR.
nergies relatives des absorptions IR
Les vibrations de dformation requirent gnralement moins dnergie et ont lieu
de plus grandes longueurs donde ( de plus faibles frquences ou nombres donde)
que les vibrations dlongation.
La triple liaison (absorption vers 4,4 5,0 m, 2300 2000 cm-1) est plus forte que
la double liaison (absorption vers 5,3 6,7 m, 1900 1500 cm-1), laquelle est plus
forte que la liaison simple (CC, CN, et CO, absorption vers 7,7 12,5 m, 1300
800 cm-1).
Lorsque la liaison simple implique le trs petit atome dhydrogne (CH, OH, ou
NH), les vibrations dlongation ont lieu une frquence considrablement plus
grande (2,7 3,8 m, 3700 2630 cm-1). Le lien OH absorbe prs de 2,8 m (3570
cm-1). Par exemple, si le spectre prsente une forte bande 5,82 m (1718 cm-1), il
est presque certain que le compos contient un groupement carbonyle.
Le spectre en lui-mme ne fournit pas toujours linformation sur la nature du groupement ; le compos peut tre un aldhyde, une ctone, un acide, un ester, ou un amide.
Donc, si lon dsire identifier un groupe fonctionnel, le spectre doit tre examin
en dtails pour lidentification de bandes dabsorption et utilis conjointement avec
(et ne peut pas toujours remplacer) les ractions chimiques classiques ainsi que la
dtermination de la solubilit. Dautre part, mme si lon ne doit pas accorder trop
dimportance labsence de preuves, si le spectre ne montre pas de bande dabsorption typique dun certain groupe fonctionnel, cela signifie que la molcule identifier
ne contient pas le groupement fonctionnel en question. Par exemple, si le spectre
ne dmontre pas dabsorption dans la rgion de 5,4 6,3 m (1850 1587 cm-1),
lchantillon ne contient pas de groupement carbonyle.
Un bon nombre des bandes dabsorption montres par les composs organiques dans
la rgion IR ne peuvent tre interprtes avec certitude.
Identification de groupements fonctionnels laide de la spectroscopie IR

Spectre IR des hydrocarbures saturs
Les hydrocarbures saturs prsentent des absorptions rsultant des vibrations typiques
de groupes prsents au sein de ce type de molcule, telles que llongation CH (~3,39
m 3,54 m et 2950 2820cm-1), la dformation CH2 (6,86 m et 1458 cm-1),
et la dformation CCH3 (6,86 7,28 m et 1458 ~1380 cm-1). Les absorptions
faibles prs de 13,85 m (722 cm-1) sont causes par les vibrations de dformation
du groupement (CH2)n, lorsque n > 4.
Absorption IR de OH
Si un groupe mthyle dun hydrocarbure satur est remplac par un atome doxygne,
ceci produit une apparence dabsorption cause par la forte vibration dlongation
CO prs de 9 m (~1110 cm-1). Le spectre change de manire trs prvisible ; il
montre dsormais des bandes dabsorptions associes aux vibrations dlongation OH
et CO en plus des bandes produites par les chromophores hydrocarbures prsents.
Le spectre du propan-1-ol, CH3(CH2)CH2OH, en est un bon exemple (figure 24
ci-dessous) ; labsorption forte et large prsente ~2,9 m (~3448 cm-1) est due la
vibration dlongation OH et est typique de lassociation polymrique des groupes
hydroxyles . Son largissement est caus par les liens hydrognes.
Figure 25 : Spectre IR du 1-propanol
Absorption IR de CO
Ctones
Si un compos contient des groupes carbonyles, labsorption cause par la vibration
dlongation CO est gnralement parmi les plus fortes. Les groupes carbonyles des
ctones absorbent gnralement vers 5,7 6,0 m (1754 1667 cm-1) ; la position
de labsorption sur le spectre est sensible, entre autres, la taille de lanneau (cycle)
dans des composs cycliques et au degr dinsaturation conjugue.
Aldhydes
Labsorption due la vibration dlongation du carbonyle dans les aldhydes apparat
environ dans la mme rgion que pour les ctones. Lautre caractristique notable de
labsorption du groupement aldhyde est la prsence de deux faibles bandes causes
par la vibration dlongation de CH. La longueur donde de cette absorption est
plus grande (nombre donde diminu) comparativement la position normale de
llongation CH de 3,4 m (294 cm-1) environ 3,55 et 3,68 m (environ 2820 et
2720 cm-1). La prsence de deux bandes dabsorption dans cette rgion est cause par
le mode dlongation symtrique et asymtrique des liens CH et C=O.
Esters et lactones
La position dabsorption de la vibration dlongation des esters et des lactones dpendant, tout come les ctones, des insaturations conjugues et de la taille du cycle.
Labsorption se fait nanmoins dans la mme rgion, en gnral, que pour les liaisons
C=O.
Acides carboxyliques
Labsorption produite par la vibration dlongation des groupes carbonyles dun acide
carboxylique satur (5,83 m, 1715 cm-1) est dplace vers une plus grande longueur
donde (nombre donde plus petit) sils sont conjugus avec un groupe insatur (par
exemple, lacide benzoque: 5,88 m et 1701 cm-1).
Amides
Tous les amides montrent une forte absorption due llongation des carbonyles et
les absorptions rsultant des vibrations dlongation NH des amides primaires et
secondaires sont de lordre de 2,8 3,2 m (~3570 3125 cm-1).
Amines
Labsorption la plus typique des amines est celle des vibrations dlongation du lien
NH vers 2,8 3,0m (~3570 3333 cm-1). Dans les solutions dilues et les solvants
inertes pour cette rgion du spectre, les amines primaires montrent deux bandes nettes,
ce qui est d aux vibrations dlongation symtriques et asymtriques de NH ; les
amines secondaires montrent une seule bande et pour les amines tertiaires, on ny
retrouve aucune bande dabsorption.
Liaison thylne C=C

En raison de la faible intensit dabsorption des vibrations dlongation de la liaison
C=C, des solutions concentres dalcnes devraient tre utilises ; labsorption se
produit dans la rgion de 5,95 6,17 m (~1680 1620 cm-1). Les absorptions sont
plus intenses si la liaison thylne est conjugue avec un groupement insatur. La
bande dabsorption due la vibration dlongation alcnique de C=CH est un petit
pic 3,19 m (3135 cm-1) prs de la bande plus large dabsorption dun alcane produite par la vibration dlongation CH.
Liaisons triples
Les absorptions rsultant des vibrations dlongation des liaisons triples carbonecarbone (CC) des composs actylniques ont lieu vers 4,4 4,8 m (~2275 2085
cm-1). Labsorption est faible, spcifiquement si la liaison actylne nest pas terminale.
Les vibrations dlongation ne sont quune expansion ou contraction linaire de la
molcule, ainsi le moment dipolaire nest pas tellement affect. Labsorption cause
par llongation actylnique CH apparat comme une forte bande nette prs de 3,0
m (~3333 cm-1).
Labsorption cause par la vibration dlongation de la triple liaison des nitriles a
lieu dans la mme rgion environ que pour les actylnes, cependant labsorption est
considrablement plus intense. Cette absorption pour le benzonitrile, par exemple,
apparat 4,44 m (2252 cm-1).
Composs aromatiques
Les structures aromatiques sont identifies par la prsence de quatre bandes dabsorption vers 6 7 m (1667 1429 cm-1) sur le spectre. Les pics se trouvent prs
de 6,25, 6,32, 6,67, et 6,90 m (1600, 1580, 1500, and 1450 cm-1) et sont causes
par les vibrations C=C dans le plan du squelette de la molcule. La seconde bande
est frquemment observe en tant que petit renflement sur le premier pic, mais est
intensifie si le noyau aromatique est conjugu avec un groupe insatur ; la quatrime bande est frquemment masque par la forte absorption due aux vibrations
de dformation CH2 si des groupes aliphatiques sont prsents. Labsence de pics
dabsorptions dans ces rgions du spectre est une bonne indication que le compos
ne contient pas de cycle aromatique.
Un bon nombre de bandes dabsorption dintensits variables apparaissent dans
la rgion de 10 15 m (1000 670 cm-1) qui sont produites par les vibrations
de dformations CH. Ces absorptions dpendent du nombre dhydrognes libres
avoisinants que le noyau aromatique possde. Un compos aromatique contenant
cinq atomes dhydrogne adjacents absorbe fortement autant vers 13,3 et 14,3 m
(~750 et 700 cm-1) ; si le compos contient quatre atomes dhydrogne avoisinants,
comme par exemple un o-benzne disubstitu, il absorbe fortement, seulement prs
de 13,3 m (~750 cm-1). Les absorptions restantes relies un plus petit nombre
atomes datomes dhydrognes voisins du noyau (plus haut degr de substitution
sur le noyau aromatique) sont habituellement faibles et difficiles identifier. Une
absorption prs de 14,3 m (~700 cm-1) est dune importance particulire ; si le

compos nabsorbe pas de faon forte dans cette rgion, il ne peut tre un compos
benznique mono-substitu.
Le spectre du biphnyle ainsi que dautres composs benzniques mono-substitus
montrent ce genre de bandes dabsorptions.
La rgion du spectre des composs benzniques prs de 5 6 m (2000 1670 cm-1)
contient des bandes dabsorption de faible intensit qui sont des bandes harmoniques
ou des bandes de combinaison. Le nombre et la position relative de ces bandes sont
remarquablement tributaires du type particulier de substitution du cycle benzne.
valuation formative
1) Placez les liaisons suivantes dans lordre croissant de la frquence dabsorption
IR de leurs vibrations dlongation.
a) CN
b) NH
c) OH
2) Laquelle des liaisons suivantes donnera une absorption IR ?

a) HH
b) CH
c) OO
d) CO
Spectre infrarouge: il est important de se rappeler que labsence dune bande dabsorption peut souvent fournir plus dinformation sur la structure dune molcule que
la prsence dune bande. Soyez attentifs et vitez de trop porter votre attention sur
les bandes dabsorptions slectionnes, cela pourrait vous faire manquer les autres.
Interprtation dun spectre IR
Observez les absorptions suivantes qui sont en ordre dcroissant dimportance:

Les absorptions de CH se trouvent entre 3100 et 2850 cm-1. Une absorption

plus haute que 3000 cm-1 indique un lien C=C, soit un alcne ou un compos
aromatique. Confirmez le cycle aromatique en trouvant les pics vers 1600
et 1500 cm-1 et les C=H de dformation hors plan pour avoir les patrons de
substitutions sous les 900 cm-1. Confirmez les groupes alcnes avec les bandes
1640-1680 cm-1. Les pics dabsorption entre 3000 et 2850 cm-1 sont produits
par des hydrognes aliphatiques.
Les absorptions de groupes carbonyles (C=O) se trouvent entre 1690 et 1760
cm-1; cette forte bande indique autant un aldhyde, une ctone, un acide
carboxylique, un ester, un amide un anhydride ou un halognure dacyle.
Lidentification de laldhyde peut tre confirme par la prsence dune bande
vers 2840 2720 cm-1.
Les absorptions des liaisons OH et NH se trouvent entre 3200 et 3600 cm-1.
Celles-ci peuvent indiquer autant un alcool (OH), une amine ou un amide
contenant un NH ou un acide carboxylique. Pour NH2, on observera un
doublet.
Labsorption de la liaison CO se situe entre 1080 et 1300 cm-1. Ces pics

sont normalement arrondis comme les pics OH et NH et sont prominents.
Les acides carboxyliques, les esters, les thers, les alcools et les anhydrides
donnent tous ce genre de pic.
Les triples liaisons CC et CN absorbent autour de 2100 2260 cm-1; leurs
pics sont petits mais visibles.
Un groupement mthyle peut tre identifi avec labsorption de CH vers 1380
cm-1. Cette bande est divise en un doublet pour les groupes isopropyles (aussi
parfois appels gem-dimthyles, cest--dire ayant deux groupes mthyles sur
le mme carbone).
La structure de composs aromatiques peut aussi tre confirme partir dun
patron de faibles bandes harmoniques et de combinaisons trouves vers 2000
1600 cm-1.
Unit V
Spectroscopie molculaire II : Rsonance magntique nuclaire (RMN)

Expliquer le phnomne de rsonance magntique nuclaire

Rviser les proprits nuclaires dmontres par la RMN
Expliquer le phnomne de RMN du proton (HRMN)
Corrler les frquences spcifiques dabsorption HRMN aux groupes fonctionnels molculaires
Corrler les frquences spcifiques dabsorption HRMN la structure molculaire de molcules organiques simples.
Expliquer les particularits du phnomne de RMN du carbone-13
Rviser la nature des informations fournies par une RMN du carbone-13
Rviser les parties dun spectromtre RMN moderne et leurs fonctions

http://www.scienceofspectroscopy.info/edit/index.php?title=NMR_Spectroscopy
http://en.wikipedia.org/wiki/NMR_spectroscopy#Chemical_Shift
http://www.mhhe.com/physsci/chemistry/carey/student/olc/ch13nmr.html#basi
ttp://teaching.shu.ac.uk/hwb/chemistry/tutorials/molspec/uvvisab4.htm
http://www.scienceofspectroscopy.info/edit/index.php?title=UV-Visible_Spectroscopy
http://www.scienceofspectroscopy.info/edit/index.php?title=UV_Absorption_Table- non open source UV visible
http://ull.chemistry.uakron.edu/analytical/Spectrophotometry/
http://www.chem.ucla.edu/cgi-bin/webspectra.cgi?Problem=bp1&Type=C
http://www.chem.ucla.edu/~webspectra/search.html
Spectroscopie de rsonance magntique nuclaire

La spectroscopie de rsonance magntique nuclaire, plus couramment appele spectroscopie RMN est le nom donn la technique qui exploite les proprits magntiques
de certains noyaux atomiques. Les plus importantes applications pour les chimistes
organiques sont la spectroscopie RMN du proton et du carbone 13.
On peut obtenir plusieurs types dinformations partir dun spectre RMN. Encore plus
que lutilisation de lIR pour identifier des groupements fonctionnels molculaires,
lanalyse dun spectre RMN fournit de linformation sur le nombre et le genre des
entits chimiques dans la molcule.
La RMN peut tre applique une grande varit dchantillons, autant en solution
qu ltat solide.
Dans cette unit, la RMN du proton est introduite et ses applications dans lidentification de composs organiques sont mises en vidence.
Phnomne de la RMN
Les noyaux possdent un spin mcanique, ou moment angulaire. Le moment angulaire
total dpend du spin nuclaire, ou nombre de spin, lequel peut avoir les valeurs 0, ,
1, 3/2, selon le noyau considr. La valeur numrique du nombre de spin est relie
au nombre de masse et au numro atomique du noyau.
Nombre de masse
Numro atomique
Nombre de spin
Impair
Pair ou impair
, 3/2 , 5/2...
Pair
pair
Pair
Impair
1, 2, 3
Le noyau tourne autour de son axe (spinning) et cela cre en un champ magntique
autour du noyau. Ainsi, le noyau devient un petit aimant de moment magntique .
Chaque noyau pour lequel I > 0 aura alors un moment magntique caractristique.
valuation formative
1) Dites ce qui fait distingue le moment magntique nuclaire du nombre de spin
nuclaire.
2) Lesquels, parmi les noyaux suivants ont un moment magntique?
a) Oxygne, nombre de masse 16, numro atomique 8
b) Carbone, nombre de masse 12, numro atomique 6
c) Azote, nombre de masse 14, numro atomique 7
d) Carbone 13
e) proton
RMN du proton (HRMN)

Les noyaux les plus utiles pour la RMN organique sont le proton (nombre de masse
1, numro atomique 1) et le carbone 13, parce quils sont prsents dans plusieurs
composs organiques.
Le proton a un nombre de spin de ; le noyau magntique peut donc prendre nimporte quelle orientation (2I +1), de - par sauts de 1 selon la direction du champ
magntique appliqu. Un proton de I = pourra donc prendre seulement une des
deux orientations possibles qui correspond aux niveaux dnergie de H dans un
champ magntique donn, o H est la force du champ magntique extrieur.
Ainsi, ces niveaux dnergie sont dits quantiques.
Figure 26 : Rsonance magntique nuclaire (RMN)
Un proton dans un champ magntique externe statique ne peut avoir deux orientations correspondant aux nergies de . Lorientation de basse nergie correspond
ltat dans lequel le moment nuclaire magntique est align paralllement au champ
magntique externe, et lorientation de haute nergie est ltat o le moment magntique est align de faon anti-parallle (oppos) au champ magntique appliqu. Il
est possible de faire des transitions entre ces deux orientations ; la frquence de
la radiation lectromagntique ncessaire pour une telle transition est donne par
= -(2Ho)/h o Ho est la force du champ magntique externe, et h est la constante de
Planck. Notez que, contrairement aux absorptions en UV et en IR, la frquence de
cette absorption est dpendante du champ magntique appliqu.
Les transitions induites par la radiation obissent aux rgles suivantes:
1) La probabilit dune transition vers le haut par absorption dnergie du champ
magntique est exactement gale la probabilit dune transition vers le bas
par un processus provoqu par le champ.
2) Les transitions spontanes dun tat de plus haute nergie vers un niveau de
plus basse nergie sont ngligeables.
Effets non-radiatifs
Les effets de radiation seuls ne produisent pas de RMN observable. Toutefois, il y a
deux effets non-radiatifs qui peuvent avoir lieu, dont un qui rend la RMN possible.
1) Deux noyaux voisins peuvent changer un spin, ainsi lun devient parallle
et lautre, anti-parallle. Ceci est appel relaxation spin-spin.
2) Un effet de rseau rsultant de lagrgation de tous les autres noyaux prsents
qui ont des transitions nergtiques varies peut survenir ; ainsi quelques
noyaux anti-parallles peuvent perdre de lnergie et devenir parallles. Cela
fait que les noyaux de plus faible nergie sont lgrement en excs, quelques
noyaux de ce groupe (en excs) vont absorber de lnergie et ainsi produire
un phnomne de RMN.
Glissement chimique (ou dplacement chimique)
Ce ne sont pas tous les atomes dhydrogne dune molcule qui absorberont exactement la mme frquence . Leffet magntique senti par un noyau hydrogne,
donn par Heff = Ho - Ho. Ho est appel dplacement chimique et mesure leffet
lectronique des atomes avoisinants dun proton donn.
Le paramtre de dplacement, , est dfini ainsi:
= frquence du proton frquence du standard (TMS, ttramthylsilane)
Comme on ne peut obtenir que des valeurs dabsorptions relatives, un standard est
utilis. Les valeurs du dplacement chimique des protons dans un compos particulier
sont alors dtermines en rfrence ce standard. On peut utiliser le standards de
deux faons: comme une rfrence externe (le standard est habituellement plac dans
un petit capillaire contenu dans le tube dchantillon) ou encore comme rfrence
interne (le standard est dissous dans la solution dchantillon mesurer). La RMN
du proton moderne utilise le ttramthylsilane (TMS) comme standard.
Corrlation de la HRMN avec la structure molculaire

