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Q UMICA BIOLGICA

GUA DE TRABAJOS
PRCTICOS

ESCUELA TCNICA ORT

5 QUMICA 2009
Profesor: Lautaro Kremenchuzky

TRABAJO PRCTICO N 0
SEGURIDAD EN EL LABORATORIO

BIOSEGURIDAD
Se denomina as al conjunto de operaciones y medidas de autoproteccin que se deben
adoptar para evitar tomar contacto con materiales txicos y/o infecciosos que puedan daar la
integridad fsica.
Toda medida de autoproteccin debe constituir una conducta natural del personal de
laboratorio, ya que realizar tareas en el mismo implica exponerse a innumerables riesgos que
pueden ser prevenidos.
Existe una gran diversidad de elementos y equipos de autoproteccin, como pueden ser:
Guantes de ltex
Guardapolvo
Antiparras
Mascarillas

Tambin deben cumplirse pautas de seguridad, que, al igual que los elementos de
bioseguridad, sirven para el resguardo personal.

No se permitir el ingreso al laboratorio sin guardapolvo.


No se permitir el consumo de comidas o bebidas dentro del
laboratorio.
El cabello deber estar siempre recogido.
Se deber evitar el uso de

sandalias como calzado dentro del

laboratorio as como el uso de anillos, pulseras y relojes que puedan


interferir en el correcto manejo del material.
Se deber evitar la circulacin innecesaria por el laboratorio
transportando sustancias qumicas y/o biolgicas.
Durante la realizacin de los trabajos prcticos todos los elementos
personales debern ser retirados de las mesadas de trabajo
No se permitir el ingreso de alumnos al paol sin previa
autorizacin.

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FUEGO
El fuego es una reaccin qumica, una oxidacin. Para que se produzca, resulta necesario el
ntimo contacto de tres componentes, lo que constituye el Tringulo del Fuego.
Combustible - Calor Comburente (Oxgeno).

CALOR

COMBUSTIBLE

COMBURENTE
COMBURENTE
Si se eliminan cualquiera de estos componentes, ser suficiente, para que el fuego no se inicie.
A travs de experiencias y estudios posteriores se ha descubierto un cuarto factor: La Reaccin
Qumica ante el Frente de Llama o Reaccin en Cadena; este cuarto factor no resta validez al
proceso de iniciacin del fuego, en cambio, es importante en el momento de seleccionar
mtodos para la extincin de un fuego ya declarado.

TIPOS DE FUEGO
CLASE A
CLASE B
CLASE C
CLASE D

Slidos de Naturaleza orgnica


Combustibles lquidos
Las dos clases anteriores donde interviene la electricidad
Metales especiales

TIPO DE EXTINTORES
TIPO A
TIPO B
TIPO C
TIPO D

Matafuegos de Agua
Matafuegos de Polvo Qumico Seco/ de Espuma
Matafuegos de Dixido de Carbono
Matafuegos Polvo Qumico Seco Presurizado

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QUEMADURAS
Conjunto de lesiones determinadas por la accin de agentes fsicos, qumicos o biolgicos que
dan lugar a una serie de reacciones locales y generales como consecuencia de alteraciones
trmicas, cuya gravedad guarda relacin con su extensin, ubicacin y profundidad.

La piel de todos los animales homeotermos (de sangre caliente) es el mayor rgano del cuerpo
y tiene varias capas a saber:

La ms superficial se llama EPIDERMIS. Formando parte de sta se encuentra la capa


cornea compuesta por clulas desgastadas y muertas que se desprenden continuamente
descascarndose, a los fines de su renovacin.

La que contina hacia la profundidad es la llamada DERMIS. En sta se encuentra la


mayor cantidad de terminaciones nerviosas y capilares, el enclave de los folculos pilosos
(pelos), las glndulas sudorparas y las glndulas sebceas.

La ms interna se denomina HIPODERMIS (tejido subcutneo) y por esta corren los vasos
sanguneos de mayor calibre. Esta ltima capa se encuentra en contacto por debajo con
los rganos internos.

CLASIFICACIN POR PROFUNDIDAD


QUEMADURAS TRMICAS POR CALOR
Se clasifican en tres grupos:
QUEMADURAS TIPO A (1):
Afecta a la capa ms superficial de la epidermis. Se caracteriza
por la edematizacin (hinchazn) y enrojecimiento de los tejidos

a causa de la

acentuada vasodilatacin local de la red vascular subcutnea. Presenta tambin purito


(picazn) y dolor como consecuencia de la irritacin de los filetes nerviosos. Luego de
algunos das puede producirse el desprendimiento de la capa cornea.

QUEMADURAS TIPO AB (2)

Se subdividen en dos clases:

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AB-a (2 superficial): afecta a la epidermis en su totalidad y algunos


componentes de la dermis. Aqu la red vascular adems de hallarse muy
dilatada, se encuentra tambin contusionada. Por otra parte se produce
una liberacin de plasma que es el responsable de la formacin de
flictenas (ampollas), llamadas de base clara por la presencia del mismo
en su interior. Asimismo el plasma se deposita tambin en la proximidad
de los tejidos, ocasionando la distensin y edematizacin de los mismos. A diferencia del
caso anterior las terminaciones nerviosas se encuentran ms afectadas, lo que genera
mayor dolor e impotencia funcional.

AB-b (2 profunda): esta lesin compromete a la epidermis y a la


dermis. Hay destruccin de la red vascular por lo que se produce
liberacin de sangre junto con el plasma, que se instala prximo a los
tejidos edematizndolos.

Se observa la presencia de flictenas las

cuales, en este caso, se denominan de base oscura debido a la


presencia de sangre en su interior. Contrariamente al caso anterior, existe destruccin de
las terminales nerviosas lo que hace que esta lesin sea poco o nada dolorosa.

QUEMADURAS TIPO B (3)


Se destruyen todos los elementos componentes de la dermis y la epidermis, razn por la
cual esta lesin es la ms peligrosa de todas. Su aspecto es de escara, seca y de color
negruzco. Asimismo la total destruccin de las terminaciones nerviosas hace que en la
zona afectada no exista dolor.

