PRESENCIA DE OOQUISTES DE Coccidias INTESTINALES EN PACIENTES

INFECTADOS POR EL VIRUS DEL VIH EN EL HOSPITAL ROSARIO

PUMAREJO DE LOPEZ DE VALLEDUPAR PRIMER PERIODO 2009

MAYRA ALEJANDRA RAMOS MONTERO

YENIXSA ADELINA FUENTES MARTINEZ
GREINER BANJHOINER DURAN DIAZ

________________________
LUISA FERNANDA PEA
Asesora metodolgica

UNIVERSIDAD POPULAR DEL CESAR

FACULTAD CIENCIAS DE SALUD
PROGRAMA DE MICROBIOLOGIA
VALLEDUPAR
2009

PRESENCIA DE OOQUISTES DE Coccidias INTESTINALES EN PACIENTES

INFECTADOS POR EL VIRUS DEL VIH EN EL HOSPITAL ROSARIO
PUMAREJO DE LOPEZ DE VALLEDUPAR PRIMER PERIODO 2009

MAYRA ALEJANDRA RAMOS

YENIXSA FUENTES M
GREINER DURAN DIAZ

_____________________
LUISA FERNANDA PEA
Asesora metodolgica

_______________________
AMPARO HERNANDEZ
Asesora tcnica

UNIVERSIDAD POPULAR DEL CESAR

FACULTAD CIENCIAS DE SALUD
PROGRAMA DE MICROBIOLOGIA
VALLEDUPAR
2009

INTRODUCCIN

Cryptosporidium Spp son

parsitos intestinales pertenecientes a la familia

cryptosporidiae, los cuales tiene distribucin mundial y pueden ocasionar graves

infecciones diarreicas tanto en los seres humanos como en los animales, esta
enfermedad es conocida comnmente como criptosporidiosis. Su importancia se
manifest a comienzos de los aos 1980 por lo que puede considerarse una
patologa de conocimiento relativamente reciente, aunque actualmente se ha
demostrado que es una de las infecciones entricas ms frecuentes en humanos y
animales. (Casemore, 1997).
La criptosporidiosis constituye uno de los mayores problemas de salud pblica en
el mundo, hasta el punto de ser considerada en la actualidad como una
enfermedad emergente. Se trata de una zoonosis de transmisin fecal-oral
producida tras la ingestin de ooquistes de Cryptosporidium excretados en las
heces de animales o humanos. Aunque la infeccin puede ocurrir de forma
espordica, son cada vez ms frecuentes los brotes epidmicos, generalmente de
transmisin hdrica, asociados a aguas de bebida contaminadas, pozos, aguas
superficiales y de la red de abastecimiento pblico, incluso filtradas y tratadas. La
resistencia del protozoo a la cloracin ha provocado la aparicin de epidemias en
muchos pases industrializados, algunas de ellas de gran magnitud con afectacin
de miles de personas. (Garca y col, 2005).
Este proyecto se realizar en el Hospital Eduardo Arredondo Daza sede San
Martn de la ciudad de Valledupar, que est ubicado al suroriente de la ciudad con
capacidad de prestar servicios mdicos y de laboratorio a 3.000 pacientes
aproximadamente cada mes.

2. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

La Criptosporidiosis es una enfermedad parasitaria distribuida en todo el mundo.

En Europa su prevalencia alcanza una cifra promedio de 6.6%, en Africa las cifras
varian entre el 22% y 48%. En Amrica la mayor prevalencia de criptosporidiosis
ocurre en Haiti con un promedio de 42%. Numerosos casos han sido descritos
especialmente en Estados Unidos en trmino de 3-15%, extendindose
igualmente en otros pases.

En Colombia existen pocos estudios sobre prevalencia de Cryptosporidium sp, en

un estudio realizado en Bogot en 115 pacientes VIH positivos, se encontr la
prevalencia de 10.5%, otro estudio realizado en Medellin con 103 pacientes VIH
positivos se observ una prevalencia de 18.4%, luego de realizarles seriados,
concentraciones y PCR para Crytosporidium spp , y en nios con diarrea los
porcentajes oscilan entre el 4%. En la ciudad de Valledupar no se registran datos
epidemiolgicos de esta parasitosis debido a que muchos laboratorios en los
examenes coprolgicos no utilizan la tcnica de Zeelh Nelsen modificado que
facilita visualizar la presencia de coccidias en materia fecal. (Weitz y Tassara,
1999)

Debido a las pobres condiciones en que viven algunos nios del barrio 5 de Enero
en la Ciudad de Valledupar, las enfermedades parasitarias se hacen ms
frecuente al sumarse factores como la mala higiene, la cercana del barrio a las
sequas, y el contacto frecuente que tienen los nios con el suelo, lo cul
predispone a la poblacin infantil de contraer la enfermedad. En los ltimos meses
estos nios han presentado cuadros diarreicos graves, los cules no han sido
diagnosticados o tratados adecuadamente, ya sea por la automedicacin y

remedios caseros o por su difcil diagnostico en el laboratorio; lo que permite que

el nio siga infectado y adems sea una fuente de infeccin.
Este trabajo se enmarca en la lnea de investigacin de enfermedades infecciosas,
en la cul se va a estudiar la prevalencia de Crytosporidium spp en nios menores
de 4 aos de edad en el barrio 5 de Enero de Valledupar.

3. JUSTIFICACIN
Los resultados de investigaciones realizadas en los ltimos aos, sugieren que
Cryptosporidium spp
enteropatgenos

es, a nivel mundial, uno de los principales agentes

desencadenantes

inmunocomprometidos,

sino

de

tambin

diarreas,
en

no

personas

solo

en

individuos

inmunocompetentes,

poblaciones infantiles con trastornos nutricionales u otras enfermedades

infecciosas. (Mndez, 2002).
La seroprevalencia de Cryptosporidium parvum en Colombia es del 85% en la
poblacin menor de 4 aos, correspondiendo los mayores niveles de ttulos a
individuos

residentes

en

el

medio

rural

la

poblacin

femenina

independientemente de su procedencia. (Vergara, 1999)

En el municipio de Valledupar la prevalencia del Cryptosporidium spp representa
una amenaza principalmente en barrios marginados como el seleccionado 5 de
Enero donde las condiciones y localizacin geogrfica no son las mejores para
propiciar un buen estado de salud.

La afectacin de la criptosporidiosis

preferentemente en la infancia y en personas malnutridas e inmunodeficientes,

as como la capacidad de este protozoo para evadir los controles habituales del
agua de bebida y su resistencia a la cloracin, deben alertar sobre su potencial
importancia como problema de salud en la comunidad.
El correcto diagnostico de la enfermedad en nios con diarrea sospechosos de
criptosporidiosis, debe hacerse lo ms rpido posible cuando se inician los
sntomas y se debe considerar como una emergencia sanitaria, debido a que
medida que evoluciona la enfermedad, el parsito suele hacerse ms agresivo.

4. OBJETIVOS
4.1 OBJETIVO GENERAL
Conocer la prevalencia de Crytosporidium spp en nios menores de 4 aos de
edad en el barrio 5 de Enero de Valledupar en el primer periodo de 2008
4.2 OBJETIVOS ESPECIFICOS
4.2.1. Recolectar muestras de materia fecal de nios entre los 6 meses y 4 aos
de edad
4.2.2. Diagnosticar la presencia de Crytosporidium sp. Mediante la tincin de Zielh
Nelsen modificado
4.2.3. Informar la prevalencia de casos de Critosporidiosis encontrados en el barrio
5 de Enero de la ciudad de Valledupar.

5. MARCO TERICO
5.1 BASES TEORICAS
5.1.1 Cryptosporidium spp
Cryptosporidium

spp.

es

un

protozoario

parsito

intracelular

obligado

perteneciente taxonomicamente al Phylum Apicomplexa, Clase Sporozoasida,

Subclase Coccidiasina, Orden Eucoccidiida, Suborden Eimeriina y Familia
Cryptosporiidae.
Se han identificado aproximadamente 20 especies de Cryptosporidium en varios
animales hospederos, pero la validez de muchas especies no ha sido establecida
puesto que estudios de transmisin cruzada, demuestran que algunos aislados de
Criptosporidium son infectivos a varias especies de animales. Solo 6 a 8 especies
son consideradas especies validas de Criptosporidium por muchos investigadores
como, C. parvum, C. wrairi, C. felis, y C.muris en mamferos; C. baileyi y C.
meleagridi en pjaros; C. serpentis en reptiles y C. nasorum k en peces. (Agudelo
y col, 2005)
El gnero Cryptosporidium es el causante de la Criptosporidiosis, enfermedad
considerada principalmente como una parasitosis gastrointestinal cuya principal
va de contagio es la oral, siendo el agua un importante agente para su
diseminacin. Otros factores de riesgo son el estado inmunolgico, la edad y
estado nutricional del individuo, as como el nmero de parsitos causantes de la
infeccin y de las condiciones del medio ambiente, ya que los ooquistes
mantienen su infectividad durante un tiempo relativamente largo y son muy
resistentes a los desinfectantes. (Prez y col, 2005)

La criptosporidiosis humana fue informada por primera vez en 1907 por Tizzer
quien encontr el parasito en las glndulas gstricas del ratn y lo denomino
Criptosporidium muris. En 1912 se identifico una segunda especie en el intestino
delgado del ratn y se nombr Cryptosporidium parvum. El primer caso en
humanos fue reportado en 1976 por Nime y colaboradores, quienes encontraron el
parsito en la biopsia rectal de una nia. Hasta esa poca el parsito se
consideraba un protozoo que causaba diarrea en varias especies de animales. A
partir de 1982 con la aparicin del SIDA toma auge la bsqueda de este parasito,
el cual es identificado con mayor frecuencia, en sujetos inmunodeprimidos y en
brotes epidmicos. (Agudelo y col, 2005)

