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GUA DE TRABAJOS
PRCTICOS
5 QUMICA 2009
Profesor: Lautaro Kremenchuzky
TRABAJO PRCTICO N 0
SEGURIDAD EN EL LABORATORIO
BIOSEGURIDAD
Se denomina as al conjunto de operaciones y medidas de autoproteccin que se deben
adoptar para evitar tomar contacto con materiales txicos y/o infecciosos que puedan daar la
integridad fsica.
Toda medida de autoproteccin debe constituir una conducta natural del personal de
laboratorio, ya que realizar tareas en el mismo implica exponerse a innumerables riesgos que
pueden ser prevenidos.
Existe una gran diversidad de elementos y equipos de autoproteccin, como pueden ser:
Guantes de ltex
Guardapolvo
Antiparras
Mascarillas
Tambin deben cumplirse pautas de seguridad, que, al igual que los elementos de
bioseguridad, sirven para el resguardo personal.
FUEGO
El fuego es una reaccin qumica, una oxidacin. Para que se produzca, resulta necesario el
ntimo contacto de tres componentes, lo que constituye el Tringulo del Fuego.
Combustible - Calor Comburente (Oxgeno).
CALOR
COMBUSTIBLE
COMBURENTE
COMBURENTE
Si se eliminan cualquiera de estos componentes, ser suficiente, para que el fuego no se inicie.
A travs de experiencias y estudios posteriores se ha descubierto un cuarto factor: La Reaccin
Qumica ante el Frente de Llama o Reaccin en Cadena; este cuarto factor no resta validez al
proceso de iniciacin del fuego, en cambio, es importante en el momento de seleccionar
mtodos para la extincin de un fuego ya declarado.
TIPOS DE FUEGO
CLASE A
CLASE B
CLASE C
CLASE D
TIPO DE EXTINTORES
TIPO A
TIPO B
TIPO C
TIPO D
Matafuegos de Agua
Matafuegos de Polvo Qumico Seco/ de Espuma
Matafuegos de Dixido de Carbono
Matafuegos Polvo Qumico Seco Presurizado
QUEMADURAS
Conjunto de lesiones determinadas por la accin de agentes fsicos, qumicos o biolgicos que
dan lugar a una serie de reacciones locales y generales como consecuencia de alteraciones
trmicas, cuya gravedad guarda relacin con su extensin, ubicacin y profundidad.
La piel de todos los animales homeotermos (de sangre caliente) es el mayor rgano del cuerpo
y tiene varias capas a saber:
La ms interna se denomina HIPODERMIS (tejido subcutneo) y por esta corren los vasos
sanguneos de mayor calibre. Esta ltima capa se encuentra en contacto por debajo con
los rganos internos.
a causa de la
QUEMADURAS
QUMICAS
Existen muchos productos qumicos que pueden provocar quemaduras. Lo que diferencia a
stas quemaduras de las trmicas es que el producto involucrado, al absorberse por la piel
causa adems fallas en los rganos internos.
inhalados provocan lesiones en las vas areas que pueden desencadenar en la obstruccin de
las vas areas o en el paro no obstructivo de la mecnica respiratoria.
IMPORTANTE
LOS
CONCENTRADOS.
INTOXICACIONES
GENERALIDADES
DEFINICIN Y CONCEPTOS RELACIONADOS
Intoxicacin es el ingreso al cuerpo de toda sustancia que por sus caractersticas qumicas o
biolgicas puede comprometer seriamente la integridad del organismo o provocar la muerte de
la persona afectada; tambin se puede definir como el conjunto de manifestaciones producidas
por las reacciones nocivas de esta sustancia y capaces de exteriorizarse como enfermedad.
Un frmaco o droga es una sustancia que puede modificar una o ms funciones del organismo
una vez introducido en l; un txico es toda aquella sustancia, incluidos los frmacos, que
pueden producir un dao en el organismo y un veneno es un txico muy potente, aunque se
utiliza como sinnimo de txico.