QUEMADURAS

QUMICAS

Existen muchos productos qumicos que pueden provocar quemaduras. Lo que diferencia a
stas quemaduras de las trmicas es que el producto involucrado, al absorberse por la piel
causa adems fallas en los rganos internos.

Por otra parte en su forma voltil, al ser

inhalados provocan lesiones en las vas areas que pueden desencadenar en la obstruccin de
las vas areas o en el paro no obstructivo de la mecnica respiratoria.

IMPORTANTE
LOS

GUANTES DE LTEX NO RESISTEN EL CONTACTO CON LOS CIDOS Y LCALIS

CONCENTRADOS.

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INTOXICACIONES
GENERALIDADES
DEFINICIN Y CONCEPTOS RELACIONADOS

Intoxicacin es el ingreso al cuerpo de toda sustancia que por sus caractersticas qumicas o
biolgicas puede comprometer seriamente la integridad del organismo o provocar la muerte de
la persona afectada; tambin se puede definir como el conjunto de manifestaciones producidas
por las reacciones nocivas de esta sustancia y capaces de exteriorizarse como enfermedad.
Un frmaco o droga es una sustancia que puede modificar una o ms funciones del organismo
una vez introducido en l; un txico es toda aquella sustancia, incluidos los frmacos, que
pueden producir un dao en el organismo y un veneno es un txico muy potente, aunque se
utiliza como sinnimo de txico.
Sin embargo se debe tener en cuenta que "la dosis hace al veneno", con lo cul los trminos
descriptos anteriormente no son absolutos, sino que depende de que dosis se trate, se incluirn
en uno u otro concepto.
Por ltimo, se indica genricamente como antdoto a toda aquella sustancia que, por distintos
mecanismos y vas, puede prevenir o limitar la absorcin de sustancias txicas, como as
tambin su efecto perjudicial sobre el organismo. Cabe destacar que los antdotos tienen una
accin muy especfica con lo que su uso es casi exclusivamente intra hospitalario, ya que una
errnea prescripcin puede ser contraproducente.

CLASIFICACIN DE LOS TXICOS


No puede hacerse una clasificacin segn la intensidad del txico debido a que esto est sujeto
a otras variables, y tampoco pueden clasificarse segn su estructura qumica debido a la gran
variedad existente; pero s pueden clasificarse en grupos potencialmente txicos para el
hombre, segn su uso, funcin o procedencia.

ABSORCIN Y EXCRECIN DEL TXICO


El proceso de absorcin es el pasaje del txico desde el exterior a la sangre por diferentes vas:
oral, drmica, inhalatoria y a travs de mordeduras, picaduras, inyecciones y heridas.

El mismo organismo es capaz de eliminarlo por: biotransformacin o metabolizacin y por


excrecin a travs de la orina, vmitos, heces, sudoracin, exhalacin, pelo y leche materna.

NUNCA

PROVOCAR EL VMITO CUANDO EL TXICO SEA UN LCALIS, UN CIDO O

DERIVADOS DEL PETRLEO.

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IDENTIFICACIN DE SUSTANCIAS
MODELOS DE ETIQUETAS

DE

QUMICAS

RIESGO

(
(Clase

1)SustanciasClase

explosivas

2)Gases

no(Clase 2) Gas venenoso

Clase 2) Gases inflamables

inflamables

(
(Clase

3)

Lquido(Clase

4)

Sustancias(Clase

inflamable

slidas inflamables

(Clase 5) Comburente

(Clase

5)

orgnico

4)

combustin espontnea

Perxido(Clase

6)

6)

infecciosas

en contacto con agua

Sustancias(Clase

venenosas

6)

Sustancias

nocivas

(
Clase

SlidoClase 4) Slido peligroso

Sustancias(Clase

7)

radiactivas

SustanciasClase

8)

SustanciasClase 9) Sustancias varias

corrosivas

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TRABAJO PRCTICO N 1
EXTRACTO SECO
Materiales:

Trpode

Tela metlica

Mechero

Mortero

Cuchillo

Balanza

Estufa a 100 105 C

Cristalizador

Alimentos (verdura, pescado, carne, etc.)

Procedimiento:
-

Pesar el cristalizador limpio y seco.

Agregar las porciones de alimentos separadamente, previamente triturados o cortados


y pesar nuevamente.

Calentar separadamente cada alimento sobre tela metlica en el mechero.

Terminar el proceso con la estufa a 104 C (hasta sequedad).

Enfriar la cpsula en desecador y volver a pesar. Repetir hasta constancia de peso.

Calcular los % de agua en cada alimento.

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TRABAJO PRCTICO N 2
SMOSIS
Materiales y reactivos:

Sal de mesa

Huevos crudos

Solucin de HCl 1:1

Vasos de precipitados

Procedimiento:
-

Sumergir los huevos en la solucin de HCl 1:1 para extraer la cscara sin daar el
resto. Dejar actuar hasta que se desprenda la cscara.

Una vez que queda la membrana sin cscara, colocar un huevo en un vaso que
contenga agua destilada de manera que lo cubra totalmente.

Realizar lo mismo con otro huevo en un vaso que contenga salmuera.

Dejarlo hasta el final de la clase y observar.


CaCO3 + 2 HCl CaCl2 + CO2 + H2O

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TRABAJO PRCTICO N 3
DILISIS

Objetivo: separar una solucin de NaCl y otra de almidn a travs de una dilisis.
Materiales y reactivos:

Membrana de dilisis

Agitador magntico

Vaso de precipitados de 1 litro

Solucin de NaCl

Solucin de almidn

Solucin de lugol

Solucin de AgNO3

Agua destilada

Procedimiento:
o

Colocar en un tubo, 1 mL de solucin de NaCl + 1 mL de solucin de AgNO 3.


Observar y registrar.

Colocar en otro tubo, 1 mL de solucin de lugol + 1 mL de solucin de almidn.


Observar y registrar.

Preparar un dializador con una membrana de dilisis o bolsa de celofn.

Introducir dentro de la membrana la solucin de NaCl y la solucin de almidn.