Les frquences de rsonance du proton peuvent tre mesures avec une prcision
denviron 0,02 ppm relativement un standard interne. La figure 26 ci-dessous
fournit une corrlation gnrale du type de structure avec la position dabsorption.
Les groupes fonctionnels lists dans la figure 26 sont lis aux atomes de carbones
saturs. Toutes les valeurs dabsorption crites ici sont des valeurs de .
Figure 27 : Paramtres de dplacement chimique de diffrents atomes dhydrogne

Effet inductif et lectrongativit
Les lectrons autour du proton crent un champ magntique qui est oppos au champ
magntique appliqu. Les groupes lectrongatifs lis au systme CH diminuent la
densit dlectrons autour des protons, ainsi il y a moins de blindage (dblindage),
donc le dplacement chimique augmente. Ces effets sont cumulatifs, ainsi plus il
y a de groupes lectrongatifs, plus il y a de dblindage et plus les dplacements
chimiques sont importants. Ces effets inductifs ne sont pas seulement ressentis par
les protons immdiatement adjacents, car la rupture de la densit lectronique a une
influence sur une grande portion de la chane. Toutefois, leffet diminue rapidement
mesure que lon sloigne du groupement lectrongatif.
Interactions spin-spin
Lnergie implique pour la transition dun spin donn est presque la mme pour
chaque proton dune molcule. Les bandes dabsorption, mesures selon la surface
quelles couvrent, sont le rapport du nombre de protons dans chaque groupe. Le spectre basse rsolution de lthanol (figure 26) montre trois pics dabsorption dans un
rapport de surface 1: 2: 3, correspondant OH, CH2, et CH3, respectivement.
Figure 28 : Spectre RMN basse rsolution de lthanol

de plus hautes rsolutions, les pics de lthanol attribus aux protons des groupements mthylne et mthyle paraissent comme des mutiplets.
Labsorption du mthyle (CH3) est divise en trois surfaces relatives 1: 2: 1 et celle
du mthylne (CH2) est divise en quatre pics 1: 3: 3: 1. Cela sexplique par le fait
que CH3 interagit avec CH2 en le sparant en 4 et le groupe mthylne interagit avec le
groupement CH3 en le divisant en 3. Cet effet est appel les interactions spin-spin.
Lampleur des multiples sparations rsultant des interactions spin-spin est fonction
de la force du champ magntique appliqu.
Figure 29 : Spectre RMN de haute rsolution de lthanol

Liaison hydrogne
Les protons impliqus dans la liaison hydrogne (habituellement OH ou NH)
sont typiquement observs sur une grande tendue de valeurs. Plus il y a de liaisons
hydrogne, plus le proton est dblind et plus haute sera son dplacement chimique.
Toutefois, puisque le nombre de liaisons hydrogne est influenc par des facteurs tels
que la solvatation, lacidit, la concentration et la temprature, il peut tre souvent
difficile prdire.
Spectroscopie RMN du carbone
La puissance et lutilit de la spectroscopie HRMN en tant quoutil pour lanalyse
structurale sont trs importantes. Malheureusement, quand des portions significatives
dune molcule ne contiennent pas de liaisons CH, il nen sort pas dinformation trs
utile. Par exemple, les composs polychlors tels que le chlordane, les composs polycarbonyls comme lacide croconique et les composs possdant des triples liaisons
(pour ces trois types dexemples, voir les carbones en orang dans les structures de
la figure ci-dessous).
Figure 30 : Molcules dont les structures ne peuvent tre identifies par

HRMN.
Mme lorsque de nombreux groupements CH sont prsents, interprter sans ambiguts un spectre de HRMN nest pas toujours possible. Le diagramme suivant illustre
trois paires disomres (A et B), lesquels montrent des spectres HRMN similaires.
Mme si la dtermination prcise des dplacements chimiques devrait permettre de
distinguer la premire paire de composs, la deuxime et la troisime paires (encadres
en rouge et vert) pourrait tre difficiles identifier par cette seule technique.
Figure 31 : Molcules qui pourraient ne pas tre distingues par HRMN

Ces difficults pourraient tre facilement rsolues si les atomes de carbone dune
molcule pouvaient tre dtects au mme titre que les atomes dhydrogne. Puisque lisotope majeur du carbone (12C), ne possde pas de spin, cette option nest pas
raliste. Heureusement, le carbone possde deux isotopes stables dans la nature, dont
1,1% de carbone 13C. Ce dernier a un spin I = et donc, en principe, il devrait tre
possible de mener une exprience de RMN de carbone. Si lisotope 13C tait naturellement plus abondant dans tous les composs, la RMN de proton deviendrait bien
plus complique cause du couplage frquent de 13C et de 1H en liaisons simples.
Problmes techniques associs la RMN du carbone:
1. Labondance de 13C dans un chantillon est trs faible (1,1%), ainsi des chantillons plus concentrs sont requis.
2. Le noyau de 13C est plus de cinquante fois moins sensible quun proton dans
lexprience de RMN, cette difficult sajoutant la prcdente.
3. Les atomes H lis latome de 13C divisent son signal RMN de 130 270 Hz,
compliquant le spectre.
Ces problmes peuvent tre rsolus au moyen de deux techniques :
Le dcouplage htro-nuclaire lors duquel les signaux de dcouplage par lhydrogne
nuclaire sont retirs du spectre de carbone ainsi que la technique dimpulsion dans
laquelle une impulsion est utilise pour recueillir plusieurs signaux dun seul atome
de carbone sont des mthodes additives pour donner un signal plus fort.
Lorsquacquis de cette manire, le spectre RMN du carbone dun compos montre

un unique signal net pour chaque carbone structuralement distinct dans une molcule
(rappel: les couplages avec protons ont t enlevs du spectre). Le spectre du camphre, indiqu ci-dessous, est un exemple typique. Une comparaison avec le spectre
HRMN pourrait permettre de voir les caractristiques avantageuses de la RMN du
carbone. La dispersion des dplacements chimiques de 13C est prs de vingt fois plus
grande que pour les protons, et cela ajout au manque de signaux de dcouplage fait
en sorte que chaque carbone structuralement distinct produira vraisemblablement un
signal individuel. Les seuls signaux clairement identifiables dans le spectre de RMN
du proton sont ceux des groupements mthyles. Les protons restants ont des signaux
de rsonance entre 1,0 et 2,8 ppm relativement au TMS et ils se chevauchent mal
cause du dcouplage spin-spin.
Figure 32 : RMN du carbone 13 du camphre

Contrairement la HRMN, la force relative des signaux de RMN du carbone nest pas
normalement proportionnelle au nombre datomes gnrant chacun de ces signaux.
cause de cela, le nombre de signaux distincts et leurs dplacements chimiques sont les
informations les plus importantes fournies par un spectre de carbone. La distribution
gnrale des dplacements chimiques du carbone associe aux diffrents groupes
fonctionnels est rsume dans la chartre ci-dessous. Gardez lesprit que ces intervalles de valeurs sont des estimations, et peuvent ne pas englober tous les composs
dune classe donne. Notez aussi que ltendue sur plus de 200 ppm de valeurs de
dplacements chimiques montre ici est bien plus grande que celle observe pour les
dplacements de lhydrogne.
Intervalles de dplacements chimiques du 13C* ( champ magntique faible)
*Pour des chantillons en solution de CDCl3. Lchelle de est relative au TMS,

pour lequel = 0.
Figure 33 : Intervalles de dplacements chimiques
valuation formative
1) Le spectre 60 MHz montr en figure 32 est celui du C10H13NO2. Les caractristiques significatives du spectre IR sont llongation CO et un pic
dlongation NH. Dduisez la structure de ce compos partir des donnes
de dplacements chimiques, de courbe dintgration et de couplages du spectre.
Figure 34 : C10H13NO2
2) Le spectre RMN du carbone 13 dun des isomres de lactate de butyle
(C4H9OCOCH3) a montr des signaux 22, 28, 80 et 170. Quelle est sa
structure ? Pourquoi lintensit du pic 28 est-elle beaucoup plus intense
que celle 22 (dun facteur denviron huit) ? Comment la multiplicit et
lintensit du signal sur un spectre HRMN de ce compos confirmeraient vos
dductions ?
Unit VI

Expliquer comment se produit le phnomne du spectre de masse

Expliquer les rgles suivies par la fragmentation dans un spectre de masse
Faire la corrlation entre le spectre de masse et des lments structurels spcifiques dans une molcule
Utiliser un spectre de masse pour identifier diffrentes catgories de molcules
Utiliser un spectre de masse haute rsolution et un calculateur de masse
molculaire afin didentifier des lments structurels
Rviser les diffrentes parties dun spectromtre de masse et leurs fonctions

http://www.cem.msu.edu/~reusch/VirtualText/Spectrpy/spectro.htm#contnt
http://riodb01.ibase.aist.go.jp/sdbs/cgi-bin/cre_index.cgi?lang=eng
http://ull.chemistry.uakron.edu/analytical/Mass_Spec/index.html/
Un spectromtre de masse identifie les composs en lionisant et en le brisant en
morceaux appels fragments (ou ions-fragments), et en analysant ces fragments en
les faisant passer travers un analyseur. Lanalyseur classe les ions-fragments selon
les rapports de leur masse leur charge. Les rsultats de lanalyseur sont donns sous
forme dun spectre de masse.
Un petit chantillon du compos est ionis, habituellement en cations, par arrachement
dlectrons (par la source dions).
Les ions sont classs et spars selon leur masse et leur charge (par lanalyseur de
masse).
Les ions spars sont ensuite dtects et compts, et les rsultats sont affichs sur
un ordinateur.
Parce que les ions sont trs ractifs (ils peuvent ragir avec les molcules environnantes), lionisation et lanalyse se font dans une enceinte o lon ralise un vide
pouss.
Source dions
Dans la source dions, les molcules de lchantillon sont bombardes par des
lectrons de haute nergie venant dun filament chauff et acclrs par un champ
lectrique. Les ions forms la suite de ce bombardement sont pris part par une
plaque attractive charge, et acclrs vers dautres lectrodes qui ont des fentes o
les ions passent sous forme de faisceau. Quelques-uns de ces ions se fragmentent en
cations plus petits ou en fragments neutres. Par la suite, la molcule donne un grand
nombre de cations qui forment un faisceau ionique.
Isotopes
Puisque le spectromtre de masse spare et dtecte des ions de diffrentes masses, il
distingue facilement les diffrents isotopes dun lment donn. Cela se manifeste plus
explicitement pour les composs contenant du brome et du chlore, tel quillustr dans
les exemples suivants. Puisque les molcules de brome ont seulement deux atomes,
le spectre de gauche sera surprenant si lon sattendait une masse atomique unique
de 80 units de masse atomique (u.m.a.) pour le brome. Les cinq pics du spectre
montrent clairement que le brome, dans la nature, consiste en un mlange de presque
moiti-moiti disotopes de masses de 79 et 81 respectivement. Ainsi, la molcule
de brome peut tre compose de deux atomes 79Br (masse de 158 u.m.a.), de deux
atomes de 81Br (162 u.m.a.) ou encore de la combinaison la plus probable: 79Br-81Br
(160 u.m.a.). La fragmentation du Br2 en deux cations de brome donne alors deux
pics de taille gale 79 et 81 u.m.a.
Dibrome (Br2)
Chrorure de mthylne
Chlorure de vinyle
(chlorothylne)
Figure 35 : Spectre de masse du brome, du chlorure de mthylne et du chlorure
de vinyle
Le deuxime et le troisime spectre montrent que le chlore est aussi compos de deux
isotopes, le plus abondant ayant une masse de 35 u.m.a, et lisotope mineur ayant
une masse de 37 u.m.a. La composition isotopique prcise de ces deux halognes
est la suivante:
Chlore : 75,77 % 35Cl et 24,23 % 37Cl
Brome : 50,50 % 79Br et 49,50 % 81Br
La prsence de chlore ou de brome au sein dune molcule ou dun ion est facilement
dtecte en observant lintensit des rapports des ions diffrant de 2 units de masse.
Dans le cas du chlorure de mthylne, lionisation molculaire consiste en trois pics de
rapports m/z de 84, 86 et 88 units de masse, et leurs intensits dcroissantes peuvent
tre calcules partir des abondances naturelles en pourcentages mentionnes ci-haut.
La perte dun atome de chlore donne lieu deux ions-fragments isotopiques m/z
= 49 et 51 u.m.a., ce qui montre clairement la prsence dun seul atome de chlore
(84-35=49, par exemple). Le fluor et liode, au contraire, sont mono-isotopiques. Ils
ont des masses de 19 et de 127 u.m.a. respectivement. Remarquez que la prsence
dhalognes au sein dune molcule ou dun ion-fragment ne change pas la rgle de
masse pair-impair mentionne plus haut.
Deux autres lments communs ont des signatures isotopiques utiles: le carbone,
dont 1,1 % de labondance naturelle est sous forme de 13C, et le soufre, qui a les
isotopes 33S et 34S prsents naturellement 0,76 % et 4,22 % respectivement. Par
exemple, le petit pic m/z = 99 dans le spectre du 4-mthyl-3-pentne-2-one est caus
par la prsence dun unique atome de 13C dans la molcule. Bien que de moindres
importances, 15N et 18O apportent aussi une mince contribution la masse des ions
satellites contenant ces lments.
Patrons de fragmentation
La nature des fragments fournit un indice de la structure molculaire, mais si lion
molculaire (pic majoritaire) a une dure de vie de moins de quelques microsecondes, il sera impossible de lobserver. La plupart des composs organiques donnent
des spectres de masses qui incluent lion molculaire. Il est possible de changer les
conditions dionisation afin de parvenir observer lion molculaire pour les composs o celui-ci ne sort pas sur le spectre.
Parmi les composs organiques simples, les ions molculaires les plus stables sont
ceux provenant de composs aromatiques (cycliques), de systmes conjugus lectrons et de cycloalcanes. Les alcools, les thers et les alcanes hautement ramifis
montrent une grande tendance se fragmenter. Les fragments stables apparatront
dans le spectre final.
Hydrocarbures
Le spectre de masse du dodcane illustre le comportement dun alcane non ramifi.
Puisquil ny a pas dhtroatomes dans cette molcule, il ny a pas dlectrons
de valence non-liants. En Consquence, le caractre du radical cationique de lion
molculaire (m/z = 170) est dlocalis sur tous les liens covalents. La fragmentation
des liaisons CC a lieu parce que ces liaisons sont gnralement plus faibles que
les liaisons CH, et cela produit un mlange de radicaux alkyles et de carbocations
alkyles. La charge positive rside normalement sur le fragment le plus petit, une srie
homologue de cations hexyles (m/z = 85), pentyles (m/z = 71), butyles (m/z = 57),
propyles (m/z = 43), thyles (m/z = 29) et mthyles (m/z = 15) est donc observe.
Ces cations sont accompagns dune srie des carbocations alcnyles correspondant
(m/z = 55, 41 et 27) forms par la perte de 2 H. Tous les ions-fragments significatifs
de ce spectre sont des ions nombre pair dlectrons. Dans la plupart des spectres
dalcanes, les ions propyle et butyle sont les plus abondants.
Htroatomes
La prsence dun groupement fonctionnel, plus particulirement si celui-ci possde
un htroatome Y sans lectron de valence non-liant (Y = N, O, S, X etc.), peut altrer
dramatiquement le patron de fragmentation dun compos. Cette influence est prsume se produire cause de la localisation de la composante radical-cation de lion
molculaire sur lhtroatome. Aprs tout, il est plus facile denlever (dioniser) un
lectron non-liant quun lectron impliqu dans une liaison covalente. En localisant
la partie ractive, certains processus de fragmentation seront favoriss. Ceux-ci sont
rsums dans le diagramme ci-dessous, o lencadr vert du haut montre des exemples
de tels ions molculaires localiss . Les deux premires voies de fragmentation
mnent des ions nombre pair dlectron et la troisime voie, llimination, mne
un ion avec un nombre impair dlectrons. Notez lutilisation de diffrentes flches
courbes dmontrant le dplacement dun unique lectron comparativement aux
dplacements de paires dlectrons.
Figure 36 : Clivages dhtroatomes.

