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LABORATORIOS
ABC
DICIEMBRE 2009
CONTENIDO
1.0
INTRODUCCIN
2.0
OBJETIVOS
3.0
PROCEDIMIENTOS PARA REALIZAR LOS PARMETROS DE
VALIDACIN DE UN MTODO ANALTICO
3.1 LIMITE DE DETECCIN DEL METODO (LDM)
3.2 INTERVALO DE TRABAJO DEL MTODO (ITM).
3.3 LMITE PRCTICO DE CUANTIFICACIN (LPC)
3.4 CALIBRACIN INICIAL (CI)
3.5 EXACTITUD (RECUPERACIN) Y SESGO INICIAL DEL MTODO
3.6 PRECISIN INICIAL DEL MTODO
3.7 REPRODUCIBILIDAD DEL MTODO
3.8 INCERTIDUMBRE INICIAL
4.0 BIBLIOGRAFIA
1.0 INTRODUCCIN
Todos los laboratorios analticos y en especial los de la Red de PRONAME se deben
obligar a seguir los 6 Principios bsicos de buenas prcticas de mediciones
analticas (ref. 3)
1.- Las mediciones analticas deben ser realizadas de acuerdo a
requerimientos acordados (con un propsito definido).
2.- Las mediciones analticas deben ser realizadas usando mtodos y equipos
que han sido probados para asegurar que son adecuados para el propsito de
la medicin.
3.- El personal que realiza las mediciones analticas debe ser calificado y
competente para llevar a cabo sus tareas.
4.- Debe haber regularmente una evaluacin independiente del desempeo
tcnico del laboratorio.
5.- Las mediciones analticas efectuadas en un lugar deben ser consistentes
con aquellas efectuadas en cualquier otro lugar.
6.- Las organizaciones que realizan mediciones analticas deben tener
perfectamente definidos procedimientos de aseguramiento y control de
calidad.
La validacin de un mtodo de ensayo se ha definido como:
Recuperacin
Sensibilidad
Selectividad / Especificidad
Robustez
Lmite de deteccin
Lmite de cuantificacin
Intervalo lineal y de trabajo
Reproducibilidad
Repetibilidad
Sesgo (En algunos casos evaluado a partir de la Recuperacin)
Incertidumbre inicial
INDICADOR
Pruebas estadsticas en diferentes
matrices con diferentes interferencias
Pruebas
Interlaboratorios
con
variaciones en las condiciones de
prueba
Lmite de deteccin
Repetibilidad, Reproducibilidad e
Incertidumbre
Recuperacin y sesgo
Lmite de Cuantificacin, Intervalo
lineal, curva de calibracin
Recuperacin
Sensibilidad
Lmite de deteccin
Lmite de cuantificacin
Intervalo lineal y de trabajo
Reproducibilidad
Repetibilidad
Sesgo (En algunos casos evaluado a partir de la Recuperacin)
Incertidumbre inicial
TIPO DE VALIDACION
Completa
Completo
Parcial o completa
Parcial o completa
Parcial o completa
Parcial
Parcial
Parcial
2.0 OBJETIVOS
2.2.1 Objetivo General
Establecer los pasos a seguir para realizar la validacin parcial de mtodos
analticos cuantitativos estandarizados.
Cromatografa de Gases
Cromatografa de Gases acoplada a Espectrometra de
Masas
Cromatografa de Lquidos de Alta Presin
Espectrofotometra UV/VIS
Espectrofotometra de Absorcin Atmica
Espectrometra de Emisin ptica con Plasma Inducido
Acoplado (ICP/OES)
Espectrometra de Masas con Emisin de Plasma Inducido
Acoplado (ICP/MS)
NOTA IMPORTANTE:
ESTE PROCEDIMIENTO NO SE DEBE APLICAR A TCNICAS
GRAVIMETRICAS,
VOLUMTRICAS,
POTENCIOMETRICAS
Y
CONDUCTIMETRICAS, PARA ESTAS TECNICAS LA CANTIDAD MINIMA
DETECTABLE ES EQUIVALENTE AL LIMITE PRACTICO DE CUANTIFICACION
INSTRUMENTAL.