Sin embargo se debe tener en cuenta que "la dosis hace al veneno", con lo cul los trminos
descriptos anteriormente no son absolutos, sino que depende de que dosis se trate, se incluirn
en uno u otro concepto.
Por ltimo, se indica genricamente como antdoto a toda aquella sustancia que, por distintos
mecanismos y vas, puede prevenir o limitar la absorcin de sustancias txicas, como as
tambin su efecto perjudicial sobre el organismo. Cabe destacar que los antdotos tienen una
accin muy especfica con lo que su uso es casi exclusivamente intra hospitalario, ya que una
errnea prescripcin puede ser contraproducente.
NUNCA
IDENTIFICACIN DE SUSTANCIAS
MODELOS DE ETIQUETAS
DE
QUMICAS
RIESGO
(
(Clase
1)SustanciasClase
explosivas
2)Gases
inflamables
(
(Clase
3)
Lquido(Clase
4)
Sustancias(Clase
inflamable
slidas inflamables
(Clase 5) Comburente
(Clase
5)
orgnico
4)
combustin espontnea
Perxido(Clase
6)
6)
infecciosas
Sustancias(Clase
venenosas
6)
Sustancias
nocivas
(
Clase
Sustancias(Clase
7)
radiactivas
SustanciasClase
8)
corrosivas
TRABAJO PRCTICO N 1
EXTRACTO SECO
Materiales:
Trpode
Tela metlica
Mechero
Mortero
Cuchillo
Balanza
Cristalizador
Procedimiento:
-
TRABAJO PRCTICO N 2
SMOSIS
Materiales y reactivos:
Sal de mesa
Huevos crudos
Vasos de precipitados
Procedimiento:
-
Sumergir los huevos en la solucin de HCl 1:1 para extraer la cscara sin daar el
resto. Dejar actuar hasta que se desprenda la cscara.
Una vez que queda la membrana sin cscara, colocar un huevo en un vaso que
contenga agua destilada de manera que lo cubra totalmente.
TRABAJO PRCTICO N 3
DILISIS
Objetivo: separar una solucin de NaCl y otra de almidn a travs de una dilisis.
Materiales y reactivos:
Membrana de dilisis
Agitador magntico
Solucin de NaCl
Solucin de almidn
Solucin de lugol
Solucin de AgNO3
Agua destilada
Procedimiento:
o
Colocar 2 porciones del agua del vaso en dos tubos y ensayar con AgNO 3 y lugol.
Registrar.
Colocar 2 porciones del agua del vaso en dos tubos y ensayar con AgNO 3 y lugol.
Registrar.
Observaciones:
Pre dilisis
Control previo:
NaCl + AgNO3:
Almidn + lugol:
Post dilisis
Tubo + AgNO3
Tubo + lugol
10
TRABAJO PRCTICO N 4
HIDRATOS DE CARBONO
PARTE A. REACCIONES DE RECONOCIMIENTO
1. Azcares reductores
Reactivos:
- NaOH 10%.
- CuSO4 1%.
- Azcares 1%: sacarosa, almidn, xilosa, lactosa.
Mtodo:
En un tubo de ensayo se vierten 2 ml de la solucin de azcar e igual volumen de NaOH 10%.
Luego de agitar, se agregan 10 gotas de la solucin de CuSO 4. Se calienta a ebullicin, siendo
la reaccin positiva cuando se observa la aparicin de un precipitado amarillo (CuOH) y luego
rojo (Cu2O).
2. Prueba de Molisch:
El cido sulfrico concentrado hidroliza enlaces glicosdicos para dar monosacridos que
pueden ser luego deshidratados dando furfural y sus derivados. Estos productos se combinan
luego con a-naftol sulfonato originando un complejo prpura. Esta reaccin es general para los
hidratos de carbono pero algunos otros compuestos orgnicos dan tambin furfural con cido
sulfrico concentrado.
