ORIGINAL

Efecto in vitro de la vacuna S3Pvac contra cisticercosis

en clulas mononucleares humanas
Mara Alicia Daz-Orea, Jos Miguel Mijares, Ral Arcega, Eduardo Gmez-Conde, Vctor Omar Castellanos-Snchez,
Rosendo Briones-Rojas, Juan Carlos Flores-Alonso, Miguel ngel Marn-Briones, Gerardo Santos-Lpez

Facultad de Medicina; Benemrita

Universidad Autnoma de Puebla
(M.A. Daz-Orea, J.M. Mijares,
E. Gmez-Conde, V.O. CastellanosSnchez, R. Briones-Rojas,
M.A. Marn-Briones). Hospital de
Especialidades IMSS; Unidad Mdica
de Alta Especialidad (R. Arcega,
E. Gmez-Conde). Centro de
Investigacin Biomdica de Oriente;
Instituto Mexicano del Seguro Social
(J.C. Flores-Alonso, G. Santos-Lpez).
Puebla, Mxico.
Correspondencia:
Dra. Mara Alicia Daz Orea.
Facultad de Medicina. Benemrita
Universidad Autnoma de Puebla.
13 Sur 2702. CP 72410 Puebla
(Mxico).
E-mail:
diazorea@yahoo.com.mx
Financiacin:
Coordinacin de Investigacin
Cientfica del Instituto Mexicano
de Seguro Social (FIS/IMSS/PROT/
2007/017).
Agradecimientos:
A la Dra. Edda Sciutto Conde,
del Instituto de Investigaciones
Biomdicas de la Universidad
Nacional Autnoma de Mxico,
por la amable donacin de los
pptidos sintticos vacunales.
Aceptado tras revisin externa:
27.02.13.
Cmo citar este artculo:
Daz-Orea MA, Mijares JM, Arcega R,
Gmez-Conde E, CastellanosSnchez VO, Briones-Rojas R, et al.
Efecto in vitro de la vacuna S3Pvac
contra cisticercosis en clulas
mononucleares humanas.
Rev Neurol 2013; 56: 456-63.
2013 Revista de Neurologa

456

Introduccin. La neurocisticercosis (NCC) es una infeccin parasitaria generada por el establecimiento de cisticercos de
Taenia solium en el sistema nervioso central. La fase larvaria del parsito tambin afecta al cerdo, que es el husped
intermediario indispensable para la transmisin. Por tal motivo, muchos investigadores se han enfocado en identificar
antgenos protectores para prevenir la cisticercosis porcina e interrumpir la transmisin. Entre ellos figuran los antgenos
de la vacuna S3Pvac, constituida por tres pptidos protectores: KETc1, KETc12 y GK1.
Objetivo. Evaluar el efecto de los pptidos vacunales KETc1, KETc12 y GK1 en clulas mononucleares de pacientes con NCC
e individuos sanos.
Sujetos y mtodos. Estudio comparativo, prospectivo y transversal. Se analiz la proliferacin y el perfil de citocinas inducidos por los tres pptidos en clulas mononucleares de tres pacientes con NCC activa, 16 pacientes con NCC calcificada y
16 sujetos sanos.
Resultados. KETc1 induce bajos niveles de proliferacin en las clulas de los pacientes con NCC activa y controlada, tanto
en linfocitos como en monocitos. KETc12 y GK-1 inducen niveles positivos de proliferacin de monocitos en sujetos sanos.
Conclusiones. El pptido KETc1 podra usarse como coadyuvante en el tratamiento de los pacientes con NCC activa, ya que
indujo una respuesta Th2; y el pptido GK1, como estimulador del monocito/macrfago en inmunizaciones con otras protenas.
Palabras clave. Neurocisticercosis. S3Pvac. Vacunas anticisticercosis.

Introduccin
La neurocisticercosis (NCC) es una infeccin neurolgica causada por la etapa larvaria del parsito
Taenia solium. En los pases en desarrollo, la infeccin del sistema nervioso central por la larva de T.
solium es la causa ms comn de epilepsia adquirida [1-3]. En Mxico, en un informe del Instituto
Nacional de Neurologa y Neurociruga Manuel Velasco Surez, se comunica que la NCC se encuentra
entre las 10 primeras causas de mortalidad y morbilidad entre los aos 1995-2001 [4]. Para tratar de
controlar esta infeccin parasitaria, que afecta gravemente la salud del humano, se han estudiado antgenos provenientes de diferentes especies de tenias. Se estudi la estructura antignica del cisticerco de T. crassiceps, y se detect que comparte
diversos antgenos con la T. solium, a partir de los
cuales se sintetizaron tres pptidos (KETc1, KETc12
y GK1), que constituyen la vacuna sinttica S3Pvac
[5]. Estos tres eptopos protectores se encuentran
ampliamente distribuidos en las distintas fases de
desarrollo de los parsitos T. solium y T. crassiceps
[6,7]. En este sentido, es de especial inters su loca-

lizacin en la oncosfera, que, segn lo encontrado

en otras cestodiasis [7], constituye la fase del parsito ms susceptible al ataque inmunolgico. Se ha
comprobado la eficacia de estos pptidos como inductores de una respuesta inmunolgica protectora
contra la cisticercosis en ratones y cerdos [8-12], as
como contra la cisticercosis experimental por T. pisiformis en conejos [13]. Tambin se han estudiado
las propiedades teraputicas de S3Pvac contra la
cisticercosis porcina [14], as como la posible utilidad de GK1 como adyuvante [15]. Sin embargo, se
desconoce el efecto de estos pptidos en clulas inmunes de seres humanos. Este conocimiento podra tener inters para modular la respuesta inmune
en individuos neurocisticercosos y lograr un eventual
mejor manejo de los pacientes.