Los brotes de la enfermedad se han asociado con los sistemas pblicos de

suministro de agua contaminados y nadar en piscinas y lagos contaminados. El
cuadro clnico se caracteriza por diarrea acuosa intensa, dolor abdominal
(calambres y retortijones), prdida de peso, anorexia, flatulencia y malestar
general. Pueden presentarse fiebre, dolores musculares, nuseas y vmitos.
Muchas veces la diarrea y el dolor aparecen cada vez que se ingieren alimentos.
Su perodo de incubacin se estima que es de 2 a 14 das. La gravedad y duracin
de la enfermedad son variables en el paciente inmunodeprimido. En el paciente
inmunocompetente se autolimita en 1 o 2 semanas. (Steinsland, 2003)

5.1.1.1 Agente etiolgico

El Crytosporidium spp es un protozoario, intracelular obligado, monoxeno, con
fases de reproduccin sexual y asexual que ha sido ampliamente estudiado en la
escala de vertebrados, incluida la especie humana. (Prez y col, 2005)
La forma infectante y de diagnstico es el ooquiste. En materias fecales
observadas en fresco, se ven como cuerpos esfricos, muy pequeos y

refringentes que no permiten hacer el diagnostico (figura N 1A), por tanto se

requiere hacer coloraciones especiales como la Zielh-Neelsen con la cual se
observan como cuerpos esfricos rojos de 3 a 4 micras (Figura N 1B), o rosados
o transparentes porque toman la coloracin de forma diferente (Figura N 1C), son
acido resistente poseen una pared gruesa, 4 esporozoitos desnudos, una vacuola
y un cuerpo residual. (Agudelo y col, 2005)

Se ha identificado la especie C. parvum, como la principal responsable de las

infecciones humanas y de algunos animales, pero existen 9 especies propias de
animales, algunas de las cules afectan al hombre como C. muris y C. felis. En las
materias fecales son eliminados los ooquistes esfricos o elipsodiales que miden
de 4 a 5 micras. Estas son las formas parasitarias infectantes para las personas o
animales. (Restrepo, 2005)

Estos parsitos son diminutas esferas intracelulares observadas en gran nmero

justo por debajo de la membrana externa de las clulas del revestimiento del
estmago o el intestino. Por tanto, son intracelulares pero extracitoplasmticos. El
trofozoito maduro (esquizonte) se divide en ocho merozoitos arciformes liberados
por las clulas progenitoras para iniciar un nuevo ciclo. Pueden observarse
oocistos que miden de 4 a 5 micras y contienen cuatro esporozoitos, pero no se
han demostrado esporocistos. Se presume que los oocitos excretados en gran
cantidad en las heces son los agentes infectantes. (Jawetz y col, 2005)

Los merozoitos y los esporozoitos son las formas invasivas del parsito y por tanto
las que tiene el complejo apical (micronemas, conoide, rhoptrias anillo polar), que
le permite la penetracin a la clula blanco, adems posee un ncleo, aparato de
golgi y abundante retculo endoplsmico. (Agudelo y col, 2005)

Figura N 1A

Figura N 1B

Figura N 3A

Agudelo y col. Parsitos intestinales oportunistas terica y prctica, 1 Edicin

Biognesis. 2005

5.1.1.2 Clasificacin
Cryptosporidium hominis afecta nicamente al hombre y ha sido responsable de
muchos brotes en todo el mundo, mientras que C. parvum, que parece ser el
principal implicado en Europa, es capaz de infectar tambin a todas las especies
de mamferos, especialmente a animales recin nacidos; el genotipo 1 es el que
ms se asla en humanos en la mayora de los estudios y se asocia a una mayor
intensidad y duracin de la parasitosis. Otras especies de Cryptosporidium no se
consideraban hasta hace poco patgenas para el hombre. Sin embargo, en los
ltimos aos, se han descrito ms de 40 casos de infeccin por C. felis, C.
meleagridis, C. canis, C. muris y C. baileyi, todos ellos en pacientes infectados por
el virus de la inmunodefieciencia humana (VIH). (Garca y col, 2003)

TABLA N 1 Especies de Cryptosporidium

Especie

Deteccin en:

Cryptosporidium parvum

Rumiantes y humanos

C. hominis

Humanos

C. muris

Roedores, otros mamferos

C. andersoni

Ganado vacuno

C. wrairi

Cobayas

C. felis

Gatos

C. canis

Perros

C. meleagridis

Pavos, aves y humanos

C. baileyi

Pollos y pjaros

C. galli

Pjaros

C. serpentis

Lagartos, serpientes

C. saurophilum

Lagartos, serpientes

C. molnari

Peces

5.1.1.3 Ciclo de vida

El ciclo biolgico de este protozoo es similar al de otras coccidias, con etapas
asexuadas y sexuadas, las cules culminan con la formacin del ooquiste de
Cryptosporidium que es la forma infectante de esta parasitosis. (Botero, 2005). El
periodo de inoculacin es de dos a 10 das, lo cul se explica por la rapidez con
que se forman los ooquistes. (Becerril M, 2004)

El hombre se infecta al ingerir alimentos o bebidas contaminadas con ooquistes

que salen en la materia fecal de animales infectados o del hombre y los cules
pueden sobrevivir en el ambiente por largos perodos de tiempo y con
temperaturas de 20C 30C.
El gnero Cryptosporidium, posee un ciclo asexuado y otro sexuado, los cules
suceden en el interior de los enterocitos en infecciones intestinales. Este ciclo se
inicia con la reproduccin asexuada, cuando el ooquiste infectante ingresa por va
oral al estmago, este mide de 4 a 6 m de dimetro y contiene cuatro
esporozoitos en su interior, se desenquista por accin del cido clorhdrico y
enzimas digestivas que libera a los esporozoitos invadiendo la clula para
convertirse en trofozoitos y esquizontes (merogonia), de primera y segunda
generacin. (Weitz J, 2005)
Los merozoitos (merontes) procedentes de sta segunda generacin, inician el
ciclo sexuado con microgametocitos y macrogametocitos que dan origen a clulas
masculinas

femeninas,

llamadas

microgametos

macrogametos

respectivamente. Esto se une, formado zigotes y luego ooquiste, uno de pared

delgada que autoinfectan especialmente a los pacientes inmunocomprometidos y
otros de pared gruesa que salen al exterior para contaminar otros huspedes
susceptibles. La reproduccin se hace dentro de una vacuola parasitfora en las
clulas de las microvellosidades, que se observan como prominencias en el
microscopio.

La

localizacin

de

estas

vacuolas

es

intracelular

pero

extracitoplasmticas. (Botero, 2005).

La duracin de las cuatro fases de reproduccin es de 12 - 24 horas, y termina con
la formacin de una nueva generacin de parsitos que origina ooquistes de pared
gruesa y de pared delgada. Los primeros son eliminados con las materias fecales,
los segundos pasan por el proceso de desenquistamiento dentro del hospedero,

este proceso, unido a ciclos repetitivos de merontes1, explica de alguna manera la

autoinfeccin

interna

infeccin

crnica,

especialmente

en

hospederos

inmunocomprometidos. La duracin de la infeccin depende de varios factores, los

ms importantes estn asociados a la inmunocompetencia y a la edad de los
hospederos. (Agudelo y col, 2005)
La arquitectura de las vellosidades de la mucosa intestinal usualmente
permanecen normal, pero pueden ocurrir alteraciones histolgicas inespecficas.
Se ha observado atrofia leve o moderada de las vellosidades, aumento de tamao
de las criptas e infiltrado inflamatorio de la lmina propia, con polimorfonucleares,
linfocitos y clulas plasmticas. En infecciones severas pueden observarse
anormalidades morfolgicas duodenales intensas, con aplastamiento de las
vellosidades. La susceptibilidad aumentada de los enfermos de SIDA a la
criptosporidiosis grave evidencia la importancia del sistema inmunitario. (Prez,
2005)
El periodo prepatente de esta infeccin es de dos a cinco das y el periodo patente
en inmunocompetentes puede alcanzar ms de un mes; en cambio, en
inmunocomprometidos se puede prolongar por meses e incluso aos. ((Weitz J,
2005)

Figura N 2. Ciclo de vida del Crytosporidium (www.btfbio.com)

5.1.1.4 Epidemiologia
Se han descrito ms de 20 especies en la naturaleza. Las que infectan al hombre
tambin lo pueden hacer en gatos, perros, reses, cerdos, ratones, ratas, ovejas.
Los criptosporidios de aves no pueden infectar a mamferos ni los de stos a
aquellos. Lo anterior indica que la criptosporidiosis es una zoonosis.