Reactivos:
- H2SO4 (c).
- -naftol (50 g/l en etanol, preparar fresco).
- Azcares 1%: lactosa, glucosa, arabinosa, fructosa.
Mtodo:
Agregue dos gotas de la solucin de -naftol a 2 ml de la sustancia problema. Aada
cuidadosamente por las paredes del tubo aproximadamente 1 ml de H 2SO4 (c) hasta que se
formen dos capas. Observe cuidadosamente cualquier cambio de color en la interfase de los
dos lquidos.
3. Prueba de Benedict:
Reactivos:
- Reactivo de Benedict. Disuelva 173 g de citrato de sodio y 100 g de carbonato de sodio en
aproximadamente 800 ml de agua caliente. Filtre a travs de papel de filtro en una probeta de
11
1000 ml y complete con agua hasta 850 ml. Mientras tanto, disuelva 17,3 g de sulfato de cobre
en aproximadamente 100 ml de agua y complete hasta 150 ml. Vierta la primera solucin en un
vaso de precipitados de 2 litros y aada lentamente la solucin de sulfato de cobre agitando
continuamente.
- Azcares 1%: sacarosa, almidn, maltosa, galactosa.
Mtodo:
Agregue cinco gotas de la solucin problema a 2 ml del reactivo de Benedict y coloque en un
bao de agua hirviendo por 5 minutos.
4. Prueba de Bial para las pentosas:
Cuando se calientan pentosas con HCl (c) se forma furfural que se condensa con orcinol en
presencia de iones frricos para dar un color verde azul. La reaccin no es absolutamente
especfica para las pentosas, ya que el calentamiento prolongado de algunas hexosas produce
hidroximetil furfural que tambin reacciona con orcinol dando complejos coloreados.
Reactivos:
- Reactivo de Bial. Disuelva 1,5 g de orcinol en 500 mL de HCl (c) y aada 20 gotas de solucin
de FeCl3 100 g/L.
- Alcohol amlico.
- Azcares 1%: fructosa, arabinosa, xilosa.
Mtodo:
En un tubo de ensayo agregue aproximadamente 1 mL de la muestra a 2,5 mL de reactivo y
caliente hasta que empiece a hervir. La aparicin de una coloracin azul verdosa indica
resultados positivos. Enfre el tubo, luego agregue 2 3 mL de alcohol amlico y agite.
5. Prueba de Seliwanoff para las cetosas:
Las cetosas se deshidratan ms rpidamente que las aldosas dando derivados de furfural que
se condensan con resorcinol para formar un complejo rojo; por lo tanto, debe evitarse un
calentamiento prolongado de la muestra que se esta estudiando.
Reactivos:
- Reactivo de Seliwanoff: (Resorcinol 0,5 g/l en HCl 3 M).
- Azcares 1%: fructosa, sacarosa, lactosa.
Mtodo:
A 2 ml del reactivo de Seliwanoff agregue dos gotas de solucin de carbohidrato y caliente
durante 1 minuto en un bao de agua hirviendo. Observe la aparicin de un color rojo intenso.
12
Tocando con el capilar depositar una pequea gota de lquido sobre una de las
marcas numeradas de la placa, cuidando que el dimetro de las manchas no supere
los 4-5 mm. (Practicar antes con un papel de filtro). Secar con secador de pelo.
13
4) Corrida cromatogrfica:
-
Introducir la placa en la cuba rpidamente de modo que queden las siembras del lado
de la fase mvil.
14
TRABAJO PRCTICO N 5
LPIDOS
1. REACCIN CON EL SUDAN III
Reactivos:
-
Sudn lll. Disolucin al 0,2%: a 200 mg de Sudn lll se aaden a 100 ml de etanol 70%
calentado en un bao Mara, se mezcla y se deja en reposo durante 24 hs por lo
menos.
Aceite vegetal.
Manteca.
