DETERMINACIN DE COMPUESTOS FENLICOS DE TRES POBLACIONES DE

ORGANO (Lippia graveolens Kunt)

Ruiz Maqueda, M. L.(1); Mendoza Daz, S. O.(2); Zavala Nigoa, J.(2)
Universidad Autnoma de Quertaro
(1)
Facultad de Ciencias Naturales. Licenciatura en Biologa.
(2)
Facultad de Qumica / Programa de Posgrado en Alimentos del Centro de la Repblica /
Maestra en Ciencia y Tecnologa de Alimentos.
RESUMEN
Se realiz la cuantificacin de compuestos fenlicos (fenoles y flavonoides totales) de tres
poblaciones de organo (Lippia graveolens Kunt) a partir del extracto acuoso liofilizado,
adems de establecer que las diferencias morfolgicas que existen en las tres plantas, no son
determinantes para clasificarlas como diferentes especies. En los resultados obtenidos, se
comprueba que los compuestos fenlicos se encuentran en el material vegetal deodorizado,
siendo esto una gran ventaja, puesto que se utilizan los materiales de desecho obtenidos del
arrastre de vapor para la extraccin del aceite esencial y, se pueden realizar estudios
relacionados con la salud humana, por medio de este tipo de extracto; adems, se observa que
las tres poblaciones tienen diferencias en los contenidos de fenoles y flavonoides totales, sin
embargo la cantidad del compuesto no determina que las plantas sean diferentes, puesto que
los factores ambientales tales como temperatura, pH del suelo, humedad, etc., influyen en el
metabolismo de los organismos, llevndonos a reafirmar que las tres poblaciones estudiadas
son la misma especie.
INTRODUCCIN
El organo mexicano (Lippia graveolens Kunt) es una de las especies ms utilizadas en todo
el mundo con fines culinarios, las cuales presentan sabor y aroma caractersticos, adems de
otros usos como en los cosmticos, frmacos, licores, etc.; es predominantemente colectada
del medio silvestre y es de las especies mas estudiadas qumicamente por sus aceites
esenciales, pero pocos relacionados con los constituyentes no voltiles (Kintzios, 2002).
Los compuestos fenlicos (tambin conocidos como polifenlicos) forman un conjunto muy
amplio de sustancias, que se caracteriza por la presencia de un anillo bencnico como
mnimo, el cual esta directamente unido al menos un grupo hidroxilo, libre o ligado con otra
funcin (steres, metil steres, glucsidos, etc.) (Bravo, 1998). Estos compuestos protegen a
las plantas contra los daos oxidativos y llevan a cabo la misma funcin en el organismo
humano (Ventura, 2004). Principalmente se encuentran en frutas y vegetales, incluyendo
manzanas, granos de caf, hojas de t, entre otros (Olvera, 2003). En base a su complejidad
estructural, a los compuestos polifenlicos se les clasifica en fenoles simples o cidos
fenlicos, cidos benzoicos y relacionados, acetofenonas y cidos fenil acticos, derivados de
cidos hidroxicinmicos, flavonoides, entre otros (Hassing et al., 1999).
Los flavonoides son compuestos de 15 carbonos que se encuentran en todo el reino vegetal,
de los cuales se han identificado mas de 2000 procedentes de vegetales (Salisbury, 1994). En
la naturaleza se encuentran en dos formas principales, libres (dando color a flores, frutos y
hojas) y como glicsidos (son ms frecuentes en tejidos leosos) (Domnguez, 1964). La
mayora de los compuestos fenlicos presentes en los alimentos son los flavonoides
provenientes de las plantas, que poseen propiedades biolgicas y qumicas comunes, entre las
que se pueden citar: actividad antioxidante, captacin de especies oxigenadas activas,
capacidad de modular ciertas actividades enzimticos, etc. (Ventura, 2004); adems, son de
particular inters para los genetistas de plantas debido a que es posible correlacionar diversas

diferencias morfolgicas entre especies muy relacionadas en un gnero en particular