Sujetos y mtodos
El presente estudio se realiz en Puebla, en el Centro de Investigacin Biomdica de Oriente del Instituto Mexicano del Seguro Social y la Facultad de
Medicina de la Benemrita Universidad Autnoma

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Vacuna S3Pvac contra cisticercosis en clulas mononucleares humanas

de Puebla. Los pacientes procedan de la Unidad

Mdica de Alta Especialidad del Centro Mdico
Nacional Manuel vila Camacho del Instituto Mexicano del Seguro Social de la ciudad de Puebla, M
xico.

Pptidos sintticos
Se utilizaron tres pptidos, llamados KETc1, KETc12
y GK1, de 12, 8 y 18 aminocidos, respectivamente,
producidos sintticamente.

Inmunolocalizacin de los pptidos KETc1,

KETc12 y GK1 por inmunofluorescencias indirectas
Para verificar si estos pptidos se expresaban en
cisticercos obtenidos de pacientes con NCC, se realizaron inmunofluorescencias indirectas, en secciones de 4 m obtenidas de bloques de parafina de
cisticercos de T. crassiceps (obtenidos de ratones
infectados experimentalmente) y de cisticercos de
T. solium de pacientes con NCC (proporcionados
por el departamento de anatoma patolgica del
mismo hospital). Las secciones fueron recogidas en
portaobjetos cubiertos con poli-L-lisina, rehidratadas y bloqueadas con suero de conejo.
Antisueros primarios
Los anticuerpos primarios utilizados corresponden
a los anticuerpos policlonales del cerdo obtenidos
contra los pptidos KETc1, KETc12 y GK1 [8], purificados, y verificada su actividad por la tcnica de
ELISA. Se realizaron diluciones de 1:100 para cada
uno de ellos en buffer fosfato salino (PBS) 0,015 M,
pH 7,3 ms albmina srica bovina al 0,1% (Sigma).
Tcnica utilizada
Sobre las secciones de tejido de ambos cisticercos
se realiz la tcnica de inmunofluorescencias indirectas, para lo cual se desparafinaron, hidrataron e
incubaron con los anticuerpos contra los pptidos
como anticuerpo primario, en cmara hmeda y
temperatura de 8 C durante 12 horas. Despus de
dos lavados en PBS durante 10 minutos, se cubrieron las muestras con el anticuerpo secundario, con
una IgG de conejo y anti-IgG de cerdo acopladas a
fluorescena (Sigma F-1638 ), diluidas 1:1.000 e incubadas durante una hora a temperatura ambiente
en una cmara hmeda. Al cabo de este tiempo, se
lavaron tres veces con PBS a pH 7,3, durante 10 minutos cada vez, y se cubrieron con glicerina tamponada (9:1). Las preparaciones se observaron y capturaron con un microscopio Olympus BH2-RFCA
de epifluorescencia.

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Se consider inmunorreactividad cuando se observaba un precipitado de color verde en los sitios

de reconocimiento del anticuerpo a antgenos del
parsito.

Muestra
Se estudiaron 19 pacientes de ambos sexos con un
rango de edad de 18-60 aos, con NCC confirmada
por tomografa axial computarizada o resonancia
magntica del servicio de neurologa del Hospital
de Especialidades, tres con NCC activa (NCCa) y 16
con NCC inactiva (NCCi) (cisticercos calcificados).
Los pacientes se clasificaron segn la localizacin
del parsito (intraventriculares, subaracnoideos de
la base, parenquimatosos y mixtos). Como grupo
control, se estudiaron las clulas provenientes de 16
paquetes residuales de donadores sanos, provenientes del banco de sangre del mismo hospital.
Obtencin de muestras sanguneas
A todos los pacientes se les explic el estudio, y con
su consentimiento por escrito y siguiendo las normas tcnicas y de salud, y los tratados de la Organizacin Mundial de la Salud y de Helsinki, se les
tom sangre venosa por venopuncin para la obtencin de las diferentes estirpes celulares.
Obtencin de clulas
La sangre obtenida de los pacientes con NCC y
controles (7 mL) se diluy con solucin salina al
0,9% (1:2), se estratific en un gradiente de FicollHypaque con una densidad de 1,077 g/mL para obtener linfocitos y 1,068 g/mL para monocitos, y se
centrifug a 2.500 rpm durante 20 minutos. Las clulas obtenidas se separaron en un tubo estril, se lavaron dos veces con solucin salina al 0,9% y se resuspendieron en un medio RPMI suplementado.
Obtencin de monocitos
La sangre diluida 1:2 de pacientes y controles se estratific sobre el gradiente de densidad 1,068 g/mL
en tubos de cultivo de 15 mL, los cuales se centrifugaron a 2.400 rpm durante 20 minutos, se recolect
el anillo de clulas de la interfaz y se lav tres veces
con solucin salina isotnica, centrifugando a 1.500
rpm durante cinco minutos. Finalmente, el botn
celular se resuspendi en un medio simple, se cuantific la cantidad de monocitos obtenida y se ajust
la concentracin celular a 2 10 6 clulas/mL.
Determinacin de CD14 por citometra de flujo
Se evalu el porcentaje de monocitos obtenidos y se
detect su marcador de superficie CD14 mediante