Adapt de Spectroscopy http://www.cem.msu.edu/~reusch/VirtualText/Spectrpy/spectro.htm# Dernier accs en fvrier 2008.
Les distributions de charges montres ci-dessus sont courantes, mais pour chaque processus de fragmentation la charge peut quelquefois tre porte par dautres composs
(neutres), et les deux types dions sont observs. Des trois ractions de fragmentation
dcrites ici, lalpha- fragmentation est gnralement favorise pour les composs
azots, oxygns et sulfurs. En effet, dans le spectre du 4-mthyl-3-pentne-2-one
et du N,N-dithylmthylamine montrs prcdemment, les ions-fragments majeurs
viennent dalpha-fragmentation. Plus dexemples de linfluence des groupes fonctionnels sur la fragmentation sont fournis par une slection de composs qui peuvent
tre examins en cliquant le bouton de gauche plus bas.
Spectre empreinte digitale
La complexit des patrons de fragmentation a men des spectres de masse utiliss en
tant quempreintes digitales pour identifier des composs. Lidentification de polluants
environnementaux, de rsidus de pesticides sur les aliments et de substances illicites
sont quelques exemples de cette application. Des chantillons extrmement petits
dune substance inconnue (un microgramme ou moins) sont suffisants pour une telle
analyse. Le spectre de masse de la cocane ci-dessous montre comment un laboratoire
mdicolgal peut dterminer la nature dun chantillon de drogue inconnu. Mme si
une fragmentation considrable sest produite au sein des molcules, plusieurs des
ions les plus abondants (identifis par les numros en magenta) peuvent tre reconnus
laide des trois mcanismes de clivages expliqus plus haut.
Figure 37 : Spectre de masse empreinte digitale de la cocane.

Les ions-fragments nombre impair dlectrons sont souvent forms par des rarrangements caractristiques dans lesquels les fragments neutres stables sont perdus. Les
mcanismes pour quelques-uns de ces rarrangements ont t identifis en suivant le
cours disotopes marqus dans les ions molculaires.
valuation formative
1) Un compos organique A est compos de carbone, dhydrogne et dazote, le
carbone constituant 60 % de la masse. Le spectre de masse montre un ion molculaire m/z = 112 u.m.a. Rpondez aux questions suivantes:
a) crivez une formule molculaire plausible pour le compos A: C H N
b) Combien de cycles et de doubles liaisons doivent tre prsents dans le compos
A?
2) Un autre compos, nomm B, contient du carbone, de lhydrogne et de loxygne. Son spectre de masse montre galement un ion molculaire m/z = 112
u.m.a.
a) crivez une formule molculaire plausible pour le compos B, sachant que
ce compos contient des triples liens, mais pas de cycles: C H O
3) Les compos C est compos seulement de carbone, doxygne et dhydrogne,
et montre un ion molculaire m/z = 180 u.m.a. sur le spectre de masse. Le
carbone compte pour 60 % de la masse molculaire.
a) crivez une formule plausible pour le compos C:
b) Combien de cycles et de doubles liaisons doivent tre prsents dans le compos

C?
XV. Synthse du module

Dans lunit I, les mthodes de sparation enseignes lcole, qui sont lextraction
au solvant et la distillation, ont t approfondies. Pour chacune, les techniques ont
t dfinies, les conditions dapplication de chaque mthode ont t explicites et les
quipements ncessaires pour excuter chacune sont aussi prsents. Plus loin dans
lunit, les techniques de chromatographie sont introduites en dbutant par la thorie
gnrale, incluant diffrents types dlutions (dveloppements). Les principaux types
de chromatographie ont t introduits, incluant la chromatographie sur papier, sur
couche mince ; lquipement ncessaire leur excution a aussi t tudi. Ensuite,
la chromatographie sur colonne a t introduite, linstrumentation galement tudi,
incluant diffrents types de colonnes et de dtecteurs. Dans la dernire partie du module, la chromatographie liquide a t aborde, et la chromatographie liquide haute
performance (CLHP) prsente en dtails incluant diverses applications de celles-ci,
linstrumentation ncessaire et les mthodes majeures de sparation par CLHP.
Dans lunit II, les techniques lectrochimiques les plus courantes sont introduites,
La partie relative la potentiomtrie englobe la thorie de la potentiomtrie et ses
applications pour la mesure du pH utilisant llectrode de verre, llectrode slective ionique ou llectrode rdox, en mettant laccent sur leur application dans les
stations de titrage automatiques. La seconde partie de lunit discute diffrentes
techniques de voltampromtrie en dbutant par une revue gnrale de la thorie de
voltampromtrie, suivie par les techniques de polarographie bases sur llectrode
gouttelettes de mercure. Lunit se termine par une discussion sur les techniques
de voltampromtrie cyclique et redissolution anodique.
Les techniques de spectroscopie et de spectromtrie atomique sont le sujet de lunit
III. La spectroscopie est introduite avec un rappel des diffrentes composantes du
spectre lectromagntique, leurs nergies relatives, les termes communs en spectroscopie et les units de mesures. Linteraction entre le rayonnement et la matire est
tudie en profondeur ainsi que lutilisation de ces techniques pour lanalyse qualitative et quantitative autant en spectroscopie molculaire et quatomique. La dernire
dfinit trois mthodes majeures de spectroscopie atomique, le phnomne menant
leur existence, et comment elles peuvent tre utilises pour lanalyse qualitative et
quantitative. Lunit se termine en faisant un survol de linstrumentation.
Spectroscopie molculaire I discute de la spectroscopie UV-visible et IR, en dbutant
par les phnomnes de base de chacune. Les transitions lectroniques donnant lieu aux
spectres UV-visibles sont tudies, ainsi que la corrlation possible avec les groupes
fonctionnels spcifiques. Les facteurs affectant labsorption des diffrents groupements sont identifis. Des exemples dutilisation de la spectroscopie UV-visible en
identification structurale sont prsents. Cette tude se termine par lapplication de
cette technique en analyse quantitative et par linstrumentation ncessaire. La dernire
partie de lunit prsente la spectroscopie IR et le phnomne la sous-tendant. Ceci est
suivi de ltude des pics dabsorption typiques des groupements majeurs fonctionnels
ainsi que la corrlation entre le spectre IR et la structure molculaire.
Spectroscopie molculaire II se rapporte la rsonance magntique nuclaire.
Lunit dbute par la description du phnomne de RMN, les proprits ncessaires
pour quun noyau puisse tre utilis en RMN et les influences de lenvironnement
structurel sur la technique. Lunit inclut lexplication de la corrlation de la RMN
du proton avec les lments fonctionnels spcifiques de la molcule, les interactions
spin-spin, et la corrlation entre lamplitude des pics et le nombre datome dhydrognes ainsi que la relation entre la position des pics, lenvironnement molculaire et
les groupes fonctionnels.
Lunit aborde ensuite la RMN du carbone 13 en mettant laccent sur la technique
en elle-mme, sur ses limites en ce qui a trait linformation fournie, et comment la
RMN du carbone-13 peut tre un complment de la RMN du proton dans la dtermination de la structure dune molcule.
La spectromtrie de masse dbute avec les principes sous-tendant cette technique,
et la manire dobtenir un spectre. Ceci est suivi par les rgles de fragmentation,
comment la prsence disotopes affecte cette dernire et pour finir, on discute de la
corrlation entre les pics du spectre et la structure de la molcule tudie.
XVI. valuation sommative

1) Calculez lnergie des photons pour un rayonnement de longueur donde de :
a) 635 nm (dans le visible)
b) 18, nm (dans lultra-violet)
c) 58,6 mm (dans linfra-rouge)
2) Le spectre RMN du carbone 13 dun des isomres de lactate de butyle (C4H9OCOCH3) a montr des signaux 22, 28, 80 et 170. Quelle est sa structure ?
Pourquoi lintensit du pic 28 est-elle beaucoup plus intense que celle 22
(dun facteur denviron huit) ? Comment la multiplicit et lintensit du signal
sur un spectre HRMN de ce compos confirmeraient vos dductions ?
3) Pour une sparation chromatographique typique donnant des pics nets (rsolution
ligne de base = 1,5), sachez que N = 3600, k = 2, et a = 1.15. Indiquez les effets
obtenus si lon change ces paramtres, un la fois:
a) N = 1600
b) k' = 0,8
c) a = 1,10
4) Afin de rduire la hauteur des plateaux thoriques et damliorer la rsolution,
quels moyens peut-on prendre ? Quels inconvnients viennent avec chaque
approche ?
5) a) Pourquoi les spectres atomiques sont-ils diffrents des spectres molculaires ?

b) Pourquoi les spectres atomiques de Ca et de Ca+ sont-ils diffrents ?
c) Quelle diffrence y a-t-il entre la spectroscopie atomique dmission et la

spectroscopie atomique dabsorption ?
6) Un liquide ayant une plaisante odeur sucre (point dbullition = 101C) donne
le spectre IR ci-dessous et le spectre MS montr un peu plus bas. Dterminez la
structure de ce compos.
7) Pour chacun des composs A F, indiquez le nombre de groupes carbone

structuralement distincts, et galement le nombre de groupes distincts datomes
dhydrognes quivalents. Entrez un nombre de 1 9 dans chacune des botes
cet effet.
A Nombre datomes de carbone distincts :

Nombre de groupes distincts dhydrogne :
B Nombre datomes de carbone distincts :
C Nombre datomes de carbone distincts :

D Nombre datomes de carbone distincts :
E Nombre datomes de carbone distincts :
F Nombre datomes de carbone distincts :
XVII. Auteur du module

Vincent Makokha a fait ses tudes lUniversit Makerere (Makerere University
Kampala). Il y a obtenu un diplme de baccalaurat en sciences (B.Sc.) en chimie
industrielle en 1991 ainsi quun diplme de matrise (M.Sc.) en chimie analytique
en 2000. Il a ensuite travaill en industrie et dans diverses organisations industrielles
et en recherche en tant que spcialiste en chimie analytique. Plus tard, il a rejoint
lUniversit Kyambogo o il enseigne la chimie thorique et pratique.
Vincent est mari Florence ; ils ont deux enfants nomms Collette et Vivienne.
Trucs dapprentissage
Ce module a pour but de prsenter aux apprenants les techniques analytiques instrumentales en chimie les plus courantes.
Les trois objectifs principaux sont:

Faire connatre les principes sous-tendant ces techniques analytiques

Apporter les habilets ncessaires pour linterprtation des donnes analytiques
gnres par les divers instruments
Permettre aux apprenants de mettre profit leurs nouvelles connaissances et
habilets en sexerant laide de rsolution de problmes de chimie.
Pour les tudiants qui nen sont pas encore aux tudes gradues, il peut tre ardu de
composer avec le niveau de complexit des informations et habilets de ce module.
Pour ce module, maintes ressources sont suggres et plusieurs dentre elles sont
ddies la pratique professionnelle et les tudiants gradus et sont donc plus ou
moins pertinentes pour nous. Le matriel dtude a donc t slectionn et prsent
dans une forme simple afin de fournir une connaissance efficace de la matire
ltude, laissant la possibilit aux tudiants trs enthousiastes dapprofondir leurs
connaissances tout en ne dsaronnant pas ltudiant moyen.
Le support de base lenseignement est le matriel prsent dans le module, lequel
forme le squelette du cours. Les textes recommands et les ressources en ligne sont
ncessaires pour approfondir les connaissances relies au module, car elles fournissent
plus de dtails et des pratiques supplmentaires aux apprenants.
La tche principale du professeur de formation en ligne est dencourager lapprenant
et de le faire progresser travers chacune des activits dapprentissage. Chaque unit
devrait tre examine en entier et matrise avant le passage lunit suivante.
Le matriel dtude devrait prfrablement tre trait dans lordre de prsentation
du module.
XIII. Rfrences
1. Crow D.R. : Principles and applications of Electrochemistry Chapman and
Hall, 2nd Edition 1996
2. Galen Wood Ewing Instrumental methods of chemical analysis Publisher:
MacgrawHill. 1986
3. Braun. D Robert Introduction to chemical Analysis Publisher: McGrawHill
1st Edition 1982.
4. Heslop R.B, Wild Gillian M.. S I Units in chemistry Applied Science Publishers, 1971.
5. Hobarth Willard, Lynne Merritt, John Dean, and Frank Settle, Instrumental
Methods of Analysis Wadsworth Publishing Company; 7 Sub edition (February
1988)
XIX. Structure du document

Document Microsoft Word:
Procds de sparation et techniques lectro-analytiques et spectrochimiques
- version finale.doc
Document en format PDF:
Procds de sparation et techniques lectro-analytiques et spectrochimiques
- version finale.pdf
Spectomtrie dabsorption atomique (SAA)
Instruments en absorption atomique
Distillation
Spectre lectromagntique
Niveaux dnergie
Chromatographie liquide haute performance (CLHP, HPLC)
Spectroscopie infra-rouge
lectrodes slectives ioniques
Potentiomtrie
Sparation et chromatographie
SPARATION, TECHNIQUES LECTROANALYTIQUES ET

SPECTROMTRIQUES
Lectures Obligatoires
Source: Wikipedia.org
Table des matires

Chromatographie .............................................................................................................................5
Dfinitions ....................................................................................................................................5
tymologie ...................................................................................................................................5
Histoire ........................................................................................................................................5
Principe ........................................................................................................................................6
Exemple : la chromatographie sur papier ....................................................................................7
tapes d'une analyse quantitative ................................................................................................8
Grandeurs caractristiques en analyse chromatographique sur colonne ......................................9
Vitesses de dplacement des soluts ..........................................................................................9
Facteur de capacit ................................................................................................................. 10
largissement des bandes et efficacit d'une colonne .............................................................. 11
Rsolution de la colonne ......................................................................................................... 12
Mthodes d'optimisation ........................................................................................................ 12
Chromatographie en phase liquide haute performance .................................................................. 12
Principe ....................................................................................................................................... 13
Appareillage et fonctionnement .................................................................................................. 13
La pompe ................................................................................................................................ 13
L'injecteur ............................................................................................................................... 14
La colonne ............................................................................................................................... 14
Le dtecteur ............................................................................................................................ 15
Les diffrentes phases stationnaires ............................................................................................ 15
Phase normale ......................................................................................................................... 15
Phase inverse .......................................................................................................................... 15
Paramtres de chromatographie .................................................................................................. 16
Caractristiques gomtriques de la phase stationnaire ........................................................... 16
Caractristiques opratoires de la phase mobile ....................................................................... 16
Grandeurs caractristiques en chromatographie .......................................................................... 17
Spectroscopie infrarouge ................................................................................................................ 18
Base et thorie ............................................................................................................................ 18
Prparation de l'chantillon ....................................................................................................... 19
Mthode classique ...................................................................................................................... 20
2
Aperu des longueurs d'ondes d'absorption pour les molcules organiques ............................... 21
Usages et applications ................................................................................................................ 22
Effets isotopiques ....................................................................................................................... 22
Spectroscopie infrarouge transforme de Fourier ................................................................... 23
Spectroscopie infrarouge en deux dimensions ............................................................................ 23
Analyse de corrlation par spectroscopie infrarouge bidimensionnelle ................................... 24
Spectroscopie infrarouge bidimensionnelle non-linaire ......................................................... 24
Spectroscopie rotationnelle ............................................................................................................. 25
Comprendre un spectre de rotation ............................................................................................. 26
Classification des molcules selon leur comportement rotationnel ........................................... 26
Structure d'un spectre de rotation ............................................................................................ 27
Dtermination exprimentale des spectres .................................................................................. 32
Applications ................................................................................................................................ 32
Spectromtrie de masse ................................................................................................................... 33
Structure d'un spectromtre de masse ......................................................................................... 33
A quoi sert la spectromtrie de masse ? ....................................................................................... 34
La source d'ionisation .................................................................................................................. 36
L'ionisation lectronique (EI) .................................................................................................... 36
L'ionisation chimique (CI) ......................................................................................................... 36
L'ionisation par bombardement d'atomes rapides (FAB) ........................................................... 37
L'ionisation par lectronbulisation (lectrospray) (ESI) ............................................................ 37
L'ionisation chimique pression atmosphrique (APCI) ............................................................ 38
La dsorption-ionisation laser assiste par matrice (MALDI) ..................................................... 38
L'analyseur .................................................................................................................................. 39
L'analyseur quadripolaire ......................................................................................................... 39
Le pige ionique quadripolaire ("trappe d'ions") ....................................................................... 41
Le temps de vol ........................................................................................................................ 41
Le FT-ICR .................................................................................................................................. 43
L'orbitrap ................................................................................................................................ 44
L'analyseur secteur magntique ............................................................................................ 45
Le dtecteur ................................................................................................................................ 47
La spectromtrie de masse en tandem (MS/MS) .......................................................................... 47
3
Le triple quadriple .................................................................................................................. 48