La

transmisin ocurre de persona a persona, por contaminacin de fmites y moscas

portadoras. Pero la principal fuente de contaqio es el agua. (Becerril M, 2004)
5.1.1.5 Patologia y Patognesis
La unin al glucoclix e invasin a la clula hospedera son acontecimientos
crticos y complejos en la patognes por Cryptosporidium spp

e involucran

mltiples protenas, tanto de la clula hospedera como del parsito; las protenas
de la clula hospedera an no se conocen, pero entre las protenas del parsito
involucradas en ese proceso, se encuentran las secretadas por las organelas del
complejo apical de esporozoitos y merozoitos, algunas conservadas en todos los
apicomplexas, como las protenas de los micronemas que facilitan la adhesin, y
otras especficas de especie.
De las molculas con dominios nicos en Cryptosporidium spp, estn la CSL
(circumsporozoite-like antigen); glicoprotenas de 130 KDa presente en la
micronema, grnulos densos y superficie del parsito, la GP900 la cul se ha visto
involucrada en la unin e invasin, porque facilita la movilidad y especificidad del
esporozoito para entrar a la clula hospedera

y la TRAP-C1 y la TRAP-C2

importantes en el reconocimiento del receptor de la clula hospedera.

Las lesiones histolgicas causadas por la invasin del Cryptosporidium spp no son
caractersticas y los cambios en el intestino delgado varan de leves a severos, de
acuerdo a la carga parasitaria en el intestino. Las interacciones iniciales entre el
parsito y el hospedero causan un acortamiento de las microvellosidades con

atrofia y aumento de las criptas. Al 3- 4 da se inicia la hiperplasia de las criptas

con infiltrado celular (predominio de mononucleares), desde la mucosa intestinal
hasta la lmina propia. La localizacin predominante del parsito es el yeyuno
seguido del ilen causando un desbalance electroltico, provocando diarrea
acuosa con sndrome de mala absorcin.

Los mecanismos involucrados en la produccin de la diarrea secretora son:

1. El incremento mucosal en la produccin de las prostaglandinas PGL2 y PGE2,
la primera con una accin indirecta sobre el sistema nervioso entrico y la ltima
con una accin directa sobre el enterocito, inhibiendo la absorcin del sodio, cloro
y agua.
2. Las alteraciones en la permeabilidad intestinal dada por el aumento interferon
gama (INF )

5.1.1.6 Manifestaciones clnicas

La infeccin se presenta en dos formas, segn sea el estado inmunitario del
hospedero:
a. Inmunocompetentes: aproximadamente el 10 al 20% de los casos infectados
son asintomticos. E los sintomticos la diarrea y el dolor abdominal son los
sntomas principales, pero debe tenerse en cuenta que frecuentemente los
pacientes positivos para Cryptosporidium, tienen otros agentes infecciosos como
son parsitos, bacterias y virus, que pueden causar o contribuir a esa

sintomatologa. El periodo de incubacin vara entre 3 y 12 das. La sintomatologa

puede fluctuar entre la sensacin de indigestin y un cuadro de enteritis con
diarrea de tipo agudo o crnico. La diarrea generalmente es acuosa, a veces con
moco y sangre, la mayora de las veces sin leucocitos. Se presenta con 5 a 10
episodios diarreicos al da, despus de un tiempo puede seguirle la constipacin.
En nios con diarrea intensa o crnica, se puede asociar a deshidratacin. La
diarrea y otros sntomas digestivos son ms frecuentes en menores de 5 aos y
en nios desnutridos. Los menores de 1 ao son ms sintomticos cuando no
reciben leche materna. Los pacientes se quejan de dolores abdominales
ocasionalmente fiebre, cefalea, anorexia, vmito y prdida de peso. Auto limitada
a 10 14 das. (Botero y col, 2005)
b. Inmunodeficientes: los sntomas ms intensos y largos. La diarrea es crnica
con enfermedad debilitante, malestar, anorexia y fiebre. Perdida de electrolitos,
sndrome de mala absorcin.

En los pacientes con SIDA, se ha encontrado

diseminacin con complicacin pulmonar. Causa neumona intersticial, colecistitis,

colestasis, pancreatitis, laringotraqueitis, sinusitis. Tambin ocurre en pacientes
con hipogammaglobulinemias, terapia inmunosupresora, desnutricin, y otros
defectos de inmunidad. Hay casos asintomticos pero son menos frecuentes.
(Botero y col, 2005)
En sujetos positivos al HIV se han encontrado infecciones por Cryptosporidium en
vescula biliar, lo cual puede conducir a colecistitis y colangitis esclerosante, fiebre,
dolor a nivel del cuadrante superior derecho sin irradiar el hombro. Tambin se
presenta dolor, naseas, diarrea, vmito e ictericia. Hay elevacin de bilirrubina en
suero y enzimas hepticas si la infeccin se desarrolla en la vescula biliar.
Tambin suele reconocerse dilatacin y engrosamiento de la vescula y conductos
biliares. Por lo regular aparece la infeccin en conductos pancreticos y ello
provoca pancreatitis y enteritis. (Becerril M, 2004)

A nivel de las vas respiratorias el paciente manifiesta tos, ronquera y respiracin

acortada. Los parsitos se han demostrado en esputo, aspirado bronquial,
secrecin broncoalveolar y exudado alveolar. Tal vez la infeccin se debe en estos
casos al contacto nasal accidental del parsito encontrado en fomites, la ruta de
entrada puede ser la va inhalatoria accidental al aspirar polvo que contiene hces
de gatos o perros y, dado que el paciente es inmunodeficiente, el parsito se
disemina con facilidad. No hay comunicaciones de diseminacin a nivel
extraintestinal. Por lo general, la localizacin extraintestinal se acompaa de
infccin por Cytomegalovirus, Pneumocystis carinii y Mycobacterium tuberculosis.
((Becerril M, 2004)
5.1.1.7 Inmunidad
Cryptosporidium parvum

tiene una

composicin bioqumica compleja, posee

carbohidratos, lpidos, glicoprotenas y otros gliconjugados que son reconocidos

por la respuesta inmune humoral. Hay un alto grado de conservacin antignica
entre los estadios asexuales y sexuales del ciclo de vida y estos antgenos
(especialmente de organelas del complejo apical y antgeno de superficie de los
estadios extracelulares).

Se han utilizado para evaluacin de estrategias de

inmunizacin activa y pasiva.

Se han identificado por lo menos ocho antgenos capaces de inducir anticuerpos
neutralizantes, pero la respuesta en el control de la enfermedad no es clara, sin
embargo en modelos animales se ha visto que altos ttulos de anticuerpos (IgM y
IgG) y mucosales (IgA) contra el parsito, coinciden con la resolucin de la
infeccin y pueden contribuir a la resistencia o diseminacin de la severidad de la
reinfeccin, pero esto requiere ms estudios. La inmunidad celular es esencial en
el control de la infeccin y son los linfocitos TCD4+, el INF y la IL12 los que

tienen la funcin ms importante en la resistencia y recuperacin de las

infecciones por C. parvum (Agudelo y col, 2005)
5.1.2 Cyclospora spp
Cyclospora cayetanensis (C. cayetanensis) es un protozoo patgeno emergente
causante de enfermedad diarreica. Esta coccidia era referida, por desconocerse
su ubicacin taxonmica, como cuerpos similares a cyanobacterias o formas
grandes de Cryptosporidium. Fue despus de los estudios realizados por Ortega
et al. que se conoci su clasificacin taxonmica. (Almirall P, 2008)
Estos investigadores despus de inducir la esporulacin con solucin de dicrmato
de potasio a los conocidos como cuerpos similares a cyanobacterias
procedentes de casos clnicos, observaron que estos microorganismos eran
capaces de esporular y en su interior desarrollaban esporoblastos y esporozoitos,
esto confirm que se trataba de un protozoo. (Vasquez O y col, 2000)
Posteriormente se defini su especie por Ortega y cols. En 1993. Despus de
identificar que pertenecan al gnero Cyclospora, se propuso la nomenclatura a la
especie como Cayetanensis, por ser ste el nombre de la universidad de Lima,
Per

(Universidad

Cayetano

Heredia)

donde

se

llevaron

cabo

las

investigaciones. (Almirall P, 2008)

C. cayetanensis es un parsito intracelular obligado, diagnosticado inicialmente
entre 1977 y 1978 e informado en 1979 por Ashford en Papua, Nueva Guinea
como agente etiolgico de infeccin intestinal que se manifiesta despus de un
periodo de incubacin entre 1 a 11 das. Esta coccidia ha sido encontrada en
hospederos inmunocompetentes, en brotes institucionales y comunitarios,
portadores asintomticos y en pacientes con compromiso del sistema inmune.
(Botero J, 2006)

La infeccin por este parsito llam la atencin a la ciencia por estar asociada a
diarrea del viajero, adquiri una mayor relevancia en los primeros aos de la
dcada de los 1990s, cuando se notifica su asociacin con diarreas en pacientes
con Sndrome de inmunodeficiencia Adquirida (SIDA). (Almirall P, 2008)
5.1.2.1 Agente etiolgico
Cyclospora pertenece al phylum apicomplexa, clase sporozoa, orden telosporidia,
suborden coccidia, familia eimeridae. Est relacionado taxonmicamente a cuatro
gneros de coccidias que han sido descritos como patgenos en humanos
crytosporidium, Isoospora, Toxoplasma y Sarcocystis (Botero J, 2006)
Cyclospora cayetanensis es un coccidio oportunista, agente de diarreas en nios,
viajeros y pacientes HIV positivos. Sus ooquistes esferoides van desde 8 a 12 de
dimetro, conteniendo dos esporoquistes

de 4 por 6 . Los Ooquistes son

estructuras coloreables por la tcnica de Kinyoun, presentandose como semicido

resistente, y poseen capacidad de autoflorecer con resplandor azulado cuando se
observan al microscopio de inmunofluorescencia. (Salvatella R y cols, 2002)
Como todos los esporozoarios, Cyclospora tiene varios estadios: Ooquistes no
esporulados, Ooquistes esporulados, esporozoitos, esquizontes, merozoitos y
gametos. Los ooquistes no esporulados (estado diagnstico) son esfricos,
hialinos y no refrctiles; miden entre 8 y 10 m de dimetro, no asimilan el lugol y
en el centro se observa una estructura semejante a una mrula que refracta la luz
y presenta una doble pared. Mediante microscopia electrnica de transmisin se
observa la doble pared, que tiene 113nm de grosor; su capa externa es rugosa
(63nm) y la interna lisa (50nm). (Ponce M, 1996)