457

M.A. Daz-Orea, et al

citofluorometra de flujo (FACS), usando anticuerpos

monoclonales anti-CD14 acoplados a ficoeritrina en
un equipo FACScalibur (BectonDickinson) [16].
Se recolect una alcuota de la suspensin de los
monocitos/macrfagos en tubos de poliestireno
(BD Biosciences), se lavaron stos con una solucin
amortiguadora de FACS que contiene PBS, un 10%
de suero fetal bovino y un 0,02% de azida de sodio,
se centrifugaron durante ocho minutos a 1.500 rpm,
se removi el sobrenadante y se agregaron 1-2 L
de anticuerpos monoclonales, anti-CD14 acoplados
a ficoeritrina (PE) se incubaron durante 30 minutos
a 4 C en oscuridad, para asegurar la unin del anticuerpo a las clulas; despus, las clulas se lavaron
dos veces con la solucin amortiguadora de FACS
para eliminar el exceso de anticuerpos y se centrifugaron durante ocho minutos a 1.500 rpm, y se resuspendieron en 500 L de la solucin amortiguadora de FACS, para posteriormente leerlas en un
equipo FACScalibur multicolor equipado con
un lser de 488 nm capaz de detectar y distinguir la
emisin de fluorescencia (BD Bioscience, BectonDickinson), y analizarlas utilizando el programa Cell
Quest Pro (BD Bioscience).
Cultivo de monocitos y linfocitos
Los monocitos y linfocitos obtenidos se ajustaron a
una densidad celular de 2 10 6 clulas/mL y se cultivaron a una densidad de confluencia de 2 10 5
clulas/pozo en cajas de cultivo de poliestireno de
96 pozos (Costar) con un medio RPMI 1.640 suplementado con suero fetal bovino al 10%, piruvato de
sodio al 1 mM, 50 U/mL de penicilina, 50 g/mL de
estreptomicina, 0,01 mM de aminocidos no esenciales, 1,6 M de -mercapto etanol y 2 g/L de bicarbonato de sodio.
Para promover la proliferacin y diferenciacin
celular in vitro, a las clulas se les adicionaron los
pptidos KETc1, KETc12 y GK1 en una concentracin de 10 g/pozo. Se utiliz concanavalina A como
control positivo en una concentracin de 10 g/
pozo. Todos los cultivos se mantuvieron a una temperatura de 37 C con una atmsfera del 5% de CO2.
El medio se reemplaz al tercer da de cultivo y se
mantuvo a 70 C para la determinacin de las citocinas. Al quinto da de cultivo, se determin la
proliferacin celular por la reduccin de una sal de
azul de tetrazolio a formazn, mediante un kit comercial (Cell Titer96 MTT , Promega), siguiendo
las indicaciones del proveedor.
Cuantificacin de citocinas en sobrenadantes
de los cultivos celulares por ELISA
Estas determinaciones se realizaron en los sobrena-

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dantes de los cultivos de linfocitos interfern gam

ma (IFN) e interleucina-4 (IL-4) y en los de monocitos (IL-1), mediante la tcnica de ELISA sndwich con kits comerciales (DRG Diagnostics) para
cada una, siguiendo las instrucciones del fabricante.

Resultados
Se estudiaron 16 pacientes con NCCi (cisticercos
calcificados), 12 mujeres (75%) y cuatro hombres
(15%), con un rango de edad de 18-30 aos, y tres
pacientes masculinos con NCCa (mltiples cisticercos en fase vesicular, todos en parnquima), con
lmites de edad de 41-69 aos.

Pureza de los monocitos aislados de la

sangre perifrica por gradiente de densidad
La pureza de los monocitos aislados de la sangre
perifrica de los tres grupos estudiados, a partir del
gradiente de densidad 1,068 g/mL, tenan una pureza del 75%, determinada por la expresin de su
marcador CD14+ por citometra de flujo, y una viabilidad 90%, mediante tcnica de azul de tripn.

Proliferacin de linfocitos y monocitos

Los tres pptidos indujeron una baja respuesta proliferativa de linfocitos y monocitos de los pacientes
con NCCa y NCCi, con valores muy semejantes (Tablas I, II y III).
Los niveles de proliferacin elevados se obtuvieron en los linfocitos y monocitos de sujetos sanos
estimulados con los tres pptidos (Tablas I, II y III).
Se realiz un anlisis estadstico no paramtrico, U
de Mann-Whitney, y se hall significacin estadstica en los linfocitos de los pacientes con NCCi
frente a los sanos (p = 0,03) y en los monocitos de los
pacientes con NCCi frente a los sanos (p = 0,0001)
con el pptido KETc1; en los linfocitos de los pacientes con NCCi frente a los sanos (p = 0,01) y en
los monocitos de los pacientes con NCCi frente a
los sanos (p = 0,0001) con el pptido KETc12; y nicamente en los monocitos de los pacientes con NCCi
frente a los sanos (p = 0,0001) con el pptido GK1.

Produccin de citocinas
Respecto a la expresin de citocinas en pacientes con
NCCa y grupo control, se encontraron valores elevados de IL-4 en los sobrenadantes de linfocitos de
pacientes con NCCa, estimulados con los tres pptidos, con un intervalo de 77-86 pg/mL. En pacien-

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Vacuna S3Pvac contra cisticercosis en clulas mononucleares humanas

Tabla I. Niveles de proliferacin y concentracin de citocinas producidos por el pptido KETc1 en linfocitos y monocitos de los tres grupos estudiados.
Proliferacin (media desviacin estndar)

Citocinas (media desviacin estndar)

Linfocitos a

Monocitos a

IL-4 (pg/mL) b

IFN (U/mL) b

IL-1 (pg/mL) b

NCCa

0,26 0,18

0,24 0,17

77,33 26,50

0,20 0,10

1,60 0,57

NCCi

0,26 0,08

0,26 0,08

52,25 31,12

0,30 0,28

117,70 220,07

Sanos

0,37 0,008

0,44 0,06

51,85 32,20

0,34 0,19

1.203,90 1.184,70

P1 (NCCa frente a sanos)

p = 0,1

p = 0,9

p=1

p=1

p = 0,7

P2 (NCCi frente a sanos)

p = 0,0324

p = 0,0001

p = 0,9794

p = 0,8

p = 0,006

IFN: interfern; IL: interleucina; NCCa: neurocisticercosis activa; NCCi: neurocisticercosis inactiva. a Los datos representan la proliferacin de linfocitos y monocitos de los pacientes con NCCa, NCCi y sujetos sanos obtenidos de sangre perifrica por gradiente de Ficoll-Hypaque y estimulados con el pptido KETc1;
b Los datos representan la produccin de citocinas por linfocitos (IL-4 e IFN) y monocitos (IL-1 ) de los grupos de pacientes con NCCa, NCCi y sujetos sanos.