Cerrar la bolsa perfectamente en forma tal de anular toda prdida.

Introducir el dispositivo sostenido por un soporte dentro del vaso de precipitados


conteniendo agua destilada.

Colocar 2 porciones del agua del vaso en dos tubos y ensayar con AgNO 3 y lugol.
Registrar.

Dializar durante 1 hora (encender el agitador magntico).

Colocar 2 porciones del agua del vaso en dos tubos y ensayar con AgNO 3 y lugol.
Registrar.

Observaciones:
Pre dilisis

Control previo:
NaCl + AgNO3:
Almidn + lugol:

Post dilisis

Tubo + AgNO3
Tubo + lugol

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TRABAJO PRCTICO N 4
HIDRATOS DE CARBONO
PARTE A. REACCIONES DE RECONOCIMIENTO
1. Azcares reductores
Reactivos:
- NaOH 10%.
- CuSO4 1%.
- Azcares 1%: sacarosa, almidn, xilosa, lactosa.
Mtodo:
En un tubo de ensayo se vierten 2 ml de la solucin de azcar e igual volumen de NaOH 10%.
Luego de agitar, se agregan 10 gotas de la solucin de CuSO 4. Se calienta a ebullicin, siendo
la reaccin positiva cuando se observa la aparicin de un precipitado amarillo (CuOH) y luego
rojo (Cu2O).

2. Prueba de Molisch:
El cido sulfrico concentrado hidroliza enlaces glicosdicos para dar monosacridos que
pueden ser luego deshidratados dando furfural y sus derivados. Estos productos se combinan
luego con a-naftol sulfonato originando un complejo prpura. Esta reaccin es general para los
hidratos de carbono pero algunos otros compuestos orgnicos dan tambin furfural con cido
sulfrico concentrado.

Reactivos:
- H2SO4 (c).
- -naftol (50 g/l en etanol, preparar fresco).
- Azcares 1%: lactosa, glucosa, arabinosa, fructosa.
Mtodo:
Agregue dos gotas de la solucin de -naftol a 2 ml de la sustancia problema. Aada
cuidadosamente por las paredes del tubo aproximadamente 1 ml de H 2SO4 (c) hasta que se
formen dos capas. Observe cuidadosamente cualquier cambio de color en la interfase de los
dos lquidos.

3. Prueba de Benedict:
Reactivos:
- Reactivo de Benedict. Disuelva 173 g de citrato de sodio y 100 g de carbonato de sodio en
aproximadamente 800 ml de agua caliente. Filtre a travs de papel de filtro en una probeta de

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1000 ml y complete con agua hasta 850 ml. Mientras tanto, disuelva 17,3 g de sulfato de cobre
en aproximadamente 100 ml de agua y complete hasta 150 ml. Vierta la primera solucin en un
vaso de precipitados de 2 litros y aada lentamente la solucin de sulfato de cobre agitando
continuamente.
- Azcares 1%: sacarosa, almidn, maltosa, galactosa.
Mtodo:
Agregue cinco gotas de la solucin problema a 2 ml del reactivo de Benedict y coloque en un
bao de agua hirviendo por 5 minutos.
4. Prueba de Bial para las pentosas:
Cuando se calientan pentosas con HCl (c) se forma furfural que se condensa con orcinol en
presencia de iones frricos para dar un color verde azul. La reaccin no es absolutamente
especfica para las pentosas, ya que el calentamiento prolongado de algunas hexosas produce
hidroximetil furfural que tambin reacciona con orcinol dando complejos coloreados.
Reactivos:
- Reactivo de Bial. Disuelva 1,5 g de orcinol en 500 mL de HCl (c) y aada 20 gotas de solucin
de FeCl3 100 g/L.
- Alcohol amlico.
- Azcares 1%: fructosa, arabinosa, xilosa.
Mtodo:
En un tubo de ensayo agregue aproximadamente 1 mL de la muestra a 2,5 mL de reactivo y
caliente hasta que empiece a hervir. La aparicin de una coloracin azul verdosa indica
resultados positivos. Enfre el tubo, luego agregue 2 3 mL de alcohol amlico y agite.
5. Prueba de Seliwanoff para las cetosas:
Las cetosas se deshidratan ms rpidamente que las aldosas dando derivados de furfural que
se condensan con resorcinol para formar un complejo rojo; por lo tanto, debe evitarse un
calentamiento prolongado de la muestra que se esta estudiando.
Reactivos:
- Reactivo de Seliwanoff: (Resorcinol 0,5 g/l en HCl 3 M).
- Azcares 1%: fructosa, sacarosa, lactosa.
Mtodo:
A 2 ml del reactivo de Seliwanoff agregue dos gotas de solucin de carbohidrato y caliente
durante 1 minuto en un bao de agua hirviendo. Observe la aparicin de un color rojo intenso.

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6. Prueba para sacarosas:


Reactivos:
- HCl (c).
- NaOH 5 M.
- Azcares 1%: sacarosa, glucosa.
Mtodo:
A 5 mL de solucin de sacarosa agregue cinco gotas de HCl (c), caliente durante 5 minutos en
un bao de agua hirviendo, enfre y agregue 10 gotas de NaOH hasta que la solucin sea
neutra o dbilmente alcalina. Con la solucin hidrolizada realice las pruebas para azcares
reductores y la de Seliwanoff.
8. Prueba del yodo:
Reactivos:
- Solucin de lugol (5 mmol/L en KI (30 g/L) .
- Azcares 1%: almidn, glucosa.
Mtodo:
A 1 mL de solucin agregue dos gotas de lugol y compare los colores obtenidos con los de
lugol en agua.

PARTE B. CROMATOGRAFA DE AZCARES


Procedimiento:
1) Preparacin de la cuba cromatogrfica:
- Poner solvente de elucin en la cuba hasta que alcance la altura de 1 cm.
-

Dejarla tapada durante 30 minutos antes de efectuar la cromatografa.

2) Preparacin de la cromatoplaca de slica gel:


-

Recortar una porcin de cromatoplaca de slica gel.