MSn en pige quadripolaire ("trappe d'ions") ............................................................................ 49
Hybride ................................................................................................................................... 49
Chromatographie
La chromatographie est une technique d'analyse qualitative et quantitative de la chimie
analytique dans laquelle l'chantillon contenant une ou plusieurs espces est entran par un
courant de phase mobile (liquide, gaz ou fluide supercritique) le long d'une phase stationnaire
(papier, glatine, silice, polymre, silice greffe etc). Chaque espce se dplace une vitesse
propre dpendant de ses caractristiques et de celles des deux phases.
La chromatographie est aussi utilise dans les laboratoires d'analyses mdicales par exemple
pour valuer la quantit de vitamines dans le sang. Elle est aussi trs utilise dans le domaine
sportif pour savoir si un athlte s'est dop. La chromatographie est galement utilise pour
analyser les substances (poudres, liquides...) prleves sur une scne de crime dans le cadre
d'investigations en police scientifique.
La chromatographie analytique est utilise pour identifier ou doser les composs chimiques d'un
mlange et apprcier leur concentration.
La chromatographie prparative est utilise pour purifier assez de produit pour d'autres
utilisations. Son but est d'obtenir de la substance ; c'est pourquoi, toute chelle, elle implique de
collecter des fractions.
Dfinitions []
Chromatographie : mthode physique de sparation base sur les diffrences d'affinits des
substances analyser l'gard de deux phases, l'une stationnaire ou fixe, l'autre mobile. Selon la
technique chromatographique mise en jeu, la sparation des composants entrans par la phase
mobile, rsulte soit de leur adsorption et de leur dsorption successives sur la phase stationnaire,
soit de leur solubilit diffrente dans chaque phase.
Phase stationnaire : phase fixe soit sur la surface intrieure d'une colonne soit sur une surface
plane.
Phase mobile : phase qui se dplace travers la phase stationnaire, en entranant les analytes. La
phase mobile ne doit pas interagir avec la phase stationnaire mais uniquement avec les analytes.
Chromatogramme : graphique dune fonction de la concentration en analyte en fonction du
temps (ou du volume) dlution.
tymologie []
Le mot chromatographie vient du grec ancien Khrma qui signifie "couleur" et Graphein qui
signifie "crire"
Histoire []
5
Le botaniste russe Mikhail Tswett (1872-1919) fut, en 1906, le premier utiliser le terme
chromatographie.
partir de 1903, Tswett utilisa des colonnes d'adsorption pour sparer des pigments de plantes.
On spcula donc l'tymologie du mot chromatographie partir du grec khrma- pour couleur
et donc pigment. Toutefois, Tswett ne donna jamais cette explication; mais tswett est le mot
russe pour couleur .
En 1952, Martin et Synge reurent le prix Nobel de chimie pour leur invention de la
chromatographie de partage.[1]
Principe []
La chromatographie repose sur l'entranement d'un chantillon dissous par une phase mobile
travers une phase stationnaire. Celle-ci retient plus ou moins fortement les substances contenues
dans l'chantillon dilu selon l'intensit des forces d'interactions de faible nergie (comme les
forces de Van der Waals, les liaisons hydrogne, etc.) ralises entre les diffrentes espces
molculaires et la phase stationnaire.
Les diffrents composants de l'chantillon ont gnralement une vitesse caractristique qui
permet de les sparer, voire de les identifier. Cette vitesse de sparation est fortement dpendante
de la nature de la phase mobile et de la phase stationnaire.
Souvent, l'chantillon est analys par comparaison avec des substances dj connues dans
l'chantillon ou par comparaison avec les rsultats de l'analyse d'une solution-talon (solution
commerciale contenant des substances connues, des concentrations bien connues). Ces
substances servent de rfrences et permettent d'identifier ou de doser chaque espce par
comparaison des vitesses de sparation (et ventuellement d'autres renseignements donns par la
dtection). Il s'agit de chromatographie analytique.
Dans d'autres cas, on se contente de sparer les fractions, de les rcolter pour les identifier par
d'autres techniques: c'est la chromatographie prparative.
Il existe de nombreux types de chromatographie ; on peut notamment les classer selon la nature
de la phase mobile :
la chromatographie sur couche mince (CCM ou TLC en anglais) ;

la chromatographie en phase gazeuse (CPG ou GC en anglais) galement appele CPV
(chromatographie en phase vapeur) ;
la chromatographie en phase liquide (CPL ou LC en anglais) ;
la chromatographie en phase liquide haute performance (CLHP ou HPLC en anglais) ;
la chromatographie en phase supercritique (CPS ou SFC en anglais).
On peut aussi les nommer selon les interactions dveloppes par la phase stationnaire :
la chromatographie d'adsorption/d'affinit ;
6
la chromatographie de partage ;
la chromatographie change d'ions ;
la chromatographie chirale (qui est, soit de la CPG, soit de la CPL) ;
la chromatographie d'exclusion strique (CES ou SEC en anglais) ;
Ou selon le support de la phase stationnaire :
la chromatographie sur colonne (regroupant notamment HPLC et CPG) : la phase

stationnaire est dans un tube troit et la phase mobile progresse par gravit ou diffrence
de pression ;
la chromatographie planaire[2] (qui recouvre CCM et chromatographie sur papier) : la
phase stationnaire est sur la surface d'un support plat (CCM) ou dans une feuille de
cellulose poreuse (chromatographie papier) et la phase mobile se dplace par capillarit
ou par gravit.
Enfin, un nouveau type de chromatographie commence trouver des applications : la

chromatographie 2 dimensions.
Exemple : la chromatographie sur papier []
schma d'une chromatographie sur papier
Rsultat d'une chromatographie de base sur papier filtre. Fait avec des feuilles d'pinard
La chromatographie sur papier est une technique de chromatographie en phase liquide.
Pour effectuer une telle sparation, une petite quantit de la ou des solutions analyser est
dpose sur le bord d'une bande de papier de chromatographie. Cet chantillon est adsorb par le
papier ; ce qui signifie que les molcules interagissent avec ce dernier et qu'elles auront tendance
rester au mme endroit.
Le papier est ensuite tremp dans un solvant (luant) comme un mlange eau/thanol et plac
dans un rcipient ferm. Pendant que le solvant (luant) monte le long du papier par capillarit, il
rencontre l'chantillon et l'entrane.
Les diffrentes substances constituant l'chantillon migrent diffrentes vitesses selon qu'elles
interagissent plus ou moins fortement avec le papier.
La chromatographie sur papier demande un certain temps (gnralement plusieurs heures). Une
fois l'opration termine, gnralement quand le front de solvant (luant) est presque arriv en
haut du papier, le papier est retir de la cuve et on laisse vaporer le solvant. Le rsultat est
appel chromatogramme.
Le chromatogramme est utilis pour comparaison avec d'autres analyses effectues sur des
substances connues et prises dans des conditions identiques, pour identifier les substances de
l'chantillon. Les substances peuvent tre identifies en calculant la valeur Rf qui peut tre
compare celles se trouvant dans les tables. Cette valeur est calcule de la faon suivante : Rf =
(distance parcourue par l'chantillon) / (distance parcourue par le solvant)
Il y a plusieurs faons d'identifier les endroits o se trouvent les produits ainsi spars :
1. les produits sont colors, il n'y a rien de spcial faire.
2. les produits sont fluorescents, on peut les identifier sous une lampe ultraviolette.
3. sinon, il faut utiliser un rvlateur qui ragira chimiquement avec les produits (en les
dtruisant) et dont le rsultat sera color.
Pour sparer des mlanges complexes de substances similaires, il peut tre utile d'employer la
chromatographie deux dimensions. Celle-ci s'effectue en deux tapes entre lesquelles on
change de solvant et on tourne le papier de 90. Les interactions dveloppes par le nouveau
solvant seront diffrentes, ce qui a la sparation dans cette deuxime dimension et permettra une
meilleure sparation globale.
La chromatographie sur papier peut aussi constituer une technique micro-prparative : pour
rcuprer les produits ainsi spars, les portions du papier o ils se situent sont dcoupes et
redissoutes ensuite. Les quantits rcuprables sont de l'ordre du milligramme ou moins.
tapes d'une analyse quantitative []

Cette section est vide, pas assez dtaille ou incomplte. Votre aide est la bienvenue !
1. Choix de la mthode
o Analytes tudier : nature et nombre
o Nombre danalyses
o Exactitude recherche
2. chantillonnage
3. Prparation de lchantillon
8
o
o
o
o
Mise en solution
Extraction des analytes de lchantillon
Concentration
Rendement de lextraction
4. liminer les interfrences
o Effet de matrice
o Purification de lextrait
5. Analyse chromatographique
o Directe
o Aprs traitement (mthylation, sylilation)
o talonnage
o Linarit
6. Calcul des rsultats
o Exactitude
o Evaluation dincertitude
Grandeurs caractristiques en analyse chromatographique

sur colonne []
Vitesses de dplacement des soluts []
Le pouvoir sparateur dune colonne est fonction des vitesses relatives dlution. Ces vitesses
sont donc fonction du coefficient de distribution des soluts entre les 2 phases :
Coefficient de distribution :
o CS est la concentration du solut en phase stationnaire et CM la concentration du solut en

phase mobile.
Temps de rtention tR : temps qui scoule entre linjection de lchantillon et lapparition dun
pic de solut sur le dtecteur dune colonne chromatographique.
Temps mort tM : temps ncessaire pour quune espce non retenue par la phase stationnaire
traverse la colonne.
Vitesse linaire moyenne de dplacement du solut :
o L est la longueur de la colonne.

Vitesse linaire moyenne de la phase mobile :
Relation entre vitesse de dplacement et coefficient de distribution :
o VS et VM sont les volumes de soluts respectivement dans la phase stationnaire et mobile

(aussi appel volume mort), or ces volumes sont proportionnels aux volumes des 2 phases
respectivement, ils peuvent donc tre estims si on connat la structure gomtrique de la
colonne.
Temps rduit t'R :
t'R = tR tM
Volume rduit V'R :
V'R = VR VM
Dbit D :
Certains paramtres qui affectent les vitesses relatives des analytes peuvent tre modifis :
Vitesse linaire de la phase mobile

Coefficient de diffusion dans la phase mobile
Coefficient de diffusion dans la phase stationnaire
Facteur de capacit k
Diamtre des particules support
Epaisseur de la couche liquide sur la phase stationnaire
Facteur de capacit []
Facteur de capacit k' : paramtre exprimental important permettant de dcrire la vitesse de
progression des soluts dans les colonnes. Cest le rapport des quantits dun analyte prsentes
lquilibre dans les 2 volumes de phase stationnaire et mobile adjacentes. Le facteur de capacit
10
depend de la temprature (CPG), du remplissage de la colonne (CPG), de la composition de la

phase mobile et stationnaire (HPLC)...
k'<1 : lution trop rapide

1<k'<5 : lution optimale
5<k' : lution trop lente
Facteur de slectivit : rapport du coefficient de distribution du solut qui est retenu le plus
sur le coefficient de distribution du solut qui est retenu le moins. Le facteur de slectivit de
deux analytes permet destimer quel point la colonne peut les sparer. Il est donc utilis pour
calculer le pouvoir sparateur dune colonne. >1 toujours.
largissement des bandes et efficacit d'une colonne []

Lefficacit dune colonne dpend du degr dlargissement du pic qui se produit mesure que
lanalyte parcourt la colonne. Cet largissement dpend du temps de sjour de lanalyte dans les
2 phases :
tR grand : pics larges ;

tR petit : pics fins.
Lefficacit dune colonne svalue partir de lun ou lautre de ces deux termes :
H = hauteur quivalente un plateau thorique

N = nombre de plateaux thoriques
Lefficacit augmente quand N augmente ou quand H diminue L constante. est la variance,

est la largeur de la base du pic, la largeur du pic mi-hauteur :
et
ou
Limportance des effets cintiques sur lefficacit de la colonne dpend essentiellement de la
dure de contact entre la phase mobile et la phase stationnaire, dpendant elle-mme de la vitesse
dcoulement de la phase mobile. Llargissement des pics est minimis en rduisant la
granulomtrie du matriau de remplissage et le diamtre de la colonne. En effet la phase
11
stationnaire est granule et le solvant occupe le volume des interstices, ce volume est appel
volume mort de solvant. H augmente avec ce volume et diminue avec le diamtre de la colonne.
Rsolution de la colonne []
La rsolution RS d'une colonne est la mesure quantitative de son aptitude sparer deux analytes
A et B :
Si RS > 1,5 : sparation complte de A et B

Si
: sparation incomplte de A et B
Si RS < 0,75 : analytes A et B mal spars
Remarque : une rsolution de 1,5 correspond un recouvrement des pics de 1%.

Lien entre rsolution et nombre de plateaux thoriques :
Cette relation permet de remarquer que la rsolution RS d'une colonne est proportionnelle la
racine carre de sa longueur car le nombre de pics thoriques N est proportionnel la longueur L
de la colonne. Avec une phase stationnaire donne on peut amliorer la rsolution de la colonne
en augmentant le nombre de plateaux thoriques donc en augmentant la longueur de la colonne.
Mais ceci augmente la dure de lanalyse, un compromis est donc ncessaire.
Mthodes d'optimisation []
Modification de la hauteur quivalent un plateau thorique (diamtre colonne,

granulomtrie)
Modification du facteur de capacit (composition phase mobile, temprature, solvant)
Modification du facteur de slectivit (composition phase mobile, temprature colonne,
composition phase stationnaire, effets chimiques (complexes)
Chromatographie en phase liquide haute

performance
La chromatographie en phase liquide haute performance CLHP, mais on trouve plus
frquemment l'abrviation anglaise HPLC (high performance liquid chromatography) depuis les
annes 1990 est une technique de sparation analytique en fonction de l'hydrophobicit et
12
prparative des molcules d'un compos ou un mlange de composs. Pour certains, HP signifie
haute pression .
Cette forme de chromatographie est frquemment utilise en biochimie, ainsi qu'en chimie
analytique.
Principe []
L'chantillon analyser est pouss par un liquide (appele phase mobile) dans une colonne
remplie d'une phase stationnaire de fine granulomtrie (les "grains" sont de trs petite taille). Le
dbit d'coulement de la phase mobile est lev ce qui entrane une augmentation de la pression
dans le systme. Ce dbit lev diminue le temps ncessaire pour sparer les composants le long
de la phase stationnaire. La fine granulomtrie de la phase stationnaire permet une meilleure
sparation des composants. En effet, pour un mme volume de phase stationnaire la surface
d'change augmente si les "grains" qui la composent sont de diamtre plus petit. Les pics obtenus
sont plus troits donc la rsolution est amliore (les pics sont bien spars, on peut donc bien les
diffrencier), le seuil de dtection est galement plus bas (des pics troits et hauts sont plus
faciles isoler du bruit de fond que des pics larges et bas). La combinaison de ces attributs rapidit et rsolution leves - conduit l'appellation haute performance .
Les solvants utiliss sont des combinaisons miscibles d'eau et de divers liquides organiques
(alcools, actonitrile, dichloromthane, ...).
Souvent, la composition de la phase mobile est modifie au cours de l'analyse, c'est le mode dit
"gradient" ou "lution gradue" (en opposition au mode "isocratique", pour lequel la composition
de la phase mobile reste la mme tout au long de l'analyse). Par exemple, sur une colonne
apolaire, en utilisant un mlange eau/mthanol comme phase mobile, les composants les plus
hydrophobes sont lus avec une concentration leve en mthanol alors que les composants plus
hydrophiles sont lus prfrentiellement avec une concentration faible en mthanol. Selon la
nature de la phase stationnaire, on commencera par une concentration leve en mthanol ou le
contraire.
Appareillage et fonctionnement []
La pompe []
C'est la partie qui sert stocker l'luant et l'injecter sous pression dans la colonne. Elle est
compose de :
Deux pistons alternatifs

Rservoirs de phase mobile
lectrovannes
Amortisseur de pulsations
Systme de purge et d'amorage
Capteur de pression
On utilise une pompe pour une lution isocratique ou plusieurs pour une lution par gradient.
13
L'injecteur []
Des tubes en acier inoxydable, en Teflon, en PEEK ou en silice fondue permettent de relier la ou
les pompes l'injecteur chromatographique. Il y a plusieurs types d'injecteurs :
Boucle d'injection : permet la rptabilit du volume d'injection

Injecteur seringue
Extraction sur phase solide en ligne
La colonne []
Elle dpend du type de chromatographie en phase liquide que l'on veut faire et donc de la nature
et du nombre de composs que l'on veut sparer. Il peut y avoir plusieurs colonnes parallles. Il y
a donc plusieurs types de chromatographies en phase liquide :
La chromatographie d'adsorption []
Article dtaill : Chromatographie d'adsorption.
Dans cette chromatographie, la phase stationnaire consiste en une matire solide grand pouvoir
d'adsorption, tel que l'oxyde d'aluminium, les silicates de magnsium, les gels de silice. Les
composants sont simplement plus ou moins retenus la surface de la phase stationnaire par
adsorption physique. C'est une technique qui prend en compte la polarit des composants.
La chromatographie de partage []
Article dtaill : Chromatographie de partage.
Dans cette chromatographie les analytes sont spars en fonction de leur affinit avec les phases
stationnaire et mobile. L'affinit dpend de la polarit des analytes et des phases. En mode
normal la phase stationnaire est polaire, en mode inverse elle est apolaire. Il y a deux types de
chromatographie de partage :
liquide - liquide : la phase stationnaire consiste en une trs fine couche de liquide rpartie par
adsorption physique la surface du matriau support le plus inerte possible. Les composants
sont spars comme dans une extraction liquide-liquide, sauf que la rpartition des composants
se fait lors du passage dans la phase liquide et non par agitation.
liquide - solide ou liquide - phase greffe : la phase stationnaire consiste en une espce
organique lie par des liaisons chimiques la surface des particules du matriau support.
La chromatographie par change d'ions []

Article dtaill : Chromatographie change d'ions.
La phase solide est une rsine insoluble munie de groupes fonctionnels capable de dissocier. Ce
sont, habituellement, des groupes "acide sulfonique" (SO3H) pour les changeurs de cations et
"ammonium quaternaire" (N(R)3) pour les changeurs d'anions.
14
La chromatographie d'exclusion strique []

Article dtaill : Chromatographie d'exclusion strique.
Les composants sont spars selon leur dimension molculaire. La phase stationnaire est
compose d'un matriau poreux (petites particules de silice ou de polymres), les molcules dont
le diamtre est suprieur celui des pores ne peuvent pntrer et ne sont pas retenues. La dure
de sjour dans la colonne augmente lorsque la taille des analytes diminue.
La chromatographie chirale []
Article dtaill : Chromatographie chirale.
Cette technique de chromatographie consiste en la formation de liaisons non covalentes entre les
nantiomres du substrat et l'absorbant chromatographique chiral donnant des complexes
diastroisomres ayant des affinits de liaisons diffrentes. Elle sert donc en particulier
sparer des nantiomres.
Le dtecteur []
Il existe plusieurs types de dtecteurs :
Dtecteur absorption UV ou visible

Dtecteur indice de rfraction
Dtecteur UV barrette de diodes (DAD)
Dtecteur fluorescence
Dtecteur de type spectromtre de masse (MS)
Dtecteur vaporatif diffusion de la lumire (DEDL)
Dtecteur lectro-chimique (DEC)
Les diffrentes phases stationnaires []