Tabla II. Niveles de proliferacin y concentracin de citocinas producidos por el pptido KETc12 en los tres grupos estudiados.
Proliferacin (media desviacin estndar)

Citocinas (media desviacin estndar)

Linfocitos a

Monocitos a

IL-4 (pg/mL) b

IFN (U/mL) b

IL-1 (pg/mL) b

NCCa

0,26 0,15

0,23 0,13

77,33 26,50

0,20 0,10

10,66 8,08

NCCi

0,23 0,05

0,23 0,05

47,33 28,63

0,41 0,51

531,20 1.071,98

Sanos

0,34 0,08

0,41 0,08

45,33 33,87

0,34 0,25

1.018,08 1.004,17

P1 (NCCa frente a sanos)

p=1

p = 0,93

p=1

p=1

p=1

P2 (NCCi frente a sanos)

p = 0,0148

p = 0,0001

p = 0,86

p = 0,7

p = 0,17

IFN: interfern; IL: interleucina; NCCa: neurocisticercosis activa; NCCi: neurocisticercosis inactiva. a Los datos representan la proliferacin de linfocitos y monocitos de los pacientes con NCCa, NCCi y sujetos sanos obtenidos de sangre perifrica por gradiente de Ficoll-Hypaque y estimulados con el pptido KETc12;
b Los datos representan la produccin de citocinas por linfocitos (IL-4 e IFN) y monocitos (IL-1) de los grupos de pacientes con NCCa, NCCi y sujetos sanos.

Tabla III. Niveles de proliferacin y concentracin de citocinas producidos por el pptido GK1 en los tres grupos estudiados.
Proliferacin (media desviacin estndar)

Citocinas (media desviacin estndar)

Linfocitos a

Monocitos a

IL-4 (pg/mL) b

IFN (U/mL) b

IL-1 (pg/mL) b

NCCa

0,21 0,09

0,20 0,08

86,00 15,50

0,23 0,05

8,00 4,00

NCCi

0,25 0,06

0,25 0,07

24,58 24,40

0,32 0,28

367,20 578,93

Sanos

0,34 0,007

0,40 0,07

21,28 21,84

0,24 0,19

1.413,20 1.346,55

P1 (NCCa frente a sanos)

p = 0,4

p = 0,5

p = 0,7

p = 0,7

p=1

P2 (NCCi frente a sanos)

p = 0,091

p = 0,0001

p = 0,7

p = 0,7

p = 0,03

IFN: interfern; IL: interleucina; NCCa: neurocisticercosis activa; NCCi: neurocisticercosis inactiva. a Los datos representan la proliferacin de linfocitos y monocitos de los pacientes con NCCa, NCCi y sujetos sanos obtenidos de sangre perifrica por gradiente de Ficoll-Hypaque y estimulados con el pptido GK1;
b Los datos representan la produccin de citocinas por linfocitos (IL-4 e IFN) y monocitos (IL-1) de los grupos de pacientes con NCCa, NCCi y sujetos sanos.

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M.A. Daz-Orea, et al

Figura 1. Tincin de inmunofluorescencia indirecta en cortes de 4 m de cisticerco de T. solium obtenidos de pacientes con neurocisticercosis incluidos en parafina y desparafinados e hidratados. a y b) Se
muestra un claro reconocimiento de eptopos contra el pptido KETc1 en el tegumento (a) y el canal
espiral (b); c) Corte de cisticerco incubado con KETc12; nicamente mostr positividad en el intersticio
del parsito; d) Corte de cisticerco incubado con GK1; no hubo reconocimiento (cisticerco teido de rojo,
por tincin de contraste) (barra de 45 m).

dos obtenidos de cerdos inmunizados contra ellos

[8]. En los cisticercos provenientes de pacientes,
KETc1 se expres en el tegumento y el canal espiral
(Fig. 1a y 1b), KETc12 en el intersticio del parsito
(Fig. 1c) y GK1 fue negativo (Fig. 1d). En el cisticerco de T. crassiceps, KETc1 se expres en el tegumento y el canal espiral (Figs. 2a y 2b), KETc12 en
la parte ms externa del tegumento del parsito
(Fig. 2c) y GK1 se encontr distribuido a lo largo del
tegumento (Fig. 2d).

Discusin

tes con NCC controlada y en sujetos sanos, se obtuvieron valores medios de 24 a 52 pg/mL con los tres
pptidos. Se detectaron valores de IFN significativamente bajos (< 1 UI) en todos los grupos estudiados con los tres pptidos, y no hubo significancia
estadstica en ningn caso.
No se encontraron concentraciones de IL-1 en
los sobrenadantes de monocitos de los pacientes
con NCCa con ningn pptido. Con relacin al grupo de pacientes con NCCi y sujetos sanos, se obtuvieron valores de IL-1 demasiado elevados (NCCi,
2.000 pg/mL; sujetos sanos, 4.000 pg/mL) al ser expuestos a cada uno de los tres pptidos estudiados.
Sin embargo, nicamente hubo significancia estadstica al comparar los pacientes con NCCi frente a
los sanos (p = 0,006) con el pptido KETc1, y los
pacientes con NCCi frente a los sanos (p = 0,03)
con el pptido GK1 (Tablas I, II y III).