Trazar una lnea con lpiz a 1 cm de uno de los extremos de la placa.

Marcar puntos distanciados 1 cm sobre la lnea identificndolos con el nombre de la


muestra o patrn a sembrar escrito en lpiz.

3) Sembrado de las muestras:


-

Con un tubo capilar tomar la muestra que se va a sembrar.

Tocando con el capilar depositar una pequea gota de lquido sobre una de las
marcas numeradas de la placa, cuidando que el dimetro de las manchas no supere
los 4-5 mm. (Practicar antes con un papel de filtro). Secar con secador de pelo.

Repetir 3 veces la operacin de siembra y secado sobre el mismo punto de la placa.

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En cada punto de la placa se sembrar una muestra diferente usando un capilar


limpio para cada siembra.

4) Corrida cromatogrfica:
-

Introducir la placa en la cuba rpidamente de modo que queden las siembras del lado
de la fase mvil.

Solvente de elucin: n-butanol:cido actico:agua (2:1:1)


5) Revelado:
-

Pulverizar, cubriendo todo el cromatograma con la niebla del revelador.

Revelador: 1 ml de anilina y 1 g de clorhidrato de difenilamina en 50 ml de acetona con


10% de cido fosfrico (usar recientemente preparado).

Clculo del Rf:


Rf = distancia recorrida por la muestra / distancia recorrida por la fase mvil.
En el ejemplo del dibujo, para la mancha N 4, el Rf ser b / a.

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TRABAJO PRCTICO N 5
LPIDOS
1. REACCIN CON EL SUDAN III
Reactivos:
-

Sudn lll. Disolucin al 0,2%: a 200 mg de Sudn lll se aaden a 100 ml de etanol 70%
calentado en un bao Mara, se mezcla y se deja en reposo durante 24 hs por lo
menos.

Aceite vegetal.

Manteca.

Margarina.

Agua destilada.

Mtodo:
Sobre un vidrio de reloj se aplica una gota de aceite, se aade una gota de Sudn lll y se
mezcla. Se observa la aparicin de una coloracin naranja de la mezcla

2. PRUEBAS PARA CIDOS GRASOS:


Saponificacin. Cuando se calientan aceites o grasas en presencia de lcali, se liberan cidos
grasos y glicerol en un proceso que se conoce como saponificacin.
Formacin del jabn. El exceso de lcali presente reacciona con el cido liberado formando la
sal de sodio o potasio, dando a la solucin una apariencia jabonosa caracterstica. Los jabones
son solubles en agua pero se precipitan aadiendo exceso de NaCl. Las sales de magnesio y
calcio tambin son insolubles y originan la nata que se forma cuando el jabn se agita en agua
dura.
Reactivos:
- Grasa animal (manteca, grasa vacuna).
- Aceite vegetal.
- KOH alcohlico (100 g/L).
- HCl (c).
- Fenolftalena (10 g/l en alcohol).
- NaOH (0,1 M).
- NaCl ss.
Mtodo:
Saponificacin. En un tubo coloque grasa hasta una altura de aproximadamente 0,5 cm:
agregue KOH alcohlica para cubrir la grasa y deje hervir cuidadosamente por cerca de un
minuto. Agregue 10 mL de agua, hierva por 10 minutos ms y enfre. Agregue cuidadosamente

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HCl (c) hasta que la solucin sea ligeramente cida y remueva la capa de cidos grasos que
aparece sobre la superficie del lquido. Caliente el cido graso con agua y agregue lcali
lentamente hasta que se obtenga una solucin clara; utilice esta solucin en los ensayos para
la formacin del jabn.
a. Acidifique con HCl. Qu observa?
b. Sature la solucin con NaCl y observe la aparicin del jabn de sodio.

3. AISLAMIENTO E IDENTIFICACIN DE COLESTEROL:


Se parte de 5 gramos de cerebro desmenuzado y se mezclan con 6 gramos de yeso en un
mortero hasta formar una pasta uniforme. Se pasa a una placa de vidrio y se espera a que se
seque (si es necesario se lleva a estufa a 37 C). En forma cuidadosa, si es posible
asegurndose con un embudo, se pasa el material pulvurulento obtenido a un tubo de ensayos
y se adicionan 6 ml de cloroformo mezclando con vrtex para luego filtrar por algodn. Sobre el
filtrado se realizan las siguientes reacciones:
3.1 Reaccin de Schiff:
Tomar 1 mL del extracto obtenido y agregar 1 mL de H 2SO4 (c) por la pared del tubo.
Observar en la interfase la formacin de un anillo rojo.
3.2 Reaccin de Liebermann - Burkhardt:
A 2 mL del extracto agregar 10 gotas de anhdrido actico y 2 gotas de H 2SO4 (c). Mezclar y
observar la variacin de colores: rojo violeta azul verde.

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TRABAJO PRCTICO N 6
PROTENAS
Objetivo: extraer protenas a partir de alimentos y realizar reconocimiento.

PARTE A. HARINA
Procedimiento:

Pesar aproximadamente 20 g de harina y colocarla en el centro de un trozo de tela de


algodn.

Tomar el lienzo por las puntas, encerrando la harina y mojarlo con agua de la canilla
para arrastrar el almidn contenido en la harina.

Abrir la bolsita y juntar el residuo de gluten (protena) con ayuda de una esptula.

Pasar el residuo a un tubo de ensayo y agregar agua hasta 1 cm de altura.

PARTE B. GELATINA
Procedimiento:

Preparar gelatina sin sabor (seguir las instrucciones del envase).

Dejar enfriar.

Una vez solidificada pasar una porcin de la gelatina a un tubo de ensayo.

Agregar agua hasta cubrirla y deshacerlo con una varilla.

PARTE C. HUEVO
Procedimiento:

Abrir un huevo y separar la clara de la yema.

Diluir la clara con 50 mL de agua destilada.

Transferir 1 mL de solucin de clara a un tubo de ensayo.

PARTE D. ENSAYO DE BIURET


Procedimiento:
A cada tubo que contiene protena (de las obtenidas en la las partes A, B y C) y a un tubo con 1
mL de agua destilada agregar 1 mL de solucin de biuret.
Materiales y reactivos:

Tela de algodn.