Phase normale []
Les colonnes en phase normale sont des colonnes dont la phase stationnaire est polaire et acide.
La phase normale la plus utilise est base de gel de silice : sa surface se trouvent des groupes
silanols (-OH) et des groupes siloxanes (-O-). Ces groupes permettent la silice de retenir les
composs analyser par des liaisons hydrognes.
Cette phase sert ainsi principalement sparer des composs polaires.
Phase inverse []
La base d'une phase inverse est une phase normale sur laquelle des chanes alkyles (ou autres
selon la polarit recherche) ont t greffes au niveau des groupes silanols (end-capping). En
gnral, la phase stationnaire est majoritairement compose de petites particules de silice sur
15
lesquels on a greff des fonctions chimiques, le plus souvent de chaines alkyles 8 ou 18 atomes
de carbones.
Les fonctions silanols (Si-OH) qui subsistent engendrent des interactions hydrophiles parasites,
qui rendent les rsultats non reproductibles surtout pour les molcules basiques. Pour viter cela,
la surface de la silice est gnralement recouverte par une fonction mthyle et les fonctions
silanols ne sont plus libres mais sous la forme (Si-O-CH3), c'est cette tape que l'on appelle "endcapping". Les fonctions chimiques utilises pour le "end-capping" peuvent toutefois tre de
nature trs diverses et les colonnes de dernires gnrations rsistant des pH extrmes sont
gnralement "end-capped" avec des fonctions proposant une plus grande gne strique, tel que
le tert-butyle (Si-O-C(CH3)3).
Selon le taux de greffage, on obtient une plus ou moins grande rsolution.
Cette phase stationnaire est dite "inverse" car de polaire et hydrophile (sans les "greffes"), la
phase devient apolaire et hydrophobe.
Paramtres de chromatographie []
La qualit et la dure d'une sparation peuvent changer avec la nature de la phase stationnaire et
de la phase mobile utilises. Mais pour un mme type de phase stationnaire et une mme phase
mobile, la qualit et la dure d'une sparation peuvent aussi tre modifies par les
caractristiques gomtriques et opratoires de ces deux phases.
Caractristiques gomtriques de la phase stationnaire []
la longueur L et le diamtre interne dc de la colonne

le diamtre des particules de phase stationnaire dp
Caractristiques opratoires de la phase mobile []
la vitesse linaire de l'coulement u

la perte de charge ou pression applique P entre l'entre et la sortie de la colonne (la pression
de sortie tant gnralement atmosphrique). Elle est donne par la loi de Darcy
o est la viscosit de la phase mobile et est le facteur de rsistance l'coulement qui dpend
de la forme des particules et de la qualit du remplissage de la phase stationnaire.
Pour des colonnes bien remplies de particules sphriques ou irrgulires, la formule empirique
suivante, tablie avec les units usuelles, permet le calcul commode d'une estimation de P en
fonction du dbit F de la phase mobile avec une incertitude infrieure 25%
16
Remarque : la loi de Darcy est l'hydraulique ce que la loi d'Ohm est l'lectricit. La pression
hydraulique est analogue au potentiel lectrique, le dbit de liquide est analogue l'intensit du
courant, la permabilit hydraulique est analogue la conductivit lectrique, la pressurisation et
la dpressurisation d'une colonne chromatographique sont respectivement analogues la charge
et la dcharge d'un condensateur lectrique.
Grandeurs caractristiques en chromatographie []

Le rsultat observable d'une analyse HPLC se prsente sous la forme d'une courbe du signal
dtect en fonction du temps : c'est le chromatogramme. Il comporte plusieurs pics de forme
gaussienne, de caractristiques diffrentes :
le temps de rtention ou tR, temps du maximum du pic. On appelle t0 ou temps de rtention

nulle le temps correspondant un compos non retenu chromatographiquement.
la largeur du pic, mesure mi-hauteur : 1/2, ou sa base, par l'intersection des tangentes du
pic ses points d'inflexion avec la ligne de base : .
De l peuvent tre calcules plusieurs caractristiques de la colonne pour la sparation des pics :
le facteur de rtention k' du pic, par la formule
l' efficacit N ou nombre de plateaux thoriques, relie la largeur du pic par la formule
Cette valeur mesure la finesse du pic. partir de cette valeur peut tre calcule la hauteur
quivalente un plateau thorique (HEPT) H, qui permet de comparer des colonnes de longueur
diffrente
la slectivit entre deux pics 1 et 2 (2 tant plus retenu que 1), dfinie par le rapport de leurs
deux facteurs de rtention
Elle mesure la capacit de la colonne sparer les maxima des pics. Plus elle est suprieure 1,
plus les temps de rtention sont loigns.
17
la rsolution RS entre les pics 1 et 2
Cette valeur mesure la qualit de sparation et d'absence de recouvrement entre les 2 pics
considrs.
La rsolution ainsi dfinie est l'objectif de la sparation chromatographique. C'est une fonction
des trois caractristiques (efficacit, slectivit et rtention), elles-mmes dfinies ci-dessus, dont
l'expression est
Cette expression montre notamment qu'une mme rsolution peut tre obtenue dans des
conditions chromatographiques ou bien trs efficaces (optimisation cintique) ou bien trs
slectives (optimisation thermodynamique). Quoi qu'il en soit, la performance qui caractrise la
technique HPLC est dfinie par le pouvoir de rsolution par unit de temps, ce qui n'implique pas
systmatiquement l'utilisation de la pression la plus haute possible.
Spectroscopie infrarouge
La spectroscopie infrarouge (parfois dsigne comme spectroscopie IR) est une classe de
spectroscopie qui traite de la rgion infrarouge du spectre lectromagntique. Elle recouvre une
large gamme de techniques, la plus commune tant un type de spectroscopie d'absorption.
Comme pour toutes les techniques de spectroscopie, elle peut tre employe pour l'identification
de composs ou pour dterminer la composition d'un chantillon. Les tables de corrlation de
spectroscopie infrarouge sont largement prsentes dans la littrature scientifique.
Base et thorie []
La partie infrarouge du spectre lectromagntique est divise en trois rgions : le proche, le
moyen et le lointain infrarouges, nomms en relation avec le spectre visible. L'infrarouge
lointain, allant approximativement de 400 10 cm-1 (100030 m), mitoyen de la rgion microonde, a une nergie faible et peut tre utilis pour la spectroscopie rotationnelle. L'infrarouge
moyen, allant approximativement de 4000 400 cm-1 (301,4 m) peut tre utilis pour tudier
les vibrations fondamentales et la structure rovibrationnelle associe. Le proche infrarouge, plus
nergtique, allant approximativement de 14000 4 000 cm-1 (1,40,8 m) peut exciter les
vibrations harmoniques. Les dnominations et classifications de ces sous-rgions sont
essentiellement des conventions. Elles ne sont pas bases sur des divisions strictes ou sur des
proprits molculaires ou lectromagntiques exactes.
La spectroscopie infrarouge exploite le fait que les molcules possdent des frquences
spcifiques pour lesquelles elles tournent ou vibrent en correspondance avec des niveaux
18
d'nergie discrets (modes vibratoires). Ces frquences de rsonance sont dtermines par la
forme des surfaces d'nergie potentielle, les masses atomiques et par le couplage vibronique
associ. Afin qu'un mode vibrationnel dans une molcule soit actif dans l'infrarouge, il doit tre
associ des modifications du diple permanent. En particulier, dans les approximations de
Born-Oppenheimer et harmonique, lorsque le hamiltonien molculaire correspondant l'tat
fondamental lectronique peut tre approxim par un oscillateur harmonique au voisinage de la
gomtrie molculaire d'quilibre, les frquences de rsonance sont dtermines par les modes
normaux correspondant la surface d'nergie potentielle de l'tat fondamental lectronique
molculaire. Nanmoins, les frquences de rsonance peuvent tre dans une premire approche
lies la force de la liaison, et aux masses atomiques de terminaison. Donc, la frquence des
vibrations peut tre associe une liaison particulire.
Les molcules diatomiques n'ont qu'une seule liaison, qui peut tre tire. Les molcules les plus
complexes ont beaucoup de liaisons, et les vibrations peuvent tre conjugues, ce qui conduit
des absorptions infrarouges des frquences caractristiques qui peuvent tre lies des groupes
chimiques. Ainsi par exemple, les atomes d'un groupe CH2, que l'on trouve communment dans
les composs organiques peut vibrer de six manires diffrentes : tirements (stretching)
symtriques et antisymtriques, cisaillement (scissoring), bascule (rocking), agitation hors du
plan(wagging) et torsion (twisting) :
tirement
symtrique
tirement
antisymtriqu Cisaillement
e
Bascule
Agitation
Torsion
Le spectre infrarouge d'un chantillon est tabli en faisant passer un faisceau de lumire
infrarouge au travers de cet chantillon. L'examen de la lumire transmise indique la quantit
d'nergie absorbe chaque longueur d'onde. On peut le faire avec un faisceau
monochromatique, avec une modification de la longueur d'onde dans le temps, ou en utilisant un
instrument transforme de Fourier afin de mesurer toutes les mesures d'onde simultanment.
On peut alors produire les spectres en absorbance ou en transmittance, et indiquer les longueurs
d'ondes d'absorption. L'analyse de ces caractristiques indique des dtails de la structure
molculaire de l'chantillon.
Cette technique fonctionne quasiment exclusivement sur les chantillons prsentant des liaisons
covalentes. Des spectres simples sont obtenus partir d'chantillons avec peu de liaisons actives
dans l'infrarouge et avec de hauts degrs de puret. Les structures molculaires plus complexes
conduisent plus de bandes d'absorption et donc des spectres plus complexes. Cette technique
a cependant t utilise pour la caractrisation de mlanges trs complexes.
Prparation de l'chantillon []
19
Les chantillons gazeux ne ncessitent que peu de prparation avant purification, mais par contre
requirent normalement une cellule de mesure avec une longueur de parcours importante
(typiquement entre 5 et 10 cm), les gaz n'absorbant que peu dans l'infrarouge.
Les chantillons liquides peuvent tre placs entre deux plaques d'un sel trs pur (habituellement
le chlorure de sodium, ou sel de table, bien qu'un nombre important d'autres sels comme le
bromure de potassium ou le fluorure de calcium soit aussi utilis). Les plaques sont transparentes
la lumire infrarouge et n'introduisent donc pas de bandes supplmentaires dans le spectre.
Cependant, comme de nombreux sels sont trs solubles dans l'eau, les chantillons et agents de
lavage doivent tre anhydres.
Les chantillons solides peuvent tre prpars de quatre manires majeures. La premire d'entre
elles est de broyer l'chantillon avec un agent liant (souvent du nujol) dans un mortier avec un
pilon. Un film mince de ce broyat est appliqu sur les plaques et mesur.
La deuxime mthode consiste moudre finement une quantit de l'chantillon avec un sel
purifi spcialement (comme le bromure de potassium) afin de supprimer les effets de diffusion
des gros cristaux. Ce mlange poudreux est ensuite comprim dans une presse afin de fournir une
pastille translucide au travers de laquelle un faisceau de spectromtre peut passer.
La troisime technique est dite de dposition de film, et est principalement utilise pour les
matriaux polymres. L'chantillon est tout d'abord dissous dans un solvant non hygroscopique
et adquat. Une goutte de cette solution est dpose la surface d'une cellule de KBr ou de NaCl.
La solution est ensuite vapore jusqu' schage complet et le film ainsi form sur la cellule est
analys directement. Il faut faire attention ce que le film ne soit pas trop pais, empchant la
lumire de le traverser. Cette technique permet des analyses qualitatives.
La quatrime mthode est l'utilisation de la microtomie afin de dcouper un film mince (de 20
100 m) dans un chantillon solide. C'est l'un des plus importants moyens d'analyse des produits
plastiques rejets, par exemple, car cette technique prserve l'intgrit physique globale de
l'chantillon.
Il est important de savoir que les spectres obtenus partir de diffrentes mthodes peuvent
prsenter de lgres diffrences entre eux en raison des tats physiques des chantillons.
Mthode classique []
20
Schma de fonctionnement d'un spectromtre infrarouge classique .

Dans un spectromtre infrarouge classique (il existe des montages spciaux dpendants des
activits poursuivies), un rayon de lumire infrarouge est produit et spar en deux faisceaux.
L'un passe au travers de l'chantillon, l'autre au travers d'une rfrence qui est parfois le compos
dans lequel l'chantillon a t dissous. Les faisceaux sont ensuite rflchis jusqu' un dtecteur,
aprs tre passs par un sparateur qui alterne rapidement les faisceaux entrant dans le dtecteur.
Les deux signaux sont compars et le spectre ainsi obtenu trac.
L'utilisation d'une rfrence permet :
d'viter les fluctuations de sortie de source qui peuvent affecter les donnes. Ces
fluctuations ont des origines diverses, comme le vieillissement.
d'viter la prise en compte des effets de solvant (la rfrence est habituellement le solvant
pur correspondant celui dans lequel l'chantillon est dissous).
Aperu des longueurs d'ondes d'absorption pour les

molcules organiques []
21
Quelques domaines d'absorption correspondant divers types de liaisons chimiques. Les

nombres d'ondes sont exprimes en cm-1.
Usages et applications []
La spectroscopie infrarouge est trs rpandue dans la recherche acadmique et l'industrie en tant
que technique simple et sure de mesure, de contrle de qualit et de mesure dynamique. Elle est,
par exemple, utilise en mdecine lgale pour les cas criminels ou civils pour la caractrisation
de la dgradation polymrique. Elle est sans doute la technique de spectroscopie applique la
plus utilise[rf. ncessaire].
Les instruments d'acquisition sont maintenant miniaturiss et donc transportables, mme pour
des usages en extrieur. Avec l'accroissement des technologies de filtrage informatique et de
traitement des rsultats, les chantillons en solution peuvent maintenant tre mesurs
prcisment (l'eau prsente une large absorbance sur les longueurs d'ondes intressantes, ce qui
rend un spectre non trait ininterprtable). Certains instruments possdant leurs propres bases de
donnes, l'identification peut ainsi galement tre automatise.
En se calant sur une frquence spcifique dans le temps, les modifications dans les proprits ou
la quantit d'une liaison particulire peuvent tre mesures. Cette mthode est particulirement
utile pour mesurer le degr de polymrisation en production. Les instruments de recherche
modernes peuvent acqurir des mesures sur la largeur du spectre voulue aussi souvent que 32
fois par seconde. Cela peut se faire dans le mme temps que d'autres mesures par d'autres
techniques, ce qui permet l'observation de ractions et processus chimiques de manire plus
rapide et plus prcise.
La spectroscopie infrarouge est une technique probante la fois en chimie organique et en
chimie inorganique. Ainsi on peut l'utiliser en analyse de surface dans l'industrie de la microlectronique[1] pour des semi-conducteurs comme le silicium, l'arsniure de gallium, le slniure
de zinc, le silicium amorphe, le nitrure de silicium, etc.
Effets isotopiques []
Les diffrents isotopes d'espces particulires peuvent donner des dtails fins en spectroscopie
infrarouge. Ainsi, la frquence d'tirement O-O de l'oxyhmocyanine est exprimentalement
dtermines 832 et 788 cm-1 pour (16O-16O) et (18O-18O) respectivement.
Si l'on considre la liaison O-O comme un ressort, la longueur d'onde d'absorption peut tre
calcule :
o k est la constante de ressort pour la liaison, et est la masse rduite du systme A-B :
22
(mi est la masse de l'atome i).

Les masses rduites de 16O-16O et 18O-18O peuvent tre approches par 8 et 9 units atomiques,
respectivement. Donc :
Spectroscopie infrarouge transforme de Fourier []

Article principal : spectroscopie transforme de Fourier.
La spectroscopie infrarouge transforme de Fourier (IRTF, en anglais Fourier transform
infrared spectroscopy - FTIR) est une technique de mesure pour l'acquisition de spectres
infrarouges. Au lieu d'enregistrer la quantit d'nergie absorbe lorsque la frquence de lumire
infrarouge varie (monochromateur), la lumire infrarouge passe au travers d'un interfromtre.
Aprs avoir travers l'chantillon, le signal mesur est un interfrogramme. Aprs que le signal a
subi une transforme de Fourier, on obtient un spectre identique celui obtenu par une
spectroscopie infrarouge conventionnelle (dispersive).
Les spectromtres IRTF sont moins chers que les spectromtres conventionnels, la construction
d'interfromtres tant plus facile que celle de monochromateurs. De plus, la mesure d'un spectre
est plus rapide en IRTF car l'information toutes les frquences est collecte simultanment (une
mesure au moyen d'un appareil dispersif dure par exemple une demi-heure ; elle dure deux
minutes avec un appareil IRTF). Cela permet de nombreux chantillons d'tre analyss et
moyenns ensemble, ce qui amliore la sensibilit. En raison de ces nombreux avantages, la trs
grande majorit des spectromtres infrarouges modernes sont des instruments IRTF.
Un exemple d'application hors laboratoire de ces appareils est l'analyse des gaz de combustion
des moteurs thermiques des vhicules. La sonde est introduite dans le pot d'chappement et
seules deux frquences sont exploites : 2 350 cm-1 pour le dioxyde de carbone et 2 170 cm-1
pour le monoxyde de carbone. Dans cet exemple, le spectromtre transforme de Fourier a
remplac le spectromtre dispersif qui ncessitait des ampoules contenant des concentrations
bien dfinies des deux gaz analyss.
Spectroscopie infrarouge en deux dimensions []

Article principal : Spectroscopie infrarouge en deux dimensions.
Plusieurs techniques de spectroscopie infrarouge sont dites en deux dimensions car elles
permettent d'extraire de l'information supplmentaire par rapport une technique plus classique
(monodimensionnelle) en analysant les phnomnes de couplage en utilisant un paramtre
supplmentaire la frquence.
23
Analyse de corrlation par spectroscopie infrarouge bidimensionnelle []