Inmunolocalizacin de los pptidos en los parsitos

Para inmunolocalizar los antgenos nativos en los
cisticercos de T. solium obtenidos de pacientes con
NCC, se utilizaron cortes de este parsito incluido
en parafina y como control, cortes de cisticercos de
T. crassiceps, incluidos en parafina, y anticuerpos
con ttulos elevados contra cada uno de los ppti-

460

La NCC es una parasitosis del sistema nervioso central, producida por el metacstodo de la T. solium,
que se atribuye como causa principal de epilepsia
adquirida en pases en desarrollo [2]. Aunque se
considera una enfermedad endmica de pases de
bajo nivel socioeconmico [17-19], una limitacin
en el desarrollo de este trabajo fue la disminucin
de los pacientes con NCCa, ya que, durante la realizacin de este proyecto, slo tres pacientes fueron
atendidos en el servicio de neurologa del Hospital
de Alta Especialidad de la ciudad de Puebla, Mxico (a pesar de ser un hospital de concentracin de
todo el sudeste mexicano) por epilepsia causada por
NCC. Esto se atribuye al reflejo de los resultados
obtenidos por la promocin de medidas preventivas en la poblacin y contrasta con las descripciones en la bibliografa sobre la elevada prevalencia
de la enfermedad en pases en vas de desarrollo. La
mayora de los pacientes con NCC calcificada fueron mujeres (75%), y esta enfermedad se present
principalmente en personas en edad productiva entre 18-30 aos de edad. Curs con clnica asintomtica, como menciona Alarcn [2], el diagnstico fue
un hallazgo radiolgico y slo un paciente requiri
derivacin ventriculoperitoneal. Los pacientes con
NCCa presentaban cisticercos en fase coloidal,
vesicular y calcificada, todos en el parnquima y
mltiples. Dos pacientes fueron tratados con corticoesteroides previa toma de la muestra y sus niveles
de proliferacin fueron bajos en comparacin con
el paciente no tratado con corticoesteroides.
La cisticercosis en Mxico era un gran problema
de salud pblica, motivo por el cual un gran nmero de investigadores se dedic a realizar estudios de
deteccin, prevencin y tratamiento utilizando antgenos de cisticercos de varias especies [20], T. solium [21-23], T. saginata [24], T. ovis [25] y T. crassiceps [26]. Desde 1990, un grupo de investigadores
de la Universidad Nacional Autnoma de Mxico
empez a estudiar los antgenos de la T. crassiceps

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Vacuna S3Pvac contra cisticercosis en clulas mononucleares humanas

como una alternativa para el control de la cisticercosis por T. solium, y encontr y sintetiz tres pptidos (KETc1, KETc12 y GK1) que inducan proteccin en ratones, hmsteres y cerdos, pero que no se
haban probado en humanos. ste es el primer artculo en que se estudia el efecto que inducen estos
pptidos en clulas provenientes de pacientes con
NCCa, controlada y personas sanas. Los pptidos
vacunales, en animales de experimentacin, inducen elevados niveles de proliferacin, pero en los
linfocitos y monocitos de humanos, estos niveles de
proliferacin son bajos y muy semejantes entre ellos
(Tablas I, II y III), con significacin estadstica, comparados con sus controles.
Debido a estos bajos niveles de proliferacin, se
verific si se expresaban en cisticercos aislados de
pacientes con NCC, utilizando, como control positivo, cortes de cisticerco de T. crassiceps (Fig. 2).
Se encontr que el pptido KETc-1 se expresa en
el cisticerco de T. solium (aislado de los pacientes)
en el tegumento y el canal espiral (Fig. 1a y 1b), el
KETc12 slo en el intersticio del parsito (Fig. 1c) y
el GK1 no se expresa (Fig. 1d). Con relacin a esto,
recientemente se ha demostrado que el patrn de
expresin gnica y protemica en parsitos como
Schistosoma japonicum [27], Toxoplasma gondii [28]
y Leishmania braziliensis [29,30] es dependiente no
solamente de los modelos in vitro e in vivo que se
estn estudiando, sino tambin del husped infectado, y dicha expresin puede deberse a mecanismos de regulacin epigentica inducidos por el sistema inmunolgico del husped y el sitio de invasin, as como por la expresin de protenas de
invasividad, de patogenicidad o de evasin de la
respuesta inmunolgica activadas en el parsito
mismo. Hay que considerar, adems, que los pptidos vacunales provienen de los antgenos protectores de la T. crassiceps, y este parsito infecta a ratones que estn filogenticamente muy alejados del
humano. Es cierto que el cisticerco que infecta al
humano proviene de la oncosfera de la T. solium,
pero sta se transform en cisticerco en el microambiente del sistema nervioso central del humano
y desconocemos si hay algn factor o protena que
bloquee la expresin del gen del eptopo para el
pptido GK1 en el humano.
Investigaciones biolgicas en esta cepa han descubierto algunas caractersticas interesantes en comparacin con las cepas silvestres. En primer lugar, la
cepa ORF ha perdido su capacidad invasiva hacia
su husped natural, adems de mostrar amplias diferencias bioqumicas e inmunolgicas en ambas
cepas [31,32]. En la infeccin experimental, el parsito se ha transformado en un organismo aneuploi-