Harina de trigo.

Tubos de ensayo.

Gelatina sin sabor.

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Varilla de vidrio.

Huevo.

Solucin de biuret.

Observaciones:
Alimento
Harina
Gelatina
Clara de huevo
Agua

Protena principal

Coloracin con Biuret

Complejo azul violceo

PARTE E. COAGULACIN DE LAS PROTENAS


Procedimiento:

Romper un huevo de gallina y descartar la yema.

Tomar 1 mL de clara y realizar los siguientes ensayos, observando lo que ocurre:

a) Agregar 1 mL de HCl concentrado.


b) Agregar 1 mL de alcohol etlico.
c) Agregar 1 mL de NaOH 40%.
d) Calentar a bao mara a 100C.

Tomar 3 mL de leche y realizar los siguientes ensayos, observando lo que ocurre:

a) Agregar 1 mL de HCl concentrado.


b) Agregar 3 mL de alcohol etlico.
c) Agregar 1 mL de NaOH 40%.
d) Calentar a bao mara a 100C.

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Alimento
Huevo
Leche nueva
Leche vieja

Protena

HCl

Alcohol

NaOH

Calor

PARTE F. CROMATOGRAFA DE AMINOCIDOS


Patrones: aminocidos (Asp, Asn, Glu, Gln, Ser, Pro, Ala, Arg) en concentracin 0,25% en
isopropanol : agua (10:90).
Solvente de corrida: n-butanol:cido actico glacial:agua (3:1:1).
Revelador: ninhidrina 0,2% en acetona, recientemente preparada.
Materiales:

Cromatofolios recubiertos con slica gel.

Cuba cromatogrfica.

Tubos capilares.

Papel de filtro.

Embudo.

Erlenmeyer.

Varillas de vidrio.

Procedimiento:
-

Sembrar los patrones de aminocidos realizando 5 a 10 toques.

Exprimir una naranja y tomar 5 mL.

Filtrar y agregar 15 mL de alcohol para precipitar las protenas. Volver a filtrar.

Sembrar en el cromatofolio con 3 a 4 toques.

Siempre que se trabaje con aminocidos hay que evitar tocar con los dedos la
superficie de las placas o del papel, puesto que la transpiracin contiene aminocidos.

Realizar la corrida cromatogrfica utilizando la fase mvil indicada.

Revelado: pulverizar abundantemente con ninhidrina y colocar en estufa 5 minutos.

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TRABAJO PRCTICO N 7
CATALIZADORES

PARTE

A.

DESCOMPOSICIN

DE

H2O2

CON

CATALIZADOR

INORGNICO
Procedimiento:
-

Agregar a un vaso de precipitados 20 mL de agua oxigenada comercial.

Agregar al vaso unos cristales de dixido de manganeso.

Realizar un blanco en otro vaso agregando 20 mL de agua destilada.


OBSERVACIONES

H2O2
H2O

PARTE

B.

DESCOMPOSICIN

DE

H2O2

CON

CATALIZADOR

BIOLGICO. MODIFICACIN DE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA POR LA


TEMPERATURA
Procedimiento:
-

Cortar daditos pequeos de papa (de unos 0.5 cm de lado).

Hervir algunos de ellos (NO TODOS!!!).

En un tubo de ensayo agregar 1 mL de H2O2 y un dadito de papa cruda.

En otro tubo de ensayo agregar 1 mL de H2O2 y un dadito de papa hervida.


OBSERVACIONES

PAPA CRUDA
PAPA HERVIDA

PARTE C. MODIFICACIN DE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA SEGN LA


ACIDEZ DEL MEDIO
Procedimiento:
-

Triturar un trocito de zanahoria junto con 5 mL de solucin reguladora de pH 7 para


extraer la enzima del tejido vegetal.

Filtrar y recoger el lquido obtenido.

Tomar 3 tubos de ensayo y colocar:

TUBO

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20

1
2
3

1 mL de filtrado + 1 mL de NaOH 0.1 M


1 mL de filtrado + 1 mL de HCl 0.1 M
2 mL de filtrado
-

TUBO
1
2
3

Luego agregar a cada uno de los tubos 3 mL de H2O2.


OBSERVACIONES

Solucin reguladora pH 7:
50 mL de KH2PO4 0.1 M (13 g/L) + 29 mL de NaOH 0.1 M

PARTE D. ACCIN DEGRADADORA


Procedimiento:
-

Poner a germinar unos granos de maz durante algunos das (hasta que tengan
raicillas).

Preparar una solucin de almidn 1%.

Hervir un grano de maz durante 5 minutos.

Tomar tres tubos de ensayo y colocar:

TUBO
1
2
3

3 mL de solucin de almidn + grano de maz hervido trozado


3 mL de solucin de almidn + grano de maz germinado trozado
3 mL de solucin de almidn + grano de maz sin germinar trozado
-

Agregar a cada tubo 3 gotas de reactivo de lugol y guardar los tubos en un sitio oscuro.

Observar el aspecto de los tubos cada 5 minutos y registrar las diferencias de color y
justificar.

PARTE E. ENZIMAS EN EL JABN PARA LAVAR LA ROPA


E1: Gelatina
Proteasas Tcnica:
-

Preparar gelatina como indica el fabricante. Dejar que solidifique.

Tomar una porcin de la misma y agregar 10 mL de agua.

Agregar 5g de jabn en polvo.

Incubar 1 hora a temperatura ambiente.

E2: Postre
Amilasas Tcnica:
-

Tomar una porcin de aproximadamente 50 g de un postre.

Agregar una cucharada de jabn en polvo.

Mezclar muy bien e incubar unas horas a temperatura ambiente.