Margarina.
Agua destilada.
Mtodo:
Sobre un vidrio de reloj se aplica una gota de aceite, se aade una gota de Sudn lll y se
mezcla. Se observa la aparicin de una coloracin naranja de la mezcla
15
HCl (c) hasta que la solucin sea ligeramente cida y remueva la capa de cidos grasos que
aparece sobre la superficie del lquido. Caliente el cido graso con agua y agregue lcali
lentamente hasta que se obtenga una solucin clara; utilice esta solucin en los ensayos para
la formacin del jabn.
a. Acidifique con HCl. Qu observa?
b. Sature la solucin con NaCl y observe la aparicin del jabn de sodio.
16
TRABAJO PRCTICO N 6
PROTENAS
Objetivo: extraer protenas a partir de alimentos y realizar reconocimiento.
PARTE A. HARINA
Procedimiento:
Tomar el lienzo por las puntas, encerrando la harina y mojarlo con agua de la canilla
para arrastrar el almidn contenido en la harina.
Abrir la bolsita y juntar el residuo de gluten (protena) con ayuda de una esptula.
PARTE B. GELATINA
Procedimiento:
Dejar enfriar.
PARTE C. HUEVO
Procedimiento:
Tela de algodn.
Harina de trigo.
Tubos de ensayo.
17
Varilla de vidrio.
Huevo.
Solucin de biuret.
Observaciones:
Alimento
Harina
Gelatina
Clara de huevo
Agua
Protena principal
18
Alimento
Huevo
Leche nueva
Leche vieja
Protena
HCl
Alcohol
NaOH
Calor
Cuba cromatogrfica.
Tubos capilares.
Papel de filtro.
Embudo.
Erlenmeyer.
Varillas de vidrio.
Procedimiento:
-
Siempre que se trabaje con aminocidos hay que evitar tocar con los dedos la
superficie de las placas o del papel, puesto que la transpiracin contiene aminocidos.
19
TRABAJO PRCTICO N 7
CATALIZADORES
PARTE
A.
DESCOMPOSICIN
DE
H2O2
CON
CATALIZADOR
INORGNICO
Procedimiento:
-
H2O2
H2O
PARTE
B.
DESCOMPOSICIN
DE
H2O2
CON
CATALIZADOR
PAPA CRUDA
PAPA HERVIDA
TUBO
20
1
2
3
TUBO
1
2
3
Solucin reguladora pH 7:
50 mL de KH2PO4 0.1 M (13 g/L) + 29 mL de NaOH 0.1 M
Poner a germinar unos granos de maz durante algunos das (hasta que tengan
raicillas).
TUBO
1
2
3
Agregar a cada tubo 3 gotas de reactivo de lugol y guardar los tubos en un sitio oscuro.
Observar el aspecto de los tubos cada 5 minutos y registrar las diferencias de color y
justificar.
E2: Postre
Amilasas Tcnica:
-
21
L-Dopa
Dopaquinona
1) Manzana Tcnica:
-
Tomar 2 fetas y rociarlas con jugo de limn. Colocar una muestra en estufa a 37C y la
otra en heladera a 4C.
Tomar 2 fetas y rociarlas con cido actico al 5% (vinagre). Colocar una muestra en
estufa a 37C y la otra en heladera a 4C.
Tomar una feta y calentarla a 100C durante 5 minutos. Luego colocar en estufa a
37C.
2) Banana Tcnica:
-
Tomar 2 fetas y rociarlas con jugo de limn. Colocar una muestra en estufa a 37C y la
otra en heladera a 4C.
Tomar 2 fetas y rociarlas con cido actico al 5% (vinagre). Colocar una muestra en
estufa a 37C y la otra en heladera a 4C.
Tomar una feta y calentarla a 100C durante 5 minutos. Luego colocar en estufa a
37C.