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Figura 2. Tincin de inmunofluorescencia indirecta en cortes de 4 m de cisticerco de T. crassiceps incluidos en parafina y desparafinados. El reconocimiento por los anticuerpos antipptidos es claramente
evidente en las estructuras del parsito (tegumento) que estn en contacto con el husped. Tegumento
(a) y esclex (b), corte incubado con anticuerpos contra el pptido KETc1; tegumento (c), corte incubado
con anticuerpos anti-KETc12; tegumento (d), corte incubado con anticuerpos anti-GK1 (barra de 45 m).

de [33] por la prdida de un par de cromosomas

como consecuencia del pasaje directo en ratones a
travs de los aos.
El pptido que indujo niveles detectables de proliferacin en linfocitos y monocitos de pacientes con
NCCa, controlada y sujetos sanos, fue KETc1; sin
embargo, no existen diferencias estadsticas significativas en relacin con los otros pptidos (Tablas I,
II y III). En la inmunolocalizacin de los pptidos, el
pptido KETc1 se encontr en la parte ms externa
del parsito, en el tegumento (Fig. 1a y 1b); por lo
tanto, es un antgeno del parsito en contacto estrecho con el husped. KETc12 indujo muy bajos niveles de proliferacin en los pacientes con NCCi y
NCCa. El pptido GK1 no indujo proliferacin en
los linfocitos de pacientes con NCCa y controlada,
slo indujo proliferacin de monocitos de sujetos
sanos. Estos resultados difieren de lo encontrado
con este pptido en ratones in vivo, donde indujo
especfica proliferacin de clulas TCD4 [15], lo que
es razonable si se recuerda que este pptido fue aislado del metacstodo de T. crassiceps (parsito que
infecta a roedores). Sin embargo, varios autores han
comunicado una respuesta linfoproliferativa positiva con antgenos de pared y fluido vesicular de cisticerco de T. crassiceps en sujetos sanos, y una ligera

461

M.A. Daz-Orea, et al

activacin especfica del antgeno en pacientes con

NCC [34,35]. Se ha detectado que, a mayor viabilidad del parsito (NCC activa), menor es la respuesta
proliferativa con mitgenos [34,36]. Con los pptidos, nosotros observamos que es baja y muy semejante a la obtenida en la NCC controlada (Tablas I,
II y III). En estudios de linfoproliferacin de polimorfonucleares aislados de pacientes con NCC y
sujetos sanos estimulados con antgenos crudos de
T. solium, no se encontr diferencia significativa entre los grupos, pero, utilizando antgenos de fluido
vesicular de bajo peso molecular, aumenta significativamente la proliferacin celular in vitro [37]. En
cuanto a la produccin de citocinas, se observ que
el pptido KETc1 increment la produccin de IL-4
en pacientes con NCCa (Tabla I); por lo tanto, existe
la posibilidad de que pueda inducir una respuesta
Th2 en humanos, lo que es semejante a lo observado
con antgenos de T. solium de aproximadamente
25,8 kDa en pacientes con NCC y sujetos sanos [37].
En modelos experimentales con cerdos, se han notificado incrementos de IL-2 e IFN producidos por
clulas mononucleares de sangre perifrica [8]; sin
embargo, en humanos, con los pptidos hubo una
muy baja produccin de IFN. Los tres pptidos indujeron proliferacin de monocitos de sujetos sanos. Por otra parte, los tres pptidos produjeron elevadas concentraciones de IL-1 en pacientes con
NCCi y sujetos sanos, hasta de 4.000 pg/mL (Tablas
I, II y III). Varios autores han detectado estimulacin de linfocitos de pacientes con NCC utilizando
antgenos de bajo peso molecular y fracciones antignicas, presentes en el lquido del cisticerco de T.
crassiceps y T. solium [34-37]. Se ha comunicado en
la bibliografa que los pacientes con NCC sufren un
estado de inmunodeficiencia, que puede deberse a
los antgenos de la pared del cisticerco, a la terapia
antihelminto (corticoesteroides) o a factores propios
del gnero [38-40]. Segn Flisser, las alteraciones en
la respuesta inmunolgica en los pacientes con
NCC, en algunos casos, pueden ser ms una predisposicin que una consecuencia de la NCC [41]. Algunos autores sostienen la hiptesis de que el parsito vivo mantiene un equilibrio con la respuesta inmunolgica del husped, por lo que pasa inadvertido, induciendo una pobre respuesta Th1. Obtuvimos resultados semejantes en los pacientes con
NCCa (cisticerco viable). Por tal motivo, consideramos que es necesario realizar ms estudios in vitro
con clulas de pacientes con otro tipo de inmunodeficiencias para determinar si inducen algn tipo de
respuesta inmunolgica y para considerar su uso,
profilctico y teraputico; pero, en el caso de la
NCCa, el pptido KETc1 podra aplicarse al pacien-