Cette technique est l'application la spectroscopie infrarouge de l'analyse de corrlation
bidimensionnelle. En tendant l'information spectrale obtenue sur un chantillon perturb,
l'analyse spectrale est simplifie et sa rsolution amliore. Les spectres bidimensionnels
synchrone et asynchrone reprsentent un survol graphique des modifications spectrales induites
par une perturbation (comme un changement de concentration ou de temprature) ainsi qu'une
relation entre modifications spectrales pour deux nombres d'ondes (frquences) diffrents.
Spectroscopie infrarouge bidimensionnelle non-linaire []
Squence d'impulsions utilise pour l'obtention d'un spectre infrarouge bidimensionnel par
transforme de Fourier. La priode 1 est habituellement appele temps de cohrence et la
priode 2, le temps d'attente. La frquence d'excitation est obtenue par transforme de Fourier le
long de l'axe 1.
La spectroscopie infrarouge bidimensionnelle non-linaire[2],[3] est, en quelque sorte, la version
infrarouge de la spectroscopie de corrlation. Cette technique a t rendue possible avec le
dveloppement de lasers infrarouges pulsations femtosecondes. Dans ces expriences, un
ensemble de pulsations de pompage sont appliques l'chantillon. Ce train de pulsations est
suivi d'un temps d'attente pour permettre au systme de se relaxer. Ce temps dure typiquement de
0 quelques picosecondes et sa dure peut tre contrle avec une rsolution d'une dizaine de
femtosecondes. Une pulsation sonde est ensuite envoye, dclenchant un signal d'mission de
l'chantillon. Le spectre infrarouge bidimensionnel non-linaire est un graphique bidimensionnel
de corrlation de la frquence 1 excite par les pulsations pompes et de la frquence 3 excite
par la pulsation sonde aprs le temps d'attente. Cela permet l'observation des couplages entre
diffrents modes vibratoires. En raison de sa trs haute rsolution temporelle, cette technique
peut tre utilise pour observer la dynamique molculaire l'chelle de la picoseconde. Cette
technique est cependant trs largement encore non rpandue mais devient de plus en plus
populaire en recherche fondamentale.
Comme pour la rsonance magntique nuclaire bidimensionnelle (RMN 2D), cette technique
permet d'obtenir un spectre en deux dimensions avec des pics corrls contenant les informations
de couplage entre les diffrents modes. Cependant, contrairement la RMN 2D, cette technique
prend aussi en compte les excitations vers les harmoniques. Ces excitations sont perceptibles
dans des pics d'absorption d'tats excits en dessous de la diagonale et des pics de corrlation. En
RMN 2D deux techniques distinctes, la COSY et la NOESY sont frquemment utilises. Les pics
de corrlation dans la premire sont rlis du couplage scalaire, tandis que dans la seconde ils
24
sont lis au transfert de spin entre les diffrents noyaux. En spectroscopie infrarouge
bidimensionnelle non-linaire, un temps d'attente nul correspond la technique COSY, et un
temps d'attente non nul permettant des transferts de populations vibrationnelles la technique
COESY. La "variante COSY" a t utilise pour la dtermination de structures secondaires de
protines[4].
Spectroscopie rotationnelle
Partie du spectre de rotation-vibration du chlorure d'hydrogne gazeux, montrant la prsence de

branches P et R. L'axe x correspond la frquence, l'axe y la transmittance.
La spectroscopie rotationnelle, de rotation ou micro-onde tudie l'absorption et l'mission

d'une onde lectromagntique (habituellement dans la rgion microonde du spectre
lectromagntique) par des molcules associes aux modifications correspondantes du nombre
quantique de rotation de la molcule. L'utilisation de micro-ondes en spectroscopie a t rendue
possible en raison principalement du dveloppement de la technologie associe pour le RADAR
durant la Seconde guerre mondiale. La spectroscopie rotationnelle n'est rellement possible qu'en
phase gazeuse quand le mouvement de rotation est quantifi.
Le spectre de rotation d'une molcule (au premier ordre) ncessite que la molcule possde un
moment dipolaire et que les centres de charge et masse soient distincts, ou, de manire
quivalente, qu'il existe une diffrentiation de deux charges distinctes. C'est l'existence de ce
moment dipolaire qui permet au champ lectrique de la lumire (micro-onde) d'exercer un couple
sur la molcule, ce qui la fait tourner plus rapidement (en excitation) ou lentement (en
dsexcitation). Les molcules diatomiques comme le dioxygne (O2) ou le dihydrogne (H2)
25
n'ont pas de moment dipolaire et par consquent n'ont pas de spectre purement rotationnel.
Cependant, les excitations lectroniques peuvent conduire une distribution asymtrique de
charge et donc induire un moment dipolaire. Dans de telles circonstances, ces molcules auront
un spectre rotationnel.
Les molcules diatomiques htrognes comme le monoxyde de carbone (CO) possde l'un des
spectres de rotation les plus simples. C'est galement le cas pour des molcules triatomiques
comme le cyanure d'hydrogne (HCN) pour les molcules linaires ou l'isocyanure d'hydrogne
(HN=C:) pour les molcules non-linaires. Plus le nombre d'atomes crot, plus le spectre devient
complexe, les raies dues diffrentes transitions commenant se superposer.
Comprendre un spectre de rotation []

En mcanique quantique, la libre rotation d'une molcule est quantifie, ce qui fait que l'nergie
de rotation et le moment angulaire ne peuvent prendre seulement que certaines valeurs fixes. Ces
valeurs sont lies de manire simple au moment d'inertie, I, de la molcule. En gnral pour une
molcule quelconque il y a trois moments d'inertie IA, IB et IC lis trois axes orthogonaux A, B
et C avec pour point d'intersection le centre de masse du systme. Les molcules linaires
constituent un cas part. Ces molcules possdent une symtrie cylindrique et un de ces
moments d'inertie (IA, qui est le moment d'inertie pour une rotation autour de l'axe de la
molcule) est ngligeable (i.e.
).
Classification des molcules selon leur comportement rotationnel []

La convention gnrale est de dfinir les axes tels que l'axe A possde le plus faible moment
d'inertie (et donc la plus grande frquence de rotation) et les autres axes tels que
. Parfois, l'axe A est associ avec l'axe de symtrie de la molcule s'il existe.
Dans ce cas, IA n'a pas besoin d'tre le plus faible moment d'inertie. Afin d'viter la confusion, on
gardera la prcdente convention dans la suite de l'article. Le schma particulier des niveaux
d'nergie (et donc des transitions dans le spectre de rotation) pour une molcule est dtermin par
sa symtrie. Une faon intressante de considrer les molcules consiste les diviser en quatre
classes diffrentes selon leurs symtries structurales. Ces classes sont :
1.
2.
3.
4.
les molcules linaires (ou rotateurs linaires)

les toupies symtriques (ou rotateurs symtriques)
les toupies sphriques (ou rotateurs sphriques)
les toupies asymtriques (ou rotateurs asymtriques).
Molcules linaires []
Comme mentionn ci-dessus,

pour une molcule linaire. Dans la plupart des
cas, IA est considr comme nul. Pour une molcule linaire, la sparation des raies du spectre de
rotation peut tre lie directement au moment d'inertie d'une molcule, et pour une molcule avec
des masses atomiques donnes, et tre directement utilise pour la dtermination des longueurs
de liaisons chimiques (structure). Pour les molcules diatomiques, ce procd est trivial et peut
26
tre faire par une mesure simple. Pour les molcules linaires avec plus de deux atomes, cela
requiert plus de travail, et il est alors ncessaire de mesurer des molcules dans lesquelles plus
d'un isotope de chaque atome a t substitu (cela donne en pratique un ensemble d'quations
couples pouvant tre rsolues pour les longueurs de liaisons).
On pourra citer comme exemples de molcules linaires : le dioxygne, le monoxyde de carbone,
le radical hydroxyle (OH), le dioxyde de carbone (CO2), le cyanure d'hydrogne, le sulfure de
carbonyle (O=C=S), le chlorthyne (HCCCl) ou l'actylne (HCCH).
Toupies symtriques []
Une toupie symtrique est une molcule pour laquelle deux des moments d'inertie sont
identiques. Pour des raisons historiques, les spectroscopistes divisent ces molcules en deux
classes, les toupies symtriques oblates (en forme de disque) avec IA = IB < IC et les toupies
symtriques prolates (en forme de cigare) avec IA < IB = IC. Leurs spectres sont assez diffrents,
et sont immdiatement reconnaissables. Comme pour les molcules linaires, la structure des
toupies symtriques (longueurs de liaison et angles) peuvent tre dduites de leurs spectres.
On peut citer comme exemples de toupies symtriques :
oblates : le benzne (C6H6), le cyclobutadine (C4H4), ou l'ammoniac (NH3).

prolates : le chloroforme (CHCl3), le propyne (CH3CCH)
Toupies sphriques []
Les toupies sphriques peuvent tre considres comme un cas spcial de toupies symtriques
dont les trois moments d'inertie sont gaux (IA = IB = IC).
On peut citer comme exemples : le ttramre de phosphore P4, le ttrachlorure de carbone
(CCl4), l'ion ammonium (NH4+) ou l'hexafluorure de soufre (SF6).
Toupies asymtriques []
Une toupie asymtrique possde trois moments d'inertie diffrents. La plupart des grosses
molcules sont des toupies asymtriques, mme si elles prsentent un fort degr de symtrie.
Gnralement, pour de telles molcules, une interprtation simple du spectre est impossible.
Parfois, les toupies asymtriques prsentent des spectres similaires ceux d'une molcule
linaire ou d'une toupie symtrique, auquel cas la structure molculaire doit aussi tre similaire
celle d'une molcule linaire ou d'une toupie symtrique. Pour le cas le plus gnral, cependant,
tout ce qui peut tre fait est de lisser le spectre sur trois moments d'inertie. Si la formule
molculaire est connue, on peut prsupposer la structure probable, et partir de cette structure,
calculer les moments d'inertie. Si ceux-ci correspondent bien aux moments mesurs, on peut dire
que la structure est dtermine. Dans cette approche, la substitution isotopique est invalide.
Quelques exemples : l'anthracne (C14H10), l'eau (H2O) - cause des doublets non liants de
l'oxygne central - ou le dioxyde d'azote (NO2) (pour des raisons similaires l'eau).
Structure d'un spectre de rotation []

Molcules linaires
27
Diagramme des niveaux d'nergie dcrivant certaines des transitions impliques dans le spectre de
rotation-vibration infrarouge d'une molcule linaire : la branche P (o J = 1), la branche Q (pas
toujours permise, J = 0) et la branche R (J = 1).
Ces molcules ont deux modes de rotation dgnrs (IB = IC, IA = 0). Comme on ne peut
distinguer les deux modes, un seul nombre quantique de rotation (J) afin de dcrire le
mouvement de rotation d'une molcule.
Les niveaux d'nergie de rotation (
peut tre exprim comme :
) de la molcule base sur le modle du rotateur rigide
28
o
est la constante de rotation de la molcule et est lie au moment d'inertie de la molcule IB
= IC par :
Les rgles de slection imposent que lors de la dure d'mission ou d'absorption le nombre
quantique de rotation varie d'une unit, i.e.
. Les localisations des raies
dans un spectre de rotation seront donnes par :
o indique le niveau d'nergie le plus bas et le niveau d'nergie le plus lev impliqus dans
la transition. La hauteur des raies est dtermine par la distribution des molcules dans les
diffrents niveaux et la probabilit de transition entre les deux niveaux d'nergie.
On observe que, pour un rotateur rigide, les raies de transition sont espaces de manire gale
dans l'espace des nombres d'onde. Cependant, ce n'est pas toujours le cas, sauf pour le modle du
rotateur rigide. Pour un modle non rigide, on doit considrer les modifications du moment
d'inertie de la molcule. Deux des raisons principales pour cette prise en compte sont :
la distorsion centrifuge : lorsqu'une molcule tourne, la force centrifuge peut agir sur les atomes
en les loignant vers l'extrieur. Le moment d'inertie de la molcule augmente, donc
dcrot. Afin de prendre en compte la correction de distorsion centrifuge, un terme est ajout
aux niveaux d'nergie de rotation de la molcule.
est la constante de distorsion centrifuge.
L'espacement des raies pour le mode rotationnel est modifi en consquence,
l'effet de la vibration de rotation : une molcule est toujours en vibration. La molcule vibrant,
ses moments d'inertie sont modifis. Il existe de plus une force fictive, un couplage de Coriolis,
entre le mouvement vibrationnel du noyau dans le repre en rotation (non-galilen).
Cependant, tant que le nombre quantique de vibration ne change pas (i.e. la molcule est dans
un seul tat de vibration), l'effet de la vibration sur la rotation n'est pas important, le temps de
vibration tant beaucoup plu court que le temps de rotation. Le couplage de Coriolis est parfois
ngligeable galement si l'on s'intresse aux nombres quantiques de vibration et de rotation
faibles.
29
Toupie symtrique
Le mouvement de rotation d'une molcule-toupie symtrique peut tre dcrit pas deux nombres
quantiques de rotation indpendants (deux axes de rotation ayant les mmes moments d'inertie,
la rotation autour de ces axes ne ncessite qu'un nombre quantique de rotation pour une
description complte). Au lieu de dfinir les deux nombres quantiques de rotation pour les deux
axes indpendants, on associe l'un des nombres quantiques (J) avec le moment angulaire total de
la molcule et l'autre (K) avec le moment angulaire de l'axe ayant un moment d'inertie diffrent
des autres (i.e. l'axe C pour une toupie symtrique oblate et A pour une prolate). L'nergie de
rotation
d'une telle molcule, base sur les postulats du rotateur rigide peut tre
exprime en termes des deux nombres quantiques de rotation dfinis ci-dessus comme il suit :
o
molcule oblate.
et
pour une molcule prolate ou
pour une
Les rgles de slection pour ces molcules fournissent des indications pour les transitions
possibles, par :
.
Cela est d au fait que K est associ l'axe de symtrie de la molcule et donc qu'elle ne possde
pas de diple franc dans cette direction. Il n'y a donc pas d'interaction de ce mode avec les
photons.
Cela donne les nombres d'ondes de transition :
ce qui est identique au cas d'une molcule linaire.

Dans le cas des rotateurs non rigides, la correction de distorsion centrifuge au premier ordre est
donne par :
Les indices de la constante de distorsion centrifuge D indiquent que le mode de rotation impliqu
et ne sont pas fonction du nombre quantique de rotation. La localisation des raies de transition
sur un spectre est donne par :
30
Toupie sphrique
Les molcules sphriques n'ayant pas de moment dipolaire, elles ne prsentent pas de spectres
purement rotationnels.
Toupie asymtrique
Le spectre de ce molcules prsente habituellement de nombreuses raies en raison des trois
modes de rotation diffrents et de leurs combinaisons. L'analyse suivante est valide pour le cas
gnral et se rduit aux cas spciaux prcdents dans les limites appropries.
A partir des moments d'inertie, on peut dfinir un paramtre asymtrique tel que :
variant de -1 pour une toupie symtrique prolate 1 pour une toupie symtrique oblate.
On peut dfinir un hamiltonien de rotation rduit dpendant de J et . La reprsentation
matricielle (symtrique) est quasi-diagonale, avec des coefficients nuls partout sauf sur la
diagonale principale et la seconde sous-diagonale. Le hamiltonien peut tre formul de six
manires diffrentes, selon l'orientation et l'arrangement des axes par rapport au rfrentiel
absolu. Pour la plus asymtrique, la reprsentation des lments diagonaux dans l'orientation
main droite est, pour
:
Hk,k() = k2
et les lments non nuls hors diagonale principale (indpendants de ) sot :

.
La diagonalisation de H donne un ensemble de 2J + 1 niveaux d'nergie rotationnelle Ek()

rduits. Les niveaux d'nergie rotationnelle pour le rotateur asymtrique de moment angulaire
total J est alors donn par :
Interactions hyperfines
En plus de la structure principale observe dans les spectres microondes imputable au
mouvement de rotation des molcules, un ensemble d'interactions plus subtiles sont
responsables de petits dtails dans ces spectres, et leurs tudes donne une comprhension
vraiment profonde de la mcanique quantique des molcules. Les interactions principales
responsables de ces lgres modifications dans les spectres (sparations supplmentaires et
dplacements de raies) sont dues aux interactions magntiques et lectrostatiques dans la
31
molcule. Les forces particulires de ces interactions dans diffrentes molcules, mais en
gnral, l'ordre de ces effets est (dans l'ordre dcroissant) :
interaction entre spins lectroniques : se produit dans des molcules avec deux lectrons non
apparis ou plus, et est une interaction entre diples magntiques.
interaction entre spin lectronique et rotation molculaire : la rotation d'une molcule
correspond une diple magntique qui interagit avec le moment magntique dipolaire de
l'lectron.
interaction entre spin lectronique et spin nuclaire : il s'agit de l'interaction entre le moment
magntique dipolaire de l'lectron et le moment magntique dipolaire du noyau s'il existe.
interaction entre gradient de champ lectrique et quadruple lectrique nuclaire, ou interaction
entre le gradient de champ lectrique du nuage lectronique d'une molcule et les moments
lectriques quadrupolaires du noyau s'ils existent.
interaction entre spins nuclaires : les moments magntiques nuclaires interagissent entre eux.
Ces interactions donnent lieu des niveaux d'nergies caractristiques qui sont montrs par des
techniques spectroscopiques de rsonance magntique comme la RMN ou la RPE, o ils
reprsentent les sparations champ nul qui sont toujours prsentes.
Dtermination exprimentale des spectres []