Los ooquistes esporulados (estadio infectante) contienen dos esporoquistes, cada

uno con dos esporozoitos. Los esporozoitos miden 1.2 m de ancho por 9.0 m de
longitud y presentan un ncleo con nucleolo y un complejo apical constituido por
micronemas y roptris. Es probable que los esquizontes contengan seis a ocho
merozoitos. Estos ltimos tambin poseen un complejo apical. (Ponce M, 1996)
5.1.2.2 Clasificacin
La especie Cayetanensis es la nica patgena en el hombre y la que se ha
logrado encontrar en heces de humanos. Otras especies de Cyclospora han sido
encontradas en monos, roedores, reptiles, e insectos, pero tienen una gran
diferencia a la especie encontrada en el hombre, los ooquistes son ovoides, de
mayor tamao que las identificadas en humanos y hasta la fecha no se ha podido
demostrar el potencial zoontico de esta parasitosis. (Botero J, 2006)
Han sido descritas diferentes especies, segn al tamao de los ooquistes y el
hospedador, cuatro de las cuales han sido aisladas en primates: C. cayetanensis,
en Homo sapiens; C. cercopitheci, en Cercopithecus aethiops; C. colobi, en
Colobus spp, y C. papionis, en Papio spp. (Garcia A y cols, 2005)
En el caso de C. cayetanensis, el examen microscpico en fresco a partir de
heces no conservadas permite la observacin de unas estructuras esfricas de 810 m, hialinas, no refrctiles, que contienen una mrula de color verdoso, de
aproximadamente 6-7 m de dimetro, con varios glbulos, de aspecto lipdico, de
unos 2 m, dispuestos en racimo o roseta. La morfologa interna es observable
slo en las heces recin emitidas, y se conserva nicamente manteniendo las
heces en agua, ya que la adicin de conservantes provoca la coalescencia de los
glbulos intramorulares y da lugar a un nmero variable de cuerpos irregulares
mal definidos. (Ponce M, 1996)

Al igual que sucede con el gnero Cryptosporidium, los ooquistes de C.

cayetanensis son cido-alcohol resistentes pero, a diferencia de los primeros,
stos presentan una autofluorescencia perifrica cuando son excitados con luz
ultravioleta. La cido-alcohol resistencia es una caracterstica muy variable, ya que
hay ooquistes que no se tien y tienen un aspecto vtreo, mientras que otros se
pueden observar de color rojo oscuro o rosado, con aspecto moteado, fenmeno
que ha sido atribuido a la extremada sensibilidad a la desecacin de estos
organismos y a la deshidratacin intrnseca de los mtodos de tincin. (Garcia A y
cols, 2005)
Tabla N 2. Especies del gnero Cyclospora descritas antes de 1993
Especie

Hospedador

Tamao del ooquiste (m)

C. angiomurinensis

Chaetodipus hispidus

19-24 x 16-22

C. ashtabulensis

Parascalops breweri

14-23 x 11-19

C. babaulti

Vipera berus

C. caryolytica

Talpa europea

16-19 x 13-16

C. cayetanensis

Homo sapiens

8-10

C. glomerica

Glomeris sp

25-36 x 9-10

C. megacephali

Scalopus aquaticus

14-21 x 12-18

C. parascalopi

Parascalops breweri

13-20 x 11-20

C. talpae

Talpa europea

12-19 x 6-13

C. tropidonoti

Tropidonotus natrix

C. viperae

Vipera aspic

16,8 x 12,6

5.1.2.3 Epidemiologia
La incidencia y prevalencia de la infeccin por Cyclospora cayetanensis se
desconocen, en parte por la pobre asistencia a las consultas mdicas de las
personas con cuadros diarreicos, la poca sensibilidad de las tcnicas diagnsticas
disponibles, el nmero reducido de ooquistes que aparece en las heces del
paciente, unido al poco uso de tcnicas de concentracin para protozoos en los
laboratorios, as como la poca indicacin de realizacin de la tcnica de ZiehlNeelsen y la inexperiencia de muchos de los laboratoristas para identificar los
ooquistes de Cyclospora. (Almirall P, 2008)
Sin embargo, esta infeccin est siendo reportada en forma creciente en
numerosos pases a escala mundial, incluyendo Guatemala, Venezuela, Nueva
Guinea, Espaa, Cuba, Brasil, EUA, Canad, Hait, Colombia y Turqua, Per,
Vietnam, Nepal, Egipto, entre otros. Esta informacin, en la mayor parte de las
notificaciones, proviene de estudios realizados en viajeros internacionales,
inmunodeprimidos y escolares. (Almirall P, 2008)
En el continente americano se han realizado mltiples reportes de esta infeccin.
Los estudios de frecuencia de aislamiento de ste parsito reportan cifras que van
del 0.2% al 10.9%, porcentajes que varian de acuerdo con la poblacin estudiada,
poca del ao en que se realiz el estudio y mtodo diagnstico de laboratoirio
empleado. (Vasquez O, 2000)
En Guatemala, al estudiar personas de diferentes localidades a mediados de la
dcada de los 90.,se encontr que el 2,3% de la muestra estudiada, entre adultos
y nios, estaban infectados por esta coccidia. En Venezuela, entre la poblacin

indgena de San Antonio de Morichal se encontr que entre las coccidias, esta fue
la ms prevalente alcanzando hasta un 11,9%. En Cuba se encontr en un estudio
en inmunodeprimidos por SIDA que el 3% estaban infectados y en un estudio
realizado entre escolares de una zona urbana se demostr la presencia de
Cyclospora en 0,7% de los nios estudiados. Cifras superiores se encontraron
entre nios ingresados en un hospital peditrico, donde el 3,7% de los ingresados
en los servicios de atencin a pacientes con diarrea estaban infectados por este
protozoo. (Almirall P, 2008)
En Per ha sido informada en el 18% de los nios menores de dos aos, Nepal 3
al 7% en poblacin general y en Haiti 11% de los pacientes VIH positivos.
Asociados a fuentes de infeccin como abastecimientos de agua, frambuesas,
frutas, verduras y moluscos. Es importante sealar que tanto en estos brotes
epidmicos como en la mayora de series clnicas reportadas la aparicin de los
casos de ciclosporiasis coincide con la poca de mayor pluviosidad entre los
meses de abril y mayo. (Botero J, 2006)
Sin duda el mejor conocimiento de esta nueva entidad clnica se debe a la
experiencia recogida en brotes epidmicos como los ocurridos en Nepal y
Chicago. En un hospital de Katmand, Nepal, se atendieron entre mayo y octubre
de 1989, ms de 50 personas que presentaron un sndrome diarreico prolongado
(100%), astenia y fatiga (90%) y anorexia (86%) y en cuyas heces se detect
estructuras compatibles con Cyclospora spp. La duracin de los sntomas fue de 4
a 107 das, siendo igual entre los pacientes tratados y aquellos que no recibieron
antibiticos. Al ao siguiente hubo un nuevo brote que afect a 85 pacientes
detectados en el mismo hospital, entre los meses de mayo y octubre de 1990, con
una sintomatologa semejante a la descrita. (Arias A, 2005)

En un esfuerzo para determinar la fuente de contagio, se estudiaron diversas

muestras de agua de bebida y de riego, verduras y estircol de vacuno, y se pudo
asilar el parasito en lechugas que haba consumido un enfermo.
En 1990, en un hospital de Chicago se produjo un brote epidmico del sndrome
diarreico provocado por coccidias determinadas como Cyclospora spp en 20
personas (17 mdicos y 3 empleados) y que dur, con ciclos de remisiones y
recadas, un lapso de 3 a 4 semanas. Esta vez, las fuentes de contagio fueron
estanques de agua contaminada. (Arias A, 2005)
El mecanismo de transmisin de esta parasitosis es la ingestin de agua
contaminada con ooquistes esporulados, tambin se han informado brotes
relacionados con la ingestin de verduras o frutas que se consumen sin coccin,
como lechuga, albahaca, fresas y frambuesas. Se descarta la transmisin directa
(fecal-bucal) de persona a persona porque los ooquistes que se eliminan con la
materia fecal no son infectantes y necesitan varios das para esporular. Es (Ponce
M, 1996)
Los brotes de transmisin por alimentos resaltan la necesidad de fortalecer las
medidas de control y de prevencin para asegurar que los productos alimentarios
que se comen crudos entn libres de Cyclospora cayetanensis, adems de la
necesidad de continuar investigando sobre la biologa y la epidemiologa de esta
coccidia tambin se ha reportado la presencia de portadores sanos, especialmente
en pases donde la infeccin es endmica. (Almirall P, 2008)
5.1.2.4 Ciclo de vida
El ciclo de vida de Cyclospora cayetanensis no ha sido totalmente dilucidado. La
presencia de ooquistes en heces sugiere que el ciclo sexual y el asexual pueden
desarrollarse en el hospedero humano. Su localizacin es intracitoplasmtica,