(Salisbury, 1994).
Los compuestos fenlicos son de particular importancia para la clasificacin de plantas, al
igual que son importantes para la salud humana, por lo que se requiere de buscar la mejor
manera de obtenerlos y de que estos sean aprovechados, es por ello que se realiz una
cuantificacin de fenoles y flavonoides totales, con la finalidad de establecer que las
diferencias morfolgicas entre las tres poblaciones no son determinantes para clasificarlas
como diferentes especies, adems de promover el anlisis de compuestos fenlicos en
extractos acuosos.
MATERIALES Y MTODOS
1) Obtencin de extracto acuoso: Se tomaron 10 gramos de organo molido y seco de las
tres poblaciones (San Juan Raya, Puebla; El Portugus, municipio de Peamiller,
Quertaro; y Salitrera, Guanajuato) y, mediante la tcnica de arrastre de vapor, se
extrajo el aceite esencial, recuperndose el material vegetal libre de aceite. Este
material se somete a decoccin por 10 minutos con 100 ml. de agua destilada y se
filtra; el lquido obtenido, se concentr en rotavapor hasta obtenerse 25 ml.
aproximadamente; el concentrado se congel a 20C y, por ltimo, se liofiliz,
obteniendo el extracto en polvo.
2) Se realiz una cromatografa en capa fina, para verificar que el extracto se encontrara
libre de aceites, teniendo como control, timol y carvracol comerciales (principales
componentes de aceites esenciales), resultando positivo.
3) Cuantificacin de fenoles: Se realiz una curva estndar de cido glico conforme al
mtodo de Folin-Ciocalteu y se compar con las muestras de organo, leyendo en
espectrofotmetro Perkin Elmer Lambda 40 a 760 nm; se expresan los resultados en
g equivalentes de cido glico/ gr. de muestra.
4) Cuantificacin de flavonoides: Se efectu una curva estndar de catequina, leyndose
en el espectrofotmetro Perkin Elmer Lambda 40 a 510 nm y comparando la
absorbancia de las muestras con la curva; los resultados obtenidos se expresan en g
equivalentes de catequina / gr. de muestra.
5) Cromatografa en capa fina: Se tom 10 mg. del liofilizado de cada una de las
poblaciones y se disolvi en etanol, se sembr con un tubo capilar sobre la placa
cromatogrfica y, con el sistema cloroformo:metanol:agua (7:3:0.5) como solvente en
la cmara cromatogrfica, se coloc la placa y se deja que suba el solvente; una vez
que el solvente se detiene, se extrae la placa de la cmara cromatogrfica, se deja
secar, se revela con sulfato seroso, se calienta y se observan los compuestos a simple
vista.
RESULTADOS Y DISCUSIN
Del liofilizado se obtuvieron las siguientes cantidades: Salitrera, Guanajuato, 3 gr.; El
Portugus, Peamiller, Quertaro, 2.318 gr. y San Juan Raya, Puebla, 3.38 gr. A partir de estos
liofilizados se realiz la curva estndar para la cuantificacin de fenoles con cido glico, la
cual se muestra en azul en la Figura 1, en rosa se observan las concentraciones de las muestras
de organo, en donde Puebla presenta una concentracin de 0.215 g equivalentes de cido
glico/gr. de muestra, mientras que Guanajuato tiene una concentracin de 0.1697 g y
Quertaro con 0.1697 g. Esto nos dice que las concentraciones estn variando de lugar a
lugar y, como ya se mencion, tal vez sea este el resultado de las diferentes condiciones que
se renen en los lugares donde fueron colectados los especimenes.

Absorbancia (b)

1,2
1
0,8

Figura 1. Grfica de fenoles totales.

Concentracin dada en g equivalentes de
cido glico / gr. de muestra.
(b)
Lectura en el espectrofotmetro a 760 nm.
1-Blanco, 2-Quertaro, 3-Guanajuato, 4-Puebla
(a)

0,6
0,4

y = 0,52x + 0,1687
R2 = 0,9823

2 4

0,2 1

0
0

0,5

1,5

Concentracin (a)

Curva de cido glico

Organo

Ajuste

En la siguiente grfica (Figura 2) se observan las concentraciones de catequina, tanto en la

curva estndar (en azul) como en las concentraciones equivalentes de catequina en las
muestras de organo (en rosa). Nuevamente se puede observar que Puebla presenta una
concentracin mayor, al presentar 2.6758 g equivalentes de catequina/gr. de muestra,
mientras que Guanajuato presenta 2.3495 g y Quertaro tiene 2.2215 g.
1,2

Absorbancia

(b)

1
2

0,8
0,6

g equivalentes de catequina / gr. de

muestra
(b)
Lectura en espectrofotmetro a 510 nm
1-Blanco, 2-Quertaro, 3-Guanajuato, 4Puebla
(a)

0,4

y = 0,3366x - 0,0153
R2 = 0,9989

0,2
1

0
-0,2

Figura 2. Grfica de flavonoides

totales.

4
3

Concentracin
Curva de catequina

(a)

Organo

Ajuste

La tabla 1 nos muestra los resultados obtenidos de la cuantificacin de fenoles y flavonoides

para las diferentes poblaciones, podemos observar que Puebla presenta 0.0086 gr. de
fenoles/gr. de muestra, demostrando por tercera ocasin que existe una mayor cantidad de
fenoles en esta poblacin, seguido de Guanajuato y posteriormente de Quertaro.
TABLA 1. Contenido de fenoles y flavonoides totales en las tres poblaciones de organo.