QUMICA BIOLGICA GUA DE TRABAJOS PRCTICOS 2009

21

PARTE F. INHIBICIN ENZIMTICA


Introduccin:
Los vegetales contienen compuestos fenlicos tales como el aminocido tirosina. Estos fenoles
pueden transformarse en catecoles por accin de la enzima fenol hidroxilasa, en presencia de
O2. A su vez, los catecoles pueden oxidarse por accin de otra enzima, la polifenol oxidasa, a
orto quinonas. Por su parte, estas ltimas polimerizan y dan lugar a compuestos de color
oscuro llamados melaninas. Ambas enzimas utilizan al Cu2+ como cofactor.
FENOL CATECOL ORTO QUINONA MELANINAS
L-Tyr

L-Dopa

Dopaquinona

1) Manzana Tcnica:
-

Pelar una manzana y cortar 7 fetas.

Tomar 2 fetas y colocarlas: una en estufa a 37C y la otra en heladera a 4C.

Tomar 2 fetas y rociarlas con jugo de limn. Colocar una muestra en estufa a 37C y la
otra en heladera a 4C.

Tomar 2 fetas y rociarlas con cido actico al 5% (vinagre). Colocar una muestra en
estufa a 37C y la otra en heladera a 4C.

Tomar una feta y calentarla a 100C durante 5 minutos. Luego colocar en estufa a
37C.

2) Banana Tcnica:
-

Pelar una banana y cortar 7 fetas.

Tomar 2 fetas y colocarlas: una en estufa a 37C y la otra en heladera a 4C.

Tomar 2 fetas y rociarlas con jugo de limn. Colocar una muestra en estufa a 37C y la
otra en heladera a 4C.

Tomar 2 fetas y rociarlas con cido actico al 5% (vinagre). Colocar una muestra en
estufa a 37C y la otra en heladera a 4C.

Tomar una feta y calentarla a 100C durante 5 minutos. Luego colocar en estufa a
37C.

Fruta

4C

37C

Limn

Limn

Vinagre

Vinagre

Hervida

4C

37C

4C

37C

37C

Manzana

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22

Banana

PARTE G. ENZIMAS PRESENTES EN MICROORGANISMOS


1) Catalasa Tcnica:
-

Tomar con un palillo una colonia de Staphylococcus aureus y depositarla en un


portaobjetos.

Realizar lo mismo con una colonia de Escherichia coli, depositndola en el


mismo portaobjetos.

Agregar a cada una de las colonias una gota de H 2O2. Observar.

2) Oxidasa: prueba utilizada para la deteccin de la enzima citocromo-c-oxidasa,


presente en los gneros Pseudomonas, Neisseria, Moraxella, Vibrio, Aeromonas, entre
otros.
Tcnica:
-

Sobre un portaobjetos colocar un disco de oxidasa y humedecer con una gota


de agua. Observar el color inicial.

Luego colocar una colonia de Pseudomonas aeruginosa tomada de una placa


de petri con un palillo. Observar el color.

IMPORTANTE:

LOS

DESCARTARSE

EN

PALILLOS
UN

FRASCO

PORTAOBJETOS

CONTENIENDO

DEBERN

SOLUCIN

DE

HIPOCLORITO DE SODIO.

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TRABAJO PRCTICO N 8
FERMENTACIN ALCOHLICA
Introduccin:
La sidra es una bebida elaborada y consumida desde hace cientos de aos. Se obtiene a partir
de un jugo de manzana azucarado, el cual es fermentado por una levadura, Saccaromyces
cereviaciae. Este microorganismo fermenta los azcares presentes en el jugo de manzana y
otros agregados artificialmente y como productos se obtiene etanol y CO 2. Es por esto que las
levaduras realizan fermentacin alcohlica.
Objetivos:
-

Fabricar sidra a partir de un jugo de manzana en presencia de levaduras.

Evaluar las mejores condiciones para la obtencin de sidra, en funcin de la cantida de


alcohol producido.

Tcnica:
-

Medir 250 mL de jugo de manzana y colocarlo en una botella.

Pesar 1 g de levadura de cerveza y colocarlo en la botella.

Agregar un sobrecito de azcar (6 g).

Cerrar la botella e incubar durante 5 das a 25 C.

Otros grupos de trabajo debern seguir el presente esquema:

Grupo

Temperatura de

Tiempo de

Jugo de

Azcar

Levaduras

1
2
3
4
5

incubacin (C)
28
37
4
28
28

incubacin (das)
5
2
7
5
5

manzana
S
S
S
S
S

S
S
S
No
No

S
S
S
S
S

Determinacin de la graduacin alcohlica:


Este mtodo consiste en determinar el ndice de refraccin del destilado alcohlico mediante el
uso del refractmetro de Abbe y posterior transformacin a Gay Lussac mediante el uso de
tablas. Tambin se puede determinar el grado alcohlico mediante el uso de aremetros
graduados en grados y dcimas de grados Gay Lussac.
Tcnica:
-

Medir 200 mL de sidra en matraz aforado previamente enjuagado con la muestra.

Verter el contenido del matraz en un tubo Kjeldahl, lavando el matraz con pequeas
porciones de agua destilada.

Neutralizar con NaOH 30% verificando con papel de pH.

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24

Destilar hasta recoger 150 mL, sobre 5 mL de agua destilada. Llevar a volumen final de
200 mL. Homogeneizar perfectamente.

Refractometra:
-

Cargar el refractmetro con unas gotas del destilado.

Leer el ndice de refraccin.

Transformar el parmetro en Gay Lussac.

Anexo I: Cdigo Alimentario Argentino.