462

te junto con su tratamiento por inducir una respuesta inmunolgica Th2, y el pptido GK1 podra utilizarse como adyuvante en otro tipo de inmunizaciones [15], por estimular al monocito/macrfago.
Bibliografa
1. Del Brutto OH. Neurocysticercosis. Semin Neurol 2005; 25:
243-51.
2. Alarcn F. Neurocisticercosis: etiopatogenia, manifestaciones
clnicas, diagnstico y tratamiento. Rev Neurol 2006; 43 (Supl 1):
S93-100.
3. Ms-Ses G, Vives-Piera I, Fernndez-Barreiro A, MartnezLage JF, Martnez-Salcedo E, Alarcn-Martnez H, et al.
Estudio descriptivo de neurocisticercosis en un hospital
terciario. Rev Neurol 2008; 46: 194-6.
4. Velzquez-Prez L, Jimnez-Marcial ME. Hospital mortality
at the Manuel Velasco Surez National Institute of Neurology
and Neurosurgery (1995-2001). Gac Med Mex 2004; 140: 289-94.
5. Sciutto E, Fragoso G, Trueba L, Lemus D, Montoya RM,
Daz ML, et al. Cysticercosis vaccine: cross protecting immunity
with T. solium antigens against experimental murine T.
crassiceps cysticercosis. Parasite Immunol 1990; 12: 687-96.
6. Toledo A, Larralde C, Fragoso G, Gevorkian G, Manoutcharian
K, Hernndez M, et al. Towards a Taenia solium cysticercosis
vaccine: an epitope shared by Taenia crassiceps and Taenia
solium protects mice against experimental cysticercosis.
Infect Immun 1999; 67: 2522-30.
7. Toledo A, Fragoso G, Rosas G, Hernndez M, Gevorkian G,
Lpez-Casillas F, et al. Two epitopes shared by Taenia
crassiceps and Taenia solium confer protection against
murine T. crassiceps cysticercosis along with a prominent
T1 response. Infect Immun 2001; 69: 1766-73.
8. Huerta M, De Aluja AS, Fragoso G, Toledo A, Villalobos N,
Hernndez M, et al. Synthetic peptide vaccine against Taenia
solium pig cysticercosis: successful vaccination in a controlled
field trial in rural Mexico. Vaccine 2001; 20: 262-6.
9. Daz MA, Villalobos N, De Aluja A, Rosas G, Gmez-Conde E,
Hernndez P, et al. Th1 and Th2 indices of the immune
response in pigs vaccinated against Taenia solium cysticercosis
suggest various host immune strategies against the parasite.
Vet Immunol Immunopathol 2003; 93: 81-90 [erratum: Vet
Immunol Immunopathol 2005; 103: 297].
10. Sciutto E, Morales J, Martnez JJ, Toledo A, Villalobos MN,
Cruz-Revilla C, et al. Further evaluation of the synthetic peptide
vaccine S3Pvac against Taenia solium cysticercosis in pigs in
an endemic town of Mexico. Parasitology 2007; 134: 129-33.
11. Sciutto E, Rosas G, Hernndez M, Morales J, Cruz-Revilla C,
Toledo A, et al. Improvement of the synthetic tri-peptide
vaccine (S3Pvac) against porcine Taenia solium cysticercosis
in search of a more effective, inexpensive and manageable
vaccine. Vaccine 2007; 25: 1368-78.
12. Cruz-Revilla C, Toledo A, Rosas G, Huerta M, Flores-Prez I,
Pea N, et al. Effective protection against experimental Taenia
solium tapeworm infection in hamsters by primo-infection
and by vaccination with recombinant or synthetic heterologous
antigens. J Parasitol 2006; 92: 864-7.
13. Betancourt MA, De Aluja AS, Sciutto E, Hernndez M,
Bobes RJ, Rosas G, et al. Effective protection induced by three
different versions of the porcine S3Pvac anticysticercosis vaccine
against rabbit experimental Taenia pisiformis cysticercosis.
Vaccine 2012; 30: 2760-7.
14. De Aluja AS, Herrera GS, Hernndez M, Plancarte A, Fragoso G,
Sciutto E. Limits of the therapeutic properties of synthetic
S3Pvac anti-cysticercosis vaccine. Vet Parasitol 2011; 177: 90-6.
15. Segura-Velzquez R, Fragoso G, Sciutto E, Sarukhan A.
Towards identification of the mechanisms of action of
parasite-derived peptide GK1 on the immunogenicity of an
influenza vaccine. Clin Vaccine Immunol 2009; 16: 1338-43.
16. Daz-Orea MA, Fraga-Olvera A, Snchez-Rodrguez S,
Gmez-Conde E, Castellanos-Snchez VO, Daz-Orea ML,

www.neurologia.com Rev Neurol 2013; 56 (9): 456-463

Vacuna S3Pvac contra cisticercosis en clulas mononucleares humanas

17.

18.
19.
20.
21.
22.

23.

24.

25.
26.

27.

28.

et al. Efecto de las hormonas esteroides y la gonadotrofina

corinica humana en la transformacin de los monocitos
humanos a macrfagos. Revista CENIC de Ciencias Biolgicas
2010; 41: 1-12.
Quet F, Preux PM, Huert M, Ramrez R, Abad T, Fragoso G,
et al. Determining the burden of neurological disorders in
populations living in tropical areas: who would be questioned?
Lessons from a Mexican rural community. Neuroepidemiology
2011; 36: 194-203.
Sotelo J, Del Brutto OH. Review of neurocysticercosis.
Neurosurg Focus 2002; 12: e1.
Prez-Lpez C, Isla-Guerrero A, lvarez F, Budke M, FernndezMiranda JC, Paz JF, et al. Actualizacin en el tratamiento de
la neurocisticercosis. Rev Neurol 2003; 36: 805-11.
Sciutto E, Fragoso G, De Aluja AS, Hernndez M, Rosas G,
Larralde C. Vaccines against cysticercosis. Curr Top Med
Chem 2008; 8: 415-23.
Flisser A, Lightowlers MW. Vaccination against Taenia solium
cysticercosis. Mem Inst Oswaldo Cruz 2001; 96: 353-6.
Flisser, A, Gauci CG, Zoli A, Martnez-Ocaa J, GarzaRodrguez A, Domnguez-Alpizar JL, et al. Induction of protection
against porcine cysticercosis by vaccination with recombinant
oncosphere antigens. Infect Immun 2004; 72: 5292-7.
Molinari JL, Rodrguez D, Tato P, Soto R, Arechavaleta F,
Solano S. Field trial for reducing porcine Taenia solium
cysticercosis in Mexico by systematic vaccination of pigs.
Vet Parasitol 1997; 69: 55-63.
Oliveira HB, Machado GA, Gonalves-Pires MR, Moura LP,
Costa-Cruz JM. Saline extract of Taenia saginata metacestodes
as an alternative antigen for the immunodiagnosis of neurocysticercosis in human cerebrospinal fluid. Parasitol Res 2009;
105: 169-74.
Ligtowlers MW. In vitro oncosphere-killing assays ti determine
immunity to the larvae of Taenia pisiformis, Taenia ovis, Taenia
saginata, and Taenia solium. J Parasitol 2006; 92: 273-81.
Peralta RH, Vaz AJ, Pardini A, Macedo HW, Machado LR,
De Simone SG, et al. Evaluation of an antigen from Taenia
crassiceps cysticercus for the serodiagnosis of neurocysticercosis.
Acta Trop 2002; 83: 159-68.
Yang J, Feng X, Fu Z, Yuan C, Hong Y, Shi Y, et al. Ultrastructural
observation and gene expression profiling of Schistosoma
japonicum derived from two natural reservoir hosts, water
buffalo and yellow cattle. PLoS One 2012; 7: e47660.
Skariah S, Mordue DG. Identification of Toxoplasma gondii
genes responsive to the host immune response during in vivo
infection. PLoS One 2012; 7: e46621.