La spectroscopie infrarouge transforme de Fourier (FTIR) peut tre utilise afin d'tudier les
spectres de rotation exprimentaux. Les spectres ces longueurs d'ondes prsentent de manire
typique de l'excitation rovibrationnelle, c'est--dire un mode la fois vibrationnel et rotationnel
pour une molcule.
Traditionnellement, les spectres micro-ondes sont obtenus par un procd simple dans lequel un
gaz sous faible pression est introduit dans un guide d'onde entre une source micro-onde (de
frquence variable) et un dtecteur micro-onde. Le spectre est obtenu par modification de la
frquence de la source et dtection simultane de la variation d'intensit de la radiation
transmise. Ce dispositif exprimental recle une difficult majeure lie la propagation de l'onde
micromtrique dans le guide d'onde. La taille physique du guide restreint la frquence de
radiation pouvant tre transmise. Pour une taille de guide donne (comme pour une bande X) il y
a une frquence de coupure, et les micro-ondes aux petites frquences ( longueurs d'ondes les
plus importantes) ne peuvent tre propages. De plus, lorsque la frquence crot, des modes
supplmentaires de propagation deviennent possibles, correspondant aux diffrentes vitesses de
la radiation se propageant dans le guide d'onde (cela peut tre compar un rebond de l'onde
dans le guide, avec diffrents angles de rflexion). Le rsultat final de ces considrations est que
chaque taille de guide d'onde est utile seulement sur un intervalle troit de frquences et doit tre
remplac par un guide plus adapt une fois les frquences limites dpasses.
Applications []
32
La spectroscopie rotationnelle est utilise frquemment en chimie physique afin de dterminer la

structure des petites molcules (comme l'ozone, le mthanol ou l'eau) avec une haute prcision.
Les autres techniques classiques comme la diffractomtrie de rayons X ne sont pas
satisfaisantes pour ces molcules (particulirement en phase gazeuse) et ne sont pas assez
prcises. Cependant, la spectroscopie rotationnelle n'est pas pertinente dans la dtermination de
molcules de tailles plus importantes, comme les protines.
La spectroscopie micro-onde est l'un des principaux moyens par lesquels les constituants de
l'univers sont dtermins depuis la Terre. Elle est particulirement utile pour la dtection des
molcules dans le milieu interstellaire. Ainsi, l'une des dcouvertes les plus surprenantes de la
chimie interstellaire fut la dcouverte de molcules longues chaines carbones dans ce milieu.
C'est dans la perspective de trouver ce type de molcules en laboratoire qu'Harold Kroto vint
dans le laboratoire de Richard Smalley et Robert Curl, o il tait possible de vaporiser du
carbone dans des conditions d'nergies trs importantes. Cette exprience collaborative conduisit
la dcouverte du C60 qui leur valut le prix Nobel de chimie en 1996.
La spectromtrie de masse (mass spectrometry ou MS) est une technique physique d'analyse
permettant de dtecter et d'identifier des molcules dintrt par mesure de leur masse, et de
caractriser leur structure chimique.
Son principe rside dans la sparation en phase gazeuse de molcules charges (ions) en fonction
de leur rapport masse/charge (m/z). La spectromtrie de masse est utilise dans pratiquement tous
les domaines scientifiques : physique, astrophysique, chimie en phase gazeuse, chimie
organique, dosages, biologie, mdecine...
Structure d'un spectromtre de masse []
Structure dun spectromtre de masse
Le spectromtre de masse, initialement conu par le britannique Joseph John Thomson, comporte
une source d'ionisation suivie d'un ou plusieurs analyseurs qui sparent les ions produits selon
leur rapport m/z, d'un dtecteur qui compte les ions et amplifie le signal, et enfin d'un systme
informatique pour traiter le signal. Le rsultat obtenu est un spectre de masse reprsentant les
rapports m/z (ou m/q, q reprsentant la charge) des ions dtects selon l'axe des abscisses et
l'abondance relative de ces ions selon l'axe de ordonnes.
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Le spectromtre de masse se compose donc de quatre parties :
Le systme dintroduction de lchantillon : lchantillon peut tre introduit directement dans la

source, sous forme gazeuse, liquide (infusion directe) ou solide (canne dintroduction directe,
dpt sur plaque MALDI, ...) ou encore par l'association une mthode sparative
(chromatographie en phase liquide, chromatographie en phase gazeuse, lectrophorse
capillaire , ...).
La source d'ionisation : elle consiste vaporiser les molcules et les ioniser. Une source
d'ionisation peut tre utilise soit en mode positif pour tudier les ions positifs, soit en mode
ngatif pour tudier les ions ngatifs. Plusieurs types de sources existent et sont utiliss en
fonction du rsultat recherch et des molcules analyses.
o L'ionisation lectronique (EI), l'ionisation chimique (CI) et la dsorption-ionisation
chimique (DCI)
o Le bombardement par atomes rapides (FAB), atomes mtastables (MAB) ou ions (SIMS,
LSIMS)
o Le couplage plasma inductif (ICP)
o L'ionisation chimique pression atmosphrique (APCI) et la photoionisation pression
atmosphrique (APPI)
o L'lectronbulisation ou lectrospray (ESI)
o La dsorption-ionisation laser assiste par matrice (MALDI), active par une surface
(SELDI) ou sur silicium (DIOS)
o L'ionisation-dsorption par interaction avec espces mtastables (DART)
Lanalyseur : il spare les ions en fonction de leur rapport masse/charge (m/z). Il existe des
analyseurs basse rsolution : le quadriple ou quadruple (Q), le pige ions 3D (IT) ou linaire
(LIT), et des analyseurs haute rsolution, permettant de mesurer la masse exacte des analytes :
le secteur magntique coupl un secteur lectrique, le temps de vol (TOF), la rsonance
cyclotronique ionique transforme de Fourier (FTICR) et l'Orbitrap. Ces analyseurs peuvent
tre coupls entre eux pour raliser des expriences de spectromtrie de masse en tandem
(MS/MS). En gnral, un premier analyseur spare les ions, une cellule de collision permet de
fragmenter les ions, et un second analyseur spare les ions fragments. Certains analyseurs,
comme les piges ions ou le FT-ICR, constituent plusieurs analyseurs en un et permettent de
fragmenter les ions et d'analyser les fragments directement.
Le dtecteur et systme de traitement : le dtecteur transforme les ions en signal lectrique.
Plus les ions sont nombreux, plus le courant est important. De plus, le dtecteur amplifie le
signal obtenu pour qu'il puisse tre trait informatiquement.
A quoi sert la spectromtrie de masse ? []
Identification :
o Suivant
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Spectre du tolune en banque de spectres par ionisation lectronique

le type d'ionisation utilis, un spectre de masse peut tre caractristique d'une
molcule. Ainsi en le comparant avec des banques de spectres, il est possible d'identifier
la molcule.
o
Lors de l'utilisation d'un analyseur haute rsolution (TOF, secteur magntique, FTICR,
Orbitrap), la spectromtrie de masse permet de mesurer avec prcision la masse monoisotopique d'un ion et d'en dduire sa formule brute.
Analyse structurale :
o La parit de la masse mesure est fonction de la parit du nombre datomes dazote que
possde une molcule (rgle de lazote).
o Chaque atome possde un ou plusieurs isotopes qui sont de masses diffrentes par
dfinition. Ainsi, la proportion de chaque isotope observ sur un spectre de masse,
c'est--dire le massif isotopique, est caractristique de la prsence de certains atomes et
de leur nombre dans l'ion mesur (en particulier les lments Cl, et Br, qui prsentent
des isotopes M et M+2 en quantit notable).
o Les ions peuvent se fragmenter dans un spectromtre de masse : dans la source
d'ionisation, dans l'analyseur ou dans une cellule de collision. Comme les
fragmentations respectent des lois prcises de chimie en phase gazeuse, l'tude de ces
fragments permet de dterminer la structure des ions.
Quantification :
o Un spectromtre de masse est un dtecteur universel et trs sensible. Sa gamme
linaire va de 3 7 ordres de grandeur, d'o la possibilit d'obtenir une quantification
fiable sur un domaine large.
Imagerie :
o L'analyse point par point d'une surface par spectromtrie de masse avec ionisation
adquate (MALDI, SIMS, DESI) permet de gnrer des images ioniques, reprsentant la
rpartition de chaque ion issu de cette surface. Cette technique d'imagerie est trs
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utilise pour la recherche de biomarqueurs (identification dans une coupe de tissu de

composs spcifiques d'une rgion dfinie).
La source d'ionisation []
Les ionisations EI et CI, qui ncessitent un certain niveau de vide, sont prfrentiellement
utilises en couplage avec la chromatographie en phase gazeuse (la CI fonctionnant partir d'une
source EI). En revanche, les deux sources pression atmosphrique (lectrospray et APCI) dites
"ionisation douce", sont principalement utilises en couplage avec la chromatographie en phase
liquide.
L'ionisation lectronique (EI) []
Source d'ionisation lectronique
Des lectrons mis par un filament rencontrent les molcules qui entrent dans la source : lors de
la rencontre, si l'nergie cintique des lectrons est suffisante, un lectron est arrach de la
molcule M, la transformant en un ion radical M+o. Celui-ci peut ensuite se fragmenter suivant
son nergie interne. L'EI conduit ainsi un spectre assez fourni, avec de nombreux fragments,
trs riche en informations structurales.
L'ionisation chimique (CI) []
Source d'ionisation chimique
En plus du dispositif EI ci-dessus, un gaz ractif est introduit dans la source et ionis par impact
lectronique. S'ensuit une srie de ractions qui donne naissance des ions pouvant ragir avec
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les molcules d'analyte arrivant dans la source. Ce type de ractions ions-molcules produit
principalement (en mode positif) des ions [MH] +, et [M+adduit+H]+, permettant ainsi d'accder
la masse molculaire de l'analyte.
Le mthane, l'isobutane et l'ammoniac sont parmi les gaz d'ionisation chimique les plus utiliss.
L'ionisation par bombardement d'atomes rapides (FAB) []

Elle permet d'analyser des molcules non vaporisables sous vide (grosses molcules
biologiques). L'ionisation est effectue par expulsion en phase vapeur des ions contenus dans un
chantillon liquide suite un bombardement d'atomes rapides (Ar ou Xe). Les molcules ainsi
ionises n'ont pas beaucoup d'nergie interne, la fragmentation est donc faible mais l'ion
molculaire est facilement reconnaissable et la masse molculaire est facile dterminer.
L'chantillon est mlang en solution une matrice liquide non volatile (glycrol,thioglycrine,
alcool m-nitrobenzylique). Un faisceau haute nergie (de l'ordre de 4 10 keV) d'atomes
neutres (Ar ou Xe) est envoy sur l'chantillon et la matrice dans la chambre de collision causant
ainsi les phnomnes de dsorption et d'ionisation. Les ions prexistants en solution sont
expulss en phase gazeuse et acclrs vers l'analyseur.
L'ionisation par lectronbulisation (lectrospray) (ESI) []

Article dtaill : Ionisation par lectronbuliseur (ESI).
Source d'ionisation par lectrospray
Son principe est le suivant : pression atmosphrique, les gouttelettes de soluts sont formes
l'extrmit d'un fin capillaire port un potentiel lev. Le champ lectrique intense leur confre
une densit de charge importante. Sous l'effet de ce champ et grce l'assistance ventuelle d'un
courant d'air co-axial, l'effluent liquide est transform en nuage de fines gouttelettes (spray)
charges suivant le mode d'ionisation. Sous l'effet d'un second courant d'air chauff, les
gouttelettes s'vaporent progressivement. Leur densit de charge devenant trop importante, les
gouttelettes explosent en librant des microgouttelettes constitues de molcules protones ou
dprotones de l'analyte, porteuses d'un nombre de charges variable.
Les ions ainsi forms sont ensuite guids l'aide de potentiels lectriques appliqus sur deux
cnes d'chantillonnage successifs faisant office de barrires avec les parties en aval maintenues
sous un vide pouss (<10-5 Torr). Durant ce parcours pression leve, les ions subissent de
multiples collisions avec les molcules de gaz et de solvant, ce qui complte leur dsolvatation.
En faisant varier les potentiels lectriques appliqus dans la source il est possible de provoquer
des fragmentations plus ou moins importantes.
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L'avantage de cette mthode d'ionisation comme pour l'APCI est l'obtention d'ions multichargs,
pour les macromolcules, polymres. Elle permet d'autre part de gnrer une ionisation "douce" :
des ions molculaires sont forms en majorit.
L'ionisation chimique pression atmosphrique (APCI) []

Article dtaill : Ionisation chimique pression atmosphrique (APCI).
Les chantillons liquides sont directement introduits dans un nbuliseur pneumatique. Sous
l'effet d'un jet d'air ou d'azote, le liquide est transform en fin brouillard. Un chauffage assure la
dsolvatation des composs. Ces derniers sont ensuite ioniss chimiquement pression
atmosphrique : en gnral, la phase mobile vaporise joue le rle de gaz d'ionisation et les
lectrons sont obtenus partir de dcharges d'lectrode couronne. L'ionisation des composs est
trs favorise lors de ces techniques car la frquence des collisions est leve pression
atmosphrique.
L'APCI est une technique analogue l'ionisation chimique (CI), elle fait appel des ractions
ions-molcules en phase gazeuse, mais pression atmosphrique et conduit essentiellement la
formation d'ions [MH]+ ou [M-H]-.
La dsorption-ionisation laser assiste par matrice (MALDI) []

Article dtaill : Dsorption-ionisation laser assiste par matrice.
Source d'ionisation MALDI
Un faisceau laser puls est utilis, gnralement dans le domaine des ultraviolets, pour dsorber
et ioniser un mlange matrice/chantillon cocristallis sur une surface mtallique, la cible.
Les molcules de matrice absorbent l'nergie transmise par le laser sous forme de photons UV,
s'excitent et s'ionisent. L'nergie absorbe par la matrice provoque sa dissociation et son passage
en phase gazeuse. Les molcules de matrice ionises transfrent leur charge l'chantillon.
L'expansion de la matrice entrane l'chantillon au sein de la phase gazeuse dense o il va finir de
s'ioniser.
L'ionisation de l'chantillon a donc lieu soit dans la phase solide avant la dsorption, soit par
transfert de charge lors de collisions avec la matrice excite aprs dsorption. Elle conduit la
formation d'ions monochargs et multichargs de type [M+nH]n+, avec une nette prpondrance
pour les monochargs.
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L'analyseur []
Les analyseurs se diffrencient par leur principe de mesure du rapport m/z des ions, qui est :
la dispersion des ions, fonde sur leur moment ou leur nergie cintique (instruments secteur
magntique ou lectrique)
la sparation dans le temps, fonde sur la vitesse des ions (TOF)
la transmission des ions traversant un champ lectrodynamique (quadriple)
le mouvement priodique dans un champ magntique ou lectrodynamique (piges ou trappes
ions)
L'analyseur quadripolaire []
Un quadriple (ou quadruple) est constitu de quatre lectrodes parallles de section
hyperbolique ou cylindrique. Les lectrodes opposes distantes de 2r0 sont relies entre elles et
soumises au mme potentiel.
Coupe d'un quadriple
Les lectrodes adjacentes sont portes des potentiels de mme valeur, mais opposs de sorte
que l'cart de potentiel soit gal 0.
Ce potentiel 0 rsulte de la combinaison de tensions, l'une continue (U) l'autre alternative (V) de
haute frquence f :
En appliquant cette diffrence de potentiel entre chaque paire d'lectrodes, il se cre un champ
lectrique quadripolaire. Un point de coordonnes (x,y,z) situ dans le champ lectrique sera
alors soumis au potentiel :
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Diagramme de stabilit d'un ion dans un quadriple
La trajectoire d'un ion pntrant dans le quadriple sera donc uniforme selon l'axe z et dcrite par
les quations de Mathieu selon les deux autres axes. Il est possible de dfinir en fonction des
valeurs U et V des zones de stabilit telles que les coordonnes x et y de l'ion restent strictement
infrieures r0. L'une d'entre elles est exploite en spectromtrie de masse (voir figure) (Les ions
qui se trouvent dans cette zone auront donc une trajectoire stable dans le quadripole et seront
dtects). En gardant constant le rapport U/V, on obtient une droite de fonctionnement de
l'analyseur. Un balayage de U avec U/V constant permet l'observation successive de tous les ions
dont la zone de stabilit est coupe par la droite de fonctionnement. La rsolution entre ces ions
est d'autant plus grande que la pente de la droite est leve.
Schma de la trajectoire stable d'un ion traversant le quadriple
En l'absence de tension continue, tous les ions de rapports m/z suprieurs celui fix par la
valeur de V applique auront une trajectoire stable (x et y < r0), le quadriple est alors dit
transparent et sert de focalisateur d'ions.
Les principaux avantages du spectromtre quadripolaire rsident dans sa souplesse d'utilisation,
sa rsolution unitaire sur toute sa gamme de masse, sa vitesse de balayage satisfaisante, ainsi que
son adaptabilit diffrentes interfaces permettant le couplage avec la chromatographie gazeuse
ou liquide.
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L'analyseur octopolaire []
Analyseur octopolaire
Identique l'analyseur quadripolaire mais avec 8 lectrodes, cet analyseur sert uniquement la
focalisation des ions.
Le pige ionique quadripolaire ("trappe d'ions") []
Schma de la trajectoire des ions dans un pige ionique (en vert)
C'est un pige ionique o la prparation, l'analyse et la dtection des ions s'effectuent dans un
mme espace, suivant des squences temporelles successives.
Le pige est constitu de trois lectrodes section hyperbolique : une lectrode annulaire
encadre par deux lectrodes-chapeaux (d'entre et de sortie) qui forment les calottes suprieure
et infrieure du dispositif. Une tension en radiofrquence
combine ou non
une tension continue U est applique entre l'lectrode centrale et les deux lectrodes calottes.[1]
Le champ rsultant est alors tridimensionnel.
Les domaines de stabilit des ions sont nouveau dtermins par les quations de Mathieu. Celui
exploit est dfini tel que lorsque les ions en sortent, leur trajectoire radiale reste stable
contrairement celle selon l'axe des z. Un balayage de l'amplitude de la radiofrquence V
entranera donc l'expulsion des ions pigs selon cet axe, vers le dtecteur.[2] [3] Les trajectoires
stables des ions, au sein du champ quadripolaire rsultant sont tridimensionnelles, en forme de
huit.
Le temps de vol []
Article dtaill : Spectromtre de masse temps de vol.
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L'analyseur temps de vol consiste mesurer le temps que met un ion, acclr pralablement
par une tension, parcourir une distance donne. Le rapport masse sur charge est directement
mesurable partir du temps de vol.
Trajectoire d'un ion dans l'analyseur temps de vol en mode linaire
Un analyseur temps de vol se compose d'une zone d'acclration o est applique la tension
acclratrice, et d'une zone appele tube de vol, libre de champ. Les ions acclrs pntrent
dans le tube de vol libre de tout champ. La sparation des ions ne va donc dpendre que de la
vitesse acquise lors de la phase d'acclration. Les ions de rapport m/z le plus petit parviendront
au dtecteur les premiers. Pour chaque groupe d'ions de mme rapport m/z, un signal est
enregistr au niveau du dtecteur sous la forme d'une fonction temps/intensit.
Ce mode de dtection comporte cependant certaines limitations en termes de rsolution : ainsi