dentro de una vacuola parasitfora en la regin apical supranuclear de las clulas

epiteliales del intestino delgado; all se reproduce y se multiplica. Al salir al exterior
con las heces los ooquistes no estn esporulados. (Almirall P, 2008)
Requieren de tiempo fuera del hospedero para su esporulacin y convertirse en
infecciosos, por tanto la transmisin de persona a persona no es probable. El
tiempo requerido para la esporulacin en la naturaleza no es conocido. En el
laboratorio los microorganismos en condiciones ptimas de laboratorio esporulan
dentro de las primeras dos semanas de excretados. Se plantea que la forma
infectante llega a un nuevo hospedero susceptible a travs del agua y los
alimentos contaminados. (Almirall P, 2008)
Cyclospora spp realiza un ciclo vital enteroepitelial y monoxnico, funcionalmente
complejo, como el de los restantes Apicomplexa, con alternancias de ciclos de
reproduccin asexual, esquizognico o merognico, y de reproduccin sexual,
esporognico o gamagnico. (Bayoumi E, 2001)
El parsito entra en el ser humano por medio de la ingestin de agua o comida
contaminada con ooquistes maduros (encontrados en las heces). En el intestino
delgado, cada ooquiste libera cuatro esporozotos, los cuales invaden el epitelio y
penetran en los enterocitos. Dentro de stos se lleva a cabo la esquizogonia
(reproduccin asexual) que implica la formacin y maduracin de seis a ocho
merozoitos. Los enterocitos infectados se rompen y liberan en la luz intestinal los
merozotos, que pueden invadir a otros enterocitos. El parsito utiliza esta fase
para diseminarse con rapidez dentro del hospedero sin necesidad que exista una
reinfeccin. (Gini G, 2005)
En los enterocitos tambin se produce el estado esporognico (reproduccin
sexual) que incluye el desarrollo y maduracin del microgametocito (masculino) y
macrogametocito (femenino). El microgametocito fecunda al macrogametocito y se

forman los cigotos, que evolucionan a ooquistes no esporulados (estado de

diagnstico); cuando los enterocitos se rompen, liberan los ooquistes en la luz
intestinal y despus se eliminan con las heces. (Gini G, 2005)

Gini G, Ciclo de vida de Cyclospora sp. Atlas de Microbiologia

5.1.2.5 Patologa y Patognesis

El hombre adquiere la parasitacin como consecuencia de la ingestin de los
ooquistes maduros, con posterior liberacin de los esporozotos y su fijacin e
internalizacin en los enterocitos yeyunales. El mecanismo ntimo de estos
eventos es desconocido, pero se supone que ser similar al de otros Apicomplexa:
i) reconocimiento intercelular, fijacin a travs del conoide y formacin de la "unin
mvil" esporozoto-enterocito; ii) liberacin del contenido de las rhoptrias e
invaginacin de la membrana de los enterocitos, facilitada por los movimientos de
deslizamiento, flexin y torsin de los esporozotos; iii) fusin de la membrana
invaginada, localizacin de los esporozotos en el interior de vacuolas
parasitforas de origen celular, cerca del polo luminal, y su multiplicacin cclica.
(Garcia A y cols,2005)
El estudio histopatolgico de biopsias de intestino delgado procedentes de
pacientes con ciclosporosis ha permitido la observacin, en todos los casos, de
alteraciones similares, de gravedad variable: i) reaccin inflamatoria difusa y
crnica, con infiltrado polimorfonuclear -leucocitos neutrfilos, linfocitos y clulas
plasmticas de la lmina propia; ii) aplastamiento, atrofia parcial o prdida de
vellosidades, e hiperplasia de las criptas, de modo que la relacin del nmero de
villi por cripta es de 0,6-1,5 en la parasitacin, frente a 3-4 en condiciones
normales. Estas evidencias, unidas a la ausencia de invasin tisular, han sugerido
la posibilidad de que este proceso estuviese mediado por una enterotoxina.
(Garcia A y cols,2005)

Investigadores como Connor et al. han encontrado que en casos asintomticos la

estructura histolgica suele estar conservada. En casos sintomticos, junto a la
presencia de diferentes estadios del parsito dentro del enterocito, existen
anomalas histolgicas como el acortamiento de las vellosidades intestinales y
alteraciones celulares de los enterocitos, los que adquieren forma columnar o
cuboide; hay hiperplasia de las criptas y presencia de un infiltrado inflamatorio de
leucocitos polimorfonucleares, linfocitos y clulas plasmticas en la lmina propia.
Muchos de los cambios inflamatorios pueden persistir, an despus de que la
infeccin cura. (Almirall P, 2008)
5.1.2.6 Manifestaciones clnicas
La infeccin por C,cayetanensis puede cursar en forma asintomtica, aunque su
proporcin en el total de infectados se desconoce. Mientras en los pacientes
inmunocompetentes la mayor prevalencia de casos sintomticos se presenta en
nios, en los pacientes inmunocomprometidos (SIDA) principalmente ocurre en
adultos y en ellos la sintomatologa es ms intensa y grave. (Arias A, 2005)
La presencia de portadores sanos es frecuente, sobre todo en reas endmicas.
En los casos sintomticos, despus de un perodo de incubacin promedio de 7
das, las personas infectadas por Cyclospora cayetanensis comienzan con un
cuadro diarreico alto, caracterizado por un nmero entre 4 y 10 deposiciones
diarias, acuosas, abundantes, con flema, pero sin sangre. Tambin es frecuente
encontrar dolores abdominales, nauseas, vmitos, anorexia fatiga, flatulencia,
prdida de peso significativa y en un por ciento de los casos fiebre y escalofros.
Sntomas como mialgias y artralgias pueden preceder al cuadro diarreico. (Almirall
P, 2008)
En los individuos inmunocompetentes, la infeccin sintomtica presenta
caractersticas similares a las de cualquier patgeno no invasor del intestino

delgado, con un perfil sindrmico indiferenciable del de otros coccidios

intestinales. El periodo de incubacin es variable, de 1 a 14 das, aunque por
trmino medio suele ser de una semana. Los prodromos, de 1 a 2 das de
duracin, consisten en malestar general y febrcula. La fase de estado se
caracteriza por la aparicin abrupta de diarrea acuosa, con 5 a 10 deposiciones
diarias, acompaada de astenia, anorexia, nauseas, vmitos, flatulencia y,
ocasionalmente, de dolor abdominal, esteatorrea, malabsorcin de D-xilosa, y
mialgias. La diarrea inicial dura de tres a cuatro das, pero a los pocos das, y
durante varias semanas, aparecen episodios diarreicos intermitentes, de
intensidad variable, que pueden determinar una perdida de masa corporal del 5 al
10%. En los periodos no diarreicos se mantienen la astenia y la anorexia. La
duracin de la diarrea es muy variable, oscilando entre 4 y 107 das, con una
media de cuatro a nueve semanas. La resolucin de los sntomas se produce de
forma abrupta y se asocia con la desaparicin de los ooquistes fecales. (Garcia A y
cols, 2005)
En los pacientes inmunodeprimidos, el cortejo sintomtico es similar al observado
en los pacientes inmunocompentes aunque, a diferencia de stos, en los que el
proceso es autolimitado, en los primeros es ms insidioso y prolongado en el
tiempo, con tendencia a la cronificacin, y siempre revistiendo una mayor
gravedad. Aunque C. cayetanensis es un patgeno intestinal primario, tambin ha
sido relacionado con la produccin de colecistitis alitisica en pacientes infectados
por el virus de la inmunodeficiencia humana, y con los sndromes de Reiter y de
Guillain-Barr. Tambin se ha descrito una infeccin broncopulmonar en un
paciente excretor fecal de ooquistes. (Garcia A y cols, 2005)
5.1.2.7 Inmunidad
En la actualidad se conoce poco de los mecanismos patognicos y la respesta
inmune del hospedero en la ciclosporosis. Pese a ello, se ha propuesto una

cascada de sucesos que se desarrolla cuando los parsitos intracelulares

obligados invaden a los entericitos. Despus que los esporozotos ingresan a los
entericitos, las clulas epiteliales liberan citocinas (IL -8) que activan a fagocitos
locales, stos atraen y reclutan a otros fagocitos desde el torrente sanguineo
hacia la lmina propia. (Ponce M, 1996)
Los leucocitos activados liberan factores solubles que incrementan la secrecin
intestinal de cloro y agua e inhiben su absorcin. Algunos mediadores como la
histamina, serotonina y adenosina, afectan la secrecin y absorcin porque actan
de modo directo sobre las clulas epiteliales. Adems el factor activador de
plaquetas, prostaglandinas y leucotrienos ejercen su accin sobre los nervios
entricos, que inducen secrecin intestinal mediada por neurotransmisores. Por
otro lado, la invasin, multiplicacin y liberacin de los parsitos daan
directamente a los entericitos al someterlos a la lisis. (Ponce M, 1996)
De forma adicional, los linfocitos T activados afectan el crecimiento de las clulas
epiteliales y producen atrofia de las vellosidades e hiperplasia de las criptas,
sucesos que levan por un lado el aumento del peristaltismo y, por otro, a la
disminucin de la absorcin de los nutrimentos.
En biopsias de la regin distal del duodeno y yeyuno se ha identificado inflamacin
aguda de la lmina propia, de leve a moderada, con presenca de neutrfilos.
Adems hay inflamacin crnica difusa, con un incremento de clulas plasmticas
en la lmina propia e incremento focalizado de linfocitos intraepiteliales. En la
superficie del epitelio, cerca de la punta de las vellosidades hay vacuolizacin
focal, prdida del borde en cepillo y alteracin de la morfologa de las clulas, de
columnares a cuboides. (Ponce M, 1996)