Salitrera, Gto.
San Juan Raya, Pbla.
El Portugus, Qro.

Fenoles totales (gr. de fenoles /

gr. de muestra)
0.0074
0.0086
0.0068

Flavonoides totales (gr. de

flavonoides / gr. de muestra)
0.0889
0.0940
0.1070

Para los flavonoides, se observa que Puebla nuevamente presenta mayor cantidad en cuanto a
los flavonoides totales, con respecto a Guanajuato y Quertaro, en orden descendente.

Por ltimo en la figura 3, se muestra la corrida de las muestras sobre la

placa, en la cual podemos observar que hay varios compuestos en
6
comn entre las tres poblaciones, en la primera banda, se observa una
mayor concentracin de compuestos en Puebla (P), mientras que se ven
5
disminuidos en Quertaro (Q) y Guanajuato (G)s. Al igual que en las
bandas 2, 3, 5 y 6, donde se observan variaciones en las
concentraciones de los compuestos, excepto en la banda 4 que slo
predomina en Puebla; los compuestos no fueron identificados, pero esto
4
nos indica que hay grandes similitudes de los compuestos entre las tres
3
poblaciones.
2
Al ser los flavonoides los compuestos fenlicos que presentan grandes
propiedades biolgicas y qumicas, resulta interesante observar que las
1
cantidades obtenidas difieren grandemente entre s, esto tal vez debido
a las diferentes condiciones climticas y ambientales que puede llegar a
tener la planta en los diferentes lugares de colecta. Es importante
Figura 3. Placa de destacar, que la colecta del material utilizado fue aproximadamente por
cromatografa
en las mismas fechas (finales de junio-principios de julio del 2004), puede
capa fina.
observarse que las tres plantas se encontraban en dos estados
diferentes, ya que Guanajuato y Quertaro se encontraban en fase
vegetativa, mientras que Puebla se encontraba en etapa de floracin, lo cual puede darnos una
probable idea acerca de por que difieren estas cantidades.
CONCLUSIONES
No hay evidencia suficiente para decir que las tres plantas colectadas sean especies diferentes,
por lo que se puede afirmar que se trata de la misma especie, ya que los componentes vistos
en la placa cromatogrfica revelan que existen compuestos afines entre s, sin embargo, en el
caso de Puebla se pueden observar algunos compuestos ms en comparacin con los dems
estados, esto requiere de ms investigaciones para indagar cuales son estos compuestos y
determinar cuales son los compuestos que estn marcando una pequea diferencia entre las
tres poblaciones de organo. Se verific que a partir del extracto acuoso se pueden recuperar
compuestos fenlicos, los cuales pueden servir para posteriores investigaciones,
representando un gran avance, pues en la industria suele desecharse el material vegetal
despus del arrastre con vapor del aceite esencial, dejando las puertas abiertas para realizar
posteriores investigaciones, en las cuales se prueben las capacidades de estos compuestos en
cultivos celulares y animales experimentales, que puedan dar beneficios para la salud humana,
como ya se ha demostrado con algunos otros tipos de extractos.
REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
Bravo, L. Polyphenols: Chemistry, dietary sources, metabolism and nutritional significance.
Nutr. Rev. 56(11), 317-333, 1998.
Domnguez, X. A. Mtodos de investigacin fitoqumica, Centro Regional de Ayuda
Tcnica. Ed. Limusa. Mxico, 1973.
Hassing, A., Liang, W.X., Schwabl, H. and Stampfli, K. Flavonoids and tannins: plant-based
antioxidants with vitamin character. Med Hypotheses. 52, 479-481. 1999.
Olvera-Garca, V. Efecto y mecanismo de accin del extracto acuoso de flor de Jamaica
(Hibiscus sabdariffa L.) sobre la proliferacin de clulas HeLa. Tesis de Maestra en Ciencia

y Tecnologa de Alimentos. Universidad Autnoma de Quertaro. Facultad de Qumica.

Programa de Postgrado en Alimentos del Centro de la Repblica. Mxico, 2003.
Quicke, D. L. J. Principles and techniques of contemporary taxonomy. Blackie Academic &
Professional Press. USA, 1993.
Salisbury, F.B. Fisiologa Vegetal Grupo Editorial Iberoamrica. Mxico, 1994.
Ventura-Prez, R. I. Evaluacin nutrimental y nutracetica de la hoja de Chaya ( Cnidosculus
chayamansa). Tesis de Maestra en Ciencia y Tecnologa de Alimentos. Universidad
Autnoma de Quertaro. Facultad de Qumica. Programa de Postgrado en Alimentos del
Centro de la Repblica. Mxico, 2004.