Artculo 1085. - (Res Conj. SPRyRS y SAGPyA 87 y 566/04)
Sidra Base es la bebida que resulta exclusivamente de la fermentacin alcohlica normal del
jugo recin obtenido de manzanas sanas y limpias, de uso industrial, con o sin la adicin de
hasta un 10% de jugo de peras obtenido en idnticas condiciones que el jugo de manzana y
fermentado en forma conjunta o separada. Su graduacin alcohlica mnima ser de 4,5% en
Vol. 0,3 a 20C."
Artculo 1085 bis (Res Conj. SPRyRS y SAGPyA 87 y 566/04)
Sidra es la sidra base, endulzada y gasificada. Su graduacin alcohlica mnima ser de 4,0%
en Vol. 0,3 a 20C.
Anexo II: tabla de conversin de ndice de refraccin a % v/v de alcohol.
n

% v/v

% v/v

% v/v

1,3333
1,3336
1,3339
1,3342
1,3345
1,3348
1,3351
1,3354
1,3357
1,3360
1,3364
1,3367
1,3370
1,3374
1,3377

alcohol
0,7
1,5
2,3
3,0
3,7
4,5
5,2
5,9
6,7
7,4
8,1
8,8
9,5
10,2
11,0

1,3381
1,3384
1,3388
1,3392
1,3395
1,3403
1,3410
1,3417
1,3425
1,3432
1,3440
1,3447
1,3455
1,3462
1,3469

alcohol
11,7
12,4
13,1
13,8
14,5
15,9
17,3
18,7
20,0
21,4
22,8
24,2
25,5
26,9
28,2

1,3484
1,3498
1,3511
1,3524
1,3535
1,3546
1,3557
1,3566
1,3575
1,3583
1,3590
1,3598
1,3604
1,3610
1,3616

alcohol
31,0
33,7
36,4
39,1
41,8
44,5
47,2
49,9
52,6
55,3
57,9
60,6
63,2
65,9
68,5

% v/v

1,3621
1,3626
1,3630
1,3634
1,3638
1,3641
1,3644
1,3647
1,3650
1,3652
1,3654
1,3655
1,3657

alcohol
71,0
73,6
76,1
78,7
81,2
83,6
86,1
88,5
90,9
93,3
95,7
98,0
100,3

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25

TRABAJO PRCTICO N 9
FERMENTACIN LCTICA
Introduccin:
El yogur es un producto lcteo obtenido mediante la fermentacin bacteriana de la leche. Si
bien se puede emplear cualquier tipo de leche, la produccin actual usa predominantemente
leche de vaca. La fermentacin de la lactosa (el azcar de la leche) en cido lctico es lo que
da al yogur su textura y sabor tan distintivo. A menudo se le aade fruta, vainilla, chocolate y
otros saborizantes, pero tambin puede elaborarse sin aadidos. Las bacterias lcticas que se
deben utilizar segn el Cdigo Alimentario Argentino son: Lactobacillus delbrueckii subsp.
bulgaricus y Streptococcus salivarius subsp. termophilus.
Tcnica:
-

Tomar una pequea muestra de yogur comercial y realizar un extendido para


coloracin de Gram.

Medir 100 mL de leche fluida y calentar a 80C durante 10 minutos. Este proceso se
denomina tyndalizacin.

Enfriar la leche a 37C.

Agregar 4 g de leche en polvo.

Agregar 6 g de azcar y 10 g de yogur.

Incubar a 44C durante 3-4 horas.

Determinaciones de acidez:
-

Tomar 10 mL de leche, agregar 2-3 gotas de fenolftalena y titular con NaOH 0,1 N
hasta coloracin rosada plida que se mantenga ms de 30 segundos.

Tomar 10 mL de leche + 0.4 g de leche en polvo y proceder de igual forma.

Tomar 10 mL de yogur comercial y proceder de igual forma.

Una vez que se puso a incubar la leche, se deben tomar 10 mL de muestra cada 30
minutos y proceder de igual forma.

Clculo: V x N)NaOH = mEq cido lctico


PEq cido lctico = 90.08
1 Dornic = 0.01 % p/v cido lctico
Microscopa:
Realizar sobre el extendido preparado una tincin de Gram. Los pasos son:

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26

Fijar por
calor

Lavar c/ H2O

Temp.
Incubacin

Violeta de
genciana
2
Safranina
1

Leche
fluida

Leche
f+p

Lugol
1

Lavar c/ H2O

Lavar c/ H2O

Decolorante

Yogur

M1

M2

M3

M4

M5

4C
28C
37C
44C

Nota: expresar los valores de acidez en Dornic.


En total, la divisin deber traer para la realizacin del TP:
2 litros de leche.
100 gramos de leche en polvo.
100 gramos de azcar.
2 yogures de 200 mL enteros, firmes de vainilla o sabor natural.

Anexo I: Cdigo Alimentario Argentino.


Artculo 576 - (Res Conj. SPyRS y SAGPA N 33/2006 y N 563/2006)
Se entiende por Yogur o Yoghurt o Iogurte, en adelante Yogur, el producto incluido en la
definicin 1) cuya fermentacin se realiza con cultivos protosimbiticos de Lactobacillus
delbrueckii subsp. bulgaricus y Streptococcus salivarius subsp. thermophilus a los que en forma
complementaria pueden acompaar otras bacterias acidolcticas que, por su actividad,
contribuyen a la determinacin de las caractersticas del producto terminado.

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TRABAJO PRCTICO N 10
IDENTIFICACIN BIOQUMICA DE ESCHERICHIA COLI
Introduccin:
Las pruebas bioqumicas son muy importantes para la clasificacin bacteriana. Estas pruebas
se basan en diferentes reacciones qumicas que se realizan con el fin de clasificar las
bacterias. A pesar de su microscpico tamao, las bacterias poseen una maquinaria metablica
importante. Las pruebas bioqumicas permitirn diferenciar diferentes bacterias en funcin de
las diferencias metablicas entre ellas.
Tcnica:
-

Se parte del cultivo realizado en gar EMB de Levine, tomando como colonia
sospechosa la que tenga un fondo negro y presente brillo verde metlico caracterstico.

Tomar con un ansa una colonia sospechosa y sembrar en una placa de gar nutritivo.
(OBTENCIN DEL CULTIVO PURO).

Incubar 24-48 horas a 37 C.

A continuacin se proceder a sembrar las diferentes pruebas bioqumicas:

1. Indol:

Principio: El indol es uno de los productos de degradacin metablica del triptofano.


Las bacterias que poseen la enzima triptofanasa son capaces de hidrolizar y deaminar
el triptofano con produccin de indol, piruvato y amonaco. La prueba de indol est
basada en la formacin de un complejo color rojo cuando el indol reacciona con el
grupo aldehdo del p-dimetilaminobenzaldehdo. Este es el principio activo del reactivo
de Kovac. Se debe utilizar un medio rico en triptofano.