Fruta
4C
37C
Limn
Limn
Vinagre
Vinagre
Hervida
4C
37C
4C
37C
37C
Manzana
22
Banana
IMPORTANTE:
LOS
DESCARTARSE
EN
PALILLOS
UN
FRASCO
PORTAOBJETOS
CONTENIENDO
DEBERN
SOLUCIN
DE
HIPOCLORITO DE SODIO.
23
TRABAJO PRCTICO N 8
FERMENTACIN ALCOHLICA
Introduccin:
La sidra es una bebida elaborada y consumida desde hace cientos de aos. Se obtiene a partir
de un jugo de manzana azucarado, el cual es fermentado por una levadura, Saccaromyces
cereviaciae. Este microorganismo fermenta los azcares presentes en el jugo de manzana y
otros agregados artificialmente y como productos se obtiene etanol y CO 2. Es por esto que las
levaduras realizan fermentacin alcohlica.
Objetivos:
-
Tcnica:
-
Grupo
Temperatura de
Tiempo de
Jugo de
Azcar
Levaduras
1
2
3
4
5
incubacin (C)
28
37
4
28
28
incubacin (das)
5
2
7
5
5
manzana
S
S
S
S
S
S
S
S
No
No
S
S
S
S
S
Verter el contenido del matraz en un tubo Kjeldahl, lavando el matraz con pequeas
porciones de agua destilada.
24
Destilar hasta recoger 150 mL, sobre 5 mL de agua destilada. Llevar a volumen final de
200 mL. Homogeneizar perfectamente.
Refractometra:
-
% v/v
% v/v
% v/v
1,3333
1,3336
1,3339
1,3342
1,3345
1,3348
1,3351
1,3354
1,3357
1,3360
1,3364
1,3367
1,3370
1,3374
1,3377
alcohol
0,7
1,5
2,3
3,0
3,7
4,5
5,2
5,9
6,7
7,4
8,1
8,8
9,5
10,2
11,0
1,3381
1,3384
1,3388
1,3392
1,3395
1,3403
1,3410
1,3417
1,3425
1,3432
1,3440
1,3447
1,3455
1,3462
1,3469
alcohol
11,7
12,4
13,1
13,8
14,5
15,9
17,3
18,7
20,0
21,4
22,8
24,2
25,5
26,9
28,2
1,3484
1,3498
1,3511
1,3524
1,3535
1,3546
1,3557
1,3566
1,3575
1,3583
1,3590
1,3598
1,3604
1,3610
1,3616
alcohol
31,0
33,7
36,4
39,1
41,8
44,5
47,2
49,9
52,6
55,3
57,9
60,6
63,2
65,9
68,5
% v/v
1,3621
1,3626
1,3630
1,3634
1,3638
1,3641
1,3644
1,3647
1,3650
1,3652
1,3654
1,3655
1,3657
alcohol
71,0
73,6
76,1
78,7
81,2
83,6
86,1
88,5
90,9
93,3
95,7
98,0
100,3
25
TRABAJO PRCTICO N 9
FERMENTACIN LCTICA
Introduccin:
El yogur es un producto lcteo obtenido mediante la fermentacin bacteriana de la leche. Si
bien se puede emplear cualquier tipo de leche, la produccin actual usa predominantemente
leche de vaca. La fermentacin de la lactosa (el azcar de la leche) en cido lctico es lo que
da al yogur su textura y sabor tan distintivo. A menudo se le aade fruta, vainilla, chocolate y
otros saborizantes, pero tambin puede elaborarse sin aadidos. Las bacterias lcticas que se
deben utilizar segn el Cdigo Alimentario Argentino son: Lactobacillus delbrueckii subsp.
bulgaricus y Streptococcus salivarius subsp. termophilus.
Tcnica:
-
Medir 100 mL de leche fluida y calentar a 80C durante 10 minutos. Este proceso se
denomina tyndalizacin.
