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POTABLE CURUMUY
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PROCEDIMIENTO
PARA
LA
DETERMINACIN DE
BACTERIAS
HETEROTROFAS POR EL MTODO DE
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1. OBJETIVO
Establecer el procedimiento para la cuantificacin de Bacterias hetertrofas por el mtodo de
filtro de membrana.
2. ALCANCE
Abarca desde la toma de la muestra, anlisis de la muestra, expresin de resultados
3. REFERENCIA
Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater
4. RESPONSABILIDAD
Los responsables de este procedimiento son:
4.1. Jefe de Control de Calidad
4.2. Tcnico de Control de Calidad.
4.3. Asistente de Control de Calidad
5. DEFINICIONES Y ABREVIATURAS
5.1. Bacterias hetertrofas
Las bacterias hetertrofas sobreviven como parsitos, creciendo dentro de otros organismos
y utilizando tanto los nutrientes como la maquinaria celular de la clula husped. Son las
que cierran el ciclo de la materia en los ecosistemas al degradar cualquier sustancia
orgnica a sus elementos inorgnicos originales. Bacterias que no puede sintetizar su propio
alimento, y tiene por tanto que alimentarse de otros seres vivos o de productos orgnicos.
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El analista que realiza sta operacin debe utilizar mandil, guantes, tapa boca y toca.
7. MONITOREO
El monitoreo lo realiza:
- El Jefe de Control de Calidad
- El Tcnico de Control de Calidad.
8. REGISTRO
Nombre del Registro
Responsable del
Control
Tiempo de
Conservacin
Disposicin Final
Cuaderno de Laboratorio
Jefe de Calidad
02 aos
Destruccin
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9. VERIFICACION
El Jefe de Calidad verificar el correcto llenado de los registros, evaluar los resultados y
tomara las acciones correctivas necesarias.
10. ANEXOS
Anexo N01: Tcnica de Toma de Muestra
Anexo N02: Tcnica de Preparacin de medios y material
Anexo N03: Tcnica de Determinacin de Bacterias hetertrofas por el mtodo de filtro de
membrana.
Anexo N 04 Tcnica del Recuento y Registro.
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Anexo N01:
Tcnica Toma de muestra
1. OBJETIVO
Recolectar correctamente la muestra a analizar
2. PRINCIPIO DEL METODO
La recoleccin de la muestra es un punto crtico en el procedimiento de la evaluacin de la
calidad de agua .La seleccin del punto de muestreo tendr como requisito principal que la
muestra sea representativa.
3. MATERIALES
Frasco de vidrio de 250 ml autoclavado por 15 min a 120 C con Tiosulfato de sodio al 1%.
Turunda de algodn
Mechero de alcohol
Alcohol
Pinza
4.
PROCEDIMIENTO
4.1 Recoleccin de la muestra en lnea (Agua tratada)
- Una vez retirados filtros u otros accesorios se proceder a una cuidadosa limpieza con
agua o alcohol.
- Con el grifo cerrado se flamear el extremo del mismo, mediante la llama obtenida con
un poco de algodn empapado de alcohol y sostenido con unas pinzas o bien una
lmpara de soldar.
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5. IDENTIFICACIN DE LA MUESTRA
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La muestra deber ser transportada al laboratorio lo antes posible, caso contrario se debe
mantener la muestra por debajo de 10C
7. RECOMENDACIONES
Se debe contar con guantes de ltex, cubre bocas, lentes de proteccin, mandil durante el
muestreo.
No beber ni comer alimentos durante el muestreo. No tocarse los ojos o boca sin haberse
lavado, desinfectado las manos.
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2.1.3 Recomendacin
Analice muestras del producto final para verificar su rendimiento usando cultivos de
control tpicos y estables.
2.2 Tiosulfato de Sodio al 1%
2.2.1 Preparacin de Tiosulfato de sodio al 1%
3. MATERIAL
3.1 Esterilizacin de frascos de vidrio para toma de muestra
Frascos de vidrio autoclavable, de boca ancha y con tapa rosca. Agregar 1 ml de Tiosulfato
de sodio al 1% por cada 100ml de muestra que se va a recolectar. Cubrir la tapa con papel
Kraft atarlo con el cordel. Autoclavar por 15 min a 121 C
3.2 Esterilizacin de placas Petri
Apilar 10 placas bien limpias y envolverlas con papel kraft y atarla con pavilo. Esterilizar
con aire caliente a 180C por 2 horas
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Anexo N03:
Tcnica de Determinacin de bacterias hetertrofas por el mtodo de filtro de membrana
1.1. OBJETIVO
Recuento de bacterias hetertrofas en agua por el mtodo de filtro de membrana
1.2. PRINCIPIO DEL METODO
La tcnica del filtro de membrana (FM) es altamente reproducible, puede utilizarse para estudiar
volmenes relativamente grandes de muestra y proporciona resultados numricos ms rpidos que
el mtodo de tubos mltiples .La tcnica del filtro de membrana es extraordinariamente til para
controlar las posibles situaciones de urgencia en relacin con el agua potable y para estudiar
distintas aguas naturales .
1.3. MATERIALES EQUIPOS Y REACTIVOS
EQUIPOS
Incubadora
Equipo de filtracin
MATERIALES
Mechero de Bunsen
Pipetas serolgicas
Placas Petri
Membranas pre esterilizadas de 0.45 um
Almohadillas absorbentes de 48 mm de dimetro
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1.4.3 Anlisis
Retirar el embudo y luego con una pinza estril retirar el filtro de membrana
Separar la parte superior del porta filtro y con una pinza cuyas extremidades sern
flameadas, retirar la membrana con cuidado para que la pinza toque apenas la parte
perifrica con cuidado de la misma , fuera del rea de filtracin. Acoplar
nuevamente la parte superior del porta filtro a la parte inferior
1.4.4 Incubacin
Microrganismo
Bacterias hetertroficas
Temperatura
35 +/- 0.5C
Tiempo de incubacin
48 horas
Lavar nuevamente el porta filtro con agua de dilucin estril y proceder a la prxima
filtracin.
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1.5. Recuento
Elegir placas con una densidad ptima de 20 a 200 colonias por filtro
Casos:
Si existen 1 a 2 colonias por cuadrado (contar todas las colonias)
Si existen 3 a 10 colonias por cuadrado, contar 10 cuadrados y obtener la media por cuadrado.
Si existen de 10 a 20 colonias por cuadrado. Comunicar el recuento como mayor a 2000 veces
el reciproco de la dilucin
1.6. INTERFERENCIAS
1.7. REFERENCIAS
Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater
1.8
RECOMENDACIONES
El analista deber usar guantes, mandil, tapa boca, toca
Antes de iniciar el examen, desinfectar la mesa de trabajo con hipoclorito de sodio
Los portafiltros deben estar estriles en el inicio de cada serie de filtraciones y estas series
no deben ser usados por ms de 30 muestras, si hubo un intervalo de 30 minutos entre una
filtracin y otra los porta filtros deben ser esterilizados nuevamente, para evitar
contaminacin accidental
Despus de la filtracin enjuagar el porta filtro 3 veces con porciones de 20-30 ml de agua
de dilucin estril, para evitar la retencin de alguna bacteria entre las paredes internas del
mismo
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