Tambin se reconoce atrofia parcial de las vellosidades con hiperplasia de las

criptas, la relacion vellosidad- cripta es de 0.6:1

a 1.5:1 mientras que en

individuos anormales la relacin es de 3:1 a 4:1. (Ponce M, 1996)

5.1.4 Diagnstico
El diagnstico de laboratorio de la Criptosporidiosis requiere la obtencin correcta
de las heces, siendo necesarias, generalmente, un mnimo de tres muestras para
descartar la infeccin. Conviene recordar que el nmero de quistes suele estar
relacionado con la consistencia de las heces: a ms diarrea ms ooquistes. En
caso de diarrea acuosa es conveniente recoger las partes mucosas, que son
especialmente ricas en quistes. Tambin pueden investigarse los quistes en
biopsias gastrointestinales, en bilis o en muestras respiratorias. (Botero, 2005)
En los enfermos infectados por el VIH con diarrea, debe investigarse
sistemticamente la presencia de Cryptosporidium. Puesto que los ooquistes
eliminados en las muestras son infecciosos, se recomienda el uso de un fijador
como el SAF (acetato de sodio, cido actico, formol) o el PVA (alcohol
polivinlico), aunque este ltimo puede interferir en el mtodo de concentracin
formol-ter y en ciertas tinciones. Para el resto de las muestras (biopsias,
secreciones respiratorias y bilis), se aconseja una solucin salina formulada al 5
10%. (Garca y col, 2005)
El

diagnstico

diferencial

definitivo

entre

Cyclospora

Cayetanensis

Cryptosporidium parvum se debe realizar mediante la medicin de los ooquistes o

la verificacin u observacin de la presencia de esporoquistes y esporozoitos.

(Huiza A, 2004)
En muestras de heces frescas no preservadas, los ooquistes de Cyclospora
aparecen bajo el micoscopio de luz, como esferas refrctiles, de 8 a 10 micrones
de dimetro, en cuyo interior se observa una masa modular de glbulos de
aspecto lipidico. En heces preservadas, el contenido se aprecia como grnulos de
forma y tamao irregular. En relacin con sus afinidades tintoriales, son
refractarios a las tinciones comunes, pero con la tincin alcohol- cido resistente
(Ziehl Neelsen) se tien de color rojo intenso o rosado y con la safranina, de
color naranja.
La sospecha clinica de isoosporosis se plantea ante un paciente con una diarrea
aguda intensa, el compromiso general y la presencia de eosinofilia al hemograma.
En los inmunocomprometidos debe estudiarse esta posibilidad ante una diarrea
cronica, en estos casos no se observa eosinofilia. (Arias A, 2005)
La presencia de ooquiste de Isaoospora belli se puede objetivizar por diferentes
mtodos. El ms utilizado es el examen parasicolgico seriado de deposiciones,
en la que se observa este elemento y lso cristales de Charcot Leyden. En caso de
encontrar slo los cristales, sumado a los elementos clinicos descrtos, deben
orientar al diagnostico de isosporosis,sin olvidar que en otras entidades clinicas e
incluso otras paarasitosis, pueden encontrarse estos elementos en las
deposiciones. (Arias A, 2005)

La sensibilidad para detectar estos parsitos en pacientes con VIH flucta entre el
40% y el 83%, la cual va depender de varios factores como la experiencia del
laboratorista entre otras.

5.1.8.1 Examen fresco: El diagnstico de la Criptosporidiosis no se puede hacer

por el examen de materia fecal en fresco o coprolgico directo se hace por el
hallazgo de ooquistes en las materias fecales. En las preparaciones con solucin
salina y lugol los parsitos se observan como estructuras redondeadas u ovoides
de pared definida, como huevos vacos, de 4 a 5 micras, refringentes, algunas
veces con grnulos internos, que no permiten hacer un diagnostico seguro.
5.1.8.2 Coloraciones: La coloracin de Ziehl-Neelsen modificado o mtodo de
Kinyoun, se observan los ooquistes como acido-resistente, de color rojo brillante
sobre fondo verde o azul. En algunos se ve los corpsculos internos que
corresponden a los esporozoitos.
5.1.8.3 Mtodo de concentracin: Para concentrar ooquistes de Cryptosporidium
se realizan las tcnicas de Ritchie modificada que usa formol ter y la de Sheather
que es una flotacin con azcar. Las heces se recogen, se maceraron en tampn
fosfato salino (PBS) con molaridad de 0,04 y pH de 7,2 y se filtran a travs de
mallas con poros de 45m. Seguidamente se aplica una tcnica v de
concentracin difsica con PBS y ter etlico mezclando dos partes de la
suspensin de heces con una parte del ter etlico para eliminar restos lipdicos.
La mezcla se agita vigorosamente y se centrifuga a 1 250 g durante 5 minutos. El
procedimiento se repite hasta haber extrado totalmente los restos lipdicos.
El sedimento obtenido se resuspende en 1mL de PBS para posterior purificacin
empleando gradientes discontinuos de Percoll con densidades de 1,13; 1,09; 1,05;
y 1,01 g/mL. Los gradientes se centrifugan a 650 g y 4 C durante 15 minutos y se
recupera la banda rica en oocistos obtenida entre las densidades 1,05 y 1,09
g/mL. Por ltimo, se realiza tres lavados con PBS para eliminar el exceso de

Percoll. El recuento de oocistos se realiza en hemocitmetro empleando como

colorante una solucin acuosa de verde malaquita a 0,16%.

En la actualidad, para el diagnstico de la Criptosporidiosis existen otras tcnicas

como son: la biopsia intestinal, la tcnica ELISA (sensibilidad del 80-90%),
inmunofluorescencia indirecta o tcnicas moleculares como reaccin en cadena de
la polimerasa. El inconveniente con estas tcnicas es que son invasivas o
costosas y frecuentemente, por su baja demanda, no son incluidas en los
laboratorios clnicos como alternativas para ayudar al diagnstico. (Rivera, 2002)
5.1.8.4 Fluorescencia,
Otra alternativa para el diagnstico es la fluorescencia; los ooquiestes de
Cyclospora observados bajo luz ultravioleta autoflorecen con un color azl. (Ponce
A, )
5.1.8.5 Flotacin
La tcnica de flotacin con sulfato de zinc, es otra herramienta de valor en el
diagnostico de la isoosporosis, pero se debe tener especial cuidado en la
preparacin de la muestra y la lectura debe efectuarase inmediatamente luego del
centrifugado, ya que de no hacerlo los ooquiste pueden deteriorarse y dar falsos
negativos.
5.1.8.4 Elisa inmunoensayo. Se estudia el reconocimiento de antgenos de
Cryptosporidium. parvum en los sueros de los individuos de la muestra y la
presencia de anticuerpos especficos (inmunoglobulinas A, M y G) contra los
antgenos de C. parvum., cuyo resultado se lee en espectrofotmetro o
visualmente. En los estudios serolgicos se consideran significativos para el
diagnostico

los ttulos de 1:40 o superiores. La medicin de anticuerpos

circulantes tiene su principal utilidad en estudios epidemiolgicos.

El estuche comercial Prospect es una prueba rpida inmunolgica capaz de

detectar al agente etiolgico, con una sensibilidad y especificidad del 80% a 90%
respectivamente. (Pez, 2001)
Las tcnicas de deteccin de Cryptosporidium spp.mediante inmunoensayos son
ms

sensibles

especficas

que

la

microscopa.

Las

tcnicas

de

inmunofluorescencia (IF) alcanzan hasta un 100% de sensibilidad y de

especificidad y el lmite de deteccin son 10.000 ooquistes/g de heces diarreicas o
50.000/g de heces consistentes. Las de enzimoinmunoanlisis (EIA), alcanzan del
66,3 al 100% de sensibilidad y del 93 al 100% de especificidad. Algunas de estas
tcnicas, particularmente las que combinan la identificacin de C. parvum y
Giardia. lamblia, pueden resultar de gran utilidad en los laboratorios.
5.1.8.5 Tcnicas de Biologa Molecular: la tcnica de la reaccin en cadena de la
polimerasa (PCR) ha proporcionado la base para el desarrollo de una nueva
generacin de mtodos diagnsticos debido a sus ventajas para detectar
Cryptosporidium spp. en muestras clnicas y ambientales, tales como su
sensibilidad para analizar muestras con escaso nmero de ooquistes (1 ooquiste
segn algunos autores), capacidad para analizar gran nmero de muestras y su
potencial para eliminar los falsos resultados negativos obtenidos mediante
microscopa de fluorescencia o caracterizar el genotipo de los aislados de
Cryptosporidium spp., Se han empleado mtodos de hibridacin con sondas de
DNA y de reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) a partir de diversos
fragmentos de cidos nucleicos, como RNA ribosmico, los genes HSP70 y
COWP y tcnicas de RAPD (random amplification of polymorphic DNA fragments).
(Torres, 2002)

5.2 ANTECEDENTES

Tyzzer en 1907. Describi por primera vez este parsito en las criptas gstricas
de ratones de laboratorio asintomticos.
Upton y Current en 1985.