deux ions identiques, de mme vitesse initiale, mais localiss deux points diffrents, entreront
dans le tube de vol des vitesses et des temps diffrents. Celui le plus loin du dtecteur
l'origine sera acclr plus longtemps et aura donc un temps de vol plus court, d'o une
dispersion en temps et en nergie. Le mode rflectron permet de pallier ce phnomne.
Trajectoire d'un ion dans l'analyseur temps de vol en mode rflectron
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En mode rflectron, un miroir lectrostatique impose un champ lectrique de direction oppose

celle du champ acclrateur initial, et donc du mouvement des ions. Ces derniers voient ainsi
leur trajectoire modifie : ils pntrent dans le rflectron et en ressortent avec une vitesse
longitudinale de sens oppos leur vitesse initiale. Les ions les plus nergtiques arrivent les
premiers au niveau du rflectron et vont y pntrer plus profondment, ils seront donc rflchis
dans un temps plus long. De cette faon, tous les ions de mme rapport m/z se trouvent focaliss
sur un mme plan, le dtecteur du rflectron tant plac sur le plan de focalisation de ces ions.En
outre, le rflectron permet d'allonger la distance de vol sans pour autant augmenter la taille de
l'analyseur : les ions mettent plus de temps pour atteindre le dtecteur, et rduisent aussi leur
dispersion en temps, la rsolution s'en trouve donc grandement amliore.
Le FT-ICR []
Schma d'une cellule cubique ICR
Lanalyseur rsonance cyclotronique dion se compose dune cellule ICR (de configuration
cubique par exemple) qui comporte notamment six plaques sous tension, isoles les unes des
autres.
Lapplication dun champ magntostatique B suivant laxe z soumet les ions la force de
Lorentz F = ez v ^ B. Leur mouvement dans le plan (xy) est alors cyclotronique , cest--dire
circulaire uniforme de frquence f= eB/(2.m/z). Les ions sont par ailleurs confins suivant laxe
z par un champ lectrostatique impos par les deux plaques parallles au plan (Oxy), rsultant de
lapplication dune tension faible.
Une fois pigs dans la cellule, les ions ont donc la mme trajectoire mais pas la mme position
un instant dtermin (a).
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Etapes de la spectromtrie de masse ICR : a) ions avant excitation, b) Excitation des ions jusqu
atteindre une certaine orbite, c) mouvement cohrent des ions de mme m/z crant le courant induit
Il convient donc de donner aux ions de mme m/z un mouvement densemble en les mettant en
phase, par rsonance cyclotronique. Pour cela, les ions m/z sont excits par un champ alternatif
de frquence correspondant leur frquence cyclotron : pour exciter tous les ions dune certaine
gamme de m/z, une tension contenant toutes les frquences cyclotron correspondantes est
impose. Les ions sont alors acclrs, mis en phase et voient le rayon de leur orbite augmenter
(b).
Le courant induit par le mouvement cohrent des ions de mme m/z sera mesur sur les plaques
de dtection (c) : ce sera une sinusode amorti de frquence cyclotronique. Le courant induit total
mesur sera donc la somme de sinusodes amorties des frquences cyclotroniques correspondant
aux ions de m/z excits par rsonance. La frquence cyclotron tant proportionnelle 1/(m/z),
linverse de la transforme de Fourier du courant obtenu permet daboutir au spectre de masse en
m/z.
Cet analyseur a lune des meilleures rsolutions qui soient (Rs>100 000), ds lors le spectre MS
a une plus grande capacit de pics, ce qui maximise la quantit dinformations pour lanalyse de
mlanges complexes. Cependant, la largeur des pics tant proportionnelle (m/z), la rsolution
est meilleure aux m/z infrieures 5000 Th. Lexcellente prcision du FT-ICR sur la mesure de
masse (5-10 ppm) lve ou diminue les ambiguts sur lidentification des composs. La gamme
de masse dpend de la valeur du champ magntique, elle stend jusque 27000 Da pour un
champ de 7 T. En revanche, la gamme dynamique est assez restreinte, avec 2-3 dcades, car cet
analyseur par confinement souffre du mme dfaut que le pige quadripolaire, la coexistence
possible dun nombre limit dions. Ds lors, les pics trs minoritaires dans le spectre de masse
prsenteront une mesure de masse moins prcise. Le FT-ICR permet lanalyse en MS/MS dans la
cellule mme, avec possibilits varies dactivation des ions et donc de fragmentations
slectives.
L'orbitrap []
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Trajectoire des ions dans un orbitrap (en rouge)
Lorbitrap se compose dune lectrode creuse, lintrieur de laquelle est place coaxialement
une lectrode en forme de fuseau. La forme particulire de ces deux lectrodes permet
limposition dun champ lectrostatique quadro-logarithmique avec la tension :
.
avec Rm rayon caractristique de llectrode centrale, k courbure du champ, et C une constante.
Le champ est en particulier quadripolaire suivant laxe z des lectrodes. Les ions sont injects
tangentiellement llectrode centrale et pigs autour delle par la force lectrostatique qui
compense les forces centrifuges. Le mouvement des ions se dcompose alors ainsi : un
mouvement circulaire autour de llectrode centrale dans le plan (xy) et un mouvement
oscillatoire de va-et-vient selon laxe z.[4] En particulier, les ions dun m/z donn seront sur la
mme trajectoire circulaire qui oscille axialement avec une frquence f. f est indpendante de la
vitesse ou de lnergie des ions et sexprime comme 1/2(km/z). De la mme faon que pour le
FT-ICR, le courant induit par ces oscillations permet par une transforme de Fourier daccder
aux m/z.
La prcision des mesures de m/z est particulirement bonne (1-2 ppm) et la rsolution (jusque
100 000) rivalise avec celle du FT-ICR, dautant qutant proportionnelle 1/(m/z), elle
diminue moins vite avec le rapport m/z que dans le cas du FT-ICR. La gamme dynamique est
satisfaisante (> 3 dcades).[5] Lorbitrap est principalement utilise en spectromtrie de masse en
tandem, associe un pige linaire.
L'analyseur secteur magntique []
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Schma de la structure dun spectromtre de masse : exemple d'un spectromtre de masse secteur
magntique associ une source d'ionisation d'impact lectronique
L'ion est ject dans un milieu dans lequel rgne un champ magntique uniforme perpendiculaire
au plan de la trajectoire. Du fait de la force de Lorentz, la trajectoire se courbe, et le point
d'impact de l'ion (donc sa dviation) permet de connatre sa masse partir de la charge.
En effet, soit
le champ magntique (dirigeant
initiale orthogonale
, elle dirige
On a alors:
) de coordonnes
Soit:
On a alors
la vitesse
D'o, en crivant la relation fondamentale de la dynamique :
Posons
et
.
.
46
En rsolvant,
Et donc:
initiales).
( l'aide des conditions
Il s'agit bien de l'quation paramtrique d'un cercle de rayon
Le spectromtre mesure ensuite les distances d'impact lorsque la particule a effectu un demicercle. La distance au point d'origine correspond au diamtre donc au double du rayon donn par
la dernire formule. La charge de la particule permet donc d'en dduire sa masse.
Le dtecteur []
Comme les analyseurs et les sources, il existe diffrents types de dtecteurs. Ils sont tous bass
sur des principes physiques diffrents, mais leur rle reste le mme, compter les ions. C'est une
partie place sous vide (10-5 - 10-7 Torr).
Les plaques photographiques sont le dtecteur historique. La plaque est enduite d'une mulsion
de bromure d'argent, son noircissement donne une valeur relative de l'intensit du flux
(quantit d'ions). Cette technique est trs peu sensible.
Le cylindre de Faraday a pour principe le suivant : le transfert de charge de l'ion est dtect sur
une surface conductrice, puis le signal est amplifi. Cette technique est prcise mais peu
sensible, avec une certaine lenteur de mesure et un bruit de fond important.
Le multiplicateur d'lectrons est le dtecteur le plus courant. Le signal est amplifi par la
formation d'lectrons secondaires l'aide de tubes en verre dops au plomb (dynode). Il
possde une bonne sensibilit, avec une amplification forte mais il est moins prcis que le
cylindre de Faraday. Il a en outre une dure de vie limite. La galette de microcanaux, autre
dtecteur, peut tre considre comme assemblage de multiplicateurs d'lectrons.
Le multiplicateur de photons est driv du multiplicateur d'lectrons : le signal est amplifi par la
formation d'lectrons secondaires l'aide de tubes en verre dops au plomb (dynode). Ceux-ci
sont acclrs vers un cran phosphorescent o ils sont convertis en photons. Ces photons sont
ensuite dtects par le photomultiplicateur. Il prsente une bonne sensibilit, avec amplification
forte mais le balayage est moins rapide qu'avec un multiplicateur d'lectrons.
La spectromtrie de masse en tandem (MS/MS) []

Voir aussi : Squenage par spectromtrie de masse
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La spectromtrie de masse en tandem consiste slectionner un ion par une premire

spectromtrie de masse, le fragmenter, puis effectuer une deuxime spectromtrie de masse
sur les fragments ainsi gnrs.
Elle peut tre ralise l'aide de nombreux appareils combinant des secteurs magntiques,
lectriques, quadripolaires ou des temps de vol, mais galement au sein d'un mme analyseur
dans le cas d'une trappe d'ions.
Le triple quadriple []
Structure d'un triple quadripole
Un triple quadriple rsulte de l'association de deux analyseurs quadripolaires en srie, spars

par une cellule de collision souvent constitue d'un quadriple plus court. Cette combinaison de
quadriples permet de travailler en MS simple ou en tandem. Pour raliser une acquisition en
MS, il suffit de n'appliquer qu'une tension alternative l'un des analyseurs pour le rendre
"transparent" comme la cellule de collision, celle-ci ne contenant alors pas de gaz.
Lors d'une acquisition en MS/MS, la cellule de collision est remplie d'un gaz inerte (argon par
exemple) sous une pression relativement leve (10 2 torr). L'nergie cintique de l'ion
slectionn est convertie lors de ses collisions successives en nergie interne. La dissociation de
l'ion se ralisera lorsque son nergie interne sera devenue suprieure l'nergie d'activation
ncessaire la fragmentation. Cette technique de dissociation active par collision (CAD) peut
tre amplifie en augmentant l'nergie cintique des ions slectionnes par application d'une
diffrence de potentiel entre la source et la cellule de collision.
L'analyse MS/MS peut tre mene selon quatre modes diffrents selon l'information recherche :
le mode descendant est le plus utilis pour obtenir des informations structurales, les deux modes
(ascendant et perte de neutre) sont d'un usage plus restreint et permettent de mettre en vidence
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des ions ayant des particularits communes. Le quatrime mode (Multiple Reaction Monitoring
ou MRM), driv du mode descendant, est vou la quantification.
en mode descendant, l'ion tudier est slectionn en focalisant le premier analyseur sur son
rapport m/z. Les fragments forms dans la cellule de collision sont spars par le deuxime
analyseur et analyss. Le spectre obtenu prsente la fois l'ion prcurseur (ou ion parent) et ses
ions fragments (ou ions produits).
en mode ascendant, le premier analyseur balaie une gamme de masse tandis que le deuxime
est focalis sur un seul rapport m/z. Tous les ions gnrs en source et capables de donner un
fragment de mme rapport m/z seront donc ainsi dtects.
en mode perte de neutre, les deux analyseurs balaient une gamme de masse simultanment et
avec un dcalage de masse constant. Le spectre tabli prsentera alors tous les ions parents
capables de se fragmenter en gnrant un neutre de masse gale au dcalage impos.
en mode MRM, l'ion parent tudier est slectionn par le premier analyseur et fragment dans
la cellule de collision, comme en mode descendant. En revanche, le second analyseur est
focalis sur l'ion produit. Ce mode de fonctionnement prsente une double slectivit, au
niveau des slections de l'ion parent et de l'ion produit. En outre les deux analyseurs tant
fixes des tensions constantes, la sensibilit de dtection est amliore par rapport d'autres
modes de balayage, faisant de la MRM un mode de choix pour la quantification.
MSn en pige quadripolaire ("trappe d'ions") []

Au sein d'un pige quadripolaire ("trappe d'ions"), l'analyse en tandem se ralise dans un premier
temps par slection d'ions dont la valeur m/z est choisie. Ces ions pigs vont ensuite se
fragmenter par collision (acquisition d'nergie interne, excitation vibrationnelle) l'aide d'une
tension RF (radiofrquence) correspondant leur frquence de rsonance, et les ions produits
forms sont leur tour pigs. Une jection slective en masse des ions produits (fragments) peut
alors tre ralise en vue de leur analyse.
L'obtention d'ions de gnrations suprieures est possible par simple renouvellement du
processus (slection d'un ion produit, fragmentation, slection d'un ion produit de 2e gnration,
fragmentation, etc...). Cette squence est appele MSn, n tant le nombre de gnrations d'ions.
Ainsi la MS2 est la MS-MS et ainsi de suite...
Hybride []
Associer plusieurs types d'analyseur dans un spectromtre de masse en tandem permet de
combiner les points forts des deux types d'analyseurs.
Quadriple/temps de vol :
Ces appareils appels Q-TOF sont constitus d'un double quadriple (1er analyseur + cellule de
collision) et d'un analyseur temps de vol comme second analyseur. Le quadriple procure ainsi
une grande efficacit au processus MS/MS, tandis que le TOF apporte son excellente sensibilit,
sa grande rapidit d'analyse et ses rsolution et prcision en masse bien meilleure sur les ions
produits, par rapport une configuration triple quadriple. Cependant ces instruments sont
limits par la faible gamme dynamique du TOF.
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Quadriple/trappe d'ions :
Cette combinaison permet d'viter les problmes de charge d'espace associs la trappe d'ions.
La trappe apporte une meilleure sensibilit et une vitesse d'analyse plus rapide. En outre, par
rapport une trappe simple, cette combinaison autorise tous les modes d'acquisition MS/MS du
triple quadriple (perte de neutre et mode ascendant).
Trappe/temps de vol :
L'association d'une trappe d'ions et d'un TOF permet d'accder une analyse structurale trs
pousse par MSn grce la trappe, mais prsente aussi une grande prcision en masse sur les ions
prcurseurs et produits pour dtermination des formules brutes, compltant ainsi l'identification.
Cet appareil hybride est ainsi principalement ddi l'identification et l'analyse structurale.
Trappe/FT-ICR ou Trappe/Orbitrap :
Le but de ce genre de couplage est d'obtenir une prcision en masse et une rsolution, qui soient
encore meilleures qu'avec un TOF comme deuxime analyseur, et permettent l'tablissement de
formules brutes sans ambiguits et donc une identification facilite. Ces appareils reprsentent
cependant un investissement bien suprieur, compars un trappe/temps de vol.
50

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Procds de sparation

Par Vincent MAKOKHA

African Virtual university

Universit Virtuelle Africaine 

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Table des matires

Procds de sparation et techniques lectro-analytiques

6.2 Vue d'ensemble................................................................................... 5

6.3 Reprsentation graphique.................................................................... 7

VII. Objectifs gnraux..................................................................................... 7

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I. Procds de sparation et techniques

II. Prrequis/connaissances pralables

Structure de latome et concept de niveau dnergie

III. Volume horaire/temps

Techniques de sparation et chromatographie

IV. Matriels didactiques

Ordinateur, CD-ROMs et ressources virtuelles

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Sparation et techniques chromatographiques - 25 heures

Techniques lectro-analytiques - 15 heures

- lectrodes slectives ioniques

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Spectroscopie et techniques de spectroscopie atomique - 20 heures

Spectroscopie molculaire 1: uv-visible et ir- 30 heures

Spectroscopie dans lultraviolet/visible

Vibrations molculaires et spectroscopie infrarouge (IR)

Spectroscopie molculaire 2: rsonance magntique nuclaire

Spectroscopie de rsonance magntique nuclaire (RMN)

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PROCDS DE SPARATION ET TECHNIQUES LECTROANALYTIQUES ET SPECTROCHIMIQUES

VII. Objectifs gnraux

Universit Virtuelle Africaine 

VIII. Objectifs spcifiques dapprentissage

la fin de cette unit, les lecteurs seront capables de:

la fin de cette unit, les lecteurs seront capables de:

Universit Virtuelle Africaine 

la fin de cette unit, les lecteurs seront capables de:

Universit Virtuelle Africaine 10

IX. Activits denseignement et

2) Le nombre quantique principal le plus bas pour un lectron est:

a) Les acides et les bases ne ragissent pas ensemble

5) Comparativement la charge et la masse dun proton, un lectron a:

la mme charge et une masse infrieure

6) Quelle est la formule empirique du compos ayant la formule molculaire

Universit Virtuelle Africaine 11

7) Laquelle des conversions suivantes ncessite un agent oxydant ?

Mn3+ --> Mn2+

9) Calculez la [H+] dans une solution ayant un pH de 8,38.

12) Llectrode standard hydrogne a un potentiel de rfrence de :

Universit Virtuelle Africaine 12

13) Choisissez lquation qui ne reprsente pas une raction redox:

La concentration de lion hydrogne, [H+]

Universit Virtuelle Africaine 13

Universit Virtuelle Africaine 14

Il est fortement recommand lapprenant(e) de rviser les concepts et connaissances

Universit Virtuelle Africaine 15

Universit Virtuelle Africaine 16

Dtecteur: Cest un dispositif lectronique qui met en vidence de faon quantitative

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Universit Virtuelle Africaine 18

Universit Virtuelle Africaine 19

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