-Anote todo lo realizado en su bitcora de analista.
-Verifique para cada analito el lmite de deteccin estimado del mtodo
fuente, tome como base este valor para determinar la concentracin de
la muestra control, la cual se debe encontrar entre 5 y 10 veces por
arriba del lmite de deteccin estimado del mtodo.
-Prepare una muestra control conteniendo los analitos del mtodo a
evaluar, en un volumen suficiente para dividirla en 7 porciones iguales.
-Divida la muestra control en 7 alcuotas y analcelas de acuerdo al
mtodo analtico en cuestin.
10
13
15
Los conceptos anteriores son citas textuales de la Introduccin de la NMX CH 1401996 IMNC Gua para la Evaluacin de la Incertidumbre en los resultados de las
mediciones
La definicin de Incertidumbre (International Vocabulary of Basic and General Terms
in Metrology, ISO, Geneva, 1993):
Parmetro asociado con el resultado de una medicin, que
caracteriza la dispersin de los valores que razonablemente pueden
ser atribuidos al mesurando
El estadstico que se debe utilizar en mediciones de qumica analtica debe ser la
Incertidumbre Expandida(2).
La referencia a la incertidumbre surge debido a que la concordancia entre los
laboratorios es limitada, en parte, por las incertidumbres en que incurre cada
laboratorio en su cadena de trazabilidad. Por lo anterior, la trazabilidad esta
ntimamente ligada a la incertidumbre, la trazabilidad provee los medios para poner
todas las mediciones relacionadas en una escala consistente de medicin, mientras
que la incertidumbre caracteriza la fuerza de los eslabones de la cadena y la
concordancia que es esperada entre los laboratorios que hacen mediciones
similares(2).
La incertidumbre de las mediciones que realiza un laboratorio ambiental de tercera
parte no pueden incluir la incertidumbre del muestreo, ya que sta es desconocida y
16
NO es posible con estos conceptos determinar cuales son las causas del error
o de la variabilidad, ya que estn basadas en el clculo de solo un nmero
final, normalmente por el uso de MRs o MRCs.
17
Estimar correlaciones
Toma de la muestra
Condiciones de almacenamiento de la muestra
Efectos instrumentales
Pureza de reactivos
Estequiometra asumida del analito
Preparacin de la muestra
Condiciones de la medicin
Efectos de la muestra (interferencias de matriz)
Efectos de las computadoras (modelos de curvas de calibracin, cifras
significativas en los clculos, etc.)
Correccin por blancos de reactivos
Efectos de los analistas
Efectos aleatorios
18
donde:
o u(xi) = desviacin estndar experimental de la media
o Esta u(xi) representa un intervalo centrado en el mejor estimado del
mensurando (media aritmtica) que contiene el valor verdadero con
una probabilidad p del 68.27% (si los datos siguen una distribucin
Normal)
Las desviaciones estndar se tienen que corregir dependiendo del tipo de
distribucin estadstica de los datos para obtener las incertidumbres estndar:
s/1 = Normal
s/2 = Normal (k=2)
s/3 = Rectangular (especificaciones simtricas, sin lmites de confianza y
donde se pueden esperar valores limtrofes, +- x% como en el material de
vidrio)
s/6 = Triangular (especificaciones simtricas, sin lmites de confianza y
donde no se esperan valores limtrofes, pero con datos de alguna distribucin
estadstica, como en el material de vidrio anterior pero verificado en el
laboratorio y donde no se aprecian valores en los extremos de la
especificacin)
Se debe determinar la relacin entre las magnitudes de entrada, de tal forma que se
conozca si existe o no correlacin entre ellas, con objeto de utilizar el modelo
matemtico pertinente para el clculo de la incertidumbre combinada.