Tcnica:

Realizar una nica puncin en el centro del tubo de medio SIM, utilizando ansa recta.

Incubar 24 horas a 37 C.

Transcurrido dicho lapso agregar 5 gotas de reactivo de Kovacs. Indol +: desarrollo de


color rojo fucsia vivo en la interfase luego de agregar el reactivo.

2. Rojo de metilo:

Principio: La prueba del rojo de metilo es cuantitativa para la produccin de cido y


requiere microorganismos positivos que produzcan cidos fuertes (lctico, actico,
frmico) a partir de glucosa, por la va de la fermentacin cida mixta.

Tcnica:

Inocular en un caldo RMVP con un cultivo puro del microorganismo en estudio.

Incubar 48-72 horas a 37 C.

Transcurrido dicho lapso, agregar 5 gotas de rojo de metilo. RM +: desarrollo de un


color rojo estable en la superficie del medio.

3. Prueba de Voges Proskauer:

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28

Principio: El piruvato, componente fundamental formado en la degradacin


fermentativa de la glucosa, es metabolizado luego a travs de varias vas, de acuerdo
con los sistemas enzimticos que poseen las diferentes bacterias. Una de dichas vas
lleva a la produccin de acetona (acetilmetilcarbinol), un subproducto de reaccin
neutra. En presencia de oxgeno atmosfrico y de hidrxido de potasio al 40%, la
acetona se convierte en diacetilo y el -naftol acta como catalizador para revelar un
complejo color rojo.

Tcnica:

Inocular en un caldo RMVP con un cultivo puro del microorganismo en estudio.

Incubar 24 horas a 37 C.

Transcurrido dicho lapso, agregar 0,6 mL de -naftol al 5% y 0,2 mL de KOH al 40%.


VP +: desarrollo de un color rojo estable en la superficie del medio.

4. Citrato:

Principio: La utilizacin de citrato por una bacteria se detecta en un medio con citrato
mediante la formacin de subproductos alcalinos. El medio incluye citrato de sodio, un
anin, como nica fuente de carbono y fosfato de amonio como nica fuente de
nitrgeno. Las bacterias que pueden utilizar citrato tambin pueden extraer nitrgeno
de la sal de amonio, con produccin de amonaco (NH 3), llevando a la alcalinizacin del
medio.

Tcnica:

Inocular en un caldo citrato de Koser con azul de bromotimol con un cultivo puro del
microorganismo en estudio.

Incubar 24-48 horas a 37 C.


Transcurrido dicho lapso observar el color del tubo. Citrato +: coloracin azul por
alcalinizacin del medio.

Resultados:
Sulfuro

Indol

Motilidad

RM

VP

Citrato

E. coli
Incgnita
Composicin de los medios de cultivo utilizados:
SIM Medio:
Instrucciones

Frmula (en gramos por litro)

Triptena

20.0

Peptona

6.1

Sulfato de hierro y amonio

0.2

Tiosulfato de sodio

0.2

Suspender 30 g del polvo por litro de agua destilada.


Mezclar hasta disolver; calentar agitando y hervir
durante un minuto. Distribuir unos 4 ml en tubos de
hemlisis y esterilizar en autoclave a 121C durante
15 minutos. Solidificar en posicin vertical.

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29

Agar

3.5
pH final: 7.3 0.2

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30

MR-VP Medio:
Frmula (en gramos por litro)

Instrucciones

Pluripeptona

7.0

Glucosa

5.0

Fosfato dipotsico

5.0

Suspender 17 g del polvo por litro de agua destilada.


Calentar suavemente agitando hasta disolver.
Distribuir y esterilizar en autoclave a 118-121C
durante 15 minutos.

pH final: 6.9 0.2

Simmons Citrato Agar:


Instrucciones

Frmula (en gramos por litro)

Citrato de sodio

2.0

Cloruro de sodio

5.0

Fosfato dipotsico

1.0

Fosfato monoamnico

1.0

Sulfato de magnesio

0.2

Azul de bromotimol

0.08

Agar

15.0

Suspender 24,2 g del medio deshidratado por litro de


agua destilada. Dejar reposar 5 minutos y mezclar
calentando a ebullicin durante 1 o 2 minutos.
Distribuir en tubos y esterilizar en autoclave a 121C
durante 15 minutos. Enfriar en posicin inclinada.

pH final: 6.9 0.2

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TRABAJO PRCTICO N 11
ANLISIS DE ORINA COMPLETA
IMPORTANTE: EL ANLISIS DE ORINA COMPLETA SE DEBE REALIZAR CON LA
PRIMERA ORINA DE LA MAANA
Objetivo: realizar el anlisis fisicoqumico y microscpico de la orina.

PARTE A: ANLISIS FISICOQUMICO


Procedimiento:
-

Introducir la tira reactiva en el frasco de modo que se moje completamente con la


muestra de orina.

Leer los parmetros medidos en los tiempos indicados.

PARTE B. ANLISIS MICROSCPICO


Procedimiento:
-

Cargar cuidadosamente un tubo cnico para centrfuga con la muestra de orina.

Introducir los tubos en la centrfuga de

modo de que queden equilibrados (muy

importante).
-

Encender el aparato y centrifugar las orinas durante 15 minutos a 2500-3000 rpm.

Descartar el sobrenadante dejando unas gotas de lquido.

Sobre un portaobjetos, volcar el contenido del tubo previamente homogeneizado y


cubrir con cubreobjetos.

Mirar en el microscopio a 400x y 1000x.

PARMETRO
Color
Aspecto
Densidad
pH
Protenas
Glucosa

VALOR

PARMETRO
Bilirrubina
Urobilingeno
Leucocitos
Hemoglobina
Nitritos
Acetona

VALOR

EXAMEN MICROSCPICO DEL SEDIMENTO


Clulas:

Leucocitos:

Piocitos:

Hemates:

Cristales:

Cilindros:

Filamentos mucosos:

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32

Cristales:

Clulas:

QUMICA BIOLGICA GUA DE TRABAJOS PRCTICOS 2009

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