29. Maretti-Mira AC, Bittner J, Oliveira-Neto MP, Liu M, Kang D,

Li H, et al. Transcriptome patterns from primary cutaneous
Leishmania braziliensis infections associate with eventual
development of mucosal disease in humans. PLoS Negl Trop
Dis 2012; 6: e1816.
30. Cloutier S, Laverdire M, Chou MN, Boilard N, Chow C,
Papadopoulou B. Translational control through eIF2alpha
phosphorylation during the Leishmania differentiation
process. PLoS One 2012; 7: e35085.
31. Freeman RS. Studies on the biology of Taenia crassiceps (Zeder
1810) Rudolphi, 1810 (cestoda). Can J Zool 1962; 40: 969-90.
32. Fox LL, Kuhn RE, Esch GW. Taenia crassiceps: antigenic
comparison of two larval strains. Exp Parasitol 1971; 29: 194-6.
33. Smith JK, Esch GW, Kuhn RE. Growth and development of
larval Taenia crassiceps (cestoda). I. Aneuploidy in the anomalous
ORF strain. Int J Parasitol 1972; 2: 261-3.
34. Bueno EC, Vaz AJ, Machado LR, Livramento JA, vila SL,
Ferreira AW. Antigen-specific suppression of cultured
lymphocytes from patients with neurocysticercosis.
Clin Exp Immunol 2001; 126: 304-10.
35. Chavarria A, Fleury A, Bobes RJ, Morales J, Fragoso G,
Sciutto E. A depressed peripheral cellular immune response
is related to symptomatic neurocysticercosis. Microbes
Infect 2006; 8: 1082-9.
36. Molinari JL, Tato P, Reynoso OA, Czares JM. Depressive
effect of a Taenia solium cysticercus factor on cultured
human lymphocytes stimulated with phytohaemagglutinin.
Ann Trop Med Parasitol 1990; 84: 205-8.
37. Amit P, Prasad KN, Kumar GR, Shweta T, Sanjeev J, Kumar
PV, et al. Immune response to different fractions of Taenia
solium cyst fluid antigens in patients with
neurocisticercosis. Exp Parasitol 2011; 127: 687-92.
38. Restrepo IB, lvarez JI, Castao JA, Arias LF, Restrepo M,
Trujillo J, et al. Brain granuloma in neurocysticercosis patients
are associated with a Th1 and Th2 profile. Infect Immun 2001;
69: 4554-60.
39. Restrepo BI, Aguilar MI, Melby PC, Teale JM. Analysis
of the peripheral immune response in patients with
neurocysticercosis: evidence for T cell reactivity to parasite
glycoprotein and vesicular fluid antigens. Am J Trop Med
Hyg 2001; 65: 366-70.
40. Sanz CR. Host response in childhood neurocysticercosis:
some pathological aspects. Childs Nerv Syst1987; 3: 206-7.
41. Flisser A. Relacin husped-parsito en la cisticercosis
humana y porcina. Gac Med Mex 1987; 123: 7-8.

In vitro effect of the S3Pvac vaccine against cysticercosis in human mononucleate cells
Introduction. Neurocysticercosis (NCC) is a parasitic infection caused by the establishment of Taenia solium cysticerci in
the central nervous system. The larval stage of the parasite also affects the pig, which is the essential intermediate host
for transmission. For this reason, many researchers have focused on identifying protective antigens to prevent swine
cysticercosis and interrupt the transmission. These include S3Pvac vaccine antigens. Vaccine is constituted by three protective
synthetic peptides: KETc1, KETc12 and GK1.
Aim. To evaluate the effect of the vaccine peptides KETc1, KETc12 and GK1 in mononuclear cells of patients with neuro
cysticercosis and healthy individuals.
Subjects and methods. Comparative, prospective, transverse study. We studied the proliferation and cytokine profile
induced by the three peptides in mononuclear cells from three patients with active NCC, 16 patients by calcified NCC and
16 healthy subjects.
Results. KETc1 induces low levels of proliferation in cells from patients with active and controlled NCC, both in lymphocytes
and in monocytes. KETc12 and GK-1 induce positive proliferation levels of monocytes in healthy subjects.
Conclusions. KETc1 peptide could be used as an adjuvant in the treatment of patients with active NCC, as induced a Th2
response also GK1 peptide as stimulator of monocyte/macrophage in immunizations with other proteins.
Key words. Cysticercosis vaccines. Neurocysticercosis. S3Pvac.

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