Determinaciones de acidez:
-
Tomar 10 mL de leche, agregar 2-3 gotas de fenolftalena y titular con NaOH 0,1 N
hasta coloracin rosada plida que se mantenga ms de 30 segundos.
Una vez que se puso a incubar la leche, se deben tomar 10 mL de muestra cada 30
minutos y proceder de igual forma.
26
Fijar por
calor
Lavar c/ H2O
Temp.
Incubacin
Violeta de
genciana
2
Safranina
1
Leche
fluida
Leche
f+p
Lugol
1
Lavar c/ H2O
Lavar c/ H2O
Decolorante
Yogur
M1
M2
M3
M4
M5
4C
28C
37C
44C
27
TRABAJO PRCTICO N 10
IDENTIFICACIN BIOQUMICA DE ESCHERICHIA COLI
Introduccin:
Las pruebas bioqumicas son muy importantes para la clasificacin bacteriana. Estas pruebas
se basan en diferentes reacciones qumicas que se realizan con el fin de clasificar las
bacterias. A pesar de su microscpico tamao, las bacterias poseen una maquinaria metablica
importante. Las pruebas bioqumicas permitirn diferenciar diferentes bacterias en funcin de
las diferencias metablicas entre ellas.
Tcnica:
-
Se parte del cultivo realizado en gar EMB de Levine, tomando como colonia
sospechosa la que tenga un fondo negro y presente brillo verde metlico caracterstico.
Tomar con un ansa una colonia sospechosa y sembrar en una placa de gar nutritivo.
(OBTENCIN DEL CULTIVO PURO).
1. Indol:
Tcnica:
Realizar una nica puncin en el centro del tubo de medio SIM, utilizando ansa recta.
Incubar 24 horas a 37 C.
2. Rojo de metilo:
Tcnica:
28
Tcnica:
Incubar 24 horas a 37 C.
4. Citrato:
Principio: La utilizacin de citrato por una bacteria se detecta en un medio con citrato
mediante la formacin de subproductos alcalinos. El medio incluye citrato de sodio, un
anin, como nica fuente de carbono y fosfato de amonio como nica fuente de
nitrgeno. Las bacterias que pueden utilizar citrato tambin pueden extraer nitrgeno
de la sal de amonio, con produccin de amonaco (NH 3), llevando a la alcalinizacin del
medio.
Tcnica:
Inocular en un caldo citrato de Koser con azul de bromotimol con un cultivo puro del
microorganismo en estudio.
Resultados:
Sulfuro
Indol
Motilidad
RM
VP
Citrato
E. coli
Incgnita
Composicin de los medios de cultivo utilizados:
SIM Medio:
Instrucciones
Triptena
20.0
Peptona
6.1
0.2
Tiosulfato de sodio
0.2
29
Agar
3.5
pH final: 7.3 0.2
30
MR-VP Medio:
Frmula (en gramos por litro)
Instrucciones
Pluripeptona
7.0
Glucosa
5.0
Fosfato dipotsico
5.0
Citrato de sodio
2.0
Cloruro de sodio
5.0
Fosfato dipotsico
1.0
Fosfato monoamnico
1.0
Sulfato de magnesio
0.2
Azul de bromotimol
0.08
Agar
15.0
31
TRABAJO PRCTICO N 11
ANLISIS DE ORINA COMPLETA
IMPORTANTE: EL ANLISIS DE ORINA COMPLETA SE DEBE REALIZAR CON LA
PRIMERA ORINA DE LA MAANA
Objetivo: realizar el anlisis fisicoqumico y microscpico de la orina.
importante).
-
PARMETRO
Color
Aspecto
Densidad
pH
Protenas
Glucosa
VALOR
PARMETRO
Bilirrubina
Urobilingeno
Leucocitos
Hemoglobina
Nitritos
Acetona
VALOR
Leucocitos:
Piocitos:
Hemates:
Cristales:
Cilindros:
Filamentos mucosos:
32
Cristales:
Clulas:
33