Concluyeron que slo dos especies afectan a

mamferos: C. parvum, de ooquistes pequeos (seres humanos y terneros) y

Cryptosporidium. muris, con ooquistes ms grandes (ratones).
Angel, V.; Franco, L.; Jaramillo, J.; Medina, L.; Ochoa, L.; Velez, A.; Botero, D;
Vasquez, I. En 1985. Determinaron la prevalencia de Cryptosporidium spp en
muestras fecales diarreicas en 6 laboratorios de Medelln. Durante septiembre de
1985 se examinaron 400 muestras fecales blandas y liquidas de laboratorio de
Medelln y se identificaron 10 casos positivos para Cryptosporidium spp (2.5%). El
diagnostico se hizo por identificacin de ooquistes en las materias fecales
concentradas por el mtodo de formol-ter, con coloracin de Ziehl-Neelsen
modificada. La distribucin por sexo fue igual, 6 eran menores de 5 anos y los
dems mayores de 30.
Weitz, J; Mercado, R.; Tassara, R; Espinoza, M; Sorca, P; Herskovic, P; Atas, A.
En 1986.

Determinaron frecuencia de Cryptosporidium sp.

en pacientes

hospitalizados, con sntomas digestivos. Entre los meses de Febrero y Marzo de

1985, se estudiaron 180 muestras de deposiciones de pacientes hospitalizados
con

sntomas

digestivos,

los

que

se

haba

solicitado

un

estudio

coproparasitolgico. Se procesaron mediante la tcnica de Ziehl Neelsen en

bsqueda de Cryptosporidium sp. De las 180 muestras 11(6,1%) fueron positivas.
Todas pertenecen a nios menores de 6 aos. De 154 pacientes con diarrea
aguda, 10(6,5%) resultaron positivos y de 16 casos con otros diagnsticos, uno
tena Cryptosporidium sp. en sus deposiciones. Slo uno de los 11 casos estaba
parasitado con Giardia lamblia, concomitantemente (AU)

Neira, P. En 1988. Mediante examen de un frotis fecal teido con Ziehl-Neelsen

se estudi la frecuencia de infeccin por Cryptosporidium sp en 512 pacientes con
sndromes diarreicos, tanto agudos, como de evolucin trpida y crnicos, de la V
Regin, Chile. De estos casos, 109 eran pacientes hospitalizados y 403
ambulatorios, de ambos sexos y diversa edad. En todos ellos tambin se practic
examen coproparasitolgico corriente por el mtodo de Telemann Modificado. Se
encontr un total de 20 pacientes positivos a Cryptosporidium sp (3,9%), con una
frecuencia general de 10% entre los hospitalizados y de 2,2% entre los
ambulatorios, diferencia que es estadsticamente significativa. De los 20 casos, 19
(95%) fueron comprobados en nios, especialmente entre lactantes menores
(11,8%) y mayores (6,8%), o en preescolares (2,7%). La mayor frecuencia de
infeccin estuvo relacionada con cuadros diarreicos agudos o de evolucin trpida
(10,9% y 10,8%, respectivamente, en los pacientes hospitalizados). En dos casos
se observ concomitancia de infeccin con Giardia lamblia y en uno fueron
tambin encontrados quistes de Entamoeba coli, todos ellos en pacientes
ambulatorios (AU)
Salomn, M; Tonelli, R; Costanzo, S; Nazrala, J; Pap, S. En 1991. Examinaron
200 muestras de materia fecal de pacientes cuyas edades oscilaron entre 2 meses
y 14 aos, todos con diagnstico clnico presuntivo de parasitosis. Se encontraron
60 muestras (30%) diarreicas frente a 140 (70%) no diarreicas. Todas fueron
examinadas por la misma tcnica y sometidas al mtodo de concentracin de
Telemann modificado. Para la identificacin de ooquistes de Cryptosporidium sp.,
se realizaron cuatro frotis por muestra con el material proveniente del
enriquecimiento, colorendose dos con la coloracin de Ziehl Neelsen y dos con
Safranina 1%. Se identificaron dos muestras positivas por las dos tcnicas de
tincin empleada, ambas diarreica y con una moderada cantidad de ooquistes (23/campo) obtenindose una prevalencia global del 1% que se corresponde con un

3,3% si se considera sobre un total de heces diarreicas solamente. En ambos

casos los anlisis parasitolgicos habituales, tanto macro como microscpico
directos y provenientes del mismo enriquecimiento resultaron negativos, no
observndose otra parasitosis.
Arcay, L; Bruzual, E. En 1993. Determinaron la presencia de Cryptosporidium sp.
en ros de Venezuela: encuesta epidemiolgica de una poblacin humana y fauna
en convivencia. Se examinaron muestras de agua de ros de Venezuela en
diferentes localidades con el objeto de detectar la presencia de Cryptosporidium
sp. De un total de 10 ros examinados, 6 resultaron positivos (60 %). Se estudiaron
dos poblaciones humanas de un ro seleccionado (Ro Anare): a) pacientes de un
Hospital Psiquitrico en la margen derecha del ro; b) pacientes de una zona
marginal del lado opuesto del ro. En esta ltima poblacin se estudi tambin la
presencia de Cryptosporidium sp. en la fauna domstica (perros, gatos, burros,
cerdos) y en la fauna silvestre (aves, batracios y peces). Resultando un alto ndice
de infeccin en las aguas de este ro (8,333.33 ooquistes/litro de agua); 57,3 %
pacientes positivos del Hospital; 73,8 % pacientes positivos de la zona marginal.
Todos los mamferos domsticos estudiados fueron positivos. En la fauna silvestre
se describe por primera vez el pelcano, a Bufo marinus y renacuajos como
hospedadores de un parsito humano.
Vergara, C; Santos, S; Freire, F; Ares, E. En 2000. Realizaron un estudio de la
seroprevalencia de la criptosporidiosis en habitantes urbanos y rurales de distintos
departamentos de la regin andina de Colombia, mediante la tcnica de ELISA y el
reconocimiento de antgenos, por una tcnica de inmunoelectrotransferencia. Se
hall una prevalencia de83,3%, mientras que los porcentajes de anticuerpos
fueron 72,2% de IgM; 27,7% de IgA y27,6% de IgG. Los porcentajes de
seropositividad ms altos se obtuvieron en mujeres, menores de 30 aos de edad
y personas de procedencia rural.

Carreo, M; Velasco C; Rueda, E. En 2005. Determinaron

la prevalencia de

Cryptosporidium sp en nios menores de 13 aos con cncer que consultan al

Hospital Universitario Ramn Gonzlez Valencia de Bucaramanga, Colombia por
medio de la tcnica Zielh-Neelsen modificada en heces (ZNM). La prevalencia de
Cryptosporidium sp en las heces de nios con cncer fue 42%, y se asoci con
dolor abdominal como factor agresivo. Pero, esta prevalencia no es muy distinta si
se compara con el grupo control sin cncer de Bucaramanga, Colombia y con
otros estudios en nios inmunocompetentes de la regin; en cambio, s es
extremadamente alta al compararla con los informes a nivel mundial.
Tutaya, R; Blanco, Y; Sandoval, M; Alcala, F; Aponte, M; Devera, R. En 2006.
Determinaron la prevalencia de coccidios intestinales en un grupo de personas
aparentemente sanas, habitantes de una comunidad urbana de Ciudad Bolvar,
estado Bolvar, Venezuela.

Las 100 personas fueron evaluadas a travs de

interrogatorio y estudio coproparasitiologico de una muestra fecal mediante

examen directo y mtodos de Kato, formol-ter y coloracin de Kinyoun.

La

prevalencia de coccidios intestinales fue de 10%, siendo diagnosticados 9 casos

de Cryptosporidium parvum y uno de Cyclospora cayetanensis. No fueron
diagnosticados ooquistes de Isospora belli. De los 10 casos de cocccidiosis, siete
se observaron en el grupo de 5-9 aos, dos en el de 10-14 y el uno en el grupo de
25-29 aos. El sexo femenino fue ms afectado (90%) que el masculino.
Rivera, O; Vsquez L. en 2006.

Estudi un caso clnico de una criptosporidiosis

en un paciente VIH positivo en la ciudad de Popayn, Cauca. Utiliz la coloracin

de Ziehl-Neelsen para realizar el diagnostico de criptosporidiosis en el cual se
observaron ooquistes compatibles con Cryptosporidium sp.

6. METODOLOGA
6.1 Tipo de estudio:
EL tipo de estudio es descriptivo longitudinal de cohorte
6.2 Poblacin:
Barrio 5 de Enero de Valledupar, temperatura 32C
6.3 Muestra:
Nios menores de 4 aos de edad residentes en el barrio 5 de Enero de la ciudad
de Valledupar en el primer periodo de 2008
6.3.1 Criterios de inclusin:

1. Nios entre 6 meses y 4 aos de edad con sntomas de diarrea o que hayan
presentado diarrea en los ltimos meses.
2. Nios que tengan contacto con animales
3. Nios que no estn tomando antiparasitarios
4. Nios con desnutricin
6.3.2 Criterios de exclusin:
1. Nios mayores de 4 aos y menor de 6 meses
2. Nios que estn tomando antiparasitarios como metronidazol, Ivermectina,
Albendazol o Prazicuantel.