A continuacin se debe estimar la incertidumbre estndar combinada, par realizarlo,
se combinan las incertidumbres estndar, segn el procedimiento cientfico, se debe
hacer por medio de la integracin de cada una de las incertidumbres estndar de
cada una de las fuentes de incertidumbre, lo cual es bastante complicado, sin
embargo existen aproximaciones aprobadas por la Eurachem que permiten tener
esta combinacin por medios matemticamente menos complejos basados en el tipo
19
20
Preparacin de
Estndares de
Calibracin
Determinacin por
AAE
Calibracin del
AAE
Resultado
II.- Co = (Ao-Bo)/Bi
Ao
Bo
Bi
Por lo tanto:
III.- r (mg/dm2) = (Vl * (Ao-Bo) * d * Facido * Ftiempo * Ftemp) / (Av * Bi)
21
Co
Curva de Calibracin
Facido
Ftiempo
Ftemperatura
Vl
Llenado
Temperatura
Calibracin
Lectura
r
Longitud 2
Longitud 1
Area
Av
0,017801097
mg/L
0,062091166
dm2
Area (Av):
Longitud 1 (altura):
La superficie se calculo en 2.37 dm2, se estima que la medicin est +- 2 mm al 95% de confianza (LC)
si la altura es de 1 dm entonces la Ustd = 2 mm/2 por ser LC 95% = 1 mm
Longitud 2 (ancho):
idem anterior Ustd = 1 mm = 0.01 dm
Area:
Ya que no es exactamente geomtrico se utiliza una Uc=5% al 95% LC,
Ustd= 5/2 = 2.5 dm2
Area = 2.37 dm2
Uc(Av) = (0.01^2 + 0.01^2 + ((0.05x2.37) / 1.96)^2)^0.5
22
Yi
Xi-X
(Xi-X)^2
Yi-Y
1
2
3
4
5
Suma
0,1
0,3
0,5
0,7
0,9
2,5
0,029
0,083
0,133
0,181
0,220
0,646
-0,400
-0,200
0,000
0,200
0,400
0,000
0,160
0,040
0,000
0,040
0,160
0,400
-0,101
-0,047
0,004
0,052
0,091
0,000
n
X
Y
5
0,5
0,1292
r
b
a
0,9983
0,2410
0,0087
Sy/x
Sb
Sa
LC95b
LC95a
Sx0
m
p
Co
Sxx
0,0051
0,0080
0,005
0,2203
-0,0032
0,018
2
15
0,26
0,4
(Yi-Y)^2 (Xi-X)(Yi-Y)
0,010
0,002
0,000
0,003
0,008
0,023
0,040
0,009
0,000
0,010
0,036
0,096
x^2
Yi
^y
0,0
0,1
0,3
0,5
0,8
1,7
0,0
0,1
0,1
0,2
0,2
0,03
0,08
0,13
0,18
0,23
[yi-^y] (yi-^y)^2
0,00
0,00
0,00
0,00
0,01
0,000017
0,000003
0,000014
0,000015
0,000028
0,000078
1
2
3
4
5
Suma
Xi
Y1
Y2
Y3
Yp
0,1
0,3
0,5
0,7
0,9
2,5
0,028
0,084
0,135
0,180
0,215
0,642
0,029
0,083
0,131
0,181
0,23
0,029
0,081
0,133
0,183
0,216
0,029
0,083
0,133
0,181
0,220
No de datos
Media de X
Media de Y
Efecto de temperatura:
El efecto de la temperatura est publicado y es 5%/grado C (ver ref 1-5 Eurachem) para el rango de +- 2 que permite
el metodo, el Ftemp sera 1+-0.1
Ustd con una distribucin rectangular sera 0.1/3^0.5 = 0.06
0,06
mL
Efecto de Tiempo:
Un estudio (ref 1 eurachem) 1.8 mg/l en 86 mg/l = 0.3%/h por el rango de +- 0.5h en 24 h el Ft = 1+-(0.5x0.003) = 1+- 0.0015
Ustd con una distribucin rectangular sera 0.0015/3^0.5 = 0.001
0,001
mL
0,008
mg/L
23
Smbolo
Concentracin de
Cadmio (Co):
Volumen (Vl):
Area (Av):
Efecto de
temperatura:
Concentracin de
Cadmio (Co):
Volumen (Vl):
Area (Av):
Efecto de
temperatura:
Incertidumbre
Estndar
Combinada
Incertidumbre
Estndar
Relativa U(x)/x
mg/L
0,26
0,017801
0,06847
L
dm2
0,332
2,37
0,001829
0,062091
0,00551
0,02620
mg/L
0,0600
0,06000
mL
0,0010
0,00100
mg/L
0,0080
0,00800
Diluciones (D)
0,036422
mg/dm2
0,003469
0.0034 mg/dm2
mg/dm2
0,00694
RESUMEN:
Smbolo
Magnitud de
Valor
Entrada o Fuente de Unidades
Estimado (x)
Incertidumbre
Concentracin de Concentracin de
Cadmio (Co): Cadmio (Co):
mg/L
L
L
Temperatura
Lectura del
Volumen
Calibracin
Area (Av):
Longitud 1 altura
Longitud 2 ancho
Area
Fuente de
Informacin
0,26
Curvas de
calibracin
#DIV/0!
No se hizo
dilucin
Incertidumbre
Original
Tipo de
Distribucin
Calculo de la Us
Incertidumbre
Estndar
0,332
Practica
99.5+-0.5%
Triangular
Metodo
22+-2 C
Rectangular
0.005*332/6^0.5
(2.1e-4*332*2) /
(3)^0.5
0,0007
Incertidumbre
Incertidumbre
Coeficiente de
Estndar
Estndar
Sensibilidad
Combinada
Relativa U(x)/x
0,017801
0,06847
0,001829
0,00551
0,062091
0,02620
0,0001
Practica
1% error
Triangular
0.01*332/(6)^0.5
0,0014
L
dm2
dm
dm
dm2
Especificacion
500+-2.5 ml
Triangular
2.5/(6)^0.5
0,0010
0.02/1.96
0.02/1.96
(0.05*2.37)/1.96
0,010
0,010
0,060
0.008*0.1
0,0080
0,00800
2,37
Practica
2 mm al 95%P Normal
2 mm al 95%P Normal
5 % error
Normal
0.1% por %v/v
Estudio + U de la
acido + 0.008% U
titulacin del
de la titulacin con
cido
NaOH
Concentracin del
cido actico:
mg/L
Efecto de Tiempo:
mL
0,0015
Rectangular
0.0015/(3)^0.5
0,001
0,00100
Efecto de
temperatura:
mg/L
0,1
Rectangular
0.1/(3)^0.5
0,06
0,06000
24
Valor
Concentra
cin de
Cadmio
(Co):
0,26
Incertidumbre Std
0,01780
Concentracin de Cadmio0,26
(Co):
0,332
Volumen (Vl):
2,37
Area (Av):
1
Concentracin del cido actico:
1
Efecto de Tiempo:
1
Efecto de temperatura:
r
u(y,xi)
u(y)^2,u(y,xi)^2
0,332
0,00183
0,2778011
0,26
0,332
0,33382877
2,37
2,37
1
1
1
1
1
1
0,036422
0,038916
0,002494
6,22E-06
1,199E-05
Inceridumbre
Combinada Uc(r)
Volumen
(Vl):
0,036623
0,000201
4,03E-08
Concentracin
del cido actico:
Area (Av):
Efecto de
Tiempo:
Efecto de
temperatura:
2,37
0,06209
0,00800
0,00100
0,06000
0,26
0,332
2,432091166
1
1
1
0,26
0,332
2,37
1,008
1
1
0,26
0,332
2,37
1
1,001
1
0,26
0,332
2,37
1
1
1,06
0,035492
0,000930
8,65E-07
0,036713
0,000291
8,49E-08
0,036458
0,000036
1,33E-09
0,038607
0,002185
4,78E-06
0,003462
Efecto de temperatura:
Efecto de Tiempo:
0,002185
0,000036
0,000291
Area (Av):
Volumen (Vl):
0,000930
0,000201
0,002494
0,0000
0,003462
0,0005
0,0010
0,0015
0,0020
0,0025
0,0030
0,0035
0,0040
Incertidumbres (mg/dm2)
25
4.0 BIBLIOGRAFIA
purpose
of
Analytical
methods,
Eurachem,
1998
in
analytical
26
27