6.4 Tcnicas y protocolos

En este estudio se realizara una encuesta a cada padre de familia o mayor
responsable del nio con el fin de hacer una historia clnica del paciente y
establecer si cumple con los criterios de inclusin de este proyecto, adems
informar a los responsables del menor los procedimientos que se le va a realizar a
la muestras de materia fecal recolectadas del menor.
As mismo despus de establecer los nios aptos para el anlisis de la materia
fecal en busca de Cryptosporium spp se le debe explicar a los adultos
responsables del menor la forma adecuada en la cual debe realizarse la
recoleccin de las muestras y todas la medidas que deben de tomar para que esta
sea de calidades optimas para su diagnostico de igual manera tambin resaltar la
importancia que tiene la toma de muestra en el resultado final del estudio.

Cuando se tiene la muestra en el laboratorio se debe realizar el anlisis en un

tiempo no mayor de dos horas si la muestra es liquida o tres horas si la muestra es
solida, de lo contrario la muestra debe ser conservada en CONSERVACIN
Los procedimientos que se le realizara a la materia fecal esta dividido en dos fases
el primero es el anlisis macroscpico de las heces en el cul se va determinar el,
color, la consistencia, el pH de la muestra.
Antes del anlisis microscpico se realizara la concentracin de la muestra por el
mtodo de Formol- ter:
1- En un tubo de ensayo, tomar 5 ml de solucin salina 0.85% y 5 ml formol al
10%
2- Agregar 1 gramo se materia fecal y se homogeniza la solucin
3- Filtrar la suspensin por doble capa de gasa
4- Centrifugar por 2 minutos a 2000 r.p.m
5- Descarta todo el sobrenadante y tomar el sedimento para realizar la tincin
de ZIELH NEELSEN modificada o kinyoung.
Para la tincin de de ZIELH NEELSEN modificada o kinyoung se realizaran los
siguientes pasos:
1- Colocar en portaobjetos limpio y libre de grasa una gota de solucin salina
al 0.85%
2- Homogenizar la muestra de materia fecal a examinar con un palillo de
madera

3- Colocar el palillo de madera impregnado con la materia fecal en la gota de

solucin salina del portaobjetos y homogenizar realizando un extendido
alrededor de la placa.
4- Dejar secar a temperatura ambiente
5- Fijar la placa sumergindola en etanol absoluto por 5 minutos
6- Dejar secar a temperatura ambiente. Cubrir el extendido de la placa con
Fuscina durante 20 minutos
7- Lavar con agua de corro hasta quitar el colorante
8- Decolorar la placa con H2SO4 al 7% hasta que la placa quede de color
rosado plido
9- Lavar con chorro para eliminar el exceso de colorante anterior
10-Colocar azul de metileno en todo el extendido por 3 minutos
11- Lavar con agua de chorro para eliminar el exceso de colorante anterior
12-Dejar secar la placa a temperatura ambiente
13-Visualizar al microscopio con aceite de inmersin con el objetivo de 100X,
se observan los ooquistes como acido-resistente, de color rojo brillante
sobre fondo verde o azul. En algunos se ve los corpsculos internos que
corresponden a los esporozoitos.
Preparacin de reactivos:
Fucsina bsica
Fucsina

10 gr.

Etanol

100 gr.
Preparacin:

Triturar la fucsina en un mortero agregando alcohol poco o poco, pasar a un frasco

oscuro.

En caso de no poseer un mortero, mezclar la fucsina con alcohol

directamente en el frasco.

Agitar diariamente durante 8 das, con esto se busca extraer la mayor cantidad
posible de colorante de polvo de fucsina; a este procedimiento se le denomina
maduracin del colorante. Rotular: Solucin Madre de Fucsina.
Solucin de fenol al 5%
Fenol

5 ml

Agua destilada

95 ml

Preparacin:
Mezclar, envasar en frasco oscuro y rotular: Solucin de trabajo de fucsina
Preparacin de Azul de Metileno
Solucin Madre
Azul de Metileno

10 gr.

Etanol al 95%

100 ml

Preparacin:
Triturar el azul de metileno en un mortero agregando alcohol poco o poco, pasar a
un frasco oscuro.
En caso de no poseer un mortero, mezclar el azul de metileno con alcohol
directamente en el frasco.
Agitar diariamente durante 8 das, con esto se busca extraer la mayor cantidad
posible de colorante de polvo de azul de metileno.
Solucin de trabajo Azul de Metileno
Solucin madre filtrada

30 ml

Agua destilada

70 ml

Preparacin
Mezclar los reactivos anteriores, homogenizado y almacenarlo en un frasco mbar.
Solucin de Acido Sulfrico

cido sulfrico

7ml

Etanol al 10%

100ml

Preparacin
Agregar el cido sobre el alcohol lentamente, envasar en un frasco y rotular.
Solucin de Verde de Malaquita
Verde de Malaquita

5 gr

Etanol al 10%

100ml

Procedimiento
Triturar el componente verde de malaquita en un mortero agregando poco a poco
alcohol o en caso de no tener a la mano el mortero mezclar directamente en un
frasco oscuro. El frasco se mantendr en constante agitacin durante 8 das para
madurar el colorante, con esto se busca extraer la mayor cantidad posible de
colorante del polvo de verde de malaquita.
Informe de Laboratorio
En caso de encontrar ooquistes en la muestra de materia fecal el reporte de
laboratorio es: positivo para ooquistes de Cryptosporidium spp.
6.5 DIAGRAMA METODOLGICO

Encuesta

Seleccin de la poblacin muestral

Asesora a padres de familia de cmo tomar la muestra a

sus nios y entrega de recipientes donde se recolectar
la muestra de materia fecal

Conservacin de la muestra

Anlisis muestral

Macroscpico

Microscpico

Color

Olor

- Ooquistes

Consistencia

- Esporozoitos

Humedad

pH

Tincin Zielh Neelsen

Reporte

9.RESULTADOS

9.1 Se recolectarn las muestras de materia fecal de nios entre los 6 meses y 4
aos de edad.
9.2 Se diagnosticar la presencia de Cryptosporidium spp mediante la tcnica de
Zielh- Nelsen modificado
9.3 Se informar la prevalencia de de los casos de criptosporidiosis encontrados
en la poblacin infantil del barrio 5 de Enero.

CAPO

DE

PAZ,

Virginia,

BARRERO

BRINGUEZ,

Marta,

VELAZQUEZ

VIAMONTE, Beltrn et al. Diagnstico de coccidias y microsporas en muestras de

heces diarreicas de pacientes cubanos seropositivos al VIH: primer reporte de
microsporas en Cuba. Rev Cubana Med Trop, ene.-abr. 2003, vol.55, no.1, p.1418. ISSN 0375-0760.
AGUDELO LOPEZ, S.; MONTOYA PALACIO, M. 2005 Parsitosis intestinales
oportunistas Teora y Prctica. Universidad de Antioquia. Editorial Biognesis.
Primera Edicin. Medelln. Pag 15-22.

7. PRESUPUESTO

ACTIVIDADES
Toma de Muestra
Procesado de la Muestra

VALOR
UNITARIO
$100

VALOR
TOTAL
$20000

600
2 Cajas
2 Cajas
2 Cajas
4 Cajas
5 Cajas
200

$250
$12000
$9000
$9000
$6500
$5800
$250

$150000
$24000
$18000
$18000
$26000
$29000
$50000

$500000

3
400 Tubos
10 Cajas
5 Cajas
1 caja
1 Rollo
10 Pliegos
2 Litros
2 litro
2 Litros.
2 Litros
2 Litros
2 Litros
2 Litros

$500000
$300
$100
$700
$2300
$2000
$300
$61000
$50000
$53000
$72000
$65000
$79000
$67000

MATERIALES

CANTIDAD

Folleto Informativo
Recolector de Materia
Fecal
Guantes
Tapaboca
Gorro
Lamina
Laminillas
Pipetas pasteur
Pipetas automtica de
1000um.
Pipetas automtica de 100
um.
Tubos de ensayo
Fsforo
Palillos
Papel lente
Papel absorbente
Papel Bond
Lugol de parasitologia
Formol
Eter
Safranina
Alcohol cido
Azul de metileno
Metanol

200

CONTRAPARTIDA

RUBOS PROPIOS

$170000

$1097100

$1500000*
$1500000*
$120000
$1000
$3500
$2300
$2000
$3000
$122000
$100000
$106000
$144000
$130000
$158000
$134000

Los equipos sern prestados por la Universidad Popular del Cesar

Cloruro de sodio
Microscopio
Centrifuga

1 Kg
3
1

$3000
$8000000
$5000000

$3000
$24000000*
$5000000*

BIBLIOGRAFIA
Weitz J y col. Brote de cryptosporidiosis en un centro de recuperacion nutricional.
Rev chilena de pediatra, 1987. Vol 58 N 1: 50-53
Vergara C y Quilez J. Cryptosporidiosis: una zoonosis parasitaria. MVZ Cordoba
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Carreo M y col. Prevalencia de Cryptosporidium spp en nios menores de 13

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de Med UCV, 2005
Tutaya R. Coccidios intestinales en habitantes del Barrio 6 de Noviembre, Ciudad
Bolvar, Estado Bolvar, Venezuela. Rev biomed, 2006, Vol 17: 152-154
Botero J y col. Brote epidmico por Cyclospora cayetanensis en Medelln,
Colombia, Rev salud pblica, Bogot dec, 2006, Vol 8 N 3
Rivera O y col. Cryptosporidium SPP: Informe de un caso clnico en Popayn,
Cauca. Centro de estudios de micobiologa y parasitologa CEMPA, Colombia
2006. Pg 225- 229

Agudelo y col. Parsitos intestinales oportunistas terica y prctica, 1 Edicin

Biognesis. 2005